Transcrição e Processamento do

RNA e Síntese Protéica

Aula 8

Biologia Celular LGN 114

Antonio Figueira
figueira@cena.usp.br
Arquitetura de Genomas
 Fluxo da Informação Gênica
(Dogma Central da Biologia Molecular)
Dogma Central
Transcrição Reversa em Retrovírus
Dogma Central
 Regulação de Expressão Gênica

Transcrição = principal ponto de regulação da expressão gênica

Estrutura Química do RNA
 Transcrição

Fita senso 5’ 3’
CATTGCCAGT

GTAACGGTCA
3’ 5’

CAUUGCCAGU

(Alberts et al., 2004)

 Tipos de RNA produzidos
mRNA: RNA mensageiro – codifica proteínas
rRNA: RNA ribossomal - estrutura do
ribossomo, participa síntese de proteínas
tRNA: RNA transportador – adaptador entre
mRNA e amino ácidos
snRNA: RNA pequeno nuclear – splicing do RNA
snoRNA: RNA pequeno nucleolar – processar e
modificar quimicamente rRNA
Dobramento da fita simples de RNA
RNA mensageiro - mRNA

Estrutura

RNA – cadeia simples

3-5% RNA total

RNA ribossomal - rRNA

Estruturas
Interação protéica
Ribossomos
Ribozima: catálise
80% do RNA total
Múltiplas cópias
(H. sapiens: 200 genes)
 RNA transportador - tRNA

Estrutura em Trevo
Adaptadores de seleção de amino ácidos
15% do RNA total
RNA total em gel de agarose

RNA total:
3-5% mRNA
12-15% tRNA
80% rRNA
 Tipos de RNA Polimerase
• Procariotos
– RNA polimerase – todos RNAs
• Eucariotos
– RNA polimerase I – genes rRNA (5.8S,
18S, e 28S)
– RNA polimerase II – mRNAs, snoRNAs
– RNA polimerase III – genes tRNA, gene
rRNA (5S), snRNA, outros
 RNA Polimerase de Procariotos

Ligações fosfodiéster
Direção de síntese
Dispensa iniciadores
Exatidão:
DNA Pol = 107 nts
RNA Pol = 104 nts
(Alberts et al., 2004)
RNA polimerase de Procariotos
RNA polimerase de Procariotos
Fator Sigma
Região Promotora de Procariotos
Seqüências consenso
-35 = TTGACA
-10 = TATAAT
Estrutura de Genes Procariotos
Término da Transcrição

Estrutura em grampo:
- desanexação do
complexo da RNA Pol
- rica em A=T
RNA

www.dnai.org

DNA
Transcrição simultânea múltipla - Procariotos

Direção de transcritos em Procariotos

 Cístrons e processamento do RNA
policistrônico

operon

monocistrônico

poliadenilação

capa 5’ trailer
(capeamento)
mRNA de Procariotos pode ser policistrônico e
Co-regulado em Operons
Etapas características da transcrição

Procariotos

Eucariotos
Transcrição em Eucariotos
Fatores gerais de transcrição

http://www.dnai.org/a/index.html
Fatores de Transcrição Eucariotos

Procariotos:
Fator Sigma (σ)
Eucariotos:
Fatores Gerais da
Transcrição (TFII)

Complexo de Iniciação
da Transcrição
Processamento de mRNAs de Eucariotos

- Capeamento
- Processamento e edição = Splicing
- Adição de cauda poli-A
 Regiões-chave do DNA na transcrição

seqüência transcrita
3’ 5’

5’ 3’
promotor éxon íntron
terminador
Transcrição e trailer
líder Processamento

AAAA

mRNA

Controle se mensagem está intacta e completa!

Capeamento de terminal 5’ de mRNA de Eucariotos

Capeamento = adição de Guanina modificada

1. Fosfatase – remove P de 5´
2. Guanil-Transferase – ligação 5´- 5´
3. Metiltransferase – adição metil

Reconhecer mRNA, distinguir dos outros RNAs

Ligar a Cap-binding complex (CBC)
Estrutura de genes humanos com arranjos de exons e introns

Splicing alternativo do gene de α-tropomiosina de rato

Splicing (edição) do RNA
Éxon 1 Éxon 2
Íntron 1
A
GU AG

AG G

AGGU(N)xA(N)yAGG

Realizada pp por RNAs - snRNAs

Localização
hnRNA => mRNA maduro
“splicing alternativo”
Spliceossomo -> snRNA + snRNPs
Splicing (edição) do RNA - Tipos
Tamanho médio de éxons e íntrons
Adição de cauda poli-A em
transcritos de Eucariotos

Poli-A Polimerase (PAP) – adiciona cauda Poli-A

Exportação do RNA para o citosol

Complexo do Poro
Nuclear
Canais hidrofílicos
Passagem livre: <50 kDa
mRNA exportado
Associação a proteínas
Transporte ativo
Ribossomos

rRNA + proteínas

Ribozimas: 2/3 RNA

RNA com atividade catalítica

Síntese e montagem: nucléolo

(até 25% do volume do núcleo)

Exportação para citoplasma

 Ribossomos

http://www.dnai.org/a/index.html
 Retículo Endoplasmático Rugoso

(Cooper, 2001)
tRNA – Folha em Trevo

Bases não usuais

Humanos: 497 genes de tRNA
Aminoacil-tRNA sintetases
 Código Genético 20 amino ácidos
4 x 4 x 4

Quadro de Leitura
 Ativação de Amino ácidos

Aminoacil-tRNA sintetase - específica para cada amino ácido

Reconhecimento da Mensagem:
Códon-Anticódon

Aminoacil-tRNA sintetase = adaptador

tRNA = adaptador
Síntese de proteínas
Sítios Ativos no Ribossomo

Sítio A = aminoacil-tRNA (reconhecimento)

Sítio P = peptidil-tRNA (ligação peptídica)
Sítio E = exit (extrusão do tRNA)
Etapas de Síntese de Proteínas

Sítios A – P –E
 Etapas da Tradução

- Fatores de Iniciação Eucariótica (eIFs)

1º codon – Met ou fMet
tRNA iniciador - AUG

- Fatores de Extensão (EF) da tradução

EF-Tu e EF-G
- Fatores de Liberação (mimetismo
estrutural com o tRNA)
terminação – UAA, UAG, UGA

Polirribossomos: tradução múltipla

Exatidão: 1/104 aa
-4 ATPs/aa incorporado
Fase de Iniciação da
Síntese Protéica

-Códon de Iniciação
-tRNA iniciador - Met
-Definição da fase de leitura
-N-Terminal e C-terminal
-Ligações Peptídicas
-Reconhecimento da capa 5’ e
cauda poli-A em eucariotos
-Taxa de iniciação define taxa
de tradução

(Alberts et al., 2004)

 Fase Final da Síntese Protéica

-Códons de Terminação: UAA, UAG, UGA

-Fatores de Liberação: mimetismo estrutural

Degradação de Proteínas:

- proteossomo

- associação com ubiquitinas

www.dnai.org
 Chaperonas e Tradução
Dobramento de proteínas
Proteínas de Choque Térmico (HSPs)
BiP (Binding protein): HSP70 do RE

(Cooper, 2001)
 Sinalização protéica: peptídeo sinal

Exportação para núcleo/mitocôndria/plastídeos/RE

Domínios de reconhecimento e direcionamento
(Alberts et al., 2004)
Chaperonas e Transporte de Proteínas

(Cooper, 2001)
 Resumo de
Transcrição e
Tradução

(Alberts et al., 2004)