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VIROLOGIA

VETERINRIA

Eduardo Furtado Flores


(ORG.)

VIROLOGIA
VETERINRIA

Santa Maria, 2007

Reitor
Vice-reitor
Diretor da Editora
Conselho Editorial

Reviso lingstica
Normalizao referncias bibliogrcas
Capa
Projeto grco e diagramao
Ilustraes

V819

Clovis Silva Lima


Felipe Martins Mller
Honrio Rosa Nascimento
Ademar Michels
Daniela Lopes dos Santos
Eduardo Furtado Flores
Eliane Maria Foleto
Maristela Brger Rodrigues
Honrio Rosa Nascimento
Jorge Luiz da Cunha
Marcos Martins Neto
Ronai Pires da Rocha
Silvia Carneiro Lobato Paraense
Maristela Brger Rodrigues
Luzia de Lima Santanna
Marcio Oliveira Soriano sobre fotograa
de microscopia eletrnica de clulas de cultivo
infectadas com herpesvrus bovino.
Carolina Isabel Gehlen
Lase Miolo Morais, Marcio Oliveira Soriano,
Eduardo Furtado Flores

Virologia veterinria / Eduardo Furtado Flores


(organizador). Santa Maria : Ed. da UFSM,
2007.
888 p. ; 30 cm.
1. Medicina veterinria 2. Virologia I. Flores,
Eduardo Furtado
CDU 619:578

Ficha catalogrca elaborada por Maristela Eckhardt CRB-10/737


Biclioteca Central da UFSM

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Cludio Wageck Canal, MV, MSc. Doutor

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Londrina, PR, Brasil. 86051-970.

Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000

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Amauri A. Aleri, MV, MSc.Doutor

Diego Gustavo Diel, MV, MSc.

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Laboratrio de Virologia

Universidade Estadual de Londrina (UEL)

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Londrina, PR, Brasil. 86051-970.

Universidade Federal de Santa Maria

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Ana Cludia Franco, MV, MSc.,PhD


Departamento de Microbiologia

Elisabete Takiuchi, MV., MSc. Doutor

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Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)

Universidade Estadual de Londrina (UEL)

Porto Alegre, RS, Brasil. 90050-170

Londrina, PR, Brasil. 86051-970

anafranco@ufrgs.br

elisabete.takiuchi.@gmail.br

Ana Paula Ravazzolo, MV, D.Sc.

Elizabeth Rieder, PhD.

Faculdade de Veterinria

Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA

Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)

PO Box 848 Greenport

Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000

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Clarice Weis Arns, MV, DSc.

Fernanda Silveira Flores Vogel, MV, MSc. Doutor

Departamento de Microbiologia e Imunologia

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Instituto de Biologia

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)

Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

Campinas, SP, Brasil. 13081-970

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Fernando A. Osorio, MV, MSc. PhD
Clarissa Silveira Luiz Vaz, MV, MSc., Embrapa Sunos

Department of Veterinary and Biomedical Sciences

e Aves (CNPSA)

University of Nebraska/Lincoln

Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,

Lincoln, Nebraska, USA. 68583-0905

clarissa.vaz@ufrgs. br

fosorio@unlnotes.unl.edu

Fernando Rosado Spilki, MV, MSc., Doutor

Julia Ridpath. PhD

Departamento de Microbiologia e Imunologia

National Animal Disease Center ARS - USDA

Instituto de Biologia

2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70

Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)

Ames, IA, USA. 50010

Campinas, SP, Brasil. 13083-970

jridpath@nadc.ars.usda.gov

fernandospilki@yahoo.com.br
Letcia Frizzo da Silva, MV, MSc.
Gael Kurath, PhD

Laboratrio de Virologia

Microbiologist Western Fisheries Research Center

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

6505 NE 65th St.

Universidade Federal de Santa Maria

Seattle, Washington, 98115. USA

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

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Gustavo Delhon, MV, MSc.PhD

Luciane Teresinha Lovato, MV, MSc., PhD

Department of Pathobiology

Departamento de Microbiologia e Parasitologia

College of Veterinary Medicine

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)

University of Illinois at Urbana-Champaign

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

Urbana, Illinois, USA.

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Luiz Carlos Kreutz, MV, MSc., PhD
Helena Beatriz de Carvalho R. Batista, MV, MSc.

Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria

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Universidade de Passo Fundo (UPF)

Porto Alegre, RS, Brasil. 91540-000

Passo Fundo, RS, Brasil. 99001-970

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Hernando Duque Jaramillo, MV, MSc. PhD

Luis L. Rodriguez, MV. PhD

Plum Island Animal Disease Center

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Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA

Greenport, New York USA.

PO Box 848 Greenport NY 11944. USA.

11944-0848

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Janice Reis Ciacci-Zanella, MV, MSc.PhD

Marcelo de Lima, MV, MSc.

Embrapa Sunos e Aves (CNPSA)

Department of Veterinary and Biomedical Sciences

Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,

University of Nebraska/Lincoln

janice@cnpsa.embrapa.br

Lincoln, Nebraska, USA. 68683-0905


mdelima2@unlnotes.unl.edu

John D. Neill, DVM, PhD


National Animal Disease Center, USDA, ARS

Maria Elisa Piccone, PhD

2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70

Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA

Ames, Iowa.USA. 50010

PO Box 848 Greenport, NY. 11944. USA

jneill@nadc.ars.usda.gov

maria.piccone@ars.usda.gov

Mariana S e Silva, MV, MSc.

Renata Servan de Almeida, MV, MSc.Doutor

Setor de Virologia

CIRAD - Dpartement Systmes Biologiques

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

UPR 15 Controle ds Maladies Animales

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)

Exotiques et Emergentes

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

34398 Montpellier cedex 5 France

msaesilva@yahoo.com.br

renservan@yahoo.com.br

Mrio Celso Speroto Brum, MV, MSc.

Rudi Weiblen, MV, MSc., PhD

Setor de Virologia

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)

Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900

rudi@ccr.ufsm.br

mcsbrum@yahoo.com.br
Sheila Wosiacki, MV., MSc. Doutor
Mauro Pires Moraes, MV, MSc., Doutor

Centro de Cincias Agrrias,

Departamento de Veterinria

Universidade Estadual de Maring (UEM)

Universidade Federal de Viosa

Campus Umuarama

Viosa, MG, Brasil. 36570-000

Maring, PR, Brasil. 87020-900

mpmoraes@ars.usda.gov

wosiacki@yahoo.com.br

Paulo Michel Roehe, MV, MSc.PhD

Ubirajara M. da Costa, MV, MSc.Doutor

Instituto de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamor

Departamento de Medicina Veterinria Preventiva e Tecnologia

FEPAGRO Sade Animal

Centro de Cincias Agroveterinrias

Eldorado do Sul, RS, Brasil. 92 990-000 &

Universidade Estadual de Santa Catarina (UDESC)

Instituto de Cincias Bsicas da Sade

Lages, SC, Brasil. 88520-000

Departamento de Microbiologia

biravetvirus@yahoo.com.br

Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)


Porto Alegre, RS, Brasil 90 050 -170

Zlia Ins Portela Lobato. MV, PhD.

proehe@gmail.com

Escola de Veterinria Departamento de Medicina


Veterinria Preventiva

Paulo Renato dos Santos Costa, MV, MSc., Doutor


Departamento de Veterinria
Universidade Federal de Viosa
Viosa, MG, Brasil. 36570-000
prenato@ufv. br

Renata Dezengrini, MV, MSc.


Setor de Virologia
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
renatadezengrini@yahoo.com.br

Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)


Belo Horizonte, MG, Brasil. 34992-101
ziplobat@vet.ufmg.br

INTRODUO

A presente obra foi concebida para preencher uma lacuna existente na bibliograa dedicada
Virologia Veterinria na lngua portuguesa. O crescimento notvel do ensino e pesquisa em Virologia
Animal no Brasil, nas ltimas dcadas, infelizmente no foi acompanhado por um aumento equivalente na literatura disponvel. Neste perodo, o acmulo fantstico de conhecimentos acerca da gentica e biologia dos agentes virais, proporcionado pelo desenvolvimento e popularizao das tcnicas
moleculares, tem tornado algumas obras clssicas gradativamente desatualizadas e obsoletas. Existem bons livros de Virologia Animal e excelentes tratados de Virologia Geral e Molecular na lngua
inglesa. No entanto, esses textos so temporariamente inacessveis a uma parcela considervel dos
estudantes de graduao que se interessam e ingressam no mundo fascinante da Virologia. Esta obra,
pois, tem por objetivo fornecer aos iniciantes em Virologia, que, porventura, sejam tambm iniciantes
na lngua inglesa, um contedo atualizado e abrangente da Virologia Animal, com nfase aos animais
de interesse veterinrio.
O presente texto direcionado aos iniciantes em Virologia, sejam eles estudantes de graduao,
ps-graduao ou mdicos veterinrios; e tem como objetivo fornecer informaes bsicas sobre a
estrutura, biologia, patogenia, diagnstico e controle dos principais vrus de interesse veterinrio. Os
principais aspectos da biologia molecular e replicao viral so abordados de maneira simples e de
fcil compreenso, para embasar o entendimento da patogenia, resposta imunolgica e diagnstico
dessas infeces. A omisso de informaes mais detalhadas sobre a biologia molecular dos vrus foi
intencional. Tal detalhamento est um pouco alm da informao usualmente buscada por iniciantes
em livros-texto. Por outro lado, os estudantes em nveis mais avanados podem recorrer a excelentes
livros existentes na lngua inglesa.
Um grande desao enfrentado durante a elaborao deste texto foi acompanhar a dinmica das
descobertas e constataes na rea da Virologia Molecular. A dinmica do conhecimento gerado nesta
rea exigir atividades de reviso e atualizao constantes do contedo, sob a pena de deix-lo obsoleto em poucos anos. Os avanos nas reas de vacinologia e teraputica antiviral tambm se intensicaram neste perodo, permitindo aos autores relatar as mais recentes conquistas cientco-tecnolgicas
nessas reas.
A dinmica das interaes dos vrus com os seus hospedeiros no ambiente natural tambm representa um desao para a elaborao de textos descritivos. No perodo de elaborao desta obra
aproximadamente trs anos surgiram novos vrus e novas doenas; e vrus j conhecidos cruzaram
a barreira de espcies e infectaram hospedeiros inusitados. Ou seja, a evoluo natural das infeces
vricas no ambiente natural to dinmica que exige uma reviso contnua de conceitos.
Este livro encontra-se dividido em duas partes. A parte inicial aborda os aspectos gerais da Virologia Animal, discorrendo sobre a estrutura, classicao e nomenclatura, gentica e evoluo, mtodos de deteco e identicao de vrus, aspectos gerais da replicao viral, replicao de vrus DNA
e RNA, patogenia das infeces, epidemiologia, imunidade a vrus, diagnstico laboratorial e vacinas.
Embora o enfoque desta parte seja direcionado para a Virologia Animal, os conceitos e aspectos nela
tratados so tambm aplicveis a vrus que infectam humanos. Assim, este texto pode til tambm
para os demais estudantes das reas biomdicas.

A segunda parte trata individualmente das famlias virais de importncia em medicina veterinria. Os captulos foram elaborados seguindo algumas orientaes com relao organizao e contedo. Dessa forma, cada captulo especco dividido em duas partes: a seo inicial aborda os aspectos
gerais da respectiva famlia, a estrutura dos vrions, a estrutura e organizao genmica, expresso
gnica, replicao do genoma e o ciclo replicativo. Um dos maiores desaos enfrentados na elaborao deste texto foi obter um equilbrio entre o nvel de aprofundamento nos aspectos biolgicos e
moleculares com a nfase necessria nos aspectos epidemiolgicos, clnico-patolgicos e diagnsticos.
Os aspectos moleculares da biologia dos vrus foram abordados de maneira simplicada para facilitar
o entendimento por iniciantes da rea. Um maior detalhamento nos aspectos biolgicos e moleculares
da estrutura e replicao dos vrus pode ser encontrado nos livros especializados.
A segunda parte de cada captulo especco dedicada s doenas de importncia veterinria causadas por membros das respectivas famlias. Esta seo discorre acerca das caractersticas do
agente, epidemiologia, patogenia, sinais clnicos e patologia, diagnstico, controle e prolaxia das
doenas por ele causadas. Algumas famlias possuem vrios vrus associados com doenas animais
de importncia sanitria e econmica; enquanto outras possuem poucos patgenos animais. Por isso,
a disparidade de contedo e extenso dos diferentes captulos. O ltimo captulo apresenta algumas
famlias virais que possuem importncia limitada em medicina veterinria. Algumas dessas famlias
abrigam patgenos exclusivamente humanos; outras abrigam vrus que infectam somente animais
sem interesse econmico ou afetivo; enquanto outras congregam vrus cujo interesse maior reside nos
seus aspectos biolgicos e moleculares.

Os autores

AGRADECIMENTOS

Uma obra deste porte somente poderia ser elaborada com a colaborao de vrias pessoas. E
nada mais justo do que agradecer a todos aqueles que tornaram possvel concretiz-la. Aos colegas
colaboradores, pela disposio em dedicar uma parte importante do seu tempo na elaborao dos
captulos. desnecessrio list-los aqui, pois os seus nomes se encontram nos respectivos captulos
ou sees.
Aos colegas e amigos de longa data, com quem a elaborao de um livro de Virologia Veterinria
foi tema de inumerveis conversas e planos em congressos e reunies cientcas nestes ltimos 15
anos. Janice Ciacci-Zanella, Clarice Arns, Ana Paula Ravazollo, Amauri Aleri, Luciane Lovato,
Mauro Moraes, Paulo Roehe, Luiz Carlos Kreutz e Rudi Weiblen, entre outros, o meu agradecimento
e a certeza de que este livro representa a concretizao de um sonho de todos ns.
O agradecimento aos colegas estrangeiros, que entenderam a importncia de um livro-texto
como este e dedicaram parte de seu tempo para auxiliar a elabor-lo: Drs. Julie Ridpath, John Neill,
Luis Rodriguez, Gael Kurath, Fernando Osorio, Maria Elisa Piccone, Gustavo Delhon, Elisabeth Rieder e Hernando Duque.
Devo um agradecimento especial a trs colegas que contriburam muito alm da elaborao dos
respectivos captulos, participando de vrios outros, enviando sugestes, traduzindo, revisando e reformulando os textos submetidos: Dr Luiz Carlos Kreutz, Dra. Fernanda Silveira Flores Vogel e Md.
Vet. doutoranda Renata Dezengrini.
Gostaria de externar o meu reconhecimento e gratido equipe do Setor de Virologia da UFSM,
composta por mestrandos e doutorandos, que participaram ativamente de todo o processo de elaborao, edio e reviso desta obra. Grande parte da qualidade e propriedade deste texto se deve s
interminveis discusses e revises de captulos, patrocinadas por um grupo cheio de entusiasmo
e motivao. Ao Mrio Celso S. Brum, Diego G. Diel, Evandro Winkelmann, Sabrina R. Almeida,
Sandra Arenhart, Andria Henzel, Renata Dezengrini, Mariana S e Silva, Helton dos Santos, Letcia
Frizzo da Silva e Marcelo Weiss, com certeza de que vocs possuem parte importante nessa obra.
Agradeo tambm aos colegas professores Slvia Hbner (UFPEL) e Valria Lara Carregaro
(UFSM) pelas revises e colaborao em captulos especcos. profa. Maristela Brger Rodrigues,
pela reviso gramatical; Carolina Gehlen, pela diagramao; Zlide Bayer Zucheto e prof. Honrio
Rosa Nascimento, da Editora da UFSM, pelo apoio para que a edio deste livro fosse possvel.
Alm do apoio da Editora da UFSM, parte do trabalho grco (elaborao de guras, diagramao, reviso gramatical) e pagamento de direitos autorais foram custeados com recursos da taxa de
bancada de Produtividade em Pesquisa do CNPq do Organizador. A arte nal e capa somente foram
possveis com o auxlio do Centro de Cincias Rurais, na pessoa do seu Diretor, prof. Dalvan Jos
Reinert, e da vice-reitoria, pelo Prof. Felipe Mller, a quem agradecemos.
Quero tambm manifestar o meu agradecimento e admirao pelo trabalho grco magnco
realizado pelos acadmicos do Curso de Desenho Industrial da UFSM, Lase Miolo Moraes e Mrcio
Oliveira Soriano. Eles foram os responsveis diretos por grande parte das ilustraes desta obra; e
responsveis indiretos pela parte restante, cuja confeco lhes foi subtrada pelo seu entusiasmado
aprendiz. Ao nal do trabalho, tivemos como resultados: um conjunto formidvel de ilustraes; dois

acadmicos de Desenho Industrial com certo conhecimento de Virologia e um virologista accionado


pela arte de ilustrar gracamente a biologia dos vrus. E isso s o incio...

Eduardo Furtado Flores, MV. MSc. PhD


Professor Associado
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva (DMVP)
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, RS, Brasil.
97105-900 ores@ccr.ufsm.br

Eduardo Furtado Flores natural de Santa Maria, RS (25/10/61); com graduao (1983) e mestrado
(1989) em Medicina Veterinria pela Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Possui PhD em
Virologia Molecular pela Universidade de Nebraska/Lincoln, Estados Unidos (1995). professor do
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva da UFSM desde 1991, responsvel pelas disciplinas de Epidemiologia Geral Veterinria e Sade Pblica Veterinria na graduao; e pelas disciplinas
Epidemiologia Veterinria, Virologia Molecular e Introduo Biologia Molecular na ps-graduao.
Faz parte do Conselho Editorial da Editora da UFSM; pesquisador de produtividade em pesquisa (1C) do CNPq desde 1997; e editor adjunto de Virologia da revista Pesquisa Veterinria Brasileira.
Divide as suas atividades didticas e editoriais com a rotina de diagnstico virolgico no Setor de
Virologia (SV/UFSM) e com a orientao de bolsistas de iniciao cientca, mestrado e doutorado.
Coordena pesquisas nas reas de epidemiologia molecular e patogenia das infeces pelos vrus da
diarria viral bovina e herpesvrus bovino tipos 1 e 5.

SUMRIO

Parte I - Virologia Geral


1 Estrutura e composio dos vrus

19

Eduardo Furtado Flores

2 Classificao e nomenclatura dos vrus

37

Luciane Teresinha Lovato

3 Deteco, identificao e quantificao de vrus

59

Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen

4 Gentica e evoluo viral

87

Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo

5 Replicao viral

107

Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz

6 Replicao dos vrus DNA

137

Gustavo Delhon

7 Replicao dos vrus RNA

165

Maria Elisa Piccone & Eduardo Furtado Flores

8 Patogenia das infeces vricas

189

Eduardo Furtado Flores

9 Resposta imunolgica contra vrus

237

Luiz Carlos Kreutz

10 Epidemiologia das infeces vricas

261

Eduardo Furtado Flores

11 Diagnstico laboratorial de infeces vricas

295

Eduardo Furtado Flores

12 Vacinas vricas
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz

327

Parte II - Virologia Especial


13 Circoviridae

361

Janice R. Ciacci-Zanella

14 Parvoviridae

375

Mauro Pires Moraes e Paulo Renato da Costa

15 Papillomaviridae

397

Amauri Alfieri, Alice Alfieri & Sheila Wosiacki

16 Adenoviridae

413

Mauro Pires Moraes & Paulo Renato da Costa

17 Herpesviridae

333

Ana Cludia Franco & Paulo Michel Roehe

18 Poxviridae

489

Cludio Wageck Canal

19 Asfarviridae

513

Gustavo Delhon

20 Caliciviridae

525

John Neill

21 Picornaviridae

537

Elisabeth Rieder & Mrio Celso S. Brum

22 Flaviviridae

563

Julia Ridpath & Eduardo Furtado Flores

23 Togaviridae

593

Eduardo Furtado Flores

24 Coronaviridae

613

Luciane Teresinha Lovato & Renata Dezengrini

25 Arteriviridae

639

Marcelo de Lima & Fernando A. Osorio

26 Paramyxoviridae

657

Clarice Weis Arns, Fernando R. Spilki & Renata Servan de Almeida

27 Rhabdoviridae
Luis Rodriguez, Helena R. Batista, Paulo Michel Roehe & Gael Kurath

689

28 Orthomyxoviridae

721

Eduardo Furtado Flores, Luciane T. Lovato, Mariana S e Silva, Renata Dezengrini & Diego G. Diel

29 Bunyaviridae

755

Fernanda Silveira Flores Vogel

30 Reoviridae

773

Amauri Alfieri, Alice Alfieri, Elisabete Takiuchi & Zlia I. P. Lobato

31 Retroviridae

809

Ana Paula Ravazzollo & Ubirajara da Costa

32 Outras famlias virais

839

Fernanda Silveira Flores Vogel & Eduardo Furtado Flores


Abreviaturas e siglas

861

Glossrio

871

PARTE I
VIROLOGIA GERAL

ESTRUTURA E COMPOSIO DOS VRUS


Eduardo Furtado Flores

1 Introduo

21

2 Estrutura das partculas vricas

21

2.1 O genoma
2.2 O capsdeo
2.3 O envelope
2.4 A matriz

23
25
28
29

3 Protenas virais

30

4 Outros componentes dos vrions

31

4.1 Enzimas
4.2 Outras protenas virais
4.3 Lipdios
4.4 Carboidratos
4.5 cidos nuclicos celulares
4.6 Protenas celulares

31
31
31
31
31
32

5 Partculas vricas anmalas

32

6 Propriedades fsico-qumicas

33

7 Bibliografia consultada

33

1 Introduo
Os vrus so os microorganismos menores e
mais simples que existem. So muito menores do
que clulas eucariotas e procariotas e, ao contrrio destas, possuem uma estrutura simples e esttica. Esses agentes no possuem a maquinaria necessria para a produo de energia metablica e
para a sntese de protenas e, por isso, necessitam
das funes e do metabolismo celular para se
multiplicar. Fora de uma clula viva os vrus so
estruturas qumicas. A sua atividade biolgica s
adquirida no interior de clulas vivas, por isso
so parasitas intracelulares obrigatrios.
O genoma viral cido ribonuclico (RNA)
ou desoxirribonuclico (DNA) codica apenas
as informaes necessrias para assegurar a sua
multiplicao, empacotamento do genoma e para
subverso de funes celulares em benefcio da
sua multiplicao. Ao contrrio de clulas eucariotas e procariotas, os vrus no crescem ou se
dividem; e sim so produzidos pela associao
dos seus componentes pr-formados no interior
da clula infectada.
A palavra vrus utilizada para designar o
agente biolgico, o microorganismo. A estrutura
fsica denominada partcula viral, partcula v-

rica ou simplesmente vrion. A nomenclatura utilizada para designar as diversas hierarquias da


classicao taxonmica dos vrus (ordem, famlia, subfamlia, gnero, espcie) ser apresentada
no Captulo 2. No presente captulo, a terminologia vernacular ser utilizada. Por exemplo: o termo picornavrus ser utilizado para referir-se aos
membros da famlia Picornaviridae; os membros
da famlia Orthomyxoviridae sero chamados de
ortomixovrus.

2 Estrutura das partculas vricas


A unidade fundamental o indivduo dos
vrus denominada partcula vrica, partcula viral
ou simplesmente vrion. As dimenses, morfologia e complexidade das partculas vricas variam
amplamente entre os vrus das diferentes famlias. A grande maioria dos vrions possui dimenses ultramicroscpicas, com dimetro que varia
entre 15 e 22 nanmetros (nm) nos circovrus; e
entre 200 e 450 nm nos poxvrus; e s pode ser
visualizada sob microscopia eletrnica (ME). As
excees so alguns poxvrus que so maiores
e podem ser visualizados sob microscopia tica
(Figura 1.1).

Poxvrus
Clulas
animais

10-2
(1cm)

10-3
(1mm)

10-4
(0,1mm)

10-5
(10m)

Bactrias

10-6
(1m)

Vrus e
ribossomos

10-7
(0,1m)

Protenas

10-8
(10nm)

10-9
(1nm)

10-10
(1A)

Microscopia tica
Microscopia eletrnica

Fonte: adaptado de Flint et al.(2000).

Figura 1.1. Escala logartmica mtrica, ilustrando as dimenses dos vrus comparativamente com clulas animais,
bactrias e macromolculas. O poder de resoluo das microscopias tica e eletrnica indicado por barras.

22

Captulo 1

De acordo com a estrutura bsica das partculas, dois grupos principais de vrus podem ser
reconhecidos: os vrus sem envelope e os vrus
com envelope (Figura 1.2). Os vrions mais simples so compostos pelo genoma recoberto por
uma camada simples de protena, denominada
capsdeo. Os vrus mais complexos possuem genomas longos associados com vrias protenas,
recobertos por capsdeos complexos, revestidos
externamente por uma membrana lipoprotica
de origem celular, denominada envelope. As camadas proticas que envolvem o genoma (capsdeo, envelope) so freqentemente denominadas
de envoltrios virais. Os conceitos principais relacionados estrutura e componentes dos vrions
esto apresentados no Quadro 1.1.

Genoma

Capsdeo

B
Envelope

condies ambientais que rapidamente inativariam o cido nuclico. Por isso, o capsdeo e o
envelope so crticos para a manuteno da integridade e viabilidade do genoma, que contm
as informaes essenciais para a multiplicao
do vrus. Outras funes importantes dos componentes superciais das partculas vricas so
o reconhecimento e interao com estruturas da
membrana da clula hospedeira. Essas interaes
so essenciais para a penetrao do agente na clula e incio da sua replicao.
A arquitetura e modo com que as partculas
vricas so construdas devem permitir o desempenho de duas funes fundamentais: a) proteo do genoma durante o transporte entre clulas
e entre hospedeiros, e b) liberao do genoma ntegro e vivel aps a penetrao na clula hospedeira. A evoluo fez com que a arquitetura das
partculas vricas tenha sido adequada para cumprir essas tarefas. Ou seja, os vrions so resistentes o suciente para proteger o genoma no exterior das clulas e so facilmente desintegrados ao
penetrarem na clula hospedeira, para permitir a
pronta liberao do genoma no seu interior. Essas
duas propriedades, aparentemente opostas, que
so particularmente bem evidentes em alguns vrus sem envelope, caracterizam o que se convencionou denominar de estrutura metaestvel.

VRUS - DEFINIES
E CONCEITOS

Genoma
- O genoma constitudo por RNA ou DNA.

Capsdeo

- O capsdeo a camada protica que


recobre o genoma.
- Os protmeros so as unidades proticas
que compe o capsdeo.
- Os capsmeros so as unidades
morfolgicas do capsdeo.

Figura 1.2. Estrutura fundamental das partculas vricas


e seus componentes. Representao esquemtica de um
vrion sem envelope (A) e com envelope (B).

A funo primordial dos envoltrios virais


(capsdeo e envelope) proteger o genoma de
danos fsicos, qumicos ou enzimticos durante
a transmisso entre clulas e entre hospedeiros.
Nessa etapa, os vrions podem ser expostos a

- O nucleocapsdeo a estrutura formada


pelo genoma + capsdeo.
- O envelope a membrana lipoprotica
que recobre o nucleocapsdeo
- O vrion a partcula vrica completa, infecciosa.

Quadro 1.1. Conceitos e definies fundamentais.

Estrutura e composio dos vrus

2.1 O genoma
O genoma dos vrus constitudo por molculas de cido ribonuclico (RNA) ou desoxirribonuclico (DNA), nunca pelos dois. Por isso,
esses agentes so comumente denominados de
vrus RNA ou vrus DNA. Em geral, os vrus das
diversas famlias contm apenas uma cpia do
genoma por vrion (so haplides). Uma exceo so os retrovrus, que possuem duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). A extenso,
estrutura, organizao genmica e o nmero de
genes contidos no genoma variam amplamente entre os diferentes vrus. Os menores vrus
animais (circovrus) possuem uma molcula de
DNA com aproximadamente 1.700 nucleotdeos
(1,7 quilobases, kb) como genoma; os vrus maiores possuem um genoma DNA com mais de 350
kb (poxvrus). O nmero de genes e conseqentemente o nmero de protenas codicadas
tambm varia entre os diferentes vrus. Alguns
vrus de plantas codicam apenas uma protena,
enquanto o genoma dos poxvrus codica mais
de 100.
Em geral, o genoma dos vrus muito compacto e codica apenas as protenas essenciais
para assegurar a sua replicao e transmisso.
Resumidamente, essas funes compreendem: a)
assegurar a replicao do genoma (enzimas polimerases de RNA e DNA e protenas acessrias);
b) subverter funes celulares em seu benefcio
(protease leader no vrus da febre aftosa [foot and
mouth disease virus, FMDV]) e c) empacotar o genoma (protenas do capsdeo e envelope). Essas
funes so codicadas pelo genoma de, virtualmente, todos os vrus. Alguns vrus mais complexos codicam funes adicionais que, de alguma
forma, favorecem a sua multiplicao e disseminao.
O tipo e estrutura do genoma de muitos
vrus diferem do padro clssico observado nos
cidos nuclicos de eucariotas e procariotas. Nesses organismos, o genoma constitudo por molculas de DNA de cadeia dupla (ds, double-stranded); enquanto os RNAs possuem ta simples (ss,
single-stranded). Os genomas dos vrus apresentam variaes de tipo e estrutura, que incluem

23

desde genomas de DNA de ta simples (ssDNA)


at RNA de ta dupla (dsRNA) (Tabelas 1.1 e 1.2,
em anexo).
A maioria dos vrus DNA possui o cido
nuclico genmico como uma molcula de ta
dupla. As excees so os parvovrus (cadeia
simples linear), os circovrus (cadeia simples circular) e os hepadnavrus (cadeia parcialmente
dupla). O termo circular refere-se continuidade
da cadeia de DNA e no forma geomtrica adotada pela molcula. Ao contrrio dos genomas
lineares, que apresentam as extremidades livres,
os genomas circulares apresentam a cadeia contnua, sem extremidades.
Os poliomavrus e papilomavrus possuem
uma molcula de DNA de cadeia dupla circular.
Essa molcula apresenta-se enrolada/tensionada
sobre o seu eixo longitudinal (do ingls: supercoiled) e est associada com protenas celulares denominadas histonas, tanto nas clulas infectadas
como nos vrions. Os parvovrus possuem uma
molcula de DNA de cadeia simples, cujas extremidades possuem seqncias complementares
invertidas (palindromes). Essa caracterstica permite que as extremidades do genoma se dobrem
sobre si mesmas, pareando com a sua regio
complementar e formando estruturas semelhantes a grampos de cabelo (hairpins). Os genomas
dos adenovrus e herpesvrus so molculas de
DNA de cadeia dupla linear. Nos herpesvrus, o
genoma linear apenas nos vrions, pois assume
a topologia circular (devido ao pareamento complementar nas extremidades) logo aps a entrada
no ncleo da clula. O genoma dos hepadnavrus
uma molcula de DNA de cadeia parcialmente
dupla (aproximadamente 3/4), o restante possui cadeia simples. As extremidades da cadeia
completa fazem um pareamento de bases entre
si, conferindo molcula a topologia circular
(a cadeia de DNA no contnua). Os poxvrus
possuem uma molcula de DNA de cadeia dupla
linear; porm as duas cadeias so contnuas, ou
seja, no h extremidades livres. Uma ilustrao
simplicada da morfologia das partculas e da
topologia do genoma dos vrus DNA est apresentada na Figura 1.3.

24

Captulo 1

Circoviridae

Parvoviridae

Adenoviridae

Herpesviridae

Hepadnaviridae

Polyomaviridae
Papillomaviridae

Poxviridae

Asfarviridae

Fonte: adaptado de Gelderson, H. R. www.gsbs.utmb.edu

Figura 1.3. Ilustrao simplificada da morfologia dos


vrions e da topologia do genoma dos vrus DNA.

O cido nuclico genmico de todos os vrus


RNA composto por molculas lineares. Em algumas famlias (Orthomyxoviridae e Bunyaviridae),
essas molculas circularizam pelo pareamento de
seqncias complementares, localizadas nas extremidades, formando estruturas que lembram
cabos de panela (panhandles). A maioria dos vrus
RNA possui o seu cido nuclico genmico como
uma molcula de cadeia simples. As excees
so os reovrus e os birnavrus, cujos genomas
so formados por segmentos de RNA de cadeia
dupla (10 a 12 segmentos nos reovrus, dois nos
birnavrus). Os genomas dos vrus RNA de cadeia simples podem ser constitudos por uma
nica molcula (no-segmentados) ou por mais
de uma molcula (genomas segmentados: sete a
oito molculas de RNA nos ortomixovrus, trs
nos buniavrus e duas nos arenavrus).
O genoma de alguns vrus RNA de cadeia
simples possui o mesmo sentido do RNA mensageiro (mRNA) e pode ser diretamente traduzido pelos ribossomos da clula hospedeira. Isso

possvel porque a seqncia de nucleotdeos, que


codica os aminocidos constituintes da protena, est alinhada no mesmo sentido da seqncia
genmica. Esses mRNA (e os respectivos vrus)
so denominados RNA de sentido ou polaridade positiva; ou simplesmente RNA+. A primeira
etapa intracelular do ciclo replicativo desses vrus
a traduo parcial ou total do RNA genmico,
resultando na produo de protenas virais, entre
as quais a enzima polimerase de RNA (replicase),
que ir replicar o genoma.
Outros vrus RNA de cadeia simples possuem genomas que no podem ser diretamente
traduzidos, pois possuem o sentido contrrio (antissense) ao mRNA. Esses genomas (e os respectivos vrus) so denominados de RNAs de sentido ou polaridade negativa (RNA-). Esses vrus
trazem a enzima polimerase de RNA nos vrions
para permitir o incio da replicao do genoma.
A etapa inicial da replicao a sntese de uma
cpia de RNA de polaridade positiva (mRNA) a
partir do RNA genmico. Ou seja, nesses vrus, a
sntese protica ocorre pela traduo do mRNA,
que possui sentido antigenmico.
Os genomas RNA dos buniavrus e arenavrus no so diretamente traduzidos pelos ribossomos, sendo considerados RNA de sentido
negativo. Esses RNAs servem de molde para a
transcrio e produo de cpias de RNA de sentido positivo (RNA+ ou mRNA) de extenso parcial ou total do genoma. No entanto, em alguns
desses vrus, um dos segmentos de RNA codica
protenas tanto no sentido do genoma como na
molcula de sentido oposto (antigenmico). Essa
estratgia de expresso gnica denominada ambissense e uma caracterstica nica dessas famlias.
Nos reovrus e birnavrus (genomas RNA
segmentados de ta dupla), a cadeia negativa
serve de molde para a transcrio e produo de
mRNA (RNARNA+). A cadeia complementar de RNA genmico (sentido positivo) no
traduzida. Essa molcula serve apenas de molde
e para parear com a cadeia negativa. A Figura 1.4
apresenta uma ilustrao simplicada da morfologia dos vrions e topologia do genoma dos vrus RNA.

25

Estrutura e composio dos vrus

Picornaviridae

Coronaviridae

Orthomyxoviridae

Astroviridae

Flaviviridae

Caliciviridae

Retroviridae

Arenaviridae

Reoviridae

Filoviridae

Arteriviridae

Birnaviridae

Rhabdoviridae

Togaviridae

Bunyaviridae

Paramyxoviridae

Fonte: adaptado de Gelderson, H. R. www.gsbs.utmb.edu

Figura 1.4. Ilustrao simplificada da morfologia dos vrions e da topologia do genoma dos vrus RNA.

2.2 O capsdeo
O capsdeo (tambm chamado de cpsula)
a camada protica que recobre externamente o
genoma. Nos vrus que no possuem envelope,
o capsdeo representa o nico envoltrio do cido nuclico viral. Alm dessa cobertura protica,
o genoma de alguns vrus encontra-se associado
com uma ou mais protenas de origem viral (p.
ex.: adenovrus e reovrus) ou da clula hospedeira (poliomavrus e papilomavrus). As protenas
que esto associadas ao genoma geralmente possuem carter bsico, sendo formadas predominantemente por aminocidos com carga positiva.
Essa estrutura, geralmente compacta (genoma +
protenas associadas), denominada core ou ncleo. O conjunto formado pelo core + capsdeo
comumente denominado nucleocapsdeo. Nos vrus envelopados, o nucleocapsdeo recoberto

externamente pela membrana lipoprotica que


constitui o envelope (Figura 1.2).
A funo do capsdeo proteger o material
gentico e proporcionar a transferncia do vrus entre clulas e entre hospedeiros. Nos vrus
sem envelope, a superfcie externa do capsdeo
responsvel pelas interaes iniciais dos vrions
com a clula hospedeira no processo de penetrao do vrus. Nesses vrus, as protenas localizadas na superfcie do capsdeo tambm interagem
com componentes do sistema imunolgico e so
alvos importantes para anticorpos com atividade
neutralizante.
Os capsdeos so formados pela associao
de subunidades proticas denominadas protmeros, que se constituem nas suas unidades estruturais. A associao dessas protenas pode formar
estruturas tridimensionais bem denidas, geralmente na forma de pequenas salincias visveis
na superfcie dos vrions. Essas estruturas consti-

26

tuem-se nas unidades morfolgicas do capsdeo,


tambm denominadas capsmeros. Cada capsmero pode ser formado por uma nica protena,
pela associao de molculas de uma mesma protena ou por diferentes protenas (Figura 1.5).

Assim, o capsdeo pode ser formado por cpias de uma mesma protena (vrus do mosaico,
rabdovrus) ou por diferentes tipos de protenas
(mais de dez tipos diferentes nos reovrus), e todas se encontram em mltiplas cpias e so codicadas pelo genoma viral. Os capsdeos compostos por cpias mltiplas de uma mesma protena
representam um exemplo de ecincia estrutural
de armazenamento e economia de espao no genoma, pois um nico gene codica a protena necessria para formar todo o envoltrio viral. Independente do nmero de protenas que compem
o capsdeo, a associao entre essas protenas
pode resultar em capsdeos com duas simetrias
principais: icosadrica e helicoidal (Figura 1.5).

Captulo 1

O icosaedro se constitui em uma estrutura


quase esfrica com uma cavidade interna. Os
capsdeos icosadricos (tambm denominados
cbicos) so formados pela associao de 20 unidades triangulares planas idnticas, unidas entre
si em 12 vrtices e arranjadas ao redor de uma
esfera imaginria (Figura 1.6). Eixos imaginrios
traados atravs do icosaedro do origem a trs
possveis planos de simetria: bilateral (two-fold),
trilateral (three-fold) e pentalateral (ve-fold). O
nmero de unidades que compem cada unidade triangular varivel e d origem a variaes
estruturais entre os capsdeos de diferentes vrus.
O icosaedro representa a otimizao estrutural
para a construo de um envoltrio resistente,
compacto e com mxima capacidade de armazenamento, podendo ser composto por mltiplas
cpias de uma mesma protena.

27

Estrutura e composio dos vrus

Os capsdeos helicoidais so formados por


mltiplas cpias de uma mesma protena. Essas
protenas se associam entre si e com o cido nuclico, revestindo externamente o genoma. Essa
associao resulta em uma estrutura espiralada
alongada, exvel ou relativamente rgida (Figura 1.7). As dimenses dos nucleocapsdeos helicoidais variam muito, dependendo da extenso
do genoma, podendo atingir at 1.800 nm nos
lovrus.

A maioria dos vrus animais possui capsdeos icosadricos ou helicoidais, mas alguns (poxvrus, iridovrus e bacterifagos) possuem capsdeos com arquitetura mais complexa, denominados
genericamente capsdeos complexos.
Com base na arquitetura, simetria e complexidade de arquitetura, os vrions de diferentes
famlias podem ser agrupados em cinco grupos
estruturais (Figura 1.8):

1. Capsdeo icosadrico

1B

1A

2. Capsdeo helicoidal

Figura 1.7. Ilustrao esquemtica de nucleocapsdeos


helicoidais. A. Nucleocapsdeo helicoidal com
morfologia definida; B. Nucleocapsdeo helicoidal
flexvel.

Os capsdeos helicoidais de alguns vrus de


plantas apresentam-se como cilindros exveis
ou rgidos, no interior do qual est localizado o
genoma. So todos vrus sem envelope. Os vrus
animais que possuem nucleocapsdeos helicoidais possuem genoma RNA de sentido negativo
e so todos envelopados. O nucleocapsdeo helicoidal desses vrus formado pela associao de
cpias mltiplas da protena do capsdeo com o
genoma, que adota uma forma espiralada. Nos
rabdovrus, o nucleocapsdeo adota uma forma
bem denida, semelhante a um projtil de arma
de fogo, no interior do qual se aloja o genoma
espiralado (Figura 1.7A). Na maioria dos vrus,
o nucleocapsdeo helicoidal exvel e enovelase sobre si mesmo e sobre o genoma sem adotar
uma forma denida (Figura 1.7 B).

2A

2B

Fonte: adaptada de Carter et al. (2005).

Figura 1.8. Os cinco principais tipos estruturais dos


vrus. 1. Vrions com capsdeos icosadricos: 1A. Sem
envelope; 1B. Com envelope. 2. Vrions com capsdeos
helicoidais: 2A. Sem envelope; 2B. Com envelope. 3.
Vrion com simetria complexa.

28

Captulo 1

sem envelope, capsdeo icosadrico: ex:


adenovrus, picornavrus;
sem envelope, capsdeo helicoidal: ex: vrus do mosaico do tabaco;
com envelope, capsdeo isosadrico: ex: togavrus, herpesvrus;
com envelope, capsdeo helicoidal: ex: paramixovrus, rabdovrus;
complexos: ex: bacterifagos, poxvrus.

2.3 O envelope
Os vrions de vrias famlias possuem os nucleocapsdeos recobertos externamente por uma
membrana lipoprotica denominada envelope.
O envelope formado por uma camada lipdica
dupla, derivada de membranas celulares. Nessas
membranas esto inseridas um nmero varivel
de protenas codicadas pelo genoma viral. Na
maioria dos vrus, o envelope est justaposto
externamente ao capsdeo. Nos herpesvrus, entretanto, existe um espao de espessura varivel
entre o capsdeo e o envelope, que preenchido
por uma substncia protica amorfa, denominada tegumento. A quantidade e a forma adotada
pelo tegumento so variveis e, conseqentemente, determinam a variao da morfologia e
dimenses da partcula dos herpesvrus. Como o
envelope derivado de membranas celulares, e
estas so uidas e exveis, a superfcie externa
e a morfologia dos vrus envelopados so mais
exveis e menos denidas do que nos vrus sem
envelope. A estrutura de um vrion com envelope est ilustrada na Figura 1.9.

nucleocapsdeo
genoma
membrana
lipdica

envelope

glicoprotenas

Adaptado de Reschke, M.; www.biographix.de

Figura 1.9. Ilustrao esquemtica da estrutura de um


vrion com envelope. As aberturas no envelope e no
capsdeo so meramente ilustrativas, com o fim de
permitir a visualizao das estruturas internas.

Os vrions adquirem a membrana lipdica


que compe o envelope pela insero/protuso
do nucleocapsdeo atravs de membranas celulares, mecanismo denominado brotamento. Os
lipdios que constituem o envelope so derivados das membranas da clula hospedeira, e as
protenas so codicadas pelo genoma viral. A
estrutura lipdica dupla dos envelopes bem semelhante entre os diferentes vrus. No entanto, a
espessura e composio dessa camada variam de
acordo com a membrana celular que os originou.
O envelope, adquirido na membrana plasmtica,
contm fosfolipdios e colesterol em determinada
proporo, enquanto o envelope originado das
membranas celulares internas mais delgado e
contm pouco ou nenhum colesterol. Os envelopes virais praticamente no contm protenas celulares. As protenas celulares da membrana so
excludas da regio do brotamento por interaes
entre as protenas virais que se inserem na camada lipdica.
Os envelopes dos vrus podem conter um ou
mais tipos de protenas codicadas pelo genoma
viral (os herpesvrus possuem entre 10 e 12; os
poxvrus possuem um nmero ainda maior). A
maioria das protenas do envelope contm oligossacardeos (acares) associados, constituindo-se,
portanto, em glicoprotenas. Essas glicoprotenas
so produzidas e modicadas no retculo endoplasmtico rugoso (RER) e no aparelho de Golgi,
cando inseridas na prpria membrana do RER
ou sendo enviadas para a membrana nuclear do
Golgi ou para a membrana plasmtica, locais do
brotamento.
As glicoprotenas do envelope viral possuem dimenses e estruturas variveis e a maioria formada por protenas integrais de membrana
(Figura 1.10A). Essas glicoprotenas podem estar
presentes na forma de monmeros, homo ou heterodmeros, trmeros e at tetrmeros. Em geral,
as glicoprotenas do envelope apresentam trs
regies principais em comum: a) uma regio citoplasmtica ou interna (cauda); b) uma regio
transmembrana (tm) e c) uma regio externa. A
cauda geralmente pequena e interage com a superfcie externa do nucleocapsdeo no processo
de morfognese e brotamento. A regio tm est
inserida na camada lipdica e serve de sustentao e xao da protena. A extenso dessa re-

29

Estrutura e composio dos vrus

gio varia de acordo com a espessura e origem


da camada lipdica: entre 18 (vrus da febre amarela, que brota no retculo endoplasmtico) e 26
aminocidos (vrus da inuenza, que adquire o
envelope na membrana plasmtica). A regio tm
composta principalmente por aminocidos hidrofbicos. Algumas glicoprotenas do envelope
possuem vrias regies tm e, assim, atravessam
a membrana duas ou trs vezes. Outras no possuem regio tm e, portanto, no se encontram
inseridas na membrana lipdica. Essas glicoprotenas encontram-se associadas ao envelope por
interaes covalentes ou no-covalentes com outras glicoprotenas integrais de membrana e, por
isso, so ditas protenas perifricas de membrana
(Figura 1.10B). Exemplos desse tipo de protena
so as glicoprotenas E0 dos pestivrus e a SU dos
retrovrus. A regio externa geralmente maior;
hidroflica e contm um nmero varivel de oligossacardeos associados. As glicoprotenas do
envelope de alguns vrus formam projees na
superfcie dos vrions, denominadas peplmeros,
que podem ser visualizadas sob ME.

TM

d) transmisso do vrus entre clulas. Nas etapas


nais do ciclo replicativo, algumas glicoprotenas
do envelope auxiliam no egresso das partculas
recm-formadas, permitindo a sua liberao a
partir da membrana celular (neuraminidase nos
ortomixovrus). As glicoprotenas do envelope
tambm desempenham um importante papel na
interao do vrus com o sistema imunolgico e
se constituem em alvos importantes para anticorpos neutralizantes.
Como as glicoprotenas do envelope mediam as interaes iniciais dos vrions com as
clulas, a sua integridade e conformao natural so essenciais para a infectividade do vrus.
Algumas substncias qumicas (formalina e detergentes) ou agentes fsicos (calor e radiaes)
alteram a conformao dessas protenas e, conseqentemente, reduzem ou eliminam a infectividade do vrus. Solventes lipdicos, como ter e
clorofrmio, tambm afetam negativamente a infectividade de vrus envelopados, pois destroem
a integridade da camada lipdica que compe o
envelope.
Os vrions adquirem o envelope por meio de
um mecanismo denominado genericamente de
brotamento. Nesse processo, o nucleocapsdeo inicialmente interage com as caudas das glicoprotenas previamente inseridas na membrana. Essa
interao inicial seguida da protuso/insero
do nucleocapsdeo atravs da membrana, resultando na formao de vrions com uma camada
lipoprotica que envolve externamente o nucleocapsdeo (Figura 1.11). O local do brotamento
varia entre os diferentes vrus e pode ocorrer na
membrana nuclear, do RER, do aparelho de Golgi ou na membrana plasmtica.

2.4 A matriz
Figura 1.10. Representao simplificada da estrutura das
glicoprotenas do envelope viral. A. Protena integral de
membrana com as regies interna (I), transmembrana
(TM) e externa (E); M. membrana lipdica; B. Duas
protenas associadas: uma integral de membrana (cinza)
associada com uma protena perifrica (preto).

As glicoprotenas, principalmente por meio


de sua regio extracelular, desempenham vrias
funes na biologia do vrus, incluindo: a) ligao aos receptores celulares; b) fuso do envelope
com a membrana celular; c) penetrao celular e

Alguns vrus envelopados possuem protenas que recobrem externamente o nucleocapsdeo, mediando a sua associao com a superfcie
interna do envelope. Essas protenas, denominadas de matriz, so geralmente glicosiladas e
abundantes, podendo corresponder a at 30% da
massa total dos vrions (como nos retrovrus).
As protenas da matriz so encontradas em vrios vrus envelopados, principalmente nos vrus
RNA de polaridade negativa (exemplos: parami-

30

Captulo 1

Meio extracelular

Membrana
plasmtica

Citoplasma

Figura 1.11. Etapas do brotamento e aquisio do envelope por vrus envelopados. 1. Interao do nucleocapsdeo com
as caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope; 2-3. Insero/protuso do nucleocapsdeo atravs da
membrana; 4. Egresso da partcula completa.

xovrus e ortomixovrus). As protenas da matriz


desempenham importante funo estrutural e na
morfognese das partculas vricas, pois interagem simultaneamente com a superfcie externa
do nucleocapsdeo e com as caudas das glicoprotenas, funcionando como adaptadores entre o
nucleocapsdeo e o envelope.

PA+PB1+PB2

NP
HA

3 Protenas virais
O genoma dos vrus codica duas classes
principais de protenas: estruturais e no-estruturais. As protenas estruturais so aquelas que participam da construo e arquitetura da partcula
vrica (Figura 1.12), ou seja, esto presentes como
componentes estruturais dos vrions. Enquadram-se nessa classe as protenas do nucleocapsdeo e do envelope. As protenas do tegumento
(herpesvrus) e as protenas da matriz tambm se
constituem em protenas estruturais.
As protenas no-estruturais so aquelas codicadas pelo genoma viral e produzidas no
interior da clula hospedeira durante o ciclo replicativo, mas que no participam da estrutura
das partculas vricas. So geralmente protenas
com atividades enzimticas e/ou regulatrias
que participam das diversas etapas do ciclo replicativo do vrus e de sua interao com as organelas e macromolculas da clula hospedeira.

NA

M2

Figura 1.12. Ilustrao esquemtica da estrutura de um


ortomixovrus (vrus da influenza), indicando a
localizao das protenas na partcula vrica.
Glicoprotenas do envelope: HA: hemaglutinina; NA:
neuraminidase; M2: canal de ons; M: protena da matriz.
Componentes do complexo ribonucleoprotena: RNA:
recoberto pela NP; NP: nucleoprotena; PA: polimerase
cida; PB1: polimerase bsica 1; PB2: polimerase bsica 2.

So exemplos de protenas no-estruturais as enzimas polimerases de DNA (DNA polimerase) e


RNA (RNA polimerase), enzimas envolvidas no
metabolismo de nucleotdeos (timidina quinase,
ribonucleotdeo redutase etc.), fatores de transcrio e regulao da expresso gnica (ICP0
nos herpesvrus, protena E1A dos adenovrus,

31

Estrutura e composio dos vrus

antgeno T dos poliomavrus), entre outras. O


nmero de protenas no-estruturais (e tambm
estruturais) codicadas pelo genoma varia com
a complexidade dos vrus. Os vrus mais simples codicam uma ou poucas protenas noestruturais, enquanto os poxvrus e herpesvrus
codicam dezenas de protenas com atividades
enzimticas e regulatrias, que desempenham
funes diversas no seu ciclo replicativo. Embora
estejam presentes nas partculas vricas de vrias
famlias, protenas com atividade enzimtica so
consideradas protenas no-estruturais.

4 Outros componentes dos vrions


4.1 Enzimas
Protenas com atividade enzimtica esto
presentes nas partculas vricas de membros de
vrias famlias de vrus DNA e RNA. Essas enzimas so necessrias para a sntese do cido nuclico viral e/ou para a biossntese de nucleotdeos e, geralmente, catalisam reaes nicas dos
vrus, que no encontram fatores com funes
similares nas clulas hospedeiras. Os vrus RNA
de sentido negativo, por exemplo, trazem a enzima RNA polimerase (polimerase de RNA dependente de RNA) nos vrions. Os retrovrus trazem,
nos vrions, a enzima transcriptase reversa (polimerase de DNA dependente de RNA; tambm
polimerase de DNA dependente de DNA). Os
hepadnavrus tambm trazem a enzima polimerase (polimerase de DNA dependente de DNA e
tambm de RNA) nos vrions. Os poxvrus trazem, em seus vrions, enzimas RNA polimerases
(com atividade equivalente s do hospedeiro),
alm de enzimas que modicam o mRNA. Essas
enzimas so necessrias para a realizao dessas
funes no citoplasma, onde ocorre a replicao
viral. Endonucleases (ortomixovrus), proteases
(vrios vrus), quinases (hepadnavrus), integrase
e ribonuclease (retrovrus) so exemplos de atividades enzimticas presentes em partculas virais.
Os retrovrus complexos (exemplo: vrus da imunodecincia humana HIV) possuem protenas
adicionais nos vrions, VPR e VIF, que so importantes para a replicao eciente em alguns tipos
de clulas.

4.2 Outras protenas


Protenas sem atividade enzimtica, mas
que possuem participao no ciclo replicativo,
tambm esto presentes nos vrions de algumas
famlias. Os herpesvrus possuem, como parte do
tegumento, a VP-16 (ou -TIF), que um transativador dos genes iniciais, e a VHS, uma protena
que degrada os mRNA da clula hospedeira.

4.3 Lipdios
Os lipdios presentes nos envelopes virais
so tipicamente os mesmos das membranas celulares, onde os vrions adquirem o seu envoltrio
externo. Os envelopes originados da membrana
plasmtica contm principalmente fosfolipdios
(50-70%) e colesterol, enquanto os envelopes adquiridos em membranas celulares internas (nuclear, Golgi, RER) possuem pouco ou nenhum
colesterol. Os lipdios constituem entre 20 e 35%
da massa dos vrus envelopados.

4.4 Carboidratos
Os carboidratos podem estar presentes em
vrions como componentes de glicoprotenas, glicolipdios e mucopolissacardeos. Esses carboidratos esto presentes principalmente no envelope, mas os vrus complexos (poxvrus) tambm
possuem carboidratos associados com protenas
internas e/ou do capsdeo.

4.5 cidos nuclicos celulares


Alguns vrus podem ocasionalmente encapsidar em seus vrions, fragmentos de DNA cromossmico da clula hospedeira (poliomavrus).
Os vrions dos retrovrus contm molculas de
RNA transportador (tRNA) adquiridos da clula infectada. Esse tRNA desempenha um papel
importante no incio do ciclo replicativo do vrus,
pois serve de iniciador (primer) para a sntese da
cadeia de DNA a partir do RNA genmico viral.
Os vrions da famlia Arenaviridae contm ribossomos da clula hospedeira, o que lhes confere
uma aparncia granular quando examinados sob

32

ME (da a denominao da famlia, arena = areia).


Os vrions dos ortomixovrus podem conter RNA
ribossmico derivado das clulas hospedeiras.

4.6 Protenas celulares


No ncleo da clula hospedeira, o genoma
DNA recm-replicado dos poliomavrus e papilomavrus associa-se com protenas celulares denominadas histonas (H), formando estruturas semelhantes cromatina celular. Essas estruturas,
chamadas de minicromossomas, que contm o
DNA viral, conjugado com as histonas H2A, H2B,
H3 e H4, so encapsidadas durante a morfognese das partculas virais. Cabe ressaltar que cada
vrion dos papilomavrus e poliomavrus contm
uma cpia do genoma, ou seja, um minicromossoma. Os vrions dessas famlias, portanto, contm certa quantidade de protenas celulares.

5 Partculas vricas anmalas


Alm de partculas vricas completas e infectivas, a replicao de alguns vrus pode resultar
na produo de uma quantidade varivel de partculas vricas anmalas, geralmente no-infecciosas. A freqncia e abundncia dessas partculas em relao aos vrions completos e infecciosos
variam amplamente de acordo com o vrus. So
muitas as causas da ausncia de infectividade
nessas partculas, incluindo:
ausncia do genoma viral. Clulas infectadas por poliomavrus podem produzir capsdeos
vazios, sem o DNA genmico; outros capsdeos
podem conter fragmentos de DNA celular. Essas
partculas so denominadas pseudovrions;
clulas infectadas por vrus de genoma
RNA segmentado (ortomixovrus, por exemplo)
podem produzir vrions com o conjunto incompleto dos segmentos genmicos;
vrios vrus podem encapsidar genomas
com delees em um ou mais genes. Os vrions
que contm esses genomas defectivos so denominados partculas defectivas. Esses vrions no
replicam autonomamente e somente so capazes
de replicar quando ocorre uma co-infeco com
um vrus homlogo infeccioso (denominado de
vrus helper);

Captulo 1

os picornavrus podem ocasionalmente


apresentar capsdeos vazios em razo da degradao do genoma;
clulas infectadas com os hepadnavrus
(vrus da hepatite B) produzem vrions completos (Dane particles) e tambm duas formas de
partculas incompletas (partculas esfricas de 20
nm e partculas lamentosas) (Figura 1.13). As
partculas incompletas so formadas por molculas da glicoprotena de superfcie (HbsAg), associadas com segmentos de membranas celulares.
Para cada vrion completo, so produzidas entre
10.000 e 1.000.000 partculas esfricas. A abundncia dessas partculas no sangue de pessoas
infectadas cronicamente tem sido utilizada como
ferramenta para o diagnstico e, durante muitos
anos, foi utilizada para a produo de vacinas.

A. Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).


B. Fonte: Dr. Linda Stannard, www.uct.ac.za.

Figura 1.13. Partculas produzidas por clulas infectadas


pelo vrus da hepatite B (hepadnavrus). A. Ilustrao
esquemtica e B. fotografia de microscopia eletrnica. As
partculas esfricas maiores com parede dupla so as
partculas infecciosas (dane particles); as esfricas
menores e as filamentosas so partculas defectivas,
compostas por protenas de superfcie e pores de
membranas celulares.

33

Estrutura e composio dos vrus

6 Propriedades fsico-qumicas
Vrios agentes fsicos e qumicos podem
afetar a integridade funcional e infectividade dos
vrions, incluindo a temperatura e o pH. A ao
deletria da temperatura sobre a viabilidade dos
vrus possui importncia durante a manipulao
e remessa de material clnico para o diagnstico,
como tambm para a preservao de estoques virais na rotina laboratorial. Alm disso, pode ser
um fator limitante para a sua disseminao entre
hospedeiros. Temperaturas de 55 a 60C desnaturam as protenas de superfcie, sobretudo as do
envelope, em poucos minutos, tornando os vrions incapazes de interagir produtivamente com
receptores celulares e iniciar a infeco. Temperaturas ambientais altas tambm afetam negativamente a infectividade dos vrus.
Os vrus envelopados so geralmente muito
mais sensveis ao deletria de altas temperaturas sobre a infectividade. Alguns vrus, como
os paramixovrus, so particularmente susceptveis a temperaturas ambientais e tambm perdem a infectividade quando submetidos a congelamento e descongelamento. A conservao de
vrus em suspenso lquida por longos perodos
deve ser realizada a temperaturas de -70C ou em
nitrognio lquido (-196C). Outra forma segura e
eciente de armazenar vrus por longos perodos
sem perder infectividade por meio de liolizao (dessecao a temperaturas de congelamento) e conservao do material liolizado (p) a
4C ou -20C.
Para vrus em suspenso, temperaturas de 4
a 6C so compatveis com a preservao da infectividade apenas por horas ou poucos dias; temperaturas de 4 ou -20C no so indicadas para
conservao por longos perodos. A resistncia
a diferentes condies de pH varia amplamente;
alguns vrus sem envelope (rotavrus, alguns picornavrus) mantm a infectividade mesmo em
condies de pH cido e so chamados de cidoresistentes; outros, sobretudo os envelopados, so
inativados j em pH um pouco abaixo do neutro
(5 a 6) e so chamados de cido-lbeis. Agentes
qumicos que possuem ao desnaturante sobre
protenas e/ou solventes e detergentes lipdicos
possuem ao deletria sobre a infectividade dos

vrus e muitos so utilizados como desinfetantes


de materiais, equipamentos e ambientes. Em geral, os vrus sem envelope so muito mais resistentes a agentes qumicos e condies ambientais
do que os vrus com envelope.

7 Bibliografia consultada
BAKER, T.S.; JOHNSON, J.E. Principles of virus structure
determination. In: CHIU, W.; BURNETT, R.M.; GARCEA, R.L.
(ed). Structural biology of viruses. New York, NY: Oxford
University Press, 1997. p.38-79.
CANN, A.J. Principles of molecular virology. 2. ed. San Diego,
CA: Academic Press, 1997. 310p.
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construction of regular viruses. Cold spring harbor symposium
on quantitative biology, v.27, p.1-24, 1962.
CHAPMAN, M.S.; GIRANDA, V.L.; ROSSMANN, M.G. The
structures of human rhinovirus and mengo virus: relevance to
function and drug design. Seminars in virology, v.1, p.413-427,
1990.
DULBECCO, R.; GINSBERG, H.S. Microbiologia de Davis:
virologia. 2. ed. So Paulo: Harbra, 1980. v.4, 1763p.
FLINT, S.J. et al. Principles of virology: molecular biology,
pathogenesis and control. Washington, DC: ASM Press, 2000.
804p.
GARCEA, R.L.; LIDDINGTON, R.C. Structural biology of
polyomaviruses. In: CHIU, W.; BURNETT, R.M.; GARCEA, R.L.
(eds). Structural biology of viruses. New York, NY: Oxford
University Press, 1997. p.157-187.
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HOWLEY, P.M. (Eds.). Fields virology. 4. ed. Philadelphia, PA:
Lippincott Williams & Wilkins, 2001. Cap.3, p.53-85.
HUNTER, E. Virus assembly. In: KNIPE, D.M.; HOWLEY,
P.M. (Eds). Fields virology. 4.ed. Philadelphia, PA: Lippincott
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MURPHY, F.A. et al. Veterinary virology. 3. ed. San Diego, CA:
Academic Press, 1999. 629p.
MURRAY, P.R. et al. Medical microbiology. 2. ed. St. Louis:
Mosby Year Book, 1994, p.573.
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648p.
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ROSSMANN, M.G. et al. Structure of a human cold virus and
structural relationship to other picornaviruses. Nature, v.317,
p.145-153, 1985.

34

Captulo 1

RYAN, K.J. Sherris medical microbiology: an introduction to


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STEWART, P.L.; BURNETT, R.M. The structure of adenovirus.
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WHITE, D.O.; FENNER, F. Medical virology. 4. ed. San Diego,
CA: Academic Press, 1994. 603 p.

WIMMER, E. Cellular receptors for animal viruses. New York,


NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. 526p.
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Disponvel em: <http://www.ivis.org>. Acesso em: 20 set.
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WILSON, J.A.T.; SKEHEL, T.S.; WILEY, D.C. Structure of the


hemagglutinin membrane glycoprotein of inuenza virus at 3A
resolution. Nature, v.289, p.366-373, 1981.

Anexos

FITA DUPLA

FITA SIMPLES

Tabela 1.1. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus DNA
Famlia

Capsdeo

Envelope

Dimenses e morfologia
do vrions

Caractersticas do
genoma

Circoviridae

Icosadrico

No

15-22 nm,
esfrico-icosadricos

DNA de cadeia simples,


circular, 1.7-2,2kb

Parvoviridae

Icosadrico

No

25nm, icosadricos

DNA de cadeia simples, linear,


seqncias complementares
nas extremidades, flexionadas
sobre si (hairpins), 5 kb

Polyomaviridae

Icosadrico

No

45nm, esfrico-icosadricos

DNA de cadeia dupla,


circular, superenrolada,
5 kb

Papillomaviridae

Icosadrico

No

55nm, esfrico-icosadricos

Adenoviridae

Icosadrico

No

80-110nm, icosadricos

DNA de cadeia dupla, linear,


com uma protena nas
extremidades, 30-44 kb

Herpesviridae

Icosadrico

Sim

120-200 nm, pleomrficos


ou aproximadamente
esfricos

DNA de cadeia dupla,


linear, 120-235 kb

Poxviridae

Complexo

Sim

170- 200 x 300-450nm,


ovides/retangulares

DNA de cadeia dupla,


linear e contnua,
130-375 kb

Iridoviridae/
Asfaviridae

Complexo

Sim

175-215nm, quase esfricos


ou com aspecto de prismas
hexagonais

DNA de cadeia dupla,


linear e contnua,
170-190kb

Hepadnaviridae

Icosadrico

Sim

40-48nm, esfricos,
ocasionalmente pleomrficos,
partculas subvirais em excesso

DNA de cadeia parcialmente


dupla (3/4), com as
extremidades pareando entre
si (pseudo-circular), 3.2 kb

DNA de cadeia dupla,


circular, superenrolada,
8 kb

35

Estrutura e composio dos vrus

POLARIDADE POSITIVA

Tabela 1.2. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus RNA

POLARIDADE NEGATIVA

Capsdeo

Envelope

Dimenses e morfologia
do vrions

Caractersticas do
genoma

Retroviridae

Icosadrico

Sim

80-100nm, esfricos

duas cpias idnticas de RNA,


cadeia simples (+), linear, 7-11kb

Picornaviridae

Icosadrico

No

28-30nm,
esfrico-icosadricos

RNA de cadeia simples (+),


linear, 5'IRES, 3'polyA, 7.2 8.5kb

Caliciviridae

Icosadrico

No

30-38nm,
esfrico-icosadricos

RNA de cadeia simples (+),


linear, protena na ext. 5,
3'polyA, 7.4 -7.7kb

Astroviridae

Icosadrico

No

28-30nm, esfricos

RNA de cadeia simples (+),


linear, 3'polyA, 7.2-7.9kb

Helicoidal

Sim

80-220nm, pleomrficos ou
aproximadamente esfricos

RNA de cadeia simples (+), linear,


5'cap, 3'polyA, 20-32kb

Arteriviridae

Icosadrico

Sim

50-70nm, aproximadamente
esfricos

RNA de cadeia simples (+),


linear ,5'cap, 3' polyA, 15kb

Togaviridae

Icosadrico

Sim

70nm, esfricos

RNA de cadeia simples (+),


linear, 5'cap, 3'polyA, 9.711.8kb

Flaviviridae

Icosadrico

Sim

45-60nm, esfrico

RNA de cadeia simples (+),


linear, 5'cap/IRES,
3'polyA/poliC, 9.5-12.5kb

Paramyxoviridae

Helicoidal

Sim

150-300nm, pleomrficos,
aproximadamente esfricos,
filamentosos

RNA de cadeia simples (-),


linear, 15-16kb

Rhabdoviridae

Helicoidal

Sim

70-85 x 130-380 nm, forma


de projtil

RNA de cadeia simples (-),


linear, 13-16kb

Filoviridae

Helicoidal

Sim

80 x 780-970nm (at 14.000),


pleomrficos (filamentosos,
forma de U ou 6

RNA de cadeia simples (-),


linear, 19.1kb

Bornaviridae

Sim

90nm, esfricos (?)

RNA de cadeia simples (-),


linear, 8.9kb

Orthomyxoviridae

Helicoidal

Sim

80-120nm, ovides,
filamentosos,
aproximadamente
esfricos, pleomrficos

6 a 8 segmentos de RNA de cadeia


simples, (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 10-13.6kb

Bunyaviridae

Helicoidal

Sim

80-120nm, pleomrficos
ou esfricos.

3 segmentos de RNA de cadeia


simples (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 11-21kb

Arenaviridae

Helicoidal

Sim

50 x 300nm , esfricos ou
pleomrficos

2 segmentos de RNA de cadeia


simples (-), lineares, 10-14kb

Birnaviridae

Icosadrica

No

60nm, icosadricos

2 segmentos de RNA de cadeia


dupla, lineares, 5.7-5.9kb

Reoviridae

Icosadrica

No

60-80nm, aproximadamente
esfricos

10, 11 ou 12 segmentos de RNA de


cadeia dupla, lineares, 16-27kb

Coronaviridae

FITA SIMPLES
FITA DUPLA

Famlia

CLASSIFICAO E NOMENCLATURA DOS VRUS


Luciane Teresinha Lovato

1 Introduo

39

2 Taxonomia dos vrus

39

3 Nomenclatura dos vrus

41

4 Critrios utilizados para a classificao dos vrus

41

5 Famlias de vrus

42
42

5.1 Vrus com genoma DNA


5.1.1 Poxviridae
5.1.2 Asfarviridae
5.1.3 Herpesviridae
5.1.4 Adenoviridae
5.1.5 Papillomaviridae
5.1.6 Polyomaviridae
5.1.7 Parvoviridae
5.1.8 Circoviridae
5.1.9 Hepadnaviridae

42
43
44
44
45
46
46
47
47

5.2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo


5.2.1 Picornaviridae
5.2.2 Caliciviridae
5.2.3 Astroviridae
5.2.4 Togaviridae
5.2.5 Flaviviridae
5.2.6 Coronaviridae
5.2.7 Arteriviridae

48
48
49
49
50
50
51
51

5.3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo no-segmentado


5.3.1 Paramyxoviridae
5.3.2 Rhabdoviridae
5.3.3 Filoviridae
5.3.4 Bornaviridae

52
52
52
53
54

5.4 Vrus com genoma RNA de sentido negativo segmentado


5.4.1 Orthomyxoviridae
5.4.2 Bunyaviridae
5.4.3 Arenaviridae

54
54
54
55

5.5 Vrus com genoma RNA de fita dupla


5.5.1 Reoviridae
5.5.2 Birnaviridae

56
56
56

5.6 Vrus com genoma RNA que realizam transcrio reversa


5.6.1 Retroviridae

57
57

6 Bibliografia consultada

57

1 Introduo

2 Taxonomia dos vrus

Existe um nmero muito grande de vrus


circulando nas diferentes espcies de seres vivos,
desde vrus que infectam bactrias at aqueles
que infectam organismos superiores, como os
mamferos e plantas. Dentre estes, existem vrus
altamente patognicos e outros que no causam
doena nos seus hospedeiros, passando despercebidos. Atualmente, so reconhecidas mais de
1.500 espcies de vrus, que abrangem mais de
30.000 cepas, isoladas ou variantes.
A classicao e nomenclatura dos vrus no
seguem as regras determinadas para os demais
microorganismos. medida que foram sendo
identicados, os vrus foram sendo agrupados de
forma aleatria, de acordo com os aspectos considerados mais importantes pelos grupos que os
identicavam. Nas dcadas de 1950 e 1960, houve um grande avano na Virologia, resultando
na identicao de um grande nmero de novos
vrus. Com o intuito de determinar regras bsicas
para classicar esses vrus, vrios comits foram
formados, o que acabou gerando uma grande
confuso taxonmica.
Durante o Congresso Internacional de Microbiologia, realizado em Moscou, em 1966, foi
criado o Comit Internacional para Nomenclatura
de Vrus (ICTV). Esse comit teve a incumbncia
de desenvolver um sistema nico de classicao
e nomenclatura para todos os vrus. At hoje, o
ICTV o rgo que determina as regras a serem
seguidas para a classicao dos vrus at o nvel
de espcie. Esse comit se rene periodicamente,
com o m de revisar e atualizar os critrios de
classicao, de modo que as novas descobertas
biolgicas e moleculares possam ser incorporadas
aos critrios taxonmicos j existentes. Com isso,
a classicao dos vrus nas diversas hierarquias
tornou-se dinmica e pode ser alterada medida
que novas informaes biolgicas ou moleculares
assim o justiquem. A classicao apresentada
neste texto est de acordo com a ltima reviso
do ICTV, datada de 07 de julho de 2007.

De acordo com os vrios critrios adotados,


os vrus so classicados hierarquicamente em
ordens, famlias, subfamlias, gneros e espcies.
O suxo virales utilizado para designar a ordem.
Para a denominao de famlia, utiliza-se o suxo
viridae; para subfamlia, utiliza-se virinae; e para
gnero, o suxo virus. Por exemplo, o vrus da
cinomose canina est classicado na ordem Mononegavirales, famlia Paramyxoviridae, subfamlia
Paramyxovirinae, gnero Morbillivirus e, nalmente, espcie, como vrus da cinomose canina (canine distemper virus, CDV). As famlias so os agrupamentos fundamentais dos vrus, agrupando
agentes que possuem caractersticas estruturais,
morfolgicas, genticas e biolgicas em comum.
Algumas famlias a minoria so agrupadas
em nveis hierrquicos superiores: as ordens. Da
mesma forma, nem todas as famlias so divididas em subfamlias; algumas delas apresentam
o gnero como nvel hierrquico imediatamente
inferior, ou seja, nem todos os vrus so classicados em todos os nveis hierrquicos possveis,
possuindo complexidades de classicao diferentes entre si.
Os vrus que apresentam algumas caractersticas biolgicas, estruturais e moleculares em
comum so agrupados em uma mesma famlia.
Por exemplo, todos os membros da famlia Herpesviridae possuem vrions grandes, com envelope contendo vrias glicoprotenas, capsdeo
icosadrico, uma camada protica denominada
tegumento entre o capsdeo e o envelope. O
genoma composto por uma molcula de DNA
de ta dupla linear. Esses vrus so capazes de
estabelecer infeces latentes em seus hospedeiros. Os vrus que apresentam essas caractersticas
(e que por isso compem a famlia Herpesviridae)
podem ser subdivididos em subfamlias, de acordo com algumas caractersticas que possuem em
comum e que so diferentes dos outros vrus da
famlia. Os membros da subfamlia Alphaherpesvirinae possuem um amplo espectro de hospedeiros, apresentam um ciclo rpido e ltico em clu-

40

las de cultivo e estabelecem infeces latentes em


neurnios sensoriais e autonmicos. Essas caractersticas diferem dos membros das outras subfamlias: Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae.
Os vrus de uma famlia ou de uma subfamlia podem ser divididos em gneros, de acordo
com propriedades biolgicas, e, principalmente,
moleculares, como a estrutura e organizao genmica: a subfamlia Alphaherpesvirinae possui
dois gneros, o Simplexvirus e o Varicellovirus.
Dentro de cada gnero se encontram as espcies,
que so grupos de vrus muito semelhantes entre
si (a exemplo de espcies de animais), mas que
apresentam algumas diferenas que justicam a
sua classicao como vrus diferentes (e tambm diferentes dos vrus do outro gnero). Por
exemplo, no gnero Varicellovirus, encontram-se
classicados os herpesvrus bovinos tipos 1 e 5
(BoHV-1 e BoHV-5), o herpesvrus suno (SuHV1) ou vrus da doena de Aujeszky (PRV), entre
outros.
A classicao dos vrus em espcies no
consensual entre os virologistas. A denio de
espcie aceita pelo ICTV foi estabelecida em 1991
e diz o seguinte: espcie de vrus uma classe
polythetic1 de vrus que constitui uma linhagem replicativa e ocupa um nicho ecolgico particular. Uma classe polythetic denida em termos de um amplo grupo de critrios sendo que
nenhum dos critrios isoladamente necessrio
ou suciente. Dessa forma, cada membro da classe deve possuir um nmero mnimo de caractersticas, mas nenhum dos aspectos necessita ser
encontrado em todos os membros de uma classe.
Assim, diferentes caractersticas podem ser usadas em diferentes grupos de vrus.
A classicao em subespcies, cepas, variantes e isolados no existe de forma ocial, embora seja reconhecida a sua importncia para o
diagnstico, para estudos biolgicos e moleculares e tambm para a produo de vacinas. A seguir so apresentadas algumas denies desses
termos.
O termo isolado (ou amostra) refere-se a um
vrus que foi obtido por isolamento de uma determinada fonte de infeco (animal infectado),
A traduo para o termo polythetic no consta em dicionrios ociais; por esta razo o termo foi escrito na sua
forma original e a denio colocada logo em seguida no
texto.
1

Captulo 2

por exemplo: o SV-299/04 um BoHV-5 isolado


do crebro de um bovino que desenvolveu meningoencefalite no estado do Rio Grande do Sul.
A denominao SV-299/04 foi dada pelo laboratrio que realizou o isolamento do vrus e referese ao nmero do protocolo. Qualquer vrus que
tenha sido isolado de material clnico e sobre o
qual se conhea pouco, alm de sua identidade,
constitui-se em um isolado ou amostra.
O termo cepa utilizado para designar amostras de vrus que j foram bem caracterizadas e
sobre as quais j se possui certo conhecimento.
A denominao cepa tambm pode ser utilizada
para se referir a isolados de um vrus que podem
apresentar pequenas variaes sem deixar de
pertencer s mesmas categorias taxonmicas. Por
exemplo, o vrus da doena de Newcastle (NDV)
pode apresentar diferentes nveis de virulncia,
dependendo da cepa do vrus que est causando a doena. Existem trs cepas desse vrus em
ordem crescente de virulncia: as lentognicas,
as mesognicas e as velognicas. Assim, aqueles
isolados do vrus que apresentam alta virulncia
pertencem cepa velognica, os que apresentam
virulncia moderada so mesognicos, e os de
baixa virulncia so os lentognicos.
Cepas de referncia so cepas amplamente caracterizadas e reconhecidas nacional ou internacionalmente, que so utilizadas como referncia
para determinado vrus em testes de diagnstico,
pesquisa e para a produo de vacinas. Por exemplo, a cepa Cooper do BoHV-1 serve de referncia
para comparaes de isolados desse vrus e amplamente utilizada em diagnstico e na produo
de vacinas.
A terminologia wild-type refere-se cepa original do vrus que circula na natureza. No caso
da existncia de mutantes, o wild-type a cepa
que deu origem aos mutantes. Em portugus,
utilizam-se os termos cepa de campo (ou vrus de
campo), no caso dos vrus circulantes na populao; e cepa original ou parental no caso da produo e/ou comparao com mutantes. Variantes
ou mutantes so vrus que diferem do wild-type
em alguma caracterstica fenotpica, como, por
exemplo, o vrus da vacina contra a doena de
Aujeszky um mutante de deleo que foi produzido a partir da cepa Bartha do herpesvrus
suno tipo 1 (SuHV-1).

41

Classificao e nomenclatura dos vrus

3 Nomenclatura dos vrus


No uso formal, as palavras que designam
as famlias, subfamlias e gneros devem iniciar
com letra maiscula e devem ser escritas em itlico ou sublinhadas. O nome da espcie do vrus
no deve iniciar com letra maiscula (a no ser
que este nome corresponda a um nome prprio
de regio, cidade etc.) e deve ser escrito com fonte normal, sem itlico. No uso formal, a hierarquia (txon) deve preceder a unidade taxonmica. Exemplo: a famlia Parvoviridae; o gnero
Parvovirus.
No uso informal (ou vernacular) os termos
referentes famlia, subfamlia, gnero e espcie
devem ser escritos com letras minsculas, sem
itlico ou sublinhado. Neste caso, o suxo formal
no includo e o nome do txon segue o termo
usado para denir a unidade taxonmica. Escreve-se ento: a famlia dos poxvrus, o gnero
parapoxvirus. O uso informal em portugus
deve suprimir letras que no existam no alfabeto
da lngua portuguesa. Exemplo: para se referir de
forma vernacular aos membros da subfamlia Alphaherpesvirinae, deve-se escrever: os alfaherpesvirus. Os membros da famlia Orthomyxoviridae
devem ser tratados como os ortomixovrus.
No uso informal, o nome do txon , muitas
vezes, suprimido, o que pode resultar em confuses. Isto se deve raiz comum das palavras
utilizadas para denir as unidades taxonmicas
nos diferentes nveis. Dessa forma, dependendo
do contexto, a palavra avivrus pode estar sendo usada para referir-se tanto famlia Flaviviridae como ao gnero Flavivirus. Para evitar essa
ambigidade, aconselha-se o uso do txon precedendo o termo usado. Exemplo: vrus do gnero
Flavivirus.
A nomenclatura ocial dos vrus utiliza
abreviaturas, que so constitudas pelas iniciais
do nome da espcie viral. No presente texto, sero
utilizadas as abreviaturas derivadas da nomenclatura na lngua inglesa, por exemplo, herpesvrus bovino tipo 1 (do ingls bovine herpesvirus type
1, BoHV-1).
No uso informal, muitos vrus podem ser
denominados de duas ou trs formas diferentes,

de acordo com a sua denominao original e com


a nomenclatura ocial preconizada pelo ICTV.
As recomendaes do ICTV so de que a sua
nomenclatura substitua as anteriores, embora
alguns deles continuem a ser denominados pela
nomenclatura tradicional. Citam-se como exemplos o SuHV-1, que tambm conhecido como
vrus da doena de Aujeszky (ADV) ou vrus da
pseudoraiva (PRV), e o BoHV-1, que tambm
conhecido como vrus da rinotraquete infecciosa
bovina (IBRV).
Exemplos de nomenclatura de vrus:
a) Formal: famlia: Picornaviridae; gnero:
Aphtovirus; espcie: vrus da febre aftosa (foot and
mouth disease vrus, FMDV);
Vernacular: Os aftovrus so sensveis ao
pH baixo [...].
b) Formal: famlia: Herpesviridae, subfamlia:
Alphaherpesvirinae, gnero: Alphaherpesvirus, espcie: herpesvrus suno tipo 1 (vrus da doena
de Aujezsky);
Vernacular: O vrus da doena de Aujeszky
um alfaherpesvrus [...].
c) Formal: ordem: Mononegavirales; famlia:
Paramyxoviridae; subfamlia: Pneumovirinae; gnero: Pneumovirus, espcie: vrus sincicial respiratrio bovino (BRSV);
Vernacular: Os pneumovrus causam doena respiratria [...].
d) Formal: famlia: Flaviviridae; gnero: Flavivirus; espcie: vrus da febre amarela (YFV);
Vernacular: O vrus da febre amarela um
avivrus transmitido por mosquitos.

4 Critrios utilizados para a


classificao dos vrus
A evoluo nos mtodos de deteco e caracterizao dos vrus determinou uma evoluo
nos critrios utilizados para a sua classicao.
A diferenciao entre vrus e os demais microorganismos foi o primeiro passo na classicao
dos agentes virais e essa diferena foi determinada, inicialmente, pela ltrabilidade dos vrus.
Enquanto as bactrias eram retidas no ltro, os
vrus passavam por ele, surgindo a denominao
de agentes ltrveis.

