Universidade Federal do Piauí – UFPI

Campus Ministro Reis Velloso – CMRV

Curso de Biomedicina
Disciplina de Biologia Molecular

Metabolismo do RNA:
Transcrição

Prof. Me. Thiago Nobre Gomes

Biomédico CRBM2 Nº 07568
Dogma Central da Biologia Molecular
 Como a informação genética é expressa nas células?

Núcleo
Metabolismo do RNA

DNA molde  Síntese

de RNA (transcrição)

Processamento pós-
sintético (modificações
pós-transcricionais)

Funções especializadas
das moléculas de RNA
Transcrição
Conceito: Síntese dos diferentes tipos de RNA a partir de
um molde de DNA, usando as regras de
complementariedade

 DNA e RNA são semelhantes, porém RNAs funcionais

apresentam-se na forma de fita simples

 Moléculas de RNA:
 Grande diversidade de estruturas  Variedade de funções

 Transmissão
Informação genética
 Armazenamento
 Catalítica Ribozimas
 Estrutural Ribossomos
Ribonucleotídeos
RNA : A, C, G e U

DNA: A, C, G e T Uracila

 Ribose – OH no carbono 2’ (instabilidade)

 Pareamento de bases: G≡C
 Por complementariedade Pareamento
 Estrutura secundária (diferentes funções) A=U
Princípio da Transcrição

As fitas são separadas

Gene de interesse num local determinado
(região do DNA) (região promotora)

(Fita simples)
(filamento de DNA)
A fita de RNA é sintetizada
(utilizando um dos filamentos de DNA como molde)
Tipos de Moléculas de RNA
 Comuns em Procariotos e Eucariotos:
 mRNA: Taxa de renovação rápida; molde para a síntese proteica
 rRNA: Principal componente dos ribossomos
 tRNA: Leva aminoácidos para os ribossomos

 Exclusivos de Eucariotos:
 Pré-mRNA (RNAs pré-mensageiros): Produto imediato da
transcrição
 snRNA (pequenos RNA nucleares): Componentes dos
spliceossomos  processamento do RNA
 snoRNA (pequeno RNA nucleolar): Processamento do rRNA
 miRNA (micro-RNA): Regulação da expressão gênica
Visão Geral da Transcrição
 Bolha de Transcrição:
Se enrola novamente

Ocorre no sentido 5’ 3’

Se desenrola

Filamento não-molde ou
codificador (senso): 5’ 3’

Filamento molde ou não-codificador

(anti-senso): 3’→ 5’

(rNTPs)
Filamentos de DNA senso e anti-senso
As fitas se abrem para a transcrição;
Apenas um dos filamentos de DNA é
usado como molde

Molde para a síntese do RNA:

Anti-senso

Contém o significado da informação

genética (sequência de um gene):
Senso (sense) ou codificante

Complementar ao filamento
molde de DNA
Unidade de Transcrição
Trecho do DNA que codifica uma molécula de RNA e as
sequências necessárias para sua transcrição

Inclui um promotor, uma região codificante de RNA e um

finalizador

Como o complexo de enzimas e proteínas que efetuam a

transcrição reconhece a unidade de transcrição?

Como ele sabe qual filamento de DNA ler, e onde começar e

parar?
Unidade de Transcrição
À montante; antes À jusante; depois

 Região reguladora que deve ser  Sequência sinal que causa a

reconhecida pela RNA polimerase para dissociação do complexo de transcrição
que possa iniciar a transcrição  Difere entre procariotos e eucariotos
 Constituída por elementos com posição
e sequência constantes
 Sequências consenso
RNA Polimerases
 Proteínas multiméricas complexas

 Catalisam reações fosfodiéster

 Tem atividade dependente da presença de DNA

 Ordem de adição dos ribonucleotídeos depende da sequência

de bases no DNA, obedecendo a combinação: A=U e GC

 Os precursores são os ribonucleosídeos trifosfatados – rNTPs

(ATP, GTP, CTP, UTP)

 A reação necessita da presença dos ions Mg2+ e Zn2+.

