04/09/2017

Biologia Molecular

Aula 4:
Transcrição

Profª Ms. Fabiana Sobral

Síntese do RNA
TRANSCRIÇÃO

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Transcrição do DNA

RNA - Polimerase
F1 F2
U
A T
A
T A
G
C G
G C C
T A A
A U T
DNA RNA

Transcrição do DNA
• Processo de síntese de uma molécula de RNA
utilizando uma das fitas de DNA como molde.
• Processo de leitura da informação contida no DNA
com o objetivo de expressá-la em forma de
proteína.
– Diferentes taxas de expressão:

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Transcrição do DNA
• Síntese de RNA a partir
de um molde de DNA.
• Ocorre união de
nucleotídeos específicos
de RNA, formados a
partir da
complementariedade da
fita de DNA.
• ligação fosfodiéster
entre carbono 5 da ribose
de um nucleotídeo e o
carbono 3 da ribose do
nucleotídeo seguinte.

Transcrição do DNA
• Características da síntese de RNAs:
Polimerização orientada e seqüencial dos nucleotídeos trifosfato
de ribose (ATP, GTP, CTP e UTP).
Enzima responsável: RNA polimerases,
Molde: seqüências nucleotídicas das cadeias de DNA.
A transcrição se dá apenas na fita de DNA 3’ 5’
RNA é sintetizado a partir da extremidade 5’ e progride para 3’

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A Transcrição promove a produção de muitos tipos de RNA

Transcrição do DNA
A Transcrição resulta sempre em uma molécula de
RNA fita simples, complementar ao DNA.

ETAPAS:
1. Abertura e desespirilação de pequena
porção de DNA dupla fita;
2. RNA polimerases atuam na síntese
complementar ao DNA molde;
3. A enzima não exige a presença de
primers iniciadores;
4. A síntese ocorre no sentido 5ʼ  3ʼ;
5. A cada adição nucleotídica: RNA se
desloca; o DNA se reassocia;
6. A síntese é limitada a pequenas regiões
de DNA por vez;

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EM PROCARIOTOS
Sinais no DNA indicam o começo e início da síntese (região
promotora)
- A subunidade Fator  da RNA polimerase lê na sequência do
DNA onde começar a transcrição;

1.Reconhecimento do promotor

2.Abertura da dupla hélice de DNA

3.Início da transcrição

4.Transcrição mais acelerada

5.Extensão da síntese

6.Reconhecimento do terminador

7.Liberação da fita sintetizada

EM PROCARIOTOS

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EM PROCARIOTOS

• Em procariotos o complexo RNA polimerase

faz todos os passos da transcrição.

• O fator sigma, que faz parte da RNA

polimerase de procariotos, é que reconhece a
região promotora do DNA (sequência de
reconhecimento para início da síntese de
RNA)

EM EUCARIOTOS

Várias rNas polimerases

RNA polimerase I – produz grandes RNAs ribossomais –
RNAr 45S;

RNA polimerase II – sintetiza os RNAs que serão traduzidos

em proteínas (RNAm), e a maioria dos pequenos RNAs;

RNA polimerase III – produz uma variedade de RNAs

estáveis, muito pequenos – incluindo o pequeno RNA
ribossomal 5S e os RNAs de transferência (RNAt).

RNA polimerase IV - transcrição dos genes do DNA

mitocondrial.

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EM EUCARIOTOS

Diferentes Classes de RNA Diferentes RNA Polimerases

rRNA RNA polimerase I

mRNA RNA polimerase II
tRNA, snRNA, miRNA RNA polimerase III
Transcrição de genes do RNA mitocondrial RNA polimerase IV

EM EUCARIOTOS

As RNA polimerases têm múltiplas atividades:

reconhecem e ligam-se a sequências específicas de DNA;

desnaturam o DNA, expondo a sequência de nucleotídeos a ser

copiada;

mantêm as fitas de DNA separadas na região de síntese;

mantêm estável o híbrido DNA:RNA na região de síntese;

renaturam o DNA na região imediatamente posterior à da síntese;

sozinhas ou com o auxílio de proteínas específicas, terminam a

síntese do RNA.

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EM EUCARIOTOS

A Transcrição depende de várias proteínas !!!

RNA polimerase exige a presença de fatores de transcrição

(proteínas) para:

- Reconhecimento do iniciador;
- Distorção do DNA;
- Abertura da hélice;
- Fosforilação da enzima;
- Início da transcrição;
- Liberação dos Fatores de transcrição.

Complexo de pré-iniciação
(PIC):
 Fatores de transcrição da Polimerase II (TFII) são
um grupo de proteínas interativas e receberam
nomes arbitrários:

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Iniciação

• Região promotora:
TATA BOX = 25 nucleotídeos com sequencia Timina
e Adenina Sinaliza o início da transcrição.
• A TFIID provoca distorção no DNA do TATAbox.
• Posteriormente outros fatores são reunidos
juntamente com a RNA polimerase II.