42

No incio, as caractersticas ecolgicas e de


transmisso, sinais clnicos da doena e tropismo por determinado rgo ou tecido foram os
critrios utilizados na classicao dos vrus. O
desenvolvimento da microscopia eletrnica possibilitou a classicao de acordo com a morfologia das partculas virais. Ao longo dessa evoluo, outras caractersticas foram sendo mais
conhecidas e consideradas para descrever os
vrus. Aspectos como a composio qumica, o
tipo de genoma, distribuio geogrca, vetores,
estabilidade e antigenicidade dos vrus foram
adquirindo importncia. Atualmente as tcnicas
de biologia molecular tm sido utilizadas para
renar e detalhar a classicao dos vrus, especialmente o seqenciamento e comparao entre
seqncias do genoma. Estratgias de expresso
gnica, homologia de nucleotdeos entre seqncias correspondentes, estrutura e funes de protenas virais tambm foram incorporadas aos critrios de classicao dos vrus.
De acordo com o ICTV, as seguintes caractersticas so atualmente levadas em considerao para classicar os vrus em ordem, famlias,
subfamlias e gneros: tipo de cido nuclico e
organizao do genoma, estratgia de replicao
e estrutura do vrion.
A classicao em espcies, embora no regulamentada pelo ICTV, segue os seguintes critrios:
a) homologia da seqncia do genoma;
b) hospedeiros naturais;
c) tropismo de tecido e clulas;
d) patogenicidade e citopatologia;
e) forma de transmisso;
f) propriedades fsico-qumicas;
g) propriedades antignicas.
Uma outra classicao prtica, no ocial,
regularmente usada entre os virologistas. Nesse caso, so levados em considerao os critrios
epidemiolgicos e/ou clnico-patolgicos para
agrupar os vrus. De acordo com esse critrio, os
vrus so classicados em:
a) respiratrios: vrus que penetram no
hospedeiro por inalao e produzem infeco e
doena primariamente no trato respiratrio. Ex:
rinovrus, calicivrus;

Captulo 2

b) entricos: vrus que penetram pela via


oral e replicam no trato intestinal. Ex: coronavrus, rotavrus;
c) arbovrus: vrus que replicam e so transmitidos por vetores artrpodos. Ex: vrus da encefalites eqinas leste e oeste;
d) vrus oncognicos: vrus com potencial
para induzir transformao celular e tumores nos
hospedeiros. Ex: retrovrus, papilomavrus.

5 Famlias de vrus
A seguir sero apresentadas as famlias de
vrus que contm patgenos de animais (Figuras
2.1 a 2.25). Em cada gnero, sero mencionados
os principais vrus que causam doenas em animais de interesse para a medicina veterinria, ou
seja, animais de produo e animais de companhia. Tambm sero citados os principais patgenos humanos. Cabe ressaltar, por essa razo, que
esta lista no se constitui na relao completa dos
vrus de cada famlia.

5.1 Vrus com genoma DNA


5.1.1 Famlia: Poxviridae
Subfamlia: Chordopoxvirinae (infectam vertebrados)
Gneros:
Orthopoxvirus: vrus da vaccinia (VACV),
poxvrus bovino (varola bovina), vrus da ectromelia (camundongos);
Parapoxvirus: vrus do ectima contagioso
dos ovinos (ORFV), vrus da estomatite papular
bovina (BPSV);
Avipoxvirus: vrus da bouba aviria
(FWPV), poxvrus do canrio (CNPV);
Capripoxvirus: poxvrus dos caprinos
(GTPV), poxvrus dos ovinos (SPPV), vrus da
doena Lumpy Skin (LSDV);
Leporipoxvirus: vrus do mixoma de coelhos
(MYXV), vrus do broma de coelhos (RFV);
Suipoxvirus: poxvrus suno (SWPV);
Molluscipoxvirus: vrus do molusco contagioso (MOCV);
Yatapoxvirus: vrus Tanapox (TANV) e Yatapox dos macacos (YMTV).

43

Classificao e nomenclatura dos vrus

Subfamlia: Entomopoxvirinae (infectam inse-

5.1.2 Famlia: Asfarviridae

Gneros:
Alphaentomopoxvirus;
Betaentomopoxvirus;
Gammaentomopoxvirus.

Gnero: Asvirus
Espcie: vrus da peste suna africana
(AFSV).

tos)

Os poxvrus so os maiores vrus de animais. Os vrions possuem uma forma retangular


ou ovide, com simetria complexa e, geralmente,
possuem envelope lipdico (algumas partculas
podem no possuir). As dimenses das partculas virais podem variar de 220 a 450 nm de extenso x 140 a 260 nm de largura x 140 a 260 nm
de espessura. O genoma consiste de uma nica
molcula de DNA, linear, cadeia dupla, com 130
a 375 kbp. Esses vrus trazem, nos vrions, um
nmero considervel de enzimas e fatores auxiliares; e realizam o ciclo replicativo inteiramente
no citoplasma das clulas hospedeiras. A maioria das doenas produzidas por esses vrus caracteriza-se pela formao de leses vesiculares
e crostosas na pele e/ou mucosas dos animais.
O vrus da varola humana (smallpox) o mais
importante vrus dessa famlia. Dentre os patgenos de animais domsticos, o mais comum em
nosso meio o ORFV, uma doena caracterizada
por leses vesiculares e pustulares na regio dos
lbios, narinas e cascos.

Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).

Figura 2.1. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Poxviridae.

Fonte: Dra Sharon Brookes, Pirbright, UK (ICTVdB).

Figura 2.2. Fotografia de microscopia eletrnica de um


vrion da famlia Asfarviridae(ASFV).

O ASFV o nico vrus classicado nessa


famlia. Os vrions do ASFV possuem envelope
lipoprotico e um capsdeo icosadrico formado
por 1.892 a 2.172 unidades estruturais. O dimetro das partculas virais varia entre 175 e 215 nm.
O genoma consiste de uma molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 170 a 190 kb. O vrus replica no citoplasma da clula hospedeira.
O ASFV transmitido por carrapatos do gnero
Ornithodoros, constituindo-se no nico arbovrus
entre os vrus DNA. Esse vrus mantido na natureza em sudeos selvagens e, ocasionalmente,
transmitido aos sunos domsticos. O vrus encontrado na frica, mas j foi esporadicamente
introduzido na Europa, onde causou doena em
sunos de alguns pases. A peste suna africana
caracterizada pela produo de hemorragias,
principalmente nos rgos linfides. O nico relato da doena no Brasil ocorreu em 1978, no Rio
de Janeiro. Atualmente o ASFV considerado
extico no Pas.

44

5.1.3 Famlia: Herpesviridae


Subfamlia: Alphaherpesvirinae
Gneros:
Simplexvirus: herpesvrus bovino tipo 2
(BoHV-2) ou vrus da mamilite herptica (BMH),
herpesvrus B (macacos), vrus do herpes simplex
humano (HSV-1, HSV-2);
Varicellovirus: BoHV-1 ou vrus da rinotraquete (IBRV), BoHV-5, SHV-1 ou PRV, herpesvrus eqino tipos 1, 3 e 4 (EHV-1, EHV-3, EHV-4),
herpesvrus canino 1 (CaHV-1), herpesvrus felino tipo 1 (vrus da rinotraquete felina, FeHV-1),
herpesvrus caprino tipo 1 (CpHV-1);
Mardivirus: vrus da doena de Marek;
Iltovirus: vrus da laringotraquete infecciosa das galinhas (ILTV);
Subfamlia: Betaherpesvirinae
Gneros:
Cytomegalovirus: citomegalovrus suno;
Muromegalovirus: citomegalovrus do camundongo 1;
Roseolovirus: herpesvrus humano 6 (HHV6).
Vrios betaherpesvrus animais ainda no
foram classicados em gneros.
Subfamlia: Gammaherpesvirinae
Gneros:
Linphocriptovirus: vrus Epstein-Barr (EBV)
humano;
Rhadinovirus: vrus da febre catarral maligna (MCFV);
Ictalurivirus: herpesvrus do catsh de canal.
A famlia Herpesviridae abriga um grupo
grande e diverso de vrus encontrados em virtualmente todas as espcies de vertebrados. Os
vrions contm envelope, capsdeo icosadrico e
o dimetro pode variar entre 120 e 300 nm. Entre
o capsdeo e o envelope, existe uma camada protica denominada tegumento. O genoma consiste
de uma molcula de DNA de cadeia dupla linear,
com 120 a 250 kb. Os vrus dessa famlia possuem
uma importante propriedade biolgica em comum, que a capacidade de estabelecer infeces
latentes nos seus hospedeiros. Embora todos os
herpesvrus apresentem algumas caractersticas
em comum, os vrus das trs subfamlias apresen-

Captulo 2

tam diferenas biolgicas e moleculares. Os vrus


da subfamlia Alphaherpesvirinae apresentam um
ciclo replicativo rpido e ltico em cultivo celular, estabelecem infeces latentes em neurnios
e produzem leses vesiculares em membranas
mucosas. Vrios vrus animais so classicados
nessa subfamlia, cujo prottipo o HSV-1. Os
vrus da subfamlia Betaherpesvirinae apresentam
uma replicao lenta em cultivo celular e estabelecem infeces latentes em glndulas secretrias
e no tecido linforeticular. O herpesvrus humano tipo 5 (HHV-5) ou citomegalovrus humano
(CMV) o prottipo dessa subfamlia. Os vrus
da subfamlia Gammaherpesvirinae infectam linfcitos de forma ltica ou latente e alguns deles
possuem potencial oncognico. Nesta subfamlia,
est classicado apenas um patgeno de animais,
o MCFV, uma doena sistmica de bovinos. O
EBV, agente de mononucleose e tumores em humanos, o prottipo dessa subfamlia.

Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).

Figura 2.3. Fotografia de microscopia eletrnica de um


vrion da famlia Herpesviridae (HSV-1).

5.1.4 Famlia: Adenoviridae


Gneros:
Mastadenovirus: vrus da hepatite infecciosa canina (CAdV-1), vrus da traqueobronquite
infecciosa canina (CAdV-2), adenovrus sunos
(SAV-1-9), adenovrus bovinos (BAV-1-9), adenovrus eqino (EAV-1 e 2);
Aviadenovirus: vrus da sndrome da queda
de postura;
Atadenovirus: adenovrus ovino D;
Siadenovirus: adenovrus dos perus B.

45

Classificao e nomenclatura dos vrus

Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).

Figura 2.4. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions


da famlia Adenoviridae.

Os adenovrus possuem vrions icosadricos


grandes (dimetro de 80 a 100 nm), sem envelope
e apresentam bras de 9 a 35 nm nos vrtices. O
capsdeo envolve uma nica molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 36 a 44 kb. Os adenovrus replicam no ncleo das clulas hospedeiras
e, como alguns outros vrus DNA, a transcrio
dos genes realizada pela maquinaria clula e
ocorre de forma ordenada. Alguns produtos dos
genes virais interferem com o controle do ciclo celular, e alguns adenovrus possuem potencial oncognico. O vrus tambm codica produtos que
antagonizam os mecanismos inatos da resposta
imunolgica. Os adenovrus so encontrados em
humanos, diversas espcies de mamferos e aves
e, em geral, so pouco patognicos. Quando associados com manifestaes clnicas, geralmente
esto envolvidos em sinais respiratrios leves em
animais e humanos. A doena de maior repercusso causada por esses vrus em animais provavelmente seja a hepatite infecciosa canina. Os
adenovrus tm sido intensivamente estudados
como vetores para terapia gentica e vacinas.

Deltapapillomavirus: papilomavrus do alce


europeu (EEPV), papilomavrus de cervdeos
(DPV), papilomavrus bovino (BPV-1 e BPV-2) e
papilomavrus ovino (OvPV-1 e OvPV-2);
Epsilonpapillomavirus: papilomavrus bovino tipo 5 (BPV-5);
Zetapapillomavirus: papilomavrus eqino
1 (EcPV-1);
Etapapillomavirus: papilomavrus de aves
(FcPV);
Thetapapillomavirus: papilomavrus dos
psitacdeos (PePV);
Iotapapillomavirus: papilomavrus dos Mastomys natalensis (MNPV);
Kappapapillomavirus: papilomavrus dos
coelhos (CRPV e ROPV);
Lambdapapillomavirus: papilomavrus oral
canino (COPV), papilomavrus felino (FDPV);
Mupapillomavirus: papilomavrus humano
(HPV-1 e HPV-63);
Nupapillomavirus: papilomavrus humano
41 (HPV-41);
Pipapillomavirus: papilomavrus oral do
hamster (HaOPV);
Xipapillomavirus: papilomavrus bovinos
(BPV-3, BPV-4 e BPV-6);
Omikronpapillomavirus: papilomavirus dos
cetceos (PsPV).

5.1.5 Famlia: Papillomaviridae


Fonte: www.oralcancerfoundation.org

Gneros:
Alphapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-32);
Betapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-5);
Gammapapillomavirus: vrios papilomavrus humanos (prottipo: HPV-4);

Figura 2.5. Fotografia de microscopia eletrnica de um


vrion da famlia Papillomaviridae (Papilomavrus
humano).

Os papilomavrus so vrus pequenos, sem


envelope, com 52 a 55 nm de dimetro e simetria
icosadrica. O capsdeo formado por 72 cap-

46

smeros, envolvendo o DNA circular de cadeia


dupla de aproximadamente 8 kbp. Os vrus replicam no ncleo de clulas epiteliais do tecido
descamativo, e as sucessivas etapas da replicao ocorrem em clulas com estgios diferentes
de diferenciao. As etapas nais da replicao
ocorrem apenas nas clulas maduras das camadas granulosa e crnea da pele. Os papilomavrus so agentes etiolgicos dos papilomas, tambm denominados verrugas, que consistem em
leses nodulares na pele e mucosas de animais
e humanos. Alguns desses vrus podem induzir
a produo de tumores malignos. Esse problema
particularmente importante no caso das verrugas genitais humanas, tambm conhecidas como
condilomas. Existem mais de 60 sorotipos diferentes de papilomavrus causando doenas em
humanos, e alguns deles so considerados de alto
risco para a produo de tumores, como o caso
dos HPV 16 e HPV 18, que esto envolvidos no
desenvolvimento de cncer de colo de tero em
mulheres. As espcies bovina, eqina e canina
so as mais freqentemente afetadas por papilomas, no entanto, o desenvolvimento de tumores
malignos nessas espcies no comum. A participao de papilomavrus na induo de tumores
em animais parece ser limitada ao carcinoma de
esfago, induzido pela ingesto de samambaia
em bovinos.

Captulo 2

vrus prottipos: Pa (papilomavrus de coelhos);


po (poliomavrus de camundongos) e va (agente
vacuolizante, SV-40). Atualmente, os poliomavrus e o prottipo SV-40 so classicados separadamente, na famlia Polyomaviridae. O interesse
maior nesses vrus iniciou-se com a descoberta
de que o SV-40 e outros poliomavrus eram capazes de produzir tumores em hamsters (por
isso foram denominados pequenos vrus DNA
tumorais). Embora estudos extensivos realizados
durante dcadas no tenham sido capazes de demonstrar associao entre o SV-40 e tumores humanos, estudos recentes demonstraram a presena de seqncias de DNA e antgenos do SV-40
em certos tumores raros em humanos, renovando
o interesse por esse vrus. Os poliomavrus foram
muito estudados como modelos para Virologia
e biologia molecular. O prottipo da famlia o
SV-40, um vrus encontrado como contaminante
de vacinas contra a poliomielite nos anos 1950.

5.1.6 Famlia: Polyomaviridae


Gnero:
Polyomavirus: vrus smio 40 (SV-40), poliomavrus de camundongos (PoV), vrus BK (humanos), vrus JC (humanos), vrios poliomavrus
de mamferos e aves.
Os poliomavrus esto entre os menores
vrus DNA. Possuem vrions icosadrico-esfricos com 45 nm, sem envelope, e uma molcula de DNA de ta dupla circular como genoma
(5 kb). Os vrions so compostos por 72 capsmeros, formados por trs protenas: VP1, VP2 e
VP3. O genoma est associado com histonas celulares, formando uma estrutura semelhante
cromatina celular. A famlia Polyomaviridae era
classicada anteriormente como uma subfamlia
da Papovaviridae, cuja denominao derivava dos

Fonte: PHIL Library, CDC.

Figura 2.6. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Polyomaviridae.

5.1.7 Famlia: Parvoviridae


Subfamlia: Parvovirinae
Gneros:
Parvovirus;
Patgenos animais: parvovrus canino tipos 1 e 2 (CPV-1; CPV-2), parvovrus felino (vrus
da panleucopenia felina, FPLV), parvovrus suno (PPV), parvovrus bovino (BPV);
Erythrovirus: vrus B19 humano;

47

Classificao e nomenclatura dos vrus

Dependovirus: vrus adeno-associado 2


(AAV);
Amdovirus: Aleutian mink disease virus;
Bocavirus: parvovrus bovino, vrus minuto dos ces.

Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).

Figura 2.7. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions


da famlia Parvoviridae.

Subfamlia: Densovirinae
Gneros:
Densovirus: densovrus da Junonia coenia;
Iteravirus: densovrus da Bombyx mori;
Brevidensovirus: densovrus do mosquito
Aedes aegypti;
Pefudensovirus: densovrus da Periplaneta
fuliginosa.
Os parvovrus so vrus muito pequenos e,
at h pouco tempo, eram considerados os menores vrus de animais e/ou humanos. Os vrions
possuem um dimetro de 25 nm, no possuem
envelope e apresentam uma aparncia esfrica
microscopia eletrnica. Os vrus dessa famlia
apresentam um DNA de cadeia simples linear
de, aproximadamente, 5.2 kb. Alguns membros
dessa famlia necessitam de uma co-infeco viral para realizar a sua replicao (Dependovirus),
o que no o caso do gnero Parvovirus, no qual
esto classicados importantes patgenos de animais e humanos. A replicao ocorre no ncleo
de clulas que esto em processo de mitose, mais
especicamente na fase S do ciclo celular. Os
principais agentes de doena dessa famlia so os
parvovrus que causam doenas gastroentricas
em caninos e felinos. O parvovrus suno um
importante agente etiolgico de perdas reprodu-

tivas na suinocultura. O parvovrus humano B-16


tem sido associado com abortos em mulheres.

5.1.8 Famlia: Circoviridae


Gneros:
Circovirus: circovrus suno tipos 1 e 2
(PCV-1; PCV-2), vrus da doena das penas e bicos dos psitacdeos (BFDV), circovrus dos pombos (PiCV), circovrus dos gansos (GoCV), circovrus do canrio (CaCV);
Gyrovirus: vrus da anemia das galinhas
(CAV).
Os vrus dessa famlia so os menores vrus
conhecidos que infectam animais. O dimetro
dos vrions, que no possuem envelope, pode variar entre 17 e 22 nm. Esses vrions apresentam
uma aparncia esfrica microscopia eletrnica.
O ncleo do vrion formado por uma molcula
de DNA circular de cadeia simples. A replicao
viral ocorre no ncleo da clula hospedeira, na
fase S do ciclo celular. Essa famlia possui um
nmero pequeno de patgenos animais, entre os
quais o agente da CAV e o vrus da doena debilitante dos leites (PCV-2). Circovrus tambm j
foram identicados em humanos.

Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).

Figura 2.8. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions


da famlia Circoviridae.

5.1.9 Famlia: Hepadnaviridae


Gneros:
Orthohepadnavirus: vrus da hepatite B humana (HBV), vrus do esquilo do solo (GSHV),

48

vrus das marmotas (WHV) e outros recentemente identicados em vrias espcies;


Avihepadnavirus: vrus da hepatite B dos
marrecos (DHBV).

Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).

Figura 2.9. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Hepadnaviridae (vrus da hepatite B).

Os vrus da famlia Hepadnaviridae causam


hepatite em humanos e em algumas espcies de
animais. Esses vrus freqentemente estabelecem infeco persistente, e a persistncia viral no
hospedeiro est associada com cirrose heptica
e hepatocarcinoma. As clulas infectadas pelos
hepadnavrus produzem trs tipos de partculas
vricas: os vrions completos possuem um dimetro de 42-47 nm e so compostos por um nucleocapsdeo icosadrico envolto por um envelope
lipoprotico. Partculas esfricas e lamentosas,
compostas apenas pelas protenas do envelope e
pores da membrana plasmtica, tambm so
produzidas pelas clulas infectadas. O genoma
viral composto por uma molcula de DNA circular de cadeia parcialmente dupla. O ciclo replicativo dos hepadnavrus ocorre parte no ncleo e
parte no citoplasma da clula hospedeira e envolve uma etapa de transcrio reversa. Os hepadnavrus possuem tropismo marcante por clulas
hepticas e, freqentemente, produzem infeces
hepticas persistentes/crnicas. O HBV o nico patgeno humano classicado nessa famlia.
O vrus animal mais conhecido dessa famlia
o DHBV, que causa uma doena muito similar
hepatite B humana.

Captulo 2

5.2 Vrus com genoma RNA


de sentido positivo
5.2.1 Famlia: Picornaviridae
Gneros:
Enterovirus: enterovrus bovinos 1 e 2
(BEV-1, BEV-2), enterovrus suno 1-13 (PEV-113), poliovrus (PV);
Rhinovirus: rinovrus bovino 1-3, rhinovrus humanos (HRV-2-100);
Hepatovirus: vrus da hepatite A humano
(HAV);
Cardiovirus: vrus da encefalomiocardite
murina Theiler (EMCV);
Aphtovirus: vrus da febre aftosa (FMDV);
Parechovirus: parechovrus humano;
Erbovirus: vrus da rinite eqina B (ERBV);
Kobuvirus: Aichi vrus (AiV);
Teschovirus: teschovirus suno 1 (PTV).

Fonte: www.vetsciences.free.fr

Figura 2.10. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Picornaviridae (poliovrus).

Os picornavrus possuem vrions esfricos


pequenos, no-envelopados, com 28 a 30 nm de
dimetro. O capsdeo icosadrico formado por
60 cpias de cada uma das quatro protenas VP1,
VP2, VP3 e VP4. Alm das protenas do capsdeo,
cada vrion possui tambm uma protena denominada VPg, associada ao cido nuclico na extremidade 5. O genoma composto de uma cadeia simples de RNA, de sentido positivo de 7.2 a
8.4 kb. A replicao do vrus ocorre inteiramente

49

Classificao e nomenclatura dos vrus

no citoplasma, e o RNA traduzido diretamente


pelos ribossomas. A infeco geralmente aguda
e citoltica, ocorrendo a liberao dos vrions pela
lise celular. Essa famlia contm vrios patgenos muito importantes para humanos e animais,
como o vrus da poliomielite, o vrus da hepatite
A, os rinovrus, os enterovrus, o FMDV, entre
outros.

5.2.2 Famlia: Caliciviridae


Gneros:
Vesivirus: calicivrus felino (FCV), vrus do
exantema vesicular dos sunos (SVEV), vrus dos
lees marinhos de San Miguel (SMSV);
Lagovirus: vrus da doena hemorrgica
dos coelhos (RHDV), vrus da doena hemorrgica das lebres pardas (EBHSV);
Norovirus: vrus de Norwalk (humano);
Sapovirus: vrus de Sapporo (humano).

ta uma protena (VPg) covalentemente ligada na


extremidade 5. Em clulas infectadas, tambm
detectado um RNA subgenmico de 2.2 a 2.4 kb.
A replicao do vrus ocorre no citoplasma, e os
vrus so liberados por lise celular. O patgeno
animal mais conhecido dessa famlia o calicivrus felino, associado com doena respiratria em
gatos. Um calicivrus (norovrus) tem sido considerado um dos principais agentes de diarria em
pessoas de todas as idades.

5.2.3 Famlia: Astroviridae


Gneros:
Mamastrovirus: astrovrus humanos e de
vrias espcies de animais domsticos;
Avastrovirus: astrovrus dos perus.
Os astrovrus so pequenos, com 28 a30 nm
de dimetro, sem envelope e com capsdeo icosadrico. A superfcie de algumas partculas vricas apresenta estruturas que lembram estrelas
de cinco ou seis pontas, o que originou o nome
da famlia. A replicao ocorre no citoplasma, e
os vrus so liberados por lise celular. Os astrovrus tm sido isolados de casos de gastrenterite
de bovinos, sunos, ces, gatos, perus, patos e humanos. Na grande maioria das espcies, a doena
se manifesta como uma diarria passageira e raramente h complicaes. Entretanto, em patos,
uma hepatite com altos ndices de mortalidade
tem sido descrita.

Fonte: www.fli.bund.de

Figura 2.11. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Caliciviridae.

Os calicivrus so vrus pequenos (dimetro


entre 30 a 40 nm) sem envelope. O capsdeo formado por 60 cpias de uma nica e grande protena. microscopia eletrnica, o vrus apresenta
depresses caractersticas na superfcie, que lembram copos ou clices, o que originou a denominao da famlia. O genoma consiste de um cido
nuclico RNA linear de cadeia simples e sentido
positivo, com extenso de 7.4 a 7.7 kb. Semelhante
aos picornavrus, o RNA dos calicivrus apresen-

Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).

Figura 2.12. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Astroviridae.

50

Captulo 2

5.2.4 Famlia: Togaviridae

5.2.5 Famlia: Flaviviridae

Gneros:
Alfavirus: vrus das encefalites eqinas
do leste (EEEV), oeste (WEEV) e venezuelana
(VEEV), alm de outros arbovrus zoonticos (Semliki Forest virus, SFV; Ross River virus, RRV;
Sindbis, SIN);
Rubivirus: vrus da rubola (humano).
Os togavrus possuem vrions esfricos, com
dimetro aproximado de 70 nm. O capsdeo
envolto por um envelope lipdico que apresenta
peplmeros formados por duas glicoprotenas.
O genoma consiste de uma molcula de RNA linear, de sentido positivo, com extenso de 9,7 a
11.8 kb. As protenas no-estruturais so sintetizadas a partir de uma poliprotena traduzida diretamente do RNA genmico. As protenas noestruturais so produzidas pela traduo de um
mRNA subgenmico, sintetizado a partir de uma
cpia de RNA de sentido anti-genmico. A replicao ocorre inteiramente no citoplasma e a liberao da prognie viral ocorre por brotamento na
membrana plasmtica. Os Alfavirus so transmitidos por insetos e a maioria deles zoontica.
Os EEEV, WEEV e VEEV de maior importncia
para a Veterinria esto classicados no gnero
Alfavirus. O vrus da rubola, tambm classicado nessa famlia, um agente que infecta exclusivamente humanos.

Gneros:
Flavivirus: vrus da febre amarela (YFV, humano e de primatas), vrus da dengue (humano),
vrus da encefalite japonesa (JEV), vrus Murray
Valley (MVEV), vrus do Nilo Ocidental (WNV),
vrus Wesselsbron (WBV), vrus do Louping Ill.
Com possvel exceo do vrus da dengue, os demais vrus so zoonticos;
Pestivirus: vrus da diarria viral bovina
tipos 1 e 2 (BVDV-1; BVDV-2), vrus da peste suna clssica (CSFV), vrus da doena da fronteira
(BDV);
Hepacivirus: vrus da hepatite C (humano).

Fonte: Dra Tuli Mukhopadnyay (ICTVdB).

Figura 2.13. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Togaviridae.

Fonte: PHIL Library, CDC.

Figura 2.14. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Flaviviridae (vrus do Nilo Ocidental).

Os membros da famlia Flaviviridae possuem


vrions envelopados, com capsdeo possivelmente icosadrico e com 45-60 nm de dimetro.
Apresentam um genoma RNA linear de sentido
positivo (9.5 a 12.5 kb), que traduzido em uma
poliprotena, posteriormente clivada nas protenas individuais por enzimas virais e celulares. O
genoma organizado de forma semelhante em
todos os membros da famlia, com as protenas
estruturais codicadas no primeiro tero (extremidade 5) e as no-estruturais nos teros nais
(extremidade 3). No gnero Flavivrus, esto
classicados vrios agentes de doenas hemorrgicas e encefalites transmitidas por mosquitos,
entre elas o YFV, o vrus da dengue e o WNV. Im-

51

Classificao e nomenclatura dos vrus

portantes patgenos para a medicina veterinria


so classicados no gnero Pestivrus, entre eles o
BVDV e o CSFV. O vrus da hepatite C de humanos o nico membro do gnero Hepacivirus.

5.2.6 Famlia: Coronaviridae

capsdeo helicoidal, que possui uma molcula de


RNA linear de cadeia simples e sentido positivo.
Dentre os vrus RNA, os coronavrus possuem o
maior genoma, podendo variar de 27 a 32 kb. A
sntese de um grupo de RNAs subgenmicos durante a replicao viral na clula infectada um
aspecto comum aos vrus dessa famlia, assim
como aos demais vrus da ordem Nidovirales. A
replicao ocorre inteiramente no citoplasma. Esses vrus causam importantes doenas entricas
em animais, incluindo a gastrenterite transmissvel dos sunos (TGE) e a peritonite infecciosa
dos felinos (FIP). Os coronavrus humanos esto
associados principalmente com os resfriados comuns. O vrus da SARS, agente de doena respiratria severa na sia entre 2003 e 2004, tambm
classicado nessa famlia.

5.2.7 Famlia: Arteriviridae


Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).

Figura 2.15. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Coronaviridae (SARS CoV).

Ordem Nidovirales
Gnero:
Coronavirus: vrus da bronquite infecciosa
das aves (IBV), coronavrus dos perus (TCoV),
vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos
(TGEV), coronavrus felino (FeCoV), vrus da peritonite infecciosa felina (FIPV), coronavrus canino (CCoV), coronavrus bovino (BCoV), coronavrus humano (HuCoV), vrus da pneumonia
asitica (SarsCoV humano);
Torovirus: torovrus eqino (EToV), torovrus bovino (BToV), torovrus suno (SToV), torovrus humano (HToV), vrus Berne (BeV), vrus
Breda (BrV).
A morfologia dos vrions, quando observada ao microscpio eletrnico, deu origem ao
nome da famlia. Os vrions do gnero Coronavrus possuem dimetro de 80 a 220 nm e forma
esfrica; os do gnero Torovrus, de 120 a 140 nm
e aparncia bacilar ou na forma de rim. Vrus de
ambos os gneros apresentam envelope lipdico
com peplmeros que se projetam externamente
por at 20 nm, e que do ao vrion o aspecto de
coroa. Os coronavrus apresentam um nucleo-

Ordem: Nidovirales
Gnero:
Arterivirus: vrus da arterite eqina (EVAV),
vrus elevador da lactato desidrogenase (LDEV),
vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV).

Fonte: Dr D. Robinson, South Dakota State University.

Figura 2.16. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Arteriviridae (PRRSV).

O nome dessa famlia originou-se da patologia induzida por esses vrus em eqinos, a arterite. Os arterivrus apresentam dimetro de 50 a 70
nm e possuem envelope. O genoma consiste de
uma molcula de RNA linear de sentido positivo,

52

com extenso entre 13 e 15 kb. De forma similar


ao que ocorre com os coronavrus, RNAs subgenmicos so produzidos durante a replicao
desses vrus no citoplasma das clulas infectadas.
A liberao dos vrus se d por exocitose aps
brotamento dentro de vesculas no citoplasma.
Alm do vrus da arterite eqina, est tambm
classicado nessa famlia o PRRSV. Ambas as doenas so consideradas ocialmente exticas no
Brasil. Entretanto, estudos sorolgicos demonstraram a presena de anticorpos contra o EVAV
em eqinos de alguns estados brasileiros.

5.3 Vrus com genoma RNA de sentido


negativo no-segmentado
5.3.1 Famlia: Paramyxoviridae
Ordem: Mononegavirales
Subfamlia: Paramyxovirinae
Gneros:
Respirovirus: vrus da parainuenza bovina tipo 3 (bPI-3V), vrus Sendai (camundongos);
Morbillivirus: vrus da cinomose canina
(CDV), vrus da peste bovina (Rinderpest), vrus
da peste dos pequenos ruminantes, morbilivrus
dos golnhos, morbilivrus de focas (PhDV), vrus do sarampo (humanos);
Rubulavirus: vrus da parainuenza canina
tipo 2 (cPIV-2), vrus da caxumba (humanos);
Henipavirus: vrus Hendra (HeV), vrus Nipah (NiV);
Avulavirus: vrus da doena de Newcastle
(NDV), paramixovrus das aves 2 a 9 (APMV-29).
Subfamlia: Pneumovirinae
Gneros:
Pneumovirus: vrus sincicial respiratrio
bovino (BRSV) e humano (hRSV);
Metapneumovirus: metapneumovrus das
aves AMPV (vrus da rinotraquete dos perus).
Os vrus dessa famlia so grandes, pleomrcos, envelopados, com dimetro variando
de 150 a 350 nm. Possuem um genoma RNA linear de sentido negativo, cadeia simples, com
16 a 20 kb. No envelope, so encontradas as glicoprotenas hemaglutinina (HN) e de fuso (F).
Em alguns vrus, as glicoprotenas de superfcie

Captulo 2

apresentam tambm uma atividade de neuraminidase. A hemaglutinina a protena viral


responsvel pela ligao ao receptor celular, e a
protena F realiza a fuso do envelope viral com
a membrana da clula. A replicao e reunio dos
componentes virais ocorrem no citoplasma, e a
liberao feita por brotamento da membrana
plasmtica. Na partcula viral, tambm so encontradas algumas cpias da enzima polimerase,
que necessria para iniciar a replicao do vrus. Esses vrus esto associados principalmente
com doenas respiratrias e foram identicados
apenas em mamferos e aves. Alguns morbilivrus podem causar infeco persistente. Entre os
vrus classicados nessa famlia e que causam
doena em animais incluem-se o CDV e o NDV
em aves, entre outros. O hRSV, o vrus do sarampo e da caxumba so patgenos importantes de
humanos.

Fonte: Dr Samuel Baron (ICTVdB).

Figura 2.17. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Paramyxoviridae (vrus Sendai).

5.3.2 Famlia: Rhabdoviridae


Ordem: Monegavirales
Gneros:
Vesiculovirus: vrus da estomatite vesicular
(VSV), vrios outros vrus isolados de insetos, alguns que infectam mamferos;
Lyssavirus: vrus da raiva (RV), lissavrus
de morcegos Lagos;
Efemerovirus: vrus da febre efmera dos
bovinos (BEFV);

53

Classificao e nomenclatura dos vrus

Novirhabdovirus: vrus da necrose hematopoitica infecciosa (HNV);


Cytorhabdovirus: vrus da necrose amarela
da alface (LNYV);
Nucleorhabdovirus: vrus do tomate pequeno amarelo (PYDV).

Fonte: Dr. F. Murphy (ICTVdB).

Figura 2.18. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Rhabdoviridae.

Os vrions dessa famlia possuem uma morfologia caracterstica, lembrando um projtil de


arma de fogo, com uma das extremidades arredondadas e a outra romba. O dimetro dos vrions varia de 70 a 85 nm, e o comprimento pode
variar de 130 a 380 nm. O vrus envelopado e
apresenta peplmeros de 8 a 10 nm na superfcie;
o nucleocapsdeo helicoidal. O genoma consiste
de uma cadeia simples de RNA linear de sentido
negativo e extenso de 10 a 13 kb. A replicao
ocorre no citoplasma. O RNA genmico de sentido negativo inicialmente transcrito em RNAs
subgenmicos, que so traduzidos nas protenas
necessrias formao de novas partculas virais.
A replicao do genoma ocorre a partir de um intermedirio positivo. O RV, que um dos vrus
zoonticos mais importantes, o principal vrus
dessa famlia. O VSV outro importante patgeno animal, capaz de infectar vrias espcies. Vrios rabdovrus de peixes e de plantas tambm
so agrupados nessa famlia.

5.3.3 Famlia: Filoviridae


Ordem: Mononegavirales
Gneros:
Marburgvirus: vrus de Marburg;
Ebolavirus: vrus ebola.
Os vrus dessa famlia apresentam formas
lamentosas, pleomrcas, com dimetro de 80
nm e extenso que pode atingir at 14.000 nm.
Podem ser vistas formas de U, de 6 ou, ainda, formas circulares. O genoma consiste de uma nica molcula de RNA linear, de cadeia simples e
sentido negativo, compondo um nucleocapsdeo
helicoidal. A replicao ocorre no citoplasma e o
vrus liberado por brotamento na membrana
plasmtica. Os vrus dessa famlia causam doenas hemorrgicas em humanos. Infeco natural
com vrus de Marburg e a cepa Reston do vrus
ebola tambm causa doena hemorrgica em macacos. Doena experimental pode ser induzida
atravs de inoculao em macacos, cobaias, hamsters e camundongos. A manipulao desses
vrus s permitida em laboratrios de nvel 4 de
biosegurana. O vrus ebola um dos vrus mais
letais j identicados para humanos. A histria
natural desses vrus ainda no bem conhecida.

Fonte: Dr F. Murphy (ICTVdB).

Figura 2.19. Fotografia de microscopia eletrnica de um


vrion da famlia Filoviridae (vrus Ebola).

54

5.3.4 Famlia: Bornaviridae


Ordem: Mononegavirales
Gnero:
Bornavirus: vrus da doena de Borna
(BDV).
Os bornavrus so esfricos e envelopados,
com dimetro de 90 nm. Possuem um genoma
RNA de cadeia simples, sentido negativo e 8.9
kb. Apesar do genoma RNA, os vrus replicam no
ncleo, onde produzem corpsculos de incluso.
Esses vrus so agentes etiolgicos reconhecidos
de doena neurolgica em ovinos e eqinos, mas
j foram isolados tambm de gatos e bovinos.
Alm disso, dados sorolgicos e moleculares recentes tm associado os bornavrus com doenas
neuropsiquitricas humanas.

Captulo 2

genoma ocorre no ncleo das clulas hospedeiras. Posteriormente, o vrus liberado da clula
por brotamento na membrana plasmtica. Os vrus do gnero inuenza so os agentes etiolgicos da gripe. O vrus inuenza A causa gripe em
humanos, aves, sunos, cavalos, martas, focas e
baleias. O vrus inuenza B patgeno somente
de humanos, e os de inuenza C, de humanos e
sunos. A natureza segmentada do genoma desses vrus facilita a troca dos segmentos genmicos entre vrus das diferentes espcies quando infectam a mesma clula. Esse mecanismo permite,
eventualmente, o surgimento de vrus bastante
virulentos.

5.4 Vrus com genoma RNA de sentido


negativo segmentado
5.4.1 Famlia: Orthomyxoviridae
Gneros:
Inuenzavirus A (FluAV): vrus da inuenza A (humanos, aves, eqinos, sunos, recentemente ces e feldeos);
Inuenzavirus B (FluBV): vrus da inuenza B (humanos);
Inuenzavirus C (FluCV): vrus da inuenza C (humanos, sunos);
Thogotovirus: vrus Thogoto de carrapatos
(THOV), vrus Dhori (DHOV). Tem sido detectada sorologia positiva em bovinos e camelos;
Isavirus: vrus da anemia infecciosa do salmo (ISAV).
Os ortomixovrus possuem vrions envelopados pleomrcos, com 80 a 120 nm de dimetro. No envelope, esto inseridas as glicoprotenas hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NE)
que se extendem externamente por 10 a 14 nm.
O genoma consiste de oito (vrus inuenza A),
sete (vrus inuenza B) ou seis (vrus inuenza
C) segmentos de RNA linear, sentido negativo de
cadeia simples, com extenso total de 10 a 13.6
kb. Cada segmento genmico empacotado em
um nucleocapsdeo helicoidal. A replicao do

Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).

Figura 2.20. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Orthomyxoviridae (influenza A).

5.4.2 Famlia: Bunyaviridae


Gneros:
Orthobunyavirus: vrus Bunyamwera
(BOTV), vrus La Crosse (LACV), vrus Akabane
(AKAV);
Hantavirus: vrus Hantaan (hantavrus
HTNV) de roedores e humanos;
Nairovirus: vrus de Dugbe (DUGV), vrus
da febre hemorrgica Crimean Congo (CCHFV),
vrus da doena das ovelhas de Nairobi (NSDV);
Phlebovirus: vrus da febre do vale Rift
(RVFV);
Tospovirus: vrios vrus de plantas.

55

Classificao e nomenclatura dos vrus

Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).

Figura 2.21. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Bunyaviridae.

Os buniavrus possuem vrions esfricos ou


pleomrcos, envelopados, com dimetro entre
80 e 120 nm. O genoma consiste de trs segmentos
de RNA de cadeia simples e sentido negativo, organizados em nucleocapsdeos helicoidais. Esses
vrus replicam no citoplasma. O ressortimento
possvel entre vrus do mesmo gnero devido
segmentao do genoma. Existe um grande nmero de vrus classicados nessa famlia, muitos
deles no infectam animais domsticos ou seres
humanos, apenas insetos. Os vrus patognicos
dessa famlia so agentes de doenas respiratrias severas, hepatite, nefrite e encefalite em
animais e humanos. Esses vrus so geralmente
citopticos quando inoculados em clulas de vertebrados, mas so no-citopticos em clulas dos
vetores invertebrados. A grande maioria dos vrus dessa famlia composta de arbovrus isolados ou transmitidos por mosquitos, carrapatos e
outros artrpodos. Os vrus do gnero hantavrus
so excees, uma vez que so mantidos e transmitidos por roedores. Alguns desses vrus (como
o RVFV e o CCMFV) s podem ser manipulados
em laboratrio de segurana nvel 4.

rus de roedores e humanos (LASV), vrus Junin


(JUNV),vrus Machupo (MACV), vrus sabi
(SABV), vrios outros vrus identicados em roedores e/ou causando doena em humanos.
So vrus envelopados e pleomrcos, cujo
dimetro varia de 100 a 300 nm. Possuem um genoma RNA de cadeia simples, sentido negativo e
ambissense, com dois segmentos de extenso de 14
a 16 kb. Os vrus replicam no citoplasma e saem
da clula por brotao da membrana plasmtica.
Os arenavrus infectam diferentes espcies de roedores nas Amricas, frica e Europa de forma
crnica e, na maioria das vezes, assintomtica.
Alguns desses vrus causam doenas severas em
humanos, algumas delas com aspectos hemorrgicos. Por isso esto entre os agentes mais importantes das febres hemorrgicas. A transmisso
ocorre geralmente atravs de aerossis provenientes da urina contaminada desses animais.
Entre os arenavrus causadores de doena em
humanos est o vrus Lassa, agente etiolgico de
febre hemorrgica em algumas regies da frica. No continente americano, j foram descritos
o MACV na Bolvia, JUNV na Argentina, Guanarito na Venezuela e SABV no Brasil. Todos esses
vrus so agentes de doenas hemorrgicas.

5.4.3 Famlia: Arenaviridae


Gnero:
Arenavirus: vrus da coriomeningite linfoctica dos camundongos (LCMV), Lassav-

Fonte: Scientific American (ICTVdB).

Figura 2.22. Fotografia de microscopia eletrnica de um


vrion da famlia Arenaviridae.

56

5.5 Vrus com genoma RNA de cadeia


dupla
5.5.1 Famlia: Reoviridae

Captulo 2

vrus, e 12 segmentos e 27 kb para o Coltivrus. A


replicao e montagem dos vrions ocorrem no
citoplasma, de onde os vrions so liberados. O
ressortimento de segmentos de RNA pode ocorrer quando mais de um vrus do mesmo gnero
infectam a mesma clula. O BTV e os rotavrus
de vrias espcies de mamferos so exemplos
de patgenos importantes em veterinria. Os rotavrus so importantes causadores de diarria,
sobretudo em crianas, em pases subdesenvolvidos.

5.5.2 Famlia: Birnaviridae

Fonte: Dra. Bchen-Osmond (ICTVdB)

Figura 2.23. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Reoviridae (rotavrus).

Gneros:
Orthoreovirus: orthoreovrus de mamferos
(MRV), orthoreovrus de aves (ARV), orthoreovrus de babunos (BRV);
Orbivirus: vrus da lngua azul (BTV-1 a
24), vrus da encefalose eqina (EEV-1 a 7), vrus
da peste eqina (AHSV-1 a 9);
Rotavirus: rotavrus de todas as espcies (A
a G);
Coltivirus: vrus da febre do carrapato do
Colorado (CTFV);
Aquareovirus: aquareovrus A (ARV-A a
F);
Seadornavirus: virus kadipiro (KDV).
Existem ainda os gneros de vrus que infectam plantas e insetos: Cypovirus, Idnoreovirus,
Fijivirus, Oryzavirus e Phytoreovirus.
Os reovrus possuem vrions complexos,
sem envelope, compostos por duas ou trs camadas de protenas arranjadas de forma concntrica. O dimetro desses capsdeos pode variar de
60 a 85 nm e possui simetria icosadrica. O genoma consiste de molculas de RNA de cadeia
dupla. O nmero e a extenso desses segmentos
variam entre os gneros; sendo de 10 segmentos
e 23 kb para o Reovrus, 10 segmentos e 18 kb para
o Orbivrus, 11 segmentos e 16-21 kb para o Rota-

Gneros:
Aquabirnavrus: vrus da necrose pancretica infecciosa (IPNV);
Avibirnavrus: vrus da doena de Gumboro (IBDV);
Entomobirnavrus: vrus X da drosla.

Fonte: Dr. Stewart McNulty, (www.qub.ac.uk).

Figura 2.24. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Birnaviridae.

Esses vrus possuem um genoma RNA linear de cadeia dupla com dois segmentos, denominados A e B. A extenso total do genoma varia
entre 5.7 e 7 kb. Os vrions so formados por um
capsdeo icosadrico, sem envelope, e dimetro
de 60 nm. Os RNAs mensageiros so sintetizados
a partir dos dois segmentos do genoma RNA e
uma poliprotena produzida e, posteriormente,
clivada. Maiores detalhes da replicao no so
conhecidos. O patgeno mais conhecido dessa famlia o IBDV, que afeta galinhas.

57

Classificao e nomenclatura dos vrus

5.6 Vrus com genoma RNA que


realizam transcrio reversa
5.6.1 Famlia: Retroviridae
Subfamlia: Orthoretrovirinae
Gneros:
Alpharetrovirus: vrus da leucose aviria
(ALV), vrus do sarcoma Rous (RSV);
Betaretrovirus: vrus do tumor mamrio do
camundongo (MMTV), retrovrus Jaagsiekte dos
ovinos (JSRV);
Gammaretrovirus: vrus da leucemia felina
(FeLV), vrus da leucemia murina (MuLV);
Deltaretrovirus: vrus da leucose bovina
(VLB), vrus da leucemia de clulas T humano
(HTLV-1 e 2);
Epsilonretrovirus: vrus do sarcoma dermal
de Walleye (WDSV);
Lentivirus: vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV), vrus da imunodecincia felina (FIV),
vrus da artrite-encefalite caprina (CAEV), vrus
Maedi-Visna (MMV), vrus da imunodecincia
dos smios (SIV), vrus da imunodecincia humana (HIV-1 e 2);
Subfamlia: Spumaretrovirinae
Spumavirus: vrus foamy do chimpanz.

ral complexa, incluindo uma etapa de transcrio


reversa. Os retrovrus so envelopados e possuem um capsdeo icosadrico. O dimetro dos
vrions pode variar entre 80 e 100 nm. O genoma
diplide, consistindo de duas cpias de RNA
cadeia simples e sentido positivo. A replicao
dos retrovrus ocorre em parte no citoplasma e
em parte no ncleo. A replicao viral envolve
a sntese de uma cpia DNA do RNA genmico
(provrus), que integrada no cromossomo celular. A sntese de mRNAs, para a sntese protica
e do RNA genmico, ocorre pela transcrio do
provrus pela maquinaria celular de transcrio.
Pelo fato de integrar o seu provrus ao DNA da
clula, os retrovrus infectam o hospedeiro para
o resto da vida. Os vrus dessa famlia esto associados principalmente a doenas tumorais e
imunossupressivas. O ALV e o EIAV esto entre
os vrus de importncia veterinria classicados
nessa famlia. O vrus da AIDS (HIV) o retrovrus de maior repercusso em sade humana.

6 Bibliografia consultada
CONDIT, R.C. Principles of Virology. In: KNIPE, D.M.;
HOWLEY, P.M. (eds). Fields virology. 4.ed. Philadelphia, PA:
Lippincott Williams & Wilkins, 2001. Cap.2, p.19-51.
DE VILLIERS, E.M. et al. Classication of papillomaviruses.
Virology, v.324, p.17-27, 2004.
FAUQUET, C.M.; FARGETTE, D. International Committee on
Taxonomy of Viruses and the 3,142 unassigned species. Virology
Journal, v.2, p.64, 2005.
ICTVdB - The Universal Virus Database, version 4. BNCHENOSMOND, C. (Ed). New York, USA: Columbia University.
KOCI, M.D.; SCHULTZ-CHERRY, S. Avian astroviruses. Avian
Pathology, v.31, p.213-227, 2002.
MAYO, M.A. Names of viruses and virus species - an editorial
note. Archives of Virology, v.147, p.1463-1464, 2002.

Fonte: University of Otaga, NZ (ICTVdB).

Figura 2.25. Fotografia de microscopia eletrnica de


vrions da famlia Retroviridae (HIV).

Nessa famlia, esto classicados vrios


patgenos de interesse na Medicina Veterinria
em diversas espcies. Esses vrus apresentam,
como principal caracterstica, uma replicao vi-

MURPHY, F. A. Virus Taxonomy. In: FIELDS, B.N.; KNIPE,


D.M.; HOWLEY, P.M. (eds). Fields virology. 3.ed. Philadelphia,
PA: Lippincott Williams & Wilkins, 1996. Cap.2, p.15-57.
MURPHY, F.A. et al. Veterinary virology. 3.ed. San Diego, CA:
Academic Press, 1999. 629p.
PRINGLE, C.R. Virus nomenclature. Archives of Virology,
v.144, p.1463-1466, 1999.
PRINGLE, C.R. Virus taxonomy--1999. The universal system of
virus taxonomy, updated to include the new proposals ratied

58
by the International Committee on Taxonomy of Viruses during
1998. Archives of Virology, v.144, p.421-429, 1999.
PRINGLE, C.R. Virus taxonomy--San Diego. Archives of
Virology, v.143, p.1449-1459, 1998.
THIEL, H.J.; KONIG, M. Caliciviruses: an overview. Veterinary
Microbiology, v.69, p.55-62, 1999.
VAN REGENMORTEL, M.H. Virologists, taxonomy and the
demands of logic. Archives of Virology, v.151, p.1251-1255,
2006.
VAN REGENMORTEL, M.H.; MAHY, B.M. Emerging issues
in virus taxonomy. Emerging Infectious Diseases, v.10, p.8-13,
2004.

Captulo 2

DETECO, IDENTIFICAO E QUANTIFICAO


DE VRUS
Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen

1 Introduo

61

2 Mtodos de deteco e identificao de vrus

61

2.1 Deteco direta por microscopia eletrnica

61

2.2 Deteco de propriedades biolgicas dos vrus


2.2.1 Hemaglutinao
2.2.2 Hemadsoro

63
63
65

2.3 Deteco de antgenos


2.3.1 Imunofluorescncia
2.3.2 Imunoperoxidase
2.3.3 Ensaio imunoenzimtico
2.3.4 Radioimunoensaio
2.3.5 Imunocromatografia
2.3.6 Aglutinao em ltex
2.3.7 Imunodifuso em gar
2.3.8 Imunoblots

65
65
66
67
67
68
68
68
68

2.4 Deteco/identificao de cidos nuclicos


2.4.1 Tcnicas de hibridizao (Southern, Northern blot)
2.4.2 Hibridizao in situ
2.4.3 Reao de polimerase em cadeia
2.4.4 Anlise de restrio
2.4.5 Eletroforese em gel de poliacrilamida

69
69
70
70
73
73

3 Multiplicao de vrus
3.1 Inoculao em animais susceptveis
3.2 Inoculao em ovos embrionados
3.3 Inoculao em cultivo celular

73
74
74
75

4 Quantificao de vrus
4.1 Diluio limitante
4.2 Ensaio de placa
4.3 Outros mtodos de quantificao

5 Identificao e caracterizao de um isolado


5.1 Sensibilidade a solventes orgnicos
5.2 Concentrao e purificao por ultracentrifugao

81
81
81
83
84
84
84

6 Biossegurana laboratorial

85

7 Bibliografia consultada

86

1 Introduo
Os grandes avanos no entendimento dos
mecanismos de replicao, transmisso e patogenia de vrios agentes virais somente foram possveis aps o desenvolvimento de mtodos de propagao e deteco de vrus in vitro. No princpio
da Virologia, antes mesmo da classicao dos
vrus como agentes ltrveis, as alteraes produzidas nos animais durante as infeces virais
j eram observadas e descritas. No entanto, a falta de conhecimentos sobre o agente e de equipamentos adequados fez com que a diferenciao
entre as infeces fosse realizada apenas entre
as enfermidades com sinais clnicos caractersticos. Inicialmente, o nico mtodo de propagao
viral era a inoculao em animais susceptveis.
Embora essa forma de amplicao viral tenha
sido muito til nos primrdios da Virologia, esse
mtodo de amplicao restringiu o estudo dos
vrus devido diculdade de manuteno de
animais e tambm pela baixa reprodutibilidade
da maioria das enfermidades vricas.
A maior revoluo na Virologia ocorreu
aps o advento dos antibiticos, o que possibilitou o estabelecimento de cultivos celulares livres
de contaminantes bacterianos. O uso dos cultivos
celulares contribuiu de maneira decisiva para a
deteco e multiplicao dos vrus com diversas
nalidades, viabilizando o diagnstico, estudos
bioqumicos e moleculares e produo de vacinas. Nesse sentido, a citopatologia, produzida
por alguns vrus em clulas de cultivo durante a
sua replicao, uma caracterstica amplamente
utilizada para demonstrar a presena do agente
em material clnico, permitindo a realizao do
diagnstico.
As tcnicas de deteco viral foram desenvolvidas inicialmente com ns diagnstico, ou seja,
para pesquisar vrus em amostras clnicas; porm
passaram a ser utilizadas para uma ampla gama
de nalidades em laboratrios de virologia.
A conrmao da presena do vrus em tecidos, secrees ou excrees pode ser realizada
pelo uso de tcnicas que demonstrem o agente, o
efeito da replicao em cultivo celular, produtos
intermedirios do processo replicativo (protenas,
corpsculos de incluso) ou o material gentico
(DNA ou RNA viral). Muitas vezes recorre-se

realizao de duas ou mais tcnicas para a conrmao denitiva da presena do agente. A escolha de uma determinada tcnica de deteco est
diretamente relacionada com a forma de infeco
e com o tropismo do vrus por determinados tecidos e rgos. Por outro lado, a disponibilidade
de equipamentos, qualidade dos reagentes e de
pessoal capacitado para a execuo das tcnicas
tambm podem determinar a escolha da tcnica a
ser empregada. A simples deteco do agente viral em uma amostra clnica deve ser considerada
com cautela, pois a sua presena pode no ser um
indicativo seguro da etiologia da doena.
Os mtodos de deteco dos agentes virais
podem ser divididos em mtodos diretos e indiretos. Os mtodos diretos compreendem as
tcnicas em que o agente viral diretamente detectado, ou seja, a partcula viral observada e
identicada de maneira precisa. A nica tcnica
que se enquadra nesse princpio a microscopia
eletrnica. Os mtodos de deteco indireta identicam as propriedades biolgicas ou produtos
resultantes da replicao viral, como protenas
ou cidos nuclicos. Neste captulo, sero apresentadas e discutidas as tcnicas utilizadas para
a deteco de partculas vricas, protenas ou material gentico viral. A aplicao dessas tcnicas,
com nalidades diagnsticas, ser abordada no
Captulo 11. Alm disso, sero abordadas as maneiras de multiplicao, quanticao e caracterizao viral, bem como alguns aspectos de segurana laboratorial.

2 Mtodos de deteco e
identificao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia
eletrnica
A maioria dos agentes virais possui partculas vricas com caractersticas morfolgicas e
estruturais peculiares s famlias as quais pertencem. Com base nesse aspecto, o mtodo mais simples de deteco e identicao de vrus a visualizao direta das partculas na amostra (Figura
3.1). Exemplos clssicos do uso da microscopia
eletrnica (ME) com ns diagnsticos incluem a
deteco de partculas vricas em crostas de leses causadas pelo ectima contagioso dos ovinos

62

Captulo 3

e pseudo-varola bovina (parapoxvrus) ou, ainda, a deteco do parvovrus em fezes caninas e

rotavrus ou coronavrus em fezes de bezerros


com diarria.

Figura 3.1. Microscopia eletrnica. (A) Partculas de parapoxvrus em material coletado de leses de ovinos suspeitos
de ectima contagioso (50.000x); (B) Partculas tpicas de rotavrus em fezes bovinas diarricas (260.000x); (C) Partculas
caractersticas de calicivrus em clulas de cultivo, inoculadas com secreo nasal de um felino com doena
respiratria (40.000x); (D) Partculas tpicas de herpesvrus no ncleo de clulas de cultivo, inoculadas com material
coletado de um touro com balanopostite (48.000x); (E) Partculas do vrus da parainfluenza bovina 3 (bPI-3),
observadas em sobrenadante de cultivo celular (260.000x); (F) Arranjo cristalino de partculas tpicas de picornavrus
no citoplasma de clulas de cultivo, inoculadas com material coletado de um bovino com doena gastrentrica e
respiratria (315.000x).

63

Deteco, identificao e quantificao de vrus

A ME possuiu grande aplicabilidade na pesquisa e identicao de vrus que no replicam


com ecincia em cultivo celular. Essa tcnica
permitiu a identicao de vrios agentes entricos de difcil cultivo, tais como: poxvrus, rotavrus, calicivrus, astrovrus, entre outros. Quando
as partculas vricas esto presentes em grande
quantidade, so facilmente observadas nas fezes
de animais com diarria ou em lquidos vesiculares de infeces cutneas.
A maior restrio da ME a sua baixa sensibilidade. Amostras clnicas que contenham quantidade inferior a 106-107 partculas vricas por mililitro no so detectadas como positivas por essa
tcnica, gerando resultados falso-negativos. Essa
quantidade de vrus geralmente encontrada em
uidos vesiculares e fezes, o que no ocorre com
tanta freqncia em secrees respiratrias. A
sensibilidade, no entanto, no o nico limitante
dessa tcnica. O custo elevado do equipamento
e a exigncia de tcnicos altamente capacitados
para a operao e interpretao dos resultados
tambm representam limitaes. O perodo necessrio para a obteno dos resultados varia entre 15 minutos, nos casos em que o material observado diretamente no microscpio, at alguns
dias quando h necessidade do processamento
prvio da amostra para aumentar a possibilidade
de deteco. Pode-se tambm realizar a ME em
clulas de cultivo previamente inoculadas com o
material suspeito.
A sensibilidade da ME pode ser aumentada
pelo uso de tcnicas que permitam a concentrao
e facilitem a visualizao das partculas vricas. A
claricao de amostras por centrifugao de baixa rotao empregada para remover partculas
e substncias que possam interferir na tcnica.
A ultracentrifugao utilizada com o objetivo
de concentrar as partculas virais. A aglutinao
com soro hiperimune rotineiramente utilizada
e denomina-se imunoeletromicroscopia. Nesta
metodologia, utiliza-se um soro hiperimune especco contra o agente suspeito, cujos anticorpos iro se ligar e promover a concentrao das
partculas, facilitando a visualizao. Anticorpos
marcados com micropartculas de ouro (tcnica
de imunogold) tambm so utilizados para au-

mentar a sensibilidade do teste. Aps o processo


de claricao e concentrao, a amostra corada negativamente, geralmente com tungstnio, e
examinada sob ME.
Alm do seu uso em diagnstico, a ME tem
sido utilizada para o estudo da morfologia e ultra-estrutura de partculas vricas e tambm em
estudos de patogenia. As caractersticas observadas para a identicao e caracterizao do
agente so: o dimetro dos vrions, morfologia
do nucleocapsdeo, presena ou no de envelope,
presena de projees na superfcie das partculas, organizao dos agregados de partculas e a
localizao celular dos vrions.

2.2 Deteco de propriedades biolgicas


dos vrus
2.2.1 Hemaglutinao
Vrios vrus possuem protenas de superfcie que se ligam a eritrcitos, provocando a sua
agregao e aglutinao, fenmeno denominado
hemaglutinao (HA) (Tabela 3.1). A propriedade
de aglutinar eritrcitos restrita a algumas famlias de vrus (exemplos: ortomixovrus e paramixovrus) e, para cada um desses vrus, a HA
ocorre apenas com eritrcitos de determinadas
espcies animais. Nos vrus da inuenza, por
exemplo, a ligao entre a protena do envelope
viral (hemaglutinina ou HA) com o cido N-acetilneuramnico da membrana dos eritrcitos de
galinha a responsvel pela aglutinao. Baseando-se nesse princpio, a tcnica de HA pode ser
utilizada para a deteco dos vrus que possuem
essa propriedade biolgica. O teste realizado
pela incubao de uma suspenso de eritrcitos
com o material suspeito (puro ou em diluies)
em microplacas com fundo em V ou U. Aps
o perodo de incubao, a presena do agente
hemaglutinante ser indicada pela formao de
uma rede difusa de eritrcitos no poo. Em amostras negativas (ausncia do agente hemaglutinante), as hemcias no sero aglutinadas, iro rolar
e se acumular no fundo da cavidade, formando
um boto bem denido (Figura 3.2). Esse teste
de fcil execuo, porm falha em detectar quan-

64

Captulo 3

LEPORINO

AVES

CANINOS e
FELINOS

SUNOS

EQINOS

BOVINOS

Tabela 3.1. Vrus com atividade hemaglutinante sobre eritrcitos animais


Vrus

Fonte de vrus

Eritrcitos (espcie)

Adenovrus bovino (BAdV)

Sobrenadante de cultivo celular

Rato, bovino ou macacos rhesus

Coronavrus bovino (BoCV)

Amostras fecais e sobrenadante


de cultivo celular

Camundongo, hamster e rato

Parainfluenza 3 bovino (bPI-3)

Sobrenadante de cultivo celular

Bovino e cobaia

Encefalomielite eqina
(EEEV, WEEV)

Macerado de crebro de
camundongo

Ganso ou pinto de 1 dia

Influenza eqina

Sobrenadante de cultivo celular


ou lquido amnitico

Galinha e cobaia

Adenovrus eqino (EAdV)

Sobrenadante de cultivo celular

Rato ou macaco rhesus

Encefalite japonesa (JEV)

Suspenso de crebro de
camundongo

Ganso ou pinto de 1 dia

Peste suna africana (ASFV)

Sobrenadante de cultivo celular

Suno

Encefalomielite
hemaglutinante dos sunos

Sobrenadante de cultivo celular

Galinha, rato, camundongo e


hamster

Influenza suna (SIV)

Fluido alantide

Galinha

Parvovrus suno (PPV)

Extratos de tecidos fetais ou


sobrenadante de cultivo celular

Humano, macaco, camundongo,


cobaia, gato, galinha e rato

Adenovrus canino (CAdV)

Sobrenadante de cultivo celular

Rato, macaco rhesus, humano e aves

Parvovrus canino (CPV)

Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo

Suno ou macaco rhesus

Panleucopenia felina (FPLV)

Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo

Suno ou macaco rhesus

Influenza aviria (AIV)

Fluido alantide

Mamferos e aves

Doena de Newcastle (NDV)

Fluido alantide

Galinha

Bronquite infecciosa
aviria (IBV)

Fludo corioalantide

Galinha

Doena hemorrgica dos


coelhos (RHDV)

Suspenso de tecidos e
sobrenadante de cultivo

Humano do tipo O

tidades pequenas de vrus. Outra restrio que

pos antivirais no soro de animais foi desenvolvi-

a atividade hemaglutinante uma propriedade

do e denomina-se inibio da hemaglutinao (HI).

restrita a algumas famlias de vrus, ou seja, a tc-

A tcnica de HI pode ser utilizada tanto para

nica no possui aplicao universal.

a deteco de anticorpos antivirais como para a

A atividade hemaglutinante pode ser inibida

identicao de vrus hemaglutinantes. Aps a

pela presena de anticorpos anti-hemaglutininas

deteco da atividade HA, a tcnica de HI rea-

especcos. Os anticorpos especcos iro ligar-se

lizada, utilizando-se um anti-soro especco con-

protena hemaglutinante do vrus, impedindo a

tra o vrus suspeito para conrmar o diagnstico.

ligao desta com os eritrcitos. Dessa maneira,

A aplicao desse mtodo em diagnstico ser

um mtodo para se detectar e quanticar anticor-

abordada com detalhes no Captulo 11.

65

Deteco, identificao e quantificao de vrus

para a deteco de ortomixovrus, paramixovrus


e asfarvrus.

+
Amostra
suspeita

2.3 Deteco de antgenos virais


Eritrcitos

Incubao
1 hora

Amostra
positiva

Amostra
negativa

Figura 3.2. Teste de hemaglutinao (HA) para a


pesquisa de vrus. A amostra suspeita de conter o vrus
misturada com uma suspenso de eritrcitos e incubada
a 37 C por 1 hora. (A). A presena do vrus indicada
pela aglutinao dos eritrcitos e formao de uma rede
fina difusa no fundo da cavidade; (B). Na ausncia do
vrus, os eritrcitos rolam para o fundo da cavidade,
formando um boto de contorno bem definido.

2.2.2 Hemadsoro
Durante o ciclo replicativo de alguns vrus
em cultivo celular, determinadas protenas virais
so expostas na superfcie das clulas infectadas.
Algumas dessas protenas possuem a capacidade
de se ligar a eritrcitos quando esses so adicionados ao meio de cultivo. Esse processo denominado hemadsoro (HAD), e restrito interao
de alguns vrus com eritrcitos de certas espcies
de mamferos e aves. A HAD um indicativo da
presena desses vrus no material suspeito. Essa
tcnica de simples execuo, sendo empregada

2.3.1 Imunofluorescncia
A imunouorescncia (IFA) uma tcnica
de deteco de antgenos e baseia-se na reao de
anticorpos especcos com o antgeno presente
no material suspeito. Os anticorpos so conjugados com uma substncia que emite luminosidade
uorescente (uorescena) quando exposta luz
ultravioleta (UV). A presena do antgeno no material revelada pela emisso de luminosidade
uorescente. Essa metodologia pode ser aplicada
em monocamada de clulas, em esfregaos celulares, em tecidos frescos, congelados ou includos
em parana. Geralmente, o material deve ser
previamente xado em etanol, metanol ou acetona. Aps a xao, incuba-se o material com o
anticorpo especco marcado com o uorocromo
(FITC isotiocianato de uorescena ou Texas
Red). Posteriormente, sucessivas lavagens so realizadas para a remoo do anticorpo no-ligado.
O material , ento, examinado ao microscpio
de luz UV. A colorao verde-ma ou vermelha
(para anticorpos marcados com FITC e Texas Red,
respectivamente), visualizada contra um fundo
escuro, indica a presena de antgenos virais na
amostra. A emisso de uorescncia resulta da
excitao do uorocromo conjugado ao anticorpo quando exposto luz UV. O resultado nal
a observao de uma regio ou de toda a clula
corada, pois as protenas virais esto dispersas no
seu interior (Figura 3.3).
Existem basicamente duas variantes da tcnica: a imunouorescncia direta (IFD) e a indireta (IFI). Na IFD, o anticorpo primrio (monoclonal ou policlonal) especco para o agente
marcado com o uorocromo e adicionado diretamente sobre a amostra. No caso da IFI, a tcnica
realizada em duas etapas. A primeira incubao realizada com o anticorpo primrio especco para os antgenos virais e, aps a remoo
dos anticorpos que no se ligaram aos antgenos,
por sucessivas lavagens, adiciona-se o anticorpo
secundrio, marcado com o uorocromo. O anti-

66

Captulo 3

corpo secundrio (especco para a espcie animal na qual foi produzido o anticorpo primrio)
reconhece e se liga ao anticorpo primrio.
A IFA uma tcnica simples e se constitui
em uma das tcnicas mais utilizadas em Virologia, possuindo diversas aplicaes, incluindo
o diagnstico de infeces vricas. A aplicao
dessa tcnica em diagnstico ser abordada no
Captulo 11. Como desvantagens, incluem-se a
necessidade de um microscpio de luz UV e a
possibilidade de alguns tecidos ou clulas emitirem uorescncia natural, o que pode dicultar a
interpretao do resultado.
A

Imunofluorescncia
direta

Imunofluorescncia
indireta

Clula infectada

Anticorpo antivrus

Antgenos virais

Anticorpo
anti-IgG-FITC

Anticorpo
antivrus-FITC

ou peroxidase) ou a fosfatase alcalina (AP). O


termo IPX tem sido utilizado quase como sinnimo, embora deva ser ressaltado que essa no
a nica enzima utilizada na tcnica. Essa tcnica
pode ser aplicada em monocamadas celulares,
esfregaos ou diretamente em tecidos, sendo denominada de imunocitoqumica (ICQ) ou imunoistoqumica (IHC), respectivamente. A metodologia semelhante IFA, existindo tambm a
IPX direta e indireta. Na IPX direta, o material
xado incubado com o anticorpo antiviral marcado com a enzima, seguido da lavagem e adio
do substrato. A presena do antgeno no material
revelada pela ao da enzima no substrato. Utilizam-se substratos cromognicos (aminoetilcarbazol AEC; diaminobenzidina DAB; ou 4-cloronaftol) que produzem uma colorao marrom
ou marrom-carmim pela ao da enzima e formam um precipitado na clula positiva (Figura
3.4). A IPX indireta utiliza o anticorpo primrio
especco para o antgeno, e o anticorpo secundrio marcado com a enzima. Essa variao da
A

Imunoperoxidase
direta

Imunoperoxidase
indireta

Clula infectada

Anticorpo antivrus

Antgenos virais

Anticorpo
anti-IgG-HRPO

Anticorpo
antivrus HRPO

Substrato

Figura 3.3. Ilustrao demonstrativa da tcnica de


imunofluorescncia para a deteco de antgenos virais
em clulas. (A) Imunofluorescncia direta (IFD); (B)
Imunofluorescncia indireta (IFI).

2.3.2 Imunoperoxidase
A tcnica de imunoperoxidase (IPX) baseiase no mesmo princpio da IFA, com a diferena
que os anticorpos so marcados com uma enzima, que pode ser a horseradish peroxidase (HRPO

Figura 3.4. Ilustrao demonstrativa da tcnica de


imunoperoxidase (IPX) para a deteco de antgenos
virais em clulas. (A). Imunoperoxidase direta; (B)
Imunoperoxidase indireta.

67

Deteco, identificao e quantificao de vrus

tcnica apresenta maior sensibilidade devido


amplicao do sinal. A tcnica de IPX possui
as mesmas aplicaes da IFA, porm apresenta
a vantagem de no necessitar do microscpio de
luz UV, j que as reaes podem ser visualizadas
sob microscopia tica comum.

2.3.3 Ensaio imunoenzimtico


O teste imunoenzimtico (ELISA) pode ser
utilizado para a deteco de antgenos virais e
tambm de anticorpos. uma tcnica que apresenta vantagens, tais como: a boa sensibilidade,
especicidade, baixo custo, repetibilidade e versatilidade. Em alguns casos, o uso da tcnica permite a deteco de at 1 ng (nanograma) de antgeno por grama de tecido coletado diretamente
do animal. Os testes podem ser executados em
amostras individuais, como recurso diagnstico
em clnicas ou consultrios; ou em grande escala, como realizado em laboratrios totalmente
automatizados. A tcnica permite uma variao
de formas e aplicaes, dependendo do objetivo e
da disponibilidade de reagentes. Basicamente, os
testes de ELISA podem ser classicados em diretos, indiretos ou de competio.
A tcnica baseia-se na imobilizao da reao antgeno-anticorpo em um suporte slido
(placas de poliestireno), seguida de uma reao
colorimtrica. Por se tratar de uma tcnica que
apresenta inmeras variaes, neste captulo ser
apresentado apenas o fundamento geral da tcnica. Para um detalhamento maior, recomenda-se a
literatura especca.
Um exemplo simplicado para facilitar o
entendimento da tcnica ser brevemente descrito. No ELISA de captura direto (Figura 3.5) para
deteco de antgenos virais, placas de 96 cavidades so recobertas com anticorpos especcos
para um determinado agente. A amostra suspeita da presena viral (sangue, secrees ou leite)
adicionada e incubada por um determinado tempo. Nesse perodo, ocorre a captura do antgeno
(amostras positivas) pelo anticorpo xado na placa. Aps essa etapa, so realizadas lavagens para
a remoo de substncias inespeccas. A seguir
adiciona-se um segundo anticorpo, especco

para o vrus, conjugado com a enzima (HRPO ou


AP). Novamente os anticorpos que no se ligaram so removidos por lavagens. A conrmao
da presena do antgeno viral evidenciada pela
adio de substrato e desenvolvimento da colorao especca nas amostras negativas. A leitura
realizada pela inspeo visual ou pelo uso de
fotocolormetro.
A

B
Anticorpos
antivirais

Incubao da
amostra suspeita

Lavagem

Antgenos na
amostra
suspeita
Anticorpo
antivrus

Lavagem

Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Mudana
de cor
Positivo

Negativo

Figura 3.5. Ilustrao demonstrativa do ensaio


imunoenzimtico (ELISA) para a deteco de antgenos.
(A) Amostra positiva; (B) Amostra negativa.

2.3.4 Radioimunoensaio
O mtodo de radioimunoensaio (RIA) de
deteco de antgenos foi muito utilizado antes
do surgimento dos testes de ELISA. A diferena
bsica entre os dois mtodos reside no tipo de
marcao utilizada. Na RIA, utiliza-se um istopo radioativo em vez de enzima. O mtodo
muito sensvel e pode ser automatizado, porm
os equipamentos requeridos so caros. A principal restrio do teste refere-se ao uso de substncias radioativas e ao descarte dos reagentes.
Dessa forma, a tcnica encontra-se em desuso
progressivo.

68

2.3.5 Imunocromatografia
A imunocromatograa uma tcnica de
visualizao simples, geralmente realizada em
dispositivos plsticos, podendo ser executada em
clnicas e ambulatrios. A prova baseada na reao antgeno-anticorpo, em que a amostra suspeita (vrus ou antgenos virais) passada atravs de
um ltro e, ento, impregnada em uma membrana, onde reagir com o anticorpo especco previamente imobilizado. A presena do antgeno
revelada pelo aparecimento de focos ou bandas
coloridas, pois os reagentes so conjugados com
substncias cromgenas. O resultado depende
essencialmente da qualidade dos reagentes. Um
dos problemas do teste o seu custo elevado. Vrios testes diagnsticos so baseados nesse princpio (Captulo 11).

2.3.6 Aglutinao em ltex


O ensaio de aglutinao em ltex provavelmente seja o mtodo mais simples de deteco de
antgenos virais. O princpio da tcnica baseia-se
na mistura do material suspeito com anticorpos
previamente adsorvidos a partculas de ltex. A
presena do antgeno resultar na sua ligao
aos anticorpos e na aglutinao das partculas.
A leitura da reao visual e pode ser realizada
imediatamente aps a sua execuo. Esta tcnica
tem aceitao por pequenos laboratrios e entre
tcnicos de campo. As suas principais restries
referem-se baixa sensibilidade e especicidade.
Por isso, resultados falso-negativos so freqentes, a no ser que grandes quantidades de antgenos estejam presentes no material suspeito. A
resoluo dos problemas de sensibilidade e especicidade pode aumentar a sua aplicabilidade.

2.3.7 Imunodifuso em gar


O teste de IDGA foi desenvolvido para a
deteco de antgenos, porm tem sido mais utilizado para a deteco de anticorpos. A prova
baseada na precipitao de complexos antgenoanticorpos em gel de gar. O ensaio realizado
pela adio da amostra suspeita e do soro controle em orifcios em posies opostas em uma

Captulo 3

matriz de gar. As amostras difundem-se radialmente pelo gel e, ao se encontrarem, proporcionam a reao antgeno-anticorpo, seguida da insolubilizao e precipitao. A precipitao deste
complexo forma linhas opacas no gel (linhas de
precipitao), que podem ser visualizadas a olho
nu, com o auxlio de uma fonte de luz (ver Figura
11.9, no Captulo 11). A IDGA uma tcnica bastante difundida para a deteco de anticorpos,
porm sem muita aplicabilidade para a deteco
de antgenos ou partculas vricas.

2.3.8 Imunoblots
O princpio dos imunoblots semelhante ao
da IPX. Os antgenos virais so detectados pelo
uso de anticorpos marcados com enzimas, que
agem no substrato, provocando mudana de cor.
A diferena fundamental entre a IPX e os imunoblots que o material suspeito deve ser previamente solubilizado e imobilizado em um suporte
slido, geralmente membranas de nitrocelulose
ou nylon. A membrana , ento, incubada com
o anticorpo antiviral no-marcado (anticorpo primrio), seguido de lavagem e incubao com um
anticorpo antiespcie do anticorpo primrio (anticorpo secundrio) conjugado a uma enzima. A
presena do antgeno pesquisado revelada pela
adio do substrato, que muda de colorao pela
ao da enzima. Substratos que emitem luminosidade capturvel em lmes de raios X tambm
tm sido utilizados e aumentam a sensibilidade
da tcnica (Figura 3.6).
Existem duas variaes principais dos imunoblots: os dot/slot blots e o Western blot (WB). No
dot/slot blot, o homogenado de protenas diretamente imobilizado na membrana, em pontos
(dots) ou fendas (slots), seguida pela deteco com
os anticorpos. Essa variao da tcnica mais
simples e rpida, porm no fornece informaes acerca da massa da protena detectada. No
WB, as protenas solubilizadas so separadas por
eletroforese em um gel de poliacrilamida (SDSPAGE), transferidas para a membrana e, ento,
submetidas deteco com os anticorpos marcados. Essa tcnica permite a deteco da protena e
tambm a determinao de sua massa molecular,
pelo padro de migrao no gel.

69

Deteco, identificao e quantificao de vrus

Amostra positiva
Substrato
Anticorpo anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus (IgG)
Antgeno viral
Membrana

Amostra negativa

Removidos
pelas lavagens

Membrana

- + -

Figura 3.6. Western blot para a deteco de protenas


virais. Os antgenos so separados por eletroforese em
gel de poliacrilamida, transferidos e imobilizados em
uma membrana de nitrocelulose. A membrana
incubada com o anticorpo primrio (anti-antgeno) e
subseqentemente com o anticorpo secundrio
conjugado com a enzima peroxidase. A presena do
antgeno revelada pela ao da enzima no substrato
que resulta na marcao do filme de raios X no local
correspondente migrao da protena-alvo.

2.4 Deteco/identificao de cidos


nuclicos
As seqncias nicas de nucleotdeos do genoma dos vrus, associadas com tcnicas de amplicao e hibridizao de cidos nuclicos, proporcionaram o desenvolvimento de metodologias
para a deteco e identicao de agentes virais
em uma variedade de amostras. As tcnicas de
hibridizao e a reao em cadeia da polimerase
(PCR) tornaram-se muito teis para a deteco e
identicao de agentes virais e impulsionaram
os estudos da biologia molecular desses agentes.
A disponibilidade das seqncias genmicas dos
vrus em bancos de dados possibilitou a identicao de regies conservadas, viabilizando
a sntese de primers e de sondas, utilizadas nas
tcnicas de PCR e hibridizao, respectivamente.
A interpretao dos resultados dessas tcnicas,
principalmente quando utilizadas com ns diag-

nsticos, deve ser realizada com cautela. O resultado positivo pode no signicar necessariamente
a associao do agente suspeito com a doena em
questo. O material gentico de agentes que produzem infeces latentes, como os herpesvrus,
pode ser detectado sem que os agentes estejam,
necessariamente, associados com a enfermidade
em questo.
A deteco de cidos nuclicos possui aplicao especial para os vrus de difcil adaptao ao cultivo celular; casos em que o material
suspeito contenha pequenas quantidades do
agente, que esteja com viabilidade comprometida por problemas de conservao e em estudos
retrospectivos. Essas tcnicas tambm possuem
aplicaes importantes na deteco de infeces
latentes, quando o nico indicador da infeco
a presena do genoma do agente.

2.4.1 Tcnicas de hibridizao


(Southern/Northern blot)
A deteco de cidos nuclicos virais pelo
uso de sondas marcadas com istopos radioativos ou com enzimas tem sido muito utilizada em
Virologia, tanto em diagnstico como em pesquisa. A tcnica baseia-se na complementaridade
das molculas de DNA ou RNA. Inicialmente,
escolhe-se a regio-alvo do genoma a ser detectado, que deve ser um segmento conservado entre
isolados de campo. A sonda deve ser sintetizada
com base na seqncia de nucleotdeos da regio-alvo e deve ser exatamente complementar
a esta. Essa sonda pode ser um oligonucleotdeo
sinttico, um segmento de DNA inserido em um
plasmdeo ou um produto de PCR. A sonda ,
ento, conjugada com um istopo radioativo ou
com uma enzima, para possibilitar a sua deteco. O material suspeito imobilizado em uma
membrana, seguido pela incubao com a sonda
marcada e de lavagens para remover as sondas
no-ligadas. Na presena do cido nuclico do
vrus suspeito, a sonda ir hibridizar com a seqncia-alvo. A presena da sonda revela-se pela
exposio da membrana a um lme de raios X ou
pela adio de substrato (Figura 3.7).

70

Captulo 3

Filme de raios X
Amostra positiva

Amostra negativa

A
C
A
G
T
A

CA

Membrana

DNA/RNA viral

TG

Sonda marcada

CA

C CAT GACA
' 'G' T' A' C' 'T'G' T' T A T T
AT C G

Removidas
pelas lavagens

Radioatividade

Membrana

Figura 3.7. Tcnica de hibridizao de cidos nuclicos (dot blot). O material gentico do vrus extrado de tecidos e
imobilizado em reas de uma membrana. Posteriormente a membrana incubada com uma sonda com seqncia de
nucleotdeos complementar ao DNA do vrus, marcada com uma substncia radioativa. A presena do DNA viral
revelada pela marcao do filme de raios X pela emisso radioativa da sonda.

A tcnica de hibridizao possuiu variaes


de acordo com o cido nuclico a ser detectado
e com a forma como o material imobilizado
na membrana. Quando o cido nuclico (DNA,
RNA) imobilizado diretamente na membrana, a
tcnica denominada dot ou slot blot. A presena
do cido nuclico ser demonstrada pelo aparecimento de uma marca ou borro no local onde foi
aplicado o material. Porm, se o material for previamente submetido eletroforese, para a separao das molculas de cido nuclico de acordo
com o tamanho, e ento transferido para a membrana, a tcnica denomina-se Southern blot (para
DNA) ou Northern blot (para RNA). A reao positiva aparece na forma de bandas marcadas na
membrana, correspondentes migrao do cido
nuclico durante a eletroforese. Em razo da necessidade da eletroforese e transferncia para a
membrana, as tcnicas de Southern e Northern blot
so mais trabalhosas e demoradas, porm os resultados so mais informativos.
As tcnicas de hibridizao possuem boa
sensibilidade e especicidade, e, quando implementadas na rotina do laboratrio, permitem a
obteno dos resultados em poucos dias. Outra
vantagem que podem ser aplicadas a qualquer
agente infeccioso, necessitando-se apenas de uma
sonda especca. As restries dessas tcnicas referem-se necessidade de pessoal especializado
e disponibilidade de reagentes.