Transcrição em Procariotos
 RNA polimerase procariótica:
 Proteína multimérica constituída por cadeias polipeptídicas
diferentes

Central enzimática - 5 subunidades

(αI, αII, , ’ e ω)

Fator σ (sigma)

 Direciona a enzima para região promotora

 Não participa da fase de extensão (alongamento)
Transcrição em Procariotos
 RNA polimerase procariótica:
 αI e αII: Envolvidas na montagem do cerne tetramérico
 β: Contém o sítio de ligação para os ribonucleotídeos
 β’: Possui a região de ligação ao DNA molde
 σ: Reconhece e liga a RNA polimerase aos promotores

Cerne tetramérico RNA polimerase

Holoenzima
Transcrição em Procariotos
 Holoenzima RNA polimerase de Escherichia coli:

 Apenas uma RNA polimerase sintetiza todos os tipos de RNA

 Existem várias formas  depende da subunidade σ (vários tipos):

 σ70 (MW: 70.000), σ32 (MW: 32.000) etc

 Não apresenta atividade revisora exonucleásica 3’  5’

 1 erro a cada 104-105 rNMP incorporados

 Como várias moléculas de RNA são transcritas, as consequências

dos erros não são tão graves
Transcrição em Procariotos
 Estrutura em E. coli: Vários promotores

 Sequências consenso:
 -35 : TTGACA (Reconhecida pela subunidade σ)
 -10 : TATAAT – Rica em AT (mais fácil de abrir)
 1ª base ou nucleotídeo transcrito (+1) : geralmente uma purina (A, G)

Posição dá orientação ao promotor  direciona a RNA polimerase

Transcrição em Procariotos
 Iniciação:

A RNA polimerase une-se não-

especificamente ao DNA

A holoenzima procura pelo promotor

Quando o promotor é encontrado, a

holoenzima e o promotor formam
um complexo fechado
Transcrição em Procariotos
 Iniciação:
Transcrição em Procariotos
 Extensão:

 Híbrido DNA / RNA (8-9pb)  Curta duração  As fitas de DNA

se re-enrolam, deslocando o RNA recém sintetizado

 A extremidade 5' do RNA liberado fica disponível para tradução

 Procariotos = sem membrana nuclear:

 Transcrição e tradução podem ocorrer concomitantemente

 Em Eucariotos:
 mRNAs recém-sintetizados precisam atravessar a membrana nuclear
até atingirem os ribossomos no citoplasma,, sofrendo uma série de
modificações
Transcrição em Procariotos
 Extensão: RNA
polimerase
DNA fita
dupla

Ribossomo
Direção da transcrição

Direção da tradução

Extremidade 5´ fica disponível para a tradução – Ocorre simultaneamente em

procariotos
Transcrição em Procariotos
 Término:

 Depende de:
 Estruturas secundárias (grampos) do RNA recém sintetizado
 Proteínas auxiliares
 Término após ser transcrita a sequência finalizadora

2 tipos de terminadores ou finalizadores

 Rho-independente: Não depende de proteínas auxiliares

 Rho-dependente: Depende de proteínas auxiliares (fator rô)

Transcrição em Procariotos
 Término:
 Características do terminador Rho-independente

Sequência rica em A

Sequências palindrômicas
Grampo

Pareamento com A é fraco e facilita liberação da fita quando a RNA polimerase parar
Transcrição em Procariotos
 Término:
 Características do terminador Rho-dependente:
 Região de simetria dupla no terminal com baixa complementaridade
entre as bases  grampo "fraco" no RNA recém sintetizado
 Não existe sequência rica em A , mas sim em CA (reconhecida por rô)
 Término da transcrição precisa de uma proteína auxiliar  rô(ρ) -
Atividade de helicase (rompe o híbrido RNA-DNA)
Transcrição em Eucariotos
 Tipos de RNA Polimerases:
 RNA Polimerase I:
 rRNA 28 S, 18 S e 5.8 S; localiza-se no nucléolo

 RNA Polimerase II:

 mRNA e snRNA; localiza-se no núcleo

 RNA Polimerase III:

 tRNAs, 5S rRNA e outros snRNA; localiza-se no núcleo

Ao contrário da enzima de E. coli, todas as 3 RNA

polimerases eucarióticas precisam da ajuda de outras
proteínas – Fatores de Transcrição
 Transcrição em Eucariotos
 Na região promotora - Presença de sequências consenso:
 Reconhecimento pela RNA polimerase II e ligação correta
Iniciador (Inr)

3’ 5’ 5’ 3’

