Biologia Molecular e Biotecnologia

Transcrição
Natália de Morais Cordeiro, PhD
 EXPRESSÃO GÊNICA
DNA mRNA PROTEÍNA

AAAAAA

GENE INTERMEDIÁRIO PRODUTO

INFORMAÇÃO DA INFORMAÇÃO FINAL
ARMAZENADA DO GENE

EFEITO
BIOLÓGICO
EXPRESSÃO GÊNICA
 RNAs
RNAs

Tipo Tamanho Função

tRNA Pequeno Transporte de aa para o local de síntese
rRNA Diversos Forma os ribossomos, juntamente com proteínas
mRNA Diversos Determina a sequência de aa na prteína
snRNA Pequeno Processa o mRNA inicial nos eucariotos
miRNA Pequeno Afeta a expressão gênica (crescimento,
desenvolvimento)
siRNA pequeno Afeta a expressão gênica. Cientistas utilizam para
bloquear a expressão do gene de interesse
 TRANSCRIÇÃO

v Processo pelo qual uma molécula de RNA é sintetizada a partir da

informação contida na sequência de nucleotídeos de uma molécula de
DNA fita dupla;

v Processo bastante variável para atender as necessidades fisiológicas da

célula;

v Apenas uma das fitas é utilizada como molde para a síntese do RNA
(fita molde direção 3’→5’). A outra fita é idêntica à fita de RNA
sintetizada (fita codificadora direção 5’→3’), com a substituição de T
por U;
 TRANSCRIÇÃO

- Formação de RNA a partir de DNA

- Necessário:
* uma fita de DNA
* enzima: RNA polimerase (DNA dependente)
* ribonucleotídeos:
ATP
CTP
GTP
UTP (não TTP)
* não requer iniciador (primer)

- Síntese do RNA ocorre no sentido 5´ → 3´

RNA POLIMERASE
 RNARNA POLIMERASE
polimerases de eucariotos

RNA pol I Nucleólo rRNA Várias subunidades

RNA pol II Nucleoplasma hnRNA Várias subunidades

(transcrito
primário)
snRNA
RNA pol III Nucleoplasma rRNA 5S Várias subunidades
tRNAs
RNA pol Mitocondria 01 subunidade
Mitocondrial

RNA pol de Cloroplasto Similar as

Cloroplastos bacterianas

Requerem proteínas auxiliares: fatores de transcrição

 TRANSCRIÇÃO

DNA
RNA Polimerase
T GT
CAGCTCCGGACTCCAT...
promotor
Transcrição mRNA

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 TRANSCRIÇÃO

DNA
RNA Polimerase
TGCAGCTCCGGACTCCAT...

promotor Transcrição mRNA

AC G UC G A G G C C U G A G G U A . . .

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 TRANSCRIÇÃO

Nos cromossomos, existem regiões transcritas (genes)

e regiões não transcritas

Como a RNA polimerase reconhece:

- Qual fita transcrever?
- Onde começar a transcrever?
- Onde parar de transcrever?
RNA polimerases
No núcleo...
 TRANSCRIÇÃO

DNA Fita 1 5´-...ATGGTCGATGCTAGCGCGATGACAGTACAGT...-3´

DNA Fita 2 3´-...TACCAGCTACGATCGCGCTACTGTCATGTCA...-5´

DNA Fita 1 5´-...ATGGTCGATGCTAGCGCGATGACAGTACAGT...-3´

+
RNA transcrito 5´-...AUGGUCGAUGCUAGCGCGAUGACAGUACAGU...-3´
DNA Fita 2 3´-...TACCAGCTACGATCGCGCTACTGTCATGTCA...-5´

Fita 2 = Fita Molde ou Anti-sense

Fita 1 = Fita Sense
 TRANSCRIÇÃO

DNA Fita 1 5´-...ATGGTCGATGCTAGCGCGATGACAGTACAGT...-3´

DNA Fita 2 3´-...TACCAGCTACGATCGCGCTACTGTCATGTCA...-5´

DNA Fita 1 5´-...ATGGTCGATGCTAGCGCGATGACAGTACAGT...-3´

RNA transcrito 3´-...UACCAGCUACGAUCGCGCUACUGTCAUGUCA...-5´

DNA Fita 2 3´-...TACCAGCTACGATCGCGCTACTGTCATGTCA...-5´

Fita 1 = Fita Molde ou Anti-sense

Fita 2 = Fita Sense
 Transcrição em eucariotos (núcleo)
TRANSCRIÇÃO
Basicamente o mesmo processo dos procariotos, mas muito
mais complexo
3 RNA polimerases (transcrição de diferentes RNAs):
•  RNA Pol I e II- muitos tRNAS, rRNAs, snRNAs;
•  RNA Pol III- muitos genes codificadores de proteínas
 Reconhecimento do Promotor