2.4.2 Hibridizao in situ


A hibridizao in situ (ISH) detecta a presena do material gentico do agente (DNA ou RNA)
diretamente em cortes histolgicos de tecidos.

Essa metodologia tem sido amplamente utilizada


para a localizao espacial e temporal da presena e expresso de determinados genes. Tambm
utilizada na identicao de agentes causadores
de tumores. O princpio da tcnica o mesmo da
anterior, porm o cido nuclico detectado diretamente nos cortes de tecido. A reao revelada pelo uso de sondas marcadas com substncias
radioativas ou com protenas que so, posteriormente, detectadas com o auxlio de anticorpos.
As reaes positivas podem ser visualizadas pela
exposio a lmes radiogrcos lquidos ou com
uso de substncias cromgenas, permitindo a localizao e identicao das clulas infectadas.
Devido ao fato de ser trabalhosa e demorada, a
ISH no utilizada na rotina laboratorial, sendo
empregada em casos especcos, principalmente
em estudos de patogenia.

2.4.3 Reao da polimerase em cadeia


A reao da polimerase em cadeia (PCR)
uma tcnica altamente especca e sensvel, que
consiste na sntese in vitro de uma grande quantidade de cpias de um segmento de DNA existente na amostra. Ou seja, consiste em amplicar
o nmero de molculas a partir de uma molcula-alvo original, denominada template ou molde.
Essa amplicao pode ser realizada a partir de
uma quantidade mnima do cido nuclico-alvo;
uma PCR bem padronizada, teoricamente, capaz de detectar e amplicar at uma nica cpia
do molde existente na amostra.
A regio-alvo a ser amplicada delimitada
por primers, que so oligonucleotdeos sintticos
de aproximadamente 20 nucleotdeos. Esses pri-

71

Deteco, identificao e quantificao de vrus

mers hibridizam com suas regies complementares, que se localizam nas cadeias opostas do
DNA, nas regies anqueadoras da seqnciaalvo. Os primers so sintetizados de acordo com a
seqncia a ser amplicada, e a sua especicidade
depende do seu grau de conservao e complementaridade com a seqncia-alvo. A reao de
PCR envolve a realizao de vrios ciclos (entre
30 e 40) de desnaturao (separao da ta dupla), hibridizao dos primers e polimerizao da
cadeia de DNA a partir dos primers, pela enzima
DNA polimerase. A cada ciclo o nmero de mo-

lculas correspondentes seqncia-alvo duplica


e, no nal da reao, acumulam-se milhes de cpias idnticas correspondentes seqncia-alvo
inicial. Essas molculas, denominadas genericamente de produtos de PCR (ou amplicons), podem, ento, ser detectadas visualmente em gis
de agarose, corados com brometo de etdio, sob
luz UV (Figura 3.8). Os produtos de PCR podem
tambm ter a sua identidade conrmada por hibridizao com sondas especcas. Essa tcnica
tem tido inmeros usos nos diversos campos da
Biologia e Medicina.

Seqncia-alvo
Molcula de DNA

270pb

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Denaturao (95C)
'''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primer 2

Reduz a
temperatura
1 ciclo

Primer 1
'''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

50-60C

Eleva a
temperatura
72C

Eleva a
temperatura

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Anelamento
dos primers

Polimerizao

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

O nmero de cpias
duplica a cada ciclo

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

30 ciclos

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Gel de agarose

250pb

Figura 3.8. Ilustrao demonstrativa da tcnica de reao em cadeia da polimerase (PCR). A partir da molcula molde
original (genoma viral), um segmento especfico amplificado por sucessivas etapas de sntese de DNA. O produto
da amplificao pode ser visualizado sob luz UV em um gel de agarose corado com brometo de etdio, aps migrao
por eletroforese. O tamanho dos produtos pode ser comparado com um marcador molecular de massa conhecida. (M)
marcador molecular, (1) controle negativo, (2) controle positivo, (3, 4 e 5) amostras teste.

72

Captulo 3

A grande difuso da PCR somente foi possvel aps a identicao de uma enzima polimerase de DNA resistente ao calor (Taq Thermophilis
aquatics), o que levou simplicao da tcnica
associado com o desenvolvimento de equipamentos cada vez mais acessveis. Essas novas tecnologias proporcionaram um domnio maior da
tcnica e o desenvolvimento de variaes, como
a nested-PCR, multiplex-PCR, RT-PCR e real-time
PCR.
A nested-PCR realizada em duas etapas. Na
primeira etapa, um determinado segmento amplicado pelo mtodo tradicional. Uma segunda
etapa , ento, realizada, utilizando-se o produto
da primeira reao como molde e um outro conjunto de primers, complementares s seqncias
localizadas internamente no produto da primeira
reao. Com isso, uma seqncia interna do primeiro produto reamplicada (Figura 3.9).
Seqncia-alvo 1
DNA molde
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Primer 1

Primer 2

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Primeira
reao

30 ciclos

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Produtos da
primeira
'''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''' reao

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Seqncia-alvo 2
DNA molde
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Primer 3

Primer 4

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Segunda
reao

30 ciclos

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Produtos da
segunda
' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' reao

''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''

Figura 3.9. A reao de PCR-nested realizada em duas


etapas. Na primeira etapa, utilizado um par de primers
externos (1 e 2), que permitem a amplificao de um
segmento do genoma viral (seqncia-alvo 1). A segunda
etapa utiliza o produto da primeira reao como molde.
Esta utiliza um par de primers internos (3 e 4), que
permitem a amplificao de um segmento interno
seqncia inicial (seqncia-alvo 2). O PCR- nested
utilizado para aumentar a sensibilidade e especificidade
da amplificao.

Em relao PCR tradicional, a nested-PCR


possui as vantagens de maior sensibilidade (duas
etapas de amplicao) e especicidade. Uma variao dessa tcnica o semi-nested PCR, em que,
na segunda reao, utiliza-se um primer interno
e em conjunto com um dos primers da primeira
reao.
O mtodo da multiplex-PCR baseia-se na utilizao de dois ou mais pares de primers na mesma reao. Cada conjunto de primer especco
para uma regio do agente ou de diferentes agentes. Devido a sua versatilidade, essa tcnica utilizada para a busca de variantes do mesmo vrus
ou no diagnstico de enfermidades que podem
ser causadas por diferentes agentes. Um exemplo
o diagnstico de aborto em bovinos, quando
realizada uma reao com diferentes pares de primers, cada conjunto sendo especco para um dos
agentes suspeitos.
A tcnica de RT-PCR (reverse transcriptase
PCR) consiste na amplicao de segmentos de
RNA. Atravs da transcrio reversa, realizada
pela ao da enzima transcriptase reversa, uma
cpia de DNA complementar (cDNA) sintetizada a partir da RNA viral (genoma ou produto
intermedirio do processo de replicao). Essa
nova molcula sintetizada ser usada como template (molde) para a reao de PCR convencional.
O desenvolvimento desta tcnica proporcionou
um grande avano no estudo e diagnstico dos
vrus RNA.
O PCR em tempo real (real time PCR) uma
variao do PCR, com a capacidade de se detectar e quanticar a amplicao do produto medida que vai sendo sintetizado. Essa tcnica utiliza, alm dos primers, uma sonda marcada com
um uorocromo. A sonda complementar a uma
regio interna do produto e marcada com uma
substncia uorognica. A cada ciclo de sntese,
o uorocromo liberado da sonda e essa liberao captada e medida na forma de intensidade
luminosa. Esta tcnica tem grande aplicabilidade
quando a quanticao do cido nuclico presente na amostra necessria. Tambm possui
aplicabilidade em diagnstico de viroses de importncia sanitria estratgica (exemplos: febre
aftosa e peste suna clssica), pois permite a obteno dos resultados em poucas horas.

73

Deteco, identificao e quantificao de vrus

2.4.5 Anlise de restrio


Diferentes isolados de vrus podem ser
identicados e distinguidos entre si pela anlise
dos fragmentos gerados pela clivagem de seus
genomas por enzimas de restrio (endonucleases, Figura 3.10). Essas enzimas clivam o DNA
em seqncias especcas, compostas por quatro
a oito bases; a alterao em uma dessas bases alGenoma BoHV - 1 135.301bp

Genoma BoHV - 5 138.390bp

Stios de clivagem da enzima BamHI

tera o stio e resulta em falha de clivagem. Assim,


o genoma de um determinado vrus DNA clivado com um conjunto de enzimas, produzindo
um conjunto de fragmentos de determinados tamanhos. Outros isolados do vrus que possuam
diferenas em quaisquer dos stios de clivagem
iro gerar padres de clivagem distintos, podendo-se, assim, fazer a diferenciao entre isolados. A anlise por restrio enzimtica (REA) foi
muito utilizada na classicao e caracterizao
de isolados de campo. Atualmente, o advento e
difuso do seqenciamento de DNA substituiu,
com algumas vantagens, essa tcnica, que se encontra restrita a alguns vrus ou em desuso.

2.4.4 Eletroforese em gel de


poliacrilamida
9 locais de clivagem

16 locais de clivagem

DNA viral genmico


Enzima de restrio BamHI =
Digesto do genoma em fragmentos

BoHV - 5

BoHV - 1

Eletroforese em agarose

Figura 3.10. Ilustrao demonstrativa da anlise de


restrio do genoma do herpesvrus bovino. A enzima
BamHI reconhece e cliva o genoma do herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) em nove stios (A) e o genoma
do BoHV-5 em 16 locais (B). Os produtos da digesto so
separados por eletroforese em agarose e visualizados
sob luz UV. Os diferentes padres de clivagem resultam
em fragmentos de tamanho diferentes, cuja anlise
comparativa permite a identificao dos respectivos
genomas. No exemplo acima, os locais de clivagem e o
tamanho dos fragmentos so meramente ilustrativos.

A tcnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), alm de ser usada para separao de protenas nos passos iniciais do WB,
tambm utilizada para a deteco do genoma
e em estudos epidemiolgicos de rotavrus, cujo
genoma composto por vrios segmentos de
RNA. Uma caracterstica dos rotavrus a presena de sorogrupos (ver Captulo 30), que so
correlacionados com diferenas na extenso desses segmentos. Essas diferenas iro produzir um
padro de migrao na eletroforese, e isso ser
utilizado para a identicao do agente e classicao em sorogrupos. A metodologia consiste
na extrao do RNA a partir de fezes, separao dos fragmentos por SDS-PAGE e colorao
do gel com nitrato de prata. Aps a realizao
desse procedimento, as bandas correspondentes
aos segmentos genmicos so analisadas, e os
padres de migrao dos segmentos so comparados. O SDS-PAGE possui boa sensibilidade
e especicidade quando comparado com outras
tcnicas de deteco dos rotavrus.

3 Multiplicao de vrus
A obteno de vrus em grandes quantidades essencial para diversos procedimentos virolgicos. Aps o seu isolamento, o vrus deve ser
identicado e caracterizado. Para isso, deve ser
amplicado a partir da amostra original. Quantidades considerveis de vrus so necessrias

74

Vrios vrus de aves e alguns de mamferos


replicam com ecincia em tecidos de embrio de
galinha. A habilidade desses vrus em se multiplicar nesse sistema biolgico tem sido utilizada
para a multiplicao de vrus em laboratrio, seja
para a deteco de vrus em material clnico, seja
para a amplicao de vrus. Essa metodologia
teve grande difuso antes do desenvolvimento
e estabelecimento dos cultivos celulares, porm,
nos dias atuais, est limitada a poucos vrus,
principalmente queles que no replicam em cultivos.
O material pode ser inoculado por vrias
vias, dependendo do agente suspeito (Figura
3.11). A presena do agente pode ser evidenciada pelo desenvolvimento de leses macro e microscpicas caractersticas no embrio e/ou nas
membranas vitelnicas (Tabela 3.2). Tambm se
pode observar retardo no desenvolvimento e
morte do embrio. A presena do agente e a sua
quanticao tambm pode ser detectada pela
pesquisa da atividade biolgica do agente (HA),
de antgenos (IFI) ou de cidos nuclicos virais
(hibridizao, PCR).
Cavidade
amnitica

Embrio

Casca

|
||

||

||

||

||

||

||

||

||

||

||

||

Albumina

||

||

||

||

||

||

||

||

||

||

||

Saco da gema

|||||||||||||||||||||||||||

||

Durante muitos anos, a reproduo da doena em animais se constituiu na forma mais objetiva de deteco de vrus em material suspeito.
A inoculao de animais tambm serviu para a
amplicao do agente para diversos ns, entre
eles a produo de vacinas. Os fatores limitantes
para esse procedimento incluem o custo elevado
de manuteno, a imunidade prvia dos animais
ao agente e a baixa reprodutibilidade da enfermidade. Nos ltimos anos, questes ticas referentes ao uso experimental de animais somaram-se a
essas restries.
No princpio do sculo, os bovinos eram
inoculados com o vrus da febre aftosa (FMDV)
no epitlio lingual. Aps o desenvolvimento de
vesculas, o uido era coletado, inativado e utilizado para a produo de vacinas. A utilizao
de extratos de crebro de camundongos infectados com o vrus da raiva (RabV), para a produo
de vacinas, outro exemplo da inoculao em
animais. Com o desenvolvimento dos cultivos
celulares, essa metodologia deixou de ser utilizada. Atualmente, a multiplicao de vrus pela
inoculao de animais possui uso muito restrito,
dentre os quais se destacam a prova biolgica
para o diagnstico da raiva em camundongos
lactentes (Captulo 11). A inoculao de camun-

3.2 Inoculao em ovos embrionados

||

3.1 Inoculao em animais susceptveis

dongos lactentes ocasionalmente utilizada para


o diagnstico do FMDV. Para alguns vrus que
no replicam ecientemente em cultivo celular,
como o vrus da peste suna africana (ASFV), a
inoculao de animais, para se obter altos ttulos
do vrus, empregada.

||

para a realizao de testes sorolgicos (soro-neutralizao SN, HI), produo de antgenos para
a imunizao de animais (obteno de anti-soros
ou anticorpos monoclonais) ou para uso como
imungenos em vacinas. A reproduo da manifestao clnica de uma enfermidade, sob condies experimentais, tambm requer altos ttulos
do vrus. Em resumo, a rotina de um laboratrio de virologia envolve necessariamente etapas
repetidas e contnuas de multiplicao de vrus
com nalidades diversas. Como os vrus necessitam clulas vivas para se multiplicar, sistemas
biolgicos so utilizados com esse propsito.
Trs sistemas biolgicos tm sido classicamente
utilizados para a multiplicao de vrus: animais
susceptveis, ovos embrionados de galinha (OE)
e cultivos celulares.

Captulo 3

||

||

||

||

Cavidade
alantide
||

||

||

||

||

||

||

||

Membrana
crio-alantide

Figura 3.11. Vias de inoculao de vrus em ovos


embrionados.

75

Deteco, identificao e quantificao de vrus

Tabela 3.2. Vrus animais que replicam em embries de pinto e efeitos da replicao
Via de inoculao

Leso/conseqncia
Focos esbranquiados (pocks)
na membrana, morte do embrio

10-11 dias

Membrana corioalantide

Vrus da estomatite
vesicular (VSV)

7 dias

Membrana corioalantide ou
cavidade alantide

Lumpy skin vrus (LSDV)

7 dias

Membrana corioalantide

Influenza eqina

10-11 dias

Cavidade alantide

Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)

10-11 dias

Qualquer via

Morte do embrio

OVINOS

Idade do embrio

Vrus da lngua azul


(BTV)

9-11 dias

Intravenosa

Morte do embrio

SUNO

Vrus

Vrus da doena de
Aujeszky (PRV)

10 dias

Membrana corioalantide

Raiva (RabV)

7 dias

Gema

Newcastle (NDV)

9-11 dias

Membrana corioalantide ou
cavidade alantide

Morte do embrio

Influenza aviria (AIV)

9-11 dias

Cavidade alantide

Morte do embrio

AVES

CANINOS e
FELINOS

EQINO

BOVINO

Varola bovina

3.3 Inoculao em cultivo celular


A deteco e identicao de vrus em amostras clnicas, aps a sua multiplicao em cultivo
celular, constituram-se em uma das primeiras
formas de deteco viral. O advento dos antibiticos contribuiu de forma decisiva para o desenvolvimento da Virologia, pois somente a partir
da foi possvel estabelecer cultivos celulares em
grande escala. A propagao do agente em cultivo celular permite que quantidades mnimas
de partculas vricas viveis sejam detectadas,
amplicadas e, posteriormente, caracterizadas.
Para os vrus que replicam bem em clulas de
cultivo, esse sistema biolgico possui aplicaes
virtualmente ilimitadas, incluindo: a) isolamento
e identicao com ns diagnsticos; b) obteno
de estoques virais para caracterizao biolgica
e molecular; c) uso em testes sorolgicos; d) produo de estoques virais para estudos de patogenia; e) produo de antgeno para a imunizao
de animais (produo de anti-soro ou anticorpos
monoclonais); f) produo de vacinas, entre outros.

Morte do embrio
Pocks na membrana crio -alantide.
-

Leses na membrana
corioalantide, invaso do sistema
nervoso central, e protuso cerebral
do embrio, morte do embrio.
Retardo do crescimento, distrofia
muscular, encefalomalcia

O isolamento em cultivo celular considerado a prova ouro (golden standard) em diagnstico


virolgico, sendo utilizada como padro de comparao com qualquer outro mtodo. Esse mtodo tambm capaz de detectar amostras ocasionais de vrus em material clnico. Vrios agentes
virais conhecidos resultaram de achados acidentais em cultivo de clulas, entre estes o circovrus suno (PCV-1) e o vrus smio 40 (SV-40). Os
cultivos celulares ainda se constituem na forma
mais simples e econmica de obteno de grandes quantidades de vrus vivel para a pesquisa
e produo de vacinas.
Devido ao fato de nenhuma linhagem celular ser susceptvel a todos os vrus, muitos laboratrios mantm cultivos celulares susceptveis
a diferentes agentes. A escolha de um tipo celular para o isolamento ou multiplicao do vrus
est, muitas vezes, associada com a espcie de
origem do material e com o histrico clnico da
enfermidade. Geralmente, so utilizadas clulas
originrias da espcie animal de origem do vrus.
No entanto, isso no regra, pois existem vrios
vrus que replicam em clulas de cultivos de ou-

76

tras espcies. Por exemplo, o FMDV cultivado


em clulas de rim de hamster (BHK-21); o vrus
da sndrome reprodutiva e respiratria dos sunos (PRRSV) cultivado em clulas de rim de
macacos (MA-104); e o herpesvrus eqino (EHV)
cultivado em clulas de rim de coelhos (RK-13)
ou em clulas de rim de macaco-verde africano
(Vero).
Basicamente existem dois tipos principais
de cultivos celulares: cultivos primrios e as linhagens contnuas. Cada um desses tipos apresenta vantagens e restries. Os cultivos primrios
originam-se da remoo de um rgo fresco de
um embrio ou feto recm-sacricado. O rgo
removido submetido a um processo mecnico e
enzimtico para fracionamento do tecido e individualizao das clulas. As clulas individualizadas so cultivadas em frascos ou garrafas, onde
iro aderir e formar uma monocamada. O cultivo
realizado com meio nutritivo e promotores de
crescimento, a temperatura de incubao de
37C. Nesse processo, a diviso celular bastante restrita, com uma propagao lenta e limitada,
podendo-se dizer que ocorre uma diviso celular
a cada 24 horas. Assim, necessria a realizao
de subcultivos peridicos, e isso realizado atravs da individualizao da monocamada pela
ao enzimtica, ressuspenso e semeadura em
novos frascos de cultivo. Nesses novos cultivos,
o nmero celular ir duplicar ou quadruplicar
em poucos dias. Aps um nmero varivel de
subcultivos (10 a 30 passagens, dependendo do
tipo celular), as clulas comeam a apresentar taxas reduzidas de multiplicao e, eventualmente, cessam a multiplicao. Os cultivos primrios
so os preferidos para a realizao da multiplicao viral, pois possuem caractersticas morfolgicas e siolgicas bastante semelhante s clulas dos rgos originais. Sendo assim, possuem
uma maior sensibilidade para a infeco viral. A
restrio que esse tipo de cultivo apresenta o
nmero limitado de subcultivos, gerando necessidade de preparao contnua nos laboratrios
com alta demanda celular.
As linhagens celulares ou linhagens contnuas
so derivadas de clulas tumorais ou de tecidos
normais que sofreram transformao in vitro. Esses tipos de cultivos celulares so cultivados de
maneira semelhante aos cultivos primrios e pos-

Captulo 3

suem capacidade de multiplicao quase indenida. Por estarem bem adaptadas s condies do
cultivo, so de fcil manipulao e propagao.
A maioria dos laboratrios d preferncia a esse
tipo de cultivo celular devido sua uniformidade,
estabilidade e facilidade de manuseio. Por causa
dessa alta taxa de propagao em laboratrio, as
linhas celulares podem sofrer alteraes morfolgicas e siolgicas que alteram a sensibilidade
infeco viral. No entanto, a sensibilidade infeco com alguns vrus pode ser inferior nas linhagens celulares em comparao com os cultivos
primrios, mas as vantagens citadas acima compensam este aspecto. Linhagens celulares podem
ser obtidas pela transferncia entre laboratrios
ou pela aquisio junto a bancos depositrios.
Diversas linhagens celulares so utilizadas
rotineiramente em laboratrios de virologia em
atividades de diagnstico e pesquisa. O nome
dessas linhagens geralmente est relacionado
com o rgo de origem e freqentemente contm
as letras iniciais do nome do descobridor ou outra caracterstica marcante. Alguns exemplos de
linhagens celulares comumente utilizadas em Virologia Veterinria so: MDBK (Madin-Darby bovine kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney),
CRFK (Crandell feline kidney), CRIB (cell resistant
to infection with bovine viral diarrhea vrus), RK13
(rabbit kidney), PK15 (porcine kidney 15), SK6 (swine kidney), BHK-21 (baby hamster kidney clone 21),
IBRS2 (Instituto Biolgico rim de suno clone 2), clulas Vero, entre outras.
Existem ainda cultivos de clulas que se
multiplicam em suspenso, ou seja, no necessitam de uma superfcie de contato para adeso e
multiplicao. Uma grande vantagem desse tipo
de cultivo a concentrao do nmero de clulas,
reduzindo a relao do nmero de clulas, tamanho do frasco e volume de meio utilizado. Essa
uma caracterstica desejvel e amplamente utilizada para a produo de vacinas. Clulas BHK-21
que se multiplicam em suspenso so utilizadas
para a multiplicao e produo de estoques do
RabV e o FMDV para uso em vacinas.
Alguns vrus no replicam ecientemente
em clulas de cultivo, assim, a sua amplicao
requer o uso de outro sistema biolgico, como
animais susceptveis (animais de laboratrio ou
os hospedeiros naturais) ou ovos embrionados.

77

Deteco, identificao e quantificao de vrus

Outros vrus no replicam em quaisquer dos sistemas biolgicos utilizados atualmente, como os
papilomavrus, vrus da hepatite C de humanos
e os vrus causador da hepatite B (famlia Hepadnaviridae).
O processamento de amostras que potencialmente contenham vrus deve ser realizado
rapidamente e seguir algumas regras para aumentar a probabilidade de deteco e multiplicao do agente. Para o diagnstico, as amostras
devem ser inoculadas em cultivos celulares o
mais brevemente possvel. A inoculao consiste
na deposio do material suspeito sobre as monocamadas, seguido de incubao por 1 a 2 horas
(perodo de adsoro). Posteriormente, o incu-

lo desprezado, e a monocamada lavada para


remover ou reduzir a presena de substncias
txicas e/ou contaminao bacteriana e fngica.
Aps, o meio de cultivo reposto, e as clulas so
incubadas a 37C, com uma atmosfera de 5% de
CO2. As monocamadas devem ser observadas
diariamente para a presena de alteraes morfolgicas celulares associadas com a replicao
viral (Figura 3.12). Essas alteraes, conseqncias do processo replicativo dos vrus, so denominadas genericamente de efeito citoptico (ECP
cytopathic effect). Uma grande parcela dos vrus
produz alteraes morfolgicas nos cultivos celulares, que, muitas vezes, so caractersticas de um
determinado agente ou grupo de vrus. As altera-

Figura 3.12. Efeito citoptico produzido pela replicao viral em clulas de cultivo. Clulas de linhagem de rim
bovino no-infectadas (A) ou inoculadas com o BoHV-1 (B); BVDV (C); BoHV-2 (D); enterovrus bovino (E); e PI-3v
(F). Pode-se observar diferentes tipos de efeito citoptico. Para descrio detalhada ver tabela 3.3.

78

Captulo 3

es freqentemente produzidas pelos vrus so


vacuolizao citoplasmtica, formao de clulas
gigantes multinucleadas (sinccios) e arredondamento celular entre outros. Na Tabela 3.3, esto

descritos os efeitos citopticos produzidos pelos


principais vrus de interesse veterinrio.
A visualizao dessas alteraes ao microscpio ptico apenas um indicativo da presena

Tabela 3.3. Principais vrus animais, clulas susceptveis para replicao in vitro e efeito citoptico

Bovinos

Vrus

Tipo celular

Efeito citoptico

Adenovrus bovino
(BAdV)

Clulas de origem renal ou


primrias de testculos de bovinos.

Arredondamento e desprendimento celular, formao


de focos infecciosos como cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.

Vrus da diarria viral


bovina (BVDV)

MDBK, SK-6, PK15, BT, cultivos


primrios de pulmo, corneto nasal,
rim e testculo de bovino.

Vacuolizao citoplasmtica, degenerao celular,


enrugamento do tapete, desprendimento e lise celular
(somente as amostras citopatognicas).

Herpevrus bovino tipos


1 e 5 (BoHV 1 e 5)

MDBK, CRIB, HeLA, BT, EBTr e


cultivos primrios de pulmo, corneto
nasal, rim e testculo de bovino.

Desorganizao nuclear, arredondamento e


desprendimento celular; formao de focos
infecciosos com o aspecto de cachos de uva, lise.
Corpsculos intranucleares.

Parainfluenza bovina
tipo 3 (bPI-3)

MDBK, BT, HELA e cultivos primrios


de corneto nasal e de rim de
bovino.

Arredondamento, citomegalia e refringncia celular, formao


de grandes sinccios, desprendimento das clulas.
Corpsculos intracitoplasmticos.

Vrus respiratrio
sincicial bovino (BRSV)

MDBK, BT, cultivos primrios de


clulas do trato respiratrio de
bovinos.

Arredondamento e refringncia celular, formao de


pequenos sinccios e desprendimento das clulas.
Corpsculos acidoflicos intracitoplasmticos.

Rotavrus bovino
(BRV)

CV-1, VERO, MA-104, BSC-1,


Aubek, MDBK

Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e


desprendimento celular. Corpsculos
intracitoplasmticos.

Coronavrus bovino
(BCoV)

VERO, HRT-18, cultivos primrios de


rim de bovino.

Formao de sinccios.

Parvovrus bovino
(BPV)

MDBK, EBTr, BT e cultivos primrios


de rim de feto bovino.

Citomegalia e refringncia celular, arredondamento e


desprendimento.

Virus da mamilite
herptica (BoHV-2)

MDBK, CRIB e cultivos primrios de


origem bovina.

Arredondamento celular, sinccios multinucleares.


Corpsculos eosinoflicos intranucleares.

Vrus da leucose
bovina (BLV)

Cultivo primrio de bao e pulmo


bovino e clulas embrionrias
diplides de humanos.

Formao de sinccios.

Vrus da febre aftosa


(FMDV)

BHK-21, IB-RS-2 cultivos primrios de


tireide bovina, cultivos primrios de
rim de suno, bovino ou cordeiro.

Condensao nuclear, arredondamento,


desprendimento e lise celular.

Vrus da estomatite
vesicular (VSV)

VERO, BHK-21 ou IB-RS2.

Arredondamento, retrao e desprendimento celular,


lise.

Vrus da estomatite
papular (BPSV)

BT, cultivo de rim de fetos bovinos.

Arredondamento, agregao, lise celular.


Corspsculos intracitoplasmticos.

Vrus da varola e
pseudovarola bovina

Cultivos primrios de clulas de


testculo bovino.

Formao de sinccios. Corpsculos intracitoplasmticos.

Rinderpest (RPV)

VERO ou cultivos primrios de


rim de terneiros.

Arredondamento e refringncia celular, seguido


de retrao com alongamentos citoplasmticos
pontes e formao de sncicios. Corpsculos
intracitoplasmticos.

Vrus da doena Lumpy Skin LT ou cultivos primrios de origem


(LSDV)
bovina, caprina ou ovina
(preferencialmente de raas
lanferas).

Arredondamento e retrao da membrana celular


e marginalizao da cromatina nuclear.
Corpsculos intracitoplasmticos.

Vrus da febre do vale


Rift (RVFV)

VERO, BHK-21, CER e cultivos


primrios de rim de terneiro e cordeiro.

Arredondamento e rpida lise celular.

Vrus da febre catarral


maligna (MCFV)

Cultivos primrios de clulas de


rim, bao, tireide, pulmo,
testculo e plexo coride de fetos
ovinos ou bovinos.

Sinccios grandes,
contrao, arredondamento e desprendimento
celular da monocamada. Corpsculos
intranucleares.

79

Deteco, identificao e quantificao de vrus

Sunos

Eqinos

Ovinos e caprinos

Tabela 3.3. Continuao.

Vrus

Tipo celular

Efeito citoptico

Lngua azul (BTV)

BHK-21, VERO

Arredondamento celular, fuso.

Ectima contagioso
(ORFV)

HeLa, VERO, cultivos primrios


de rim e testculo ovino e bovino;
fibroblastos de galinhas e patos.

Arredondamento celular, aglomerao e desprendimento


celular. Corpsculos de incluso intracitoplasmticos
eosinoflicos.

Artrite e encefalite
caprina (CAEV)

Clulas da membrana sinovial de


fetos caprinos e cultivos primrios
de testculos de caprinos.

Formao de sinccios.

Pneumonia progressiva
dos ovinos Maedi-Visna
(OPPV)

Cultivos de pulmo fetal, de clulas


do plexo coride de ovino ou de
leuccitos sangneos perifricos.

Formao de sinccios e degenerao celular.

Poxvrus ovino e
caprino

Cultivos primrios de testculo


de cordeiro.

Vacuolizao nuclear. Corpsculos


intracitoplasmticos eosinoflicos.

Peste dos
pequenos
ruminantes (PPRV)

VERO e cultivo primrio de rim


de cordeiro

Arredondamento, agregao celular e formao de


sncicio com o ncleo na forma circular. Vacuolizao
de algumas clulas. Corpsculo de incluso
intracitoplasmticos e intranucleares.

Herpesvrus eqino
(EHV 1, 2, 3 e 4)

VERO, ED, RK-13, MDBK, BHK-21


e cultivos primrios de rim eqino e
fibroblastos da derme eqina.

Desorganizao nuclear, arredondamento e


desprendimento celular; formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.

Anemia infecciosa
eqina (EIAV)

ED, PBMC eqino, fibroblastos


de derme eqina.

Formao de sinccios somente em leuccitos.

Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)

VERO, RK-13, BHK-21 e cultivos de


fibroblastos de embrio de
galinhas e patos.

Lise celular

Arterite viral eqina


(EAV)

RK-13, VERO, LLC-MK2 e cultivos


primrios de clulas de macaco,
coelho e eqino.

Desprendimento celular do tapete, lise

Influenza eqina (EIV)

MDCK

Arredondamento, desprendimento celular

Doena de Aujeszky
(PRV ou SuHV-1)

PK-15, SK6, MDBK, cultivos


primrios de origem suna.

Desorganizao nuclear, arredondamento e


desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.

Adenovrus suno

Cultivos primrios de rim suno,


PK-15 e SK6.

Citomegalia e arredondamento celular,


desprendimento das clulas da monocamada.
Copsculos intranucleares.

Peste suna clssica


(CSFV)

SK6, PK-15.

.A maioria dos isolados no causa citopatologia

Sndrome respiratria
e reprodutiva suna
(PRRSV)

MARC-145, MA-104 e clulas de


origem de smios.

Aumento de tamanho, arredondamento e


agregao celular, lise.

Enterovrus suno
(PEV)

PK-15, IB-RS-2, SST e cultivos


de clulas de rim e testculos
de sunos.

Lise e desprendimento celular,


destruio da monocamada.

Parvovrus suno
(PPV)

Cultivos primrios de rim suno,


ST, PK-15 e SK6.

Arredondamento celular e picnose.


Corpsculos intranucleares.

80

Captulo 3

Galinhas e Outras Aves

Caninos e Felinos

Tabela 3.3. Continuao.

Vrus

Tipo celular

Efeito citoptico

Parvovrus
canino (CPV)

CRFK, MDCK, A-72 e


cultivos primrios de clulas de rim
e pulmo de canino e felino.

Aumento do ncleo, enrugamento da membrana


celular, arredondamento das clulas, lise.

Coronavrus
canino (CCoV)

CRFK, A-72 e cultivos de rim, timo


e sinvia de canino.

Formao de sinccios.

Rotavrus
canino

MA-104, A-72, CRFK e cultivos


primrios de rim de canino.

Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e


desprendimento celular. Corpsculos
intracitoplasmticos.

Herpesvrus
canino (CaHV)

MDCK e cultivos primrios


de rim de canino.

Desorganizao nuclear, arredondamento e


desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.

Vrus da cinomose
(CDV)

VERO, MDCK e PBMC de


caninos e furo.

Formao de sinccios, desprendimento celular


do tapete, incluses intracitoplasmticas.

Adenovrus canino
(CAdV)

MDCK, cultivos primrios de


testculo ou rim de canino e felino.

Arredondamento e desprendimento celular,


lise e destruio do tapete. Corpsculos intranucleares.

Vrus da raiva (RabV)

CV-1, BHK-21, VERO, HeLa e cultivos


de fibroblastos de embrio de galinhas.

Arredondamento e desprendimento celular.


Corpsculos intracitoplasmticos.

Calicivrus felino
(FCV)

CRFK, FCWF-4, Fe3TG, VERO


e fibroblastos felinos.

Arredondamento e desprendimento celular,


lise e destruio do tapete.

Vrus da rinotraquete
felina (FeHV)

CRFK e cultivos primrios de pulmo,


rim e testculo de felino.

Desorganizao nuclear, arredondamento,


desprendimento celular e formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.

Vrus da peritonite
infecciosa felina
(FeCoV)

CRFK, A-72, FeWF e cultivos primrios


de tecidos fetais de felinos.

Arredondamento e desprendimento celular.

Vrus da panleucopnia
felina (FPLV)

CRFK e Fe3TG.

Arredondamento e aumento da refringncia


das clulas.

Vrus da imunodeficincia felina


(FIV)

PBMC felino.

Formao de sinccios.

Doena
de Newcastle (NDV)

Cultivos primrios de rim de embrio


de galinhas, cultivos primrios de
fibroblastos de galinhas e BHK-21.

Formao de sinccios, morte celular.

Doena de
Gumboro (IBDV)

Cultivos primrios de clulas da


bursa, rim e fibroblastos de
embrio de galinha.

.Efeito pouco discernvel

Vrus da laringotraquete aviria


(ILTV)

CEK e cultivos de rim, fgado e


pulmo de galinhas.

Citomegalia, formao de sinccios.

Vrus da anemia
aviria (CAV)

MDCC-MSB1.

Citomegalia, lise celular.

Vrus da doena
de Marek (MDV)

CK e fibroblastos de embrio
de galinhas ou patos.

Desorganizao nuclear, arredondamento e


desprendimento celular. Corpsculos intranucleares.

Poxvrus avirio

QT-35, cultivos primrios de rim ou


derme de embrio de galinha.

Arrendondamento, refringncia celular e


desprendimento.

de um agente viral na amostra suspeita. Alguns


vrus possuem a capacidade de infectar cultivos
celulares de diversas origens, como o vrus da
lngua azul (BTV), que infecta clulas de mamferos e insetos e variaes do efeito citoptico po-

dem ser observadas. No entanto, a ausncia de


alteraes no indica necessariamente a ausncia
de vrus. Alguns vrus infectam as clulas sem
causar ECP e so denominados de no-citopticos, como o caso do circovrus suno (PCV-2).

81

Deteco, identificao e quantificao de vrus

Outro exemplo o vrus da diarria viral bovina


(BVDV), que possui amostras citopatognicas e
no-citopatognicas (Captulo 22). A conrmao e identicao do agente so, geralmente,
realizadas por mtodos que detectam alguma atividade biolgica (HA ou HAD), antgenos (IFA
ou IPX) ou cidos nuclicos virais (PCR, hibridizao). A neutralizao com anti-soro especco
tambm pode ser usada para a identicao do
agente causador do ECP nos cultivos. Colorao
direta, como Giemsa ou hematoxilina e eosina
(para corpsculos de incluso), tambm podem
ser utilizadas para a conrmao da presena de
alguns agentes.

4 Quantificao de vrus
A realizao de vrias tcnicas virolgicas
requer o conhecimento da quantidade aproximada de partculas vricas presente no material.
O procedimento de quanticao denominado
titulao, e o valor obtido dito ttulo viral. Existem tcnicas diretas e indiretas para a quanticao das partculas vricas. As tcnicas diretas
baseiam-se na contagem das partculas presentes
em uma amostra e observadas ao microscpio
eletrnico. Esse mtodo capaz de informar o
nmero preciso de partculas, porm no diferencia partculas infecciosas de no-infecciosas.
Devido a essas particularidades, o mtodo direto
de quanticao viral no utilizado na rotina
laboratorial. As tcnicas indiretas possuem como
base a infectividade do vrus, que medida por
meio de um indicador biolgico. A quanticao
da infectividade de uma determinada suspenso
viral requer necessariamente o uso de sistemas
biolgicos para a replicao do agente (cultivos
celulares, OE ou animais). Como j mencionado,
os cultivos celulares so muito utilizados com
esse propsito. Para os vrus que no replicam
em cultivo, pode-se recorrer aos OE ou animais.

4.1 Diluio limitante


Os testes que utilizam a diluio limitante
foram os primeiros desenvolvidos e so muito utilizados pela sua simplicidade. O material
inicialmente submetido diluio seriada, e
cada diluio serve como inculo para um n-

mero determinado de cultivos celulares. Quanto


maior o nmero de rplicas, mais preciso ser o
resultado. Essa tcnica geralmente realizada em
placas de microtitulao de 96 cavidades, e cada
diluio do material inoculada em oito rplicas. Aps um determinado perodo de incubao
(varia entre 48 h e vrios dias, dependendo do
vrus), os cultivos so monitorados em relao ao
aparecimento do ECP (ou submetidos IFA ou
IPX para deteco de antgenos virais), que so
os indicadores da presena de infectividade na
respectiva diluio.
O ttulo viral geralmente expresso como a
recproca da maior diluio capaz de provocar reao especca (ECP ou antgenos virais) em 50%
dos cultivos e a unidade ser TCID50 (tissue culture infection dose). Quando a titulao realizada
em animais ou em OE, e o indicador a morte,
a unidade usada dose letal 50% (LD50). Quando
o resultado da infectividade medido de outra
forma que no a morte (ex.: paralisia, presena
de leses de pele, prurido), a unidade empregada dose infectiva 50% (ID50). Para os vrus com
capacidade hemaglutinante, aplica-se o teste de
HA, ento a unidade de expresso ser unidade
hemaglutinante (UH).
Os valores obtidos nos ensaios de titulao
so submetidos anlise matemtica, que converte os dados de infectividade em valores numricos com uma acurcia aceitvel. Alguns mtodos
de clculo so utilizados, no entanto, o mtodo
de Reed e Muench o mais difundido para o
clculo de ttulo viral (Quadro 3.1). Os mtodos
de Spearman e Krber; e Seligman e Mickey so
menos populares. Esses mtodos, apesar de diferirem na metodologia aplicada, baseiam-se na
observao da infectividade, portanto, somente
consideram as partculas infecciosas.

4.2 Ensaio de placa


Outro mtodo muito utilizado para a quanticao de vrus o ensaio de placa, descrito inicialmente por Dulbecco, em 1952. Diluies seriadas da suspenso viral so inoculadas em tapetes
celulares pr-formados, geralmente em placas
poliestireno de seis cavidades. Aps a adsoro
e a remoo do inculo, os tapetes so recobertos

82

Captulo 3

Testes de infectividade so rotineiramente utilizados para o


clculo do ttulo viral (nmero de unidades infecciosas por
unidade de volume), que comumente expresso por TCID50/mL
ou PFU/mL. Uma unidade infecciosa definida como a menor
quantidade do vrus capaz de produzir um efeito biolgico
detectvel (efeito citoptico, ECP) em clulas de cultivo in vitro,
ou doena clnica, ou morte em animais. No caso de cultivos
celulares, uma unidade infecciosa equivaleria a uma

Cultivos celulares

partcula viral vivel capaz de infectar e replicar em uma clula


susceptvel.
1.TCID50 definida como a diluio de um determinado vrus
necessria para infectar 50% dos cultivos celulares inoculados.
Esse tipo de teste consiste na produo e deteco de ECP nas
clulas infectadas. O clculo da TCID50 em uma suspenso
inicial de vrus pode ser feito pelos mtodos de Reed & Muench
ou Spearman-Krber.

ndices acumulados

Diluio

Porcentagem (%) =
[Infectados/(infectados
+ no-infectados)] X

No-infectados

Infectados

Noinfectados

Infectados

Noinfectados
+
infectados

10

-1

41

41

41/41 =100%

10

-2

33

33

33/33 =100%

10-3

25

25

25/25 =100%

-4

17

17

17/17 =100%

10-5

11

9/11 =81%

-6

11

3/11 =27%

10-7

15

15

0/15 =0%

-8

23

23

0/23 =0%

10

10

10

Para o clculo dos ndices acumulados dos cultivos noinfectados (isto , onde no se observou ECP), soma-se os
valores dos cultivos no-infectados, iniciando-se a partir da
-8
menor diluio (10 ). J o clculo do ndice dos cultivos
infectados, realizado pelo somatrio das culturas infectadas
-1
(onde o ECP foi visualizado) a partir da maior diluio (10 ).
Assim, a diluio apresentada no Quadro 3.1 necessria para a
infeco de 50% dos cultivos celulares, obviamente estar entre
-6
-5
as diluies 10 (27% infectados) e (10 ) (81% infectados). A
distncia proporcional entre essas duas diluies calculada
da seguinte forma:
(% positivo acima de 50%) - 50
------------------------------------------------------------------------ =
(% positivo acima de 50%) - (% positivo abaixo de 50%)
Assim, tem-se:

81-50
81-27

Este ndice ou distncia proporcional utilizado para o clculo


do ttulo viral pelo uso da equao: (fator da diluio onde se
observou ECP em mais de 50% das culturas de clulas) + (ndice
ou distncia proporcional multiplicado pelo logaritmo do fator de
diluio). Assim, tem-se (-5) + (0,57 x 1) = -5,57. Desse modo, a
diluio limitante da suspenso inicial do vrus capaz de infectar
-5,57
50% dos cultivos celulares ser de 10 . A recproca deste
nmero ser o ttulo viral por unidade de volume empregado para
-5,57
a realizao da prova, ou seja, 10
TCID50 em 50L.
Rotineiramente, o ttulo viral expresso em mililitros (mL). Para
isso, basta multiplicar o valor obtido por 20 (1 mL contm 20 vezes
o volume de 50L utilizado para a realizao da prova).
-5,57
6,57
6,87
Finalmente, tem-se 10 que equivalente a 2 x 10 ou 10
TCID50/mL.

= 0,57

Quadro 3.1. Quantificao de vrus por diluio limitante

com uma camada de meio semi-slido base de


gar ou carboximetilcelulose, e incubados por 24
a 72 horas, variando conforme o agente. As partculas virais que penetraram nas clulas durante a
adsoro iro replicar e produzir prognie viral.
A cobertura semi-slida, no entanto, impede que
as partculas vricas produzidas se disseminem

distncia. A transmisso do vrus a partir das clulas inicialmente infectadas ocorre apenas para
as clulas vizinhas, pela transmisso direta entre
clulas. Aps alguns dias, so observados focos
de destruio celular nos tapetes, denominados
placas. Cada placa representa um determinado
nmero de clulas infectadas e destrudas a par-

83

Deteco, identificao e quantificao de vrus

tir de uma clula originalmente infectada. O nmero de placas produzidas no tapete, portanto,
corresponde ao nmero aproximado de unidades
infecciosas presentes na diluio inoculada. Para
uma melhor visualizao e contagem das placas,
os tapetes so corados com cristal violeta (Figura
3.13).
Nessa tcnica, a quanticao expressa
como unidade formadora de placas por mililitro
(PFU/mL). Para o clculo nal do ttulo, leva-se
em considerao o nmero de placas produzidas
em cada diluio e o volume utilizado para inoculao. Um exemplo de titulao, usando essa
tcnica, est descrito no Quadro 3.2. Os ensaios
em placa so utilizados principalmente para a
quanticao de vrios vrus citopatognicos (ou
citopticos), mas podem tambm ser utilizados
para vrus que no induzem citopatologia. Nesses casos, os focos (e no placas) de replicao
viral podem ser detectados e contados aps a realizao da tcnica de IPX.
Alm de quanticao viral, os ensaios de
placa so tambm utilizados com outras nalidades, incluindo: a) clonagem biolgica e puricao de vrus; b) anlise de fentipo de variantes
virais; c) ensaios de neutralizao viral por anticorpos monoclonais ou policlonais; d) testes de

atividade antiviral de compostos qumicos; e) estudos de cintica e replicao viral, entre outras.

Figura 3.13. Ensaio de placa. Tapetes de clulas BHK-21


foram infectados com diferentes diluies do vrus da
estomatite vesicular (VSV) e, 48 horas aps, foram
corados com cristal violeta. Linha superior: a ausncia de
placas indicativa da ausncia de vrus; Linha inferior:
observa-se inmeros focos infecciosos, indicando a
replicao viral e lise celular.

4.3 Outros mtodos de quantificao


Mtodos mais modernos que utilizam a
biologia molecular tm sido empregados para a
quanticao de vrus, principalmente em medi-

O ttulo de uma suspenso viral do VSV foi calculado


pelo mtodo de ensaio de placa. Para isso, trs placas
de seis cavidades, contendo uma monocamada prformada de clulas BHK-21 foram inoculadas. A partir da
suspenso original, realizou-se oito diluies seriadas
na base 10, que serviram como inculo. Cada diluio foi
inoculada em duplicada e, para isso, foram

utilizados 200L/cavidade. Aps o perodo de adsoro,


o inculo foi removido e meio de cultivo contendo
carboximetilcelulose foi adicionado. Aps 24 horas de
incubao, os tapetes celulares foram corados por
cristal violeta. Os nmeros da contagem das placas
esto apresentados abaixo.

Nmero de placas
Diluio

Rplicas

Mdia

10-1

10-2

10

incontveis

incontveis

incontveis
-

-3

10-4

10-5

10-6

10-7

10-8

Controle

168

96

35

incontveis

150

89

27

159

92,5

31

Para a obteno do ttulo, utiliza-se o nmero mdio de


placas presentes na maior diluio em que foi possvel
observar a replicao do vrus. Dessa maneira, tem-se: 31
x 105 PFU/200L, que o equivalente a 3,1x106
PFU/200L.

Quadro 3.2. Quantificao de vrus por ensaio de placa

Normalmente o ttulo expresso em mililitro (mL), nesse


caso, o volume inoculado foi de 200L e, para realizar a
transformao, deve-se multiplicar por 5. Tem-se, ento,
15,5 x 106 PFU/mL ou 1,55 x 107 PFU/ml.

84

cina humana. Essas tcnicas mensuram a carga


viral (ou quantidade de vrus) pela anlise quantitativa do material gentico viral presente em uma
amostra clnica. A quantidade de vrus presente
nas secrees e excrees de animais infectados
com o FMDV pode ser estimada atravs da tcnica de real time PCR. Essa mesma metodologia
tambm pode ser aplicada para os vrus da peste
suna clssica (CSFV) e AFSV, entre outros. Imunoensaios quantitativos e outros procedimentos
imunolgicos que fornecem a titulao e que
avaliam a presena do vrus em cada diluio so
amplamente usados. Esses mtodos apresentam
a vantagem de permitir realizar diluies, adio
de reagentes e leituras colorimtricas automatizadas. Os dados da leitura crua so posteriormente
analisados por mtodos matemticos que permitem a identicao correta e precisam das unidades infectantes presentes no material testado. No
entanto, esses mtodos possuem aplicabilidade
restrita em medicina veterinria e dicilmente
sero substitudos pelos mtodos tradicionais.

5 Identificao e caracterizao de
um isolado
Os termos isolado ou amostra de vrus referem-se a um vrus que foi detectado e identicado, mas que ainda no foi completamente caracterizado. O termo cepa designa um vrus cujas
principais caractersticas genotpicas e fenotpicas j foram estudadas e so conhecidas. As cepas so geralmente utilizadas como referncia
em testes de diagnstico, em pesquisas e para a
produo de reagentes.
A primeira etapa aps a deteco de um
agente viral a partir de amostras clnicas a sua
identicao. Isso pode ser realizado preliminarmente pelas caractersticas do ECP produzido nos cultivos ou pelas alteraes produzidas
no embrio de galinha. A ME pode ser utilizada
para a identicao inicial do agente, de acordo
com as suas caractersticas morfolgico-estruturais. A conrmao da identidade do agente, no
entanto, depende do uso de anticorpos especcos (IFA, IPX), de anti-soro especco (SN ou HI)
ou de mtodos de deteco e identicao de cidos nuclicos (hibridizao, PCR).

Captulo 3

A caracterizao de uma amostra viral


uma etapa posterior sua deteco e identicao. Essa etapa geralmente envolve a caracterizao antignica ou sorolgica, que pode ser denida como o perl dos antgenos de um vrus. A
obteno deste perl realizada pelo uso de testes que detectam e identicam os determinantes
antignicos presentes nas protenas virais. Vrias
tcnicas so utilizadas com essa nalidade, incluindo a IFA com anticorpos monoclonais, soroneutralizao, xao do complemento, ELISA,
alm de outras tcnicas sorolgicas. A forma de
caracterizao a ser utilizada depende das particularidades de cada famlia de vrus e da disponibilidade de tcnicas e reagentes do laboratrio.
A identicao de seqncias especcas pode
ser realizada pelo uso de tcnicas como o PCR,
anlise de restrio ou seqenciamento do genoma viral.

5.1 Sensibilidade a solventes lipdicos


Existe uma correlao entre presena do envelope e susceptibilidade dos vrus aos solventes lipdicos. Durante muito tempo, uma forma
de identicao e caracterizao da presena de
vrus envelopados foi o tratamento com solventes lipdicos previamente inoculao em cultivo
celular ou ovo embrionado. No envelope viral,
encontram-se inseridas glicoprotenas, que so
responsveis pelas interaes iniciais vrus-clula. A remoo do envelope dos vrus resulta em
perda de infectividade e inativao da partcula.
A maioria dos vrus envelopados sensvel ao
ter e/ou clorofrmio, que so os solventes normalmente utilizados (paramixovrus, herpesvrus, mixovrus entre outros); no entanto, alguns
vrus, como os poxvrus, apresentam variaes
de sensibilidade ao ter.

5.2 Concentrao e purificao por


ultracentrifugao
Estudos estruturais e ultra-estruturais, produo de antgenos para imunizaes ou mtodos
de deteco, entre outros, requerem solues contendo altas concentraes de vrus e com elevado
grau de pureza. A obteno de solues com es-

85

Deteco, identificao e quantificao de vrus

sas caractersticas pode ser feita de vrias maneiras, das quais se destacam a ultracentrifugao.
A ultracentrifugao um mtodo relativamente
fcil, rpido e prtico, em que o material de alta
qualidade obtido. Seu princpio baseia-se na
taxa de sedimentao do vrus, que, por sua vez,
dependente do tamanho, densidade, morfologia da partcula, bem como da natureza do meio
e da fora de centrifugao. A maior restrio o
custo do equipamento, que difere das centrfugas
por atingir velocidades que variam entre 20.000 e
100.000 rotaes por minuto (RPM).

6 Biossegurana laboratorial
A manipulao em laboratrios de agentes
infecciosos, como os vrus, pode representar risco

de infeces inadvertidas ou disseminao de enfermidades entre humanos e animais. Isso pode


ser observado em vrias descries do passado.
O FMDV, devido a sua alta infecciosidade, talvez
tenha produzido os exemplos mais conhecidos.
A infeco de pesquisadores pelo vrus Marburg,
em um laboratrio da Alemanha na dcada de
1970, outro exemplo. No princpio, uma alternativa para evitar acidentes, como a disseminao
do vrus febre aftosa ou introduo de agentes
exticos no rebanho de um pas, foi a construo
de laboratrios em ilhas, o caso mais conhecido
de Plum Island Animal Disease Center, nos Estados
Unidos. Posteriormente outros laboratrios de
segurana elevada e acesso restrito, para manipulao de agentes virais e animais infectados,
foram estabelecidos, tais como: o Australian Ani-

Tabela 3.4. Nveis de biossegurana para manipulao de agentes virais

Exemplos

Equipamento
de segurana

Equipamentos
de proteo

Procedimentos

Vrus

Nvel

BSL-1

BSL-2

BSL-3

BSL-4

Vrus no-zoonticos.

Associados com
infeces em humanos,
risco de auto-inoculao,
ingesto ou exposio
da pele e mucosas.

Agentes exticos ou
selvagens, com potencial de
transmisso por aerossol e de
produzir doena severa ou
letal.

Agentes altamente perigosos


ou exticos, com risco de
vida para humanos,
transmitidos por aerossis,
ou agentes de periculosidade
desconhecida.

Normas bsicas de prtica


laboratorial.

BSL-1, com acesso limitado,


identificao das reas de
manipulao, primeiros
socorros e descontaminao
do lixo e resduos.

Normas do BSL-2, com


acesso restrito e controlado,
coleta de soro do
trabalhadores,
descontaminao de todo o
lixo e resduos e esterilizao
das roupas antes da lavagem.

Normas do BSL-3, com


mudanas de roupas ao
ingressar na rea
contaminada. Requerimento
de banho para sada,
descontaminao de todo o
material antes da remoo
do laboratrio.

Nenhum requerido.

Aventais, luvas, culos,


conforme a necessidade.
Manipulao de material
que produz aerossol em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II.

Requerimentos do BSL-1 e
toda manipulao em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II. Uso de luvas,
aventais, respiradores,
conforme a necessidade.

BSL-3, utilizao de cabine


de fluxo laminar tipo III ou
cabines tipo I e II em
ambiente com presso
positiva, macaces de
corpos inteiro com
respiradores para todos os
procedimentos.

Bancada laboratorial.

BSL-1 com autoclave.

BSL-2 acrescido de
separao fsica para
corredores e reas de
circulao, porta duplas,
presso negativa nos
laboratrios, sistema de
filtrao do ar.

BSL-3, rea ou prdio


isolado com suprimento de
ar e exausto, vcuo e
sistema de
descontaminao.

BoHV, BVDV, BLV, BTV,


PRV, CDV, outros.

Adenovrus humano,
citomegalovrus, influenza A,
B e C, rubola, poliovrus,
parainfluenza, vrus da raiva.

Herpesvrus dos smios


(vrus B), vrus da encefalite
japonesa, hantavrus, febre
amarela, encefalite eqina
venezuelana, vrus do Nilo
Ocidental.

Vrus Ebola, Marburg, sabi,


febre do vale Rift, entre
outros.

Adaptada de Murphy et al., 1999.

86

mal Health Laboratory na Austrlia, o Onderstepoort


Veterinary Institute na frica do Sul, o Institute for
Animal Health na Inglaterra, o Center for Disease
Control (CDC) em Atlanta e, mais recentemente,
o Canadian Science Center for Human and Animal
Health, em Winnipeg, no Cnada.
A manipulao de amostras infectadas para
pesquisa ou diagnstico deve seguir as normas
da boa prtica laboratorial. Dessa maneira, contaminaes inadvertidas de amostras ou disseminaes da infeco entre humanos ou animais so
evitadas. Conforme a infra-estrutura do laboratrio e o risco dos agentes manipulados, os laboratrios de virologia so classicados em Nveis de
Segurana (BSL) 1, 2, 3 ou 4 (Tabela 3.4). O uso de
tcnicas asspticas, roupas adequadas (avental,
mscaras, luvas e culos) e desinfetantes apropriados so cuidados bsicos e necessrios em
todo trabalho laboratorial, independente do nvel
de segurana. O uso de equipamentos, tais como:
cabines de uxo laminar, sistema de ltrao do
ar, tratamento e esterilizao de dejetos, descarte
e incinerao dos dejetos so requisitos necessrios para laboratrios que manipulem agentes
com risco mdio a elevado, conforme o caso.

7 Bibliografia consultada
BARTLETT, J.M.S; STIRLING, D. Methods in Molecular Biology:
PCR protocols. 2.ed. Totowa, NJ: Humana Press, 2003. 545p.
CASTRO, A.E.; HEUSCHELE, W.P. Veterinary diagnostic
virology: a practitioners guide. St. Louis, MO: Mosby, 1992.
285p.
FRESHNEY, R.J. Culture of animal cells. 2.ed. New York, NY:
Wiley-Liss, 1987. 397p.
HIRSCH, D.C.; ZEE, Y.C. Veterinary microbiology. Malden,
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KAHRS, R.F. Viral diseases of cattle. 2.ed. Ames, IA: Iowa State
University Press, 2001. 324p.
MAHY, B.W.J.; KANGRO, H.O. Virology methods manual. San
Diego, CA: Academic Press, 1996. 374p.
MURPHY, F.A. et al. Veterinary virology. 3.ed. San Diego, CA:
Academic Press, 1999. 629p.
OIE. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines.
3.ed. Paris, France: OIE, 1997. 723p.

Captulo 3

RICHMOND, J.Y.; McKINNEY, R.W. (Eds). Biosafety in


microbiological and biomedical laboratory. 4.ed. Washington,
DC: U.S. Government Printing Ofce, 1999. 265p.
ROVOZZO, G.C.; BURKE, C.N. A manual of basic virological
techniques. Englewood Cliffs, NJ: Prentice-Hall, 1973. 287p.
STORCH, G.A. Diagnostic Virology. In: KNIPE, D.M.; HOWLEY,
P.M. (eds). Fields virology. 4.ed. Philadelphia, PA: Lippincott
Williams & Wilkins, 2001. Cap.18, p.493-531.
STRAW, B.E. et al. (eds). Diseases of swine. 8.ed. Ames, IA:
Iowa State University Press, 2002. 1209p.
SWAYNE, D.E. et al. A Laboratory manual for the isolation and
identication of avian pathogens. 4.ed. Tallahasse, FL: Rose
Printing, 1998. 311p.
TIMONEY, J.F. et al. Hagan and Bruners microbiology and
infectious diseases of domestic animals. 8.ed. Ithaca, NY:
Comstock Publishing Associates, 1988. 951p.
VERSTEEG, J. A colour atlas of virology. Weert, Netherlands:
Wolfe Medical Publications, 1985. 240p.

GENTICA E EVOLUO VIRAL


Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo1

1 Gentica viral

89

1.1 Conceitos e definies


1.2 Mutao
1.3 Classificao genotpica
1.4 Classificao fenotpica
1.5 Taxa de mutao

90
92
93
93
94

1.6 Interaes genticas entre vrus


1.6.1 Recombinao
1.6.2 Ressortimento

95
95
97

1.7 Outras interaes virais


1.7.1 Complementao
1.7.2 Mistura fenotpica
1.7.3 Poliploidia

97
97
98
98

2 Evoluo viral

99

2.1 Origem dos vrus


2.2 Quando se originaram os vrus
2.3 Como os vrus ampliaram o seu repertrio protico
2.4 Capacidade de mutao viral
2.5 Estudos laboratoriais de evoluo

99
100
100
100
102

2.6 Exemplos de evoluo viral


2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tempo versus fatores ambientais
2.6.2 Mixomatose na Austrlia
2.6.3 Vrus da influenza
2.6.4 Parvovrus canino

102
102
103
104

2.7 Concluses

105

3 Bibliografia consultada

Responsvel pela seo de Evoluo Viral.

105

106

1 Gentica viral
As populaes virais, principalmente aquelas de vrus RNA, so excelentes modelos para
estudos de evoluo gentica. Devido ao ciclo
replicativo dos vrus ser extremamente rpido,
tanto em infeces naturais como em cultivo celular, os processos de seleo e evoluo podem
ser observados em um curto espao de tempo.
Assim, a gentica de populaes virais pode ser
considerada uma viso minimalista e simplista
da evoluo das espcies.
Ao longo de sua histria natural que pode
remeter h milhes de anos os vrus vm realizando um nmero incontvel de ciclos replicativos em seus hospedeiros, sendo constantemente
transmitidos entre hospedeiros. Alguns necessitam utilizar diferentes espcies de hospedeiros
mesmo invertebrados para assegurar a sua
manuteno na natureza. As infeces naturais
resultam em presso de seleo constante, que
acaba moldando o perl gentico e fenotpico dos
vrus, pois favorece e permite a sobrevivncia das
variantes que melhor se adaptam ao hospedeiro e
que so mais ecientemente transmitidas. Dentre
as propriedades que favorecem a sobrevivncia
e evoluo dos vrus destacam-se: a) capacidade
de replicar e ser excretado em altos ttulos; b) capacidade de se adaptar a novos tecidos, rgos
e/ou hospedeiros; c) capacidade de ser excretado
por longo tempo; d) capacidade de se reproduzir
e ser excretado sem produzir doena severa na
maioria de seus hospedeiros; e) capacidade de
escapar dos mecanismos imunolgicos do hospedeiro; f) capacidade de resistir no meio ambiente, tanto fora de clulas vivas como em animais
vertebrados ou invertebrados, assegurando a sua
sobrevivncia at alcanar um novo hospedeiro;
g) habilidade de ser transmitido verticalmente
entre hospedeiros.
Dentre as caractersticas que apresentam
relevncia na gentica das populaes virais e
facilitam a compreenso da sua evoluo, destacam-se a grande quantidade de prognie viral
produzida a partir da infeco de uma nica clula e o curto perodo de tempo de gerao. Para
se ter uma idia desta dinmica, a infeco de
uma clula, com uma nica partcula infecciosa,

pode produzir uma prognie de mais de 100.000


novos vrions em pouco mais de 10 horas. Isso
corresponde a uma cpia do genoma produzida
a cada meio segundo. Considerando-se infeces de hospedeiros multicelulares ou mesmo
cultivos celulares as geraes se sucedem em
magnitude (nmero de indivduos produzidos)
e velocidade inimaginveis. Um ingrediente adicional nesta complexidade a potencial variao
gentica da prognie. Nos vrus RNA, geralmente ocorre uma mutao para cada 10.000 nucleotdeos incorporados aos novos genomas, ou seja,
cada novo genoma potencialmente contm, pelo
menos, uma mutao e, em alguns casos, a grande maioria da prognie pode ser distinta do vrus
parental. Esses eventos, em conjunto, proporcionam uma grande capacidade de adaptao dessas populaes, resultando em novas geraes de
vrus com propriedades distintas das parentais,
de acordo com o ambiente em que replicam.
A gentica dos vrus possui implicaes
em todos os aspectos de sua biologia, incluindo
a evoluo e seleo de variantes adaptados ao
meio, distribuio espacial e temporal, espectro
de hospedeiros, patogenicidade e virulncia, interaes com o sistema imunolgico do hospedeiro, entre outros. O estudo da gentica viral
tem como objetivos conhecer a composio gentica do genoma e como as informaes genticas
nele contidas se reetem no fentipo do vrus.
Assim, o conhecimento da gentica viral pode ter
um amplo espectro de aplicaes, que vo desde
a sua utilizao para otimizar o manejo sanitrio
de um rebanho at a produo de recombinantes
atenuados para uso em vacinas.
A gentica viral clssica era baseada no isolamento e anlise fenotpica de um grande nmero de mutantes naturais, estudos de complementao, recombinao natural, determinao
da ordem e posio dos genes no genoma e, nalmente, na anlise fenotpica dos mutantes para
determinar a funo dos genes. Notveis avanos
foram obtidos com o desenvolvimento dos cultivos celulares na dcada de 1950 e com o advento
das tcnicas moleculares a partir do nal dos anos
1970. Essas tcnicas permitiram a anlise detalhada da seqncia, estrutura e funo de cidos e
protenas virais e inauguraram uma nova etapa

90

no estudo da gentica dos seres vivos. Embora


alguns procedimentos genticos clssicos continuem em uso, grande parte foi substituda por
mtodos modernos que permitem uma anlise
mais detalhada e aproximada das relaes entre
gentipo e fentipo.
A seqncia completa do genoma de virtualmente todos os vrus de interesse humano e
animal j foi determinada e, atualmente, encontra-se disponvel em bancos de dados de acesso
pblico. As funes de grande parte das protenas virais tambm j foram estabelecidas, tanto
por mtodos diretos como por inferncia a partir de seqncias de aminocidos e estrutura de
outras protenas semelhantes. De especial relevncia para a Virologia o conjunto de procedimentos denominados genericamente de gentica reversa, que realizam a anlise fenotpica a
partir da composio gentica, ao contrrio da
gentica clssica. Assim, o conhecimento da gentica e a disponibilidade das tcnicas moleculares tm permitido a manipulao do genoma dos
vrus, a produo de recombinantes com mutaes em genes especcos e o estudo do impacto
dessas mutaes no fentipo viral. Essas tcnicas
e conhecimentos adquiridos tm proporcionado
um progresso notvel na Virologia, permitindo
a identicao e manipulao de genes envolvidos em virulncia e nas interaes com o sistema
imune, como, por exemplo, para a produo de
vacinas mais ecientes e seguras.
A seqncia completa de nucleotdeos do
genoma dos vrus pode ser determinada por tcnicas de seqenciamento de DNA. Em se tratando
de vrus RNA, a anlise e manipulao dos genomas so facilitadas pela sua converso em molculas de DNA complementar (cDNA) por meio
de transcrio reversa. Genomas recombinantes,
contendo delees de genes, inseres de genes
heterlogos ou mutaes pontuais em nucleotdeos ou seqncias especcas podem ser obtidos
pelo uso de tcnicas moleculares de manipulao
enzimtica e clonagem de DNA. Vrus contendo genes de outros vrus de interesse podem ser
produzidos in vitro para estudos de patogenia,
usos em terapia gentica e em vacinas. Protenas
virais, para uso teraputico ou vacinal, podem
ser expressas em sistemas heterlogos. Essas so

Captulo 4

apenas algumas aplicaes da tecnologia de DNA


recombinante e tcnicas moleculares em geral no
estudo da gentica e biologia dos vrus. Considera-se que os limites da manipulao gentica
dos vrus sero impostos apenas pelas restries
biolgicas, ou seja, ser possvel modicar tudo e
apenas o que a biologia permitir.
Este captulo abordar os principais mecanismos genticos e de evoluo das populaes
virais. Dentre esses, sero discutidos os mecanismos relacionados diretamente com as caractersticas de replicao do genoma, como as mutaes; aqueles resultantes de interaes entre
diferentes vrus, como a recombinao, rearranjo,
complementao; algumas interaes entre vrus
e hospedeiros, como a integrao; e as interaes
no-genticas entre vrus. A seo de evoluo
abordar alguns aspectos e hipteses sobre a origem e evoluo dos vrus, e de como esses microorganismos conseguem se perpetuar e evoluir,
apesar das constantes restries impostas pelo
meio e pelas defesas dos hospedeiros. Ao nal,
sero apresentados alguns exemplos de evoluo
de vrus humanos e animais e as conseqncias
biolgicas nas interaes desses agentes com os
seus hospedeiros.

1.1 Conceitos e definies


Os princpios bsicos, conceitos e terminologia utilizados em gentica de vrus so basicamente os mesmos empregados no estudo da
gentica de outros organismos. Assim, eventos
como mutao, recombinao e seleo possuem
signicado semelhante quando aplicados aos vrus. A gentica viral, no entanto, possui algumas
particularidades que so derivadas das peculiaridades da biologia desses agentes. A replicao e
a conseqente expanso viral, por exemplo, um
processo muito mais rpido do que em outros organismos uni- ou multicelulares. Para se ter uma
idia dessa dinmica, a infeco de uma clula
por uma nica partcula vrica pode resultar na
produo de uma prognie de mais de 100.000
vrions em poucas horas. Considerando-se as infeces naturais em hospededeiros multicelulares vertebrados, por exemplo ou mesmo em
cultivos celulares, a populao derivada de um

Gentica e evoluo viral

nico progenitor se expande exponencialmente


em uma velocidade impressionante. Como resultado, as geraes de vrus se sucedem a uma velocidade incomparvel com aquela observada em
organismos multicelulares. Essa caracterstica faz
com que os vrus sejam muito utilizados como
modelo para estudos genticos e evolutivos.
Assim, quando se estuda os diversos aspectos da biologia e gentica dos vrus, na verdade
est se estudando uma populao numerosa de
indivduos (vrions), e no um indivduo isolado
ou um grupo pequeno (como em estudos genticos em bovinos, por exemplo). Ento, quando
se refere a uma cepa ou um mutante viral, a referncia feita ao conjunto de unidades vricas que
compe aquela populao de vrus.
Quando se refere a um determinado vrus
vrus da cinomose (CDV), por exemplo est se
referindo a uma espcie viral. Uma espcie viral
denida como uma populao de vrus genetica e biologicamente muito semelhantes entre si,
derivada de ancestrais comuns. Assim como os
demais organismos uni- ou multicelulares, as diferentes espcies virais ou os diferentes vrus
so compostos por inumerveis indivduos, que
podem ser mais ou menos semelhantes entre si.
Ou seja, a similaridade gentica e fenotpica entre
os vrus que compem uma espcie variam entre
as espcies. Os componentes de uma populao
de vrus RNA (vrus da inuenza, por exemplo)
so mais variveis entre si do que os vrus DNA.
Em outras palavras, as populaes de vrus variam em sua homogeneidade/heterogeneidade,
sendo que os vrus RNA so mais variveis. Cabe
recordar que uma clula infectada com um nico vrion pode produzir centenas de milhares
de novas partculas, no necessariamente idnticas em suas seqncias de nucleotdeos. Assim,
uma amostra do vrus da diarria viral bovina
(BVDV), isolada no Brasil, provavelmente diferente gentica e antigenicamente de amostras
isoladas em outras partes do mundo. Por outro
lado, os vrus DNA tendem a ser mais estveis
geneticamente e pouca variao encontrada entre os vrus de uma mesma espcie. As diferenas
nos nveis de homogeneidade/heterogeneidade
entre os vrus DNA e RNA devem-se principalmente s propriedades das enzimas replicativas

91

desses vrus, que apresentam diferentes taxas de


erro ao replicarem os genomas.
Em razo da heterogeneidade gentica e fenotpica que pode existir em uma populao de
vrus de uma mesma espcie sobretudo em vrus RNA os estudos genticos geralmente so
realizados com vrus puricados. Atravs de clonagem biolgica e posterior expanso dos clones
obtidos, possvel se obter populaes homogneas de vrus derivados de um nico ancestral.
Os vrus puricados (ou clonados) a partir de
populaes mistas so geralmente aqueles mais
abundantes e predominantes na populao, sendo, por isso, os seus verdadeiros representantes.
medida que esses clones so expandidos, no
entanto, a tendncia que a prognie viral se
torne gradualmente divergente geneticamente
devido gerao contnua de indivduos com
mutaes. Por isso, quando se deseja trabalhar
continuamente com populaes homogneas de
vrus, essas populaes devem ser periodicamente clonadas.
Alm dos conceitos acima, algumas denies so tambm necessrias para o entendimento dos princpios de gentica viral, embora a sua
aceitao e terminologia nem sempre sejam universais. Cabe ressaltar que as denies a seguir
como j denido , referem-se aos vrus como
populaes, colhidas diretamente dos hospedeiros ou de cultivos celulares onde so multiplicados:
Vrus de campo (wild-type): o vrus original
ou parental, a partir do qual se realiza estudos
biolgicos, genticos ou moleculares. Esta populao de vrus serve de base para as comparaes genotpicas e fenotpicas feitas com populaes derivadas dela ou com outras populaes
da mesma espcie viral, porm de outra origem.
Embora a denominao remeta ao vrus original
que foi obtido de animais infectados, os vrus de
campo, utilizados em estudos biolgicos e genticos, nem sempre so exatamente iguais queles
originalmente isolados. Isto porque a obteno de
ttulos virais compatveis com vrios estudos requer a sua multiplicao, s vezes, por passagens
sucessivas em cultivos celulares ou em ovos embrionados. Esses ciclos sucessivos de replicao
podem resultar em alteraes genticas e fenot-

92

picas no vrus. De forma ideal, os vrus de campo


utilizados em quaisquer experimentos devem ter
sido cultivados o menor nmero de vezes possvel. O termo selvagem tambm tem sido utilizado
para designar os vrus de campo;
Mutante: o vrus que difere do vrus parental na seqncia de nucleotdeos de seu genoma, ou seja, apresenta alteraes de bases e/ou
de segmentos genmicos em comparao com
o vrus de campo. Algumas mutaes no se reetem em alteraes fenotpicas e, por isso, so
chamadas de mutaes silenciosas (silent mutations). Nesses casos, o fentipo do vrus mutante
indistinguvel do parental e a sua identicao
depende de anlise da seqncia do genoma. Por
outro lado, as mutaes que resultam em alteraes fenotpicas podem ser detectadas pela observao e anlise das caractersticas fenotpicas
alteradas. Vrus temperatura-sensveis (TS), por
exemplo, so mutantes que no replicam bem
temperatura corporal (37-38C), ao contrrio do
vrus parental. Os vrus TS geralmente necessitam uma temperatura mais baixa (30-34C) para
replicarem com ecincia. Mutantes de placa
pequena (small plaque mutants) so vrus que se
disseminam decientemente em cultivo celular,
produzindo focos menores de destruio celular
do que os produzidos pelo vrus parental. Esse
fentipo est geralmente associado com uma capacidade reduzida de transmisso direta entre
clulas. Mutantes de gama de hospedeiros (host
range mutants) so vrus que diferem dos vrus
parentais em relao ao espectro de hospedeiros que infectam in vivo, ou em relao aos tipos
celulares que podem infectar in vitro. O termo
variante usado para designar um determinado
vrus (uma populao de vrus) que apresenta alguma diferena fenotpica em relao ao vrus de
campo, ou seja, uma denio essencialmente
fenotpica. As diferenas fenotpicas entre os vrus parentais e os seus variantes certamente so
reexos de mutaes no genoma;
Cepa (ou estirpe): um vrus cujas caractersticas biolgicas e/ou moleculares so razoavelmente conhecidas. Em contraste, uma amostra (ou isolado) um vrus isolado de animais
sobre o qual no se tem um maior conhecimento.
Amostras (ou isolados) podem se tornar cepas

Captulo 4

a partir da sua caracterizao laboratorial. Em


outras palavras, as cepas so alguns isolados ou
amostras de um determinado vrus que sofreram
caracterizao aps o seu isolamento. No entanto, essas denies no possuem utilizao universal, e o termo cepa , muitas vezes, utilizado
para designar isolados no-caracterizados e vrus
de campo.
O termo cepa de referncia utilizado para designar cepas virais conhecidas que so utilizadas
por diferentes laboratrios com ns diagnsticos
e/ou produo de reagentes, vacinas e mesmo
para estudos de patogenia.

1.2 Mutao
O termo mutao utilizado para designar
alteraes na seqncia de nucleotdeos no cido
nuclico genmico de um determinado organismo comparando-o com o seu parental. As mutaes surgem naturalmente como resultado da
indelidade das polimerases principalmente as
polimerases de RNA que incorporam nucleotdeos incorretos durante a replicao do genoma. Mutaes tambm podem ser induzidas por
mtodos qumicos (hipoxantina, bromodeoxiuridina) ou fsicos (raios X, ultravioleta e gama).
Acredita-se que muitas mutaes que ocorrem
naturalmente resultam na produo de vrus inviveis, ou seja, constituem-se em mutaes letais. Esses tipos de mutaes no so percebidas
e no possuem impacto na adaptao e evoluo
viral, pois os genomas mutantes so incapazes de
replicar. Logo, quando se faz referncia a mutantes, cepas, tipos ou variantes virais, sempre so
consideradas as mutaes no-letais, que permitem diferenciar o indivduo e a sua prognie do
vrus parental.
Como foi mencionado, as mutaes podem
ser espontneas (resultados de erros durante a
replicao) ou induzidas (resultados de danos
ao cido nuclico por agentes qumicos ou fsicos). As mutaes naturais so mais freqentes
nos vrus RNA (um nucleotdeo incorreto entre
103 a 104 nucleotdeos inseridos) do que nos vrus
DNA (um erro a cada 108 a 1011 nucleotdeos incorporados). A maior taxa de mutao observada nos vrus RNA deve-se menor delidade da

93

Gentica e evoluo viral

polimerase de RNA, que incorpora nucleotdeos


incorretos com maior freqncia, alm da incapacidade de corrigir os erros cometidos. As polimerases de DNA, por sua vez, cometem menos
erros e, ainda assim, so capazes de corrigi-los,
substituindo os nucleotdeos incorretos incorporados s cadeias nascentes.
Os mutantes gerados durante a replicao
viral, quando apresentam uma vantagem seletiva
em comparao com os parentais, sero amplicados com maior ecincia e rapidamente tornam-se predominantes na populao viral. Por
outro lado, mutantes que no apresentam vantagem seletiva tendem a permanecer em proporo pequena e ocasionalmente desaparecem da
populao, caso repliquem com menor ecincia
do que os demais indivduos. Ou seja, a evoluo
de uma determinada populao viral depende da
taxa de mutao e da seleo a qual os vrus gerados so submetidos.

1.3 Classificao genotpica


Um dos critrios usados para a classicao
de mutantes baseia-se nas caractersticas genotpicas da mutao. Mutaes causadas por simples
substituies de nucleotdeos so chamadas de
mutaes pontuais. As mutaes pontuais podem
ser do tipo transio, quando h substituio de
uma purina por outra purina (A ou G) ou pirimidina por outra pirimidina (C ou T); ou transverso,
quando ocorre a substituio de uma pirimidina
por uma purina ou vice-versa. Outras mutaes
envolvem delees ou inseres de segmentos de
tamanhos variveis de cido nuclico.
Outra forma de classicao das mutaes
pontuais considera as suas conseqncias na
codicao de aminocidos, quando a mutao
ocorre em seqncias codicantes do genoma.
Assim, as mutaes podem ser silenciosas (silent
mutations) quando a troca do nucleotdeo no
resulta na codicao de outro aminocido. A
protena sintetizada permanece a mesma e no
ocorre mudana no fentipo do vrus. Mutaes
de sentido trocado (missense) so aquelas em que
a troca de nucleotdeos resulta na codicao
de outro aminocido. As conseqncias dessas
mutaes so variveis, dependendo do novo

aminocido incorporado protena e da possvel


alterao da conformao e/ou funo protica. Mutaes missense podem ser absolutamente
incuas (se o aminocido incorporado no alterar a funo da protena) ou mesmo letais (se o
novo aminocido alterar drasticamente a funo
da protena codicada). Mutaes sem sentido
(nonsense) resultam na produo de um cdon de
terminao da traduo (stop codon) em uma seqncia aberta de leitura (ORF). Com isso, ocorre
a produo de uma protena truncada, cuja funcionalidade pode variar amplamente, dependendo do local onde a mutao introduzida. Essas
mutaes so classicadas como mbar (amber =
UAG), ocre (ochre = UAA) ou opala (opal = UGA).
As conseqncias de mutaes nonsense tambm
variam amplamente, e muitas delas so provavelmente letais ou, pelo menos, deletrias para a
viabilidade do vrus.
Embora as mutaes e suas conseqncias
sejam mais estudadas em seqncias codicantes
de protenas, certamente tambm so importantes
em regies regulatrias de transcrio e replicao (promotores, enhancers, origens de replicao
etc.), e em seqncias nucleotdicas envolvidas
na encapsidao dos genomas recm-formados.

1.4 Classificao fenotpica


Os mutantes virais tambm podem ser classicados quanto s conseqncias fenotpicas de
suas mutaes. Vrias caractersticas fenotpicas
podem ser consideradas nesta classicao, e os
mutantes podem ser selecionados pela sua habilidade em produzir placas de lise celular; por
exemplo. Alguns mutantes de adenovrus podem
egressar precocemente da clula infectada, em
comparao com os seus parentais, e, conseqentemente, produzem maiores placas de destruio
celular in vitro. Essa caracterstica pode estar relacionada com alteraes da virulncia do vrus, ou
seja, mutantes virais que produzem placas maiores in vitro podem possuir maior virulncia em
hospedeiros susceptveis in vivo. Este fenmeno
j foi observado em diversos vrus, incluindo o
vrus da peste suna clssica (CSFV). Em outros
casos, pode no existir uma correlao entre tamanho de placa in vitro e virulncia in vivo. Nes-

94

ses casos, o fentipo serve apenas como um parmetro para a seleo de mutantes com diferentes
habilidades replicativas in vitro.
Outro fentipo observado para a seleo
de mutantes a capacidade de replicao a diferentes temperaturas. Como j mencionado, os
mutantes TS replicam bem a temperaturas de
30-34C (denominada temperatura permissiva) e
no replicam com ecincia a 37C (temperatura no-permissiva). Mutantes adaptados ao frio
(cold adapted) replicam melhor sob temperaturas
baixas, mas retm alguma capacidade de replicar a 37C. Freqentemente, essa caracterstica
atribuda a alteraes conformacionais de determinadas protenas, especialmente as polimerases virais, dependendo da temperatura. Ou seja,
pela mudana na sua seqncia de aminocidos
em determinada temperatura, essa protena no
manteria sua conformao secundria ou terciria e perderia a sua funo. Esses mutantes podem ser utilizados em vacinas atenuadas, pois
replicam apenas em reas superciais do corpo,
sem se disseminar sistemicamente no organismo.
A alterao da gama de hospedeiros outra
caracterstica fenotpica utilizada na classicao
de mutantes. Alguns mutantes podem no replicar com a mesma ecincia nos mesmos hospedeiros que os vrus de campo, reduzindo, assim,
a sua abrangncia. Um exemplo tpico um mutante do vrus da febre aftosa (FMDV) que surgiu,
em 1997, na Tailndia. Esse mutante natural no
possua a habilidade de infectar bovinos principal espcie hospedeira do vrus infectando
apenas sunos.
Uma forma importante de seleo de mutantes a resistncia a determinadas drogas. A
presso de seleo exercida pelas drogas antivirais permite o seu uso para a seleo e pesquisa desses mutantes. Anticorpos neutralizantes
tambm podem ser utilizados para a seleo de
vrus resistentes neutralizao. Para isso, os
vrus so cultivados in vitro na presena de anticorpos neutralizantes. Os mutantes originados
que eventualmente no forem reconhecidos pelos anticorpos por alteraes nas protenas de
superfcie so rapidamente amplicados e se

Captulo 4

tornam predominantes na populao. Esses vrus


so chamados de mutantes de escape antignico. A
gerao natural de mutantes de escape uma estratgia utilizada por vrus que produzem infeces persistentes, sobretudo os retrovrus, pois
podem seguir replicando no hospedeiro mesmo
na presena de anticorpos.
Mutantes decientes em atividade enzimtica so aqueles que apresentam mutaes nos
genes que codicam determinadas enzimas,
como a timidina quinase dos herpesvrus. Esses
mutantes apresentam capacidade de replicao
semelhante a dos vrus parentais in vitro, mas a
sua virulncia atenuada quando so inoculados
em animais susceptveis. A exemplo dos mutantes TS, esses vrus tambm podem ser utilizados
para a produo de vacinas. Os mutantes que
apresentam atenuao da virulncia, sem que necessariamente se conhea a causa, so conhecidos
como mutantes atenuados.

