MTODOS

DE PESQUISA NA
BIOFSICA

MTODOS BIOFSICOS DE
ESTUDO
So

mtodos utilizados com base no

conhecimento fsico que se aplica na
biologia, com o objetivo de obter mtodos
diagnsticos e de tratamento para o
auxlio da Biomedicina e outras reas de
Sade. Existem trs tipos de mtodo de
estudo para diagnstico:

MTODOS IN VIVO:
Usam

o prprio paciente:
Exemplos: fotografia, endoscopia(usa-se um endoscpio,
que atua como uma fonte de luz para observar partes
internas atravs de uma micro-cmera);
densitometria ssea (analisa a densidade mineral ssea e
pode usar tanto raios-X;
quanto raios e ultra-som: (no d informaes sobre a
forma, e sim sobre o funcionamento).
Radiografia,tomografia computadorizada
(TC),ultrassonografia, cintilografia e RMN(ressonncia
magntica nuclear).

RADIOGRAFIA

MTODOS IN VITRO:

usam uma mostra do paciente (sangue, fezes,

urina,bipsia...). Exemplos: espectofotometria,
centrifugao (separa molculas combase na
densidade);

necessrio criar um campo gravitacional ,

eletroforese(separa molculas com base na diferena de
potencial eltrico);

necessria apresenadecargaeltricaresultante.

ESPECTROFOTOMETRIA

POR

MEIO DA ESPECTROFOTOMETRIA,
COMPONENTES DESCONHECIDOS DE UMA
SOLUO PODEM SER IDENTIFICADOS POR
SEUS ESPECTROS DE COR.

a tcnica ptica mais usado nas investigaes biolgicas e

fsico-qumicas.

Tcnica

colorimtrica que permite detectar a concentrao de

compostos presentes em uma soluo.

energia utilizada a luminosa se baseia na absoro da luz

pelo composto a ser medido

Por

meio da espectrofotometria, componentes

desconhecidos de uma soluo podem ser identificados
por seus espectros caractersticos.

O olho humano percebe cores entre as

faixas
de 400 a 750 nm

ABSORO DA LUZ
A

luz uma forma de radiao eletromagntica que possu

caractersticas de onda e de partcula (fton)
A interao da luz com a matria depende da estrutura
qumica dos compostos
Compostos corados cromforo
Reagente cromognico
A reao entre o composto cromforo e o reagente
cromognico origina um produto colorido quanto mais
concentrado maior quantidade de luz ele absorve

A ESPECTROFOTOMETRIA CONSISTE EM:

Usar

o espectro radiante (luz) para inspecionar sistemas

biolgicos, principalmente solues.

Um

feixe de energia atravessa a soluo e a sua

absoro oferece informaes sobre a qualidade e
quantidade dos Componentes do sistema .

Luz

Monocromtica: a luz utilizada em experincias

e em medidas espectrofotomtricas aquela de um
nico comprimento de onda.

MTODO DE

De

ESPECTROFOTOMETRIA

absoro:

- o processo fundamental;
2. -Passagem de um feixe de luz pela soluo e mede-se
sua absoro;
1.

*Aparelho utilizado o espectrofotmetro que deve

produzir a luz MC e medir a luz absorvida pelas solues.

MTODO DE
ESPECTROFOTOMETRIA

Curva de absoro espectral permite:

Identificar

substncias - so uma impresso digital

Identificar grupamentos qumicos
Identificar a pureza de substncias - quando a curva se
afasta do esperado
Identificar os comprimentos de onda para dosagem da
substncia - escolher comprimento de onda que seja
especificamente absorvido por aquela substncia

DETERMINAO DA CONCENTRAO DA
SUBSTNCIA:

um dos mtodos mais sensveis e precisos;

Quanto

mais choques entre o feixe de energia e a matria

absorvente, mais energia absorvida. dependente de 2
fatores:
1. Trajeto ptico
2. Concentrao

*Quando a concentrao da substncia constante, a absoro

depende do comprimento do trajeto ptico. E quando o trajeto
ptico constante, a absoro depender da concentrao.

2 - CROMATOGRAFIA
Mtodo

de separao e identificao de
componentes dos sistemas biolgicos
(misturas) que consiste em movimentar o
sistema, em condies apropriadas e separar
espacialmente os componentes: a cada
componente uma posio no trajeto.

As

substncias vo se movimentar pelo sistema

em velocidades diferentes e se separarem.

Ocorre

pela passagem de uma mistura atravs

de duas fases: umaestacionria(fixa) e
outramvel.
Esses sistemas podem ser: slido lquido ou
slido-gs:
1. A fase lquida a mvel -solvente
2. A fase slida a fixa- suporte ou matriz
.Analito:

substncia a ser analisada aps

separao

cromatografia um dos mtodos de anlise que

tem grande utilizao devido a sua facilidade em
efetuar a separao, identificao e quantificao
das espcies qumicas ;
uma tcnica que separa os componentes por
diferena de peso molecular, carga inica e
afinidade.

cromatografia pode ser feita de vrios modos, os

mais comuns so: em colunas e em placas.

Mtodos cromatogrficos

Cromatografia de adsoro:
Adsoro a adeso fsica ou ligao de ons e
molculas na superfcie de uma outra molcula.
Cromatografia em Camada Delgada
Utiliza-se pequena quantidade de amostra
(microgramas a miligramas)
As manchas podem ser reveladas por meio de
luz UV, vapores de iodo, solues de cloreto
frrico e tiocianoferrato de potssio,
fluorescncias, radioatividade, etc.

3- ELETROFORESE

a separao de componentes de um sistema atravs

da aplicao de um campo eletromagntico
Permite a separao de fraes de molculas
orgnicas como RNA, DNA, protenas e enzimas
O princpio bsico consiste na migrao de
substncias de acordo com suas cargas eltricas:
1. - Componentes de carga negativa migraro para o
polo positivo
2. - Componentes de carga positiva migraro para o
polo negativo.

Deve-se

levar em conta , alm das cargas

eltricas o peso molecular das partculas a serem
separadas:

*Quanto maior o peso molecular, mais lenta ser a

migrao da partcula pelo gel e menor ser a
distncia percorrida por ela.

FATORES QUE CONDICIONAM A MIGRAO ELETROFORTICA :

velocidade de migrao das partculas vai depender

dos seguintes fatores:
Fora do campo aplicado
Carga, tamanho e forma das molculas
Viscosidade , pH e temperatura do meio
A voltagem aplicada ao sistema deve ser adequada:
Deve ser o mais rpido possvel, para evitar que os
componentes se difundam e se espalhem no sistema
No pode ser muito alta, pois superaquece o sistema,
prejudicando a separao dos componentes.

EM GEL:
- O mais usado a poliacrilamida

Filtrao pelos poros do gel (separa por tamanho da

molcula), alm da separao por cargas.
EM

GEL DE POLIACRILAMIDA COM SDS:

Protenas so tratadas com sdio-DuodecilSulfato para igualar suas cargas (negativas)
Sero separadas pelo peso molecular
As mais leves chegaro primeiro ao polo positivo.

Mtodos de eletroforese

Mtodos de eletroforese

Mtodos de eletroforese