C na posição -1
A na posição +1

Rica em GC Dowstream Rica em GC Rica em

(20–50 nt) de TATA box (20–50 nt) pares AT

CAAT box, GC box e octâmero : Influenciam a eficiência da transcrição

Transcrição em Eucariotos
 Fatores de Transcrição (TF) ou de iniciação:
 Interagem com o promotor para iniciar a transcrição

 Várias subunidades (10-15) com funções específicas

 Não fazem parte da holoenzima

 Ligam-se previamente ao DNA, e depois as RNA polimerases

 São específicos para cada RNA polimerase (TFI, TFII e TFIII)

Nomenclatura: TF II B Refere-se à proteína

Transcritption factor RNA polimerase II

Transcrição em Eucariotos
 Iniciação – Formação do
aparato basal:

 TFIID: 1º fator basal a interagir

com o promotor

 TBP: Proteína de ligação a TATA

 TFIIF: Contém subunidade com

atividade de deselicoidizar o DNA
Transcrição em Eucariotos
 Iniciação – Formação do
aparato basal:

Fatores de iniciação são trocados

por fatores de alongamento

Domínio carboxila terminal (CTD) é

fosforilado e inicia-se o processo de
transcrição
Transcrição em Eucariotos
 Extensão e Terminação:

5’ CAP é adicionado logo

após começar o processo
de alongamento – 30 nt

(ponto próximo à
sequência AAUAA)
 Transcrição: Procariotos x Eucariotos
PROCARIOTOS EUCARIOTOS

 Citoplasma
 1 RNA polimerase
 RNA não é modificado
 Sem fatores de transcrição
 Tradução ocorre de forma
simultânea
 Núcleo
 3 RNA polimerases
 RNA é modificado
 Fatores de transcrição
 Tradução não ocorre de
forma simultânea
Síntese de DNA dependente de RNA
 Transcriptase Reversa (RT):
Ex: PCR para DENV
 Enzima que sintetiza DNA a partir de RNA

Ex: HIV
Síntese de DNA dependente de RNA
Reações catalisadas pela Transcriptase Reversa

1) Síntese de uma fita de DNA a partir da molécula de RNA:

RNA Híbrido RNA/DNA

2) Degradação da fita de RNA:

cDNA = DNA complementar

3) Síntese de outra fita de DNA, tendo a 1ª fita como molde:

DNA dupla fita – se insere no DNA do hospedeiro

Síntese de DNA dependente de RNA
 Transcriptase Reversa:

Não tem atividade exonucleásica 3’-5’

(como todas as DNA polimerases)

Insere 1 nucleotídeo errado a cada 20.000

Alta taxa de erro = Alta taxa de evolução viral

Surgimento de novas linhagens de vírus

Síntese de DNA dependente de RNA
 Expansão do dogma central da Biologia Molecular:
DNA

Transcrição Reversa
Transcrição

RNA
Replicação do RNA

Tradução
Alguns vírus copiam o RNA
diretamente de RNA

PROTEÍNA
 Comparativo
Replicação
 1 cromossomo inteiro é copiado
de uma vez
 Requer primer (iniciador)
 Ambas as fitas de DNA servem
como molde
 Precisa e uniforme
 Seus precursores são trifosfatos
de desoxirribonucleosídeos
Transcrição
 Somente 1 gene ou grupo de
genes (regiões específicas do
DNA) são copiados
 Não requer primer
 Somente 1 das fitas serve como
molde
 Algumas regiões do DNA
genômico nunca são transcritas
 Seus precursores são trifosfatos
de ribonucleosídeos
 Sequências específicas regulam a
expressão (promotor/terminador)
Referências bibliográficas básicas
 SNUSTAD, D. P.; SIMMONS, M. J. Fundamentos
de Genética. 6. ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2013 – Cap. 11

 PIERCE, B. A. Genética: um enfoque conceitual. 5.

ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2016 – Cap
13
Referências bibliográficas básicas
 WATSON, J. D.; et al. Biologia Molecular do Gene.
5. ed. Porto Alegre: Artmed, 2015 – Cap. 13

 ZAHA, A. Biologia Molecular Básica. 5. ed. Porto

Alegre: Artmed, 2014 – Cap. 10
 Universidade Federal do Piauí – UFPI
Campus Ministro Reis Velloso – CMRV
Curso de Biomedicina
Disciplina de Biologia Molecular

Metabolismo do RNA:
Transcrição

Prof. Me. Thiago Nobre Gomes

E-mail: gomestn.bio@gmail.com