1.5 Taxa de mutao


As taxas de mutao natural dependem basicamente da delidade da enzima polimerase
e da sua capacidade de corrigir eventuais erros
cometidos durante a polimerizao das novas cadeias de cido nuclico. As polimerases de DNA,
que utilizam molculas de DNA como molde
para a sntese de novas molculas, geralmente
apresentam um sistema de correo (proofreading)
para aqueles nucleotdeos incorporados erroneamente. Esse processo envolve seqncias
funcionais especcas (motivos) com atividade
exonuclease, que so capazes de remover os nucleotdeos incorretos e substitu-los pelos corretos. Em contraste, as enzimas que polimerizam
RNA a partir de RNA no possuem a capacidade
de proofreading. Como conseqncia, as polimerases de DNA apresentam uma taxa de um erro
para cada 1010 a 1011 nucleotdeos incorporados,
enquanto as polimerases de RNA apresentam um
erro a cada 103 a 104 nucleotdeos. Isso signica
que a taxa de erros cometida durante a replicao
dos vrus RNA pode ser at um milho de vezes
maior do que aquela resultante da replicao dos
vrus DNA. A diferena nas taxas de mutao se
constitui na principal causa da grande variabi-

95

Gentica e evoluo viral

lidade gentica e antignica dos vrus RNA em


comparao com os vrus DNA.
Os erros de incorporao so essencialmente randmicos, mas a sua deteco em mutantes
naturais indica que podem existir regies onde
h uma maior concentrao de erros, conhecidos
como pontos quentes (hot spots). Essas diferenas
esto relacionadas com a habilidade dos mutantes sobreviverem com essas mudanas. Regies
mais conservadas so aquelas em que as mutaes eventualmente introduzidas no se perpetuam na populao por provocarem efeitos deletrios aos novos gentipos.

enzimas e fatores auxiliares do hospedeiro. Em


tese, a recombinao homloga pode ocorrer entre o genoma do vrus e da clula e entre dois genomas virais. As conseqncias da recombinao
entre dois genomas virais variam de acordo com a
similaridade das seqncias recombinadas e com
o seu impacto no fentipo viral. Cabe ressaltar
que a recombinao entre dois vrus geralmente
ocorre entre vrus da mesma espcie e depende
de uma infeco concomitante por esses vrus.

Genoma A

1.6 Interaes genticas entre vrus


Pareamento e troca
de um segmento

1.6.1 Recombinao
Classicamente, o termo recombinao utilizado para designar um intercmbio de seqncias genticas entre dois genomas. Esse processo
muito estudado em molculas de DNA e ocorre, com grande freqncia, na maioria das clulas eucariotas e procariotas. Alguns mecanismos
de reparo do DNA, por exemplo, baseiam-se em
eventos de recombinao gentica entre os cromossomos homlogos. Mecanismos semelhantes
so observados em vrus DNA e parecem fazer
parte do seu processo evolutivo. Esse processo
envolve o alinhamento de duas molculas com
seqncias semelhantes, a clivagem da cadeia
contnua do DNA, o intercmbio de uma regio
do genoma e a religao da cadeia de DNA, originando molculas hbridas ou recombinantes
(Figura 4.1). Por causa da necessidade do alinhamento de seqncias entre molculas semelhantes, este processo denominado recombinao
homloga. Na biologia dos vrus, recombinaes
podem ocorrer entre dois vrus de uma mesma
espcie viral ou, ocasionalmente, entre o genoma
viral e o DNA da clula hospedeira.
A recombinao homloga parece ser comum entre os vrus DNA e aqueles que apresentam molculas de DNA intermedirias de sua
replicao, como os retrovrus. Em clulas infectadas, esse processo realizado com o auxlio de

Genoma B

Genomas recombinantes A/B

Figura 4.1. Ilustrao simplificada da recombinao


homloga entre duas molculas de DNA.

Nos vrus RNA clssicos, esse evento mais


raro e, provavelmente, no utiliza enzimas celulares. Os picornavrus e provavelmente outros
vrus RNA de genoma no-segmentado apresentam uma forma de recombinao pouco eciente e diferente da recombinao homloga. A
recombinao genmica desses vrus envolve o
mecanismo de escolha do molde (copy-choice). Nesses casos, a polimerase de RNA inicia a sntese
da cadeia lha utilizando uma molcula de RNA
como molde, mas troca de molde durante a polimerizao, resultando em molculas hbridas de
RNA, com seqncias mistas derivadas de mais
de uma molcula molde (Figura 4.2).

96

Captulo 4

Genoma A
A polimerase
troca de molde

Genoma B

Genoma recombinante A/B

Figura 4.2. Ilustrao simplificada do modelo de


recombinao de RNA pelo mecanismo de copy choice.

Alguns exemplos de recombinao de vrus


RNA na natureza servem para ilustrar as suas
possveis conseqncias. Um exemplo clssico

a recombinao entre RNA viral e seqncias


celulares (provavelmente de RNAs mensageiros), alm de recombinaes intramoleculares,
que ocorrem durante infeces persistentes com
o vrus da diarria viral bovina (BVDV). Nesses
casos, o vrus que produz a infeco persistente
no-citoptico e replica continuamente no animal, muitas vezes sem conseqncias clnico-patolgicas. No entanto, eventos de recombinao
e/ou rearranjos genmicos, envolvendo o genoma viral e seqncias celulares, ocasionalmente
resultam na gerao de mutantes citopticos. A
gerao desses mutantes no animal persistentemente infectado seguida do desenvolvimento
de doena fatal, denominada doena das mucosas. Os mutantes citopticos podem conter uma
variedade de mutaes, inseres e rearranjos
genmicos (Figura 4.3.). Casos de recombinao

A
5

pro

Rns

E1

E2

pro

Rns

E1

E2

NS5B

NS5A

NS5B

NS4-A NS4-B

NS5A

Insero Duplicao
N

pro

Rns

E1

E2

Ns3

NS2-3

NS5B

Duplicaes

D
5

NS4-A NS4-B

Ns3

Ns2

C
5

NS5A

Insero

B
5

NS4-A NS4-B

NS2-3

pro

pro

Rns

E1

NS2-3

E2

pro

Ns3

NS4-A NS4-B

NS5A

NS5B

E
5

NS4-A

Ns3

Rns

E1

E2

NS4-B

NS5A

NS5B

Ns2

Deleo

Figura 4.3. Ilustrao de genomas do vrus da diarria viral bovina (BVDV) contendo alteraes genticas. A) Genoma
do vrus de campo no-citoptico; B-E) Genomas de mutantes citopticos gerados por recombinao gentica; B)
Genoma contendo uma insero de seqncia celular; C) Genoma contendo uma insero de gene celular e
duplicao do gene na protena NS3; D) Genoma contendo duplicaes dos genes Npro e NS3; E) Genoma defectivo
contendo uma deleo que abrange os genes das protenas estruturais e a NS2.

97

Gentica e evoluo viral

de amostras de campo e cepas vacinais do BVDV,


com conseqncias diversas, tambm j foram relatadas.
Eventos de recombinao tambm tm sido
descritos nos togavrus e coronavrus, com conseqncias que incluem o surgimento de novos
vrus, apresentando espectro de hospedeiros e
virulncia alterados. No entanto, esses processos
ainda no esto totalmente elucidados. Provavelmente, h uma correlao direta com a estratgia de replicao utilizada por esses vrus. At o
momento, no h evidncia desse tipo de recombinao em vrus com genoma RNA de sentido
negativo.
O mecanismo natural de recombinao tem
sido explorado em laboratrio, para a produo
de vrus recombinantes, com caractersticas determinadas para usos diversos, incluindo estudos
genticos de virulncia e produo de vacinas.

1.6.2 Ressortimento
Esse mecanismo exclusivo dos vrus que
possuem o genoma RNA segmentado (ortomixovrus, buniavrus, arenavrus, reovrus e birnavrus) e pode ocorrer quando h uma infeco
concomitante por duas cepas do mesmo vrus.
Nesses casos, os segmentos genmicos recmreplicados so redistribudos de maneira irregular na prognie viral, resultando em vrions
que contm uma mistura de segmentos dos dois
vrus parentais. Esse mecanismo tem sido bem
documentado nos vrus da inuenza e tem sido
responsabilizado pelo surgimento de cepas altamente patognicas resultantes do ressortimento
entre vrus avirios e de mamferos (Figura 4.4).
Esses eventos ocorrem com maior freqncia em
sunos, que podem ser infectados tanto por vrus
avirios como por vrus de mamferos. De fato,
vrias cepas do vrus da inuenza que causaram
surtos em humanos e sunos podem ter resultado
de ressortimento entre vrus previamente existentes. Do ponto de vista evolutivo, o ressortimento representa um importante evento para o
vrus, pois resulta em uma alterao gentica e
fenotpica muito rpida.

Vrus parental B

Vrus parental A

Prognie A

Prognie A/B

Prognie B

Figura 4.4. Ilustrao do mecanismo de ressortimento


entre dois vrus da influenza resultante de uma coinfeco em sunos.

1.7 Outras interaes virais


1.7.1 Complementao
Esta interao puramente fenotpica e
funcional e no resulta de modicao do genoma viral. Por exemplo, se dois mutantes TS,
determinados por mutaes em genes distintos,
infectarem concomitantemente uma clula, a caracterstica fenotpica pode ser revertida e ambos
os vrus podem replicar a 37C, porm as caractersticas genotpicas permanecem as mesmas.
Esse tipo de complementao do tipo intergnica ou no-allica (nonallelic). Quando as mutaes
determinantes dos TS ocorrem no mesmo gene,
mesmo que com modicaes diferentes, pouco
provvel que ocorra complementao.
Com menor freqncia, a complementao
pode ser intragnica ou allica (allelic). Essa complementao pode ocorrer quando o produto do
gene mutante origina uma protena com mltiplas subunidades, e as subunidades que so funcionais podem complementar a decincia do
complexo nal.

98

O processo de complementao tambm


ocorre em determinadas populaes de vrus que
so submetidas a vrias passagens in vitro. Durante esse processo, so gerados genomas defectivos contendo delees em um ou mais genes.
Esses genomas defectivos no so capazes de
replicar autonomamente, pois no contm genes
que codicam protenas essenciais para a replicao. A presena concomitante de um genoma
ntegro nas clulas infectadas, no entanto, permite a complementao das funes ausentes nos
genomas defectivos e, assim, esses genomas so
continuamente replicados. Embora esse evento
seja bem caracterizado na biologia de vrios vrus in vitro, a sua ocorrncia e signicado biolgico in vivo permanecem incertos.

1.7.2 Mistura fenotpica


Essa alterao caracterizada pela interao
entre dois vrus com a produo de prognie distinta dos vrus parentais. Os vrus resultantes so
caracterizados pela presena de diferentes determinantes antignicos e as partculas virais possuem componentes de ambos os vrus parentais
(Figura 4.5). Como a complementao, a mistura
fenotpica no envolve mudanas genticas na
prognie. Ou seja, os vrions resultantes possuem
componentes estruturais oriundos dos dois vrus
parentais, porm os seus genomas so idnticos
aos dos vrus parentais. A mistura fenotpica
pode ocorrer entre vrus da mesma famlia ou de
famlias diferentes.
Um exemplo de mistura fenotpica entre
famlias distintas ocorre entre membros da Rhabdoviridae e Paramyxoviridae. Os vrus dessas duas
famlias possuem protenas distintas no envelope, porm com funes semelhantes e, quando
co-infectam uma determinada clula, podem realizar a mistura fenotpica. H tambm a possibilidade de produo de pseudovrions, quando o
nucleocapsdeo pertence a um vrus e o envelope
a outro (exemplo: nucleocapsdeo de retrovrus
e envelope de um rabdovrus). Nesse caso, o tropismo dos vrus resultantes ser o mesmo dos rabdovrus, enquanto a prognie formada ser de
retrovrus.

Captulo 4

Vrus parental B

Vrus parental A

Co-infeco de
um hospedeiro

Prognie

Fentipo misto
Sem alteraes no genoma
Possvel: Host range alterado
Resistentes neutralizao

Figura 4.5. Ilustrao da mistura fenotpica resultante da


co-infeco de uma clula por dois vrus diferentes. A
prognie viral pode conter vrus com fentipos mistos,
porm com o genoma de um dos dois vrus parentais.

1.7.3 Poliploidia
A grande maioria dos vrus animais haplide, ou seja, possui apenas uma cpia do genoma nos vrions. Os retrovrus se constituem
em excees, pois os vrions contm duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). Porm, os
paramixovrus podem, ocasionalmente, apresentar mltiplas cpias de seu genoma encapsidados em mltiplos nucleocapsdeos em uma
nica partcula vrica, fenmeno denominado
poliploidia.
Existem descries de isolados do vrus do
sarampo que, ecientemente, produzem vrions
com, pelo menos, duas cpias do genoma. Essas
duas molculas de RNA so complementares e
possuem mutaes diferentes, existindo a necessidade da presena das duas tas para ocorrer a
replicao.

99

Gentica e evoluo viral

2 Evoluo viral

2.1 Origem dos vrus

Quando se fala em evoluo, geralmente


se relaciona esse termo com um processo longo,
que ocorre durante milhes de anos. No entanto,
mesmo para os vrus muito antigos (alguns com
indcios de existncia por mais de 220 milhes de
anos), o processo de evoluo ocorre rapidamente e permanente, em razo do grande nmero
de geraes produzidas em um curto espao de
tempo. As mudanas evolutivas dos vrus se produzem em questes de dias, e possvel avaliar
as suas conseqncias no fentipo viral em nvel
laboratorial. Essa capacidade de mudana possui
implicaes importantes na emergncia de novos
patgenos, como tem sido testemunhado durante as ltimas dcadas, com a emergncia de vrus
como o da imunodecincia humana (HIV), o
parvovrus canino (CPV) e as mudanas peridicas que capacitam os vrus da inuenza a iniciar
novas pandemias.
A evoluo viral tem sido tema de estudos
intensos nos ltimos anos e, conseqentemente,
tem permitido a compreenso dos seus mecanismos e efeitos. Esta seo no pretende ser um tratado exaustivo de um tema to complexo, apenas
se trata de um resumo geral, que inclui algumas
das teorias recentes sobre a origem dos vrus, sua
rpida capacidade de mudana, a maneira como
se estuda a evoluo em laboratrio e no campo,
as implicaes da evoluo viral na patognese e
aparecimento ou emergncia de novas enfermidades. O conhecimento acerca dos mecanismos
utilizados pelos vrus para alterar as suas propriedades genticas e fenotpicas pode permitir a
utilizao de manejos mais adequados dos surtos
e o planejamento mais efetivo de programas sanitrios para o controle de infeces virais.
Todos os seres vivos evoluem com o decorrer
do tempo, mas a rapidez de evoluo dos vrus
RNA situa-se vrias ordens de magnitude acima
da velocidade de evoluo dos organismos cujo
genoma formado por DNA. Essa caracterstica
pode ser explicada pela indelidade e incapacidade de correo das polimerases de RNA, o que
resulta em um nmero maior de erros durante a
replicao do genoma.

O estudo da origem e evoluo dos vrus


realizado principalmente por alinhamento e comparao de seqncias de cidos nuclicos e protenas, anlises logenticas e por estudos das estruturas tridimensionais das enzimas e protenas
estruturais. Ainda que no exista uma evidncia
inequvoca que permita determinar quando se
originaram e com que rapidez evoluram, podese armar que os diferentes vrus no possuem
uma origem comum e que vrios grupos deles
surgiram independentemente. Atravs dos anos,
tm-se proposto vrias teorias sobre a origem
desses agentes. A teoria regressiva prope que os
vrus evoluram por simplicao ou regresso
de parasitos intracelulares que perderam os genes requeridos para a replicao independente.
A teoria de origem celular defende que os vrus surgiram de componentes celulares que adquiriram
a habilidade de replicar de forma autnoma dentro da clula hospedeira. A teoria da co-evoluo
com as clulas muito favorecida na atualidade,
mas de difcil comprovao prope que tanto
os vrus RNA como os vrus DNA se originaram
de plasmdeos (cromossomos acessrios que replicam independentemente do DNA celular).
Estes plasmdeos poderiam ter adquirido, provavelmente por recombinao com o genoma das
clulas hospedeiras, genes que permitiam a sua
transformao em elementos genticos com as
trs caractersticas bsicas dos vrus. Essas caractersticas so: a) codicar mecanismos que permitam a replicao intracelular; b) capacidade de
empacotar o cido nuclico em partculas vricas,
que so biologicamente inativas e relativamente
resistentes no meio extracelular; e c) capacidade
de ser transmitido entre clulas. Pode-se deduzir, portanto, que antes de se converter em vrus,
esses plasmdeos j continham as funes necessrias para a sua replicao independente e que
alguns deles comearam a desenvolver parte da
maquinaria protica (polimerases) que permite
a replicao do seu material gentico. Posteriormente, teriam adquirido os genes que codicam
as protenas necessrias para empacotar o seu
genoma e transport-lo entre clulas. Teriam ad-

100

quirido tambm um variado repertrio de protenas, para uma melhor manipulao das funes
celulares, do sistema imunolgico do hospedeiro
e para a produo de uma prognie mais abundante.

2.2 Quando se originaram os vrus


A dependncia de uma clula hospedeira
para a ocorrncia da replicao poderia implicar que os vrus se originaram depois das clulas eucariotas. No entanto, alguns elementos que
compem os vrus podem ter se originado antes
da evoluo celular. O genoma dos vrus RNA,
por exemplo, pode ter surgido nos primrdios
da vida, em um mundo constitudo por RNA e
que consistiria de molculas de RNA catalticas e
auto-replicativas.
Aparentemente, todos os vrus RNA se originaram de um nico ancestral ou desenvolveram
solues comuns para problemas similares. A
anlise comparativa das seqncias de aminocidos das polimerases dos vrus RNA (enzimas que
sintetizam cpias do genoma RNA) favorece a hiptese de que o seu gene seja codicado por vrus
de procariotas e de eucariotas. Essa observao
indica que a molcula ancestral das polimerases
de RNA provavelmente se originou antes da divergncia evolutiva em procariotas e eucariotas.
Outras superfamlias de enzimas comuns a todos
os vrus RNA e que, como as polimerases, apresentam um alto grau de similaridade, tambm
reforam a hiptese de uma origem muito antiga
e monologentica dos vrus RNA. Essas superfamlias so as helicases e algumas proteases semelhantes a quimiotripsinas.

2.3 Como os vrus ampliaram o seu


repertrio protico
Aps a aquisio dos genes bsicos que permitiam a replicao e construo do capsdeo
viral contendo o genoma, os vrus continuaram
evoluindo e ampliando o nmero de genes do
seu genoma, para codicar novas protenas, e,
conseqentemente, adquirir novas funes e propriedades evolutivas.
Um dos mecanismos utilizados para a aquisio de novas seqncias a recombinao do

Captulo 4

genoma viral com o cido nuclico de outros vrus ou das clulas hospedeiras. A recombinao
do genoma pode ocorrer entre vrus diferentes,
inclusive entre vrus que pertenam a famlias
distintas. Os vrus so muito ativos na obteno
de seqncias genmicas por recombinao com
outros vrus durante a sua evoluo, e essa caracterstica tem dicultado a construo de rvores logenticas nicas, que facilitem uma classicao lgica e nica. Como resultado dessas
recombinaes, vrus de grupos muito distintos
podem possuir genes relacionados e seqncias
homlogas.
A recombinao pode ocorrer entre regies
do prprio genoma viral (recombinao intramolecular), resultando em duplicao de genes,
delees e inseres, com a transformao em
novos genes. Assim, uma determinada seqncia
de nucleotdeos pode duplicar-se vrias vezes e,
dessa maneira, originar famlias de genes, como
ocorre nos poxvrus e no vrus da peste suna
africana (ASFV).
Os vrus tambm podem obter novos genes
mediante a sntese de uma nova seqncia de
nucleotdeos ou pelo uso de seqncias abertas
de leitura (ORFs; open reading frame) alternativas.
Combinaes desses mecanismos j foram descritas, como a duplicao de um gene acompanhada
de mudana de ORF.
Esses processos de recombinao seguem
ocorrendo e podem ter conseqncias diversas
na biologia dos vrus, incluindo alteraes na
especicidade de hospedeiro, tropismo tecidual,
patogenicidade e virulncia, como tambm podem resultar na emergncia de novos vrus.

2.4 Capacidade de mutao viral


O estudo das enzimas que catalisam a replicao dos cidos nuclicos as polimerases tem
demonstrado que as polimerases de DNA celulares possuem uma alta delidade. Isto se deve, em
parte, capacidade dessas enzimas de remover
nucleotdeos inseridos equivocadamente. A taxa
de erro dessas polimerases tem sido calculada em
10-8 a 10-11 nucleotdeos por replicao. Isso signica que, em uma molcula de DNA de um bilho de nucleotdeos polimerizados, apenas um
nucleotdeo errado ser incorporado. A taxa de

Gentica e evoluo viral

erro das polimerases virais de DNA 20 a 100


vezes maior.
Em contraste, as polimerases dependentes
de RNA no possuem mecanismos de correo,
e, por isso, a sua taxa de erro muito alta: entre
10-3 a 10-4 nucleotdeos/replicao. Portanto, cada
novo genoma RNA viral com 10.000 nt contm
uma mdia de trs mutaes pontuais (trs nucleotdeos diferentes do genoma parental). Algumas dessas mutaes podem ser prejudiciais aos
vrus, enquanto outras so neutras e no possuem
nenhum efeito. provvel tambm que algumas
mutaes introduzidas durante a replicao resultem em benefcios para a replicao viral, conferindo vantagens evolutivas aos vrus mutantes.
Uma mesma mutao pode ter efeitos diferentes
para um vrus, dependendo do meio em que se
encontre. Por exemplo, uma determinada mutao pode conferir vantagens para a replicao do
vrus em sunos, porm pode ser adversa para a
sua replicao em bovinos. Essas mutaes, que
ocorrem ao acaso, so mantidas ou descartadas
por meio dos processos de seleo natural por
conferir maior aptido biolgica. O conhecimento
das conseqncias dessas mutaes pode ser til
para a manipulao viral, pois possibilita o desenvolvimento de vacinas baseadas em variantes
virais atenuadas ou adaptadas a outras espcies.
Como cada novo genoma de RNA viral
sintetizado possui pelo menos trs mutaes,
as seqncias genmicas e os vrus individuais
produzidos continuamente so diferentes entre
si. Essa distribuio de indivduos no idnticos, porm muito semelhantes, foi denominada
por Manfred Eigen como quasispecies. Portanto, os indivduos que compem uma quasispecie
apresentam pequenas variaes nas seqncias
genmicas, porm aqueles indivduos que apresentam uma maior aptido biolgica e ecincia
de replicao tornam-se predominantes sobre os
demais e so produzidos em maior abundncia.
Apesar do polimorsmo existir em virtualmente todos os seres vivos, o termo quasispecie viral
utilizado para enfatizar a grande variao que
os vrus componentes de uma mesma populao
exibem. Esse termo utilizado para os vrus RNA
pela sua grande variabilidade gentica. Assim
mesmo, os diferentes vrus RNA apresentam nveis variveis de variabilidade gentica.

101

A caracterstica das polimerases de introduzir mutaes muito favorvel para os vrus,


permitindo a produo de mutantes que, eventualmente, possam se adaptar ao hospedeiro ou
a diferentes condies do meio. Em alguns casos
especcos, os vrus que possuem polimerases
com maior delidade apresentam decincias
em sua aptido biolgica. Isso sugere que a evoluo tende a conservar esta capacidade de erro
das polimerases, mas mantendo-as abaixo de um
limite denominado nvel de erro limite (threshold
error). Acima desse nvel no seria possvel a sobrevivncia dos vrus como espcie.
Os vrus constituem a combinao da grande diversidade de indivduos, com seqncias
diferentes e que possuem a propriedade de produzir prognie abundante. Como exemplo, o
vrus da poliomielite (um picornavrus) produz
uma descendncia de 10.000 indivduos em uma
nica clula infectada. A populao viral sofrer,
ento, um processo de seleo natural cada vez
que as condies do meio se alterem. Assim, os
indivduos com maior aptido para sobreviver
a essas novas condies se tornaro tambm os
mais abundantes.
A alta taxa de alteraes produzidas no genoma dos vrus RNA o motor que permite a explorao rpida de novos espaos evolutivos. Em
outras palavras, as mutaes no genoma podem
reetir em mudanas de aminocidos e essas novas combinaes de aminocidos podem gerar
novas estruturas proticas com propriedades e
funes inditas. Essas propriedades e funes
podem ser importantes para a adaptao do vrus a novos hospedeiros ou para escapar da vigilncia do sistema imune, por exemplo.
importante tambm observar que a seleo natural faz parte do processo evolutivo. O
processo de seleo faz com que os indivduos
que contenham mutaes que favoream a sua
replicao em determinado meio produzam
maior descendncia e predominem na populao. Por exemplo, uma mutao nas protenas do
capsdeo pode fazer com que um vrus escape da
neutralizao por anticorpos. Esses vrus que escapam da neutralizao sofrem um processo de
seleo quando infectam animais vacinados e,
com o tempo, passam a predominar e substituir a
populao viral original.

102

2.5 Estudos laboratoriais de evoluo


O estudo da dinmica de evoluo dos vrus
RNA in vitro tem sido realizado principalmente
em bacterifagos e no vrus da estomatite vesicular (VSV). A freqncia de recombinao do
VSV muito baixa e no detectvel. Esse fenmeno permite que se utilizem duas populaes
virais competindo em clulas, sem que haja intercmbio gentico entre elas. Caso se consiga
uma caracterstica ou marcador que identique
e diferencie essas populaes, possvel saber as
propores de cada populao ao longo de passagens seriadas em cultivos de clulas e avaliar a
aptido biolgica relativa de cada populao. Uma
caracterstica fenotpica utilizada nesses estudos
a resistncia (ou escape) neutralizao por
anticorpos, presente em uma das populaes,
devido a mutaes introduzidas pela polimerase.
Dessa maneira, foram isolados mutantes cujas seqncias consenso diferiam da seqncia da cepa
progenitora somente em um aminocido, sendo
resistentes neutralizao por um anticorpo monoclonal especco. Quando a cepa progenitora e
a cepa resistente neutralizao so misturadas,
possvel determinar a proporo de placas produzidas por cada uma das cepas cultivadas na
presena ou ausncia do anticorpo monoclonal.
No cultivo com a presena do anticorpo, somente
so amplicados os vrus da cepa resistente neutralizao, enquanto no cultivo sem anticorpos
so produzidas placas produzidas por vrus das
duas cepas. Dessa forma, possvel quanticar a
proporo de placas formadas por componentes
de cada cepa e determinar qual cepa apresentou
maior aptido biolgica.
Esses experimentos podem ser relacionados
com muitas observaes epidemiolgicas realizadas em populaes animais. As altas densidades
animais nas criaes intensivas requerem programas sanitrios especiais, pois, aps a introduo
de um patgeno, a aglomerao de animais favorece os ciclos de infeco iniciados com grandes populaes de vrus, e a evoluo viral contribuiria para uma maior aptido biolgica. Em
contraposio, as baixas densidades de animais
na populao produzem indiretamente um gargalo gentico e, como conseqncia, os vrus so

Captulo 4

mais benignos, alguns animais no adoecem e


podem desenvolver imunidade natural por contato com o vrus de baixa aptido biolgica.

2.6 Exemplos de evoluo viral


Mesmo que a capacidade terica de mutao e explorao do espao evolutivo por parte
dos vrus parea ilimitada, a estrutura e funes
das diferentes protenas e cidos nuclicos desses
agentes, assim como as interaes com os hospedeiros, j sofreram um processo intenso e prolongado de otimizao da aptido biolgica. Portanto, provavelmente h restries que limitem
a capacidade real de mudana. Por essa razo,
possvel que vrus isolados de uma mesma regio
com um grande intervalo de tempo sejam virtualmente idnticos. Ou seja, j teriam atingido um
gentipo/fentipo equilibrado e sucientemente
evoludo ou, por outro lado, j teriam esgotado a
sua capacidade de evoluo.
Quando se analisa a evoluo viral, podese observar como os diferentes vrus utilizam
distintas estratgias evolutivas. Em seguida, so
apresentados alguns exemplos que ilustram essas
mudanas evolutivas que conduzem aquisio
de uma maior aptido biolgica, isto , produo de prognie viral mais bem adaptada e mais
numerosa.
Existem vrus cujas mutaes facilitam a
sua adaptao ao meio e outros cujas alteraes
genticas alteram a sua virulncia. Existem tambm aqueles que alteram as suas propriedades
antignicas para garantir seus ciclos contnuos de
transmisso e alguns que usam estratgias que
ampliam seu tropismo para outras espcies e/ou
tecidos. Todas essas alteraes ocorrem com o
objetivo nico de garantir a sobrevivncia e manuteno desses agentes na natureza.

2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tempo versus fatores ambientais


O vrus da estomatite vesicular (VSV) um
vesiculovrus pertencente famlia Rhabdoviridae.
O VSV infecta uma grande variedade de ruminantes e sudeos domsticos e silvestres, causando uma doena clinicamente semelhante febre

Gentica e evoluo viral

aftosa, caracterizada por febre e leses vesiculares na boca, focinho, patas e em regies do corpo
com abrases ou leses mecnicas.
As anlises logenticas de isolados do VSV
de vrias regies da Amrica Central e do Norte
tm demonstrado que as seqncias de cepas de
uma mesma regio geogrca apresentam um
alto grau de conservao, mesmo quando isoladas a grandes intervalos de tempo (at 30 anos).
Essa caracterstica no observada para os vrus
isolados na mesma poca em diferentes regies.
A distribuio logentica mostra um melhor
agrupamento dos vrus por regies geogrcas. A
evoluo desse vrus depende de presses de seleo relacionadas com fatores ecolgicos, como
os vetores que transmitem o vrus e os animais
reservatrios que o mantm. Para esse vrus, no
foi detectada a evoluo por presso imunolgica seletiva, que muito evidente para o vrus da
inuenza, por exemplo.

2.6.2 Mixomatose na Austrlia


Muitos estudos clssicos demonstram a evoluo dos vrus nas populaes humanas e animais. Em um deles, observou-se como o vrus da
mixomatose dos coelhos evoluiu aps a sua introduo na Austrlia. A mixomatose uma doena
produzida por um poxvrus, cujos hospedeiros
naturais so os coelhos americanos do gnero
Sylvilagus. Essa enfermidade conhecida desde
1896, e a transmisso ocorre mecanicamente por
insetos. Nos hospedeiros naturais, a infeco produz bromas localizados e benignos. Porm, ao
contrrio da enfermidade branda produzida nos
coelhos americanos, o vrus do mixoma produz
uma infeco letal nos coelhos europeus do gnero Oryctolagus.
Nas primeiras dcadas do sculo passado,
coelhos europeus foram introduzidos da Austrlia propositalmente e, como no existiam predadores naturais, esses animais se reproduziram
rapidamente, tornando-se uma praga para a agricultura e pecuria. Assim, em 1950, um programa de controle biolgico dos coelhos com o vrus
da mixomatose foi aplicado naquele pas com o
objetivo de solucionar o problema da superpopulao.

103

A cepa viral utilizada era oriunda do Brasil,


isolada pelo Instituto Oswaldo Cruz em 1911. Inicialmente, a disseminao do vrus no foi ampla
e permaneceu restrita aos habitats onde era introduzido, sem disseminao para ecossistemas
vizinhos. Porm, observaram-se, posteriormente,
centenas de coelhos doentes em locais muito distantes dos locais originais de introduo do vrus.
A doena se distribuiu principalmente pelas margens dos grandes rios, onde os mosquitos eram
mais abundantes. O vero seguinte foi mido, e a
enfermidade se disseminou rapidamente, resultando em mortalidade de at 99%. No entanto,
no ano seguinte, observou-se que uma variante
menos virulenta do vrus estava gradativamente
substituindo a cepa original de alta virulncia.
A virulncia da cepa original e das cepas de
campo isoladas na Austrlia foi determinada em
coelhos de laboratrio e a cada isolado se atribuiu um grau de virulncia entre I e V. A cepa
original foi 100% letal em 11 a 13 dias aps a inoculao (virulncia grau I). Algumas das cepas de
campo produziram uma letalidade entre 70-95%,
com mdia de sobrevivncia de 17 a 20 dias (virulncia grau III). Outras cepas matavam menos
de 50% dos coelhos infectados e produziam uma
doena mais benigna (virulncia grau IV). Aps
dois anos, todos os vrus de campo recuperados
na Austrlia possuam grau III.
A seleo de cepas menos letais ocorreu em
conseqncia da transmisso do vrus para os
mosquitos, que foi prolongada para os vrus com
virulncia de grau III pela maior sobrevivncia
dos coelhos. Como conseqncia, os animais infectados produziam vrus por mais tempo, dando maior oportunidade aos mosquitos de se contaminar e transmitir a doena. Por outro lado, os
coelhos infectados com a cepa original de grau I
morriam rapidamente, e o ciclo de transmisso
era interrompido.
A populao de coelhos na Austrlia tambm sofreu uma seleo para a resistncia mixomatose. A nova gerao de coelhos descendeu
dos 10% da populao original que sobreviveu
doena. Durante sete anos, antes de comearem
os surtos de mixomatose na primavera, coelhos
jovens eram capturados nas reas endmicas
e mantidos em cativeiro at atingirem a idade

104

adulta e os nveis de anticorpos maternos desaparecerem. Esses coelhos foram desaados com
uma cepa de virulncia grau III. A mortalidade
foi superior a 90% no primeiro ano e somente
30% no stimo ano.
Embora a mixomatose tenha sido introduzida deliberadamente na Austrlia, pode-se considerar que esse foi um caso de enfermidade emergente. Humanos infectaram coelhos europeus
com o vrus da mixomatose, uma espcie na qual
o vrus produz uma doena muito mais severa. A
emergncia de uma enfermidade pode estar relacionada com uma mudana evolutiva no agente
causal, porm a enfermidade pode emergir mesmo na ausncia de mutaes virais.
No caso da mixomatose na Austrlia, o vrus
evoluiu, reduzindo a sua virulncia. No entanto,
no h um consenso de que todos os vrus evoluem no sentido da atenuao. muito comum
se considerar que os vrus evoluem para uma
forma inofensiva para o seu hospedeiro, o que,
provavelmente, poderia ser melhor para o futuro
da populao viral. Aos parasitas interessa no
produzir muitos danos na populao hospedeira,
para que esses sobrevivam e permitam a sua amplicao e transmisso. Contudo, o xito evolutivo de uma espcie depende essencialmente da
gerao de uma descendncia numerosa, e isso
no est necessariamente associado com atenuao da doena nos hospedeiros.

2.6.3 Vrus da influenza


Os vrus da inuenza tm utilizado uma
srie de estratgias e alteraes evolutivas que
permitem a sua contnua circulao mesmo em
populaes com certo grau de imunidade. Existem razes evidentes pelas quais se estuda muito
esses vrus: ocorreram quatro pandemias de inuenza em um sculo e, na pandemia de 1918,
morreram entre 20 e 50 milhes de pessoas.
O vrus da inuenza um ortomixovrus,
possui envelope e seu genoma composto por
oito segmentos de RNA de sentido negativo, a
maioria dos quais codica somente uma protena. O envelope viral possui duas glicoprotenas:
a hemaglutinina (16 tipos) e a neuraminidase
(nove tipos), e as cepas so designadas conforme

Captulo 4

a composio da superfcie viral por estas protenas (H3N2, H5N1, H3N8).


A hemaglutinina (HA) a protena que se
liga a molculas da superfcie celular que possuem cido silico, que servem como receptores para o vrus. A HA tambm a protena que
induz a produo de anticorpos neutralizantes
e protetores pelo hospedeiro. A neuraminidase
(NA) atua durante o egresso do vrus, clivando
o cido silico dos glicoconjugados e permitindo,
dessa maneira, que a prognie viral seja liberada
da clula.
Os vrus da inuenza so mestres nas mudanas genticas e antignicas. Ao se estudar os
diferentes isolados, so observadas variaes antignicas pontuais e progressivas na HA. Essas
pequenas variaes denominam-se drift antignico (pode ser traduzido como substituio gentica, principalmente por mutaes em ponto)
e permitem ao vrus reinfectar uma populao
parcialmente imune, que ainda possui anticorpos
produzidos por uma infeco recente, mantendo
o vrus circulante na populao. Contrastando
com essas variaes pequenas, as alteraes radicais na HA e NA denominam-se shift (troca),
e ocorrem pelo intercmbio dos respectivos genes entre dois vrus da inuenza quando estes
co-infectam um mesmo hospedeiro. Esses shifts
antignicos foram responsveis pelas pandemias
de 1957 e 1968, e acredita-se que so produzidos
periodicamente pela criao conjunta de aves e
sunos. Ao contrrio, os segmentos genticos do
vrus que causou a pandemia de 1918 se originaram completamente de um ancestral avirio.
Alm do drift e shift, so detectadas inseres de
seqncias e outros mecanismos que permitem o
processamento proteoltico da HA, alterando o
tropismo tecidual e a patogenicidade.
Assim, os vrus da inuenza evoluem por
meio de dois mecanismos principais: mutaes
em ponto, que conferem pequenas alteraes antignicas; e ressortimento, que proporciona grandes alteraes antignicas e/ou de virulncia. A
espcie animal que geralmente abriga os eventos
de ressortimento a suna, que pode ser infectada tanto por vrus avirios como por vrus humanos ou sunos.
Em 2005, foi publicado um artigo que descreve como o vrus que ocasionou a pandemia de

105

Gentica e evoluo viral

1918 foi recriado em laboratrio. O mais marcante deste fato que esta pandemia ocorreu muito
antes da identicao do vrus da inuenza, que
somente foi isolado no princpio dos anos 1930.
Os segmentos genmicos de RNA do vrus foram
recuperados de amostras de pulmo xadas em
formalina, que estavam guardadas, e tambm de
tecidos de uma vtima da pandemia de 1918 que
havia sido enterrada na permafrost (terra permanentemente congelada, no Alasca). Por meio de
metodologia de gentica reversa, foi possvel recriar o vrus em laboratrio e estudar algumas de
suas caractersticas. As seqncias dos genes do
vrus de 1918 so relacionadas com o vrus H1N1
avirio, mais do que com qualquer outro isolado
H1N1 de mamfero. Esses achados aumentaram
a preocupao atual com os casos de inuenza
de origem aviria pelo vrus H5N1, que pode
infectar humanos. At o momento, no h evidncias de que este vrus possua a habilidade de
ser transmitido entre humanos, pois a replicao
viral connada ao trato respiratrio inferior e
provoca a morte de pessoas em poucos dias. Porm, medida que o nmero de pessoas infectadas aumente, a probabilidade de mutaes que
permitam a transmisso entre humanos tambm
aumentar.
Os trs tipos de alteraes evolutivas descritas, drift e shift antignico e inseres na hemaglutinina conferem ao vrus da inuenza uma maior
aptido biolgica, uma vez que podem reinfectar
uma populao parcialmente imune ou ampliar
o tropismo tecidual, produzindo uma prognie
mais abundante.

2.6.4 Parvovrus canino


O parvovrus canino (CPV) surgiu subitamente como causa de enfermidade de ces na
dcada de 1970 e, em 1978, foi diagnosticado simultaneamente em vrios pases, causando enfermidade grave na populao canina. Este vrus se
originou a partir de um parvovrus j conhecido
anteriormente, o vrus da panleucopenia felina
(FPLV), por mutaes em ponto na protena VP2
do capsdeo, stio de ligao do vrion aos receptores celulares. Assim, o novo vrus foi capaz de
infectar e, posteriormente, se adaptar a uma nova
espcie hospedeira.

Estudos das mutaes responsveis pelo


cruzamento da barreira entre espcies indicam
que mudanas em apenas dois cdons (posies
93 e 323) da VP2 do FPLV possibilitaram ao vrus infectar ces e linhagens celulares de origem
canina. Posteriormente foi demonstrado que as
mesmas substituies desses cdons no CPV pelos correspondentes do FLPV eliminam a predileo do vrus pela espcie canina.
Como a populao canina no possua anticorpos contra o novo agente, os primeiros seis
meses aps o surgimento do CPV foram seguidos
de uma pandemia mundial, que produziu gastrenterite hemorrgica grave com altos ndices de
mortalidade em ces. Esse agente foi denominado CPV-2 e, nos anos seguintes, sofreu algumas
alteraes que permitiram uma adaptao maior
aos hospedeiros caninos, originando os bitipos
CPV-2a e CPV-2b. Um terceiro bitipo, o CPV-2c,
tem sido descrito na populao canina nos ltimos anos. Acredita-se que o CPV no perdeu a
sua capacidade inicial de infectar felinos, pois a
infeco natural tem sido demonstrada em gatos
domsticos. Os CPVs que existem atualmente circulando na populao canina so menos virulentos do que os originais, provavelmente reetindo
uma evoluo do vrus no sentido de se adaptar
aos novos hospedeiros.

2.7 Concluses
Os vrus so os mestres das mudanas e
evoluo gentica. importante conhecer as estratgias que esses agentes utilizam para melhor
reconhecer enfermidades produzidas por vrus
emergentes e por vrus conhecidos que produzam doenas atpicas. medida que se intensica
a explorao pecuria e se aumenta a densidade
dos animais, torna-se necessria a implementao
de programas sanitrios especiais que reduzam a
possibilidade de introduo de novos patgenos
nas criaes. importante considerar tambm
que todos os vrus so importantes, mesmo os
que aparentemente no produzem enfermidades no homem ou em animais, pois esses agentes podem alterar a sua gama de hospedeiros e
produzir enfermidades devastadoras. Exemplos
recentes incluem a infeco de humanos, ces e

106

felinos com novos subtipos do vrus da inuenza, o surgimento do SARS-CoV, que matou centenas de pessoas na sia e a inusitada infeco
de mamferos marinhos com variantes do CDV,
causando alta mortalidade no mar Mediterrneo.
Assim, tendo em vista a sua plasticidade e capacidade de adaptao e evoluo, nenhum vrus
pode ser considerado sem importncia.

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REPLICAO VIRAL
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz

1 Introduo

109

2 Conceitos bsicos: infeco, susceptibilidade, permissividade

109

3 Etapas da replicao

110

3.1 Adsoro

111

3.2 Penetrao
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie celular
3.2.2 Penetrao aps endocitose
3.2.3 Outros mecanismos de penetrao

114
114
114
117

3.3 Etapas aps a penetrao


3.3.1 Desnudamento
3.3.2 Movimentao intracelular
3.3.3 Penetrao nuclear

118
118
118
119

3.4 Expresso gnica

119

3.5 Replicao do genoma


3.5.1 Replicao dos vrus DNA
3.5.2 Replicao dos vrus RNA

121
122
126

3.6 Morfognese, maturao e egresso


3.6.1 Maturao intracelular (citoplasmtica ou nuclear)
3.6.2 Maturao por brotamento em membranas celulares

131
131
132

4 Bibliografia consultada

134

1 Introduo
A produo de prognie gentica e fenotipicamente semelhante ao vrus parental se constitui
no evento central da existncia e perpetuao dos
vrus na natureza. Por isso, por uma viso evolutiva simplista, a multiplicao dos vrus possui
uma nalidade nica e objetiva: produzir prognie vivel. As alteraes da siologia celular, associadas com as infeces virais que podem resultar em doena e at em morte do hospedeiro ,
so meras conseqncias das interaes do vrus
com as clulas; interaes que so absolutamente
necessrias para o agente atingir esse objetivo.
Os vrus so os organismos mais simples
que existem: os mais simples so compostos por
uma molcula de cido nuclico envolta por uma
camada protica. Quando esto fora de clulas
vivas, os vrus so estruturas qumicas, desprovidas de qualquer atividade biolgica. No possuem metabolismo prprio, no so capazes de
produzir autonomamente nem os componentes
mnimos para a sua multiplicao. Por isso, necessitam utilizar as organelas e o metabolismo
celular para replicar o seu genoma e produzir as
protenas necessrias para a construo de novas
partculas vricas. Esses agentes s adquirem atividade biolgica dentro de clulas vivas. Mesmo
os vrus mais complexos e evoludos so dependentes de processos biolgicos celulares para a
sua multiplicao. Por isso, os vrus so, tradicionalmente, classicados como parasitas intracelulares obrigatrios.
O termo replicao que em sua origem signica a sntese de molculas de cidos nuclicos
a partir de um molde tem sido universalmente
utilizado para designar o processo de multiplicao dos vrus como um todo e assim ser utilizado neste texto. Este captulo abordar os aspectos
gerais da replicao dos vrus; os aspectos peculiares de cada famlia sero abordados nos captulos especcos.

2 Conceitos bsicos: infeco,


susceptibilidade e permissividade
A palavra infeco deriva do latim infere, que
signica inserir, penetrar, introduzir. No entanto,

embora a penetrao (ou infeco, no signicado


estrito da palavra) seja uma etapa indispensvel
replicao viral, por permitir a introduo do
material gentico na clula, o termo infeco possui um signicado mais amplo em Virologia. A
penetrao do vrus na clula, por si s, no assegura a produo de prognie viral, pois outras
etapas intracelulares so necessrias. Por isso, o
termo infeco tem sido utilizado para denir o
processo replicativo do agente como um todo, incluindo a penetrao e as etapas subseqentes da
replicao. A srie de etapas que inicia com a penetrao e culmina com a liberao de prognie
viral tambm denominada ciclo replicativo.
Se todas as etapas da infeco forem completadas e resultarem na produo de prognie
viral vivel, a infeco dita produtiva. Se, aps
a penetrao, o ciclo replicativo for interrompido
em alguma etapa, a infeco dita abortiva. Susceptibilidade e permissividade so propriedades
complementares que denem a capacidade das
clulas de suportar as etapas da replicao viral.
Susceptibilidade refere-se capacidade das clulas
de serem infectadas naturalmente pelo vrus, enquanto permissividade refere-se s condies intracelulares para a ocorrncia da multiplicao viral.
Assim, as clulas que suportam o ciclo replicativo
completo, aps a infeco natural, so simultaneamente susceptveis (permitem a penetrao) e
permissivas (permitem a ocorrncia das etapas intracelulares). Essas duas propriedades, no entanto, nem sempre ocorrem concomitantemente em
uma clula. Em algumas situaes, clulas permissivas podem ser no susceptveis infeco,
devido falta de receptores para a adsoro e penetrao do vrus. Essas clulas somente podero
ser alvo de uma replicao produtiva se o material gentico viral for introduzido articialmente (i.e., por transfeco). Por outro lado, clulas
susceptveis infeco natural podem apresentar
um bloqueio intracelular em alguma etapa da
replicao, sendo denominadas no-permissivas.
Se esse bloqueio ocorrer aps algumas etapas do
ciclo, essas clulas so ditas semipermissivas. Para
simplicar, neste texto, o termo susceptibilidade
ser utilizado para denir a capacidade das clulas de suportar todas as etapas da replicao viral
aps a infeco natural.

110

A susceptibilidade determinada pela interao de mltiplos fatores virais e celulares. Em


razo da complexidade dessas interaes, as espcies animais (e tambm as clulas de cultivo)
apresentam uma ampla variao de susceptibilidade a diferentes vrus. O termo espectro de hospedeiros (host range) utilizado para denir o conjunto de espcies animais (host range in vivo) ou de
diferentes clulas (host range in vitro) que podem
ser infectados naturalmente por um determinado
vrus. O termo tropismo refere-se predileo do
vrus por determinadas clulas, tecidos ou rgos
do hospedeiro para se multiplicar. O principal
fator celular mas no o nico determinante
da susceptibilidade e do tropismo a presena
de molculas especcas na superfcie celular,
denominadas genericamente de receptores virais.
Os receptores virais so molculas da membrana
plasmtica que desempenham funes diversas
na biologia das clulas, das quais os vrus se utilizam para se ligar e iniciar a infeco.

3 Etapas da replicao
A multiplicao dos diferentes vrus apresenta vrias etapas em comum, apesar da diversidade estrutural, do tipo e da organizao
genmica e das diferentes estratgias de replicao. Essas etapas ocorrem de forma ordenada e
seqencial e envolvem interaes complexas entre as protenas e o genoma viral com organelas e
macromolculas celulares. O ciclo replicativo de
todos os vrus inclui necessariamente as etapas
de adsoro, penetrao, desnudamento, expresso gnica (transcrio e traduo), replicao do
genoma, morfognese/maturao e egresso. Essas etapas esto ilustradas esquematicamente na
Figura 5.1.
A maior parte dos conhecimentos sobre os
mecanismos biolgicos e moleculares da multiplicao dos vrus somente foi obtida a partir
do estabelecimento dos cultivos celulares. Aps
a inoculao do vrus em clulas cultivadas in
vitro, os cultivos so deixados em repouso para
que as partculas vricas iniciem gradativamente a entrar em contato com a superfcie celular.
Essa etapa denominada adsoro. Imediatamente aps a adsoro, os vrions penetram nas clu-

Captulo 5

las e iniciam a infeco. A coleta e quanticao


do vrus presente no sobrenadante dos cultivos a
diferentes intervalos, aps a inoculao, permite
a identicao de trs fases: eclipse, maturao e
inativao (Figura 5.2).

9
1

Citoplasma
4

7
6

Ncleo

Figura 5.1. Representao esquemtica do ciclo


replicativo de um vrus DNA. 1) Adsoro; 2) Penetrao;
3) Desnudamento; 4) Transcrio dos genes virais; 5)
Traduo dos RNA mensageiros (mRNA) e produo
das protenas virais; 6) Replicao do genoma; 7)
Morfognese; 8-9) Egresso.

Aps a remoo do material que foi inoculado e durante um perodo varivel, apenas uma
pequena quantidade de infectividade pode ser
detectada no sobrenadante. Esse perodo em que
o vrus virtualmente desaparece denominado
eclipse e coincide com as fases iniciais da infeco.
A durao da fase de eclipse depende do ciclo replicativo de cada vrus, que varia entre quatro a
seis horas nos picornavrus e mais de 40 horas em
alguns herpesvrus. A fase de eclipse seguida
por um perodo em que a prognie viral vai sendo produzida e gradativamente liberada pelas
clulas, acumulando-se no sobrenadante (Figura
5.2). Essa fase denominada maturao. Nos vrus
que produzem lise celular, a quantidade de vrus
no sobrenadante aumenta at atingir um plat,
que coincide com a perda da integridade funcional e estrutural das clulas. A partir da, o ttulo
viral no sobrenadante tende a decrescer gradativamente dependendo do vrus devido ina-

111

Replicao viral

tivao da infectividade das partculas vricas e


perda da viabilidade das clulas. Essa fase denominada inativao. Em infeces por vrus nolticos, as clulas podem produzir prognie viral
indenidamente, mas o balano entre a produo
e a inativao no permite que o ttulo viral no
sobrenadante aumente indenidamente.

Maturao

Inativao

Ttulo viral no sobrenadante

Eclipse

Inoculao

Horas

Figura 5.2. Fases da infeco por vrus lticos em cultivo


celular: eclipse, maturao e inativao.

3.1 Adsoro
A primeira etapa da replicao a ligao
especca das partculas vricas na superfcie das
clulas hospedeiras evento denominado adsoro . Essa ligao mediada por protenas da
superfcie dos vrions (viral attachment proteins,
VAPs) que interagem com os receptores na superfcie das clulas. Nos vrus sem envelope, a
funo de ligao exercida pelas protenas do
capsdeo; nos vrus envelopados, pelas glicoprotenas do envelope. Os receptores celulares para
os vrus so geralmente protenas (glicoprotenas)
ou carboidratos (presentes em glicoprotenas ou
em glicolipdios da membrana). Em comparao
com os receptores proticos, os carboidratos so
menos especcos, pois podem estar presentes em
uma variedade de molculas de membrana. Alguns vrus so estritamente dependentes de um
receptor especco (exemplos: rinovrus, poliov-

rus, vrus da febre aftosa [FMDV]) enquanto outros podem utilizar receptores alternativos para
iniciar a infeco (exemplo: herpesvrus, alguns
togavrus). A capacidade de utilizar mais de um
receptor para iniciar a infeco pode representar
uma vantagem evolutiva, pois oferece a esses vrus a possibilidade de infectar diferentes tipos de
clulas e/ou hospedeiros.
Os receptores celulares para vrus so molculas de membrana que desempenham funes
diversas na biologia celular e que, ocasionalmente, servem para os vrus se ligarem e iniciarem
a infeco. Os receptores celulares para vrios
vrus animais j foram identicados (Tabela 5.1).
Na maioria dos casos, a presena dos receptores
determina o espectro de hospedeiros e o tropismo
do vrus. Conseqentemente, a presena e distribuio dos receptores tambm so determinantes
fundamentais da patogenia da infeco. O nmero de receptores na superfcie de uma clula parece ser extremamente varivel. Essas molculas
podem ser raras e especcas de algumas clulas
ou abundantes e amplamente distribudas em vrias clulas.
Em alguns casos, as interaes entre as VAPs
e os receptores no so sucientes para permitir
o incio da infeco. Nesses casos, a interao dos
vrions com protenas adicionais da membrana
celular, denominadas co-receptores, necessria
para que ocorra a penetrao. Por exemplo, a interao inicial dos adenovrus com a clula hospedeira envolve a ligao da protena ber com
um receptor celular. Essa interao no suciente para assegurar a penetrao, mas necessria para que a protena viral penton interaja com
uma segunda molcula da membrana celular a
vitronectina e resulte em penetrao. O vrus
da imunodecincia humana (HIV-1) liga-se ao
receptor CD4 e utiliza como co-receptor um receptor de citocina. A interao inicial do vrus do
herpes simplex humano (HSV-1) com as clulas
mediada pela interao da glicoprotena gC (ou
gB) com o sulfato de heparina na superfcie celular. A fuso e penetrao, no entanto, dependem
de interaes secundrias entre a gD (e tambm a
gH) com outras molculas da membrana.

112

Captulo 5

Vrus RNA

Vrus DNA

Tabela 5.1. Receptores celulares e mecanismos de penetrao dos principais vrus animais
.
Forma/local de Penetrao

Famlia

Vrus

Receptor Viral

Herpesviridae

Herpes simplex

Sulfato de heparina/receptor homlogo


ao fator de necrose tumoral (TNF) e
fator de crescimentonNeuronal (NGF)

Pseudoraiva

Sulfato de heparan (HS),


proteoglicanos (HSPG) e coreceptores

Fuso na membrana
plasmtica

Adenoviridae

Adenovrus 2

Receptor para adenovrus e


vrus Coxsackie B (CAR)

Endocitose dependente
de clatrina

Poxviridae

Vaccinia

Fator de crescimento epidermal (EGF)

Membrana plasmtica e/ou


macropinossomo

Polyomaviridae

SV-40

Molculas do complexo maior de


histocompatibilidade (MHC)
classe I

Endocitose caveolar e/ou


retculo endoplasmtico

Papillomaviridae

Papilomavrus
bovino

Integrina !-6 e molculas


semelhantes ao heparan

Endocitose dependente
de clatrina

Parvoviridae

Parvovrus
canino

Receptor da transferrina

Endossomos

Asfarviridae

Peste suna
africana

nd

Endossomos

Arteriviridae

Vrus elevador da
desidrogenase lctica

Molculas do complexo maior de


histocompatibilidade (MHC) classe II

Endossomos

Coronaviridae

Vrus da Hepatite dos


Murinos

Glicoprotena biliar dos murinos/


antgeno carcinoembriognico

Endossomos

Coronavrus
humano 229E

CD13 (Aminopeptidase)

Membrana plasmtica

Orthomyxoviridae

Vrus da influenza

cido silico

Endocitose dependente de clatrina

Paramyxoviridae

Vrus do sarampo

CD46

Membrana plasmtica

Togaviridae

Semliki Forest

Molculas do MHC classe II

Endocitose dependente de clatrina

Flaviviridae

Vrus da diarria viral


bovina

CD46 bovino

Endossomos

Rhabdoviridae

Vrus da raiva

Receptor da neurotropina (p75NTR)

Endocitose dependente de clatrina

Filoviridae

Vrus Ebola e Marburg

Receptor folato !(FR-!)

Caveola

Retroviridae

HIV-1

CD4 e receptor de citocinas

Membrana plasmtica

Bunyaviridae

Vrus Hantaan

Integrinas ("3)

Endocitose dependente de clatrina

Picornaviridae

Vrus da febre aftosa

Integrinas (!v)

Endocitose

Caliciviridae

nd

nd

Endossomos

Reoviridae

Reovrus

cido silico e molcula 1 de adeso


jjuncional (JAM 1)

Endossomos

Rotavrus

Integrinas !V"3 e protenas cognatas


do choque trmico (hscp70)

Membrana citoplasmtica (lipid rafts)

Fuso na membrana plasmtica

* Adaptado de Klasse et al. (1998); de Pelkmans e Helenius (2003) e referncias selecionadas. CAR: receptor de virus
b
coxsackie B e adenovirus. no determinado.

Replicao viral

Em cultivo celular e provavelmente tambm in vivo o contato de um vrion com uma


clula um evento que ocorre ao acaso. Ou seja,
a clula hospedeira no atrai a partcula vrica a
distncia. Uma vez em contato com a superfcie
da clula, componentes externos dos vrions interagem quimicamente (interaes eletrostticas,
pontes de hidrognio etc.) com molculas da
membrana plasmtica, podendo resultar ou no
em penetrao e incio da infeco.
O processo de adsoro independente de
energia e do metabolismo celular e ocorre com
a mesma ecincia temperatura corporal ou a
4C. Embora seja de alta especicidade, a interao de uma molcula de VAP com o receptor de
fraca intensidade e, isoladamente, no seria suciente para proporcionar a ocorrncia das etapas
seguintes da penetrao. Para isso, necessria
a ocorrncia simultnea de dezenas ou centenas
dessas interaes. Ou seja, a adsoro viral na
superfcie celular um processo cooperativo, resultante de mltiplas interaes entre protenas
da superfcie dos vrions com os seus respectivos
receptores.
Embora a adsoro dos vrions superfcie
celular seja a etapa inicial e indispensvel para o
incio da replicao, esse evento nem sempre resulta em infeco produtiva. provvel que um
nmero muito grande de interaes entre vrions
e clulas no resulte em penetrao, seja pela ausncia de receptores especcos para o vrus, seja
pela debilidade dessas interaes. Partculas vricas podem se ligar superfcie da clula e no
serem internalizadas. Outro cenrio possvel a
ligao, porm com internalizao e liberao do
nucleocapsdeo em compartimentos inadequados
para a replicao (p. ex.: lisossomos). possvel
tambm que vrions sejam internalizados em clulas que no possuam os componentes necessrios continuao do ciclo. Resumindo, a ligao
dos vrions a molculas da membrana celular
uma etapa absolutamente necessria, porm nem
sempre suciente para garantir a continuidade
do ciclo replicativo.
Alm de proporcionar o contato inicial com
a clula, as interaes dos vrions com os receptores tambm podem desencadear alteraes es-

113

truturais nas protenas de superfcie dos vrions.


Para alguns vrus (p. ex.: poliovrus), essas alteraes so absolutamente necessrias para a penetrao, desnudamento e continuao do ciclo.
Por isso, alm de servir para a ligao inicial, os
receptores, para alguns vrus, podem ser necessrios para a desestabilizao das partculas vricas
e conseqente liberao do genoma no interior
da clula. Nos vrus envelopados, a ligao ao receptor pode induzir alteraes conformacionais
nas VAPs, que promovem a fuso do envelope
com a membrana celular. No caso do HIV-1, a
ligao do vrion ao receptor CD4 necessria
para estimular a capacidade fusognica da glicoprotena TM.
Em alguns casos, a ligao dos vrions aos
receptores tambm pode induzir sinais qumicos
intracelulares, que podem estar envolvidos na
facilitao da endocitose, no transporte intracelular dos nucleocapsdeos e at mesmo na sobrevivncia da clula. Por outro lado, a penetrao
e a posterior replicao viral ativam mecanismos
imunolgicos de defesa, como a produo de interferon do tipo I (IFN-I).
A distribuio dos receptores na superfcie
apical das clulas parece ser aproximadamente
uniforme. A penetrao dos vrions, no entanto,
parece ocorrer preferencialmente em alguns locais. Isso ocorre porque a ligao das partculas
vricas aos receptores acompanhada de movimentos laterais dessas molculas, resultando na
aglomerao dos receptores em determinados locais. Esses locais so facilmente observveis sob
microscopia eletrnica (ME) e aparecem como
espessamentos da membrana plasmtica. Esses
espessamentos so decorrentes do acmulo de
uma protena denominada clatrina, envolvida em
sistemas de transporte intracelular por vesculas.
A aglomerao dos vrus que penetram por endocitose mediada por receptores, em determinados locais, precede e promove a invaginao da
membrana, com a conseqente formao da vescula endoctica contendo os vrions em seu interior. A endocitose mediada por receptores um
processo siolgico utilizado pelas clulas para
internalizar diversas molculas, das quais os vrus tiram proveito para iniciar a infeco.

114

3.2 Penetrao
A penetrao a etapa subseqente adsoro e envolve a transposio da membrana
plasmtica, permitindo a introduo do nucleocapsdeo (genoma viral + protenas) no interior
da clula, local onde ocorrero a expresso gnica e a replicao do genoma. A transposio da
membrana pode ocorrer na superfcie celular ou
j no interior do citoplasma, a partir de vesculas
produzidas por endocitose, fagocitose ou macropinocitose. Dependendo da biologia do vrus, a
penetrao pode ocorrer sem prvia internalizao
(se ocorrer na superfcie celular) ou aps internalizao (se ocorrer a partir de vesculas intracitoplasmticas). No entanto, a internalizao de
vrions em vesculas endocticas no assegura a
ocorrncia de penetrao. A internalizao em
vesculas ou a penetrao direta so processos
que ocorrem imediatamente aps a ligao dos
vrions aos receptores da membrana plasmtica.
Ao contrrio da adsoro, a internalizao e
penetrao so processos dependentes de energia
e no ocorrem ecientemente a 4C. Uma forma
de sincronizar o incio da infeco viral in vitro
realizar adsoro a 4C durante uma hora (ocorre
adsoro sem penetrao) e, a seguir, transferir o
cultivo para 37C, quando ocorrer a penetrao
simultnea das partculas vricas adsorvidas.
As etapas iniciais da infeco viral tm sido
estudadas com o recurso da ME e com a utilizao de qumicos que inibam a internalizao e/
ou a acidicao de vesculas intracelulares (i.e.,
endossomos). Dessa forma, quando a infeco
por um vrus prevenida por substncias inibidoras da endocitose, deduz-se que a sua penetrao dependa de prvia internalizao; quando
a infeco inibida por agentes que previnam a
acidicao dos endossomos, conclui-se que o
pH cido dessas organelas seja necessrio para a
penetrao.
Em geral, os vrus penetram nas clulas utilizando um (ou alternativamente mais de um)
dos seguintes mecanismos: a) penetrao por
fuso na superfcie celular; b) penetrao aps
endocitose (mediada por clatrina, caveolina ou
agrupamentos de lipdios); c) fagocitose. Esses
mecanismos esto ilustrados na Figura 5.3.

Captulo 5

3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie


celular
Alguns vrus com envelope (p. ex.: retrovrus, paramixovrus e herpesvrus) penetram na
clula aps fuso do envelope com a membrana
plasmtica, evento que ocorre na superfcie celular (Figura 5.3A). A fuso resulta em um canal
entre o interior da partcula e o compartimento
citoplasmtico, atravs do qual o nucleocapsdeo
penetra no citoplasma. A fuso entre as membranas do envelope e a plasmtica requer a ao de
protenas de fuso presentes no envelope dos vrions (p. ex.: glicoprotena TM nos retrovrus e F
nos paramixovrus). Nesses vrus, o mecanismo
de fuso ocorre sob pH neutro, ou seja, independe de acidicao, e, por isso, esses vrus so denominados pH-independentes.
A membrana plasmtica no a nica barreira que o nucleocapsdeo viral deve ultrapassar
para ter acesso aos locais intracelulares apropriados para a replicao. Algumas clulas possuem
um citoesqueleto cortical espesso logo abaixo da
membrana plasmtica, o que impede o acesso de
ribossomos e outras organelas rea imediatamente adjacente membrana. Essas estruturas
tambm dicultam a progresso dos nucleocapsdeos at as regies mais internas da clula. No
obstante, os vrus que penetram por fuso na superfcie celular desenvolveram estratgias para
superar esses obstculos e conseguir liberar os
seus nucleocapsdeos nos locais adequados.

3.2.2 Penetrao aps endocitose


Esse mecanismo caracterstico da penetrao de vrios vrus envelopados (p. ex.: avivrus
e ortomixovrus) e de alguns vrus sem envelope
(p. ex.: adenovrus, picornavrus e reovrus). A via
endoctica parece ser o caminho mais adequado
para a internalizao dos vrus, pelos seguintes
aspectos: a) a endocitose um processo siolgico comum maioria das clulas; b) somente ocorre em clulas com transporte de membrana ativo,
evitando a penetrao em eritrcitos e plaquetas,
onde a infeco seria improdutiva; c) os vrions
podem se ligar em qualquer local da superfcie
celular para serem internalizados; d) a endocito-

115

Replicao viral

se assegura a internalizao e o transporte dos vrions aos locais de expresso gnica e replicao;
e) a penetrao a partir dos endossomos reduz os
riscos de deteco pelo sistema imunolgico, pois
no deixa protenas virais expostas na superfcie
celular; e f) o ambiente endossomal se acidica
gradativamente, o que auxilia na ativao dos
mecanismos de fuso e penetrao.

3.2.2.1 Endocitose mediada por clatrina


Os endossomos recobertos por clatrina so
vesculas de aproximadamente 100 nm de dimetro e se formam pela invaginao de pequenas regies da membrana plasmtica revestidas internamente por molculas de clatrina (clatrin-coated
pits). Quando examinadas sob ME, essas regies

Microtbulos

H+

H+

H+
H+

Retculo endo

H+

plasmtico

H+

Ncleo

?
E

Meio extracelular

Citoplasma

Figura 5.3. Principais mecanismos de penetrao dos vrus nas clulas hospedeiras. A) Penetrao na superfcie
celular, por fuso com a membrana plasmtica; B) Penetrao por fuso aps endocitose mediada por clatrina; C)
Penetrao por fuso aps endocitose mediada por caveolina; D-E) Penetrao aps endocitose mediada por
agrupamentos de lipdios.

116

aparecem como espessamentos da membrana,


adjacentes aos locais de ligao dos vrions. Aps
a invaginao, o revestimento de clatrina removido e as vesculas trafegam em direo ao interior da clula. Nesse trajeto, o ambiente endossomal gradativamente acidicado por meio de
ATPases associadas membrana, que bombeiam
prtons H+ para o seu interior. Nos endossomos
tardios e lisossomos, o pH pode atingir 5,0 a 5,5.
Dessa forma, os vrions internalizados por essa
via so submetidos reduo gradativa do pH.
Essa forma de penetrao a mais estudada e,
provavelmente, a mais importante entre os vrus
animais, sendo tratada com mais detalhes a seguir (Figura 5.3B).
Ao contrrio da fuso e penetrao dos vrus pH independentes, a fuso do envelope de
muitos vrus com a membrana celular s ocorre
sob pH baixo (5,5-6,5). Esses vrus so denominados pH-dependentes e no conseguem fusionar
e penetrar na superfcie celular sob pH neutro. A
acidicao progressiva dos endossomos proporciona condies para a fuso do envelope com a
membrana endossomal, resultando na liberao
do nucleocapsdeo no citoplasma. Embora vrios vrus penetrem dessa forma, esse um mecanismo particularmente bem caracterizado nos
vrus da inuenza. A protena de fuso desses
vrus (hemaglutinina, HA) tambm a protena
responsvel pela ligao aos receptores (cido silico). Aps a ligao nos receptores, os vrions
so internalizados por endocitose. A acidicao
dos endossomos induz alteraes conformacionais na HA que resultam na fuso do envelope
com a membrana do endossomo. O pH baixo nos
endossomos tambm facilita a dissociao dos
nucleocapsdeos do restante do envelope, resultando na sua liberao no citoplasma. Nos vrus
pH-dependentes, a penetrao deve ocorrer no
momento apropriado, pois a acidicao excessiva que ocorre aps a fuso dos endossomos com
os lisossomos pode inativar o vrus. Drogas que
inibem a endocitose (xido de fenilarsina) ou impedem a acidicao dos endossomos (monensina, cloroquina e cloreto de amnia) previnem a
penetrao de vrus pH-dependentes.
Os vrus sem envelope transpem a membrana pela formao de canais proteinceos na

Captulo 5

membrana endossomal (picornavrus) ou por


lise/perturbao da integridade dessa membrana (adenovrus e reovrus). A acidicao progressiva dos endossomos e as interaes com a
membrana provocam alteraes estruturais e
desorganizao do capsdeo, podendo ocorrer a
dissociao de algumas protenas. Nos picornavrus, o rearranjamento das protenas do capsdeo induzido pelo pH baixo, leva formao de
aberturas atravs das quais o genoma translocado para o interior do citoplasma. As partculas vricas do reovrus, internalizados por endocitose,
sofrem alteraes estruturais e algumas protenas
do capsdeo so ativadas, tornando-se capazes
de lisar ou permeabilizar a membrana do endossomo. Dessa forma, permitem a penetrao dos
capsdeos semidesintegrados. Nos adenovrus, o
capsdeo sofre alteraes estruturais pela exposio ao pH progressivamente baixo, resultando
na desorganizao da partcula e na ativao das
protenas bra e penton. Essas protenas participam da lise ou da permeabilizao da membrana
endossomal, permitindo a penetrao do complexo nucleoprotena no compartimento intracelular.

3.2.2.2 Endocitose mediada por caveolina


As caveolas so pequenas invaginaes em
forma de cantil, que so formadas na membrana
plasmtica de diversos tipos de clulas. As caveolas podem ser internalizadas com auxlio da actina
e, at o presente momento, no h evidncias de
que o seu contedo seja entregue via endoctica,
ou seja, constituem um mecanismo independente
de internalizao. As caveolas internalizadas so
transportadas at a regio perinuclear, prximaao retculo endoplasmtico (RE). Recentemente,
evidenciou-se que o vrus smio 40 (SV-40) utiliza
essa via para a internalizao e penetrao (Figura 5.3C). Aps a ligao aos receptores, os vrions
se deslocam lateralmente na superfcie celular
at serem capturados por caveolas. As caveolas
so, ento, circundadas parcialmente por bras
de actina, conferindo vescula uma aparncia
de cantil. Posteriormente, a vescula caveolar,
contendo os vrions, entregue aos caveossomos,

117

Replicao viral

que so organelas de pH neutro preexistentes no


citoplasma, ricas em caveolina e colesterol. Aps
algumas horas da infeco, os caveossomos liberam tbulos membranosos repletos de vrions,
que trafegam ao longo dos microtbulos at o RE.
Posteriormente, as partculas virais deixam essa
organela, entram no citosol e penetram no ncleo
atravs dos poros nucleares. Essa via de penetrao parece no ser exclusiva do SV-40. Estudos
recentes com o vrus ebola (lovrus), poliomavrus e echovrus (picornavrus) tm sugerido um
mecanismo semelhante de penetrao.

3.2.2.3 Endocitose mediada por


agrupamento de lipdeos
Esngolipdeos e/ou glicoesngolipdeos e
molculas de colesterol podem se associar lateralmente e formar microdomnios na membrana
celular, denominados de lipid rafts (o termo raft
denota as toras de madeira utilizadas na construo de jangadas). Esses microdomnios contm
protenas especcas e participam de funes
celulares, como o transporte de membrana, morfognese e sinalizao celular. A internalizao
dessas estruturas independente do revestimento por clatrina e caveolina. Os vrions internalizados por essa via so direcionados aos endossomos, a partir dos quais ocorre penetrao no
compartimento citoplasmtico. Essa via de penetrao tem sido sugerida para o SV-40, em clulas
que no contm caveolina, e tambm para alguns
picornavrus, papilomavrus e retrovrus (Figuras 5.3D e 5.3E).

3.2.3. Outros mecanismos de


penetrao
3.3.3.1 Fagocitose
O papel da fagocitose na penetrao dos
vrus nas clulas hospedeiras ainda no est esclarecido. No entanto, partculas do vrus da inuenza j foram observadas em vesculas fagocticas, e os poxvrus possivelmente utilizam essa
via para a internalizao e posterior penetrao
celular. Aps a sua formao, os fagossomos se
fusionam com os endossomos e lisossomos e so

acidicados, potencializando a capacidade de fuso e penetrao dos vrions pH-dependentes.

3.3.3.2 Macropinocitose
A macropinocitose um processo celular
no especco (pode ocorrer na ausncia de ligantes aos receptores) de internalizao de volumes
grandes de uidos e de regies de membrana.
Substncias internalizadas por essa via tambm
so direcionadas aos endossomos e lisossomos.
O vrus da vaccinia (poxvrus) pode penetrar por
essa via, uma vez que os seus vrions so muito
grandes para serem internalizados por endocitose mediada por clatrina. O vrus HIV tambm parece utilizar essa via para infectar macrfagos.

3.2.3.3 Translocao atravs da membrana plasmtica


Esse um mecanismo pouco conhecido, provavelmente raro entre os vrus animais e parece
ocorrer somente com os vrus sem envelope.

3.2.3.4 Transferncia direta entre


clulas
Alm dos mecanismos especcos de penetrao, alguns vrus podem ser transmitidos
diretamente entre clulas, sem a necessidade de
egresso e infeco de uma nova clula. Essa transmisso possvel pela insero de protenas virais na membrana lateral da clula. As protenas
virais produzem fuso entre as clulas vizinhas e
transferncia do material gentico do vrus para
a nova clula. Esse mecanismo de transferncia
direta (observada nos paramixovrus e poxvrus,
entre outros) permite ao vrus infectar novas clulas sem se expor ao sistema imunolgico.
Como j mencionado, a simples internalizao da partcula vrica no assegura que a replicao ir ocorrer. O desnudamento e a entrega do
material gentico aos locais apropriados so necessrios para o prosseguimento do ciclo. Alm
disso, a clula deve apresentar as condies intracelulares necessrias para a expresso gnica
e replicao do genoma. Sob ME, freqente a

118

visualizao de vrions internalizados em clulas,


porm localizados em stios inapropriados para
o prosseguimento da replicao. Alguns desses
vrions podem ser eventualmente reciclados e
liberados na superfcie celular, podendo infectar
produtivamente outras clulas. A maioria, porm, parece estar destinada inativao por processos catablicos celulares.

3.3 Etapas aps a penetrao


3.3.1 Desnudamento
O termo desnudamento (do ingls uncoating)
refere-se serie de eventos que ocorrem imediatamente aps a penetrao, em que os componentes do nucleocapsdeo so parcial ou totalmente
removidos, resultando na exposio parcial ou
completa do genoma viral. A remoo das protenas do nucleocapsdeo necessria para a exposio do genoma s enzimas e fatores responsveis
pela transcrio (vrus DNA e RNA de cadeia
negativa) ou traduo (vrus RNA de cadeia positiva). No ciclo replicativo de alguns vrus, a replicao do genoma ocorre aps o desnudamento completo do genoma (poliovrus e avivrus).
Em outros vrus, a remoo parcial das protenas
do nucleocapsdeo j suciente para a ocorrncia das etapas seguintes do ciclo (paramixovrus,
rabdovrus, ortomixovrus e reovrus). Portanto,
o desnudamento parece ter uma denio mais
funcional do que estrutural. A estrutura e complexidade de cada nucleocapsdeo que determina os passos subseqentes na replicao.
O produto do desnudamento depende da
estrutura do nucleocapsdeo. Nos picornavrus,
o resultado a liberao do RNA genmico totalmente desnudo, com uma protena de 23 aminocidos (VPg) ligada covalentemente sua extremidade 5. Em alguns vrus (paramixovrus,
rabdovrus, arenavrus e ortomixovrus), o genoma nunca totalmente desnudo. Os processos de
transcrio e replicao ocorrem com o genoma
recoberto por protenas (ribonucleoprotena).
Nos reovrus e poxvrus, a transcrio e a replicao do genoma ocorrem no interior de capsdeos
parcialmente desintegrados.

Captulo 5

Nos vrus que penetram por fuso com a


membrana plasmtica, a remoo do envelope,
que ocorre pela fuso faz parte do desnudamento. Em alguns vrus RNA de cadeia positiva
(togavrus), a remoo das protenas do nucleocapsdeo ocorre logo aps a penetrao, pela sua
interao com o RNA dos ribossomos. Nos vrus
pH dependentes, a acidicao dos endossomos
desencadeia a fuso e tambm pode facilitar a
dissociao das protenas do genoma. Isso resulta na liberao do nucleocapsdeo ou do genoma
desprovido de protenas diretamente no citoplasma. Nos herpesvrus, adenovrus e papovavrus,
o capsdeo permanece parcialmente ntegro aps
a penetrao, sendo transportado at as proximidades do ncleo associado aos tbulos do citoesqueleto. O desnudamento e a penetrao do
nucleocapsdeo no ncleo ocorre prximo aos
poros nucleares. Nos picornavrus, a acidicao
dos endossomos provoca alteraes conformacionais no capsdeo que proporcionam interaes
de suas protenas com a membrana, resultando
na formao de aberturas atravs das quais o genoma liberado no citoplasma.
O desnudamento torna o genoma acessvel
s enzimas e a outros fatores celulares responsveis pelas etapas subseqentes da replicao.
Dependendo do tipo de genoma, as etapas que
se seguem ao desnudamento diferem entre os vrus.

3.3.2 Movimentao intracelular


Aps a penetrao, o genoma viral precisa
ser transportado at o local onde ocorrero a expresso gnica e a replicao. A movimentao
dos vrions no citoplasma ocorre inicialmente
de forma passiva, no interior de vesculas endocticas. Aps a penetrao, os nucleocapsdeos
podem interagir com os componentes do citoesqueleto ou com protenas transportadoras. Os
paramixovrus (que penetram na clula por fuso direta do envelope com a membrana celular)
e os picornavrus (que penetram atravs de poros
na membrana endossomal) no necessitam de
transporte intracelular antes de iniciar a sntese
de protenas, pois os ribossomos podem estar

119

Replicao viral

prximos ao local de penetrao. Outros vrus


penetram na clula em vesculas endocticas, que
se movimentam entre a densa cadeia de microlamentos e entregam a sua carga aos locais apropriados. Os herpesvrus e retrovrus penetram na
clula por fuso do envelope com a membrana
plasmtica, e o genoma viral deve ser transportado at o ncleo para a replicao. Para iniciar
a transcrio reversa de seu material gentico, os
retrovrus interagem com lamentos de actina,
necessitam funes relacionadas miosina e dos
microtbulos. O HSV ultrapassa o crtex celular
(composto basicamente de actina) por mecanismos ainda desconhecidos, e os nucleocapsdeos
so transportados at o ncleo associados com os
microtbulos. Os adenovrus e parvovrus tambm so transportados por microtbulos at o
ncleo da clula hospedeira.

3.3.3 Penetrao nuclear


O ncleo o local de replicao da maioria
dos vrus DNA e tambm dos ortomixovrus. No
entanto, a presena da membrana nuclear representa uma barreira adicional progresso dos vrions ou dos nucleocapsdeos, pois os poros nucleares permitem a passagem somente de partculas
com at 39 nm de dimetro. Conseqentemente,
o transporte dos nucleocapsdeos ou do genoma
at o interior do ncleo depende de interaes
especcas com componentes celulares. Vrions
pequenos, como os parvovrus (18-24 nm) e os
capsdeos do vrus da hepatite B (36 nm), podem
ser transportados intactos (ou semi-ntegros), por
meio de mecanismos citoplasmticos especializados (microtbulos, microlamentos e protenas
motoras), e, posteriormente, translocados atravs
dos poros nucleares por protenas especializadas.
Os vrions ou capsdeos maiores necessitam ser
previamente desintegrados ou deformados para
permitirem a introduo do genoma viral pelos
poros nucleares. O nucleocapsdeo do HSV, por
exemplo, transportado do crtex celular at o
ncleo ao longo dos microtbulos e liga-se, na
face citoplasmtica da membrana nuclear, por
meio de uma molcula denominada de importina. Posteriormente ocorre uma abertura parcial
de um dos vrtices do capsdeo e a liberao do

DNA viral atravs do poro nuclear. O adenovrus tipo 2 transportado ao longo dos microtbulos at as proximidades do ncleo e liga-se a
lamentos dos poros nucleares. Aps, com o auxlio das importinas, e pela ligao com histonas,
ocorre a desmontagem do vrion e o DNA viral
translocado para o interior do ncleo.