• Transcrição: 4 momentos fundamentais

• Reconhecimento do promotor, iniciação, alongamento e terminação

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 Reconhecimento do Promotor
• Sequencias de DNA específicas importantes para o início da
transcrição
• Reconhecidas por algumas proteínas específicas, chamadas de
fatores de transcrição, que trazem a RNA polimerase para
realizar a montagem dos RNAs
 TATA box
• Um dos principais promotores eucarióticos - a 5' do início
da transcrição da grande maioria dos genes
• Localiza-se cerca de 25 nucleotídeos antes do local de início
da transcrição e foi chamada de TATA box
• TATA box é semelhante à sequência consenso –10 de
procariotos (TATAAT) e é flanqueado por regiões ricas em G
eC
 PROMOTORES
RNA POLIMERASE II

eucariotos

procariotos
 TERMINAÇÃO

TERMINADOR

proteína rho
TRANCRIÇÃO - EUCARIOTOS
 ENHANCERS
Enhancer é um sítio de ligação de
Proteína Ativadora RNA polimerase
proteína coativadora da transcrição

- facilita a ligação da RNA polimerase

(estimula transcrição)
- independe da distância ao promotor

Proteína Ativadora RNA polimerase

enhancer promotor

Proteína Ativadora RNA polimerase

EUCARIOTOS X PROCARIOTOS

PROCESSAMENTO
PÓS TRANSCRICIONAL
 EUCARIOTOS
Processamento Pós-Transcricional
(Transcritos da RNA pol II)

Transcrito primário
Transcrição

Adição de cap

Poliadenilação

Splicing

mRNA maduro
Adição de Capacete de
7-metilguanosina (CAP)

PROTEÇÃO: contra ação de ribonucleases, proteção contra ação

de fosfatases e Responsável por interagir com complexos
protéicos que processam, exportam o mRNA para o citosol e
promovem a ligação deste com os ribossomos
 POLIADENILAÇÃO

protege a molécula de RNA

das exonucleases, e é
importante para a terminação
da transcrição, para a
exportação do RNA a partir do
núcleo e para a tradução
 EUCARIOTOS
Processamento Pós-Transcricional
(Transcritos da RNA pol II)
 SPLICING do RNAm
• Os genes podem ser fragmentados. O que significa isto?
• Num segmento do DNA, correspondente a um gene que codifica
uma determinada proteína, são encontradas:

Regiões codificadoras (exons) alternando-se com regiões não-codificadoras (introns)

 Sítios de SPLICING

• Exons:
• Sequências expressas (traduzidas em proteínas)

• Introns:
• Sequências intercaladas que são eliminadas na tradução

• Sítios de splicing (splice-junctions)

• Fronteiras onde ocorrem junções de exons e introns
• Doadoras: bordas exon-intron
• Receptoras: bordas intron-exon
SPLICING = REMOÇÃO DE INTRONS
 SPLICING = REMOÇÃO DE INTRONS
splicing

GU AG

5' 3'

98% das junções de slides no genoma humano- GU/AG

•  primeiro intron é re3rado antes que os demais sejam sequer transcritos
•  Remoção ou não de determinados introns: diferentes proteínas
 SPLICING ALTERNATIVO
Splicing alterna3vo

Vantagens do Intron- splicing alterna3vo

-  Origem a diferentes proteínas a par3r do mesmo gene
-  Remoção ou não de determinados introns
-  Maioria dos genes tem splicing alterna3vo
-  ~ 1 milhão de proteinas diferentes devido ao splicing alterna3vo
SPLICING ALTERNATIVO
 Sítios de SPLICING

DNA

doador receptor Transcrição

exon
intron Splicing mRNA
 Processamento
Processamento de mRNA de eucariotos

Ø  Adição de CAP (7-metilguanosina)

na extremidade 5’ ; metilação da ribose (C2)
-proteção a exonucleases e ligação a ribossomo.

Ø  Adição de cauda de poli A na extremidade 3´

- (80- 100 resíduos de adenina)

Ø  Remoção de regiões não codificantes-

splicing (spliceossomo- ribonucleoproteínas)
-Introns (50- 20000 nucleotidios).
-SnRNAs identificam, alinham no local de corte e
quebra das ligações.
TRANSCRIÇÃO REVERSA
TRANSCRIÇÃO REVERSA
TRANSCRIÇÃO REVERSA