ATP
Enzima DNA-helicase
TFIIH
TFIID TFIIB
ATGCCATTAGGCATTCAGTAG
TATA BOX
TACGGTAATCCGTAAGTCATC
RNA Pol II

ALONGAMENTO

DNA
RNA Polimerase
TGTAGCTCCGGACTCCAT...
promotor Transcrição mRNA

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ALONGAMENTO

DNA
RNA Polimerase

TGTAGCTCCGGACTCCAT...
promotor Transcrição mRNA

ACAUCGAGGCCUGAGGUA...

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ALONGAMENTO

• Molde de DNA
5’ A T G C C A T T A G G C A T T C A G T A G 3’
3’ T A C G G T A A T C C G T A A G T C A T C 5’

5’ A U G C C A U U A G G C A U U C A G U A G 3’

• Fita de pré-mRNA

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Processamento do RNAm

A transcrição em eucariotos está ligada ao

processamento do RNA.

Modificações no pré mRNA recém sintetizado:

1. O Capeamento da extremidade 5’ recém sintetizada;

2. O Splicing remove íntrons de pré-mRNAs recém-

transcritos;

3. A Geração da Extremidade 3’ do mRNA em eucariotos:

poliadenização.

Processamento do RNAm

Processamento
Pré-mRNA mRNA maduro

► Modificação covalente das extremidades do mRNA

• Adição da estrutura CAP na extremidade 5’
• Adição da cauda poli(A) na extremidade 3’
► Splicing/recomposição (excisão dos íntrons)

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Processamento do RNAm

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Processamento do RNAm

1. Formação do CAP na molécula de RNAm

Processamento do RNAm
2. Remoção dos Íntrons - Splicing
• Uma das características do genoma de eucariotos é que os
genes podem ser fragmentados.
• Num segmento do DNA, correspondente a um gene que
codifica uma determinada proteína, são encontradas:
– Regiões codificadoras (éxons) alternando-se com regiões não-
codificadoras (íntrons).
– O transcrito resultante não é funcional e só poderá ser traduzido
se for devidamente montado, descartando-se os íntrons e unindo-
se os éxons em sequência ordenada
– Essa modificação do transcrito primário é o "splicing" (cortar e
colar; montagem)
• Ocorre dentro do núcleo
• O transcrito processado e pronto para migrar para o
citoplasma, recebe o nome de RNA mensageiro

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Processamento do RNAm

2. Remoção dos Íntrons - Splicing

• Moléculas especializadas de RNA reconhecem as
sequências que devem ser retiradas do mRNA.

• São moléculas pequenas (menos de 200

nucleotídeos cada) = snRNA (nucleares) formam
o cerne do spliceossomo.

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Processamento do RNAm
Splicing
• A descoberta de que os genes de eucariotos poderiam ser
interrompidos ou fragmentados, foi realizada por Philip Sharp
& Richard Roberts, em 1977, tendo lhes valido o prêmio Nobel
de 1993.
• Posteriormente, foram detectados genes interrompidos também
em bactérias, porém como um evento raro.
• Segmentos não codificadores são muito frequentes no genoma
eucariótico
– Ao contrário do que ocorre nas bactérias, onde os genes estão
mais compactamente organizados
– Em eucariotos as distâncias intergênicas são grandes e, dentro
dos próprios genes a frequência de íntrons é alta. Em geral, os
íntrons são muito mais extensos que os Éxons

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Processamento do RNAm
3. Adição da Cauda
• Ocorre na posição da extremidade 3’
• Última análise
• 2 subunidades denominadas fator de estimulação
à clivagem (CstF) e fator de especificidade de
clivagem e poliadelinação (CPSF) se
movimentam para a cauda do mRNA e a enzima
poli-A-polimerase (PAP) = + OU – 200
nucleotídeos de Adenina
CstF

5’ A U G C C A U U A G G C A U U C A G U A G 3’ AAAAAAAAAAAAAA
PAP
CPSF

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RNA mensageiro eucariótico x procariótico

EM EUCARIOTOS

Estágios

1) Formação do complexo de
pré-iniciação

2) Alongamento

3) Término e processamento

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EM EUCARIOTOS

Os RNAs eucarióticos maduros são seletivamente

exportados do núcleo

O Nucléolo

- Síntese de ribossomos e
de ribonucleoproteínas;

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EM EUCARIOTOS E PROCARIOTOS
Maiores diferenças entre passos de células procariótica e
eucariótica para expressar genes:

PROCESSO DE TRANSCRIÇÃO EM EUCARIOTOS

• As RNA polimerases eucarióticas sempre necessitam de

proteínas auxiliares, denominadas fatores de
transcrição.
• Os promotores são inicialmente reconhecidos por
fatores de transcrição que, ligados ao DNA, interagem
com outros fatores, formando um complexo ao qual
as RNA polimerases se associam.
• Ao contrário do que ocorre em procariotos, a
transcrição e tradução não são acopladas em
eucariotos. Os RNAs são processados e devem ser
transportados através da membrana nuclear para
serem traduzidos no citoplasma.

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