3.4 Expresso gnica


A sntese de protenas virais pela maquinaria celular o evento central da multiplicao
dos vrus. O genoma viral codica diferentes
protenas que devem desempenhar pelo menos
trs funes bsicas: a) assegurar a replicao
do genoma; b) subverter funes celulares em
seu benefcio e c) empacotar os genomas recmreplicados em novas partculas vricas. Os vrus
no possuem metabolismo prprio e so inteiramente dependentes da maquinaria celular para a
produo de suas protenas. Ou seja, as informaes genticas contidas no genoma dos vrus so
decodicadas em protenas virais pelo aparato
de sntese protica da clula hospedeira. Para utilizar esse aparato para a produo de suas protenas, os vrus tiveram que evoluir de forma a
satisfazer algumas restries impostas pelas clulas hospedeiras. O ponto-chave desse processo
a sntese (ou apresentao) de mRNAs que sejam
adequadamente reconhecidos e traduzidos pelos
ribossomos. Dependendo da estrutura e organizao genmica, os vrus de diferentes famlias
convergem para a produo de mRNA por diferentes vias (Figura 5.4).
O aparato celular de transcrio (RNA polimerase II e fatores de transcrio) e de processamento dos transcritos se localiza no ncleo das
clulas hospedeiras. A maioria dos vrus DNA
replica no ncleo e, assim, pode utilizar esses
mecanismos. Os genes desses vrus contm regies regulatrias (promotores, enhancers) que
so reconhecidas pela RNA polimerase II (RNApolII) e pelos fatores de transcrio celulares. Os
transcritos (mRNA) produzidos contm a estrutura cap, so poliadenilados e alguns so submetidos a splicing antes de serem exportados para
o citoplasma. Embora sejam vrus DNA, os poxvrus e asfarvrus replicam no citoplasma e so
independentes da maquinaria nuclear de sntese

120

Captulo 5

Vrus DNA
Poxviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Polyomaviridae
Papillomaviridae
(Classe I)

dsDNA

Vrus RNA
Vrus que realizam
transcrio reversa

Circoviridae
Parvoviridae
(Classe II)

Hepadnaviridae
(Classe VII)

ssDNA

Reoviridae
Birnaviridae
(Classe III)

Retroviridae
(Classe VI)

pdsDNA

ssRNA
(+)

dsRNA
(+ / -)

Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Bunyaviridae
Filoviridae
(Classe V)

ssRNA
(-)

Picornaviridae
Flaviviridae
Caliciviridae
Astroviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Togaviridae
(Classe IV)

ssRNA
(+)

ssDNA

.dsDNA

.dsDNA

dsDNA

mRNA
Traduo

Protena

Fonte: adaptado de Baltimore (1971).

Figura 5.4. Estratgias de produo de RNA mensageiros (mRNA) e expresso gnica das diferentes classes de vrus.
Nos vrus da classe I, os promotores virais so reconhecidos por fatores celulares, e os genes so transcritos pela
RNApolII celular, resultando em mRNAs traduzveis pelos ribossomos (1). Nos vrus da classe II, o genoma DNA de
fita simples linear (parvovrus) ou circular (circovrus) , inicialmente, convertido em fita dupla e transcrito pela
RNApolII (2). Apenas as cadeias negativas dos vrus da classe III (genoma RNA de fita dupla) so transcritas pela
polimerase viral, originando os mRNA (5). O genoma dos vrus da classe IV (RNA fita simples de polaridade
positiva) pode ser diretamente traduzido, em toda a sua extenso (flavivrus, picornavrus) ou parcialmente (outros)
(7). Nestes, o restante dos mRNA so produzidos pela transcrio do RNA intermedirio pela polimerase viral. Nos
vrus da classe V, o genoma RNA de polaridade negativa transcrito pela polimerase presente nos vrions (6). Nos
hepadnavrus (classe VII), os mRNA so produzidos pela transcrio do DNA viral pela RNApolII e fatores celulares
(3). Nos retrovrus (classe VI), os mRNA so produzidos pela transcrio do provrus DNA (uma cpia do RNA
genmico) pela RNApolII e fatores celulares, aps a integrao do provrus ao genoma celular (4).

e processamento de DNA e RNA. Isso s possvel porque esses vrus trazem, nos vrions, as
enzimas e fatores auxiliares para a transcrio e
processamento dos seus mRNA.
Os vrus RNA, com exceo dos retrovrus,
no dependem da maquinaria celular de transcri-

o e convergem para a produo de mRNA por


vias diferentes. Os retrovrus utilizam a maquinaria celular para a transcrio dos seus genes,
aps a integrao de uma cpia DNA do genoma
(provrus) nos cromossomos celulares. A transcrio resulta na produo de mRNA para a sntese

121

Replicao viral

protica e tambm de cpias de RNA genmico


que sero encapsidadas.
Os vrus RNA convergem para a apresentao de mRNA traduzveis de duas formas: a) o
prprio genoma dos vrus RNA de sentido positivo serve de mRNA e parcial ou integralmente
traduzido pelos ribossomos. Nos vrus cujo genoma parcialmente traduzido, os mRNAs, para a
sntese das protenas estruturais, so produzidos
pela transcrio do RNA de sentido antigenmico, que produzido pela replicao do genoma;
b) os vrus RNA de sentido negativo trazem a
sua prpria RNA polimerase nos vrions. Assim,
no incio da infeco, essa enzima se encarrega
de transcrever o genoma viral, produzindo os
mRNA para a sntese protica. Nos vrus RNA
de cadeia dupla, a RNA polimerase trazida nos
vrions transcreve as cadeias genmicas negativas em mRNA.
A maquinaria de sntese protica das clulas eucariotas (ribossomos e fatores auxiliares) se
localiza no citoplasma; somente traduz mRNA
monocistrnicos e que possuam a estrutura cap
na extremidade 5. Os mRNA dos vrus DNA que
replicam no ncleo so produzidos, processados
e exportados para o citoplasma pela maquinaria
da clula e, como tal, assemelham-se aos mRNA
celulares. Os mRNA do vrus DNA que replicam
no citoplasma (poxvrus, asfarvrus) so produzidos e modicados no prprio citoplasma por enzimas virais, tambm semelhana dos mRNA
celulares. Para serem traduzidos diretamente,
os genomas dos vrus RNA de sentido positivo
possuem cap 5 (alguns avivrus, coronavrus,
arterivrus e togavrus) ou uma estrutura secundria que permite o reconhecimento pelos ribossomos e o incio da traduo. Essa estrutura
denominada IRES (internal ribosomal entry site) e
est presente prxima extremidade 5 do genoma dos picornavrus e de alguns membros da famlia Flaviviridae (pestivrus). Nos vrus RNA de
sentido negativo e RNA de cadeia dupla, a RNA
polimerase viral produz mRNAs com cap e cauda
poliA.
A maquinaria de traduo das clulas eucariotas no capaz de traduzir mRNAs policistrnicos, ou seja, mRNAs que contenham mais
de uma ORF. A traduo de ORFs internas no

mRNA exige o reconhecimento de seqncias


especcas localizadas prximas ao cdon de
iniciao, mecanismo ainda no identicado em
eucariotas. Por isso, os vrus desenvolveram diferentes estratgias de codicao de suas protenas: produo de mRNA monocistrnicos
(contendo uma ORF = um gene) ou produo
de mRNA policistrnicos. Os mRNAs policistrnicos contm uma nica e longa ORF que codica uma longa poliprotena. medida que vai
sendo traduzida, essa poliprotena clivada por
proteases celulares e/ou virais, dando origem s
protenas virais individuais. Do ponto de vista da
traduo, os mRNA que contm uma nica ORF,
que traduzida em poliprotena, comportam-se
como mRNAs monocistrnicos, pois a traduo
se inicia no primeiro cdon de iniciao e termina
no cdon de terminao. As protenas individuais so geradas aps este processo, pela clivagem
enzimtica.
Alm de superar essas restries, os vrus
tiveram que desenvolver estratgias que os permitam utilizar a maquinaria celular de traduo
em seu benefcio. Isso porque os mRNA celulares esto presentes em muito maior quantidade e
competem com grande vantagem em relao aos
mRNA virais. Dentre as estratgias virais utilizadas pelos vrus para competir pelo aparato celular
de traduo destacam-se: a) inibio da transcrio celular (vrus da estomatite vesicular, VSV);
b) inibio do processamento e/ou maturao e
exportao de mRNA celulares do ncleo (adenovrus, HIV); c) degradao de mRNA celulares
no ncleo (ortomixovrus, HSV) ou no citoplasma
(buniavrus); d) inibio seletiva da traduo de
mRNA celulares (poliovrus, FMDV); e) facilitao do processamento, transporte e traduo de
mRNA virais (HIV); g) alterao da especicidade de reconhecimento de mRNA para a traduo:
a traduo de mRNA que possuem cap inibida
e as clulas infectadas passam a traduzir mRNA
virais, que so reconhecidos pelos ribossomos
atravs da estrutura IRES (picornavrus).

3.5 Replicao do genoma


Dependendo do tipo e organizao genmica, os vrus podem utilizar diferentes estratgias

122

Captulo 5

para cumprir as etapas de expresso gnica e replicao do seu genoma. Baltimore (1971) props
a classicao dos vrus em seis grupos, de acordo com o tipo de genoma, local e estratgia de
replicao. Essa classicao foi posteriormente
ampliada para contemplar novos vrus e estratgias identicadas, resultando em sete grupos
ou classes (Tabela 5.2). A seguir sero abordados
os principais aspectos da replicao de cada um
desses grupos. Os detalhes da replicao dos vrus de cada famlia sero abordados nos captulos especcos.

3.5.1 Replicao dos vrus DNA


A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hospedeira associada com fatores codicados pelo v-

rus. A contribuio dos fatores virais na replicao desses vrus, no entanto, varia muito entre as
diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA mais
simples (circovrus, parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
pois os seus genomas codicam poucos produtos associados com funes replicativas. Por outro lado, os vrus DNA complexos (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquinaria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral.
A replicao da maioria dos vrus DNA
ocorre no ncleo da clula hospedeira. O genoma
desses vrus contm regies regulatrias que so
reconhecidas pela maquinaria celular de transcrio e, assim, podem utiliz-la para a produo

Tabela 5.2 Classificao dos vrus de acordo com o tipo de genoma, local de replicao e estratgia utilizada para
produzir os mRNAs.
Classe

Genoma

Local de replicao

Famlias

Ia. Ncleo

Polyomaviridae
Papillomaviridae
Adenoviridae
Herpesviridae

Ib. Citoplasma

Poxviridae
Asfarviridae

DNA de cadeia dupla

II

DNA cadeia simples

Ncleo

Parvoviridae
Circoviridae

III

RNA de cadeia dupla

Citoplasma

Reoviridae
Birnaviridae

IV

RNA de cadeia simples,


sentido positivo

IVa.Traduo integral
do genoma

Flaviviridae
Picornaviridae

IVb.Traduo parcial
do genoma; mRNAs
subgenmicos

Astroviridae
Caliciviridae
Togaviridae
Coronaviridae
Arteriviridae

Citoplasma

Va. Ncleo
V

RNA de cadeia simples,


sentido negativo

Orthomyxoviridae
Bornaviridae

Vb. Citoplasma

Bunyaviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Paramyxoviridae
Filoviridae

VI

RNA de cadeia simples e


intermedirio DNA

Citoplasma/ncleo

Retroviridae

VII

DNA de cadeia parcialmente


dupla e intermedirio RNA

Ncleo/citoplasma

Hepadnaviridae

Fonte: adaptado de Baltimore (1971).

123

Replicao viral

dos mRNA necessrios sntese de suas protenas. Em diferentes graus, esses vrus tambm
utilizam enzimas e fatores celulares para o metabolismo de nucleotdeos, para a sntese de DNA
e replicao do genoma.
Os poxvrus e asfarvrus se constituem em
excees, pois trazem, nos vrions, as enzimas e
fatores necessrios para a transcrio e modicao dos mRNA e codicam as enzimas e fatores
requeridos para a replicao do genoma. Mesmo
assim, so dependentes da maquinaria celular de
sntese protica. A replicao desses vrus ocorre
inteiramente no citoplasma.
O mecanismo de replicao do genoma
tambm apresenta diferenas entre as famlias,
devido a peculiaridades de estrutura, topologia
e organizao genmica. A replicao do genoma circular de ta dupla dos poliomavrus, por
exemplo, realizada quase que exclusivamente
por enzimas e fatores celulares. A sntese das novas cadeias utiliza um primer de RNA e ocorre de
forma bidirecional e semidescontnua, a exemplo
da replicao do DNA celular. A replicao dos
genomas DNA de ta simples (circovrus e parvovrus) tambm envolve a participao predomi-

Genoma dsDNA

Transcrio
genes iniciais

mRNA

Traduo

3
Replicao

nante de fatores celulares e se inicia com a sntese


da ta complementar. Nos parvovrus, a prpria
extremidade 3 do genoma serve de primer para
o incio da replicao. A replicao do genoma
linear de ta dupla dos adenovrus se inicia com
um primer de protena, ocorre de forma contnua
e em duas etapas. Apenas uma das cadeias replicada em cada etapa. A replicao do genoma
dos herpesvrus e poxvrus mais complexa e
envolve a participao de vrios fatores codicados pelo genoma viral. Os herpesvrus parecem
replicar o seu genoma por um mecanismo de crculo rolante, no qual a replicao inicia-se aps a
circularizao do genoma e resulta na produo
de multmeros, que so posteriormente clivados
em unidades genmicas. A replicao do genoma
dos hepadnavrus inclui uma etapa de transcrio reversa, na qual um RNA produzido a partir
do DNA genmico convertido em DNA de ta
simples e, posteriormente, em DNA de ta dupla.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus DNA esto ilustradas esquematicamente nas Figuras 5.5 a 5.8 (a forma de apresentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN e PALESE, 1996).

DNA Prognie

Transcrio
genes tardios

mRNA

Vrions

Egresso

Traduo
6

Protenas
iniciais (NS)

Morfognese

Morfognese

Protenas tardias
(estruturais)

Figura 5.5. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ia (Adenoviridae, Herpesviridae, Polyomaviridae e Papillomaviridae).
Os genes iniciais so transcritos antes da replicao do genoma (1) e geralmente codificam protenas no-estruturais
(NS) envolvidas nas etapas seguintes da replicao (2). Essas protenas, isoladamente ou em conjunto com fatores
celulares, atuam na replicao do genoma (3). Os genes tardios so transcritos aps a replicao do genoma (4) e
codificam protenas estruturais em sua maioria (5). As protenas estruturais so importadas para o ncleo, onde
ocorre a morfognese (6).

124

Captulo 5

de infeco, tambm so produzidas nessa etapa


e incorporadas na prognie viral (Figura 5.5).

3.5.1.1 Vrus da classe Ia


Os genes desses vrus so transcritos pela
maquinaria celular de transcrio, pois possuem
as regies regulatrias (promotores, enhancers),
que so reconhecidas pela RNApolII e pelos fatores de transcrio da clula hospedeira. Os genes
so classicados em duas ou mais classes e so
transcritos seqencialmente sob regulao temporal restrita. Os genes iniciais (immediate-early e
early nos herpesvrus; early nas demais famlias)
so transcritos logo aps a penetrao na clula e,
geralmente, codicam protenas no-estruturais
que possuem funes regulatrias sobre outros
genes e tambm enzimas e fatores envolvidos na
replicao do genoma. A replicao do genoma
dos poliomavrus e papilomavrus realizada
quase que exclusivamente por fatores e enzimas
celulares; j os herpesvrus e adenovrus codicam vrias protenas com funes replicativas
(DNA polimerase, protena de ligao no DNA,
helicase e quinases de nucleotdeos). Os genes
tardios so transcritos aps a replicao do genoma e codicam principalmente protenas estruturais e/ou protenas envolvidas na morfognese.
Algumas protenas no-estruturais (NS), que so
necessrias nos estgios iniciais do prximo ciclo

Genoma DNA
(encapsidado)

Transcrio
inicial

mRNA iniciais

Traduo

Protenas
iniciais (NS)

DNA
livre

3.5.1.2 Vrus da classe Ib


Os poxvrus e asfarvrus realizam o seu ciclo
replicativo inteiramente no citoplasma. Para isso,
trazem, nos vrions, as enzimas e fatores necessrios para a transcrio dos seus genes e processamento dos transcritos. O genoma desses vrus
codica vrios produtos que atuam no metabolismo de nucleotdeos e na replicao do genoma
(DNA polimerase, helicase, protena de ligao
no DNA e quinase de timidina), que, portanto,
realizada predominantemente por enzimas e
fatores virais. A expresso gnica ocorre em trs
etapas principais: inicial, intermediria e tardia.
Os genes iniciais so os primeiros a ser expressos, e os seus produtos possuem funes diversas, incluindo a concluso do desnudamento, a
replicao do genoma e ativao da transcrio
dos genes intermedirios. As protenas intermedirias atuam principalmente na ativao da
transcrio dos genes tardios, cujos produtos so
predominantemente protenas estruturais e/ou
que participam da morfognese da prognie viral
(Figura 5.6). Esses vrus codicam vrios produ-

DNA prognie

Replicao
5

Transcrio 7

mRNA
intermedirios

6 Traduo

Protenas
intermedirias

mRNA
tardios

Morfognese

Vrions

Egresso

Transcrio

Traduo
9

Morfognese

Protenas
tardias

Figura 5.6. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ib (Poxviridae e Asfarviridae). Os genes iniciais so transcritos pela
RNA polimerase viral ainda com o DNA parcialmente encapsidado, resultando nos mRNAs (1) que so traduzidos
nas protenas iniciais (2). Essas protenas participam do desnudamento completo do genoma (3), na sua replicao (4)
e na transcrio (5) dos genes que codificam as protenas intermedirias (6). Estas protenas esto envolvidas na
transcrio dos genes tardios (7), que codificam principalmente protenas estruturais (8). Estas protenas participam
da morfognese dos vrions, juntamente com o DNA recm-replicado (9).

125

Replicao viral

tos que interferem com a resposta do hospedeiro infeco, dicultando o reconhecimento das
clulas infectadas pelo sistema imunolgico do
hospedeiro.

3.5.1.3 Vrus da classe II

Os parvovrus encapsidam predominantemente


cpias de DNA de sentido negativo (aquelas que
sero transcritas), mas algumas espcies podem
encapsidar tambm cpias positivas e, ocasionalmente, uma mistura das duas (Figura 5.7).

3.5.1.4 Vrus da classe VII


A replicao do genoma dos parvovrus e
circovrus realizada predominantemente por
enzimas e fatores da clula hospedeira. A primeira etapa da replicao a sntese da cadeia complementar de DNA. O DNA de ta dupla (linear
nos parvovrus, circular nos circovrus) , ento,
transcrito pela RNA polII celular, originando os
mRNAs para a sntese de protenas virais. A replicao dos parvovrus est intimamente associada com a fase S do ciclo celular, demonstrando a dependncia de fatores celulares presentes
nesta fase. O genoma dos parvovrus replicado
de forma contnua, a partir de uma 3-OH localizada na extremidade do hairpin, formado pelo
pareamento das regies complementares terminais. A sntese da nova cadeia seguida pelo deslocamento da cadeia original, originando concatmeros, que sero posteriormente clivados para
originar os monmeros de extenso genmica.

Genoma DNA
(cadeia simples)

A replicao do genoma dos hepadnavrus envolve uma etapa de transcrio reversa e


ocorre parte no ncleo e parte no citoplasma. No
ncleo, o genoma de cadeia dupla parcial convertido em um crculo covalentemente fechado
(ccc) por fatores celulares e virais e, subseqentemente, transcrito pela RNApolII celular. Alm
dos mRNA para a produo das protenas virais,
a transcrio produz RNAs com a extenso do
genoma (pgRNA). Esses pgRNAs serviro de
molde para a transcrio reversa, que realizada
pela polimerase viral, e ocorre no interior de capsdeos pr-formados no citoplasma. A sntese da
cadeia complementar de DNA inicia em seguida,
mas interrompida por ocasio do egresso dos
vrions. Com isso, as partculas vricas contm
uma molcula de DNA de ta parcialmente dupla (Figura 5.8).

DNA fita dupla

Transcrio 4

mRNA

DNA ss (-)

DNA ss (+)

Morfognese 5

Vrions

Egresso

Traduo
Morfognese 5

Protenas estruturais
e
No-estruturais (NS)

Figura 5.7. Ciclo replicativo dos vrus da classe II (Parvoviridae e Circoviridae). O genoma DNA de cadeia simples ,
inicialmente, convertido em DNA de cadeia dupla por polimerases e fatores auxiliares da clula hospedeira (1).
Apenas uma das cadeias (DNA de sentido negativo) transcrita pela RNA polimerase II celular, originando os
mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde so traduzidos (3). A replicao do genoma
depende da interao entre fatores celulares e virais e resulta na sntese de cpias de DNA de cadeia simples de
sentido positivo (4) e negativo (5). As molculas de DNA recm-replicadas so ento includas nos vrions, atravs de
interaes especficas com as protenas do capsdeo (6).

126

Captulo 5

Genoma DNA
(Parcialmente ds)
1

A cadeia dupla
completada

DNAccc

Egresso
7

mRNA

Transcrio
parcial

Traduo

Protenas estruturais
e polimerase

Vrions

DNApds

PgRNA

Transcrio
completa

5
Transcrio
reversa

Sntese da
cadeia complementar

CDNA

Figura 5.8. Ciclo replicativo dos vrus da classe VII (Hepadnaviridae). O DNA genmico , inicialmente, convertido
em uma molcula circular de cadeia dupla completa ccc (1). Essa molcula transcrita pela RNA pol II celular,
originando inicialmente mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde sero traduzidos em
protenas estruturais e no-estruturais (3). RNAs com a extenso integral do genoma (pgRNA) so, ento, produzidos
(4) e exportados para o citoplasma. A polimerase viral recm-produzida realiza a transcrio reversa do pgRNAs,
resultando em cDNA (5), que convertido em DNA de cadeia dupla (6). Capsdeos contendo o DNA de cadeia
parcialmente dupla podem voltar ao ncleo e reiniciar o ciclo (7) ou participar da morfognese das partculas vricas
(8).

3.5.2 Replicao dos vrus RNA


A replicao dos vrus RNA enfrenta algumas diculdades adicionais, impostas por peculiaridades dos processos biossintticos das clulas hospedeiras. A replicao do genoma desses
vrus envolve a sntese de molculas de RNA de
sentido antigenmico, que servem de molde para
a subseqente sntese de RNAs de sentido genmico. Essas reaes so realizadas por polimerases especcas, que produzem molculas de RNA
a partir de moldes RNA (polimerases de RNA dependentes de RNA). No entanto, as clulas eucariotas no possuem tais enzimas e, por isso, no
so capazes de replicar o genoma desses vrus.
Assim, para replicar o genoma, os vrus RNA devem codicar as suas prprias enzimas replicativas. As polimerases de RNA virais, cuja funo
produzir cpias do genoma, so denominadas
genericamente transcriptases ou replicases.
Os vrus RNA de polaridade positiva solucionaram esse problema pela prpria natureza
do genoma: a enzima replicase codicada pelo
genoma e produzida pela traduo direta do

genoma logo no incio da infeco. Uma vez produzida, essa enzima se encarrega de replicar o
genoma, produzindo cpias de RNA de sentido
antigenmico, que servem de molde para a sntese de mais cpias de sentido genmico. Por isso,
o genoma desses vrus dito infeccioso, ou seja, a
sua introduo por mtodos articiais em clulas
permissivas (transfeco) resulta na ocorrncia
de todas as etapas do ciclo replicativo e na produo de prognie viral.
Por outro lado, o genoma dos vrus RNA de
polaridade negativa no pode ser traduzido, pois
possui o sentido complementar ao mRNA. Esses
vrus solucionaram esse problema de forma diferente: trazem associado ao material gentico
algumas molculas da polimerase de RNA (replicase). Uma vez no interior da clula, a replicase
sintetiza cpias de RNA de sentido antigenmico
que servem de mRNA para a sntese das protenas virais. Esses RNAs tambm servem de molde
para a sntese de mais cpias de RNA de sentido
genmico. O genoma dos vrus RNA de polaridade negativa no infeccioso, ou seja, a sua
introduo (desprovido de protenas) em clulas
permissivas no resulta na ocorrncia das etapas

127

Replicao viral

seguintes da replicao. Em resumo, a necessidade da polimerase de RNA para replicar o genoma foi suprida, de formas diferentes, tanto pelos
vrus RNA de sentido positivo como pelos vrus
RNA de sentido negativo.
A replicao do genoma dos vrus RNA
ocorre em duas etapas. A primeira etapa envolve
a sntese de um RNA de sentido antigenmico,
tambm denominado replicativo intermedirio
(RI). Nos vrus RNA de polaridade positiva, o
RI possui polaridade negativa; nos vrus RNA
de polaridade negativa, o RI possui polaridade
positiva. A segunda etapa envolve a sntese de
RNA de sentido genmico, utilizando o RI como
molde. Em alguns vrus RNA de sentido positivo
(Classe IVb), o RI tambm serve de molde para a
sntese de mRNAs. Embora essas duas etapas faam parte do processo replicativo, s vezes, recebem denominaes diferentes: a sntese de RNAs
de polaridade positiva denominada transcrio;
a sntese da cpia negativa de RNA denominada replicao. Essas duas etapas so realizadas
pelas replicases virais, pois as clulas eucariotas
no possuem enzimas e funes para replicar o
RNA. Alm das replicases, esses vrus codicam
outras protenas no-estruturais (NS) com funes diversas e que auxiliam, de algum modo,
na replicao do genoma. Atividades de helicase,
protease, ligao no RNA, ATPase, ribonuclease,

RNA
anti-genmico
(-)

entre outras, j foram identicadas entre as protenas NS dos vrus RNA.


Como os vrus RNA independem da maquinaria nuclear para a sntese e modicao
de cidos nuclicos, o seu ciclo replicativo pode
ocorrer inteiramente no citoplasma. Os ortomixovrus constituem as excees, pois dependem de
segmentos dos mRNA celulares para a produo
e funcionalidade de seus mRNAs e, por isso, replicam no ncleo da clula hospedeira.
Os retrovrus apresentam um mecanismo de
replicao que difere dos demais vrus RNA. Embora possua polaridade positiva, o RNA genmico no traduzido pelos ribossomos, e sim convertido em uma molcula de DNA de ta dupla
pela enzima transcriptase reversa (RT) presente
nos vrions. Essa molcula de DNA, denominada
provrus, integrada ao genoma da clula hospedeira e, posteriormente, transcrita pela RNApolII. A transcrio resulta em mRNAs para a sntese de protenas estruturais e da enzima RT, e em
cpias do RNA genmico, que ento includo
nas novas partculas vricas.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus RNA esto ilustradas esquematicamente nas Figuras 5.9 a 5.13 (a forma de apresentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN E PALESE, 1996).

4
Replicao

Genoma RNA (+)

3
1,6

Traduo

Poliprotena

Morfognese

Vrions

Egresso

Clivagem
7

Morfognese

Protenas no-estruturais
Protenas estruturais

Figura 5.9. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVa (Picornaviridae e Flaviviridae). A ORF nica do genoma
traduzida em toda a sua extenso logo aps o desnudamento, resultando da produo de uma longa poliprotena (1).
medida que vai sendo produzida, essa poliprotena vai sendo clivada por proteases celulares e/ou virais dando
origem s protenas individuais, entre as quais a RNA polimerase viral (2). A RNA polimerase responsvel pela
replicao do genoma, que ocorre via produo de um intermedirio RNA de sentido negativo (3, 4). As novas cpias
de RNA de sentido positivo so, ento, utilizadas em novos ciclos de traduo (6), replicao (3,4) e/ou participam da
morfognese da prognie viral (7).

128

Captulo 5

3.5.2.1 Vrus da classe IVa


O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, anqueada por duas regies no
traduzidas (5UTR; 3UTR). Os genes das protenas estruturais ocupam o tero 5 do genoma; o
restante da ORF contm os genes das protenas
no-estruturais (NS). Essa ORF traduzida em
toda a sua extenso logo aps o desnudamento,
originando uma poliprotena longa, que clivada em protenas individuais medida que vai
sendo produzida (Figura 5.9). As protenas NS
recm-produzidas incluindo a replicase viral
realizam a replicao do genoma, que envolve a
sntese de um RNA de sentido antigenmico (de
polaridade negativa); que serve, ento, de molde para a sntese de cpias de RNA de sentido
genmico. As regies 5UTR e 3UTR do genoma
contm seqncias importantes para a transcrio e replicao. O genoma dos vrus do gnero
Flavivirus possui a estrutura cap na extremidade
3; os demais membros da famlia Flaviviridae e os
picornavrus possuem estruturas secundrias (internal ribosomal entry site, IRES) na regio 5UTR,
que so reconhecidas pelos ribossomos para o
incio da traduo.

3.5.2.2 Vrus da classe IVb


O genoma desses vrus constitudo por
uma molcula de RNA de polaridade positiva,
6
Genoma RNA (+)

Replicao
3

Traduo
parcial

Poliprotena
regio 5
Clivagem

mas a organizao genmica e a estratgia de


expresso gnica diferem do grupo anterior. Os
genes que codicam as protenas NS ocupam os
dois teros iniciais do genoma; o tero restante
contm os genes das protenas estruturais. No
incio da infeco, o RNA genmico traduzido
parcialmente, resultando na produo de uma
poliprotena que abrange a regio das protenas
NS. A clivagem dessa poliprotena resulta nas
protenas NS, incluindo a replicase viral. Utilizando o RNA genmico como molde, a replicase
sintetiza uma cpia de RNA de sentido antigenmico (polaridade negativa) com a extenso completa do genoma. Esse RNA antigenmico serve
de molde para a sntese de vrios mRNAs de
extenses variveis (denominados mRNAs subgenmicos), que sero traduzidos nas protenas
estruturais. O RNA antigenmico tambm serve
de molde para a transcrio completa e produo
de RNAs de sentido e extenso genmica. Resumindo, embora o genoma desses vrus possua
polaridade positiva, apenas a regio da ORF, que
corresponde s protenas NS, traduzida pelos
ribossomos. As protenas estruturais so produzidas pela traduo de mRNAs subgenmicos,
que, por sua vez, so produzidos pela transcrio
do RNA antigenmico. Uma caracterstica marcante dessas famlias e que difere do grupo anterior a produo de mRNAs subgenmicos
(Figura 5.10).

RNA
anti-genmico
(-)

Genoma RNA (+)

Replicao

Transcrio

mRNA
subgenmicos

Vrions

Egresso

Traduo
7

Protenas
no-estruturais

Morfognese

Morfognese

Protenas
estruturais

Figura 5.10. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVb (Coronaviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Caliciviridae e
Astroviridae). O RNA genmico de sentido positivo traduzido parcialmente, resultando em uma poliprotena (1) que
clivada em protenas no-estruturais, incluindo a replicase (2). A replicase recm-produzida replica o genoma em toda a
sua extenso, produzindo uma molcula de RNA de sentido antigenmico (3). O RNA anti-genmico serve de molde
para a transcrio e produo de vrios RNAm subgenmicos de extenses variveis (4), cuja traduo resulta nas
protenas estruturais (5). Posteriormente tambm so produzidas cpias inteiras do genoma RNA de sentido positivo (6),
que serviro de molde para ciclos adicionais de replicao (3) e sero oportunamente encapsidadas (7).

129

Replicao viral

Nos vrus com o genoma segmentado, a transcrio dos segmentos genmicos de RNA tambm
resulta em dois tipos de RNAs, com funes diferentes (mRNAs para a traduo; RI RNAs para a
replicao). Os mRNAs e RIs, derivados de cada
segmento, no entanto, possuem tamanhos aproximados. Os mRNAs possuem alguns nucleotdeos a mais e a estrutura cap na extremidade 5
e uma cauda poliA na extremidade 3. Os RNAs
RI, sem cap ou poliA so produzidos tardiamente
na infeco e servem exclusivamente de molde
para a replicao e produo de segmentos de
RNA genmicos. Todas as etapas de transcrio
e replicao desses vrus ocorrem com o genoma
intimamente associado com protenas, principalmente a nucleoprotena (NP), formando o complexo ribonucleoprotena (RNP).
Os arenavrus e os vrus do gnero Phlebovirus (Bunyaviridae) apresentam uma estratgia peculiar de expresso de alguns de seus genes. Os
RNA genmicos possuem polaridade negativa
e a maioria dos genes expressa pela estratgia
descrita acima. No entanto, um dos segmentos
genmicos contm seqncias codicantes de
protena tanto no sentido do genoma (sentido negativo) como no sentido antigenmico. Essa es-

3.5.2.3 Vrus da classe V


Esses vrus possuem um genoma RNA de
sentido negativo, no-segmentado (paramixovrus, rabdovrus e lovrus) ou segmentado (ortomixovrus, buniavrus e arenavrus) e trazem a
replicase viral nos vrions. Nos vrus com o genoma no-segmentado, os genes so transcritos
individualmente, originando mRNAs que so
traduzidos nas protenas estruturais e NS (Figura
5.11). Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento contm um (ou dois) gene(s), que tambm so transcritos individualmente. Nas etapas
iniciais da infeco, a transcrio direcionada
para a sntese de mRNAs para a produo de protenas virais. Em fases tardias do ciclo, o modo de
transcrio deve ser alterado, de modo a produzir os RNAs intermedirios de replicao (RI) de
sentido antigenmico. Nos vrus com o genoma
no-segmentado, esses RI possuem a extenso inteira do genoma e servem de molde para a sntese
de molculas de RNA de sentido genmico. Dois
tipos de RNAs de sentido positivo so, ento,
produzidos: os mRNA com a extenso dos genes
individuais (para a traduo); e o RNA RI, com a
extenso inteira do genoma (para a replicao).
4
RNA
antigenmico
(-)

Replicao

Genoma RNA (-)

3
1, 5

Transcrio

mRNA
2

Morfognese

Vrions

Egresso

Traduo
6

Morfognese

Protenas estruturais
No-estruturais + NP

Figura 5.11. Ciclo replicativo dos vrus da classe V (Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridade, Orthomyxoviridae
e Bunyaviridade). Os genes individuais so transcritos pela RNA polimerase presente nos vrions, produzindo
mRNAs correspondentes a cada gene (1). A traduo desses mRNA resulta em protenas estruturais e NS (2). As
protenas NS, incluindo a replicase, participam da replicao do genoma. A replicao ocorre via sntese de RNAs de
sentido antigenmico (3), que servem de molde para a sntese de RNAs de sentido genmico (4). As molculas de
RNA de sentido genmico servem de molde para novos ciclos de transcrio (5), replicao (3, 4) e sero
posteriormente encapsidadas (6).

130

Captulo 5

tratgia denominada ambissense e nica dessas


famlias.

deo com os complexos pr-formados entre o genoma e outras protenas estruturais. A liberao
dos vrions maduros ocorre de forma ineciente
aps a lise celular. As molculas de RNA genmico possuem funes distintas: as molculas de
RNA de polaridade negativa servem apenas de
molde para a transcrio. A funo aparente das
molculas genmicas de RNA positivo apenas
parear com as cadeias negativas. J as molculas
de RNAs de sentido positivo, produzidas durante a infeco, possuem duas funes: podem ser
traduzidas em protenas (mRNAs) e/ou servem
de molde para a sntese das cadeias negativas (Figura 5.12).

3.5.2.4 Vrus da classe III


O genoma desses vrus composto por 10
a 12 segmentos (reovrus) ou dois segmentos
(birnavrus de animais) de RNA de ta dupla.
Nos reovrus, a maioria dos segmentos codica
apenas uma protena; poucos segmentos contm
dois genes. Logo aps a penetrao e ainda em
capsdeos semi-ntegros, a polimerase viral presente nos vrions realiza a transcrio primria de
cada segmento. Os mRNA resultantes possuem
duas funes: so traduzidos em protenas e, j
associados com as protenas estruturais recmproduzidas, servem de molde para a replicao
(sntese de RNAs de sentido negativo). Dentro de
capsdeos pr-formados, os segmentos de RNA
de polaridade negativa recm-produzidos so
transcritos (transcrio secundria). Os transcritos
resultantes so utilizados predominantemente
para a produo de protenas nas fases tardias do
ciclo. Os eventos que ocorrem nas fases nais do
ciclo no esto esclarecidos, mas parecem envolver a associao das protenas externas do capsReplicao

Pr-capsdeos
+ mRNA

3.5.2.5 Vrus da classe VI


A replicao do genoma dos retrovrus inclui etapas que ocorrem no citoplasma (logo aps
a penetrao do nucleocapsdeo na clula hospedeira) e no ncleo (aps a integrao do material
gentico viral no genoma da clula). O genoma
desses vrus composto por duas molculas idnticas de RNA de sentido positivo que, no entanto,
no so traduzidas pelos ribossomos. No inico
da infeco, a molcula de RNA genmico con-

Genoma RNA
(cadeia dupla)

1,6

Morfognese
inicial

Transcrio
primria e
secundria

mRNA
2

Morfognese

Vrions

Egresso

Traduo
6

Morfognese

Protena no-estruturais
Protenas estruturais

Figura 5.12. Ciclo replicativo dos vrus da classe III (Reoviridae e Birnaviridae). A replicase viral trazida nos vrions
realiza a transcrio primria, produzindo mRNAs (1), que so traduzidos em protenas estruturais e no-estruturais
(2). Esses mRNAs formam complexos com as protenas estruturais recm-produzidas (3) e, no interior desses
complexos, servem de molde para a sntese de RNAs de sentido negativo, com a participao das protenas NS (4). As
molculas de RNA de cadeia dupla, resultantes da replicao (4), servem de molde para a transcrio secundria (5) e
para etapas adicionais de replicao (4). Essas molculas, j conjugadas com algumas protenas estruturais,
eventualmente participam da morfognese pela associao com as demais protenas do capsdeo (6).

131

Replicao viral

vertida em uma molcula de cDNA pela enzima


viral transcriptase reversa (RT, DNA polimerase
dependente de RNA), que, em seguida, convertida em uma molcula de DNA de ta dupla.
Essa molcula, denominada provrus, ingressa no
ncleo e integrada no genoma da clula hospedeira, pela atividade integrase da polimerase viral. A integrao do provrus no genoma celular
assegura a perpetuao das informaes genticas do vrus no hospedeiro, e absolutamente necessria para a continuao do ciclo replicativo.
A prxima etapa a transcrio dos genes virais
pela RNApolII e fatores de transcrio celulares.
A transcrio parcial do genoma produz mRNAs
que sero processados por splicing e sero traduzidos nas glicoprotenas do envelope. A transcrio completa do genoma origina mRNAs com
duas nalidades: servirem de molde para a traduo em protenas (RT, protena da matriz, do
capsdeo) ou constiturem o RNA genmico para
a morfognese da prognie viral. Considerandose que a transcrio do provrus que produz o
RNA genmico realizada pela maquinaria celular de transcrio, sem a participao de nenhum

ssDNA

Transcrio
reversa
1

fator viral, o genoma dos retrovrus o nico genoma viral a ser sintetizado exclusivamente por
enzimas e fatores celulares (Figura 5.13).

3.6 Morfognese, maturao e egresso


Os vrus das diversas famlias apresentam
uma ampla diversidade estrutural, que vai desde partculas formadas pelo genoma e uma camada simples de protenas at vrions altamente complexos. No entanto, independente da sua
complexidade estrutural, uma srie de interaes
entre os seus constituintes so necessrias para a
montagem das partculas vricas e a concluso do
processo de replicao. Essas interaes incluem:
a) formao das unidades estruturais do capsdeo pela interao entre as respectivas protenas;
b) incorporao do genoma ao capsdeo pr-formado ou em formao; e c) liberao da prognie
viral da clula infectada. No caso dos vrus envelopados, a formao no nucleocapsdeo seguida
pela aquisio do envelope a partir de membranas celulares, nas quais as protenas virais foram
previamente inseridas.

Genoma RNA (+)

Sntese da
cpia complementar

Morfognese

7
dsDNA
(provrus)
3

Traduo
5

Pol+In
Protenas do
capsdeo

Integrao

Provrus DNA
Integrado

Vrions

Transcrio RNAs de extenso


genmica
4

Splicing +Traduo
6

Egresso

Morfognese

Glicoprotenas
do envelope

Figura 5.13. Ciclo replicativo dos vrus da classe V (Retroviridae). Logo aps o desnudamento, a enzima viral
transcriptase reversa (RT) sintetiza uma molcula de DNA complementar ao RNA genmico (1) que, em seguida,
convertida em DNA de cadeia dupla (dsDNA), tambm pela ao da RT (2). Esta molcula de dsDNA, denominada
provrus, penetra no ncleo e integrada no genoma da clula hospedeira pela atividade viral integrase (3). Os genes
presentes no provrus so, ento, transcritos pela RNA polII celular, originando mRNAs de extenso subgenmica (4)
para a traduo nas protenas do envelope (5). A transcrio do provrus em toda a sua extenso resulta em mRNAs de
extenso genmica (6), que podem ser traduzidos nas outras protenas estruturais e polimerase viral (7) ou participam
da morfognese das partculas virais (8).

132

Captulo 5

Diferentemente de clulas eucariotas e procariotas, que se multiplicam por sso binria,


os vrions so formados pela associao de componentes pr-formados (genoma + protenas).
O processo de montagem das partculas vricas,
que ocorre ao nal do ciclo replicativo, denominado genericamente de morfognese ou reunio.
A aquisio da capacidade infectiva pelas partculas vricas recm-formadas que ocorre prvia
ou concomitantemente com o seu egresso da clula denomina-se maturao. Como, para muitos
vrus, esses processos ocorrem simultaneamente,
sero aqui abordados conjuntamente.
As diferentes etapas da formao da partcula vrica no ocorrem ao acaso. As associaes
entre os componentes so direcionadas e favorecidas por interaes qumicas especcas entre as
unidades proticas estruturais e entre estas e o
cido nuclico. Dependendo da estrutura e complexidade da partcula vrica, da estratgia e local
de replicao, os vrus desenvolvem diferentes
estratgias de morfognese e maturao/egresso
de sua prognie.

3.6.1 Maturao intracelular


(citoplasmtica ou nuclear)
Alguns vrus (principalmente os desprovidos de envelope) completam o processo de mor-

fognese das partculas (e a conseqente maturao) integralmente no citoplasma (vrus RNA) ou


no ncleo (vrus DNA). Dessa forma, a prognie
viral infecciosa pode ser encontrada nesses compartimentos, mesmo com a clula ainda ntegra,
ou seja, a maturao ocorre previamente ao egresso. Esses vrus geralmente so liberados quando
ocorre a destruio das clulas infectadas (Figura 5.14). Os vrus no-envelopados das famlias
Polyomaviridae, Papillomaviridae, Adenoviridae e Picornaviridae e tambm os membros da Poxviridae e
Asfarviridae (com envelope), enquadram-se nessa
categoria.

3.6.2 Maturao por brotamento em


membranas celulares
No ciclo replicativo dos vrus envelopados,
as glicoprotenas do envelope recm-sintetizadas
so inseridas em membranas celulares, isto , na
membrana do retculo endoplasmtico rugoso
(RER), no aparelho de Golgi ou na membrana
plasmtica. Os nucleocapsdeos recm-formados
interagem com a protena da matriz e/ou com
extremidades citoplasmticas dessas glicoprotenas e inserem-se (ou projetam-se) atravs da
membrana, incorporando o envoltrio. Esse envoltrio (envelope) composto pela membrana
lipdica dupla, contendo as glicoprotenas virais

Meio extracelular

Membrana plasmtica

Citoplasma

Figura 5.14. Maturao intracelular e egresso dos vrus sem envelope. Os componentes do capsdeo interagem entre si
e com o genoma (1), resultando na formao de partculas vricas infecciosas (2), que so liberadas por lise celular (3).

133

Replicao viral

inseridas. O processo de aquisio do envelope


denominado brotamento, pois o nucleocapsdeo
literalmente brota para o interior do RER (Figura
5.15), do Golgi ou para o exterior da clula (Figura 5.16). Os vrus que realizam brotamento em
membranas celulares, como forma de adquirir o

envelope e completar a sua morfognese/maturao, podem ser liberados por exocitose sem induzir necessariamente lise da clula.
Os vrus RNA de sentido negativo, alguns
vrus RNA de sentido positivo (togavrus) e os retrovrus completam a morfognese e a maturao

Meio extracelular

Membrana plasmtica

Citoplasma

Figura 5.15. Maturao intracitoplasmtica de vrus envelopados por brotamento em membranas celulares internas.
Interao dos nucleocapsdeos com as caudas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento e transporte no interior
de vesculas (2), liberao por exocitose (3).

Meio extracelular
4

Membrana plasmtica

2
1
Citoplasma

Figura 5.16. Brotamento e maturao de vrus envelopados na membrana plasmtica. Interao do nucleocapsdeo
com a protena matriz e/ou caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento atravs da
membrana plasmtica e aquisio do envelope (2, 3), egresso de partculas infecciosas (4).

134

somente no momento da liberao dos vrions na


superfcie da clula. Nesses casos, no possvel
detectar prognie viral infecciosa no interior das
clulas. Os vrions de outras famlias (Flaviviridae, Coronaviridae, Arteriviridae, Bunyaviridae, Poxviridae) realizam o brotamento no RER e/ou no
aparelho de Golgi. Vrions infecciosos podem ser
encontrados em vesculas citoplasmticas derivadas desses compartimentos, nas quais so transportados at a membrana plasmtica, onde so
liberados por exocitose.
Os herpesvrus apresentam uma estratgia
particular de morfognese, maturao e egresso. A replicao do genoma e a montagem dos
nucleocapsdeos ocorrem no ncleo, para onde
as protenas estruturais so importadas aps a
sua sntese no citoplasma. Os nucleocapsdeos
podem adquirir o envelope pelo brotamento na
membrana nuclear interna vrions completos
envelopados podem ser observados no espao
entre as membranas nucleares . Esses nucleocapsdeos podem perder o envelope ao sair desse
compartimento e readquir o envelope pelo brotamento na membrana do RER. Nesses casos,
so transportados em vesculas e liberados ao
exterior por exocitose. Outros nucleocapsdeos
podem ser transportados atravs do citoplasma
at a membrana plasmtica, onde adquirem o envelope por brotamento. Ao contrrio de alguns
vrus envelopados, que no so lticos, a replicao dos herpesvrus inevitavelmente leva lise e
destruio celular.
Os efeitos da replicao viral na clula hospedeira so muito variveis e vo desde infeces que no provocam alteraes detectveis at
a morte e lise celular. As conseqncias da replicao viral em nvel celular possuem importncia
na patogenia das doenas vricas. Esses temas sero abordados no Captulo 8.

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REPLICAO DOS VRUS DNA


Gustavo Delhon1

1 Introduo

139

2 Poliomavrus

140

2.1 O ciclo replicativo


2.2 O genoma dos PoVs
2.3 Expresso dos genes iniciais
2.4 Replicao do DNA
2.5 Expresso dos genes tardios
2.6 Morfognese e egresso
2.7 Concluses

3 Papilomavrus
3.1 O ciclo replicativo
3.2 O genoma dos PpVs
3.3 Expresso dos genes iniciais
3.4 Replicao do DNA e interferncia com o ciclo celular
3.5 Expresso dos genes tardios
3.6 Concluses

4 Adenovrus
4.1 O ciclo replicativo
4.2 O genoma dos AdVs
4.3.Expresso dos genes iniciais
4.4 Replicao do DNA viral
4.5 Expresso dos genes tardios
4.6 Concluses

5 Herpesvrus
5.1 O ciclo replicativo
5.2 O genoma dos HVs
5.3 Os genes virais
5.4 Expresso gnica
5.5 Replicao do DNA viral
5.6 Expresso gnica durante a infeco latente
1

Traduzido por Fernanda S.F.Vogel.

140
142
142
144
145
146
146

147
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154
156

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156
156
157
158
159
160

5.7 Concluses

6 Poxvrus

160

160

6.1 O ciclo replicativo


6.2 O genoma dos PoxVs
6.3 Expresso gnica
6.4 Replicao do DNA
6.5 Concluses

160
160
161
162
163

7 Bibliografia consultada

163

1 Introduo
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hospedeira, associada com fatores codicados pelo
vrus. A contribuio relativa dos fatores virais
na replicao desses vrus, no entanto, varia muito entre as diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA pequenos (parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
ou seja, os seus genomas codicam poucos produtos associados com funes replicativas. Por
outro lado, os vrus DNA grandes (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquinaria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral. Dessa
forma, qual seria a estratgia mais eciente para
a manuteno desses vrus na natureza? Na verdade, ambas, pois tanto os vrus DNA pequenos
como os grandes tm conseguido se perpetuar,
sugerindo que uma perfeita adaptao a um nicho tecidual mais importante do que a complexidade do genoma e a estratgia de replicao.

Os mecanismos de replicao do genoma


tambm variam entre os vrus DNA, de acordo
com a estrutura e topologia do genoma e tambm
com a participao relativa de fatores celulares
e/ou virais (Figura 6.1). O genoma circular de
cadeia dupla dos poliomavrus (e provavelmente
dos papilomavrus), por exemplo, replicado de
forma bidirecional e semidescontnua, a partir de
uma origem nica. O complexo replicativo utiliza um primer de RNA para iniciar a sntese, e o
mecanismo de replicao semelhante ao utilizado pelas clulas eucariotas para replicar o DNA
cromossmico. O genoma linear de ta dupla dos
adenovrus possui uma origem em cada extremidade. A replicao ocorre em duas etapas, e cada
cadeia parental replicada em uma dessas etapas.
O complexo replicativo utiliza uma oxidrila (OH)
ligada a uma protena viral (pTP), que est ligada
em cada extremidade do genoma como iniciador
da sntese de DNA (protein priming). A replicao
dos genomas dos herpesvrus e poxvrus mais
complexa. O genoma dos herpesvrus possui trs
origens e parece ser replicado por um mecanismo de crculo rolante, no qual multmeros lineares so produzidos e, posteriormente, clivados

Ou

Poliomavrus
Papilomavrus

Adenovrus

Parvovrus

Herpesvrus

Poxvrus

Fonte: adaptada de Dulbecco e Ginsberg (1980).

Figura 6.1. Ilustrao da replicao do genoma dos principais vrus DNA. Os estgios intermedirios foram propostos
a partir de estudos fsico-qumicos e, microscopia eletrnica, realizados a diferentes intervalos aps a infeco.

140

em unidades genmicas. A replicao do genoma


DNA linear de ta dupla dos poxvrus parece se
iniciar com a clivagem de uma das cadeias prxima a ala terminal do genoma, seguida de elongao a partir da extremidade 3, gerada pela clivagem. A replicao do genoma DNA linear de
ta simples dos parvovrus no abordada neste
captulo inicia-se com a elongao da extremidade 3 livre, que se encontra exionada, e prossegue continuamente. Uma ilustrao esquemtica da replicao do genoma de diferentes vrus
DNA est apresentada na Figura 6.1.
O objetivo fundamental da replicao viral
produzir prognie viral vivel e abundante, que
assegure a propagao do vrus e a conseqente
transmisso a novos hospedeiros. A produo de
prognie depende da sntese de milhares de cpias do genoma viral e das protenas componentes do vrion, associado com a montagem correta
e liberao eciente das partculas vricas. Esse
processo envolve uma srie de etapas reguladas
temporal e espacialmente, que incluem a expresso de genes virais e a induo e/ou represso
de alguns genes do hospedeiro. Muitas vezes, a
replicao viral est associada com alterao da
siologia celular, o que pode determinar diferentes graus de patologia e at a morte da clula
hospedeira.
Embora a grande maioria dos vrus DNA
replique no ncleo, alguns deles desenvolveram
estratgias especiais que permitem a sua replicao no citoplasma da clula hospedeira. No decorrer deste captulo, sero abordados os aspectos replicativos das principais famlias de vrus
DNA e a estratgia de replicao dos prottipos
de cada famlia, enfatizando-se os aspectos moleculares e biolgicos da expresso gnica, a interferncia com funes celulares, para assegurar a
replicao (entre elas a induo do ciclo celular),
e a replicao do genoma propriamente dita. A
replicao dos circovrus e parvovrus ser abordada nos Captulos 13 e 14, respectivamente. A
replicao dos hepadnavrus ser tratada, resumidamente, no captulo destinado s famlias de
interesse limitado em medicina veterinria.
Inicialmente, ser descrita a replicao dos
vrus da famlia Polyomaviridae, vrus relativamente simples, cuja estratgia de replicao tem

Captulo 6

sido amplamente estudada. De fato, a replicao


dos vrus DNA grandes pode ser considerada
como uma evoluo progressiva de complexidade quando comparada com os esquemas relativamente simples de replicao dos poliomavrus. A
seguir, sero apresentados os principais aspectos
da expresso gnica, replicao do genoma e interao com funes celulares dos papilomavrus, adenovrus, herpesvrus e poxvrus, respectivamente.

2 Poliomavrus
A famlia Polyomaviridae contm um nico
gnero, Polyomavirus, que inclui o prottipo da
famlia, o vrus smio 40 (SV-40), e os vrus JC e
BK, que tm sido, esporadicamente, associados
com tumores em humanos. Os poliomavrus
(PoVs) so vrus DNA pequenos, sem envelope,
de simetria icosadrica, que infectam um amplo
espectro de hospedeiros desde pssaros at humanos . As infeces pelos PoVs so geralmente
subclnicas. No entanto, a infeco de clulas que
no suportam uma replicao produtiva freqentemente resulta em transformao neoplsica.
Por isso, os PoVs so tambm conhecidos como
os pequenos vrus DNA tumorais.
Apesar de sua pequena importncia clnica,
os PoVs foram alvo de intensivos estudos biolgicos e moleculares, principalmente devido s
suas propriedades tumorignicas. As pesquisas
com os PoVs elucidaram importantes aspectos
da biologia celular. Dentre as maiores descobertas resultantes do estudo dos poliomavrus destacam-se: a) estrutura do DNA superenrolado,
b) estrutura e funo da origem da replicao do
DNA, c) estrutura e funo dos promotores, d) descoberta dos enhancers e o seu papel na expresso
gnica, e) descoberta do mecanismo de splicing
alternativo dos transcritos (RNA mensageiros,
mRNA) e f) replicao do DNA cromossmico.

2.1 O ciclo replicativo


O mecanismo de penetrao dos PoVs nas
clulas hospedeiras ainda no est completamente esclarecido. Embora estudos recentes tenham
demonstrado o envolvimento de molculas do

141

Replicao dos vrus DNA

complexo maior de histocompatibilidade do tipo


I (MHC-I) como receptores para o SV-40, ainda
no h evidncias conclusivas nesse sentido. Aps
a ligao aos receptores, os vrions so internalizados por endocitose caveolar e transportados ao
longo dos microtbulos at o retculo endoplasmtico. O mecanismo de transporte para o citoplasma e da para o ncleo no est esclarecido,
porm, sabe-se que o desnudamento do genoma
ocorre no interior do ncleo. Aps a sua liberao
no nucleoplasma, o genoma transcrito pela RNA
polimerase II celular e, subseqentemente, repli-

cado. Os mRNA virais produzidos so processados por splicing e exportados para o citoplasma,
onde so traduzidos. As protenas virais recmproduzidas so transportadas de volta ao ncleo,
onde participam da replicao do genoma e, posteriormente, da montagem das partculas vricas.
Durante esse processo, os mRNA e as protenas
virais necessitam interagir com componentes da
maquinaria celular responsvel pela exportao
e importao nuclear de macromolculas. A morfognese das partculas virais ocorre no ncleo.
As partculas recm-formadas so transportadas

1
7

Ncleo

5a

Transformao
celular

Citoplasma
9

Clula permissiva

Clula no-permissiva

Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).

Figura 6.2. Ciclo replicativo dos poliomavrus em clulas permissivas (A) e no-permissivas (B). A) Aps a penetrao
do vrion (1), o genoma desnudo no interior do ncleo (2), onde os genes iniciais so transcritos pela maquinaria
celular de transcrio (3). Os mRNAs so traduzidos nas protenas iniciais, ou seja, os antgenos T (4). Os antgenos T
ingressam no ncleo e interagem com o DNA viral e com fatores da clula hospedeira, resultando na replicao do
genoma (5). Aps a replicao, os genes tardios so transcritos (6) e a traduo dos mRNAs origina as protenas
estruturais (7) que ingressam no ncleo e interagem com o genoma para formar as novas partculas vricas (8). Os
vrions se acumulam no ncleo, so exportados em vesculas para o citoplasma e liberados por lise celular ou por
exocitose (9). Em clulas no-permissivas (B), as etapas 1 a 4 ocorrem normalmente. No entanto, o antgeno T falha em
interagir com os fatores celulares, no ocorrendo a replicao do DNA viral, nem a transcrio e expresso dos genes
tardios. O DNA viral persiste no ncleo da clula (5a) e os genes dos antgenos T continuam sendo expressos (3, 4),
podendo levar imortalizao e transformao celular. No h replicao do genoma e nem produo de prognie
viral.

142

at a superfcie celular, no interior de vesculas, e


liberadas por exocitose ou por lise celular, dependendo do tipo de clula.
A infeco de clulas permissivas resulta na
ocorrncia de todas essas etapas e na conseqente produo de prognie viral infecciosa. Por outro lado, a infeco de clulas semipermissivas
(geralmente de espcies heterlogas) resulta em
replicao abortiva, na qual ocorre apenas a expresso dos genes iniciais, sem a replicao do
genoma ou produo das protenas tardias (protenas estruturais). A persistncia do genoma
viral nessas clulas, associada com a expresso
contnua dos antgenos T, pode levar imortalizao e transformao celular. As etapas do ciclo
replicativo dos PoVs em clulas permissivas e
no-permissivas esto representadas esquematicamente na Figura 6.2.

2.2 O genoma dos PoVs


O genoma dos PoVs constitudo por uma
molcula de DNA de ta dupla circular, com
aproximadamente 5.000 pares de bases (bp), que,
na maioria dos PoVs, est associado com protenas. O genoma desses vrus encontra-se associado com histonas celulares, formando estruturas
semelhantes aos nucleossomas e assumindo uma
congurao helicoidal semelhante cromatina
celular. Por essas razes, os seus genomas so geralmente denominados minicromossomos virais. A
replicao do genoma do SV-40 realizada basicamente por fatores e enzimas da clula hospedeira, com a participao de apenas uma protena
viral, o antgeno T. Por isso, a replicao do DNA
do SV-40 tem sido utilizada como modelo para se
estudar a replicao bidirecional semidescontnua do DNA cromossmico celular.
A organizao do genoma do SV-40 est representada na Figura 6.3. Cerca de 90% da extenso do genoma codicante, e os 10% restantes
representam regies no-traduzidas que possuem
funes regulatrias. O genoma do SV-40 codica seis protenas, sendo trs delas componentes
da estrutura do capsdeo (VP1, VP2 e VP3) e trs
protenas no-estruturais, denominadas antgeno
T pequeno (sT) e grande (lT), e a protena agno. A
protena agno parece participar na morfognese

Captulo 6

dos vrions, pois interage com a VP1. Os PoVs de


roedores codicam uma terceira protena T, o antgeno T mdio (mT), e no codicam a protena
agno.
Em vez de possurem regies codicantes
com seqncias regulatrias individuais, os PoVs
solucionaram o problema do genoma pequeno
realizando splicing alternativo em alguns transcritos, resultando, assim, na traduo em protenas diferentes parcialmente homlogas. Alm
disso, o genoma apresenta uma concentrao das
seqncias regulatrias para a transcrio e replicao do DNA em uma pequena regio, o que
contribui para a compactao gentica (Figura
6.3).

2.3 Expresso dos genes iniciais


Aps o desnudamento do genoma no interior do ncleo, o minicromossoma do SV-40
transcrito pelos complexos de transcrio da clula hospedeira (RNA pol II e fatores de transcrio). O primeiro gene a ser transcrito o do
antgeno T, e a sua transcrio contnua resulta
em um acmulo gradual do mRNA especco
durante as primeiras 10 a 12 horas de infeco.
Como os mRNA do antgeno T so os primeiros
a serem transcritos e detectados, so denominados transcritos iniciais (E = early). Os transcritos
primrios do gene do antgeno T sofrem splicing
alternativo para originar mRNAs, que sero traduzidos em duas protenas: o antgeno T grande
(lT) e pequeno (sT). Com isso, as protenas lT e sT
possuem parte de sua seqncia de aminocidos
em comum; sendo que o lT possui uma regio
adicional no presente no sT.
A transcrio dos genes iniciais controlada
por uma regio regulatria de 250 pb, localizada imediatamente na direo 5 do stio inicial
de transcrio do gene do antgeno T (Figura
6.3). Essa regio regulatria apresenta pequenas
seqncias de nucleotdeos, dispostas em la, ou
motivos (motifs) que, juntos, constituem o promotor inicial do SV-40. Esses motivos atuam como
stios de ancoragem e ligao de componentes do
aparato de transcrio celular, incluindo a RNA
pol II e os fatores de transcrio. Logo acima do
promotor (na direo 5), existem duas cpias re-

143

Replicao dos vrus DNA

m RNA iniciais

m RNA tardios

Enhancer

72

72

TATA

21 21 22

III

II
Aux-2

ORI

Core

Promoter inicial

I
Aux-1

Origem da replicao bidirecional

320

240

160

80

0/5243

5163 bp

PL Ori PE
VP2

Organizao genmica
do SV-40

ST

VP3
LT
17kT
VP1

Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).

Figura 6.3. Estrutura e organizao do genoma do SV-40 (inferior) e organizao das regies regulatrias da
transcrio e replicao (superior). ORI: origem de replicao; PE: promotor dos genes iniciais; PL: promotor dos
genes tardios; lT: mRNA do gene do antgeno T grande; sT: mRNA do gene do antgeno T pequeno; VP1, VP2 e VP3:
mRNA das protenas estruturais. >>: stios de ligao do antgeno; I: stio de regulao negativa da transcrio dos
mRNA iniciais; II: stios de ligao e separao do DNA para o incio da replicao; III: stios de regulao positiva da
transcrio dos genes tardios.

petidas de 72 pb que atuam como enhancers do


promotor. Essas seqncias de 72 pb so responsveis pela ligao especca de fatores de transcrio, ou transativadores, cuja funo se ligar
ao DNA e aumentar a ecincia da transcrio a
partir do complexo basal de transcrio.
Alguns motivos presentes nos promotores
e enhancers virais so encontrados tambm nas
regies regulatrias de certos genes das clulas

hospedeiras. Esse aspecto molecular crucial


para o parasitismo do vrus. Possuindo regies
regulatrias semelhantes s da clula hospedeira,
o vrus pode seqestrar os componentes da maquinaria celular de transcrio para sintetizar os
seus mRNA.
Alm disso, a regio regulatria do SV-40
contm vrias seqncias repetidas que servem
de stios de ligao para o antgeno lT, o que in-

144

dica que esta protena regula a sua prpria expresso. Quando a quantidade de antgeno lT, na
clula infectada, atinge nveis altos, a ocupao
desses stios pelo prprio antgeno lT regula negativamente a transcrio do seu gene.
A prxima etapa do ciclo replicativo a replicao do genoma viral. Como o genoma dos
PoVs no codica os produtos necessrios sua
prpria replicao, esses vrus dependem integralmente de enzimas e fatores celulares para replicar o seu DNA. No entanto, apenas um pequeno nmero de clulas no organismo encontra-se
na fase S do ciclo celular, fase em que a clula expressa os fatores necessrios para a replicao do
DNA nuclear. A maioria das clulas do organismo j so diferenciadas ou so clulas que necessitam estmulos externos (fatores de crescimento, hormnios ou outros estmulos mitognicos)
para iniciar o ciclo celular. Os PoVs, assim como
outros vrus DNA, solucionaram esse problema
ao desenvolverem mecanismos para estimular as
clulas a entrarem em fase S e, assim, produzirem os fatores necessrios replicao do seu genoma. Dessa maneira, o SV-40 capaz de infectar
de forma persistente clulas renais diferenciadas
e que no esto em diviso de seu hospedeiro
natural.
A replicao do DNA cromossmico das clulas ocorre durante a fase S do ciclo celular, mas
a sntese e o acmulo dos fatores necessrios
replicao do DNA iniciam na fase anterior (G1).
A transio entre as fases G1 e S controlada parcialmente pela protena do retinoblastoma (pRb)
e pelas protenas relacionadas p107 e p130. Em
clulas que no esto em diviso, as protenas da
famlia Rb impedem o incio da fase S pelo seqestro de fatores de transcrio que ativam os
genes das enzimas relacionadas com a replicao
do DNA, incluindo a DNA polimerase . Aps o
estmulo mitognico, a ciclina D liga-se nas cdk
4 e cdk 6, ativando-as, o que leva hiperfosforilao da protenas Rb e resulta na liberao dos
fatores de transcrio (E2F) e incio da fase S.
Outros fatores tambm esto envolvidos no
controle da transio entre as fases G1 e S. O fator
de transcrio p53 pode prevenir a sntese noprogramada de DNA e bloquear o incio da fase
S quando so detectadas leses no DNA celular.

Captulo 6

Dependendo do estgio siolgico da clula, a


p53 pode retardar o progresso do ciclo celular
ou induzir apoptose. Pelo seu papel na transio
G-S1, tanto a pRb como a p53 podem ser consideradas guardis que evitam a diviso celular
extempornea e a transformao maligna das
clulas. Por isso, so conhecidas como protenas
antioncognicas.
Apesar desses mecanismos de controle do
ciclo celular, os PoVs conseguem induzir o incio
da fase S em clulas quiescentes porque o antgeno lT dos PoVs exerce um importante papel,
alterando o controle do ciclo celular por interagir diretamente com a protena Rb e, em alguns
PoVs, tambm com a p53. Um pequeno domnio
prximo a regio N-terminal do antgeno lT se
liga especicamente s protenas da famlia Rb,
enquanto seqncias prximas regio C-terminal so requeridas para a associao com a p53
(Figura 6.4). As conseqncias dessas interaes
so a inibio da funo da pRb e p53 e a conseqente expresso dos produtos necessrios replicao do DNA viral e tambm celular.
Alm do efeito da ligao nas pRbs, o antgeno lT capaz de estimular diretamente os
promotores dos genes envolvidos no controle do
ciclo celular, incluindo os genes que codicam as
ciclinas. Dessa forma, o antgeno lT utiliza dois
mecanismos para assegurar que a clula infectada entre em fase S e, assim, propicie um ambiente
favorvel replicao viral.
A funo exata do antgeno T pequeno (sT)
durante a infeco produtiva ainda no est completamente esclarecida, porm sabe-se que esta
protena capaz de interagir com a fosfatase 2,
uma enzima reguladora do ciclo celular. Assim, o
sT poderia colaborar com o lT na induo da fase
S em clulas infectadas.

2.4 Replicao do DNA


A replicao do DNA circular dos PoVs envolve o relaxamento e a separao das cadeias do
DNA, a sntese da cadeias lhas de DNA e a resoluo e a separao das molculas replicadas. O
multifuncional antgeno lT exerce um papel fundamental no incio da replicao do DNA viral
ao se ligar em seqncias regulatrias, localiza-

145

Replicao dos vrus DNA

Antgeno T

Domnio J

Hsc70

L
X
C
X
E

N
L Liga na ORI
S

ATPase
Zn

Liga na p53

Liga na p53

pRB

p53

p107

p300

HR

p130

Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).

Figura 6.4. Estrutura funcional do antgeno T do SV-40. Nessa representao, esto indicados os motivos funcionais
do lT. Domnio J: stio de ligao da protena Hsc70; LXCXE: stio de ligao das protenas da famlia pRb; NLS: sinal
para localizao nuclear; stio de ligao na ORI; stio de ligao de Zn+; stio com atividade ATPase; stios de ligao
nas protenas p53; HR: stio envolvido na determinao do host range.

das nas proximidades do promotor/enhancer do


genoma do SV-40. Essa regio, conhecida por origem da replicao (ori), consiste de uma seqncia central de 64 nucleotdeos, anqueada por
seqncias auxiliares (Figura 6.3). Como outras
protenas que se ligam ao DNA, o antgeno lT oligomeriza ao interagir com os stios especcos na
ori. Hexmeros do lT formam um anel duplo ao
redor da ori e promovem a separao das cadeias
do DNA viral nesse local. Esse processo dependente de energia, que fornecida pela hidrlise
de ATP catalisada por uma atividade ATPase do
prprio antgeno T (Figura 6.4).
As regies de ta simples do DNA associamse, ento, com a protena replicativa A (RPA), que
uma protena celular que se liga e mantm as
regies de ta simples separadas. Isso permite a
separao bidirecional das cadeias mediada pelo
antgeno lT, expondo regies de cadeia simples
para a processividade da replicao. O recrutamento da DNA polimerase (primase) e da topoisomerase I resulta na formao do complexo de
iniciao. A etapa de elongao envolve a sntese
bidirecional do DNA, que precedida pela atividade helicase do antgeno lT, que se move
frente do complexo replicativo (Figura 6.1A). Os
fatores do hospedeiro (PCNA e a DNA polimerase ) participam da sntese das cadeias leading

(contnua) e lagging (descontnua). A exonuclease e


ligase I da clula hospedeira so necessrias para
a remoo dos primers e ligao dos fragmentos de
Okazaki, produzidos pela replicao descontnua
de uma das cadeias. Como as cadeias parental e
recm-replicada de DNA, so circulares e permanecem entrelaadas. A prxima etapa envolve a
separao dessas molculas pela ao da enzima
celular topoisomerase II (Figura 6.1). As histonas
acumuladas no ncleo celular durante a fase S se
associam com os genomas virais recm-replicados, formando, assim, uma prognie de minicromossomos. As clulas infectadas contm mais de
200.000 cpias de DNA viral e, aproximadamente, 50% destes so encapsidados para formar a
prognie viral. Em resumo, a replicao do DNA
do SV-40 compartilha vrias etapas e componentes essenciais envolvidos na replicao do DNA
da clula hospedeira.

2.5 Expresso dos genes tardios


A replicao do DNA viral provoca uma
alterao no padro de expresso gnica, favorecendo a transcrio e expresso dos genes
tardios (L = late), que codicam as protenas do
capsdeo. O mecanismo de transio, passando
da expresso dos genes iniciais para a expresso

146

dos tardios no bem conhecido. A redistribuio dos nucleossomos nas regies regulatrias
do genoma possivelmente desempenhe alguma
funo nesse processo, pois resulta na exposio
dos stios regulatrios dos genes tardios para o
reconhecimento pelo aparato celular de transcrio. O promotor que direciona a expresso dos
mRNA tardios possui alguns motivos presentes
tambm nos stios regulatrios dos genes iniciais,
incluindo as seqncias para a ligao do antgeno lT.
Dois mRNA tardios principais so transcritos na direo oposta aos mRNA iniciais e
sofrem splicing alternativo. Os mRNA pequenos
so traduzidos na protena VP1 do capsdeo, e os
transcritos grandes originam a VP2 e VP3. Como
a seqncia que codica a VP3 est contida na
seqncia da VP2, a VP3 poderia ser produzida
pela clivagem da protena VP2. No entanto, tem
sido demonstrado que a traduo e sntese da
VP3 e VP2 so independentes.
A quantidade de mRNA tardios nas clulas
infectadas muito superior a dos mRNA iniciais.
Isso se explica pelo fato de que uma nica partcula vrica contm 360 molculas de VP1. Portanto, para uma prognie viral de 105 vrions por clula, so necessrias 3.6 x 107-8 molculas de VP1.
Assumindo que cada molcula de mRNA pode
originar de 5.000 a 10.000 molculas de VP1, mais
de 30.000 molculas de mRNA da VP1 seriam necessrias para a produo de protena suciente
para encapsidar a prognie viral. O acmulo da
prognie de minicromossomos durante a replicao do DNA viral, com a conseqente amplicao dos moldes DNA e a ativao da transcrio
pelo antgeno lT, so os responsveis pelos nveis
altos de mRNA tardios nas clulas infectadas.
Recentemente, foi relatado que microRNAs
(miRNAs) so transcritos do genoma do SV-40
em fases tardias da infeco. Os miRNAs so
pequenos (aproximadamente 20 nt) e desempenham funes regulatrias na expresso gnica
de eucariotas. A hibridizao desses miRNAs
com determinados mRNA-alvos resulta no silenciamento dos genes correspondentes. Esse silenciamento pode ocorrer por interferncia com a
traduo ou pela degradao dos mRNA. Assim,

Captulo 6

dois mecanismos atuam para reduzir a expresso


do antgeno lT em fases tardias da infeco: a represso da transcrio pelo prprio antgeno lT
e a interferncia pelos miRNAs. Surpreendentemente, clulas infectadas com isolados de campo
do SV-40 so menos susceptveis lise por linfcitos T citotxicos do que clulas infectadas com
cepas mutantes que no induzem a sntese de
miRNAs. Provavelmente, a capacidade de sntese de miRNA se constitua em um mecanismo de
evoluo viral, permitindo a esses vrus escaparem da vigilncia do sistema imunolgico.

2.6 Morfognese e egresso


Aps a sntese no citoplasma, as protenas
virais VP1, VP2 e VP3 so transportadas para o
interior do ncleo para a montagem dos vrions.
Esse transporte mediado por sinais de localizao nuclear (NLS, seqncias especcas de
aminocidos) presentes nessas protenas. Essas
seqncias so responsveis pela interao das
protenas virais com o aparato de importao nuclear.
O mecanismo de montagem das partculas
virais (morfognese) dos poliomavrus no conhecido. Capsdeos vazios podem ser inicialmente pr-formados, seguidos da incorporao dos
genomas (como minicromossomos). Alternativamente, os capsmeros individuais formados pelos pentmeros da VP1, associados com a VP2 e
com a VP3, podem interagir como o minicromossomo para a montagem dos capsdeos. A protena agno, uma protena altamente bsica, codicada pela regio lder dos mRNA tardios de alguns
PoVs, facilita a morfognese por interagir com a
VP1. Nos PoVs de humanos, a agnoprotena atua
tambm na transcrio e replicao do DNA.

2.7 Concluses
A importncia crtica de uma nica protena o antgeno lT em vrias etapas do ciclo
replicativo, como a transcrio, induo da fase S
e replicao do DNA, constitui-se em um aspecto
nico da famlia Polyomaviridae. O antgeno lT o
protagonista principal e possui vrias atividades

147

Replicao dos vrus DNA

biolgicas. Atua como regulador da transcrio


viral, como protena ligante de DNA, possui atividade helicase e ATPase e de chaperone, alm de
interagir com vrias protenas da clula hospedeira. A atividade do antgeno lT regulada por
vrias modicaes ps-traduo, como fosforilao, glicosilao, acetilao e adenilao.
Os PoVs so tambm conhecidos como pequenos vrus DNA tumorais, por causa de sua
capacidade de induzir a formao de tumores. A
infeco de clulas no-permissivas pode resultar em replicao abortiva. No entanto, a integrao freqente do genoma viral nos cromossomos
da clula hospedeira pode resultar em expresso
contnua das protenas iniciais. O antgeno T possui um papel decisivo nos processos de imortalizao, transformao celular e oncognese, provavelmente por suas interaes com mltiplos
fatores celulares e pela interferncia com a regulao do ciclo celular.

A famlia Papillomaviridae possui apenas o


gnero Papillomavirus, que inclui vrios vrus de
mamferos e de aves. Esses vrus esto freqentemente associados com leses proliferativas na
epiderme e nas mucosas (papilomas ou verrugas).
Alm de clulas epiteliais, alguns papilomavrus
(PpVs) tambm infectam clulas do tecido conjuntivo, causando bropapilomas (p. ex.: papilomavrus bovino-1, BPV-1). As leses causadas
pelos PpVs so geralmente benignas, mas alguns
desses vrus esto associados com a produo de
neoplasias malignas.
Os vrions dos PpVs so icosadricos, sem
envelope e possuem aproximadamente 55 nm de
dimetro. O genoma consiste de uma molcula
de DNA de ta dupla circular, com 6.800 a 8.400
pb que, a exemplo dos poliomavrus, est associada com histonas da clula hospedeira, formando um complexo semelhante cromatina celular
(minicromossomo).

dos queratincitos (ou das clulas equivalentes


em superfcies no-cutneas). Na epiderme, os
queratincitos representam cerca de 90% das clulas e encontram-se em diferentes fases de diferenciao. As clulas menos diferenciadas esto
localizadas no compartimento basal (estrato germinativo), e as mais diferenciadas localizam-se
no compartimento apical (estrato crneo). As clulas em estgios intermedirios de diferenciao
esto localizadas nos estratos granuloso e espinhoso. As clulas-tronco do compartimento basal
se multiplicam de forma assimtrica, originando
outras clulas-tronco e tambm clulas de transio para a posterior diferenciao. Essas ltimas
deixam o estrato basal e penetram no estrato espinhoso, onde iniciam o processo de diferenciao celular. O ritmo de multiplicao das clulas
basais assegura uma substituio contnua das
clulas escamosas da superfcie apical que vo
sendo desfoliadas.
A infeco de animais e pessoas pelos PpVs
provavelmente ocorre por meio de microleses,
que expem o compartimento basal, permitindo
a penetrao e incio da replicao viral. A ligao dos vrus s clulas mediada pelo sulfato de
heparina. No entanto, no se conhecem os receptores especcos que mediam a ligao e penetrao do vrus nas clulas e tampouco o mecanismo
de desnudamento.
A infeco das clulas basais no produtiva, ou seja, no resulta na produo de prognie viral. O ciclo replicativo inicia nessas clulas
com a expresso limitada de genes virais (genes
iniciais) e replicao do DNA. No entanto, a replicao s completada nas clulas diferenciadas, onde ocorre a amplicao do DNA viral,
a expresso dos genes tardios, a morfognese e
egresso da prognie viral. Embora as clulas basais representem a fonte de fatores de replicao,
a infeco viral necessita de fatores que somente
esto presentes em clulas que esto na fase S,
para assegurar a expresso temporal dos genes e
a replicao do genoma.

3.1 O ciclo replicativo

3.2 O genoma dos PpVs

O ciclo replicativo dos PpVs est estreitamente associado com o processo de diferenciao

A Figura 6.5 apresenta a organizao do genoma do papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1).

3 Papilomavrus

148

Captulo 6

Os genes do PpVs so classicados em iniciais


(E) ou tardios (T) e, ao contrrio dos PoVs, so
codicados em apenas uma das tas do DNA
genmico. Assim, a transcrio do DNA viral
realizada em apenas uma direo. Uma regio
no-traduzida, conhecida como regio longa de
controle (LCR), contm as seqncias regulatrias, incluindo a origem da replicao do DNA
e enhancers para a transcrio. Seis diferentes
promotores foram identicados no genoma do
BPV-1. Entre os diferentes PpVs, existe uma variabilidade muito grande dos promotores, provavelmente reetindo os aspectos peculiares de regulao em diferentes espcies ou em diferentes
stios de replicao.

E6
LCR

AL

P7185
PL
CE

L1

E7
P7940
P89

E8
P890

7946/1

7000

1000

E1

BPV-1

6000

2000

P2443
3000

5000

P3080

L2
4000

E3

AE

E5

E4

E2

Fonte: adaptado de Fowley e Lowy (2001).

Figura 6.5. Estrutura e organizao do genoma do


papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1). LCR: regio longa
de controle (contm a origem de replicao); CE:
enhancer constitutivo; P: promoters (os nmeros
indicam a posio no genoma); AE: stio de
poliadenilao dos transcritos iniciais; AL: stio de
poliadenilao dos transcritos tardios; E1 a E8: mRNAs
dos genes iniciais; L1 e L2: mRNAs dos genes tardios.

o diferencial de mRNAs em diferentes clulas.


Os mRNA dos PpVs so policistrnicos, ou seja,
contm mais de uma seqncia codicante (open
reading frame, ORF). No entanto, apenas uma dessas ORFs traduzida de cada mRNA. Nos PpVs
de humanos e de bovinos, os primeiros genes a
serem expressos so o E1 e E2, pela RNA pol II,
com o auxlio de fatores de transcrio especcos de queratincitos.
A protena E2 desempenha um papel fundamental na transcrio e na replicao do DNA.
Essa protena contm uma regio para a ligao
no DNA e outra com funo de ativao da transcrio. A E2 se liga especicamente em determinados promotores no LCR e controla positiva e
negativamente a expresso dos genes iniciais,
dependendo da sua concentrao e das interaes de suas regies regulatrias com o DNA.
Essa regulao ainda mais complexa devido
presena de diferentes isoformas da E2, que, provavelmente, possuam diferentes propriedades
regulatrias. Por outro lado, a nica e importante
funo da E2 na replicao do genoma estimular a ligao da E1 ao DNA, principalmente no
incio da infeco, quando a concentrao da E1
ainda baixa.
A E1 a maior e mais conservada protena
dos PpV. a nica protena viral diretamente envolvida na replicao do DNA viral. Essa protena apresenta atividade ATPase/helicase e forma
hexmeros simples e duplos ao redor do DNA viral. Alm disso, a E1 forma complexos com protenas do hospedeiro que esto envolvidas com
a replicao do DNA, incluindo as subunidades
da DNA polimerase , a RPA e chaperone Hsp40.
Portanto, a E1 dos PpV semelhante ao antgeno
lT dos poliomavrus com relao atividade enzimtica, capacidade de recrutar fatores celulares
e no papel fundamental na iniciao da replicao do genoma viral.

3.4 Replicao do DNA e interferncia


com o ciclo celular

3.3 Expresso dos genes iniciais


A expresso dos genes dos PpVs complexa, em razo da presena de mltiplos promotores, de stios de splicing alternativo e pela produ-

O resultado da atividade conjunta da E1 e


E2 a formao do complexo de iniciao que se
liga na origem de replicao do DNA. Esse evento precede e permite a elongao da cadeia, resul-

149

Replicao dos vrus DNA

tando na produo das cpias de DNA a serem


encapsidadas na prognie viral. importante salientar que todas as fases da replicao do DNA
viral ocorrem em sincronia com a replicao dos
cromossomos da clula hospedeira.
A replicao do DNA viral no compartimento basal produz entre 20 e 100 cpias do genoma,
que so mantidos como DNAs extracromossmicos no ncleo da clula hospedeira. Os genomas
virais so elmente distribudos entre as clulaslhas, e o processo de replicao s reiniciado
nos queratincitos em estgios avanados de diferenciao (Figura 6.6).
A amplicao dos genomas virais que
ocorre em queratincitos diferenciados, denomi-

nada replicao vegetativa do DNA, representa


um desao para o vrus, pois essas clulas encontram-se na fase G0 do ciclo celular. Acredita-se
que duas pequenas protenas virais, a E6 e a E7,
sejam responsveis pela criao de um ambiente
favorvel para a replicao vegetativa. Essas protenas tambm desempenham um papel central
na transformao celular e na induo de neoplasias, especialmente nos PpVs humanos de alto
risco. De fato, sabe-se muito mais sobre o papel
dessas protenas na transformao celular do que
em infeces produtivas. Por isso, deve-se analisar com cautela as informaes a respeito do provvel papel da E6 e da E7 na infeco produtiva
no contexto da replicao vegetativa do DNA.

Vrus introduzido
por microleses

Diferenciao dos
queratincitos

Replicao dos
papilomavrus

Estrato crneo

Liberao de vrions maduros

Camadas
granulares

Vrions maduros

Camadas
espinhosas
superiores

Morfognese dos vrions


Produo das protenas tardias
Amplificao vegetativa do DNA
Nveis altos de protenas iniciais (E4)

Camadas
espinhosas
inferiores

Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4

Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(substituem as
amplificadoras)

Possvel stio alternativo


de infeco
Protenas iniciais E1 e E2
Infeco primria
Estabelecimento da replicao
Protenas iniciais E1 e E2

Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)

Fonte: daptado de Chow e Broker (1997).

Figura 6.6. Diferenciao do epitlio cutneo e etapas da replicao dos papilomavrus em infeces benignas (notumorais). As fases de diferenciao celular esto apresentadas esquerda da figura; e as etapas do ciclo replicativo
esto apresentadas direita.

150

De forma semelhante ao antgeno lT dos


PoVs, as E6 e E7 dos PpVs interagem com as
protenas celulares pRb e p53, que so protenas
antioncognicas envolvidas no controle do ciclo
celular. Quando a E6 expressa em camundongos transgnicos, ocorre a hiperproliferao do
epitlio e o desenvolvimento de tumores epiteliais. Esses efeitos dependem parcialmente da
habilidade da E6 de se ligar p53 e recrutar uma
ligase celular, que adiciona uma ubiquitina, a
p53, direcionando-a a degradao. A E6, ento,
ao remover a p53, que envolvida no controle do
ciclo celular, estimularia a clula a entrar em fase
S e retardaria a apoptose.
Estudos recentes sugerem que, alm dos efeitos mediados pela interao com a p53, a E6 pode
interferir com o ciclo e na sobrevivncia celular
por outros mecanismos. A E6 induz a hiperfosforilao e inativao da pRb, o que importante
para entrada da clula na fase S. Tambm induz a
expresso da telomerase, uma enzima que replica as extremidades do DNA e impede o encurtamento dos cromossomos aps a diviso celular.
A inativao da pRb e a expresso da telomerase
so importantes no processo de imortalizao de
clulas pelos PpVs. Alm disso, a E6 pode interagir com a BAK, que uma protena pr-apoptose,
que expressa em altos nveis na camada apical
do epitlio estraticado. Assim como a p53, a interao da E6 com a BAK resulta na ubiquitinao e posterior degradao da BAK. Por induzir a
degradao da p53 e BAK, a E6 impede ou reduz
a probabilidade da clula infectada sofrer apoptose em resposta infeco, aumentando o tempo
para o vrus completar o seu ciclo replicativo.
A E7 interage com vrias protenas celulares envolvidas no controle do ciclo e na diferenciao celular, incluindo os membros da famlia
das protenas pRb, as deacetilases de histonas,
as ciclinas, cdks e fatores de transcrio da famlia dos AP-1. Embora o signicado de vrias
dessas interaes permanea incerto, sabe-se que
a ligao da E7 com a pRb resulta na degradao
da pRb e na conseqente liberao do fator de
transcrio E2F. A interao da E7 com fatores de
transcrio AP-1 est associada com a modulao
da transcrio de genes envolvidos com resposta
inicial a sinais mitognicos.

Captulo 6

Em resumo, a E6 e a E7 atuam sobre reguladores importantes do ciclo celular e da sobrevivncia das clulas infectadas, com o objetivo de
proporcionar tempo suciente para assegurar a
replicao e produo de prognie viral em clulas diferenciadas. A progresso do ciclo e a diferenciao celular so eventos mutuamente excludentes. De fato, a progresso no-programada do
ciclo celular em clulas diferenciadas geralmente
leva morte celular. Assim, a E6 e a E7, ao inuenciarem simultaneamente o ciclo celular e o
mecanismo de sobrevivncia, so capazes de resolver o impasse que levaria morte celular.
Alm do papel da E6 e E7, experimentos in
vitro tm demonstrado que a E5 do BPV-1 ativa
o receptor para o fator de crescimento derivado
das plaquetas (PDGF), uma protena que se liga
ao PDGF e proporciona o sinal mitognico. Assim, por mimetizar o PDGF, a E5 capaz de criar
sinais adicionais para criar um ambiente de fase
S propcio replicao viral.

3.5 Expresso dos genes tardios


A transcrio dos genes tardios controlada
por um promotor, que estimulado por fatores
de transcrio presentes somente em queratincitos em fase nal de diferenciao. Isso pode explicar porque a sntese das protenas estruturais e
a morfognese das partculas virais ocorrem apenas em clulas diferenciadas. No entanto, evidncias indicam que a expresso dos genes tardios
em queratincitos menos diferenciados reprimida por fatores do hospedeiro. Isso indica que
a regulao dos genes tardios e a conseqente
continuao do ciclo podem estar sujeitas tanto a
regulao positiva como negativa, ambas dependentes de condies e fatores associados com o
estgio de diferenciao celular.
O mesmo promotor tardio direciona a sntese de mRNAs que codicam a E4, uma das protenas menos conservadas dos PpV. Dessa forma,
embora o gene da E4 esteja localizado na regio
dos genes iniciais, expresso em fases tardias. O
gene da E4 completamente sobreposto ao gene
da E2. No entanto, a sua seqncia de aminocidos codicada por uma ORF diferente, fazendo
com que as seqncias de aminocidos da E2 e

151

Replicao dos vrus DNA

da E4 sejam completamente diferentes. A E4 se


associa com a queratina e, quando expressa em
altos nveis, pode induzir o colapso da cadeia de
queratina. Com base nessas observaes, provvel que a E4 participe da replicao, facilitando
o egresso das partculas vricas.

3.6 Concluses
Os PpVs dependem da diferenciao do epitlio para completar o seu ciclo de replicao, e
a expresso dos seus genes regulada medida
que as clulas basais migram em direo superfcie do epitlio. Os produtos virais no apenas
controlam a expresso gnica dos genes virais e
a replicao do DNA viral como tambm modulam o ciclo celular e os programas de apoptose
para assegurar a produo de prognie viral. Em
algumas circunstncias, infeces abortivas, sem
a realizao completa do ciclo replicativo viral,
podem ocorrer. A exemplo de outros vrus DNA
pequenos, essas infeces abortivas podem resultar em transformaes neoplsicas.

4 Adenovrus
A Adenoviridae uma famlia de vrus DNA
grandes, no-envelopados, que infectam vertebrados e produzem enfermidade leve no trato
respiratrio, gastrintestinal e genitourinrio. Os
adenovrus (AdVs) possuem a capacidade de infectar uma grande variedade de clulas que no
esto em diviso. Por isso, tm sido muito utilizados como vetores para a transferncia de genes e
tambm para vacinas vetoriais. Por essas razes,
a biologia molecular dos AdVs conhecida com
detalhes.

4.1 O ciclo replicativo


Aproximadamente aps 40 minutos da penetrao na clula, os vrions podem ser observados prximos ao ncleo. A internalizao parece
ativar a protease viral L3, que inicia o desmonte
da partcula vrica. A protena terminal (TP), que
uma protena que est associada de forma covalente na extremidade 5 do genoma, contm sinais de localizao nuclear, que so encarregados

de mediar a importao do genoma viral para o


ncleo da clula hospedeira.
A expresso gnica do AdVs divide-se em
fases inicial e tardia. As protenas iniciais so
necessrias para a transcrio dos genes virais
e para a replicao do DNA. Tambm esto envolvidas com a interferncia com os mecanismos
inamatrios e de apoptose desencadeados pelo
hospedeiro. Aps a replicao do DNA, ocorre a
expresso dos genes tardios, cujos produtos so,
em sua maioria, componentes estruturais das
partculas vricas. O ciclo replicativo se completa
em 20 a 24 horas e resulta na produo de aproximadamente 104 partculas vricas por clula infectada.
Embora a diviso da expresso gnica em
fases inicial e tardia seja conveniente do ponto de
vista didtico, o limite exato entre essas fases no
claro. Por exemplo, alguns genes iniciais continuam a ser expressos em fases tardias da infeco; e baixos nveis de expresso de genes tardios
podem ser detectados j no incio da infeco.
Essa sobreposio da expresso gnica inicial/
tardia tambm observada durante a replicao
de outros vrus DNA.

4.2 O genoma dos AdVs


Os genomas dos AdVs de mamferos so
constitudos por molculas lineares de DNA de
ta dupla, com aproximadamente 35 kb. Seqncias repetidas invertidas (ITRs) com 36 a 200 pb
so encontradas nas regies terminais do genoma. O genoma encontra-se associado com quatro
protenas virais (V, VII, X and TP) para formar o
ncleo (ou core) da partcula viral. A protena V
provavelmente medeia as interaes entre o ncleo e o capsdeo. Maiores detalhes da estrutura
das partculas vricas dos adenovrus esto apresentados no Captulo 16.
Embora a organizao genmica seja conservada dentro dos gneros, diferenas importantes
podem ser observadas entre vrus de gneros diferentes. A maioria dos genes gnero-especcos
se localiza prxima s extremidades do genoma,
enquanto os genes conservados na famlia tendem a se concentrar na regio central. Essa caracterstica tambm observada em outros vrus

152

Captulo 6

DNA de ta dupla lineares, como os poxvrus


e herpesvrus. Nessas famlias, vrios genes gnero-especcos esto envolvidos nas interaes
do vrus com o hospedeiro, provavelmente para
favorecer a sua sobrevivncia em determinados
nichos biolgicos. Alguns desses genes parecem
ter sido capturados do hospedeiro em um passado remoto.
O genoma dos AdVs codica aproximadamente 45 protenas, das quais apenas 12 so
encontradas nos vrions. Os genes virais so organizados em unidades de transcrio, cuja expresso regulada temporalmente. Cinco unidades E1A, E1B, E2, E3 e E4 so expressas em
fases iniciais e uma (L) expressa tardiamente na

Leader:

2 i

infeco. Duas pequenas unidades (IX e Iva2) so


expressas em fases intermedirias. O genoma do
AdV humano pode ser descrito como um bloco
central de genes com orientao para a direita,
interrompidos por genes iniciais da regio E3 na
mesma cadeia, e por genes E2 na cadeia oposta.
A regio terminal direita ocupada pelos genes
E4, e, esquerda, pelos genes E1A and E1B e dois
genes intermedirios (Figura 6.7).
Vrios mRNA so produzidos a partir de
cada unidade transcripcional. Com poucas excees, os transcritos primrios das vrias unidades
so processados por splicing. De fato, uma das
mais importantes contribuies dos AdVs para a

3
x y

L5

L4
ML
L3

L2
E3 (tardio)

L1
IX
E1B
VA

E3

E1A

10

L1 (iniciais)
20

30

40

50

60

70

80

90

100

E2A

E2B
IV a2

E4

Fonte: adaptado de Shenk (2001).

Figura 6.7 Estrutura do genoma e mapa de transcrio dos adenovrus. A linha dupla representa o genoma. Os
nmeros abaixo representam as unidades genmicas. Os transcritos iniciais (E: early) so representados por setas
finas; os transcritos tardios (L: late) so representados por setas espessas. A extenso das setas corresponde regio
codificante dos mRNAs. A maioria dos transcritos tardios inicia na regio prxima unidade 16 do mapa e contm
uma regio lder composta por trs seqncias (1, 2 e 3). As regies entre as seqncias lder e as respectivas setas so
removidas por splicing (representam os ntrons).

Replicao dos vrus DNA

Biologia foi a descoberta do splicing de RNA realizada durante estudos de expresso gnica.
A maioria das unidades de transcrio codica uma srie de polipeptdeos com funes
relacionadas. Por exemplo, a unidade E1A codica duas protenas que ativam a transcrio e
induzem a clula hospedeira a entrar na fase S,
enquanto a E2 codica trs protenas que atuam
na replicao do DNA viral.

4.3 Expresso dos genes iniciais


A regio da E1A, a primeira unidade transcripcional a ser expressa, resulta em um transcrito primrio nico, que processado por splicing
diferencial em dois mRNAs. Os seus produtos,
as protenas 12S e 13S (em razo de diferenas
no coeciente de sedimentao dos mRNA), so
idnticas, com exceo de 46 aminocidos adicionais presentes na E1A 13S.
Uma funo importante das protenas E1A
estimular a transcrio generalizada de genes
virais. Essa funo depende da habilidade das
protenas E1A de se ligarem em uma variedade
de fatores regulatrios da transcrio celular,
como as protenas CREB, AP1 e fatores basais
de transcrio como a protena ligante do TATA
(TBP). A ligao da E1A nesses fatores mediada pelos domnios conservados CR1 e CR2 (12S e
13S) e CR3 (somente na 13S). Uma interao crtica ocorre entre o CR3 e a subunidade mediadora
MED23, que estimula a montagem do complexo
de pr-iniciao nos promotores dos genes iniciais e, provavelmente, tambm aumente a taxa
de incio da transcrio desses genes.
As protenas E1A tambm desempenham
um papel importante de induo do ciclo celular.
A exemplo dos poliomavrus, as protenas iniciais
dos AdVs focalizam a sua ao nos reguladores
principais do ciclo celular, a pRb e p53. A interao entre as E1A e a pRb resulta na dissociao
dos complexos E2F-pRb e ativao da transcrio
de genes cujos produtos promovem a entrada na
fase S. Interessantemente, a E2F tambm se liga
e ativa os promotores da E1 e E2. Isso provavelmente represente um mecanismo para coordenar
a progresso do ciclo celular com a expresso gnica e replicao do DNA viral.

153

As protenas E1A inibem a p300/CBP, uma


protena que modica a estrutura da cromatina
para facilitar a atividade de fatores de transcrio,
como a p53. Ao se ligar na p300/CBP, as protenas E1A antagonizam a ao da p53, liberando o
bloqueio para a progresso do ciclo celular. Alm
disso, a E1B de certos AdVs pode se ligar diretamente e bloquear a p53. A razo por que os AdVs
(e tambm os polioma e papilomavrus) utilizam
dois mecanismos para estimular o ciclo celular
desconhecida. Uma possibilidade que, in vivo,
podem existir clulas nas quais um dos mecanismos mais eciente do que o outro. Uma anlise
mutacional demonstrou que, embora a ligao da
E1A nas protenas pRb ou p300/CBP possa induzir a sntese de DNA em clulas quiescentes, ambas as regies so necessrias para induzir a fase
M, sugerindo que eventos tardios do ciclo celular
so, provavelmente, requeridos para assegurar
uma replicao viral eciente. Funes virais que
induzem a progresso do ciclo celular esto envolvidas na transformao de clulas de cultivo
por alguns sorotipos dos AdVs. No entanto, nenhum AdV tem sido associado com tumores em
seu hospedeiro natural.
Os AdVs induzem apoptose na clula hospedeira em fases iniciais da infeco, principalmente atravs de efeitos indiretos da E1A. Por outro
lado, vrias protenas virais, incluindo as E1B/55
kDa, E1B/19 kDa e E4orf6, atuam bloqueando a
apoptose por vrios mecanismos. A E1B e E4orf6
bloqueiam o mecanismo pr-apopttico dependente da p53, ligando-se e inativando essa protena. A E1B/19 kDa semelhante protena celular
antiapopttica Bcl-2, que se localiza na membrana mitocondrial e impede a ativao da caspase9, uma efetora da apoptose. Mutantes do AdVs
defectivos na E1B/19 kDa induzem morte celular
rpida, resultando em produo de prognie viral em quantidade reduzida quando comparada
com o vrus de campo.
A sobrevivncia das clulas infectadas tambm depende da interferncia com sinais de morte celular induzidos pela resposta imune. A E3
19 kDa uma glicoprotena transmembrana que
ca retida no retculo endoplasmtico (RE) e cujo
domnio luminal se liga em molculas do MHCI, provocando a sua reteno no RE. A E3 19 kDa

154

tambm se liga no complexo TAP e o impede de


transferir peptdeos ao MHC-I. O efeito dessas
atividades a proteo das clulas infectadas do
reconhecimento e lise mediada por linfcitos T
citotxicos (CTLs). Os CTLs tambm podem induzir lise celular, desencadeando sinais atravs
do receptor de Fas expresso nas clulas-alvo. O
complexo viral E3 14.4-kDa/E3 10.4-kDa interfere com a apoptose mediada pelo Fas, induzindo
a degradao do seu receptor. Alm disso, esse
complexo tambm inibe a lise celular pelo fator
de necrose tumoral alfa (TNF ), uma citoquina
antiviral potente. Provavelmente, as atividades
imunomodulatrias das protenas E3 dos AdVs
desempenhem importantes funes durante e replicao viral in vivo.
Uma das respostas mais precoces contra
infeces vricas aquela mediada pelos interferons (IFNs) e , que agem de forma autcrina
e parcrina, induzindo um estado de resistncia
antiviral nas clulas. Os IFNs atuam por meio de
seu receptor, provocando a ativao da transcrio de genes cujos produtos possuem aes antivirais. Elementos-chave nesse mecanismo so as
quinases citoplasmticas denominadas STATs,
que, uma vez ativadas, so translocadas para o
ncleo, onde se ligam e ativam os promotores
responsivos ao IFN. As protenas E1A dos AdVs
atuam diretamente nos mecanismos mediados
pelos IFNs, ligando-se e inativando a STAT1 e,
assim, bloqueando a ativao dos genes responsivos aos IFNs.
Em resumo, as protenas iniciais dos AdVs
atuam para assegurar uma expresso gnica adequada, progresso do ciclo celular e modulao
das respostas do hospedeiro, at que o ciclo replicativo seja concludo. Indiretamente, essas atividades contribuem para a disseminao do vrus
no organismo do hospedeiro. Estudos de infeces pelos AdVs in vivo tm demonstrado que
esses vrus no so inerentemente inamatrios,
indicando que conseguem moderar a resposta inamatria do hospedeiro.

4.4 Replicao do DNA viral


A maioria das funes necessrias para a replicao do DNA dos AdVs so codicadas pela
regio E2 do genoma. Seqncias especcas de

Captulo 6

51 bp, localizadas nas regies terminais repetidas, servem de origem de replicao (ori). Duas
protenas virais codicadas pela regio E2, a protena pr-terminal (pTP) e a polimerase de DNA,
se ligam nas primeiras 20 bases da ori. Uma terceira protena da E2, a protena ligante do DNA
(DBP), juntamente com fatores celulares, ligamse um pouco abaixo (na direo 3) e interagem
com o complexo pTP/polimerase. A principal
funo da pTP servir de primer para a iniciao da replicao do DNA viral. Essa protena ,
posteriormente, clivada para originar a TP, que
permanece ligada s extremidades 5 do genoma.
A DBP forma multmeros em uma das cadeias
do DNA, provocando a separao das cadeias,
evento que necessrio para a elongao das cadeias-lhas. A sntese de DNA se inicia na extremidade de uma das cadeias e se prolonga at a
outra extremidade, resultando em uma molcula
de cadeia dupla recm-replicada e uma molcula
parental de cadeia simples. No segundo estgio,
a cadeia simples deslocada na reao inicial serve
de molde para a sntese da cadeia complementar.
Em clulas de cultivo, a replicao do DNA viral
se inicia 5 a 10 horas aps a infeco e continua
at a morte celular. Uma ilustrao simplicada
da replicao do genoma dos AdVs est apresentada na Figura 6.8. Maiores detalhes sobre este
mecanismo esto apresentados no Captulo 16.

4.5 Expresso dos genes tardios


O promotor principal tardio exibe um nvel
baixo de atividade durante as fases iniciais da
infeco e direciona a expresso da protena L1
52/55-kDa. Esta protena se associa com o genoma e o empacota em etapas avanadas do ciclo.
medida que a replicao do DNA progride, a
atividade do promotor tardio aumenta e se torna
centenas de vezes mais ativo em fases tardias da
infeco. Esse promotor fortemente ativado pelas protenas E1A, mas as razes de sua ativao
tardia so desconhecidas.
A transcrio da regio tardia do genoma resulta em um transcrito primrio longo, que processado por poliadenilao em diferentes stios,

155

Replicao dos vrus DNA

Segunda
etapa

Primeira
etapa
Tp
5
3

3
5
Tp

.pTp
OH

3
.pTp

OH

-OH

-OH

Lineariza

3
5

3
5

5
3

Circulariza

5
3

3
5

3
5

Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).

Figura 6.8. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. A cadeia no-replicada circulariza ento
para a formao de uma nova origem de replicao. A replicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao
longo da cadeia, que, em seguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNA esto
replicadas.

e por splicing para gerar vrios mRNA tardios. O


acmulo citoplasmtico dos mRNA tardios favorecido por duas protenas virais, a E1B 55 kDa
e E4 34 kDa, que facilitam o movimento desses
transcritos do ncleo para o citoplasma. Concomitantemente, o transporte de mRNA celulares
para o citoplasma inibido. A natureza dessa
discriminao (mRNA virais versus mRNA celulares) no completamente conhecida, mas pode
envolver a relocalizao de fatores celulares requeridos para o transporte de mRNA nos centros
de transcrio virais.
Alm disso, os mRNA virais so preferencialmente traduzidos em etapas tardias da infeco, por causa de vrios mecanismos regulatrios

virais. Um desses mecanismos a inativao do


fator de iniciao da traduo eIF-4F, que, normalmente, se liga aos mRNA para facilitar a
traduo. As extremidades 5 dos mRNA virais
tardios contm uma regio no-codicante de
200 nt, que permite a esses mRNA serem traduzidos na ausncia de eIF-4F ativo. Em contraste,
os mRNA celulares no so mais traduzidos na
ausncia do eIF-4F.
A maioria das protenas tardias dos AdVs
so componentes estruturais dos vrions e fatores
envolvidos na morfognese que, juntamente com
a replicao do DNA, produzem o cenrio para a
morfognese e egresso da prognie viral.

156

4.6 Concluses
Os adenovrus codicam uma srie de produtos envolvidos na interferncia com os mecanismos de regulao do ciclo celular. As protenas
E1A so ativadores promscuos de vrios genes
virais e tambm induzem a clula a entrar em
fase S. Por outro lado, os efeitos indiretos dessa
ativao podem levar a clula infectada apoptose. Por isso, os AdV codicam tambm produtos
com atividade antiapopttica. Com isso, o vrus
tem tempo suciente para completar o seu ciclo
replicativo. No hospedeiro, os AdVs interferem
com o reconhecimento de clulas infectadas pelo
sistema imunolgico, tambm com o objetivo de
preservar a integridade das clulas infectadas
pelo tempo necessrio para a concluso do ciclo. Os AdVs tm sido intensivamente estudados
como potenciais vetores para terapia gentica e
vacinas contra vrus.

5 Herpesvrus
Os herpesvrus (HVs) so vrus grandes
(120-200 nm de dimetro), com envelope, que
possuem uma molcula de DNA de cadeia dupla linear como genoma. A famlia Herpesviridae
dividida em trs subfamlias, de acordo com
aspectos biolgicos e moleculares em comum:
Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae. Todos os herpesvrus possuem a capacidade de estabelecer infeces latentes em seus
hospedeiros. Os herpesvrus so encontrados em
praticamente todas as espcies de vertebrados.

5.1 O ciclo replicativo


Os HVs replicam o seu genoma no ncleo
da clula hospedeira e utilizam fatores virais e
celulares no processo de replicao. Dependendo
da expresso de determinados genes e das interaes com a clula hospedeira, os HVs podem
apresentar dois tipos distintos de ciclo replicativo. O primeiro ocorre nas clulas epiteliais ou
do tegumento durante a infeco aguda inicial,
logo aps a penetrao no hospedeiro. A infeco
dessas clulas resulta na expresso do conjunto
completo de genes virais e na produo de pro-

Captulo 6

gnie viral infecciosa. A infeco produtiva com


produo de prognie incompatvel com a sobrevivncia das clulas e resulta inevitavelmente
em lise. Esse ciclo ltico pode ser facilmente reproduzido in vitro pela inoculao de HVs em
clulas de cultivo.
Aps a replicao ltica inicial, os HVs podem permanecer em determinadas clulas do
hospedeiro em um estado no-replicativo durante um longo perodo, provavelmente por toda a
vida do indivduo, sem que este apresente sinais
da infeco. Essa forma no-produtiva de infeco, que ocorre sem a expresso de genes virais
ou produo de prognie viral, denominada infeco latente. No entanto, estmulos especcos
muitos deles relacionados ao estresse podem
induzir o vrus em latncia a retomar a replicao
ativa e, assim, iniciar um novo ciclo de infeco
produtiva que culmina com a produo da prognie viral. Essa retomada da replicao ativa
denominada reativao. Grande parte dos conhecimentos sobre a replicao produtiva dos HVs
foram obtidos a partir de estudos da replicao
in vitro pelo herpesvrus humano tipo 1 (vrus do
herpes simplex, HSV-1), que o prottipo da famlia Herpesviridae. Em contraste, muito menos se
conhece sobre a infeco latente pelos HVs pela
diculdade de sua reproduo in vitro.

5.2 O genoma dos HVs


O genoma dos herpesvrus consiste de uma
ta dupla linear de DNA com 125 a 240 kb. Os genomas dos HVs so classicados em seis classes
(A-F), com base na organizao do genoma presena, nmero e localizao de regies repetidas e
terminais (Figura 6.9). Por exemplo, nos genomas
da classe E (p. ex.: HSV-1), as seqncias terminais so repetidas em uma orientao invertida
e justapostas internamente, dividindo o genoma
em uma regio curta (S) e outra longa (L), onde
cada regio anqueada por regies repetidas
e invertidas. O genoma do herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1) um genoma do tipo D, no qual
apenas a regio curta (US) anqueada pelas regies repetidas invertidas (Figura 6.9). Em ambos
os casos, os componentes nicos podem estar na
mesma orientao ou invertidos em relao ao

157

Replicao dos vrus DNA

outro. O DNA extrado dos vrions consiste em


populaes equimolares que diferem apenas na
orientao relativa dos dois componentes. Os genes presentes nas regies repetidas obviamente
se encontram em mais de uma cpia no genoma.

A
B
R4

R3

R2 R1

C
D
E

UL
UL

Us
Us

Fonte: adaptado de Roizman e Pellet (2001).

Figura 6.9. Estrutura e organizao dos genomas dos


herpesvrus. As linhas representam seqncias nicas;
os blocos representam seqncias repetidas.
Representantes de cada grupo: A) Herpesvrus do catfish
de canal; B) Herpesvrus Saimiri; C) Vrus Epstein-Barr;
D) Vrus da varicella-zoster; E) Vrus do herpes simplex;
F) Herpesvrus Tupaia. Note que somente os genomas
do tipo F no apresentam seqncias repetidas. Os
alfaherpesvrus de maior importncia veterinria
(herpesvrus bovino tipo 1 [BoHV-1] e vrus da doena
de Aujeszky [PRV]) possuem genomas do tipo D.

O genoma dos HVs contm entre 70 e 200


genes, e a maioria destes so monocistrnicos,
portanto, codicam apenas uma protena. Os genes esto presentes e so transcritos a partir de
ambas as cadeias de DNA. A expresso gnica
controlada por promotores com TATA box e a
transcrio realizada pela RNA polimerase II
celular. Quando os genes so sobrepostos, as suas
regies regulatrias esto localizadas na regio
codicante do gene adjacente. Uma caracterstica
comum dos genomas dos HV a existncia de
grupos de transcritos co-terminais da extremidade 3, cada um expressando uma ORF diferente.
Ao contrrio dos adenovrus, a grande maioria
dos transcritos dos HVs no sofrem splicing.
Alguns transcritos de genes dos HV parecem
no conter ORFs traduzveis. Um exemplo clssico o transcrito associado com a latncia (LAT)
do HSV-1, que o nico RNA viral transcrito
durante a latncia desse vrus. No caso do vrus

Epstein-Barr (EBV), so sintetizados microRNAs


que apresentam potencial para silenciar a expresso de genes celulares e/ou virais.

5.3 Os genes virais


Aproximadamente 30 genes dos HV (denominados centrais ou core genes) so conservados
entre os membros da famlia Herpesviridae, ou
seja, esto presentes nos genomas de todos os
HV examinados at o momento. Os produtos
desses genes so responsveis pelo metabolismo
dos nucleotdeos, pela replicao do DNA e pela
morfognese e estrutura dos vrions. Outros genes so conservados apenas entre membros de
uma determinada subfamlia. Por exemplo, os
alfaherpesvrus codicam transcritos associados
latncia, uma protena do tegumento que ativa
a transcrio dos genes iniciais e um regulador
da transcrio relacionado ao ICP4 dos HSV-1.
Alm desses, vrios outros genes so peculiares
a algumas espcies de vrus.
Os HVs da subfamlia Gammaherpervirinae,
principalmente, codicam genes de origem do
hospedeiro, provavelmente adquiridos por retrotransposio de cDNAs. Em alguns casos, os
genes virais codicam funes similares as dos
correspondentes celulares. Em outros casos, esses genes foram alterados para modicar a sua
funo. Por exemplo, o homlogo da ciclina tipo
D (no herpesvrus humano tipo 8 [HHV-8]) no
responde a sinais que atuariam sobre a verso celular do gene, fazendo com que a ciclina tipo D
viral permanea constantemente ativada e capaz
de promover transformao celular. Na seo 5.4,
ser visto que a aquisio de genes do hospedeiro
uma caracterstica marcante dos poxvrus.
Cerca de 50% dos genes do HSV-1 no so
necessrios para a replicao viral em cultivo celulares, por isso so ditos no-essenciais (NE). No
entanto, esses genes so importantes para a replicao e patogenia durante a infeco natural. Vrios genes NE atuam antagonizando os mecanismos de defesa antiviral do hospedeiro e, assim,
favorecendo a replicao do vrus.
Os HVs so capazes de alterar o ambiente
celular para favorecer a sua replicao, provocando a inibio ou induo da sntese de macromo-

158

lculas, induo ou inibio da sntese de DNA


celular e, ainda, podem induzir a imortalizao
da clula hospedeira. Os HVs podem bloquear a
induo de apoptose, ativar os mecanismos mediados pelo interferon e a apresentao de antgenos e mimetizar determinadas funes imunomodulatrias. Uma conseqncia geral dessas
atividades o retardamento na erradicao da
infeco das clulas hospedeiras, por um perodo
suciente para permitir a replicao viral completa ou o estabelecimento da infeco latente.

Captulo 6

tras classes de genes virais. Alm do stio para


a ligao do complexo VP16/HCF/Oct-1, esses
promotores contm stios especcos para a ligao de uma variedade de fatores de transcrio
do hospedeiro (Figura 6.10).

Classe
do gene

Promotor
TATAA
TIF SP1 SP1 SP1 ICP4 SP1 TIF SP1
ICP4

IE (ICP4)
- 300

5.4 Expresso gnica

+1

E (TK)

A cintica da expresso dos genes dos HVss


durante a infeco aguda produtiva tem sido estudada detalhadamente em cultivo celular, mas
acredita-se que variaes possam ocorrer in vivo
e tambm entre tipos celulares diferentes. Como
na maioria dos vrus DNA, os genes dos HV so
expressos sob regulao temporal estrita. Os genes alfa ou de transcrio imediata (IE) so os primeiros a serem expressos, seguidos pelos genes
beta ou iniciais (E), gama 1 (parcialmente tardios)
e pelos genes gama 2 ou tardios (L). Embora os
genes virais sejam transcritos pela RNA polII celular com o auxlio de fatores celulares de transcrio, protenas virais so necessrias e auxiliam
em cada etapa de transcrio.
Aps a penetrao do vrus, o nucleocapsdeo envolto pelo tegumento transportado para
as proximidades dos poros nucleares, de onde o
DNA viral translocado para o interior do ncleo
e rapidamente circularizado. No HSV-1, a protena VP16 do tegumento liga-se a duas protenas
celulares, HGF e oct-1, formando um complexo
que se liga especicamente aos promotores dos
genes IE, ativando a sua transcrio. A ativao
da transcrio dependente da regio C-terminal da VP16, que atua facilitando a reunio dos
fatores de transcrio celulares responsveis pela
maquinaria de transcrio basal. A dependncia
da VP16 parece ser maior em clulas quiescentes
e diferenciadas encontradas in vivo.
Seis produtos IE so codicados pelo HSV1: os polipeptdeos ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 e 47
e a protena Us1.5. Os promotores desses genes
geralmente so mais complexos do que os de ou-

CCATT, SP1 SP1

TATA
+1

TATAA Inr

L (UL38)

DAS

-30
+20
+1

Fonte: adaptado de Roizman e Knipe (2001).

Figura 6.10. Organizao dos promoters dos genes de


transcrio imediata (IE), iniciais (early) e tardios (late)
do vrus do herpes simplex (HSV-1). Cada classe
representada pelo promotor de um determinado gene.
Os retngulos indicam os stios de ligao dos fatores de
transcrio/ transativadores. As setas indicam o incio e
direo da transcrio. IE: stios para a ligao do
complexo VP16/HCF/oct-1 (TIF), do fator de transcrio
celular SP1 e do produto do gene ICP4; TATAA (TATA
box). Inr: iniciador; DAS.

As protenas IE ICP4, ICP27 e ICP22 regulam a expresso dos outros genes virais e, portanto, so indispensveis para a continuao do
ciclo replicativo. A deleo experimental do gene
do ICP4, o mais importante transativador viral,
resulta em um vrus incapaz de replicar. Outras
funes dos genes IE incluem a inibio de splicing de mRNA (ICP27), a modulao do sistema
de degradao das protenas celulares (ICP0) e a
reduo da expresso das ciclinas indutoras da
fase S (ICP22/Us1.5). A expresso das protenas
IE alcana o pico mximo em 2 a 4 horas aps
a infeco. Como o ICP4 capaz de reprimir a
sua prpria expresso, acredita-se que contribua
para a supresso dos genes IE, que observada
nas fases tardias da infeco.

159

Replicao dos vrus DNA

As protenas codicadas pelos genes E (beta)


atingem o pico mximo de sntese cerca de 5 a 7
horas aps a infeco, embora alguns produtos
(p. ex.: a subunidade maior da ribonucleotdeo
redutase, RR) sejam sintetizados com cintica semelhante aos genes IE. As protenas E apresentam diferentes funes, relacionadas com o metabolismo de nucleotdeos e com a replicao do
DNA viral. O seu acmulo nas clulas infectadas
prenuncia o incio da replicao do DNA. Os produtos dos genes E envolvidos no metabolismo de
nucleotdeos (timidina quinase TK, dUTPase, RR)
e aqueles envolvidos na modicao e reparo do
DNA (uracil-N-glicosilase e nuclease alcalina)
no so essenciais para a replicao viral em clulas de cultivo. Isto se deve ao fato de as clulas
em multiplicao expressarem enzimas prprias
com atividades semelhantes. No entanto, as protenas E so importantes in vivo e mutaes nos
seus genes resultam em vrus que apresentam
replicao deciente. Isso faz sentido principalmente nos alfaherpervrus HSV-1 e BoHV-1, que
so capazes de infectar diferentes tipos celulares,
inclusive neurnios. Os neurnios so clulas diferenciadas que no se dividem e no expressam
protenas envolvidas no ciclo celular, incluindo
vrias protenas envolvidas no metabolismo de
nucleotdeos e na replicao do DNA. Por isso,
essas e outras protenas virais podem ser cruciais
para possibilitar a infeco de determinados tipos celulares.
A expresso dos genes gama 1 inicia em nveis baixos aps o incio da replicao do DNA,
mas o seu nvel de expresso aumenta com o
avano do processo replicativo. Os genes gama
2 (L) comeam a ser expressos aps a sntese e
replicao do DNA viral. A transcrio dos genes
tardios ocorre a partir de genomas recm-replicados, localizados em compartimentos de replicao nuclear, nos quais a ICP4 e a RNA polimerase
II se localizam.
Os promotores dos genes tardios consistem
de seqncias regulatrias localizadas a certa distncia dos genes, como tambm de seqncias localizadas na regio 5no-traduzida (Figura 6.10).
Alm da ICP4, a transcrio dos genes tardios
exige a presena da ICP27, uma protena multifuncional que estimula a transcrio das prote-

nas virais envolvidas na replicao do DNA viral.


A ICP27 movimenta-se entre o ncleo e o citoplasma das clulas infectadas, com funes nos
dois compartimentos. Evidncias indicam que a
ICP27 participa no recrutamento da enzima RNA
polimerase II celular para a transcrio dos genes tardios; auxilia na exportao dos transcritos
tardios para o citoplasma e estimula a traduo
desses mRNA nos poliribossomos.

5.5 Replicao do DNA viral


No incio da expresso dos genes iniciais, as
protenas UL9 (protena viral que se liga na origem de replicao), UL29 (protena que se liga em
DNA de ta simples) e UL5, UL8 e UL52 (complexo helicase-primase) se dirigem ao ncleo e
se associam ao DNA viral, formando estruturas
focais chamadas de stios pr-replicativos. Aps
o recrutamento do complexo viral de replicao
de DNA (UL30/UL42), uma frao dos stios prreplicativos maturam para formar os compartimentos virais de replicao.
As funes mais importantes da protena
UL9 so a de ligao especca na origem de replicao (ori) e a separao das cadeias de DNA
neste stio. Acredita-se que isso favorea a montagem do complexo de iniciao, incluindo a associao da DNA polimerase viral. A sntese da
cadeia contnua envolve a separao das cadeias
do DNA e a sntese de um primer pelo complexo
helicase-primase, a partir do qual a cadeia nascente pode ser sintetizada de forma contnua pela
DNA polimerase. A sntese da cadeia descontnua
mais complexa e envolve mltiplos ciclos de
sntese do primer, extenso, remoo dos primers
e ligao dos fragmentos de Okazaki adjacentes.
A sntese de DNA viral ocorre pelo mecanismo
de crculo rolante (rolling circle), que resulta em
molculas longas, contendo vrias unidades do
genoma unidas linearmente entre si. Essas molculas contm as quatro possveis formas isomricas do genoma (no caso do HSV-1), que so,
ento, clivadas em unidades genmicas, que so
encapsidadas nos nucleocapsdeos (Figura 6.1).
Os fatores celulares induzidos na fase inicial
da infeco, incluindo vrios componentes da
maquinaria de reparo do DNA, acumulam-se nos

160

centros de replicao viral. Esses fatores parecem


ser importantes para os centros de replicao do
HSV-1 se tornarem funcionais, sugerindo que um
estresse celular pode ser necessrio para a replicao eciente dos HVs.

5.6 Expresso gnica durante a infeco


latente
A expresso de genes virais durante a infeco latente muito restrita e apenas um ou
poucos genes virais so transcritos. Por exemplo, durante a latncia em neurnios de gnglios
sensoriais, o HSV-1 e o BoHV-1 sintetizam uma
srie de transcritos a partir de uma regio bem
determinada do genoma (regio associada latncia, LRT; transcrito associado latncia, LAT).
As demais regies do genoma permanecem inativas em relao transcrio. A razo dessa restrio da transcrio desconhecida, mas o ambiente neuronal e sinais derivados de clulas do
sistema imunolgico tm sido implicados. Vrus
recombinantes que possuem mutaes na regio
do LAT/LRT so capazes de estabelecerem infeces latentes, mas so defectivos na reativao,
o que sugere um papel para esses transcritos na
reativao da infeco.

5.7 Concluses
Os herpesvrus possuem um genoma mais
complexo e codicam vrias protenas envolvidas nos processos replicativos. Com isso, esses
vrus so capazes de replicar em uma variedade
de clulas, independente do seu estado de diviso ou diferenciao. Ao contrrio do que ocorre
com os vrus DNA pequenos (polioma, papiloma
e adeno), os HV no necessitam induzir as clulas
a entrarem na fase S, pois codicam e/ou trazem
nos vrions grande parte dos fatores necessrios
replicao de seu genoma. No entanto, dependem da maquinaria celular de transcrio e processamento dos mRNAs. A replicao dos HVs
geralmente induz uma supresso da sntese de
macromolculas das clulas, geralmente levando
a alteraes metablicas incompatveis com a vida
celular. O estabelecimento de infeco latente se
constitui em uma estratgia muito eciente para

Captulo 6

permitir a permanncia do vrus no hospedeiro.


A reativao ocasional dessas infeces permite
ao vrus ser transmitido e infectar novos hospedeiros, perpetuando-se, assim, na natureza.

6 Poxvrus
6.1 O ciclo replicativo
Os poxvrus (PoxV) so vrus DNA que realizam o seu ciclo replicativo incluindo a replicao do genoma integralmente no citoplasma,
uma propriedade que comum tambm ao vrus
da peste suna africana (ASFV), nico membro da
famlia Asfarviridae. Como as enzimas celulares
que participam da sntese de RNA e DNA esto
localizadas no ncleo, os PoxV devem trazer nos
vrions as suas prprias enzimas e fatores auxiliares. Esse cenrio ilustra o nvel de independncia
relativa que esses vrus conseguiram atingir em
relao clula hospedeira. No entanto, embora
codiquem grande parte das enzimas e fatores
de transcrio, os PoxV ainda so dependentes
de vrios fatores auxiliares da clula hospedeira.
O ciclo replicativo dos PoxV foi estudado in vitro,
utilizando-se o vrus da vaccinia (VV) como modelo. Apesar da sua complexidade, o ciclo replicativo do VV relativamente rpido, e a prognie
viral pode ser detectada j oito horas ps-infeco (pi).

6.2 O genoma dos PoxVs


Mais de 50 seqncias genmicas completas,
representando vrios gneros, espcies e isolados
de campo dos PoxV j foram obtidas, permitindo
uma descrio detalhada da estrutura, organizao genmica e dos genes individuais.
O genoma dos PoxV consiste de uma molcula de DNA linear de ta dupla com 130-390
kbp, contendo seqncias repetidas invertidas do
tipo hairpin (ITRs) de 0.1 a 12.4 kb nas extremidades (Figura 6.11). Nos Chordopoxvirus (ChPVs),
o nmero de genes de aproximadamente 150,
embora mais de 300 genes j tenham sido deduzidos no genoma do PoxV do canrio (canaripox).
A densidade gnica alta, com uma mdia de um
gene por kb.

161

Replicao dos vrus DNA

Repetio invertida
10 kbp

Seqncias nicas
160 kbp

Seqncias repetidas
0,9 kbp 1,3 kbp

Repetio invertida
10 kbp

Seqncias repetidas
1,3 kbp 0,9 kbp

Fonte: adaptado de Murphy et al. (1999).

Figura 6.11. Estrutura do genoma dos poxvrus. O genoma consiste de uma molcula contnua de DNA de fita dupla,
sem extremidades livres. Nas duas extremidades, situam-se regies repetidas invertidas de aproximadamente 10 kb
cada. As seqncias nicas abrangem o restante do genoma.

Aproximadamente 90 dos 150 genes so


conservados no genoma de todos os ChPVs seqenciados at o presente, e codicam produtos que participam da replicao do DNA, da
transcrio, da morfognese e da estrutura das
partculas virais. Nesses genes, tanto as regies
codicantes quanto os promotores so altamente
conservados. Em geral, grande parte dos genes
conservados esto localizados na regio central
do genoma.
Os genes localizados entre a regio central
e as extremidades do genoma tendem a ser espcie-especcos e codicam protenas cujas funes antagonizam a resposta imune do hospedeiro. Esses genes so chamados coletivamente de
genes de virulncia. Esto includos nesse grupo
os genes que codicam produtos homlogos s
citocinas e quimioquinas do hospedeiro, e genes
de receptores de citocinas e quimioquinas que
foram adquiridos do hospedeiro e modicados
durante a evoluo. Ao contrrio dos genes centrais conservados, vrios genes de virulncia so
dispensveis para a replicao viral em cultivo
celular.

6.3 Expresso gnica


Como os outros vrus DNA, os PoxVs coordenam os processos de replicao genmica e
morfognese por meio de uma regulao temporal da expresso de grupos de genes. A transcri-

o dos genes do VV pode ser dividida em trs


etapas: inicial, intermediria e tardia. A transcrio de vrios genes, no entanto, parece no obedecer a essa regulao estrita, ocorrendo continuamente ao longo do ciclo replicativo.
Os fatores de transcrio e enzimas necessrias para a transcrio dos genes iniciais esto
presentes nas partculas vricas infectantes. Assim, a transcrio desses genes inicia poucos minutos aps a penetrao viral, ainda no interior
de partculas parcialmente ntegras e, portanto,
antes do desnudamento ser completado. A transcrio inicial resulta na produo de aproximadamente 100 mRNA diferentes, que so exportados do interior dos vrions para o citoplasma
para serem traduzidos. Entre as protenas dos
genes iniciais esto aquelas envolvidas nos mecanismos de evaso do sistema imunolgico, no
desnudamento completo do genoma, na sntese
de DNA viral e na regulao da expresso dos
genes intermedirios.
Os produtos dos genes intermedirios so
principalmente fatores de transcrio utilizados
para a expresso dos genes tardios. As protenas
tardias, por sua vez, esto envolvidas na morfognese, fazem parte da estrutura das partculas
vricas e tambm incluem as enzimas e fatores de
transcrio que sero includos na prognie viral
para o prximo ciclo de replicao.
Os genes dos PoxVs so transcritos pela
RNA polimerase viral, que composta por nove

162

subunidades. As duas subunidades maiores


apresentam um alto grau de similaridade nos
aminocidos, com as subunidades maiores das
RNA polimerases de eucariotas e procariotas,
mas as duas subunidades menores no apresentam similaridade signicativa com as suas correspondentes.
Aproximadamente a metade dos genes do
VV pertence ao grupo dos genes iniciais. Os promotores desses genes possuem um resduo de
guanina (G) extremamente conservado na posio 21, anqueado por uma regio varivel rica
em A-T. A transcrio dos genes iniciais requer a
RNA polimerase viral, o fator de transcrio inicial (ou ETF, a nica protena de ligao ao DNA
codicada pelos PoxV) e ATP. No modelo atual,
o ETF se liga nos promotores iniciais e recruta
o complexo da RNA polimerase. A hidrlise de
ATP pelo ETF e a sua subseqente liberao do
complexo permite a RNA polimerase iniciar a
transcrio.
Estudos recentes sugerem que vrios fatores
de transcrio dos genes iniciais formam complexos que se ligam aos promotores durante a morfognese das partculas virais. Com isso, parte
dos fatores necessrios para a transcrio inicial
j estaria posicionada nos promotores, permitindo o rpido incio da transcrio, logo aps a penetrao na clula hospedeira. As enzimas virais
guanilyl-transferase (capping enzyme), polimerase
poly-A e um fator de terminao da transcrio
tambm so importantes para a transcrio inicial. A transcrio desses genes termina logo aps
o nal das ORFs, em resposta a uma seqncia
TTTTTNT (onde N qualquer nucleotdeo), localizada na cadeia de DNA oposta (codicante).
At o presente, nenhuma funo da clula hospedeira foi identicada como necessria para a
iniciao e terminao da transcrio inicial.
Aps o desnudamento completo do genoma, seguem-se as etapas de transcrio dos genes
intermedirios, a replicao do DNA e a transcrio dos genes tardios. Os promotores dos genes
intermedirios so bipartidos, possuindo um elemento iniciador no stio de iniciao da transcrio e uma seqncia rica em A-T, localizada prxima (na direo 5). A transcrio desses genes
requer fatores virais recm-sintetizados, como a

Captulo 6

RNA polimerase, fatores ITF-A (helicase), ITF-B


(enzima que coloca o cap), VITF-2 (fator derivado
do hospedeiro) e B1R (protena quinase viral).
Os promotores dos genes tardios tambm
so bipartidos e contm um elemento iniciador
e uma regio rica em A-T logo acima. Alm da
RNA polimerase, trs produtos de genes intermedirios e um produto inicial so necessrios
para a transcrio dos genes tardios, embora as
funes desses produtos sejam desconhecidas.
Um fator de transcrio do hospedeiro tambm
parece estar envolvido na transcrio dos genes
tardios. A terminao da transcrio dos genes
tardios diferente daquela dos genes iniciais,
mas tambm requer a participao de produtos
virais.

6.4 Replicao do DNA


A replicao citoplasmtica do genoma se
constitui em um aspecto nico do ciclo replicativo dos PoxV e ASFV. A replicao do DNA do
VV ocorre em fbricas virais, que so reas citoplasmticas totalmente envolvidas por membranas derivadas do retculo endoplasmtico rugoso
(RER). O envolvimento dessas reas pelas membranas do RER um processo que se completa
em, aproximadamente, 45 minutos a partir do
incio da infeco e parece ser inuenciado por
protenas virais de membrana. Em etapas tardias
da infeco, quando se inicia a morfognese, esses envelopes membranosos do RER no so
mais visveis na estrutura celular.
Alguns PoxVs codicam enzimas envolvidas na sntese de deoxiribonucleotdeos (dNTPs),
para favorecer a sntese e replicao do DNA em
clulas que na esto em diviso. No caso do VV, a
replicao do DNA ocorre entre 3 e 12 horas psinfeco e resulta na produo de aproximadamente 10.000 cpias por clula, metade das quais
sero includas nos vrions.
Acredita-se que a replicao do DNA dos
PoxV se inicie com uma clivagem em uma das cadeias nas proximidades dos hairpins, seguida de
polimerizao seqencial a partir da extremidade
3, deslocamento da cadeia complementar e resoluo por concatmeros (Figura 6.1). A regio terminal de 200 pb do genoma provavelmente serve

Replicao dos vrus DNA

de origem de replicao. A resoluo/separao


dos genomas individuais requer uma protena
viral tardia, a resolvase. Partculas vricas imaturas, em associao com estruturas membranosas,
acabam envolvendo o DNA e amadurecem na
forma de vrions de formato retangular.
Vrios produtos virais desempenham funes importantes da replicao do genoma do
VV, incluindo a polimerase de DNA e um fator
de processividade associado; a trifosfatase de
nucleosdeos, a protena de ligao em DNA de
ta simples, a topoisomerase I, protena quinase e glicosilase de uracil. Mutaes em qualquer
desses genes so deletrias para a capacidade dos
vrus replicar o seu genoma.

6.5 Concluses
Os PoxVs esto entre os vrus mais complexos de animais e trazem nos vrions e/ou
codicam um nmero grande de enzimas e fatores necessrios transcrio, processamento de
seus mRNAs e replicao do genoma. Por isso,
independem da maquinaria celular de sntese
de RNA e DNA e realizam o ciclo replicativo inteiramente no citoplasma da clula hospedeira.
Os PoxVs tambm codicam uma srie de produtos que antagonizam a resposta imunolgica
do hospedeiro, permitindo, assim, que o ciclo
replicativo seja completado com a mnima interferncia dos mecanismos anti-virais. A facilidade
da manipulao do genoma, assim como a sua
extenso e capacidade de suportar a insero de
grandes segmentos de DNA, tm feito dos PoxV
vrus adequados para a construo de vetores vacinais.

7 Bibliografia consultada
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Captulo 6

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REPLICAO DOS VRUS RNA


Maria Elisa Piccone1 & Eduardo Furtado Flores

1 Introduo
1.1 Diversidade de estrutura, organizao e funcionalidade dos genomas
1.2 Stios de replicao
1.3 Infidelidade das replicases e diversidade gentica
1.4 Outras protenas virais envolvidas na replicao

2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo

7
167
167
169
169
169

169

2.1 Genomas com uma nica ORF, sem produo de mRNA subgenmicos
2.1.1 Estrutura e organizao do genoma
2.1.2 Traduo e replicao do genoma

171
171
172

2.2 Genomas com mais de uma ORF e produo de mRNAs subgenmicos


2.2.1 Estrutura e organizao genmica
2.2.2 Expresso gnica e replicao do genoma

174
174
174

3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo

176

3.1 Vrus com o genoma no-segmentado


3.1.1 Estrutura e organizao do genoma
3.1.2 Transcrio
3.1.3 Replicao do genoma

176
177
178
179

3.2 Vrus com o genoma segmentado


3.3 Vrus com o genoma ambissense

180
181

4 Vrus com RNA de fita dupla


4.1 Estrutura e organizao do genoma
4.2 Transcrio
4.3 Replicao do genoma

182
182
183
184

5 Retrovrus

184

6 Bibliografia consultada

185

Responsvel pela seo de vrus RNA de sentido positivo.

1 Introduo
Os vrus RNA compem um grupo amplo
e diverso de vrus que infectam desde insetos e
plantas at vertebrados superiores. So os nicos
organismos que possuem RNA como genoma, e,
por isso, precisaram se adaptar a certas condies
impostas pelas clulas hospedeiras para poder se
multiplicar. As clulas eucariotas no possuem
enzimas e reaes para a sntese de RNA a partir de moldes RNA, etapa necessria para a replicao do genoma desses vrus. No entanto, a
evoluo viral solucionou este impasse, pois o
genoma de um vrus RNA codica a sua prpria
enzima replicativa (RNA polimerase dependente
de RNA ou replicase). Em alguns vrus RNA, a
replicase e os fatores auxiliares para a replicao
do genoma so produzidos pela traduo direta do genoma, logo no incio do ciclo replicativo.
Em outros vrus RNA, o genoma no traduzido
diretamente e os vrions carreiam a enzima replicase e os fatores necessrios para a replicao do
genoma.
A replicao do genoma dos vrus RNA
(com exceo dos retrovrus) ocorre em duas etapas e envolve a sntese de molculas intermedirias (RNA complementar ou antigenmico). O
RNA antigenmico serve, ento, de molde para
a sntese de RNA de sentido genmico. A sntese de RNA com sentido de mensageiro (mRNA
ou sentido positivo) denomina-se transcrio, e
a sntese de RNA genmico denomina-se replicao. Na verdade, transcrio e replicao so
termos equivalentes utilizados para designar a
sntese de molculas de RNA a partir de moldes.
A mesma enzima replicase, possivelmente assistida por uma combinao diferente de fatores auxiliares ou submetida a modicaes qumicas,
responsvel tanto pela transcrio como pela
replicao. O complexo enzimtico envolvido na
transcrio geralmente chamado de transcriptase; e o complexo responsvel pela replicao
denominado replicase.
Os retrovrus apresentam uma estratgia
de replicao nica, que difere dos demais vrus
RNA. Esses vrus possuem um genoma RNA
com sentido positivo, mas que no traduzido
diretamente. A replicao do genoma ocorre pela

produo de uma molcula de DNA complementar (provrus) que integrada aos cromossomos
celulares. A transcrio desse provrus pela RNA
polimerase II celular (RNApol II) resulta na produo do RNA para ser includo como genoma
nas partculas vricas.
A natureza do seu genoma resultou em algumas conseqncias biolgicas e evolutivas
para os vrus RNA: a) a maioria deles realiza o
seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
das clulas hospedeiras, b) poucos deles utilizam
o processamento de RNA (splicing) para a gerao
de diversidade de protenas; c) a alta taxa de erro
das replicases virais, associada com a ausncia de
autocorreo, resulta em uma alta freqncia de
mutaes, o que contribui para a grande variabilidade gentica e antignica desses vrus.

1.1 Diversidade de estrutura, organizao e funcionalidade dos genomas


Os genomas dos vrus RNA de animais so
todos compostos por molculas lineares, porm,
apresentam diferenas quanto funcionalidade,
estrutura e organizao (Tabela 7.1). A distino
inicial se refere funcionalidade do genoma, ou
seja, existem vrus com genoma RNA de sentido (ou polaridade) positivo e negativo. Os vrus
RNA de sentido positivo possuem as seqncias
codicantes de protenas (open reading frames,
ORFs) no mesmo sentido do genoma, ou seja, o
seu genoma pode ser diretamente traduzido em
protenas pelos ribossomos. Dentre estes, duas
propriedades principais so reconhecidas: alguns vrus possuem uma nica ORF no genoma
e outros genomas possuem mais de uma ORF e
produzem RNAs mensageiros subgenmicos
(mRNAsg).
Os RNAs genmicos dos vrus RNA de sentido negativo no apresentam as ORFs na mesma orientao do genoma, assim, no podem ser
diretamente traduzidos em protenas. As ORFs
esto presentes no RNA complementar, de sentido antigenmico. Ento, a produo de suas protenas depende inicialmente da sntese de mRNAs pela polimerase viral trazida nos vrions.
Dentre esses vrus, existem alguns cujo genoma
composto por uma molcula contnua de RNA

168

Captulo 7

e outros cujo genoma dividido em dois ou mais


segmentos. Dentre os vrus com o genoma segmentado, existem alguns que possuem o genoma
ambissense, ou seja, codicam as suas protenas
por ORFs existentes tanto no RNA de sentido genmico quanto no RNA complementar.
Todos os genomas dos vrus RNA (sentido
positivo e negativo, segmentados ou no) so
compostos por molculas de RNA de ta simples (ssRNA). Um terceiro grupo formado por
vrus que possuem ta de RNA de cadeia dupla
(dsRNA) segmentada como genoma. Estes vrus
tambm trazem a enzima polimerase nos vrions,
que necessria para a transcrio e replicao
dos segmentos genmicos.

Os retrovrus representam uma exceo entre os vrus RNA. O seu genoma possui polaridade positiva, porm no traduzido diretamente
pelos ribossomos. A replicao dos retrovrus
envolve a transcrio reversa (sntese de DNA a
partir de RNA), integrao do DNA proviral nos
cromossomos da clula hospedeira e transcrio
do provrus pelo aparato celular de transcrio.
Apesar dessa diversidade, praticamente todos esses vrus convergem para um evento central comum: a produo de mRNA reconhecveis
e traduzveis pela maquinaria celular de traduo. A nica exceo composta pelos genes que
codicam protenas no-estruturais (e estruturais
em alguns casos) entre os vrus RNA de sentido
positivo, que podem ser traduzidos diretamente
do genoma.

Tabela 7.1. Classificao dos vrus RNA de acordo com a estrutura, organizao e polaridade do genoma e local
intracelular de replicao

Replicao

RNA genmico
ss/ds

Polaridade

Topologia

Segmentos

Local intracelular

Picornaviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Flaviviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Caliciviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Astroviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Togaviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Coronaviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Arteriviridae

ss

Positiva

Linear

Citoplasma

Retroviridae

ss

Positiva

Linear

2 (idnticos)

Ncleo/citoplasma

Birnaviridae

ds

Ambas

Linear

Citoplasma

Reoviridae

ds

Ambas

Linear

10-12

Citoplasma

Rhabdoviridae

ss

Negativa

Linear

Citoplasma

Filoviridae

ss

Negativa

Linear

Citoplasma

Bornaviridae

ss

Negativa

Linear

Ncleo

Paramyxoviridae

ss

Negativa

Linear

Citoplasma

Orthomyxoviridae

ss

Negativa

Linear

7-8

Ncleo

Bunyaviridae

ss

Negativa ou
ambissense

Linear

Citoplasma

Arenaviridae

ss

Ambissense

Linear

Citoplasma

Famlia

169

Replicao dos vrus RNA

1.2 Stios de replicao


Com exceo dos vrus das famlias Orthomyxoviridae e Bornaviridae, cuja replicao do
genoma ocorre no ncleo; e dos retrovrus, em
que o ciclo replicativo ocorre parte no citoplasma
e parte no ncleo, os demais vrus RNA realizam
o seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
da clula hospedeira. Esses vrus so, portanto,
independentes da maquinaria nuclear de sntese e processamento de RNAs. Os ortomixovrus
replicam o genoma no ncleo e so dependentes
de oligonucleotdeos com cap, que so subtrados
dos mRNA celulares. Estes vrus, alm dos retrovrus, dependem ainda da maquinaria de processamento de mRNAs celulares (splicing) para
o processamento de alguns de seus transcritos.
Alguns vrus RNA que replicam no citoplasma
(paramixovrus) utilizam mecanismos alternativos para modicar os seus transcritos e produzir
diferentes protenas a partir de um mesmo gene.

1.3 Infidelidade das replicases e


diversidade gentica
As replicases dos vrus RNA (RNAs polimerases dependentes de RNA) apresentam uma
taxa de erro aproximadamente 1.000 a 10.000 vezes superior s polimerases de DNA. Alm disso,
essas enzimas no possuem a atividade de proofreading (correo de nucleotdeos incorretos adicionados durante a sntese). O resultado disso
que pelo menos uma mutao em ponto pode ser
introduzida a cada replicao do genoma, o que
tem uma grande implicao para a diversidade e
evoluo desses vrus. Como conseqncia, uma
populao de vrus RNA no constituda por
uma prognie clonal homognea, e sim por uma
mistura de variantes agrupados em torno de uma
seqncia predominante e mais abundante. Essa
populao heterognea de vrus que compe
uma espcie viral denominada quasi-species. A
gerao contnua dessa populao heterognea
se constitui em uma grande vantagem evolutiva
para os vrus RNA, pois permite que variantes
geradas ao acaso possam apresentar vantagem
evolutiva e rapidamente se sobressair na populao quando submetidos determinada presso
de seleo. A rpida taxa de evoluo desses v-

rus possui implicaes importantes na epidemiologia, patogenia, diagnstico e para a produo


de vacinas.

1.4 Outras protenas virais envolvidas


na replicao
Alm das replicases, outras protenas que
participam da sntese de RNA so codicadas
por esses vrus. As funes exercidas por essas
protenas so diversas e incluem: a) direcionamento da polimerase e/ou do genoma aos locais
da clula onde ocorre a replicao; b) facilitao
do reconhecimento do stio de iniciao da sntese de RNA pela polimerase; c) encapsidao do
genoma RNA para a transcrio e replicao; d)
aumento da anidade da polimerase pelo RNA;
e) aumento da atividade da polimerase; f) separao das cadeias de RNA para a polimerizao
(atividade de helicase); g) alterao da especicidade da polimerase pelo molde RNA (troca de
transcrio para replicao). Ou seja, esses vrus
codicam uma srie de protenas, algumas com
atividades enzimticas, que atuam como co-fatores no processo de sntese de RNA e replicao
do genoma.
Alm de protenas, a sntese de RNAs virais
envolve a participao de componentes celulares,
denominados genericamente fatores do hospedeiro. A especicidade, as etapas de participao
e a dependncia relativa de fatores do hospedeiro para a sntese de RNA viral variam entre os
vrus.

2 Vrus com genoma RNA de sentido


positivo
Por denio, esses vrus codicam as suas
protenas no sentido do RNA genmico, ou seja,
as seqncias abertas de leitura (ORFs) que codicam as protenas virais esto presentes na
mesma orientao do genoma. Por isso, o RNA
genmico pode ser usado como mRNA e ser diretamente traduzido pelos ribossomos. Os vrus
desse grupo possuem algumas caractersticas em
comum: a) replicam no citoplasma da clula hospedeira; b) o RNA genmico serve de mRNA e
pode ser traduzido; c) o RNA genmico desprovido de protenas infeccioso quando introduzido

170

Captulo 7

o genoma no-segmentado: 1) Picornaviridae, 2)


Flaviviridae, 3) Caliciviridae, 4) Astroviridae, 5) Togaviridae, 6) Arteriviridae e 7) Coronaviridae.
A replicao do genoma desses vrus envolve a ao conjunta de vrios componentes, que
incluem protenas virais, seqncias especcas
no RNA viral e, provavelmente, vrios componentes celulares, como protenas e membranas.
Uma diferena fundamental entre grupos
de vrus RNA de sentido positivo se refere existncia de uma ou mais ORFs no genoma e a produo ou no de mRNAs subgenmicos (Figura
7.1; Tabela 7.2).

nas clulas; d) as protenas virais so sintetizadas


como poliprotenas precursoras. Essas poliprotenas so imediatamente clivadas em protenas
individuais por proteases virais e/ou celulares;
e) os vrions no contm enzimas.
As infeces por vrus RNA de sentido positivo no so exclusivas dos animais, e um grande nmero desses agentes pode infectar tambm
bactrias ou plantas, constituindo gneros que
so classicados dentro dessas famlias de vrus.
Sete famlias de vrus animais possuem genoma RNA de sentido positivo, e todos possuem

Picornaviridae (FMDV)

7 - 8.5kb
ORF nica

5'
VPg

VP4

VP2

VP3

VP1

2A

2B

2C

3A 3B

3C

polyA 3'

3D

Flaviviridae (gnero Pestivirus, BVDV) 12,3kb


ORF nica
5'

pro

ms

E1

E2

NS2-3

NS4-A

NS4-B

NS5A

poliC3'

NS5B

Caliciviridae 7.3 - 8.3kb


ORF1

5'
VPg

p32

NTPase

P30

VpG

ORF2
capsdeo

P76 (Pro - pol)

ORF3
poliA3

mRNA subgenmico

Astroviridae

6.8kb
ORF1b

ORF1a

5'
VPg

ORF2
Capsdeo

Pol

Pro

poliA3'

mRNA subgenmico

Togaviridae 9.7 - 11.8kb


ORF2

ORF1
Cap

5'

NsP1

NsP2

NsP3

NsP4

E3

E2

poliA3'

E1

mRNA subgenmico

Arteriviridae 13 - 15kb
Cap

ORFs2-7
ORF 1b

ORF 1a

LLL

a 2b

3
4

3
poliA

mRNA subgenmicos

Coronaviridae
Cap

27 - 32kb
ORF1a

5'
L

Pol

5-7 ORFs

ORF1b
2

HE

poliA

mRNA subgenmicos

Figura 7.1. Estrutura e organizao do genoma dos vrus RNA de sentido positivo. As linhas contnuas representam o RNA
genmico; os retngulos representam os genes. A localizao das ORFs e dos mRNA subgenmicos tambm est indicada.

171

Replicao dos vrus RNA

Tabela 7.2. Principais caractersticas do genoma dos vrus RNA de polaridade positiva
Famlia

Genoma (kb)
5'

Extenso (kb)

Extremidades

3'

RNA
subgenmicos

Picornaviridae

7,2 - 8,5

VPG*, IRES

poliA

no

Flaviviridae

9,6 - 12,3

cap**,IRES***

poliC****

no

Astroviridae

6,8

VPG

poliA

sim (1)

Caliciviridae

7,3 - 8,3

VPG

poliA

sim (1)

Arteriviridae

13 - 15

cap

poliA

sim (6)

Togaviridae

9,7 - 11,8

cap

poliA

sim (1)

27 - 32

cap

poliA

sim (5-7)

Coronaviridae

* Protena terminal associada extremidade 5' do genoma.


** Apenas os vrus do gnero Flavivirus.
*** Pestivrus, hepacivrus.
**** Pestivrus (BVDV).

Nos vrus que possuem uma nica ORF no


genoma, todas as protenas so produzidas pela
traduo direta do RNA genmico, originando
uma longa poliprotena. Esta poliprotena clivada por proteases celulares e/ou virais, originando as protenas individuais. A clivagem ocorre
medida que a traduo vai se desenvolvendo, de
modo que a poliprotena inteira nunca detectada nas clulas infectadas. Nesses vrus, os genes
que codicam as protenas estruturais esto localizados no tero 5 do genoma; enquanto as protenas no-estruturais inclusive a polimerase
viral so codicadas pelo restante do genoma
(Figura 7.1).
Entre os vrus em que o genoma possui mais
de uma ORF, as protenas no-estruturais (e a
polimerase) so codicadas na regio prxima
extremidade 5 do genoma (dois teros do genoma). Apenas a ORF localizada na regio prxima extremidade 5 traduzida diretamente do
RNA genmico, resultando na sntese das protenas no-estruturais, inclusive a polimerase viral.
A(s) outra(s) ORF(s) embora estejam presentes
no sentido do RNA genmico so expressas a
partir de RNAs subgenmicos (mRNAsg), que
so produzidos a partir da transcrio das molculas de RNA complementar (antigenmicos),
ou seja, esses vrus produzem uma parte de suas
protenas (no-estruturais) pela traduo direta

do genoma e outra parte pela traduo de mRNAs subgenmicos (Figura 7.1).


Nesta seo, sero apresentados alguns aspectos das principais estratgias utilizadas pelos
vrus RNA de sentido positivo para expressar os
seus genes e replicar o seu genoma, utilizando
exemplos de diferentes famlias.

2.1 Genomas com uma nica ORF, sem


produo de mRNA subgenmicos
Importantes vrus animais e de humanos
esto includos neste grupo, que composto por
membros das famlias Picornaviridae e Flaviviridae. Dentre os patgenos humanos, esto o poliovrus, os rinovrus, os vrus da dengue e febre
amarela, e o vrus da hepatite C. Os principais
vrus animais deste grupo so: o vrus da febre
aftosa (FMDV, um picornavrus), que possui um
impacto sanitrio e econmico notvel na bovinocultura e na economia de vrios pases; e os
pestivrus (famlia Flaviviridae) vrus da diarria
viral bovina (BVDV) e vrus da peste suna clssica (CSFV).

2.1.1 Estrutura e organizao do genoma


O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, que abrange quase toda a extenso

172

Captulo 7

do genoma (Figura 7.1). Essa ORF anqueada


por duas regies no-traduzidas (5UTR, 3UTR),
que possuem extenses variveis, de acordo com
o vrus (podem atingir at 1.100 nt em alguns picornavrus). A extremidade 5 do genoma possui
estruturas especializadas que so importantes
para o direcionamento do genoma para o local da
replicao (5VPg), para o incio da traduo (cap
ou IRES) e replicao. A extremidade 3 poliadenilada ou possui uma seqncia de citosinas,
como no caso dos pestivrus (Figura 7.1; Tabela
7.2). A regio 3 UTR geralmente menor e possui seqncias importantes para a replicao do
genoma.

(Figura 7.2). Essa poliprotena clivada seqencialmente, medida que produzida, originando os precursores intermedirios e, nalmente,
as protenas virais maduras. Nos picornavrus,
as clivagens so realizadas essencialmente por
proteases virais; nos membros da famlia Flaviviridae, essas clivagens so realizadas por proteases
virais e celulares.
Uma das protenas maduras produzidas
pela traduo do genoma a replicase viral (polimerase de RNA dependente de RNA), que se encarrega de replicar o genoma. A replicao ocorre
em duas etapas: a) sntese de uma molcula de
RNA complementar (com a extenso do genoma)
e b) sntese de cpias de RNA de sentido genmico a partir do RNA complementar. As molculas de RNA de sentido genmico possuem trs
funes: a) servem de mRNA para a produo da
poliprotena; b) servem de molde para a sntese
de RNA complementar; e c) so encapsidadas

2.1.2 Traduo e replicao do genoma


A primeira etapa na replicao desses vrus
a traduo do genoma em uma nica poliprotena, que a precursora de todas as protenas virais

ORF nica
5'
VPg

VP4

VP2

VP3

VP1

2A

2B

2C

3A 3B

3C

3'

3D

IRES
-3'

5'-

Poliprotena
Clivagem

P1

Clivagem

Protenas estruturais
L

VP4

VP2

VP3

P3

P2

VP1

2A

2B

2C

Protenas no-estruturais
3A 3B

3C

3D

Figura 7.2. Organizao do genoma e expresso gnica de um picornavrus (vrus da febre aftosa, FMDV). A estrutura
IRES, reconhecida pelos ribossomos, est demonstrada na regio 5' no-traduzida. A ORF nica e longa traduzida
pelos ribossomos em uma longa poliprotena, que vai sendo clivada por proteases celulares medida que
produzida. As clivagens seqenciais originam precursores intermedirios e, finalmente, as protenas virais maduras.

173

Replicao dos vrus RNA

como genoma nas novas partculas virais (Figura


7.3). Aps a morfognese dos vrions, ocorre lise
celular e a prognie viral liberada.
A cintica de replicao dos picornavrus
rpida e o ciclo completado em cinco a dez
horas. O RNA viral (vRNA) traduzido diretamente pelos polirribossomos, mas, aproximadamente 30 minutos aps a infeco, a sntese de
protenas celulares reduzida drasticamente.
Essa supresso da sntese protica a causa primria das alteraes morfolgicas celulares que
acompanham a infeco, genericamente denominadas como efeito citoptico (ECP). A supresso
parece ocorrer pela clivagem de fatores de traduo celulares envolvidos no reconhecimento e
ligao s estruturas cap dos mRNAs celulares,
evento necessrio para o incio da traduo. Essa
clivagem atribuda protease 2A dos rinovrus
e enterovrus, e protease L do FMDV. Alguns
vrus deste grupo (a maioria dos isolados dos
pestivrus) so excees e no so citolticos.
Embora o genoma desses vrus se comporte
como mRNA e possa ser traduzido em protenas,
a sua estrutura diferente dos mRNA celulares.
Alm de codicar as protenas virais, esta molcula possui importantes seqncias conservadas
e estruturas secundrias na regio 5 no-traduzida (UTR). Entre as estruturas funcionais mais im-

portantes desta regio, destaca-se uma estrutura


secundria altamente complexa denominada Internal Ribosomal Entry Site (IRES). Esta estrutura
direciona os ribossomos ao cdon de iniciao
da traduo, sobrepondo-se ao mecanismo usual
de iniciao da traduo dos mRNAs celulares.
Estruturas IRES j foram identicadas nos genomas dos poliovrus, vrus da encefalomiocardite
(EMCV), FMDV, vrus da hepatite A e em alguns
membros da famlia Flaviviridae (vrus da hepatite C [HCV] e BVDV).
O mecanismo pelo qual o aparato de traduo celular reconhece o IRES permanece desconhecido, mas a participao de vrios fatores de
iniciao, alm de outros fatores celulares, tem
sido proposta. Ao contrrio dos poliovrus e dos
pestivrus, o genoma dos vrus do gnero Flavivirus possui uma estrutura cap na extremidade 5,
mas parece ser traduzido por um novo mecanismo que no depende do cap.
A regio 5 UTR do genoma dos vrus RNA
de sentido positivo tambm contm sinais para a
replicao do genoma. O balano entre traduo e
replicao parece ser mediado pela interao dessa regio com protenas virais e celulares. Outra
estrutura essencial para a replicao, conhecida
como sinal cis-acting de replicao (cre), tem sido
identicado no genoma de vrios vrus. Essas

RNA genmico (+)

-3'

5'-

Encapsidamento (4)

Traduo (1)

2
Replicao
Protenas

3'-

-5'

RNA antigenmico (-)

Figura 7.3. Ilustrao simplificada das etapas de replicao dos vrus das famlias Picornaviridae e Flaviviridae. O
genoma RNA , inicialmente, traduzido em protenas (1). A RNA polimerase produzida nesta etapa sintetiza o RNA
complementar (2) e, a seguir, cpias de sentido genmico (3). Alm de ser traduzido em protenas, o RNA de sentido
genmico serve de molde para a sntese do RNA complementar e, posteriormente, encapsidado nas novas partculas
vricas (4).

174

estruturas, embora aparentemente responsveis


pela mesma funo, esto localizadas em regies
diferentes dos genomas.
A regio 3 UTR do genoma contm estruturas secundrias e tercirias que so importantes
durante a replicao do genoma. Acredita-se que
ocorre uma interao direta entre as duas UTRs
(5 e 3) durante a traduo e replicao, mediada
por complexos do RNA com protenas. Existem
ainda evidncias de circularizao do genoma do
vrus da dengue (um avivrus) atravs de interao fsica entre as UTRs 5 e 3.
Durante a sua replicao, os picornavrus induzem a proliferao de estruturas membranosas
envolvidas na replicao viral. Essas membranas
podem fornecer fatores celulares necessrios para
a replicao do RNA. Vrias protenas celulares
que interagem com o RNA genmico tm sido
identicadas e, em alguns casos, tm sido associadas funcionalmente com a replicao.

2.2 Genomas com mais de uma ORF e


produo de mRNAs subgenmicos
Vrios patgenos animais e humanos utilizam esta estratgia de expresso gnica e replicao do genoma. Incluem-se entre eles os togavrus Sindbis e vrus das encefalites eqinas (EEEV,
VEEV e WEEV), os calicivrus (calicivrus felino,
FCV), os coronavrus (vrios patgenos animais
e humanos), os arterivrus (PRRSV, vrus da arterite eqina) e os astrovrus. Pela sua organizao
genmica e estratgia de expresso similares, os
membros das famlias Coronaviridae e Arteriviridae so agrupados na ordem Nidovirales. Os vrus
deste grupo de famlias apresentam vrias similaridades de estrutura, organizao genmica e
expresso gnica com o grupo anterior, porm
tambm apresentam importantes diferenas.

2.2.1 Estrutura e organizao genmica


Os vrus deste grupo possuem molculas
de RNA de polaridade positiva como genoma,
com extenso entre 6.8 kb (astrovrus) a 32 kb
(coronavrus). Dependendo da famlia, a extremidade 5 possui uma protena ligada (VPg) ou
uma estrutura cap, enquanto a extremidade 3

Captulo 7

poliadenilada. Os genes que codicam as protenas no-estruturais esto localizadas nos dois
teros prximos extremidade 5, e os genes das
protenas estruturais ocupam o tero restante do
genoma. Uma caracterstica comum a todos esses vrus a produo de mRNA subgenmicos
(mRNAsg), em nmero e extenso variveis, que
so traduzidos nas protenas estruturais.

2.2.2 Expresso gnica e replicao do


genoma
A expresso gnica e a replicao do genoma desses vrus apresentam algumas semelhanas com o grupo anterior: a) o genoma serve de
mRNA e traduzido diretamente pelos ribossomos; b) a traduo resulta na produo de poliprotenas, que so posteriormente clivadas nas
protenas individuais; e c) a replicao do genoma ocorre via produo de um RNA de sentido
antigenmico. As principais diferenas se referem organizao do genoma (posio dos genes
das protenas estruturais versus no-estruturais),
nmero de ORFs e produo de mRNAsg.
Dentre esses vrus, os mais estudados so os
coronavrus e os togavrus. A seguir, ser descrita
a expresso gnica e replicao do vrus Sindbis,
um togavrus responsvel por encefalomielite
aguda em camundongos e extensivamente estudado como modelo para diversos aspectos da
Virologia.
O genoma desse vrus contm duas ORFs,
cada uma codicando quatro protenas (Figura
7.4). Inicialmente, a ORF situada prxima extremidade 5 do genoma traduzida, resultando
na produo de uma poliprotena. Esta poliprotena clivada medida que vai sendo produzida,
originando as protenas no-estruturais, incluindo a replicase viral. Esta polimerase sintetiza,
ento, uma cpia de RNA de sentido negativo
(complementar ou antigenmica) com a extenso
completa do genoma. A molcula de RNA complementar serve para dois propsitos: a) molde
para a sntese de RNAs de sentido e extenso genmicos que so encapsidados na prognie viral
e b) molde para a sntese de mRNAs subgenmicos. Esses mRNAsg so traduzidos em uma poliprotena que origina, por clivagem, as protenas

175

Replicao dos vrus RNA

5'

Cap

NsP1

NsP2

NsP3

NsP4

E3

E2

3'

E1

A(n)

Traduo
Poliprotena
Clivagem
NSP1

NSP2

Protenas noestruturais

NSP3

Replicao
NSP4

Transcrio

5
RNA antigenmico (negativo)

Transcrio
Cap

m RNA subgenmico

A (n)

Traduo
Poliprotena

Clivagem
C

E3

E2

E1

Protenas estruturais

Figura 7.4. Ilustrao esquemtica da expresso gnica e replicao dos togavrus (vrus Sindbis).

do capsdeo e envelope. Os nucleocapsdeos se


formam no citosol, pela associao de mltiplas
cpias da protena do capsdeo com o genoma
RNA. As glicoprotenas do envelope so inseridas em membranas de organelas celulares, e os
vrions maturam por brotamento na membrana
plasmtica.
A transcrio dos mRNAs (uma nica espcie, no caso dos togavrus) ocorre por iniciao
em um stio ou promotor interno. Uma vez sintetizados, esses mRNAsg no so reconhecidos
como molde pela polimerase viral e apenas servem para a traduo nas protenas estruturais.
Essa estratgia permite a separao temporal da
sntese de protenas regulatrias (iniciais) e estruturais (tardias). A replicao desses vrus um
pouco mais complexa do que a dos picornavrus,
e a clula deve manter a sua integridade para
permitir o brotamento contnuo das novas partculas vricas. De fato, a reduo da sntese protica celular muito menos dramtica at mesmo
em fases tardias da infeco.
A replicao dos calicivrus e astrovrus no
tem sido to caracterizada como os togavrus,
pois alguns desses vrus no replicam com eci-

ncia em cultivo celular. No entanto, os vrus de


ambas as famlias tambm produzem mRNAsg
durante a sua replicao.
Os coronavrus e arterivrus replicam fazendo uso de um mecanismo similar. Nos coronavrus, uma srie de 5 a 7 mRNAsg sobrepostos so
produzidos pela transcrio do RNA antigenmico (Figura 7.1). Cada mRNAsg inicia com uma
regio lder 5 idntica (com cap), o que indica um
mecanismo mais complexo de iniciao do que o
simples reconhecimento de um promotor interno. Todos os mRNAsg possuem a mesma extremidade 3 e so traduzidos em vrias protenas
estruturais.
A exemplo dos outros vrus RNA de sentido
positivo, a replicao desse grupo de vrus ocorre
em complexos replicativos associados com membranas intracelulares. As estruturas formadas e a
origem das membranas envolvidas, no entanto,
variam entre os vrus. Por exemplo, os complexos
replicativos de vrios picornavrus e avivrus
so associados com o retculo endoplasmtico,
enquanto os togavrus utilizam tambm as membranas dos endossomos e lisossomos como stios
de replicao.

176

3 Vrus com genoma RNA de sentido


negativo
Os vrus com genoma RNA de sentido negativo apresentam uma maior diversidade do que
o grupo anterior. Esses vrus possuem o genoma
geralmente mais extenso e codicam um nmero
maior de protenas. Essa complexidade pode dever-se s diculdades adicionais da sua expresso
gnica e replicao, o que faz com que necessitem
codicar mais protenas e com funes diversas.
Os genomas dos vrus RNA de sentido negativo no so traduzidos diretamente em protenas, pois no possuem as ORFs no sentido genmico. Ao contrrio, as ORFs esto presentes na
ta de RNA complementar (RNA antigenmico).
A sntese das protenas virais, portanto, requer a
prvia produo de mRNAs. Estes mRNAs so
transcritos pela transcriptase/replicase viral,
usando o RNA genmico como molde. Como o
RNA genmico no traduzido diretamente e
assim a polimerase no produzida no incio do
ciclo, como no grupo anterior esses vrus necessitam trazer, nos vrions, as enzimas necessrias
para a sntese de RNA antigenmico e mRNA.
Os vrus RNA de sentido negativo compartilham algumas caractersticas, tais como: a) os
vrions contm cpias da enzima replicase; b)
o RNA genmico desprovido de protenas no
infeccioso; c) so produzidos mRNAs individuais para cada gene, ou seja, so RNAs monocistrnicos; d) os mRNAs possuem 5cap e so
poliadenilados (existem excees); e) o genoma
permanece associado com protenas durante a
transcrio e replicao; f) o RNA genmico de
vrios desses vrus forma estruturas semelhantes
a cabos de panela (panhandles), pela associao de
seqncias complementares presentes nas extremidades.
Neste grupo so encontrados vrus com dois
tipos de organizao genmica: os vrus com o
genoma no-segmentado, ou seja, uma molcula
nica de RNA; e os vrus com o genoma dividido
em vrios segmentos.
A estratgia de expresso gnica e replicao do genoma dos vrus RNA de sentido negativo muito similar. Cada gene origina um mRNA
que codica uma protena, ou seja, so mRNAs
monocistrnicos. A replicao do genoma ocorre

Captulo 7

por meio da produo de uma molcula de RNA


complementar (antigenmico), que serve de molde para a sntese de RNA genmico.
Nos vrus com o genoma no-segmentado,
so produzidos vrios mRNAs de extenso curta, cada um correspondendo a um nico gene.
medida que os mRNAs so transcritos, ocorre a
atenuao da transcrio, sendo produzida uma
quantidade maior de mensageiros dos genes localizados na extremidade 3 do genoma. Esses mRNAs sero traduzidos em protenas. A produo
do RNA complementar (intermedirio na replicao do genoma) envolve a transcrio completa
do genoma. Para isso, a replicase ignora os sinais
de terminao de cada gene e prossegue transcrevendo at a extremidade 5 da molcula molde.
Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento genmico codica um ou ocasionalmente dois produtos. Cada mRNA corresponde
aproximadamente extenso completa do respectivo segmento genmico. Esses mRNAs possuem 5 cap e so poliadenilados na extremidade 3. Os RNAs antigenmicos que serviro de
molde para a sntese de cpias de RNA genmico
possuem uma extenso semelhante, mas no
possuem cap na extremidade 5 e nem poliA na
extremidade 3.

3.1 Vrus com o genoma no-segmentado


Os membros de quatro famlias de vrus
possuem genoma RNA negativo no-segmentado (Tabela 7.1). As famlias Paramyxoviridae, Filoviridae, Bornaviridae e Rhabdoviridae compem
a ordem Mononegavirales, pelas semelhanas na
estrutura e organizao genmica, estratgia de
expresso gnica e replicao do genoma e por
semelhanas estruturais e funcionais das protenas. Uma caracterstica marcante da replicao
desses vrus a grande estabilidade do complexo
ribonucleoprotena (genoma + nucleoprotena,
RNP). Esse complexo nunca desfeito durante
as diferentes etapas do ciclo replicativo, ou seja,
a transcrio e a replicao ocorrem utilizando,
como substrato (ou molde), um RNA fortemente
recoberto por mltiplas cpias da nucleoprotena
(N ou NP). Esses vrus apresentam tambm um
mecanismo interessante de regulao na trans-

177

Replicao dos vrus RNA

crio dos diferentes genes, chamado de atenuao da transcrio, o que resulta na produo
de quantidades de protenas de acordo com a
necessidade do vrus. Os bornavrus apresentam
alguns aspectos nicos, como a transcrio e replicao nuclear, splicing alternativo dos transcritos primrios policistrnicos, uso diferencial de
sinais de incio e trmino de transcrio. Esses
aspectos os distinguem dos paramixovrus, lovrus e rabdovrus.
As seguir, sero abordados os principais
aspectos da expresso gnica e replicao do vrus da estomatite vesicular (VSV), um membro
da famlia Rhabdoviridae. Grande parte das informaes se aplica tambm aos outros membros da
ordem Mononegavirales.

3.1.1 Estrutura e organizao


do genoma
A estrutura e organizao do genoma de
vrus representativos das trs famlias que compem a ordem Mononegavirales esto apresenta-

dos na Figura 7.5. Variaes na extenso do genoma, no nmero de genes e na extenso das regies
intergnicas (IR) so encontradas nos vrus das
diferentes famlias. Porm, todos eles possuem
um grupo principal de genes em comum e a organizao genmica muito semelhante.
O genoma do VSV formado por uma molcula de RNA linear de ta simples, com aproximadamente 11 kb. Os rabdovrus, em geral,
codicam um mnimo de cinco genes, na ordem
3 N P M G L 5, e o VSV codica outras
duas pequenas protenas (C e C) em outra fase
de leitura do gene P. Nos paramixovrus, vrias
protenas so produzidas a partir do gene P, pela
utilizao de diferentes cdons de iniciao, traduo de diferentes ORFs e por um mecanismo
de edio. Neste mecanismo, so adicionadas
uma, duas ou trs guaninas (G) em um determinado ponto do mRNA, resultando em mudana
de fase de leitura a partir deste local. Prximo
extremidade 3, existe uma regio no-codicante, que transcrita em um polinucleotdeo denominado lder. A seqncia lder possui 47 nt (no

A
Rhabdoviridae (VSV)
(11-15kb)
P

B
Paramyxoviridae
(15-16kb)
N

P/C/V

L
5'

C
Filoviridae
(19kb)
NP

VP35

VP40

GP

VP30 VP24

Figura 7.5. Estrutura e organizao do genoma de trs vrus representativos das famlias que compem a ordem
Mononegavirales. A) Rhabdoviridae (vrus da estomatite vesicular, VSV); B) Paramyxoviridae (vrus da cinomose,
CDV); C) Filoviridae (vrus Ebola). O genoma consiste de uma molcula linear de RNA de polaridade negativa,
representada pelo trao contnuo. Os blocos representam os genes, com regies intergnicas (IRs) entre eles. N ou NP):
nucleoprotena; P: fosfoprotena (C e V, produtos secundrios do gene P); M (VP40): protena da matriz; G:
glicoprotena do envelope; F: protena de fuso; H: protena de ligao aos receptores, hemaglutinina; L: polimerase
viral. VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP30: nucleoprotena
menor; VP24: protena do envelope. O nmero de genes pode variar entre os vrus de cada famlia.

178

Captulo 7

VSV), no possui cap, no poliadenilado e no


traduzido em protena. Logo aps, existe um sinal
para o incio da transcrio do primeiro gene, que
seguida da adio de 5 cap no mRNA resultante. Entre os genes, existem as regies intergnicas
(IR), sendo que cada uma possui um sinal para a
terminao da transcrio do gene anterior, uma
pequena regio interveniente e um sinal para a
iniciao da transcrio do gene subseqente (Figura 7.6). Prximo extremidade 5, existe uma
regio no-traduzida, denominada trailer. Em todas as etapas da replicao, o genoma permanece
fortemente associado com mltiplas cpias da
nucleoprotena N, formando o complexo ribonucleoprotena (RNP).

3.1.2 Transcrio
Aps a penetrao e perda do envelope, o
nucleocapsdeo (RNA + protena) serve de molde

para a transcrio, que realizada pela replicase


viral. O complexo replicase formado pelas protenas L e P. A transcrio se inicia na extremidade 3, a partir de onde a transcriptase sintetiza a seqncia lder de 47 nt. Segue-se, ento, a
transcrio individual e seqencial de cada gene,
resultando em mRNAs individuais que possuem
a estrutura cap na extremidade 5 e so poliadenilados na extremidade 3. A cada regio intergnica, a transcriptase faz uma pausa de aproximadamente 1 a 2 minutos e prossegue transcrevendo o
gene seguinte. No entanto, apenas 70 a 80% das
replicases prosseguem transcrevendo o prximo
gene. As demais se dissociam do genoma e cessam a transcrio. Esse mecanismo de transcrio
seqencial, acompanhado de reduo do nmero de transcriptases que prosseguem a sntese de
RNA aps cada IR, gera um gradiente de transcrio que importante para a regulao da quantidade de mRNA produzido de cada gene. Assim,

Regio intergnica IR
Terminao

Iniciao

AUACUUUUUUUGAUUGUC
UAUGA
A

AA

Lder = 47nt

IR

N = 1333

AA

AA

AA

AA

AA

AA

AA

N
mRNA

AA

AA

IR

M = 838

P = 821

AA

AACAG
G

IR

IR

m7

AA

AA

AA

AA

AA

AA

AA

P AA
mRNA

AA

AA

M
mRNA

AA

AA

AA

5
AA

AA

AA

L = 6380

G = 1672

AA

G
mRNA

AA

AA

L
mRNA

AA

Figura 7.6. Organizao do genoma e estratgia de transcrio do vrus da estomatite vesicular (VSV) da famlia
Rhabdoviridae. O genoma representado pela linha contnua (as extremidades 3' e 5' e a seqncia lder esto
indicados). Os blocos representam os genes, com o nmero respectivo de nucleotdeos. Acima do genoma est
apresentada a seqncia comum das regies intergnicas (IR), com os sinais para a terminao e incio da transcrio
dos genes subseqentes. Abaixo do genoma, esto representados os mRNAs produzidos pela transcrio seqencial
dos genes. O nmero relativo de mRNAs decresce medida que a transcrio se distancia do seu incio. N)
nucleoprotena; P) fosfoprotena; M) protena da matriz; G) glicoprotena do envelope; L) polimerase.

179

Replicao dos vrus RNA

cada gene localizado na direo 5 do genoma


transcrito por um nmero progressivamente menor de transcriptases, resultando em quantidades
decrescentes de mRNAs. Esse mecanismo denominado atenuao da transcrio (transcription
attenuation). (Figura 7.6).

etapas iniciais do ciclo. Mltiplas cpias da protena N se conjugariam fortemente com o transcrito lder, provocando um sinal de antiterminao,
que interferiria com a capacidade da replicase de
reconhecer os sinais de terminao presentes no
nal de cada gene, resultando na sntese de uma
molcula de RNA complementar com a extenso
do genoma (Figura 7.7). Outro modelo para a
troca do modo de transcrio descontnua para
a replicao sugere que dois complexos enzimticos diferentes seriam responsveis por cada um
desses mecanismos. A fosforilao da protena P,
que faz parte do complexo, converteria o complexo transcriptase (que realiza a transcrio descontnua) em complexo replicase (que realiza a
transcrio contnua).
O RNA antigenmico serve de molde para a
sntese das cpias genmicas. Esse processo facilitado pela inexistncia de sinais de terminao
da transcrio neste sentido do RNA. Tanto a sntese de RNA antigenmico como a de RNA genmico so seguidas pela imediata encapsidao
dos RNAs recm-produzidos pela protena N. As
etapas de transcrio e replicao do genoma do
VSV esto ilustradas na Figura 7.7.

3.1.3 Replicao do genoma


A replicao do genoma inicia em um determinado momento do ciclo, aps a sntese de
quantidade suciente de protenas virais, principalmente de nucleoprotena. A replicao do
genoma desses vrus ocorre em duas etapas e
envolve a sntese de uma molcula de RNA complementar com a extenso total do genoma. A
replicase no interrompe a transcrio a cada IR,
ignorando os sinais de terminao da transcrio
at a extremidade 5. Os mecanismos responsveis pela transio entre transcrio descontnua
(sntese de mRNAs) e transcrio contnua (sntese de RNA complementar) no so completamente conhecidos, mas parecem ser dependentes do
acmulo da protena N (e provavelmente a P) nas
N

mRNA

mRNA

mRNA

mRNA

mRNA

AA

AA

RNA pol

AA

AA

AA

AA

AA

AA

AA

AA

Transcrio (1)

RNA genmico (-)


5

RNA pol

Replicao (2)
RNA antigenmico (+)

Replicao (3)

5
RNA genmico (-)

Figura 7.7. Etapas da transcrio e replicao do genoma do vrus da estomatite vesicular (VSV). A linha contnua
representa a molcula de RNA genmico, recoberta por mltiplas cpias da nucleoprotena. No incio do ciclo
replicativo, a transcrio descontnua resulta em mRNAs individuais de cada gene (1). Em uma determinada etapa,
com o acmulo da nucleoprotena (N), o complexo replicase realiza a sntese da molcula de RNA complementar (2),
que serve de molde para a sntese de molculas de RNA genmico (3). Note que tanto o RNA genmico (-) quanto o
RNA antigenmico ou complementar (+) permanecem recobertos por molculas da protena N (ou NP) durante os
processos de transcrio e replicao. As etapas ilustradas acima so comuns aos vrus da ordem Mononegavirales.

180

Captulo 7

3.2 Vrus com o genoma segmentado


Vrus de trs famlias possuem este tipo
de genoma: Orthomyxoviridae (7 ou 8 segmentos); Bunyaviridae (trs segmentos) e Arenaviridae
(dois segmentos). Os ortomixovrus e a maioria
dos buniavrus possuem o genoma inteiramente
de sentido negativo, ou seja, as ORFs esto presentes no RNA complementar. O genoma dos
arenavrus e de alguns buniavrus possui sentido ambissense, ou seja, contm algumas ORFs no
sentido do RNA genmico e outras no sentido do
RNA complementar. O genoma no traduzido
diretamente, e esses vrus necessitam trazer a sua
replicase nos vrions. Por isso so classicados
como vrus RNA de sentido negativo.
Os ortomixovrus possuem o genoma segmentado (inuenza A e B = oito segmentos; inuenza C = 7 segmentos) e replicam o genoma
no ncleo da clula hospedeira. A replicao no
ncleo faz desses vrus excees entre os vrus

RNA, juntamente com os bornavrus. A descrio


a seguir abordar o vrus da inuenza A.
O genoma do vrus da inuenza A constitui-se por oito segmentos de RNA de polaridade
negativa, numerados de 1 a 8. Os segmentos 1 a 6
codicam uma protena cada; os segmentos 7 e 8
codicam duas protenas cada. Todos os segmentos genmicos apresentam a mesma organizao
geral: possuem um gene (ou mais) na regio central, anqueada por seqncias altamente conservadas nas extremidades 3 (12 nt) e 5 (13 nt)
(Figura 7.8). As regies terminais possuem sinais
para o incio da transcrio e replicao. Cada segmento genmico encontra-se recoberto (encapsidado) por mltiplas cpias da protena NP e est
associado com algumas protenas que formam o
complexo polimerase-replicase. Esse complexo
formado por trs protenas principais: PB1 (polimerase bsica 1); PB2 (polimerase bsica 2) e PA
(polimerase cida). O complexo RNA + protenas associadas se denomina ribonucleoprotena
(RNP) e permanece estvel durante a replicao.

Traduo

B. mRNA
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG

AAA(n)-3

8-13nt

15-22nt
Transcrio (1)
8-13nt

Cap-5---------GA
3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)

5-AGCGAAAGCAGG

GGAACAAAGAUGA-5

Replicao

3
CCUUGUUUCUACU-3

C. RNA antigenmico (+)

Figura 7.8. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. A) RNA genmico (vRNA); B)
mRNA; C) RNA antigenmico. A transcrio para a sntese de mRNA utiliza nucleotdeos com cap subtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA ou genmico a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem
dos RNA antigenmicos, pela presena de 8-13 nt adicionais com cap e cauda poliA.

Replicao dos vrus RNA

Cada segmento genmico transcrito individualmente pelo complexo transcriptase. O processo se inicia pela subtrao de seqncias de 8
a 13 nt, com cap na extremidade 5, de mRNAs
celulares. Essa atividade atribuda PB1, ou
seja, essa enzima literalmente furta os segmentos
iniciais de mRNAs celulares. Esses nucleotdeos
servem de primer para o incio da transcrio,
alm de possurem a estrutura cap, que necessria para a traduo dos mRNA virais. A transcrio termina 15 a 22 nt antes da extremidade
5 de cada segmento, e seguida pela adio de
uma cauda de poliA. Os mRNAs virais no so,
portanto, exatamente complementares aos RNAs
genmicos: possuem uma extenso de 8 a 13 nt
em sua regio 5 e no possuem os 15-22 nt terminais, sendo substitudos por uma cauda poliA.
A replicao dos RNA genmicos (vRNA)
ocorre em duas etapas: sntese do RNA antigenmico (complementar) e sntese de RNA genmico (vRNA), utilizando o RNA antigenmico
como molde. A sntese do RNA antigenmico
no envolve a subtrao de nucleotdeos com
cap de mRNA celulares; inicia-se exatamente na
extremidade 3 do genoma e termina exatamente na extremidade 5. Dessa forma, o RNA antigenmico exatamente complementar ao RNA
genmico. A transio entre a transcrio iniciada por primer + cap para a transcrio independente de primer + cap parece envolver complexos
transcriptase/replicase diferentes. O acmulo da
protena NP e alteraes especcas na composio do complexo polimerase seriam responsveis
pela transio entre transcrio e replicao. A Figura 7.8 apresenta a estrutura dos vRNA, mRNA
e RNAs antigenmicos produzidos durante a replicao dos vrus da inuenza A.

3.3 Vrus com o genoma ambissense


Os arenavrus e alguns buniavrus possuem
genoma ambissense, ou seja, alguns genes so codicados no sentido do RNA complementar, enquanto outros so codicados no sentido do genoma, aps a sntese de mRNA, a partir da cpia
complementar de RNA. Em outras palavras, as
ORFs de alguns genes esto presentes no RNA

181

genmico (sentido positivo) e outras esto presentes no RNA complementar (sentido negativo).
As ORFs que esto no sentido do genoma ocupam a metade 3 do genoma e no so traduzidas
diretamente. Como o genoma no traduzido
diretamente pelos ribossomos, esses vrus necessitam trazer, nos vrions, a sua enzima transcriptase/replicase e, por isso, so classicados juntamente com os vrus RNA de sentido negativo.
Os arenavrus possuem dois segmentos de
RNA como genoma: um segmento grande (large
= L) e outro segmento pequeno (small = S). Cada
um desses segmentos contm dois genes (Figura
7.9A). No segmento grande, o gene L possui polaridade negativa, ou seja, a sua ORF est presente
no RNA complementar. Para que a protena seja
expressa, esse gene transcrito pela polimerase
viral, originando um mRNA, que , ento, traduzido (Figura 7.9B). Por outro lado, o gene Z possui
polaridade positiva (a ORF est presente no RNA
genmico do segmento L). No entanto, este gene
no expresso pela traduo direta do genoma.
A sua expresso somente ocorre aps a sntese do
RNA complementar, a partir do qual o mRNA ,
ento, produzido (Figura 7.9B). A expresso deste
gene segue o mesmo padro dos genes expressos
atravs de mRNA subgenmicos, caractersticos
de algumas famlias de vrus RNA. No segmento
S, o gene NP possui polaridade negativa e a sua
expresso depende da sntese de mRNA. O gene
GP possui polaridade positiva e a sua expresso
segue o mesmo padro do gene Z do segmento L:
sntese do RNA complementar e transcrio do
seu mRNA. A estratgia ambissense de codicao de protenas encontrada ainda em vrus de
alguns gneros da famlia Bunyaviridae (Tospovrus e Phlebovrus).
A replicao do genoma segue o padro dos
outros vrus RNA e ocorre por intermdio de um
RNA complementar de sentido antigenmico. A
diferena que o RNA complementar serve de
molde para a sntese do RNA genmico e tambm para a sntese do mRNA de um dos genes.
Em resumo, os genomas ambissense possuem
genes que so expressos de maneira semelhante
aos genomas RNA de sentido negativo (as ORFs
esto presentes no RNA complementar); e genes

182

Captulo 7

que so expressos como nos vrus RNA de sentido positivo (as ORFs esto presentes no sentido
genmico, embora no sejam traduzidas diretamente).

A
Z

- 5'

3' -

Segmento grande (L)


NP

GP
- 5'

3' -

Segmento pequeno (S)


Protena Z

Traduo
mRNA
-5'

3'Transcrio (3)

4 Vrus com RNA de fita dupla


So conhecidas atualmente seis famlias de
vrus que possuem RNA de ta dupla (ds RNA)
como genoma, e apenas duas abrigam vrus que
infectam vertebrados (Reoviridae e Birnaviridae);
destas, apenas a primeira possui patgenos de
mamferos. A famlia Reoviridae a maior e mais
diversa dessas famlias, contendo importantes
patgenos animais. O genoma desses vrus
composto por 10, 11 ou 12 segmentos de dsRNA,
dependendo do gnero. A maioria dos segmentos
codica apenas uma protena, mas alguns podem
codicar duas. Nos segmentos duplos de RNA,
apenas uma das tas contm as ORFs codicantes de protenas. O complexo replicase trazido
nos vrions, associado aos segmentos, e a sntese
dos mRNA virais ocorre no interior dos capsdeos semi-ntegros.

4.1 Estrutura e organizao do genoma

L
5' -

- 3'

RNA complementar

Z
Replicao (2)
Z

- 5'

3' -

RNA genmico
Transcrio (1)
mRNA
5' -

- 3'

Traduo
Protena L

Figura 7.9. Estrutura e expresso do genoma ambissense


dos arenavrus. A) Organizao dos segmentos
genmicos L (grande) e S (pequeno) com os respectivos
genes; B) Estratgia de expresso gnica do segmento
grande. O gene L possui sentido negativo e a sua
expresso depende inicialmente da transcrio e sntese
de mRNA (1). O gene Z possui sentido positivo, mas no
expresso pela traduo direta do genoma. A sua
expresso ocorre somente aps a sntese do RNA
complementar (2). Este serve de molde para a transcrio
e produo do mRNA correspondente (3). Os genes NP e
GP do segmento S seguem os mesmos padres de
expresso dos genes L e Z, respectivamente.

Os vrus do gnero Orthoreovirus possuem


os prottipos da famlia Reoviridae, os reovrus
no-fusognicos de mamferos. O genoma desses
vrus composto por dez segmentos de dsRNA.
Os segmentos genmicos so denominados de
acordo com a sua migrao em gis de poliacrilamida (SDS-PAGE): L = grandes (L1, L2, L3);
M = mdios (M1, M2 e M3) e S = pequenos (S1,
S2, S3 e S4). Somente os segmentos S1 e M3 originam duas protenas, o restante codica apenas
uma. Os dez segmentos dos orthoreovrus so
lineares e possuem as extremidades livres. Embora se constituam em segmentos separados,
algumas evidncias indicam que os segmentos
genmicos encontram-se associados atravs de
suas extremidades nas partculas vricas. Cada
segmento de polaridade positiva possui uma estrutura cap (7-M-guanina) na extremidade 5, que
provavelmente adicionado por enzimas virais
no interior dos capsdeos. As extremidades 5 dos
segmentos de polaridade negativa possuem um
nucleotdeo difosfato. A cadeia codicante (e os
mRNAs) possuem uma regio no-traduzida de

183

Replicao dos vrus RNA

Gene (nt)
Cadeia (+)
5'
3'

Protena (aa)

L1=3854

3' 3 (1267)
5' pp
Cadeia (-)

L2=3916

2 (1269)
L3=3901
1 (1275)
M1=2304
2 (736)
M2=2203
1 (708)
M3=2241
NS (721) + NSC (681)
S1=1416
1 (455) + 1s (120)
S2=1331
2 (418)
S3=1198
NS (366)
S4=1196
3 (365)

Figura 7.10. Organizao do genoma dos vrus do gnero Orthoreovirus da famlia Reoviridae. O genoma composto
por 10 segmentos de RNA de fita dupla, sendo que apenas uma das cadeias codificante (sentido positivo). No
segmento L1, so mostradas as duas cadeias, os demais mostram apenas a cadeia codificante. Os diferentes segmentos
apresentam uma organizao semelhante, possuindo uma ORF central flanqueada por pequenas regies notraduzidas nas extremidades 5' e 3'. A nomenclatura e nmero de aminocidos de cada protena esto apresentados
direita. Note que oito segmentos codificam apenas uma protena cada; os segmentos M3 e S1 codificam dois produtos
cada.

12 a 32 nt prxima extremidade 5 e outra regio no-traduzida de 35 a 73 nt na extremidade


3, intercaladas por ORFs que possuem entre 365
e 1.289 nt (Figura 7.10). Essas regies no-codicantes possuem stios regulatrios da transcrio
e traduo.

4.2 Transcrio
A transcrio inicial ocorre ainda no interior
dos capsdeos, logo aps a penetrao dos vrions
no citoplasma da clula hospedeira, e apenas as
cadeias negativas so transcritas. Os mRNAs in-

dividuais so exatamente complementares aos


RNA moldes: possuem 5 cap e no so poliadenilados. Por isso servem tanto para a traduo
como de molde para a sntese do RNA complementar (Figura 7.11). Os mRNAs tardios, produzidos aps a replicao do genoma, constituem
uma exceo por no receberem cap na extremidade 5. Os mRNAs so rapidamente exportados
dos capsdeos e ganham acesso ao citoplasma
para serem traduzidos. Em fases adiantadas do
ciclo, j no interior de capsdeos recm-formados,
ocorre um novo ciclo de transcrio com a produo de mais mRNA.

184

Captulo 7

4.3 Replicao do genoma


A segunda etapa da replicao, a sntese das
cadeias negativas, ocorre j em capsdeos pr-formados no citoplasma da clula hospedeira, em
um local chamado de viroplasma, que constitui
uma fbrica de vrus dentro da clula hospedeira. Para que isso ocorra, as protenas que formam
os capsdeos j so produzidas em etapas iniciais
do ciclo replicativo. Cada segmento de RNA (+)
serve de molde para a sntese da cadeia complementar (-), que permanece pareada com o molde, restabelecendo, assim, a molcula genmica
dsRNA. A sntese da cadeia negativa se inicia na
extremidade 3 da molcula molde e prossegue
at a extremidade 5. Por isso, as cadeias positivas e negativas so exatamente complementares
(Figura 7.11).

diretamente. A replicao tambm no ocorre


por meio de um intermedirio RNA, como nos
outros vrus RNA. Ao contrrio, a replicao do
genoma ocorre por meio de um intermedirio
DNA. Parte das etapas de replicao do genoma
ocorre no citoplasma e parte ocorre no ncleo da
clula hospedeira. Resumindo, as principais peculiaridades do genoma e da replicao desses
vrus so: a) o seu genoma diplide, ou seja,
composto por duas molculas idnticas de RNA;
b) o RNA genmico possui polaridade positiva,
porm no traduzido em protenas; c) a replicao do genoma ocorre por meio da sntese de
um intermedirio DNA (provrus), que incor-

Genoma
Cap

U5

.gag

pol

env

U3

AAAA

RNA

Transcrio reversa (1)


Provrus

Genoma (ds)
RNA (+)
5'
3'

3'
5'

U3

U5

.gag

pol

env

U3

U5 DNA

U5

DNA
celular

AAAA

RNA

RNA (-)

Integrao (2)

Transcrio (1)
Provrus Integrado

mRNA (+)
5'

3'

Traduo (2)

DNA
celular

U3

U5

DNA
.gag

pol

env

U3

Replicao (3)
Transcrio (3)
RNA (+)

3'
5'

5'
3'

Protena

Genoma (ds)

RNA (-)

Figura 7.11. Etapas da expresso gnica e replicao dos


vrus RNA de fita dupla. A fita negativa do genoma
transcrita, originando RNAs de sentido positivo
exatamente complementares (1). Estes RNAs podem ser
traduzidos em protenas (2) e tambm servem de molde
para a sntese da molcula de sentido negativo (3),
restabelecendo a molcula genmica de dsRNA.

5 Retrovrus
Os retrovrus apresentam uma estratgia
peculiar de replicao do genoma que difere dos
demais vrus RNA (Figura 7.12). Embora esses
vrus codiquem as suas protenas no sentido do
genoma (por isso so considerados vrus RNA
de sentido positivo), o genoma no traduzido

Genoma
Cap

U5

.gag

pol

env

U3

Figura 7.12. Ilustrao da estrutura e etapas da replicao


do genoma dos retrovrus. O genoma constitudo por
uma molcula de RNA de fita simples de 7 a 10 kb com
5'cap e poliA. Prximo s extremidades, o genoma
possui duas regies repetidas R (5' e 3') e duas regies
nicas (U5 e U3). Entre essas regies, localizam-se as
seqncias codificantes: genes gag, pol e env. A primeira
etapa da replicao sntese do provrus DNA
(molcula de DNA de fita dupla correspondente ao
genoma) pela enzima viral transcriptase reversa (1). O
provrus contm as regies U3 e U5 duplicadas nas
extremidades opostas e integrado aos cromossomos
celulares pela ao da enzima viral integrase (2). Aps a
integrao, o provrus transcrito pela RNA polimerase
II celular (3) originando mRNAs idnticos ao genoma.
Estes mRNAs servem para a traduo em protenas e
tambm constituem o RNA genmico para serem
encapsidados na prognie viral.

Replicao dos vrus RNA

porado aos cromossomos celulares; d) o provrus


integrado transcrito, originando mRNAs para a
sntese protica e para serem incorporados como
genoma na prognie viral; e) as etapas iniciais da
replicao do genoma ocorrem no citoplasma e
so mediadas por enzimas virais (transcritase reversa); f) as etapas seguintes ocorrem no ncleo
e so mediadas por enzimas virais (integrao =
integrase, IN) e celulares (transcrio = RNA pol
II celular); g) o genoma dos retrovrus o nico
genoma viral sintetizado exclusivamente por enzimas e fatores celulares. Por isso, a sua estrutura idntica aos mRNA celulares: possui cap na
extremidade 5 e poliadenilado na extremidade
3. As principais etapas da replicao do genoma
dos retrovrus e a estrutura das molculas intermedirias esto ilustradas na Figura 7.12. Maiores detalhes sobre a expresso gnica e replicao
do genoma podem ser encontrados no Captulo
31.

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PATOGENIA DAS INFECES VRICAS


Eduardo Furtado Flores1

1 Introduo
1.1 Conceitos bsicos

2 Patologia em nvel celular


2.1 Interaes dos vrus com as clulas
2.2 Efeitos da replicao viral nas clulas hospedeiras
2.3 Apoptose por vrus

8
191
191
193
193
196
196

3 Patogenia em nvel de hospedeiro

197

3.1 Penetrao e replicao primria


3.1.1 Pele e mucosas superficiais
3.1.2 Trato respiratrio
3.1.3 Orofaringe e trato digestivo
3.1.4 Mucosa urogenital

197
197
199
200
201

3.2 Infeces localizadas versus infeces disseminadas (ou sistmicas)


3.2.1 Disseminao local
3.2.2 Disseminao hematgena
3.2.3.Disseminao nervosa

202
202
202
207

3.3 Localizao das infeces


3.3.1 Infeces em rgos e sistemas especficos
3.3.2 Infeces da pele e tegumento
3.3.3 Infeces do trato respiratrio
3.3.4 Infeces do trato digestivo
3.3.5 Infeces do sistema nervoso central
3.3.6 Infeces do sistema linforreticular e hematopoitico
3.3.7 Infeco fetal

209
209
211
212
213
215
217
218

4 Padres principais de infeco


4.1 Infeces agudas

Colaboraram em sees especcas: Janice Ciacci Zanella (Apoptose por vrus); Luiz Carlos Kreutz
(Padres principais de infeco) e Mariana S e Silva (Imunopatologia em infeces vricas).
1

220
221

4.2 Infeces persistentes (ou crnicas)


4.2.1 Infeces latentes
4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas
4.2.3 Infeces persistentes temporrias

212
222
222
223

4.3 Mecanismos envolvidos na manuteno das infeces persistentes


4.3.1 Restrio do efeito citopatognico
4.3.2 Infeco de clulas semipermissivas
4.3.3 Infeco de um pequeno nmero de clulas
4.3.4 Manuteno do genoma viral nas clulas hospedeiras
4.3.5 Evaso da resposta imune do hospedeiro

225
225
225
226
226
226

5 Oncognese por vrus

226

5.1 Oncognese por retrovrus


5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos

226
227

6 Imunopatologia em infeces vricas

228

6.1 Imunopatologia mediada por imunocomplexos


6.2 Imunopatologia mediada por linfcitos T citotxicos
6.3 Imunopatologia por induo de auto-imunidade

7 Imunossupresso por vrus


7.1 Replicao viral em clulas envolvidas na resposta imunolgica
7.2 Imunossupresso associada com a ativao do sistema imune
7.3 Produtos de moncitos e linfcitos ativados
7.4 Protenas virais

8 Bibliografia consultada

229
230
230

230
231
232
232
232

234

1 Introduo
O termo patogenia ou patognese , aplicado s infeces vricas, refere-se ao conjunto
de mecanismos pelos quais os vrus produzem
doena em seus hospedeiros (pato = doena, gnese = origem, produo). A denio de doena como sendo qualquer manifestao resultante
de alteraes da siologia do organismo abrange
um leque muito amplo de condies. Manifestaes patolgicas incluem desde aumentos leves
da temperatura corporal, alteraes de nimo e
apetite, at condies severas que, eventualmente, resultam na morte do hospedeiro. Na maioria
das doenas, a patogenia multifatorial, resultante da alterao de fatores endgenos ou exgenos, raramente determinadas por um fator nico. Com as infeces vricas no diferente, pois
as conseqncias dependem das interaes entre
inmeros fatores do agente e do hospedeiro.
Grande parte dos sinais clnicos observados
nas doenas vricas conseqncia da resposta
do hospedeiro injria celular e tecidual. Por sua
vez, essa injria pode resultar de efeitos diretos
ou indiretos da replicao viral ou pode, ainda,
ser conseqncia da resposta imune do hospedeiro contra as clulas infectadas. De fato, a patogenia de vrias doenas vricas est mais intimamente ligada aos mecanismos imunolgicos
do hospedeiro do que s conseqncias diretas
da replicao viral nos tecidos. Em resumo, a patogenia das infeces vricas determinada pela
combinao entre os efeitos diretos e indiretos da
replicao viral e as respostas do hospedeiro infeco.
Os mecanismos pelos quais os vrus produzem doenas em seus hospedeiros podem ser
examinados em diferentes nveis. As clulas so
as unidades fundamentais do organismo, nas
quais os vrus se multiplicam. Por isso, as clulas
se constituem nos locais de origem dos eventos
ligados infeco vrica que podem resultar em
doena. A replicao dos vrus, muitas vezes, interfere com mecanismos siolgicos essenciais
da clula hospedeira, alterando as suas funes
em benefcio da replicao viral. A alterao de
processos celulares envolvidos na biossntese de
macromolculas e na manuteno da homeostase
celular, por exemplo, podem resultar em disfun-

o e at morte celular. Outras vezes, produtos da


replicao viral podem ser txicos para a clula
hospedeira. Essas alteraes esto freqentemente envolvidas na origem de processos patolgicos
observados no organismo. Uma infeco pode resultar em absoluta ausncia de efeitos deletrios
sobre as clulas e, conseqentemente, na ausncia de manifestaes clnicas; ou pode resultar em
efeitos celulares graves, acompanhados de sinais
clnicos severos e morte do hospedeiro.
No hospedeiro, a complexidade de interaes que pode ou no resultar em doena
muito maior, e ainda acrescida da participao
dos componentes celulares e humorais da resposta imunolgica e de outros sistemas encarregados de manter a homeostasia e integridade
do organismo. Ao contrrio do que se imagina, a
ocorrncia de doena clnica em infeces vricas
um evento pouco freqente, considerando-se a
totalidade das infeces. Ou seja, a maioria das
infeces por vrus no resulta em alteraes orgnicas que se manifestem com sinais perceptveis clinicamente. A ocorrncia ou no de doena
em uma determinada infeco vrica depende da
interao entre inmeros fatores do agente e do
hospedeiro, na qual os mecanismos imunolgicos, destinados a manter a integridade e funcionalidade do organismo, desempenham um papel
fundamental. A Figura 8.1 ilustra esquematicamente a relao entre infeco e doena em nvel
celular e de hospedeiro, com as conseqncias
derivadas da replicao nos diferentes nveis.

1.1 Conceitos bsicos


O termo patogenicidade se refere capacidade de um determinado agente produzir doena no hospedeiro. Vrus altamente patognicos so aqueles capazes de produzir doena em
uma grande parcela dos hospedeiros infectados.
Como a patogenia das infeces depende tambm das reaes do organismo, a patogenicidade
de um vrus modulada por suas interaes com
o hospedeiro. O termo virulncia, muitas vezes
utilizado como sinnimo de patogenicidade, se
refere ao nvel de severidade da doena causada por um agente. Os vrus altamente virulentos
causam doena grave; enquanto vrus avirulentos ou pouco virulentos (atenuados) no causam

Captulo 8

Efeito no hospedeiro

Efeito em nvel celular

Morte do hospedeiro

Lise celular

Doena clssica e severa

Disfuno celular,
efeito citoptico ou
transformao celular

DOENA CLNICA

PERCEPTVEIS VISUALMENTE

192

Replicao viral sem


alteraes celulares visveis,
ou danos teciduais restritos

Infeco sem sinais


clnicos (assintomtica)

Exposio sem
infeco

Exposio sem infeco

INFECO SUBCLNICA

VISUALMENTE
IMPERCEPTVEIS

Doena leve ou moderada

Conceito iceberg das infeces

Figura 8.1. O conceito iceberg das infeces vricas. Note que a maioria das infeces vricas no resulta em efeitos
perceptveis em nvel de hospedeiro. As manifestaes clnicas, quando ocorrem, constituem-se em reflexos da
disfuno e patologia em nvel celular e tecidual.

doena, ou causam doena leve, respectivamente. A virulncia de um vrus pode ser medida de
vrias formas, incluindo o percentual de animais
que adoece ou morre aps inoculao experimental, grau de severidade dos sinais clnicos, nvel e
intensidade de alteraes histolgicas, entre outras.
A virulncia dos vrus determinada geneticamente e pode variar entre isolados de uma
mesma espcie viral. No entanto, fatores do hospedeiro podem interferir com e modular a virulncia desses agentes. Embora em alguns vrus a
virulncia possa ser mapeada em um ou poucos
genes, para a maioria dos vrus essa uma caracterstica multifatorial. Em geral, os genes virais
envolvidos na virulncia podem ser divididos em
quatro classes: a) genes cujos produtos afetam a
capacidade replicativa do vrus; b) produtos gnicos que inuenciam a capacidade do vrus se
disseminar no hospedeiro; c) produtos virais que
se contrapem resposta imunolgica do hospedeiro e d) produtos virais txicos para a clula

e/ou hospedeiro. Muitos genes virais podem se


enquadrar em mais de uma classe, afetando a virulncia de mais de uma forma.
A identicao dos genes envolvidos na determinao da virulncia dos vrus de importncia em sade humana e animal um dos maiores
desaos da Virologia, pois pode permitir a manipulao gentica desses agentes com ns vacinais
e/ou teraputicos. No entanto, essa nem sempre
uma tarefa fcil, pela complexidade das interaes vrus-clula, falta de sistemas apropriados
ou modelos animais adequados e pela diculdade de se estudar virulncia em cultivos celulares.
O termo susceptibilidade se refere s condies oferecidas pelo hospedeiro para a ocorrncia
da infeco e doena. Por outro lado, resistncia
a oposio oferecida pelo hospedeiro instalao
da infeco. A susceptibilidade e resistncia de
um hospedeiro a um vrus so determinadas geneticamente e podem variar entre indivduos de
uma mesma espcie, de acordo com fatores como:
raa, idade, sexo, condio corporal, estado sio-

Patogenia das infeces vricas

lgico etc. A resistncia infeco pode ser devida a mecanismos naturais (resistncia natural
ou inata) ou adquiridos (resistncia adquirida). O
termo imunidade muito utilizado para designar
a resistncia, principalmente a resistncia adquirida. O termo refratariedade se refere a um grau de
resistncia absoluta a um determinado agente, e
uma caracterstica da espcie animal, e no do
indivduo.
O tropismo a predileo de um vrus por
determinadas clulas ou tecidos e pode ser determinado por uma variedade de fatores celulares que so necessrios para a replicao viral. O
principal fator determinante do tropismo e que
possui inuncia direta no padro de distribuio e localizao das infeces a presena de
receptores especcos para o vrus. Maiores detalhes sobre os mecanismos envolvidos com o
tropismo celular dos vrus sero abordados ao
longo do texto.

2 Patologia em nvel celular


A compreenso da patogenia das doenas
vricas depende do conhecimento dos mecanismos envolvidos em diferentes nveis. Os vrus
necessitam das macromolculas e de processos
biossintticos da clula hospedeira para se multiplicar. As interaes entre o vrus e os componentes celulares so complexas e, muitas vezes,
resultam em alteraes da siologia celular, podendo levar injria e at mesmo morte da
clula. As patologias celulares associadas com a
replicao viral se constituem em um dos principais mecanismos de produo das doenas. Em
nvel celular, as infeces vricas podem resultar em uma variedade de condies, a saber: a)
infeco no-produtiva, com bloqueio em uma
das etapas intracelulares da replicao, seguida
ou no de injria e morte celular; b) estabelecimento de infeco latente, com limitada expresso gnica viral e persistncia do genoma viral
na clula hospedeira; c) infeco produtiva, com
produo de prognie viral infecciosa, acompanhada de patologia ou morte celular; d) infeco
produtiva persistente, em que a clula sobrevive
e segue produzindo vrus em nveis baixos por
longos perodos e, at mesmo, indenidamente;
f) oncognese, seja pela incorporao de oncoge-

193

nes virais na clula hospedeira ou por alteraes


nas funes de genes celulares encarregados do
controle do ciclo celular.

2.1 Interaes dos vrus com as clulas


A maioria das alteraes da siologia celular resultantes da replicao viral se deve a efeitos secundrios das interaes entre os produtos
virais e componentes celulares; interaes estas
que so necessrias para a multiplicao dos vrus. Os efeitos txicos especcos de alguns produtos virais e o acmulo excessivo de protenas
e cidos nuclicos virais tambm podem levar
injria celular.
As interaes que resultam em alterao na
siologia celular podem ocorrer em qualquer etapa do ciclo replicativo. A penetrao dos adenovrus em clulas de cultivo acompanhada por
despreendimento das clulas da superfcie de
contato. Esse evento deve-se ligao da protena penton dos vrions s molculas de integrinas
da membrana das clulas. Essa ligao altera as
interaes das integrinas com outras protenas da
membrana celular, necessrias para a aderncia
das clulas superfcie do frasco. A protena M2
dos vrus da inuenza produz canais inicos na
membrana dos endossomos durante o processo
de internalizao do vrus, atravs dos quais prtons H+ penetram para o interior das vesculas
endossmicas, acidicando o pH e facilitando o
processo de fuso/penetrao e desnudamento
do nucleocapsdeo. No entanto, as possveis conseqncias desse evento, para a siologia celular,
so desconhecidas.
Alguns vrus interferem com os mecanismos de transcrio, processamento (splicing) e
transporte de RNA mensageiros (mRNA) celulares, estratgias que visam a favorecer a traduo
dos mRNA virais. Os adenovrus e herpesvrus
inibem a maturao e a exportao de mRNA celulares para o citoplasma; os vrus da inuenza
provocam a clivagem de mRNA celulares para
utilizar a extremidade 5 com cap para os seus
mRNA. Produtos dos vrus da inuenza, herpesvrus e poxvrus promovem a degradao de
mRNA celulares (Tabela 8.1).
Outros vrus alteram a especicidade ou
subvertem a maquinaria celular de traduo

194

Captulo 8

Tabela 8.1. Protenas virais responsveis por efeitos especficos sobre mecanismos e estruturas das clulas
hospedeiras
Efeito

Alvo

Inibio da traduo cap-dependente

elF-4G

2A, 3A

Inibio do trfego protico RER-Golgi

Desconhecido

2B, 2C

Proliferao de vesculas
membranosas

Desconhecido

Desconhecida

Alterao do mecanismo da MAP4

MAP4

3C

Inibio da transcrio

Tbp, Complexo Tfflc

Vrus Sindbis

Desconhecida

Aumento da permeabilidade da membrana


plasmtica

Na, K-ATPase?

Paramixovrus

Fuso entre clulas formao de sinccios

Membrana plasmtica

E1B-55K, E4-34K

Bloqueio na acumulao de mRNAs


celulares no citoplasma

Protena celular envolvida


no transporte de mRNA

Desconhecida

Inibio da traduo cap-dependente

elF-4E

Herpesvrus

Produto do gene
vhs (ribonuclease)

Desmontagem dos polissomas

mRNA celular

Vrus do herpes
simplex

ICP 27

Inibio do transporte e
processamento de mRNA celular

Desconhecido

Vrios vrus

Desconhecida

Despolimerizao do citoesqueleto

Filamentos de actina.

Vrus

Protena(s)
2A

Poliovrus

pro

Adenovrus

Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).

para a produo de suas protenas, em detrimento das protenas celulares. A inibio da traduo de mRNA celulares, e no de mRNA virais,
uma forma de subverso utilizada pelos vrus
para favorecer a sntese de suas protenas. Esses
mecanismos so utilizados por vrios vrus, incluindo o vrus da estomatite vesicular (VSV),
o poliovrus, o vrus da febre aftosa (FMDV), os
adenovrus, entre outros. Essa interferncia pode
ter efeitos deletrios para a clula hospedeira,
que tem a sua sntese protica reduzida ou mesmo suprimida.
A inibio da sntese de DNA celular outro mecanismo utilizado por vrus RNA e DNA
durante a sua replicao. Essa inibio pode proporcionar uma disponibilidade maior de precursores (nucleotdeos), protenas e estruturas celulares para a sntese dos cidos nuclicos virais e
replicao do genoma. possvel tambm que a
inibio da sntese de DNA celular, em alguns casos, seja uma mera conseqncia da inibio da
sntese protica da clula hospedeira pelo vrus.

Por outro lado, alguns vrus (poliomavrus,


papilomavrus e adenovrus) estimulam as clulas a entrar em fase S, com ativao da sntese de
DNA e subseqente diviso celular. Essa estratgia tem por m estimular a clula a fornecer
condies e componentes (nucleotdeos, enzimas
replicativas e fatores de replicao) necessrios
replicao do genoma viral. Como conseqncia,
a clula hospedeira passa a oferecer as condies
necessrias replicao viral. Essa interferncia
com a regulao do ciclo celular, algumas vezes,
pode levar transformao tumoral dessas clulas.
A apoptose ou morte celular programada
um mecanismo de morte celular em resposta a
vrios estmulos, inclusive infeces vricas. Tem
sido demonstrado que vrios vrus so capazes
de desencadear a cascata de reaes que leva
apoptose da clula hospedeira. Por outro lado,
vrios vrus possuem produtos que inibem ou
retardam a apoptose, prolongando, assim, a vida
da clula e permitindo a concluso do seu ciclo
replicativo.

Patogenia das infeces vricas

Protenas virais podem tambm interferir


com mecanismos celulares de modicao, localizao e maturao de protenas, podendo resultar
em citopatologia. As glicoprotenas do envelope,
em especial, so alvos de extensivas modicaes
ps-traduo, maturao e transporte por mecanismos celulares, e a sua abundncia pode interferir com os processos celulares de processamento de protenas endgenas.
A alterao da estrutura de membranas celulares, resultando em fuso e/ou alterao da
permeabilidade, tambm so efeitos da replicao de vrios vrus. Diversos vrus com envelope
possuem glicoprotenas que so necessrias para
promover a fuso do envelope com a membrana celular, permitindo a sua penetrao na clula hospedeira. A expresso dessas protenas em
clulas infectadas pode resultar em fuso entre
clulas vizinhas, resultando na formao de massas citoplasmticas multinucleadas denominadas
sinccios. A fuso entre clulas vizinhas tambm
possvel pela ao direta das glicoprotenas virais no processo de penetrao. A fuso celular
uma forma de citopatologia produzida por vrus,
mas tambm pode ser considerada uma forma de
disseminao do vrus entre clulas.
Os produtos de alguns vrus produzem um
aumento na permeabilidade da membrana plasmtica da clula infectada. Em decorrncia disso,
o aumento da concentrao de ons sdio na clula pode favorecer a traduo de mRNA virais.
Ento, para alguns vrus, o aumento da permeabilidade da membrana pode favorecer a sntese
preferencial de protenas virais.
A infeco por diversos vrus pode provocar a desorganizao ou mesmo a ruptura do citoesqueleto da clula hospedeira. Uma reduo
na quantidade de lamentos de actina tem sido
observada na infeco por vrios vrus, incluindo
o vrus do herpes simplex humano (HSV), vrus
da cinomose (CDV) e VSV, entre outros. As conseqncias da desorganizao do citoesqueleto
no so bem claras, mas provavelmente possuem
relao com algumas alteraes morfolgicas observadas em clulas infectadas. provvel que as
alteraes na estrutura e funo do citoesqueleto
sejam efeitos secundrios da replicao viral e da
interferncia do vrus com outras funes celulares.

195

A replicao de alguns vrus resulta na formao de estruturas com morfologia mais ou menos denidas no citoplasma ou no ncleo da clula infectada. Essas estruturas so denominadas
genericamente corpsculos de incluso e so
formadas pelo acmulo de complexos de transcrio e replicao, produtos intermedirios da
replicao, protenas estruturais e no-estruturais, capsdeos, nucleocapsdeos e vrions em determinados locais da clula. A localizao dos corpsculos de incluso reete o local de replicao
do respectivo vrus. Os corpsculos de Negri so
formados no citoplasma de neurnios infectados
pelo vrus da raiva; os corpsculos citoplasmticos de Lenz so caractersticos da infeco pelo
CDV. A replicao dos reovrus acompanhada
da formao de grandes estruturas citoplasmticas denominadas virossomos, que podem ocupar
grande parte do citoplasma. Os virossomos so
os locais de acmulo de cidos nuclicos e protenas virais e onde ocorrem os mecanismos de
replicao do genoma e montagem das partculas
vricas. A replicao dos herpesvrus neuropatognicos (herpesvrus bovino tipo 5 [BoHV-5],
vrus da doena de Aujeszky [PRV]) resulta na
formao de corpsculos nucleares em neurnios
do sistema nervoso central (SNC). A presena de
corpsculos de incluso tem sido utilizada no
diagnstico histopatolgico de algumas viroses,
pela facilidade de observao e pelas suas caractersticas tintoriais (podem ser basoflicos ou acidoflicos).
Pelo exposto, ca evidente que as interaes
entre os produtos virais e os componentes celulares, durante o ciclo replicativo dos vrus, so
extremamente complexas e podem resultar em
uma variedade de alteraes da siologia celular.
Grande parte dessas alteraes foi investigada e
caracterizada em clulas de cultivo. Conseqentemente as informaes provenientes desses estudos devem ser analisadas com cautela. No obstante, possvel que grande parte das alteraes
observadas in vitro ocorra tambm in vivo. provvel tambm que as interaes entre os vrus e
as clulas hospedeiras sejam ainda mais complexas no animal, pela participao de componentes
orgnicos ausentes nos frascos de cultivo. Nesse
sentido, os componentes celulares e humorais do
sistema imunolgico (citocinas e anticorpos) de

196

outros sistemas de defesa e tambm do sistema


endcrino do hospedeiro certamente possuem
participao importante nas interaes dos hospedeiros com esses agentes invasores. Exemplos
de protenas virais que interferem com mecanismos especcos das clulas hospedeiras esto
apresentados na Tabela 8.1.

2.2 Efeitos da replicao viral nas


clulas hospedeiras
A replicao dos vrus nas clulas hospedeiras freqentemente resulta em alteraes na siologia celular, tanto pela interferncia com processos metablicos e estruturas celulares quanto pela
ao txica de produtos da replicao viral. Em
particular, a interferncia com a sntese de macromolculas pode afetar negativamente a siologia
celular e, freqentemente, resulta em patologia.
Essas alteraes podem ser detectadas visual ou
bioquimicamente e tem sido mais caracterizadas
em clulas de cultivo. As alteraes morfolgicas,
associadas com a replicao de vrus em clulas
de cultivo, so denominadas coletivamente de
efeito citoptico ou citopatognico (ECP).
Como cada grupo de vrus pode afetar funes e mecanismos celulares diferentes, o tipo de
ECP produzido tambm caracterstico de cada
espcie ou grupo de vrus. A patologia mais extrema a lise ou destruio celular, e os vrus que
a induzem so denominados citolticos. A lise
celular caracterizada pela morte e desintegrao celular, freqentemente devida absoro
excessiva de lquido extracelular. Alguns vrus
produzem alteraes morfolgicas, como citomegalia ou arredondamento celular. A citomegalia
pode ser devida absoro de lquido, enquanto
o arredondamento geralmente conseqncia
de alteraes na estrutura e funo das bras do
citoesqueleto. Alteraes no citoesqueleto tambm resultam em desprendimento das clulas do
substrato, efeito que pode ocorrer em estgios
avanados de patologia celular, por mecanismos
diversos. Os vrus que possuem glicoprotenas
fusognicas no envelope promovem fuso celular, com a formao de clulas gigantes multinuleadas, denominadas sinccios. Clulas fusiona-

Captulo 8

das possuem vida curta e eventualmente sofrem


lise. A formao de vacolos outro tipo de ECP
produzido por vrus que replicam no citoplasma.
Corpsculos de incluso citoplasmticos ou nucleares tambm so formados como resultado da replicao de alguns vrus e podem ser observados
sob microscopia tica.
Embora a lise celular seja o mecanismo mais
atraente e fcil para explicar as patologias induzidas pelos vrus nos seus hospedeiros, certamente
no se constitui no nico mecanismo responsvel
pela produo das doenas. Vrus no citolticos
tambm podem causar patologias severas e at
a morte do hospedeiro. Nesse sentido, provvel que outras formas de citopatologia que no
necessariamente a lise celular tambm possam
ser responsveis por patologias observadas em
animais doentes. Acredita-se que grande parte
das patologias observadas em doenas causadas
por vrus no-citopticos sejam conseqncias da
resposta imune do hospedeiro.

2.3 Apoptose por vrus


Apoptose ou morte celular programada
um processo bioqumico que funciona como uma
cascata que leva a morte ou suicdio celular.
Esse mecanismo ocorre naturalmente durante o
desenvolvimento embrionrio e fetal, manuteno da imunidade e da homeostase em organismos multinucleados. Muitos vrus interferem
no processo de apoptose da clula hospedeira,
alterando reaes e componentes-chave desse
processo. Produtos de diferentes vrus promovem ou inibem a apoptose atravs de diversos
mecanismos de ao. bvio que os vrus se beneciam ao evitar a apoptose, pois isso permite a
sobrevivncia da clula at que o ciclo replicativo
seja concludo. Porm, em alguns casos, a ocorrncia de apoptose vantajosa para o vrus. Em
tais casos, a formao de corpos apoptticos, contendo vrus, resulta em fagocitose dessas estruturas e liberao do vrus no uido extracelular, o
que favorece a sua disseminao.
Os adenovrus, vrus da peste suna africana
(ASFV), vrus da anemia infecciosa das galinhas
(CAV) e os vrus da peste suna clssica (CSFV)

197

Patogenia das infeces vricas

so exemplos de vrus que produzem protenas


indutoras da apoptose. Protenas que inibem a
apoptose tambm so produzidas pelos adenovrus e ASFV e pelos vrus da vaccinia, herpesvrus bovino tipo-4 (BoHV-4), herpesvrus eqino
(EHV), vrus da doena de Marek, dentre outros.

3 Patogenia em nvel de hospedeiro


O resultado de uma infeco vrica de hospedeiro depende de vrios fatores, a saber: a) capacidade de o vrus penetrar em um hospedeiro
susceptvel pela via adequada; b) realizar uma
replicao primria em tecidos prximos ao local
de entrada; c) escapar dos mecanismos naturais
de defesa do organismo; d) disseminar-se para os
tecidos e rgos-alvo; e) replicar ecientemente
nesses tecidos e f) produzir ou no injria tecidual (provocar patologia). Embora os vrus apresentem uma diversidade muito grande e participem
de interaes de especicidade e complexidade
diferentes com os seus hospedeiros, algumas etapas da patogenia parecem ser comuns maioria
das infeces vricas. A seguir, sero abordadas
essas etapas.

3.1 Penetrao e replicao primria


O estabelecimento da infeco no hospedeiro depende da penetrao e replicao do vrus
em clulas prximas aos locais de entrada. Essa
replicao denominada primria necessria
para a amplicao do agente, de modo a superar as barreiras impostas pela resposta inata do
hospedeiro. A replicao primria geralmente
ocorre no prprio local de penetrao, em tecidos
prximos ou nos linfonodos regionais. Em geral,
os vrus podem utilizar mais de uma via para penetrar nos seus hospedeiros. As principais vias de
penetrao de vrus nos animais sero apresentadas a seguir e esto ilustradas na Figura 8.2.

3.1.1 Pele e mucosas superficiais


A pele se constitui em uma importante barreira para a penetrao de vrus, pois a sua camada externa formada por clulas mortas e
no suporta a replicao viral. Alm disso, a sua
superfcie seca, levemente cida e possui uma
ora bacteriana permanente/residente que atua
como uma barreira natural. No entanto, solu-

Mucosa
conjuntival
Pele

Mucosa
respiratria

Mucosa
orofarngea

Mucosa
urogenital
Mucosa
intestinal

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.2. Vias de penetrao de vrus em seus hospedeiros.

198

Captulo 8

es de continuidade mesmo imperceptveis


provocadas por abrases, pequenas incises ou
puncturas podem permitir a penetrao e instalao de vrios vrus. Dentre os vrus que podem
penetrar atravs da pele semi-ntegra incluem-se
os papilomavrus, alguns poxvrus e herpesvrus
(Tabela 8.2). Esses vrus so geralmente transmitidos por contato direto ou indireto, ou tambm
mecanicamente atravs de insetos. Se a penetrao for supercial, a replicao geralmente limitada ao stio de penetrao, pois a epiderme
desprovida de vasos sangneos e linfticos que
poderiam servir para disseminar a infeco. No
entanto, a infeco de camadas mais profundas
da derme pode levar disseminao sangnea,
pois essa camada altamente vascularizada (Figura 8.3A). Em especial, os vrus que so transmitidos por insetos hematfagos (alfavrus, avi-

vrus, buniavrus, alguns rabdovrus e orbivrus)


ou por procedimentos iatrognicos (retrovrus e
hepadnavrus) podem alcanar as camadas mais
internas e encontrar condies propcias para a
sua replicao primria. A abundncia de vasos
sangneos e linfticos na derme e em camadas
mais internas oferece condies para a disseminao desses agentes a partir do stio primrio de
replicao. Aps a replicao primria no tecido
drmico ou subdrmico, os vrions podem se disseminar para os linfonodos regionais no interior
de clulas fagocticas ou livres na linfa e/ou sangue. Os herpesvrus invadem terminaes nervosas localizadas nesses locais e so transportados
ao longo dos axnios ou dentritos at o corpo dos
neurnios. O transporte dos herpesvrus por bras nervosas ser abordado na seo 3.2.3.

Tabela 8.2. Vrus animais que penetram no hospedeiro atravs da pele ou de superfcies mucosas
Via de penetrao

Vrus

Pequenas leses (puncturas,


abrases)

Papilomavrus de vrias espcies;


Herpesvrus de vrias espcies;
Poxvrus de bovinos, sunos e ovinos; vrus da
estomatite papular bovina; poxvrus avirios;
Vrus da doena vesicular de sunos;
Vrus da estomatite vesicular (VSV).

Picada de insetos (transmisso


mecnica)

Vrios poxvrus (mixomavrus, poxvrus suno, poxvrus


avirios);
Alguns retrovrus (vrus da anemia infecciosa eqina [EIAV],
vrus da leucose bovina [BLV]);
VSV.

Picada de insetos (transmisso


biolgica)

Vrus da peste suna africana (ASFV);


Vrus da lngua azul (BTV);
VSV, outros rabdovrus;
Vrus da febre do vale Rift (RVFV), outros buniavrus;
Todos os alfavrus;
Vrus do gnero flavivrus.

Mordeduras de vertebrados

Vrus da imunodeficincia felina (FIV);


Vrus da raiva (RabV);
Arenavrus (entre roedores);
Herpesvrus smio B.

Transmisso iatrognica

Papilomavrus de vrias espcies animais;


Retrovrus (BLV, EIAV);
Vrus da diarria viral bovina (BVDV), vrus da peste suna
clssica (CSFV).

Contato com a conjuntiva

Herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvrus eqino 1(EHV-1);


Adenovrus canino tipos 1 e 2 (CAdV-1, CAdV-2).

Fonte: adaptada de Murphy et al. (1999).

199

Patogenia das infeces vricas

Aparentemente, as membranas mucosas superciais poderiam se constituir em uma barreira


menos eciente para impedir a penetrao viral.
Ainda assim, so recobertas por uma camada de
muco que, pela sua natureza viscosa e pela presena de IgA, pode dicultar a penetrao dos
vrus. Os herpesvrus parecem ser capazes de
penetrar em mucosas intactas para iniciar a infeco, embora a ocorrncia de leses certamente
favorea a instalao da infeco.
Determinados vrus so introduzidos atravs da pele diretamente no tecido subcutneo
ou mesmo no tecido muscular. O vrus da raiva
inoculado profundamente pela mordedura de
animais infectados; os arenavrus tambm so
transmitidos entre os roedores silvestres atravs
de mordidas; o herpesvrus smio B e o vrus da
imunodecincia felina (FIV) tambm podem ser
transmitidos por mordeduras. Essa inoculao
profunda facilita ainda mais a replicao primria e o estabelecimento da infeco.

Alguns vrus penetram no organismo pela


mucosa conjuntival e podem estar associados
com conjuntivite ou com infeces sistmicas. Os
adenovrus caninos tipos 1 e 2 (CAdV-1; CAdV2) podem penetrar por essa via; o herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) pode causar conjuntivite
pela infeco direta da conjuntiva ou por contaminao a partir da cavidade nasal.
Os principais vrus de animais que penetram
nos seus hospedeiros atravs da pele e mucosas
superciais esto apresentados na Tabela 8.2.

3.1.2 Trato respiratrio


A mucosa do trato respiratrio provavelmente se constitui na principal via de penetrao
de vrus, por causa de sua grande superfcie e
grande quantidade de patgenos potencialmente
presentes no ar inspirado. No obstante, o sistema respiratrio apresenta barreiras que limitam
ou reduzem as chances dos vrus que penetram

Produzem doena sistmica

Produzem doena respiratria


ou localizada

Tabela 8.3. Principais vrus que penetram pelo trato respiratrio para iniciar a infeco do hospedeiro
Famlia

Vrus

Herpesviridae

Herpesvrus de vrias espcies.

Adenoviridae

Adenovrus de vrias espcies.

Paramyxoviridae

Vrus da parainfluenza (PIVs) e vrus


respiratrios sinciciais (RSVs).

Orthomyxoviridae

Vrus da influenza suna e eqina.

Coronaviridae

Vrus da bronquite infecciosa das


galinhas (IBDV).

Picornaviridae

Vrus da febre aftosa (FMDV);


rinovrus de vrias espcies.

Caliciviridae

Calicivrus felino (FCV).

Herpesviridae

Vrus da doena de Aujeszky (PRV), vrus da


doena de Marek, vrus da febre catarral
maligna (MCFV).

Paramyxoviridae

Vrus da cinomose (CDV), vrus da peste


bovina (rinderpest).

Orthomyxoviridae

Vrus da influenza aviria (AIV).

Flaviviridae

Vrus da diarria viral bovina (BVDV)*; vrus


da peste suna clssica (CSFV).

* O BVDV pode tambm causar doena respiratria.


Fonte: adaptada de Murphy et al. (1999).

200

pelo ar inspirado conseguirem atingir e penetrar


nas clulas epiteliais. As vias areas superiores e
inferiores contm um epitlio ciliado recoberto
com muco, cuja funo reter e, eventualmente,
expulsar as partculas inaladas. Alm de reter as
partculas vricas, o muco pode conter IgA especca, que pode neutralizar a infectividade dos vrus. Os alvolos so desprovidos dessas defesas,
porm possuem macrfagos residentes encarregados de fagocitar e digerir partculas exgenas.
Alm disso, a temperatura nas vias areas superiores aproximadamente 3 a 5C inferior temperatura corporal, o que pode restringir a replicao de alguns vrus. Por isso, os vrus incapazes
de replicar temperatura corporal (rinovrus),
replicam somente no trato respiratrio superior.
J os vrus capazes de replicar sob temperatura
corporal, podem causar infeco no trato respiratrio inferior.
Os vrus geralmente penetram no trato respiratrio atravs de aerossis produzidos por expectoraes (tosse e espirro) ou pelo contato nasal
com fmites contaminados. O hbito investigativo olfatrio de vrias espcies animais se constitui
em um fator de risco que favorece as infeces da
mucosa nasal e do focinho. A maioria dos vrus
que penetra por essa via realiza a replicao primria em clulas epiteliais das vias respiratrias;
alguns podem replicar em macrfagos livres no
lmen respiratrio ou em espaos subepiteliais.
A replicao dos vrus que penetram pelas vias
areas pode car restrita ao epitlio respiratrio

Captulo 8

ou se disseminar para outros tecidos e rgos. Ou


seja, os vrus que penetram pelo trato respiratrio podem produzir infeces localizadas ou disseminadas (Tabela 8.3). Os tecidos subjacentes ao
epitlio respiratrio possuem vasos linfticos e
sangneos que facilitam a disseminao dos vrus at os rgos linfides secundrios e da para
o sangue (Figura 8.3B).

3.1.3 Orofaringe e trato digestivo


A mucosa do trato digestivo, desde a orofaringe at os segmentos nais do intestino, pode
se constituir em local de penetrao para vrios
vrus, que produzem tanto infeces localizadas
como sistmicas. Os vrus adquiridos pela ingesto de alimentos ou gua contaminada, ou pelo
contato oral com fmites, podem ser deglutidos
e alcanar o estmago e intestinos; ou podem
infectar as clulas superciais da orofaringe. Os
vrus que replicam na orofaringe podem ser, posteriormente, deglutidos ou podem se disseminar
sistemicamente pela via hematgena. Os rotavrus, coronavrus, calicivrus e muitos enterovrus produzem infeces localizadas no intestino
delgado; o parvovrus canino penetra na mucosa da orofaringe e, por via hematgena, atinge o
epitlio intestinal, onde replica e provoca distrbios celulares que resultam em doena; o vrus
da diarria viral bovina (BVDV) pode penetrar
na mucosa da orofaringe e se disseminar sistemicamente. Alguns vrus podem penetrar atravs

201

Patogenia das infeces vricas

da mucosa intestinal e causar doena sistmica,


como alguns adenovrus de aves e de mamferos
e alguns enterovrus.
O trato digestivo apresenta vrias barreiras que restringem ou dicultam a infeco por
determinados vrus. O pH cido do estmago,
a alcalinidade do intestino delgado, as enzimas
digestivas presentes na saliva e no suco pancretico, e as enzimas lipolticas presentes na bile
restringem o nmero de vrus que capaz de infectar o hospedeiro por essa via.
Como regra, os vrus no-envelopados so
mais resistentes ao pH cido do estmago. Excees incluem os rinovrus e o FMDV (picornavrus), que so lbeis pH cido e no resistem
ao pH do estmago. Para estabelecer a infeco,
portanto, esses vrus devem penetrar na mucosa orofarngea ou nasal. Embora sejam sensveis
ao pH baixo e ao da bile, os coronavrus de
vrias espcies animais resistem s condies do
estmago e intestino e podem estabelecer infeces intestinais. Em geral, os vrus que causam
infeces intestinais, como os rotavrus, calicivrus e enterovrus, so resistentes ao pH baixo e
ao da bile e, por isso, podem penetrar a partir
do lmen intestinal.
As enzimas proteolticas presentes no lmen intestinal podem tambm favorecer a infeco por alguns vrus, pela clivagem e ativao de
protenas da superfcie dos vrions que so envolvidas na penetrao do vrus na clula hospedeira. Como exemplos, citam-se: a tripsina, pancreatina e elastina que aumentam a infectividade dos
rotavrus; e outras enzimas que ativam os processos de penetrao dos reovrus e de alguns coronavrus. Enzimas presentes em secrees respiratrias tambm tm sido envolvidas na ativao
de protenas de fuso dos paramixovrus.
Os vrus associados com gastrenterite podem infectar uma variedade de clulas do trato
gastrintestinal. Os adenovrus, rotavrus, calicivrus e coronavrus infectam predominantemente
entercitos maduros quiescentes. Outros vrus
possuem tropismo por clulas das criptas que
esto em diviso (parvovrus) ou por clulas epiteliais especializadas, como as clulas M (poliovrus e reovrus). As clulas M podem tambm
capturar vrions no lmen intestinal e transport-

los para clulas mononucleares adjacentes, onde


ocorrer a replicao primria (Figura 8.3C).
Dentre os vrus animais que penetram pelo
trato digestivo e esto associados com diarria
esto os parvovrus (canino e felino), os rotavrus de vrias espcies, os coronavrus entricos,
os astrovrus e calicivrus. Outros vrus penetram
pelo trato digestivo e esto associados com doena disseminada, geralmente sem diarria, como
os adenovrus de vrias espcies, os enterovrus,
o vrus do exantema vesicular de sunos, entre
outros. Estes vrus utilizam o epitlio intestinal
para a replicao primria e amplicao, de
onde ganham acesso ao sistema linftico e sangneo (Figura 8.3C).

3.1.4 Mucosa urogenital


A mucosa do trato genital da fmea pode
servir de local de penetrao tanto para vrus
sistmicos, que so excretados no smen, como
para vrus que produzem infeces localizadas
no trato genital masculino. No primeiro caso, a
transmisso pode ser pela monta natural ou pela
inseminao articial, j que os vrus encontram
condies ideais de sobrevivncia em smen industrializado. Os herpesvrus de vrias espcies
animais podem ser transmitidos pelo smen e/ou
pela cpula; o vrus da sndrome respiratria e
reprodutiva dos sunos (PRRSV) foi amplamente
disseminado pela inseminao articial; a monta
natural uma importante forma de transmisso
do vrus da arterite viral eqina (EAV). Os papilomavrus que causam leses genitais tambm
podem ser transmitidos pela cpula, por causa
do contato entre as mucosas. Embora o BoHV-1
possa ser excretado pelo smen durante a infeco aguda respiratria, a transmisso venrea
desse vrus est mais freqentemente associada
com a infeco genital (balanopostite).
Os tecidos submucosos so altamente irrigados e fornecem condies propcias para a
disseminao dos vrus pela linfa ou pelo sangue
para os linfonodos regionais ou para tecidos mais
distantes. As terminaes nervosas, localizadas
na submucosa, constituem-se em alvos para a pe-

202

netrao pelos herpesvrus, que so, ento, transportados at gnglios nervosos regionais.
Embora com menor freqncia, fmeas que
desenvolvem infeces genitais tambm podem
transmitir o vrus para o macho durante a cpula, o que favorece a disseminao do agente, pois
o macho infectado pode transmitir o agente para
outras fmeas.

3.2 Infeces localizadas versus


infeces disseminadas (ou sistmicas)
Os padres de distribuio e envolvimento
de diferentes rgos e tecidos variam amplamente com os vrus e esto intimamente associados
com a biologia do agente, sendo dependentes de
suas interaes com o hospedeiro. Alguns vrus
produzem infeces localizadas, geralmente limitadas s proximidades dos stios de penetrao
e replicao primria. Esse padro de infeco
caracterstico dos vrus respiratrios (rinovrus,
vrus da inuenza e parainuenza), gastrintestinais (coronavrus e rotavrus) e de alguns vrus
que infectam a derme e epiderme (papilomavrus, alguns poxvrus, vrus da mamilite herptica
[BoHV-2]). Essas infeces esto geralmente limitadas ao epitlio, mas a penetrao e envolvimento de tecidos subjacentes e disseminao sistmica podem ocasionalmente ocorrer. As infeces
que se restringem aos stios de replicao primria e suas proximidades so ditas localizadas.
Outros vrus so capazes de se disseminar
a longas distncias pelo sangue ou pela linfa e
produzir infeces em rgos especcos ou infeces generalizadas. Exemplos incluem o CDV,
os parvovrus canino (CPV) e felino (FPLV), o
BVDV, os retrovrus, entre outros. As infeces
que se estendem alm dos stios de replicao
primria so chamadas de disseminadas; e as que
atingem vrios rgos ou sistemas so denominadas sistmicas ou generalizadas.

3.2.1 Disseminao local


Aps a replicao primria, muitos vrus se
disseminam localmente pela transmisso entre
clulas vizinhas. Essa forma de transmisso, no

Captulo 8

entanto, no permite uma disseminao a longas


distncias e essas infeces so geralmente controladas pela resposta imune do hospedeiro. Os
vrus que penetram na mucosa respiratria ou digestiva e que so liberados pela superfcie apical
de clulas epiteliais podem ser transportados por
uidos ou pelo muco e se disseminar rapidamente pelo lmen do rgo. A replicao de muitos
desses vrus ca restrita ao epitlio, com nenhuma ou pouca invaso dos tecidos subjacentes. Paralelamente, os vrions podem ser transportados
at os linfonodos regionais, livres na linfa ou no
interior de clulas fagocticas. Esta geralmente
a primeira etapa na disseminao das infeces
sistmicas. Em geral, os vrus que so liberados
apenas na superfcie apical das clulas epiteliais
tendem a car restritos localmente, enquanto
aqueles que so liberados tambm pela superfcie basolateral so mais provveis de produzirem
infeces sistmicas.

3.2.2 Disseminao hematgena


O transporte pelo sangue oferece aos vrus
a oportunidade de atingir virtualmente todos os
rgos e tecidos em poucos minutos a partir dos
stios de replicao primria. Os vrions podem
penetrar no sangue diretamente atravs da parede capilar, aps a infeco de clulas endoteliais
ou pela inoculao direta por insetos ou por instrumentos contaminados. A disseminao hematgena se inicia quando os vrions produzidos
nos stios primrios de replicao so liberados
no lquido extracelular e drenados pelo sistema
linftico, cujos capilares so mais permeveis do
que os capilares sangneos. Os vrions veiculados pela linfa eventualmente ganham acesso
corrente sangnea, seja como partculas livres
no plasma, seja no interior de linfcitos ou moncitos/macrfagos infectados durante a sua
passagem pelos linfonodos regionais. De fato,
a patogenia de vrias infeces vricas est intimamente associada com a infeco de clulas do
sistema imunolgico, que ocorre devido ao seu
contato com os vrions nos rgos linfides perifricos. Uma vez no sangue, os vrions se disseminam rapidamente pelo organismo. O trajeto

203

Patogenia das infeces vricas

Superfcie corporal

Seios linfticos
revestidos por
macrfagos
Capilar
linftico

Capilar
sangneo

Histicito

Tecido
conjuntivo

Tecido
linfide

Veia

Vaso
linftico
aferente

Vaso
linftico
eferente

Ducto
torcico

Linfonodo

Fonte: adaptada de Mims e White (1984).

Figura 8.4. Trajeto dos vrus que penetram pela pele ou mucosas superficiais para atingir o sangue e se distribuir
sistemicamente.

utilizado pelos vrus que penetram no organismo


atravs de superfcies cutneas ou mucosas para
atingir a corrente sangnea est ilustrado na Figura 8.4.
A presena de vrus no sangue denominada viremia e, dependendo da origem do vrus,
pode ser classicada em passiva ou ativa. A viremia passiva resulta da introduo do vrus diretamente no sangue, sem a prvia replicao em
tecidos. Esta introduo pode resultar de inoculao direta por insetos hematfagos, por transfuso sangnea ou por outras formas de inoculao de sangue. Essas viremias so geralmente
transitrias e no duram mais de 12-24 h, mas
podem ser de tal magnitude a ponto de provocar
a infeco macia de alguns rgos. As viremias
ativas resultam da replicao viral em tecidos e
rgos do hospedeiro e geralmente atingem uma
maior magnitude e durao. Os vrus presentes
no sangue podem ter vrias origens, tais como: a)
partculas vricas presentes nos tecidos prximos
aos locais de penetrao podem ser capturadas
pelo sistema linftico e ter acesso ao sangue; b)
vrios vrus replicam em clulas localizadas nos
linfonodos, podendo ser liberados e ter acesso ao
sangue; c) alguns vrus so capazes de replicar

em clulas endoteliais e so liberados diretamente na circulao; d) vrios vrus replicam em clulas mononucleares do sistema linforreticular
(moncitos/macrfagos; linfcitos) e podem ser
liberados no sangue.
Em vrias infeces vricas, duas etapas de
viremia ativa podem ser detectadas. A viremia primria resulta da replicao viral nos stios iniciais,
geralmente atinge baixa magnitude, mas permite
a disseminao do vrus aos rgos secundrios
de replicao, denominados rgos-alvo. A replicao viral nesses tecidos produz uma viremia secundria, caracterizada por uma presena macia
de vrus no sangue e disseminao ainda maior
da infeco. Os resultados da viremia so variveis e, freqentemente, resultam em infeco de
vrios tecidos perifricos, com resultados que dependem do tropismo, da patogenicidade e virulncia do vrus. Uma conseqncia freqente de
viremia em animais a transmisso transplacentria do vrus ao feto, podendo resultar em uma
variedade de condies que vo desde uma infeco transitria at a morte fetal, seguida de abortamento. As etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e disseminadas esto ilustradas
na Figura 8.5.

204

Infeco

Excreo

Replicao primria

Superfcie corporal

Captulo 8

Herpesvrus
Influenza
Paramixovrus
Rotavrus
Papilomavrus
Coronavrus

Pele
Mucosas
Trato respiratrio
Trato digestivo

Linfonodos

Viremia
primria

Medula
ssea

Msculo

Pele

Lumpy skin

Encfalo

CDV,
Togavrus
Flavivrus

Endotlio
vascular

Transmisso
iatrognica
ou por vetores

Glndula salivar
ou rins

Raiva (g.salivar)
Arenavrus

Trato respiratrio
(pulmes)

Arenavrus
hantavrus

Replicao secundria

Epitlio
respiratrio

rgos/tecidos

Bao

Viremia
secundria

Sangue

CDV
Rinderpest

Fgado

Replicao secundria

rgos/tecidos

Sangue

Excreo

Fonte: adaptada de Mims e White (1984).

Figura 8.5. Etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e sistmicas: papel da viremia na disseminao das
infeces.

Patogenia das infeces vricas

No sangue, os vrions podem ser transportados livres no plasma, no interior de leuccitos ou


aderidos membrana de leuccitos, eritrcitos ou
plaquetas. Os avivrus, togavrus, enterovrus e
parvovrus circulam livres no plasma e produzem a chamada viremia plasmtica. A concentrao de partculas vricas no sangue depende de
um equilbrio entre a sua produo nos tecidos
infectados e a taxa de remoo ou inativao no
sangue. A tarefa de remover vrions circulantes
cabe s clulas fagocticas do sistema retculo-endotelial, principalmente s clulas de Kpfer no
fgado e, em menor proporo, aos macrfagos
dos pulmes, bao e linfonodos.
Os vrus que circulam livres no plasma podem entrar em contato e infectar uma grande
variedade de clulas, mas dois tipos celulares
desempenham um papel importante para a continuidade da infeco: as clulas endoteliais e os
macrfagos adjacentes aos vasos. As interaes
entre os vrions circulantes e as clulas de Kpfer
no fgado podem resultar em: a) internalizao e
inativao dos vrions; b) internalizao, transporte transcitoplasmtico e liberao dos vrions
na bile; c) infeco dessas clulas e liberao da
prognie viral de volta ao sangue, incrementando a viremia; d) infeco celular e liberao dos
vrions recm-produzidos pela superfcie basal,
resultando na infeco macia de hepatcitos. A
infeco das clulas endoteliais pode favorecer a
invaso viral nos tecidos a partir do sangue.
Em etapas mais avanadas da infeco, os
anticorpos produzidos so capazes de se ligar e
neutralizar as partculas vricas livres no plasma
sangneo. A ligao dos anticorpos aos vrions
tambm facilita a fagocitose dos complexos anticorpo-vrions por macrfagos adjacentes aos
vasos sangneos teciduais. Esses macrfagos se
ligam aos complexos imunes por meio de receptores para a poro Fc das imunoglobulinas. A
maioria das viremias plasmticas possui durao
limitada e o seu trmino coincide com o aparecimento de anticorpos neutralizantes no soro.
Vrios vrus replicam em clulas sangneas,
particularmente moncitos e linfcitos B e T, e a
sua presena no sangue est predominantemente
associada com essas clulas. As viremias associadas a clulas apresentam algumas caractersticas

205

que as distinguem das viremias plasmticas, tais


como: a) no interior das clulas os vrus esto protegidos dos anticorpos neutralizantes e podem se
propagar a grandes distncias; b) os ttulos virais
so geralmente baixos; c) o isolamento do vrus
do sangue geralmente difcil e pode requerer
o co-cultivo de leuccitos com clulas de cultivo.
Essa diculdade de isolamento pode ser devida
aos baixos nveis de replicao do vrus e/ou
presena de anticorpos neutralizantes; d) em algumas infeces, a viremia persiste por toda a
vida do animal e no termina com o aparecimento dos anticorpos neutralizantes. Exemplos desse tipo de viremia so encontrados nas infeces
por retrovrus animais, como o FIV, o vrus maedi-visna (MVV), o vrus da leucose bovina (BLV)
e o vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV).
Em algumas dessas infeces, a contnua evoluo gentica da populao viral produz variantes
que escapam da neutralizao por anticorpos e
que podem ser isolados do plasma. Esses vrus,
no entanto, parecem representar uma pequena
parcela do total de vrus que produzido e que
neutralizado e capturado nos complexos imunes. O vrus da lngua azul (BTV) produz viremia
persistente e os vrions encontram-se aderidos
membrana dos eritrcitos. Embora mais estudada em infeces persistentes, a viremia associada a clulas tambm observada em infeces
agudas, como a infeco de ces pelo CDV, entre
outras. O BVDV pode ser encontrado em linfcitos e moncitos, mas viremia plasmtica tambm
pode ser detectada em animais persistentemente
infectados. Esses animais so imunotolerantes a
antgenos virais e, por isso, no produzem anticorpos contra o vrus. Com isso, o vrus infeccioso pode ser continuamente isolado do plasma
desses animais.

3.2.1.1 Penetrao dos vrus nos tecidos


Os vrus que se disseminam pela via hematgena devem ultrapassar a parede vascular para
invadir e replicar nos tecidos e rgos-alvo. Embora seja uma etapa fundamental na patogenia
das infeces por virtualmente todos os vrus patognicos que produzem viremia, poucos detalhes so conhecidos sobre a penetrao dos vrus

206

nos tecidos. O mecanismo de penetrao utilizado pelos vrus depende da sua biologia e tambm
da estrutura e relaes do endotlio vascular, que
varia muito entre os diferentes tecidos. Os possveis mecanismos utilizados, j demonstrados
para alguns vrus, esto ilustrados na Figura 8.6 e
descritos a seguir:
1) Penetrao passiva pelo espao entre as
clulas endoteliais. Esse mecanismo possvel
em alguns endotlios que apresentam fenestras
entre as clulas endoteliais, como o plexo coride
no SNC. Aps atravessar esta barreira, os vrus
podem infectar as clulas epiteliais do plexo coride e ganhar acesso ao uido crebro-espinhal
e, assim, disseminar-se pelos espaos ocupados
por esse uido. Exemplos de vrus que provavelmente utilizam essa via de invaso incluem
o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV) e o
retrovrus (MVV). Os vasos dos tbulos renais,
pncreas, clon e leo tambm apresentam fenestras que podem servir para a penetrao dos vrus nos tecidos a partir do sangue;
2) Os vrions podem ser transportados atravs do endotlio vascular por endocitose, seguida de transporte vesicular intracitoplasmtico e
exocitose na face oposta da clula endotelial. Para
que essas duas formas de invaso possam ocorrer, a concentrao de vrions no sangue deve ser
alta e contnua, e o uxo sangneo no local deve
ser lento, para permitir o contato e aderncia das
partculas vricas ao endotlio e/ou penetrao
pelos espaos interendoteliais;
3) Alguns vrus podem infectar as clulas
endoteliais e/ou clulas adjacentes e completar o
seu ciclo replicativo nessas clulas. Assim, a sua
prognie pode ser liberada atravs da superfcie
basal ou basolateral dessas clulas e infectar clulas teciduais subjacentes. Essa forma de invaso
tecidual j foi demonstrada para os picornavrus,
retrovrus, alfavrus e parvovrus. As clulas de
Kpfer, que esto localizadas entre as clulas
endoteliais dos sinusides hepticos, servem de
porta de entrada para vrus que so veiculados
no sangue. Os vrus podem ser transportados
passivamente ou replicarem ativamente nessas
clulas;
4) Os vrus que produzem viremia associada
a clulas, em moncitos ou linfcitos, podem ser
transportados atravs da parede vascular no in-

Captulo 8

terior das clulas infectadas. As clulas mononucleares do sangue esto freqentemente atravessando a parede vascular e penetrando nos tecidos
em resposta a estmulos inamatrios e podem
funcionar como verdadeiros cavalos de Tria,
transportando os vrus para os tecidos. O movimento de clulas atravs do endotlio em direo
aos tecidos denominado diapedese. Essa forma
de invaso tem sido demonstrada para o CDV,
vrus da febre amarela (YFV) e tambm para explicar a penetrao do vrus da imunodecincia
humana adquirida (HIV) no encfalo.

2
1
3

Lmen
do vaso

Tecido

Figura 8.6. Mecanismos de penetrao de vrus nos


tecidos a partir do sangue. 1) Penetrao pelos espaos
existentes entre as clulas endoteliais; 2) Transporte
ativo atravs das clulas endoteliais; 3) Infeco das
clulas endoteliais com posterior egresso da prognie
viral na face oposta do endotlio; 4) Transporte atravs
do endotlio no interior de moncitos/linfcitos.

3.2.1.2 Infeco celular mediada por


anticorpos (antibody-dependent enhancement
of viral infection, ADE)
A ADE um mecanismo utilizado por alguns vrus para penetrar produtivamente e replicar em clulas que expressam receptores para a

Patogenia das infeces vricas

poro Fc das imunoglobulinas, principalmente


os moncitos e macrfagos. Nessas clulas, os
receptores de Fc so importantes para a captura
e inativao de complexos imunes formados nos
uidos e tecidos corporais. O fenmeno de ADE
ocorre quando os vrions so recobertos por anticorpos sem atividade neutralizante ou quando
os nveis de anticorpos especcos so baixos.
Assim, a ligao dos anticorpos no neutraliza
a infectividade dos vrions. No entanto, as clulas que expressam receptores para a regio Fc se
ligam aos complexos anticorpos-vrions atravs
da regio Fc. Essa ligao seguida pela internalizao dos complexos nas clulas, aps a qual
os vrions podem ser liberados no citoplasma e
iniciar a replicao. Ou seja, alm de no neutralizar a infectividade dos vrions, os anticorpos auxiliam a sua penetrao nas clulas que possuem
receptores de Fc. Esse mecanismo somente ocorre para vrus que infectam naturalmente clulas
que expressam esses receptores. Embora a ADE
j tenha sido demonstrada para vrios vrus in vitro, o seu papel na patogenia das infeces vricas
in vivo ainda controverso e parece se restringir
a poucos vrus, como o vrus da dengue em humanos e o vrus da peritonite infecciosa felina
(FIPV, um coronavrus). Nesses casos, a presena
de anticorpos em nveis baixos contra um determinado sorotipo do vrus resulta em um aumento da severidade da doena por ocasio de uma
reinfeco com um sorotipo heterlogo. De fato,
tem sido demonstrado que a peritonite infecciosa
dos gatos mais severa em animais previamente
vacinados, reforando a possibilidade de que a
ADE contribua na patogenia da doena.

3.2.3 Disseminao nervosa


Vrios vrus se disseminam a partir dos stios de replicao primria no interior de bras
nervosas cujas terminaes se distribuem nesses
locais. Essa forma de transporte utilizada por
vrus essencialmente neuropatognicos (vrus da
raiva e vrios alfaherpesvrus) e tambm por vrus cuja invaso do sistema nervoso representa
uma circunstncia da sua replicao e disseminao hematgena (reovrus e poliovrus). Alguns
vrus, como o CDV e o vrus da artrite e encefa-

207

lite caprina (CAEV), replicam no SNC e produzem doena neurolgica, porm parecem atingir
o encfalo pela via hematgena. Dentre os vrus
animais que utilizam a via nervosa para invadir o
encfalo e causar doena neurolgica se incluem
o BoHV-5, o PRV, o EHV, o vrus da raiva, o vrus da encefalite eqina venezuelana (VEEV) e
o vrus da doena de Borna (BDV). Em modelos
animais, o VEEV parece tambm utilizar a via
hematgena para invadir o encfalo e produzir
encefalite. Embora os vrus que se disseminam
pela via nervosa e replicam no sistema nervoso
sejam denominados classicamente vrus neurotrpicos, esses agentes so capazes de infectar
uma variedade de clulas. De fato, a replicao
inicial desses vrus ocorre geralmente no epitlio
e em tecidos adjacentes aos locais de penetrao,
aps a qual os vrions penetram nas terminaes
nervosas.
O mecanismo de penetrao dos vrus em
neurnios parece ser similar ao utilizado para
iniciar a infeco de outras clulas. Aps a penetrao e desnudamento, o nucleocapsdeo
transportado passivamente ao longo dos processos neuronais (dentritos e axnios) por transporte axoplsmico rpido. O vrus pode ocasionalmente replicar nos axnios ou dendritos, mas
este um processo lento e no requerido para
a disseminao. Drogas que inibem o transporte
axonal (p. ex.: colchicina) tambm bloqueiam a
progresso dos vrus o longo dos axnios.
Essa forma de disseminao tem sido estudada com detalhes nos alfaherpesvrus, em que o
transporte neural at os gnglios sensoriais e autonmicos essencial para o estabelecimento de
infeco latente, que, por sua vez, crtica para a
manuteno desses vrus na natureza (Figura 8.7).
Aps a replicao na mucosa nasal ou genital,
os vrions penetram em terminaes dos nervos
que se distribuem nas camadas subjacentes. Os
vrions ntegros ou partculas subvirais so transportados em vesculas ao longo dos microtbulos
dos axnios ou dendritos at os corpos neuronais
que se localizam nos gnglios nervosos regionais
(gnglio trigmeo, no caso de infeco oronasal;
gnglios sacrais, no caso de infeco genital). O
transporte axonal de substncias das terminaes
nervosas em direo ao corpo neuronal deno-

208

Captulo 8

Transporte retrgrado
Latncia

Crebro
Reativao
Transporte antergrado

Mucosa nasal

Gnglio trigmeo

Figura 8.7. Disseminao neural dos alfaherpesvrus animais do epitlio respiratrio para os gnglios sensoriais
durante a infeco aguda (transporte retrgrado) e do corpo dos neurnios para o epitlio nasal durante a reativao
da infeco latente (transporte antergrado). Durante a infeco aguda (e menos freqentemente durante a
reativao), pode ocorrer transporte antergrado em direo ao SNC, com invaso e replicao viral no encfalo.

minado retrgrado. Ao alcanar os corpos neuronais, os alfaherpesvrus replicam ativamente de


forma ltica ou estabelecem infeco latente. A
infeco latente caracterizada pela presena do
genoma viral inativo no ncleo dos neurnios,
sem expresso gnica ou produo de prognie
viral. Em determinadas circunstncias, geralmente associadas com estresse, ocorre a reativao
da infeco, a retomada da expresso gnica e a
produo de partculas vricas infecciosas. Essas
partculas so transportadas de volta aos locais
de replicao primria pelas mesmas vias nervosas que haviam servido de acesso para os vrons
aos corpos neuronais. O transporte de vesculas
e substncias do corpo neuronal em direo s
terminaes nervosas denomina-se antergrado e
permite a prognie viral alcanar os tecidos perifricos, replicar e ser excretada.
Em alguns vrus (BoHV-5 e PRV), a replicao nos corpos neuronais durante a infeco
aguda (e provavelmente tambm durante a reativao da infeco latente) tambm pode ser
seguida pelo transporte antergrado da prognie
viral ao longo das bras nervosas em direo ao
encfalo. Esses vrus so capazes de se transmitir atravs de sinapses nervosas e se disseminar
ao longo de circuitos neuronais sinapticamente

ligados, resultando em invaso e replicao no


encfalo. As infeces neurolgicas acompanhadas de meningoencefalite severa so freqentes
em bovinos infectados pelo BoHV-5 e em sunos
jovens infectados pelo PRV. Alguns alfaherpesvrus que causam meningoencencefalite (BoHV-5,
por exemplo), parecem invadir o encfalo principalmente pela via olfatria que, provavelmente,
se constitui em uma via mais eciente e rpida de
transporte do que a via trigeminal. Outros (PRV
e BoHV-1) parecem atingir o sistema nervoso,
principalmente pelos ramos sensoriais do nervo
trigmeo. O transporte neural permite a propagao do vrus aos rgos-alvo sem exposio ao
sistema imunolgico.
Embora as vias hematgena e neural sejam
freqentemente consideradas como vias excludentes (alternativas) de disseminao viral, a
patogenia de alguns vrus parece envolver a participao de ambas. A invaso dos vrus das encefalites eqinas do leste (EEEV), oeste (WEEV) e
venezuelana (VEEV) no encfalo de animais infectados experimentalmente, por exemplo, j foi
demonstrado que pode ocorrer por ambas as vias,
embora uma delas provavelmente desempenhe
um papel preponderante em infeces naturais.

209

Patogenia das infeces vricas

3.3 Localizao das infeces


3.3.1 Infeces em rgos e sistemas
especficos
O padro de doena sistmica produzida
durante uma infeco depende dos rgos e tecidos-alvo do vrus, das populaes de clulas desses rgos que so infectadas e tambm do tipo
de alteraes produzidas pela replicao viral
nessas clulas. Felizmente, nenhum vrus capaz
de infectar todos os tecidos e clulas do hospedeiro. Na verdade, devido a sua dependncia de
processos bioqumicos e moleculares especcos,
a maioria dos vrus infecta um nmero limitado
de tipos celulares no hospedeiro. As Figuras 8.8
a 8.12 apresentam alguns padres peculiares de
disseminao, distribuio e localizao de infeces vricas em ces.
O termo tropismo utilizado para designar
a predileo dos vrus por determinadas clulas, tecidos ou rgos. Assim, o tropismo um
dos principais determinantes da patogenia das
infeces vricas. O tropismo celular ou tecidual
de um vrus determinado pela interao entre
mltiplos fatores virais e celulares, e pode ser inuenciado em diferentes nveis. A constituio e
siologia da membrana plasmtica (presena de
receptores, co-receptores, atividade endoctica,
espessura do citoesqueleto cortical etc.) podem
afetar as etapas iniciais da infeco (adsoro,
penetrao, desnudamento e transporte intracelular dos vrions). A presena de fatores de
transcrio, de transativadores ou inibidores e
de enzimas polimerases pode afetar a expresso
dos genes virais. Proteases e nucleases celulares
podem ativar ou inativar fatores virais. Os mecanismos celulares de transporte e distribuio de
macromolculas podem afetar a replicao, distribuio, morfognese e liberao da prognie
viral, ou seja, o tropismo de um vrus pode ser
determinado por fatores que atuam em qualquer
etapa do ciclo replicativo, desde o seu incio at a
etapa de egresso das partculas vricas.
A presena de receptores especcos na
membrana da clula hospedeira o principal fator determinante do tropismo para a maioria dos
vrus. Em geral, os receptores virais so restritos

a determinados tipos celulares ou tecidos, e apenas estes podem ser infectados naturalmente. Por
isso, a distribuio de receptores nos tecidos e rgos um determinante importante da patogenia
dos vrus. Existem vrios exemplos de mutaes
naturais ou induzidas nas protenas virais de ligao nos receptores que resultam em alterao
no tropismo e/ou na virulncia do vrus mutante. Esses exemplos ilustram a importncia das
interaes vrion-receptores como determinantes
do tropismo e da patogenia das infeces vricas.

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.8. Patogenia da parvovirose canina. O CPV


penetra pela via oronasal e replica inicialmente na
orofaringe e nas tonsilas. Aps a replicao primria, o
vrus atinge a corrente sangnea e transportado
sistemicamente pelo sangue. Os stios de predileo para
a replicao secundria so as clulas das criptas do
intestino delgado, que expressam o receptor para o vrus
e esto em multiplicao ativa. A replicao viral
acompanhada de destruio dessas clulas e reposio
deficiente das clulas absortivas das vilosidades
intestinais. Os ces com gastrenterite pelo CPV
apresentam dificuldade de absoro de nutrientes,
diarria hemorrgica e desidratao. A infeco pelo
CPV em filhotes caninos com menos de seis semanas de
idade pode ser caracterizada por miocardite, pois nessa
fase as clulas do miocrdio esto em constante mitose.

Embora aparentemente seja o principal determinante do tropismo, a presena dos receptores no o nico fator que determina a capacidade do vrus infectar um determinado tipo celular.
Para alguns vrus DNA e retrovrus, a transcrio dos genes virais pode ser inuenciada pela
presena de fatores de transcrio e/ou inibidores celulares. A penetrao em clulas que no

210

apresentem tais fatores pode resultar em infeco


abortiva, pois os genes virais no so expressos
ou so expressos em quantidades insucientes

Captulo 8

vrions, que ocorre com ecincia diferente conforme o tipo celular. Assim, o tropismo desses vrus parcialmente determinado pela capacidade
de determinadas clulas de clivar a protena viral
de fuso. Esses exemplos ilustram a variedade de
fatores celulares que podem ser determinantes
do tropismo dos vrus por determinados tipos
celulares.

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.9. Patogenia da coronavirose canina. O


coronavrus canino (CCoV) penetra pela via oral pela
ingesto de gua ou alimentos contaminados. O vrus
atinge o intestino pela passagem direta pelo trato
digestivo, pois resiste ao pH cido do estmago. No
intestino, o vrus infecta inicialmente as clulas das
vilosidades do duodeno e posteriormente se dissemina
at o leo. A replicao nas clulas absortivas das
vilosidades provoca uma enterite, que resulta em
reduo da absoro de nutrientes, diarria e
desidratao. O vrus excretado nas fezes um a dois
dias aps a infeco. O CCoV pode, ainda, disseminar-se
aos linfonodos mesentricos e, ocasionalmente, replicar
no bao e fgado.

Os parvovrus dependem da atividade da


DNA polimerase celular e fatores associados
para a replicao do seu genoma; por isso esses
vrus apresentam tropismo marcante por clulas em diviso. Os papilomavrus dependem de
clulas cuja sntese e transporte de nucleotdeos
para o ncleo estejam ativos, alm da atividade da DNA polimerase celular. O transporte de
nucleocapsdeos at as proximidades dos poros
nucleares uma atividade requerida para a replicao dos adenovrus. A integrao do provrus
DNA de alguns retrovrus somente ocorre em
clulas em atividade mittica. A replicao dos
papilomavrus est estritamente associada com o
estgio de diferenciao dos queratincitos e dos
fatores celulares expressos por essas clulas. A
capacidade infectiva dos coronavrus e paramixovrus inuenciada pela clivagem e maturao
da protena envolvida na fuso e penetrao dos

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.10. Patogenia da hepatite infecciosa canina. A


infeco pelo adenovrus canino tipo 1 (CAdV-1) pode
ocorrer pela via oral, nasofaringeal e/ou conjuntival,
seguida de replicao primria nas tonsilas e placas de
Peyer. Durante a viremia primria, o vrus se dissemina
no organismo e infecta as clulas endoteliais dos vasos e
as clulas parenquimais de vrios tecidos. A replicao
no parnquima heptico resulta em hepatite, com a
ocorrncia de hemorragia e necrose no rgo. Tambm
so encontradas leses na crnea e glomerulonefrite,
resultantes da deposio de imunocomplexos. O epitlio
tubular renal um stio de acesso limitado do sistema
imune, permitindo a persistncia do CAdV-1 nesse local
por vrios meses.

A distribuio dos vrus nos tecidos e rgos


do organismo depende de um balano entre o padro de disseminao e o seu tropismo celular e
tecidual. Os vrus que se disseminam pela via hematgena podem ter acesso a virtualmente todos
os tecidos do organismo. No entanto, a maioria
desses vrus infecta apenas alguns tecidos ou rgos ou podem ainda infectar apenas algumas
clulas especcas nesses rgos. Em resumo, a
disseminao hematgena permite ao vrus atingir virtualmente todos os tecidos, mas no assegura que a replicao ir ocorrer em todos os tecidos potencialmente atingidos. Por outro lado, a
disseminao neural predominantemente dire-

211

Patogenia das infeces vricas

cional, pois o vrus se dissemina ao longo de circuitos neuronais sinapticamente ligados e infecta
as populaes de neurnios que recebem bras
dos neurnios previamente infectados. Durante
a transmisso transinptica, alguns vrions podem se disseminar localmente e infectar clulas
vizinhas, mas esta infeco ca geralmente limitada. O egresso de vrions dos corpos neuronais
no SNC, por outro lado, pode resultar em disseminao local e infeco de outros neurnios e
tambm de clulas da glia.

ciam a sua disseminao e localizao no organismo. Cada vrus, em particular, produz um ou


mais padres caractersticos de disseminao e
localizao de suas infeces. importante ressaltar que cepas ou isolados de um mesmo vrus
podem apresentar padres diferentes de disseminao e distribuio, podendo resultar em manifestaes clnico-patolgicas distintas. A seguir
sero abordadas sucintamente as caractersticas
das infeces nos principais rgos ou sistemas
do organismo. Detalhes da patogenia de cada infeco vrica sero abordados nos captulos especcos.

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.11. Patogenia da traqueobronquite infecciosa


canina. Essa enfermidade pode ser causada por vrios
agentes virais e bacterianos, incluindo o vrus da
parainfluenza canina (CPIV-2) e o adenovrus canino
tipo 2 (CAdV-2). Os agentes penetram pela via
respiratria e replicam inicialmente no epitlio da
nasofaringe. Posteriormente a infeco se dissemina
para o epitlio pseudo-estratificado ciliado da traquia.
A injria epitelial pela replicao viral e o processo
inflamatrio resultam em perda da funo ciliar,
aumento da produo de muco, com a ocorrncia de tosse
seca, engasgos e aumento da secreo nasal. A
progresso da infeco para o trato respiratrio inferior
depende da infeco concomitante com bactrias e o
quadro clnico-patolgico pode evoluir para
pneumonia, com tosse produtiva e febre. As infeces
pelo CPIV-2 e pelo CAdV-2 so geralmente restritas ao
sistema respiratrio, no causando viremia ou
disseminao sistmica.

A localizao especca das infeces, isto ,


a distribuio do vrus em rgos, tecidos e em
grupos de clulas especcas determinada por
vrios fatores, que incluem a via de penetrao e
replicao primria, a via de disseminao, o tropismo tecidual e celular do vrus. Alm desses fatores, as interaes do vrus com os mecanismos
imunolgicos do hospedeiro tambm inuen-

Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.

Figura 8.12. Patogenia da cinomose canina. O CDV


penetra geralmente pela via oronasal e replica
inicialmente nos epitlios e em macrfagos das vias
areas superiores, faringe e tonsilas. A replicao
primria seguida de viremia que permite a
disseminao sistmica do vrus e infeco de uma
variedade de linfonodos e acmulos linfides, levando a
um quadro de imunossupresso. Em ces que no
conseguem montar uma resposta imune eficiente, o
vrus produz uma viremia secundria, dissemina-se e
replica em uma variedade de tecidos, incluindo clulas
epiteliais da pele, dos tratos digestivo, respiratrio e
urinrio, no sistema nervoso central e no sistema
retculo-endotelial. Esses animais podem apresentar
uma variedade de manifestaes clnicas, que possuem
correlao com os rgos/ tecidos afetados. A
incapacidade de erradicar o vrus pode resultar em
persistncia viral no SNC.

3.3.2 Infeces da pele e tegumento


As clulas da epiderme e derme se constituem em alvos de replicao de vrios vrus. Esses tecidos podem se constituir nos stios de replicao primria aps transmisso por contato,

212

abrases, vetores mecnicos (alguns poxvrus e


herpesvrus, papilomavrus) ou se constituir em
stios de replicao secundria aps uma disseminao hematgena (alguns poxvrus, CDV).
Por outro lado, os vrus que replicam na pele
ou na transio muco-cutnea oronasal e genital
podem produzir infeces localizadas (papilomavrus) ou se disseminar para outros rgos a
distncia pela via sangnea (vrios poxvrus e
alguns herpesvrus) ou neural (vrios herpesvrus). O tecido drmico e subdrmico so ricos em
clulas e capilares sangneos e linfticos, a partir
dos quais os vrus podem se disseminar pelo organismo (ver Figuras 8.3A e 8.4).
Os efeitos da replicao viral nesses locais
so mais pronunciados e visveis em reas desprovidas de plos, como as extremidades das
orelhas, a transio muco-cutnea do focinho, da
vulva, bere e tetas, prepcio e escroto. As infeces por contato freqentemente resultam em
leses delimitadas, com o desenvolvimento de
eritema e edema localizados, mculas, ppulas,
formao e ruptura de vesculas, pstulas e eroses. As eroses e a contnua exsudao podem
levar ao acmulo de brina, formando membranas nas que recobrem as leses e, posteriormente, dessecam e formam crostas. A contaminao
bacteriana das vesculas pode levar formao
de pstulas. Na infeco por alguns vrus (p. ex.:
vrus do ectima contagioso dos ovinos), as crostas que se desprendem das leses contm o vrus
e podem mant-lo vivel durante meses no meio
ambiente, servindo de fonte de infeco para outros animais.
Algumas infeces sistmicas podem resultar na formao de eritema, petquias e sufuses
na pele e/ou mucosas, sem estarem necessariamente associadas com a replicao viral nesses
locais. Nesses casos, essas patologias esto associadas com alteraes/leses no endotlio vasculares e/ou com decincias sistmicas na coagulao sangnea (p. ex.: trombocitopenia).
Embora vrios vrus produzam infeces
cutneas e, assim, esto presentes nas leses,
nem todos utilizam esta via de excreo para serem transmitidos. Excees so os herpesvrus,
alguns poxvrus e os papilomavrus, que podem
ser transmitidos de forma mecnica por vetores

Captulo 8

ou por contato a partir das leses superciais (ver


Figura 8.5).

3.3.3 Infeces do trato respiratrio


Estima-se que aproximadamente 90%
das infeces respiratrias de animais possuam
etiologia viral, isoladamente ou em infeces
mistas. A anatomia e siologia do trato respiratrio favorecem o estabelecimento de infeces
veiculadas por aerossis, poeiras ou transmitidas
por contato direto ou indireto. Dentre os fatores
que favorecem as infeces respiratrias podese mencionar: a) a inalao contnua de grande
quantidade de ar potencialmente contaminado;
b) o hbito investigativo olfatrio de vrias espcies animais; c) a grande superfcie das vias respiratrias, que se estendem desde as fossas nasais
at os alvolos pulmonares; d) a diversidade do
epitlio que reveste os diferentes segmentos do
trato respiratrio; e) o gradiente de temperatura
entre as fossas nasais (33C) e os alvolos (temperatura corporal), que favorece a replicao de
alguns vrus; f) alm dos aspectos que favorecem
a replicao viral no epitlio respiratrio ou em
tecidos anexos, a abundncia e acessibilidade do
tecido linfide e a irrigao presente nos tecidos
subjacentes facilita a disseminao sistmica desses vrus (ver Figura 8.3B). Da mesma forma, a
anatomia especca do epitlio olfatrio fornece
uma conexo direta com o SNC, o que favorece a
invaso do encfalo por vrios vrus (ex. BoHV5). Por isso, apesar dos mecanismos naturais de
defesa (muco e epitlio ciliar), o epitlio do trato
respiratrio um importante local de replicao
para vrios vrus.
Os vrus que replicam no trato respiratrio
podem produzir infeces localizadas (p. ex.:
vrus da inuenza, vrus da parainuenza, vrus sinciciais respiratrios) ou se disseminar a
partir desse local e infectar outros rgos e sistemas (CDV, BoHV-1 e 5 e BVDV) (ver Tabela
8.3). Alguns vrus tendem a replicar nas vias areas superiores, causando rinite ou rinotraquete
(rinovrus e BoHV-1), outros replicam em segmentos intermedirios, provocando traquete ou
bronquite (vrus da inuenza), enquanto outros
atingem regies mais internas e podem estar as-

213

Patogenia das infeces vricas

sociados com bronquiolite e pneumonia (vrus


sincicial respiratrio bovino, BRSV).
A replicao viral no epitlio respiratrio
acompanhada de edema e inamao, resultando
em interrupo da atividade ciliar, perda da integridade da camada de muco e destruio focal
ou multifocal de clulas epiteliais. A destruio
do epitlio e a perda da atividade ciliar contribuem para a colonizao bacteriana secundria.
O auxo de clulas inamatrias e acmulo de
transudato resultam no aumento da rea desprovida de muco e na exposio da superfcie celular. A infeco pode induzir a produo local de
citocinas, que exacerbam o processo inamatrio
e contribuem para a manifestao de sinais clnicos. Em estgios avanados, o edema da mucosa
associado com o acmulo de transudato, inltrado inamatrio e restos celulares necrticos
podem levar reduo importante do lmen e
conseqente diculdade respiratria. Contaminaes bacterianas secundrias so freqentes
em vrias infeces vricas e, muitas vezes, so as
responsveis pela severidade do quadro clnico.
Alm dos vrus que produzem infeces localizadas pela sua replicao no epitlio respiratrio, outros vrus utilizam esse epitlio como porta
de entrada para a replicao primria e infeco
de outros rgos (ver Tabela 8.3). O BoHV-1 replica no trato respiratrio e produz rinotraquete,
mas tambm pode se disseminar sistemicamente
e infectar o feto. O BoHV-5 e o PRV replicam no
epitlio nasal e invadem o SNC, onde replicam
maciamente e provocam meningoencefalite. O
BVDV pode penetrar e replicar na mucosa nasofarngea, a partir da qual se dissemina sistemicamente e pode infectar o feto, podendo causar
aborto ou malformaes. O CDV tambm pode
utilizar a replicao respiratria como etapa inicial de uma disseminao sistmica. Os parvovrus podem atingir o epitlio intestinal ou o feto
aps replicao primria e disseminao a partir
da mucosa orofarngea. Nos vrus que atingem os
rgos-alvo por viremia, a replicao secundria
ocorre no tecido linfide adjacente mucosa respiratria e tambm nos linfonodos regionais.
Os vrus que replicam no trato respiratrio,
produzindo infeces respiratrias ou sistmicas,
so excretados no muco nasal e/ou na saliva e

podem ser expelidos pela tosse, espirro, expectoraes ou durante a ingesto de gua e alimentos.
Esses agentes so transmitidos por contato direto
ou indireto e alguns podem ser veiculados por
aerossis a distncias relativamente grandes.

3.3.4 Infeces do trato digestivo


As infeces vricas do trato gastrintestinal
(TGI) so muito comuns, sendo superadas em
freqncia somente pelas infeces respiratrias.
A anatomia e siologia dos rgos que compem
o TGI tambm oferecem condies favorveis
para a instalao de infeces virais. Dentre estas
se destacam a exposio a uma grande quantidade de agentes ingeridos com a gua e alimentos,
a grande rea de superfcie e a existncia de diferentes tipos de epitlio nos vrios segmentos do
TGI.
As infeces intestinais ocorrem de forma
direta, pela ingesto de partculas vricas (coronavrus, rotavrus e calicivrus), ou de forma indireta, por via hematgena aps a replicao viral
na orofaringe (parvovrus). Os vrus que atingem
o intestino aps a ingesto devem ser capazes de
resistir ao pH cido do estmago e aos sais biliares do intestino delgado para estabelecer a infeco. Aps resistir a essas adversidades, o vrus
deve ultrapassar a camada de muco e penetrar
nas clulas epiteliais para iniciar a infeco.
De acordo com a sua biologia, os vrus associados com infeco do TGI podem ser divididos
em trs grupos principais: a) os vrus associados primariamente com replicao no TGI e que
causam gastrenterite (parvovrus, calicivrus,
astrovrus, coronavrus e rotavrus); b) os vrus
excretados nas fezes, mas que no so enteropatognicos (vrios enterovrus, picornavrus, alguns
adenovrus; vrus que causam hepatites); e c) vrus sistmicos que replicam no TGI e em outros
rgos, podendo estar associados com gastrenterite (exemplo: BVDV). Infelizmente, a biologia de
muitos vrus associados primariamente com gastrenterite muito pouco conhecida, pois muitos
deles no replicam bem em cultivo celular, o que
diculta o seu estudo e a produo de reagentes
para o diagnstico.

214

Captulo 8

Vrus de vrias famlias replicam no TGI e


esto primariamente associados com doena entrica e diarria. Embora esses agentes estejam
freqentemente associados com enterite com caractersticas clnicas semelhantes, a sua patogenia apresenta algumas diferenas importantes. A
maioria desses vrus atinge o intestino pela via
oral e replica nos entercitos maduros das regies mais altas das vilosidades do intestino delgado (ID) (Figura 8.13). Os vrus que replicam e
destroem essas clulas provocam a reduo da
capacidade digestiva e absortiva do rgo, resultando em reteno de material parcialmente
ou no-digerido no lmen intestinal. Isso leva
reteno de gua, aumento de volume e fermentao excessiva nos segmentos terminais do ID e
no intestino grosso, exacerbando o efeito osmtico que atrai gua para o lmen intestinal. Essa
condio conhecida como sndrome da m-absoro primria.
Os parvovrus atingem o intestino delgado
pela via sangnea, aps a replicao na orofaringe. Esses vrus infectam as clulas das criptas
intestinais, que so imaturas e se constituem nas
clulas progenitoras dos entercitos das vilosidades (Figura 8.13). As clulas das criptas so os
alvos principais de replicao do CPV e FPLV,
pelo fato de apresentarem uma taxa acelerada de
diviso, o que favorece a replicao viral. Essas

clulas esto em diviso ativa, pois so encarregadas de substituir gradativamente as clulas


das vilosidades que vo sendo esfoliadas. Com a
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral, a substituio das clulas das vilosidades
se torna deciente. Isso leva tambm decincia dos processos absortivos do ID, o que caracteriza a sndrome de m-absoro secundria. A
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral resulta em achatamento das vilosidades e
reao inamatria severa. A destruio de entercitos maduros leva exposio das camadas
adjacentes, hemorragia e desidratao. A presena de sangue nas fezes se constitui em um achado
freqente em vrias infeces vricas intestinais,
podendo estar associada com nveis importantes
de mortalidade. Em ambos os casos, as vilosidades se tornam atroadas e achatadas, podendo
ocorrer necrose progressiva e descamao.
Embora a maioria desses vrus replique preferencialmente no epitlio do ID, alguns deles podem infectar as clulas epiteliais das vilosidades
do intestino grosso. Em geral, a replicao desses
vrus ca restrita ao epitlio do intestino, com
pouca ou nenhuma replicao em clulas da lmina prpria e tecidos subjacentes. Outros vrus
infectam populaes especcas de clulas, alm
das clulas epiteliais, como os astrovrus (clulas
M e das placas de Peyer do ID).

movimento dos entercitos


em maturao

Vilosidade

Rotavrus
Astrovrus
Calicivrus
Coronavrus
Adenovrus
Torovrus
Torovrus
Astrovrus

Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
Epitlio do Dome
(clulas M)

Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)

Placas de Peyer
Linfonodo

Parvovrus
Torovrus

Fonte: adaptada de Conner e Ramig (1997).

Figura 8.13. Ilustrao simplificada da estrutura do epitlio do intestino delgado (A) e local de replicao de alguns
vrus entricos (B).

Patogenia das infeces vricas

O BVDV est freqentemente associado com


quadros de enterite, nos quais a replicao viral
nos epitlios e/ou no tecido linfide adjacente
resulta em leses erosivas e ulcerativas disseminadas pelo trato GI. Com certa freqncia, essas
leses podem ser observadas ao longo do TGI,
incluindo a lngua, mucosa oral, esfago, rmen,
abomaso e intestino delgado. Alm da replicao nas clulas epiteliais, o carter sistmico do
agente e a sua capacidade de replicar em clulas
do sistema linforreticular provavelmente contribuem para a patogenia dessas leses.
Os vrus que replicam no epitlio intestinal ou em rgos anexos (fgado) geralmente so
excretados em altos ttulos nas fezes e so transmitidos principalmente pela via fecal-oral. Esses
vrus so geralmente resistentes s condies
ambientais, o que favorece a sua sobrevivncia
no ambiente e transmisso. Os vrus hepatotrpicos (p. ex.: CAdV-1 e hepadnavrus) tambm
so excretados nas fezes. Alguns vrus replicam
em rgos anexos ao trato digestivo e so excretados pela saliva, podendo ser transmitidos por
mordeduras (vrus da raiva em ces, gatos e morcegos; arenavrus entre roedores; herpesvrus B
em macacos) ou pelo contato direto ou indireto
com as secrees contaminadas (CDV, CAdV-1 e
FMDV).

3.3.5 Infeces do sistema nervoso


central
O SNC se constitui em rgo-alvo para a replicao de diversos vrus, cuja infeco geralmente revestida de signicado especial pela sua
importncia. Os vrus que produzem infeces
neurolgicas e encefalite geralmente invadem o
encfalo atravs dos nervos, mas vrios deles podem atingir esse rgo pela via hematgena. Os
vrus que replicam em clulas do sistema nervoso
so ditos neurotrpicos, mas a maioria deles tambm capaz de replicar em outras clulas. Duas
propriedades devem ser denidas com relao a
infeco neurolgica por vrus. O termo neuroinvasividade se refere capacidade dos vrus atingir
o SNC aps a replicao em stios perifricos. Os
vrus que produzem infeces neurolgicas sob
condies naturais so neuroinvasivos, pois do

215

contrrio no seriam capazes de alcanar o encfalo aps a sua penetrao no hospedeiro. O


termo neurovirulncia se refere capacidade dos
vrus de replicar, disseminar-se no SNC e produzir doena neurolgica. Para a maioria dos vrus
que produzem infeces neurolgicas, estas duas
propriedades esto presentes simultaneamente.
No entanto, tem sido demonstrado que alguns
vrus podem ser neurovirulentos se inoculados
diretamente no SNC, mas no so capazes de
atingir o encfalo aps replicao em stios perifricos. Ou seja, so potencialmente neurovirulentos, mas no neuroinvasivos. Alguns isolados
do BoHV-1, por exemplo, s produzem infeces
neurolgicas em coelhos aps a inoculao intratecal ou intracerebral, no sendo capazes de invadir o encfalo aps a inoculao intranasal ou
intraconjuntival.
A via nervosa fornece um acesso direto ao
encfalo, pois os vrus so transportados ao longo de bras conectadas sinapticamente. O transporte ao longo de axnios e dentritos e a transmisso atravs das sinapses permite aos vrions
percorrer longas distncias e atingir o encfalo a
partir dos stios perifricos de replicao.
A penetrao de vrus no SNC a partir do
sangue oferece obstculos adicionais, representados pela barreira hematoenceflica. Essa barreira
formada pela estrutura especializada da parede
de certos capilares, que apresentam clulas endoteliais justapostas; pela lmina basal espessa;
pelo plexo coride; e pelo epitlio ependimal,
que no apresenta espao entre as clulas. Embora estas barreiras sejam ecientes para evitar
a penetrao de alguns vrus no SNC, parecem
no serem capazes de impedir a penetrao de
outros. provvel que alguns vrus consigam ultrapassar essas barreiras; outros podem infectar
as clulas endoteliais e serem liberados na face
oposta; uma minoria parece ser transportada do
sangue para o tecido nervoso no interior de clulas sangneas.
Aps a penetrao no tecido nervoso, o vrus pode se disseminar localmente pela infeco de neurnios e clulas da glia localizadas
nas proximidades; pode se disseminar pelos
espaos intercelulares; e pode tambm atingir
regies mais profundas dos SNC por transpor-

216

te transinptico. Embora as manifestaes clnico-patolgicas mais importantes das infeces


neurolgicas devam-se a distrbios funcionais e
morte dos neurnios, uma variedade de clulas
pode ser infectada e contribuir para as patologias
observadas. Ou seja, as patologias neurolgicas
nem sempre so derivadas exclusivamente da infeco viral dos neurnios. Para vrios vrus que
produzem infeces neurolgicas, as clulas-alvo
da replicao no SNC ainda no so perfeitamente denidas. A identicao das clulas-alvo da
replicao se constitui em um ponto-chave para
o entendimento da patogenia de muitas infeces
vricas neurolgicas.
Os efeitos mais deletrios e mais estudados
das infeces neurolgicas por vrus se devem
destruio dos neurnios infectados. Dependendo do nmero de neurnios infectados e destrudos, esses eventos podem resultar em doena
severa e na morte do hospedeiro, como ocorre
em animais de laboratrio infectados experimentalmente com alguns buniavrus, vrus da raiva,
herpesvrus e alfavrus. A morte celular pode
dever-se a uma variedade de mecanismos, muitos j descritos na seco referente s interaes
do vrus com as clulas hospedeiras (seo 2.1).
A induo de apoptose em neurnios tambm
tem sido implicada na patogenia de alguns vrus
neurovirulentos. O tropismo especco do vrus
por determinadas subpopulaes de neurnios
pode inuenciar o padro de neurovirulncia e
as conseqncias clnico-patolgicas da infeco.
O poliovrus, por exemplo, infecta preferencialmente neurnios do corno anterior da medula
espinhal, resultando em sintomatologia caracterstica. O buniavrus La Crosse infecta as clulas
de Purkinge do cerebelo de camundongos infectados experimentalmente. A via de inoculao
e penetrao no SNC tambm pode determinar
as caractersticas clnico-patolgicas da infeco.
O curso clnico e os sinais clnicos apresentados
por coelhos inoculados com o BoHV-5 variam
de acordo com a via de inoculao (intranasal e
conjuntival), provavelmente reetindo diferentes
padres temporais e espaciais de replicao viral
no encfalo.
Embora a infeco e destruio de neurnios seja o mecanismo mais atraente e talvez

Captulo 8

aquele de ocorrncia mais freqente para explicar os distrbios neurolgicos associados com as
infeces vricas do SNC, a ocorrncia de doena
neurolgica grave sem infeco neuronal macia
tambm tem sido descrita em infeces vricas.
Isso demonstra que alguns vrus podem causar
disfuno neuronal grave sem infeco ou morte
de um nmero signicativo dessas clulas, o que
poderia explicar, em parte, os casos de recuperao clnica que eventualmente ocorram aps
infeces neurolgicas. Em muitos casos, ocorre
a infeco de um nmero varivel de clulas da
micrglia, de astrcitos e de oligodendrcitos,
com um envolvimento pouco signicativo de
neurnios. possvel que produtos virais txicos
para os neurnios sejam liberados por essas clulas no meio extracelular. A liberao de citocinas
e outros mediadores qumicos inamatrios tambm tm sido implicados na disfuno neuronal
observada nessas infeces. Em particular, o xido ntrico que produzido por clulas da glia em
resposta infeco vrica pode ser deletrio para
os neurnios. De fato, tem sido demonstrado que
as interaes entre clulas inamatrias e neurnios podem resultar em toxicidade e disfuno
neuronal, sem necessariamente induzir a morte
de neurnios. Os mecanismos efetores celulares
e humorais da resposta inamatria tambm
podem potencialmente contribuir para a injria
e disfuno neuronal. Esses mecanismos podem
explicar, em parte, a ocorrncia de doena neurolgica severa e at mesmo fatal, desacompanhada de infeco neuronal signicativa, como ocorre em algumas situaes.
Alm das infeces neurolgicas agudas
com conseqncias clnico-patolgicas variveis
e freqentemente fatais alguns vrus estabelecem infeces persistentes no sistema nervoso.
Uma parte das infeces agudas resulta em morte do hospedeiro dentro de poucos dias, tendo,
assim, importncia epidemiolgica limitada (p.
ex.: encefalites eqinas por alfavrus e avivrus,
raiva e cinomose). Por outro lado, as infeces
persistentes podem ter conseqncias epidemiolgicas mais importantes, pela perpetuao da
infeco nos hospedeiros. Para estabelecer uma
infeco persistente, o vrus no pode matar as
clulas infectadas; ele deve manter a sua replica-

Patogenia das infeces vricas

o em nveis baixos e possuir estratgias para


escapar da vigilncia do sistema imunolgico.
De fato, nessas infeces, a extenso da injria
e leses geralmente muito pequena ou mesmo
ausente. Por outro lado, a persistncia viral em
clulas nervosas freqentemente associada com
imunopatologia em neurnios e clulas da glia.
O SNC apresenta caractersticas que podem
favorecer a persistncia de infeces vricas, entre
elas: possui uma populao estvel e heterognea
de clulas susceptveis a vrios vrus; uma rede
intrincada de processos (axnios e dendritos) que
permite a disseminao do vrus a longas distncias; uma barreira hemato-enceflica que restringe o acesso de linfcitos T e anticorpos. No entanto, alguns vrus infectam concomitantemente
clulas extraneurais e produzem viremia crnica,
indicando que o SNC pode no oferecer todas as
condies para a persistncia viral.
As infeces persistentes do SNC podem ser
classicadas em trs tipos principais, com conseqncias clnico-patolgicas e epidemiolgicas
diferentes: infeces latentes, infeces crnicas
defectivas e infeces crnicas produtivas. Os
alfaherpesvrus (PRV, BoHV-1, BoHV-5 etc.) estabelecem infeces latentes em neurnios dos
gnglios sensoriais e autonmicos prximos ao
stio de infeco primria. Durante a infeco latente, o genoma do vrus permanece inativo no
ncleo dos neurnios, sem expresso gnica ou
produo de prognie viral. Ocasionalmente, em
situaes de estresse, o vrus retoma a replicao
ativa e transportado de volta aos stios de penetrao, onde replica e excretado. A reativao
da infeco importante na epidemiologia desses vrus, pois permite a excreo e transmisso
a outros animais. Algumas vezes a reativao
acompanhada de recrudescncia clnica, com o
desenvolvimento de leses no stio de penetrao, e tambm com o desenvolvimento espordico de infeco neurolgica e meningo-encefalite
(BoHV-5). Ces que se recuperam da infeco
aguda pelo CDV acompanhada ou no de sinais clnicos podem car portadores do vrus,
que segue replicando em nveis muito baixos no
SNC, geralmente desacompanhado de excreo
viral. Eventualmente esses animais desenvolvem
um quadro de encefalite viral e vo a bito, mas

217

essa ocorrncia pode demorar anos. A persistncia do vrus no SNC, aps a infeco aguda,
pode ser favorecida por mutaes que resultem
na produo de vrus defectivos. Outra forma de
infeco persistente no SNC a estabelecida pelo
retrovrus MVV, nos quais o vrus estabelece infeco crnica em clulas da linhagem macrofgica com produo de vrus ausente ou espordica.
O vrus da doena de Borna (BDV) de eqinos
tambm estabelece infeco persistente no sistema nervoso, porm a produo de vrus parece
ser contnua, apesar de ocorrer em nveis baixos.

3.3.6 Infeces do sistema linforreticular


e hematopoitico
Vrios vrus utilizam clulas linforreticulares e/ou da linhagem hematopoitica como alvos
de replicao em infeces naturais. A variedade
de tipos celulares e a multiplicao contnua de
algumas dessas clulas favorecem a replicao
desses vrus. Da mesma forma, a contnua recirculao dessas clulas especialmente os linfcitos favorece o carter sistmico dessas infeces. Em geral, a infeco se inicia nos rgos
linfides secundrios, aps a drenagem da linfa
dos tecidos ou com a passagem do sangue pelo
bao. Os vrus presentes na linfa e/ou sangue so
capturados por ou infectam clulas da linhagem
monoctica/macrofgica, clulas dentrticas ou
linfcitos dos linfonodos, bao, placas de Peyer
e outros acmulos linfides. A replicao viral
nessas clulas seguida da produo de prognie
viral que infecta um nmero adicional de clulas
prximas, alm de permitir a sua disseminao
sistmica atravs de clulas circulantes. Assim o
vrus pode se distribuir por outros rgos linforreticulares e se disseminar nesses tecidos. Infeces de clulas progenitoras hematopoiticas da
medula ssea podem ocorrer nesses estgios da
infeco. Os macrfagos, clulas dendrticas, linfcitos T e B so alvos de replicao de uma variedade de vrus que causam doenas em animais.
Alm dessas, clulas progenitoras da linhagem
linfide, mielide ou hematopoitica da medula ssea podem ser infectadas por alguns vrus e
comprometer a reposio das clulas sangneas
(alguns vrus induzem trombocitopenia).

218

A infeco macia do sistema linforreticular


freqentemente leva depleo linfide e disfuno da resposta imunolgica. A disfuno do sistema imunolgico pode resultar em decincias
na resposta a outros patgenos, com predisposio a infeces secundrias. Vrios vrus animais
tm sido associados com infeco do sistema linfide e induo de imunossupresso, incluindo o
vrus da doena de Gumboro em aves (IBDV), o
FIV e o vrus da imunodecincia bovina (BIV).
Outros vrus, como o BVDV, CSFV, CDV e CPV
podem estar associados com quadros transitrios
de supresso imunolgica. A imunossupresso
produzida por esses vrus pode dar-se em razo
de vrios mecanismos e ser abordada em seo
especca.
Alguns dos vrus mais virulentos para humanos e animais esto associados com infeces
do tecido linforreticular e hematopoitico, incluindo o vrus ebola (lovrus), arenavrus, hantavrus, o vrus da febre do vale Rift (um buniavrus), o VEEV, CSFV e ASFV. Esses vrus esto
associados com doena severa, caracterizada pelo
curso agudo e pela ocorrncia de leses vasculares, disfunes hemodinmicas, de coagulao
sangnea e ocorrncia de eventos hemorrgicos.
Alguns isolados do BVDV tambm tm sido associados com doena aguda severa acompanhada
de componentes hemorrgicos. Essas enfermidades possuem algumas caractersticas em comum,
como o curso agudo, a ocorrncia de alteraes
vasculares, leses endoteliais com perda de lquido vascular, proteinria e edemas. As manifestaes mais comuns da injria nos endotlios vasculares incluem hiperemia acentuada, petquias
e sufuses nas mucosas e serosas, equimoses e
hemorragias pontuais disseminadas em quadros
severos. Quadros de choque hipovolmico so
freqentes em estgios avanados da doena. As
hemorragias e extravasamento de plasma podem
ser por causa da injria nos endotlios vasculares
pela replicao viral nas clulas endoteliais, por
alteraes na coagulao sangnea (coagulao
intravascular disseminada com consumo de plaquetas) ou ainda por trombocitopenia primria.

Captulo 8

3.3.7 Infeco fetal


Os tecidos embrionrios e fetais apresentam uma alta taxa de multiplicao celular e, por
isso, constituem-se em stios de predileo para
a replicao de vrios vrus. Os vrus que infectam o feto se disseminam pela via hematgena e
vrios deles produzem infeces inaparentes ou
leves nas fmeas prenhes. Nesses casos, as conseqncias maiores da infeco so devidas s perdas reprodutivas. As conseqncias da infeco
fetal variam com a espcie e cepa do vrus, com
o status imunolgico da fmea e com a fase de
gestao em que ocorre a infeco. As infeces
que ocorrem em fases precoces da gestao so
geralmente acompanhadas de morte embrionria
ou fetal. Infeco fetal em estgios intermedirios
pode produzir teratogenia ou abortos e infeco
em fases avanadas pode induzir abortos, natimortos ou resultar em resposta imunolgica e erradicao da infeco pelo feto.
A infeco fetal tambm pode representar
um meio para o vrus persistir na populao, pela
gerao de animais imunotolerantes e persistentemente infectados, capazes de disseminar o vrus por longos perodos. A produo de neonatos
persistentemente infectados caracterstica da
infeco fetal por cepas no-citopticas do BVDV
entre os 40 e 120 dias de gestao, e pode ocorrer
tambm com os pestivrus suno e ovino. Os efeitos da infeco fetal pelo BVDV esto ilustrados
na Figura 8.14.
Os efeitos observados no feto podem deverse replicao viral nos tecidos fetais e/ou replicao na placenta e interferncia com as funes
placentrias. A mortalidade fetal pode ser seguida de reabsoro, mumicao fetal ou abortamento. Os abortos associados com infeces vricas geralmente ocorrem dias ou semanas aps a
infeco, o que diculta a deteco de vrus e/ou
produtos virais nos tecidos fetais e conseqentemente o diagnstico.
Dentre os vrus animais que produzem infeces embrionrias e fetais destacam-se:

219

Patogenia das infeces vricas

vrus da leucemia felina (FeLV): leucemia,


mortalidade fetal;
vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos sunos (PRRSV) e vrus da arterite viral
eqina (EAV): mortalidade fetal, abortos;
vrus Akabane (ovinos e bovinos): morte
fetal, abortos, malformaes, natimortalidade;
vrus da febre do vale Rift (RVFV) em ovinos: mortalidade fetal e abortos.
Perdas reprodutivas por alguns desses agentes tambm tm sido relatadas aps o uso de vacinas atenuadas contendo os respectivos agentes.
Por outro lado, para os vrus que causam perdas
reprodutivas importantes, a vacinao deve ser
realizada antes da cobertura ou inseminao para
prevenir a infeco fetal e, assim, minimizar as
perdas.

herpesvrus de vrias espcies: mortalidade fetal, abortos, doena ou mortalidade neonatal;


pestivrus de bovinos (BVDV), sunos
(CSFV) e ovinos (border disease virus BDV): mortalidade fetal, abortos, malformaes, natimortalidade, nascimento de animais persistentemente
infectados;
vrus da lngua azul (BTV, um orbivrus)
em ovinos e bovinos: mortalidade fetal, abortos,
malformaes congnitas;
parvovrus suno (PPV): reabsoro embrionria, mortalidade fetal, abortos, mumicao, natimortalidade;
vrus da panleucopenia felina (FPLV): hipoplasia cerebelar;

BVDV
ncp ou cp
Soropositivo, sem o vrus
ncp
Bezerro PI
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos

ncp ou cp

Atrofia da retina
Cegueira
Embrio muito
susceptvel

Bezerros saudveis
soropositivos

Imunotolerncia (PI)

Efeitos na
fertilizao,
implantao

Leses no SNC

Abortos

40

80

120

160

200

240

280

D I A S D E G E S TA O

Figura 8.14. Efeitos da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo vrus da diarria viral bovina (BVDV). As
conseqncias da infeco dependem do status imunolgico da fmea, da cepa do vrus (biotipo e virulncia) e do
estgio de desenvolvimento do embrio/feto.

220

Captulo 8

4 Padres principais de infeco


A sobrevivncia dos vrus como espcie
depende de infeces sucessivas e contnuas de
diferentes indivduos e/ou de infeces prolongadas no mesmo indivduo. Por outro lado, o resultado da infeco viral em um animal depende
de interaes mltiplas entre componentes virais
e do hospedeiro. Objetivamente, depende do
balano entre as estratgias virais para se perpetuar no organismo e dos mecanismos de defesa
do hospedeiro para erradicar o agente. Apesar
da diversidade dos vrus e da complexidade de
suas interaes com os hospedeiros, dois padres

principais de infeco podem ser reconhecidos:


as infeces agudas e as infeces crnicas (ou
persistentes). No entanto, variaes e combinaes desses tipos tambm ocorrem com freqncia (Figura 8.15).
Alguns vrus produzem infeces agudas, que
se caracterizam pela curta durao e rpida erradicao do agente pela resposta imunolgica
do hospedeiro. Outros vrus produzem infeces
persistentes ou crnicas, caracterizadas pela permanncia do agente no hospedeiro por longos
perodos, muitas vezes pelo resto da vida. A natureza autolimitante das infeces agudas se deve
principalmente ecincia do sistema imunol-

Infeco Aguda

Infeco Latente

Infeco Persistente

Infeco Persistente
temporria

Replicao viral
Manifestaes clnicas

Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).

Figura 8.15. Principais padres de infeco.

221

Patogenia das infeces vricas

gico do animal em combater e erradicar a infeco. Visto por outro ngulo, o carter transitrio
dessas infeces se deve incapacidade dos vrus
persistir no animal na presena da resposta imunolgica. As infeces persistentes ou crnicas
tambm podem ser vistas sob duas ticas: a) do
ponto de vista do hospedeiro, a persistncia do
agente em seus tecidos reete a incapacidade do
sistema imunolgico de erradic-lo; e b) do ponto
de vista do agente, a persistncia o resultado
de estratgias evolutivas, que foram desenvolvidas para se adaptar ao hospedeiro e escapar da
vigilncia do sistema imunolgico, garantindo,
assim, a sua permanncia no animal.

4.1 Infeces agudas


A principal caracterstica das infeces agudas o curto perodo de tempo em que o vrus
replica no organismo do hospedeiro. o padro
de infeco mais estudado e conhecido e caracterstico de vrios vrus que replicam com ecincia em animais e em cultivos celulares. O termo
aguda se refere rapidez de replicao e produo de prognie viral, que seguida tambm por
uma rpida resoluo e erradicao da infeco.
Os nveis de replicao viral no organismo aumentam rapidamente, atingem um pico aps alguns dias e decrescem tambm com certa rapidez
(Figura 8.15). A reduo dos nveis de vrus no
organismo coincide com o desenvolvimento de
resposta imunolgica humoral (anticorpos) e celular (linfcitos T citotxicos). Em geral, a resposta imunolgica capaz de erradicar o agente dos
tecidos aps alguns dias. Se, por um lado, o curto
perodo de replicao e excreo pode ser detrimental para a sobrevivncia do vrus na populao, os altos ttulos de vrus que so excretados
favorecem a transmisso do agente.
importante ressaltar que o termo aguda se
refere cintica de replicao viral (nveis e tempo) e no s manifestaes clnicas. De fato, muitas
infeces agudas so absolutamente subclnicas,
ou seja, so desacompanhadas de manifestaes
clnico-patolgicas. No obstante, muitas vezes
as infeces agudas no podem ser controladas
pelo sistema imunolgico e resultam em doena de severidade varivel, algumas vezes fatais.
Exemplos de infeces agudas incluem as infec-

es entricas por rotavrus em vrias espcies,


vrus da inuenza em sunos e eqinos, vrus da
raiva em vrias espcies, CPV, entre outras.

4.2 Infeces persistentes ou crnicas


As infeces crnicas ou persistentes se caracterizam pela persistncia do vrus ou do genoma viral no hospedeiro por longos perodos.
A maioria dessas infeces se inicia como uma
infeco aguda, caracterizada por uma rpida
replicao viral, acompanhada ou no de sinais
clnicos. No entanto, ao contrrio das infeces
agudas, a resposta imunolgica montada pelo
hospedeiro no capaz de erradicar o agente,
resultando na sua permanncia nos tecidos por
perodos variveis. Diferentes tipos de infeces
crnicas podem ser reconhecidos de acordo com a
biologia do agente, com a dinmica de replicao
viral (ausncia ou presena de replicao ativa) e
com a durao. Em geral, os nveis de replicao
e excreo viral nas infeces crnicas so muito
mais baixos do que nas infeces agudas e, algumas vezes, podem ser dicilmente detectveis.
De acordo com a ocorrncia ou no de replicao viral durante a persistncia, dois tipos
principais de infeces crnicas so reconhecidos: as infeces latentes e as infeces persistentes. As infeces latentes so caracterizadas pela
permanncia do genoma viral nas clulas do hospedeiro, na maior parte do tempo sem replicao
e produo de vrus. A replicao e produo de
prognie viral somente ocorrem em situaes espordicas e duram horas ou poucos dias. J nas
infeces persistentes, a replicao viral ocorre
de forma contnua, em nveis variveis, e freqentemente acompanhada de excreo do agente. Em algumas infeces persistentes, no entanto, os nveis de replicao so to baixos e em
determinados tecidos do organismo que no
so acompanhados de excreo viral detectvel
(p. ex.: persistncia do CDV no encfalo de ces
adultos e persistncia do FMDV na faringe). Em
outras, a replicao e excreo viral ocorrem de
forma contnua e em nveis signicativos.
As infeces persistentes aquelas que cursam com replicao viral contnua podem ser
agrupadas em duas classes, que so determinadas pela biologia dos vrus e por suas interaes

222

com o hospedeiro. Para alguns vrus, o estabelecimento de infeco persistente uma regra
e ocorre em, virtualmente, todos os indivduos
infectados. Em outras palavras, a persistncia
uma caracterstica biolgica inerente s relaes
daquele vrus com os seus hospedeiros. Esse tipo
de infeco persistente se prolonga por tempo indeterminado, provavelmente por toda a vida do
animal. Essas so as infeces persistentes clssicas
e so caractersticas das infeces pelos retrovrus animais, alm de outros vrus. Em outros
grupos de vrus, infeces persistentes podem
ser estabelecidas aps a infeco aguda, em um
nmero varivel de indivduos, e a persistncia
geralmente possui durao varivel, no necessariamente indenida. Nesses casos, a persistncia
uma conseqncia provvel e muitas vezes
freqente da infeco, mas no se constitui em
regra ou padro biolgico da infeco por esses
vrus. Alm disso, grande parte dos animais que
se tornam portadores consegue erradicar a infeco aps algum tempo, determinando o m da
persistncia, ou seja, so infeces persistentes temporrias (Figura 8.15).
Algumas infeces persistentes so acompanhadas de sinais clnicos crnicos, que podem ser
brandos ou graves; outras vezes a infeco absolutamente inaparente. Vrias infeces crnicas
resultam em patologias progressivas de desenvolvimento lento (MVV, CAEV, vrus da pneumonia progressiva dos ovinos [OPPV] e FeLV),
em imunopatologia ou imunodecincia (EIAV,
FIV e LCMV) ou no desenvolvimento de neoplasias malignas (vrus da leucose aviria [ALV] e
BLV). Essas patologias so mais comumente observadas nas infeces persistentes clssicas.
Os locais de persistncia do vrus no so
necessariamente os mesmos em que o vrus replicou e produziu patologias na fase aguda e, freqentemente, incluem stios de acesso restrito do
sistema imunolgico. Os padres de replicao e
excreo viral durante as infeces crnicas tambm so muito variveis. Em algumas infeces,
a replicao viral contnua e ocorre em nveis
moderados a altos; em outras, os nveis de replicao so muito baixos, com pouca ou nenhuma
excreo viral. J as infeces latentes so caracterizadas por longos perodos de absoluta ausncia de replicao viral intercaladas com episdios
espordicos de reativao, replicao e excreo
viral.

Captulo 8

4.2.1 Infeces latentes


Esse tipo de infeco tpico dos alfaherpesvrus animais (BoHV-1, BoHV-5, PRV, EHV1, herpesvrus canino, herpesvrus felino, entre
outros) e se caracteriza pela permanncia do genoma viral inativo em neurnios dos gnglios
sensoriais e autonmicos aps o trmino da replicao na fase aguda. Durante a infeco latente
no ocorre produo de protenas virais, replicao do genoma ou produo de partculas vricas. Com isso, os neurnios que abrigam o genoma viral no so reconhecidos como infectados
pelo sistema imunolgico, o que permite ao vrus
escapar da vigilncia imunolgica. O genoma viral no integrado aos cromossomos celulares e
permanece como um epissomo, fortemente associado com protenas celulares no ncleo dos neurnios. Esporadicamente, geralmente associado
com situaes de estresse e produo de glicocorticides endgenos, a infeco reativada e o
vrus replica de forma aguda e excretado. O perodo e a magnitude de excreo viral durante a
reativao so geralmente bem inferiores queles
observados durante a infeco aguda. A reativao da infeco ocasionalmente acompanhada
de manifestaes clnicas, geralmente mais brandas do que aquelas observadas durante a infeco aguda. As reativaes ocorrem a intervalos
variveis (semanas, meses, anos) em uma parcela
dos indivduos e possvel que alguns hospedeiros no apresentem episdios de reativao. A
infeco latente representa um meio do vrus se
perpetuar no hospedeiro, e a sua reativao peridica permite a sua excreo e transmisso.

4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas


Essas infeces se caracterizam pela contnua replicao e produo de partculas vricas
nos tecidos do hospedeiro por tempo ilimitado,
provavelmente por toda a vida do animal. possvel se detectar o agente infeccioso em qualquer
momento aps a infeco aguda, desde que se
examinem os tecidos certos com tcnicas apropriadas. As infeces persistentes se estabelecem
porque o sistema imunolgico do hospedeiro no
consegue erradicar o vrus durante a infeco

Patogenia das infeces vricas

aguda. Subseqentemente, por diferentes mecanismos, o agente consegue coexistir com uma
resposta imune que mantm um controle parcial
da infeco, sem conseguir elimin-la totalmente.
Os nveis de replicao nesse tipo de infeco variam de acordo com o vrus. Alguns vrus mantm nveis considerveis de replicao de forma
contnua; outros apresentam uma replicao
mnima, s vezes, de difcil deteco. As infeces pelos retrovrus animais (EIAV, BLV, FeLV,
CAEV, entre outras), BTV e infeco persistente
pelo BVDV so exemplos clssicos de infeces
vricas persistentes.
No caso dos retrovrus, a manuteno da infeco se deve integrao denitiva de cpias
DNA do genoma viral nos cromossomos das
clulas hospedeiras, ou seja, as clulas infectadas cam persistentemente infectadas e, caso se
multipliquem, transmitem o genoma viral para
a sua prognie. Assim, geraes sucessivas de
clulas produzem vrus infecciosos ao longo da
vida do animal. No caso do BLV, a manuteno
da infeco persistente deve-se principalmente a
divises celulares contnuas e transmisso do genoma viral para a prognie, do que produo
de vrus infecciosos. interessante observar que
os retrovrus, alm de inserir o seu material gentico nos cromossomos do hospedeiro, tambm
sofrem contnuas mutaes que contribuem para
a sua perpetuao no animal infectado.
As infeces persistentes pelo BVDV somente ocorrem em animais que tenham sido infectados intra-uterinamente, entre os 40 e 120 dias de
gestao. Esses animais se tornam imunotolerantes e so incapazes de montar uma resposta imunolgica contra o vrus infectante. Assim, o vrus
pode replicar continuamente em altos ttulos no
tecido linforreticular e epitlios dos animais, sem
a interferncia do sistema imunolgico.

4.2.3 Infeces persistentes temporrias


Em alguns vrus, a infeco aguda pode ser
seguida de persistncia do agente nos tecidos do
hospedeiro por perodos variveis. Em algumas
delas, a persistncia ocorre apenas em alguns
animais, no se constituindo em uma regra. Em

223

outros casos, as infeces crnicas que se seguem


s infeces agudas parecem ocorrer na maioria,
seno em todos os animais. Os nveis de replicao e excreo viral variam de acordo com o
agente e com a resposta do hospedeiro. A durao da persistncia tambm varivel, podendo
ser de meses e at anos (ou at mesmo por toda a
vida do animal). Naqueles casos em que a erradicao do agente ocorre aps algum tempo, provvel que o vrus tenha esgotado o seu arsenal de
estratgias para persistir no animal, sendo eventualmente combatido pelo sistema imune. Vrios
vrus produzem este tipo de infeco. O PRRSV
permanece replicando nos testculos de reprodutores sunos por at seis meses aps a infeco aguda. O CAdV-1 tambm pode permanecer
durante meses replicando no epitlio dos tbulos
renais, que so locais de acesso restrito do sistema
imunolgico. A infeco pelo CDV um exemplo
de infeco que geralmente aguda na maioria
dos animais mas pode se tornar crnica em uma
parcela dos ces que no conseguem erradicar o
vrus na fase aguda. Nesses animais, o vrus persiste replicando em nveis baixos no SNC. Essa
replicao no acompanhada de excreo viral
em secrees ou excrees. A maioria desses animais eventualmente desenvolve doena neurolgica de curso fatal, em um prazo que varia de
meses a anos. No caso do calicivrus felino (FCV),
a persistncia do vrus no hospedeiro parece ser
favorecida pela ocorrncia contnua de mutaes
genticas que resultam em variantes virais que
escapam da resposta imune do animal. O FMDV
produz uma infeco clnica aguda (febre aftosa)
que se resolve em poucos dias. No entanto, uma
parcela dos animais permanece abrigando o vrus
na faringe por um determinado tempo. Os nveis
de replicao so geralmente muito baixos e parecem no ser acompanhados de excreo viral.
Alguns arenavrus e hantavrus produzem
infeces crnicas em roedores silvestres. Essas
infeces so acompanhadas por viremia prolongada muitas vezes por toda a vida e de transmisso vertical do vrus para a prognie. J as
infeces crnicas por hantavrus so caracterizadas por viremia transitria seguida de excreo
prolongada de vrus pela saliva, secrees nasais,
fezes e urina. Esses vrus podem ser ocasional-

224

Captulo 8

mente transmitidos para humanos e so importantes causas de febres hemorrgicas. A Tabela

8.4 apresenta as principais caractersticas das infeces virais persistentes.

Tabela 8.4 Stios de persistncia de vrus que estabelecem infeces latentes ou persistentes nos hospedeiros
Tipo

Famlia/subfamlia

Vrus

Espcie

Local de persistncia

BoHV-1

bovina

Gnglios sensoriais e autonmicos, tonsilas e


linfcitos T (BoHV-1.1), linfonodos da regio
sacral (BoHV-1.2).

BoHV-5

bovina

Gnglio trigmeo e stios do SNC.

BoHV-2

bovina

Gnglio trigmeo, pele e linfonodos.

CaHV-1

canina

Gnglios sensoriais e autonmicos.

FHV-1

felina

Gnglios sensoriais e autonmicos.

CpHV

caprina

Gnglios sensoriais e autonmicos.

PRV

suna

Gnglio trigmeo, bulbo olfatrio, tronco


cerebral, medula espinhal, tonsilas.

EHV-1, 3 e 4

eqina

Gnglios sensoriais e autonmicos.

GaHV-1

aves

Gnglios sensoriais e autonmicos.

Herpesviridae/
Betaherpesvirinae

PCMV (SHV-2)

suna

Glndula salivar, epitlio vesical e clulas


mononucleares.

Herpesviridae/
Gammaherpesvirinae

MCFV (AHV-1)

ruminantes

Clulas linfoblastides.

EHV-2 e 5

eqina

Clulas linfoblastides.

DAdV-A

aves

Clulas da glndula da casca e do oviduto.

BLV

bovina

Linfcitos B.

Maedi/ Visna

ovina

Moncitos e macrfagos.

CAEV

caprina

Linfcitos, SNC, epitlio alveolar, moncitos e


macrfagos.

FIV/FeLV

felina

Clulas mielides, linfcitos T e B.

EIAV

eqina

Macrfagos e linfcitos.

ALV

aves

Clulas linfides, mielides, renais, sseas,


endoteliais e mesenquimais.

Vrus Jaagsiekte
OPAV

ovina

Clulas epiteliais do sistema respiratrio.

Coronaviridae

FIPV

felina

Macrfagos.

Paramyxoviridae

CDV*

canina

SNC (oligodendrcitos).

Caliciviridae

FCV

felina

Epitlio respiratrio e anexos.

Flaviviridae

BVDV, BDV e
CSFV**

bovina, ovina e
suna

Clulas do sistema imune, SNC, medula


ssea, clulas endoteliais e clulas
epiteliais dos sistemas respiratrio e
digestrio.

Alphaherpesvirinae

MDV (GaHV-2)

aves

Linfcitos T.

Adenoviridae

EAdV-2

eqina

Mucosa respiratria, adenides.

Parvoviridae

PPV***

suna

Tecido linfide, rins e testculos.

Reoviridae

BTV

bovina e ovina

Clulas hematopoiticas.

Hepadnaviridae

DHBV, WHBV,
GSHBV

patos, gansos,
marmotas, esquilos
ovinos

Hepatcitos.

Latente

Herpesviridae/
Alphaherpesvirinae

Adenoviridae

Persistente

Retroviridae

225

Patogenia das infeces vricas

Tabela 8.4 Continuao


Tipo

Famlia/subfamlia

Vrus

Espcie

Local de persistncia

BPV-1 a 7

bovina

Clulas epiteliais.

CaPV

canina

Clulas epiteliais.

EPV-1 e 2

eqina

Clulas epiteliais.

Adenoviridae

CAdV-1

canina

Epitlio dos tbulos renais.

Asfarviridae

ASFV

suna e bubalina

Clulas mononucleares e fagocticas,


tonsilas e linfonodos.

Circoviridae

PCV-1 e 2

suna

Clulas mononucleares sangneas,


macrfagos e linfcitos.

Picornaviridae

FMDV

bovina, suna
e ovina

Mucosa da orofaringe.

PRRSV

suna

Macrfagos, clulas germinativas


dos testculos.

EAV

eqina

Macrfagos, clulas endoteliais e


mesoteliais.

TGEV

suna

Mucosas respiratria e intestinal.

IBV

aves

Clulas do epitlio renal.

BDV

eqina

Neurnios, astrcitos e oligodendrcitos.

Persistente temporria

Papillomaviridae

Arteriviridae

Coronaviridae
Bornaviridae

* Alguns animais que se recuperam da doena ficam portadores,mas no excretam o vrus, que replica em nveis baixos no SNC.
**Fetos infectados em determinada fase de gestao ficam imunotolerantes e nascem persistentemente infectados.
***Alguns fetos infectados no tero se tornam imunotolerantes e ficam portadores, excretando o vrus por longos perodos.

4.3 Mecanismos envolvidos na


manuteno das infeces persistentes
Os mecanismos envolvidos no estabelecimento e manuteno das infeces persistentes
so muito complexos e pouco esclarecidos at o
presente. No entanto, independentemente dos
mecanismos responsveis, a manuteno de uma
infeco vrica no organismo deve preencher trs
condies essenciais: a) a infeco celular deve
ser no-citoltica (ou de citopatogenicidade limitada); b) manuteno do genoma viral nas clulas do hospedeiro, e c) evaso da resposta imune
do hospedeiro. Vrios mecanismos adicionais ou
complementares tm sido sugeridos para explicar a persistncia desses agentes em tecidos do
hospedeiro, por longos perodos, a despeito da
resposta imunolgica desencadeada contra eles.
provvel que nenhuma infeco persistente seja
mantida por causa de apenas um desses mecanismos; ao contrrio, provavelmente so mantidas
pela combinao de vrios deles.

4.3.1 Restrio do efeito citopatognico


Os vrus que produzem infeces no-citolticas so mais propensos a estabelecerem infeces persistentes, pois a sua replicao no resulta na destruio das clulas infectadas (ou resulta
em destruio limitada). Exemplos de vrus nocitolticos que causam infeces persistentes so
alguns arenavrus (infeco renal persistente em
roedores), o BVDV (infeco de clulas do sistema linforreticular) e o vrus da hepatite B (infeco no-citoltica de hepatcitos).

4.3.2 Infeco de clulas


semipermissivas
A replicao dos alfaherpesvrus em clulas
epiteliais e do tegumento altamente citoltica, o
que tambm observado em uma variedade de
clulas in vivo e in vitro. A infeco tambm citoltica em vrios tipos de neurnios. No entanto,
alguns neurnios sensoriais e autonmicos no
so permissivos replicao ltica aguda. Como

226

conseqncia, aps penetrar e ter o seu ciclo replicativo interrompido, o vrus estabelece infeces latentes nesses neurnios, ou seja, a infeco de clulas semi-permissivas infeco ltica
o mecanismo responsvel pela persistncia dos
alfaherpesvrus nos seus hospedeiros. Sob determinadas condies, esses neurnios que abrigam
o genoma viral se tornam permissivos, o que desencadeia a reativao e replicao viral.

4.3.3 Infeco de um pequeno nmero


de clulas
Essa forma de infeco tem sido observada
por alguns vrus in vitro e possvel que tambm
ocorra in vivo. Candidatos para esse tipo de modulao so os adenovrus e os arterivrus (EAV
em eqinos e PRRSV em sunos). A infeco persistente no hospedeiro seria mantida atravs de
infeces sucessivas citolticas ou no de um
nmero pequeno de clulas a cada ciclo. Os vrus
produzidos por essas clulas infectariam outra
pequena populao de clulas e, assim, a infeco
se prolongaria sucessivamente. Provavelmente
algum mecanismo concomitante de evaso do
sistema imune seja necessrio para permitir a
ocorrncia dessas infeces continuadas, mesmo
em baixos nveis.

4.3.4 Manuteno do genoma viral nas


clulas hospedeiras
A manuteno do genoma viral nas clulas
do hospedeiro pode ocorrer por dois mecanismos distintos: pela integrao do genoma viral
nos cromossomos da clula do hospedeiro, como
ocorre com as infeces pelos retrovrus, ou pela
manuteno do genoma como elemento extracromossomal no ncleo da clula, como ocorre nas
infeces latentes pelos alfaherpesvrus e papilomavrus.

4.3.5 Evaso da resposta imune


do hospedeiro
As estratgias de evaso do sistema imunolgico esto entre os mecanismos mais importantes
utilizados pelos vrus para assegurar a sua per-

Captulo 8

sistncia no hospedeiro. Em muitos vrus, essas


estratgias provavelmente complementam os outros mecanismos envolvidos na permanncia do
agente no organismo. Os mecanismos mais utilizados pelos vrus para evaso da resposta imune
so: a) restrio de produo das protenas virais
(como no caso da latncia dos herpesvrus); b) infeco de locais imunologicamente privilegiados
(p. ex.: infeco das clulas do SNC pelo CDV e
e de clulas do epitlio seminfero dos testculos
pelo PRRSV); c) variao antignica (EIAV, FCV
e FMDV); d) tolerncia imunolgica (bovinos
persistentemente infectados pelo BVDV); f) interferncia com clulas e molculas do sistema imunolgico (adenovrus e poxvrus).

5 Oncognese por vrus


A transformao celular e produo de tumores esto entre as conseqncias da replicao
de alguns grupos de vrus nos seus hospedeiros.
De fato, acredita-se que uma parte considervel
dos tumores de humanos e animais possua a participao direta ou indireta de agentes virais. De
acordo com o vrus, diferentes tipos celulares e
rgos podem ser afetados, com conseqncias
diversas. Alguns tumores induzidos por vrus
so benignos, mas uma parcela importante
constituda por neoplasias malignas que resultam em doena progressiva e morte do animal.
Para alguns vrus indutores de tumores, os mecanismos moleculares de oncognese j foram
razoavelmente esclarecidos. Para outros vrus,
no entanto, esses mecanismos permanecem obscuros e se constituem em temas de contnuas investigaes. Dentre os vrus animais associados
com neoplasias, encontram-se famlias de vrus
RNA (retrovrus) e DNA (poliomavrus, papilomavrus, adenovrus e hepadnavrus).

5.1 Oncognese por retrovrus


Os retrovrus envolvidos com a produo
de tumores tambm chamados de oncornavrus
so amplamente distribudos na natureza e tm
sido isolados de virtualmente todas as espcies
animais. Esses vrus diferem entre si em relao
ao tropismo celular, potencial oncognico, per-

Patogenia das infeces vricas

odo de incubao e mecanismo de oncognese.


Com base no tempo necessrio para a produo
dos tumores, os oncornavrus podem ser divididos em vrus transformantes no-agudos, agudos
e transindutores. Os retrovrus transformantes
no-agudos induzem a formao de neoplasias
aps um longo perodo de incubao (meses at
dcadas), assim como os transindutores. Os retrovrus transformantes agudos induzem tumores em um intervalo menor de tempo (semanas).
Os mecanismos de oncognese tambm variam
entre os grupos.
Os retrovrus transformantes no-agudos
esto envolvidos em vrios tipos de neoplasias,
incluindo linfomas e leucemias. Esses vrus no
possuem genes especcos com atividade oncognica no seu genoma. Ao contrrio, induzem
oncognese pela integrao do seu genoma (provrus DNA) nas proximidades de proto-oncogenes celulares ou de genes envolvidos no controle
do ciclo e diferenciao celular. Com isso, a expresso desses genes alterada e pode levar
transformao tumoral. Este processo denominado de oncognese insercional.
Os retrovrus transformantes agudos podem
induzir a formao de tumores dentro de poucos
dias. Ao contrrio do grupo anterior, esses vrus
possuem oncogenes (genes oncognicos) no seu
genoma. Mais de 30 diferentes oncogenes j foram identicados no genoma de retrovrus animais e todos eles parecem ter sido adquiridos
integralmente ou por rearranjos do genoma dos
hospedeiros em infeces passadas. As funes
dos produtos desses oncogenes so variveis e
incluem desde quinases at fatores de transcrio. Uma caracterstica comum a quase todos os
oncogenes retrovirais identicados at o presente
que os seus produtos esto envolvidos em mecanismos de sinalizao intracelular (signal transduction). Retrovrus com essas caractersticas j
foram identicados em vrias espcies animais e
tm sido associados com uma grande variedade
de tumores, incluindo sarcomas, carcinomas e
linfomas em aves; sarcomas e linfomas em roedores; brossarcomas e linfossarcomas em felinos; e
sarcoma em primatas.
Os retrovrus transformantes transindutores
produzem leucemias monoclonais de linfcitos T

227

e B aps um longo perodo de incubao. Entre


esses vrus se destacam o vrus da leucemia de
linfcitos T humano (HTLV) e o BLV. O genoma
desses vrus no possui oncogenes e o mecanismo
de induo da oncognese difere daqueles dos
dois grupos anteriores. A transformao tumoral induzida por esses vrus parece estar ligada
funo dos produtos de dois genes acessrios, tax
e rex, que tambm possuem papel importante no
ciclo replicativo do vrus. A protena Rex essencial para o ciclo replicativo ltico do HTLV, mas a
sua participao na oncognese permanece desconhecida. J a protena Tax necessria para o
ciclo ltico e tambm para a transformao tumoral das clulas hospedeiras. Esta protena um
potente transativador de transcrio do provrus
viral e tambm de vrios genes celulares. J foi
demonstrado que vrios genes celulares que possuem um papel potencial na regulao do ciclo
celular podem ser ativados pela protena Tax. Por
isso a ativao de genes envolvidos no controle
do ciclo celular um dos provveis mecanismos
de oncognese pelos retrovrus transindutores.

5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos


Algumas famlias de vrus DNA possuem
membros que tm sido associados com tumores,
seja em infeces naturais ou aps inoculao
experimental. Alguns deles produzem tumores
em animais e, por isso, possuem importncia em
medicina veterinria. Em particular, alguns vrus
das famlias Polyomaviridae e Papillomaviridae tm
sido associados com tumores em seus hospedeiros naturais e tm comprovado o seu potencial
oncognico aps inoculao em hospedeiros heterlogos. O primeiro vrus DNA tumorignico
identicado foi o CRPV (papilomavrus dos coelhos cauda-de-algodo) que causa papilomas
cutneos benignos nos hospedeiros naturais.
Quando inoculado em coelhos domsticos, no
entanto, o CRPV induz papilomas que tendem a
progredir e se tornar carcinomas. Vrios aspectos
da tumorignese associada com infeces virais
foram estudados nesse modelo animal. O papilomavrus de camundongos tambm tem sido associado com tumores mltiplos, sobretudo aps
inoculao experimental em neonatos. O vrus

228

smio 40 (SV-40), tambm um membro da famlia


Polyomaviridae, capaz de produzir tumores em
hamsters recm-nascidos. O SV-40 tambm tem
sido associado com alguns tumores raros em pessoas que foram vacinadas h aproximadamente
50 anos com uma vacina antipoliomielite contaminada com o vrus. Os papilomavrus bovinos
(BPVs) tambm tm sido associados com a induo de tumores nos seus hospedeiros. O BPV-1
est associado com papilomas e bropapilomas,
tumores cutneos de carter benigno e com freqncia muito menor, a tumores cutneos malignos. O BPV-4 est associado com a produo de
carcinomas de laringe e esfago em bovinos, cuja
etiologia parece estar combinada com a intoxicao por samambaia. Os papilomavrus humanos
16 e 18 (HPV-16; HPV-18) esto envolvidos na
produo de um dos tumores mais freqentes
em humanos, o carcinoma de colo de tero de
mulheres.
Os mecanismos pelos quais esses vrus induzem transformao neoplsica nas clulas hospedeiras tm sido intensivamente estudados nas
ltimas dcadas. A capacidade oncognica desses
vrus tem sido atribuda a uma ou mais protenas
virais que se ligam e inativam protenas celulares envolvidas na regulao do ciclo celular. Em
particular, as protenas celulares pRb e p53 so os
alvos para o antgeno T, dos poliomavrus, e para
as protenas E6 e E7 dos papilomavrus. As protenas da famlia da pRb e p53 exercem um papel
regulatrio-chave no controle da estabilidade do
genoma, na proliferao, diferenciao e apoptose em clulas de mamferos. A sua inativao pelas protenas virais citadas resulta no descontrole
do ciclo celular e eventualmente pode resultar
em transformao neoplsica.
Os vrus da famlia Hepadnaviridae, tambm
conhecidos como vrus das hepatites B, tambm
tm sido associados com a produo de tumores
em seus hospedeiros naturais. Alm do vrus da
hepatite B humana (HBV), os hepadnavrus de
esquilos (GSHV) e de marmotas (WHV) esto
associados com o desenvolvimento de carcinoma hepatocelular, que ocorre ocasionalmente em
hospedeiros com hepatite crnica. Os mecanismos responsveis pela transformao neoplsica
que ocorre nas infeces crnicas pelos hepadnavrus no esto completamente esclarecidos. V-

Captulo 8

rios mecanismos tm sido propostos e acredita-se


que a oncognese pode resultar da combinao
de mais de um deles. Os mecanismos propostos
incluem: a) ativao de proto-oncogenes celulares pela insero do genoma viral nos cromossomos; b) ativao de proto-oncogenes celulares
pela protena X; c) injria e inamao heptica
crnica, com produo de substncias potencialmente mutagnicas. Em geral, o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular precedido por
uma infeco heptica crnica de longa durao.

6 Imunopatologia em infeces
vricas
O sistema imunolgico o responsvel pela
proteo do organismo contra agentes agressores, porm a ativao da resposta imune nem
sempre capaz de controlar a infeco. Alm
disso, em determinadas situaes, a resposta
produzida pode induzir leses imunomediadas,
determinando a ocorrncia da doena. Vrias doenas vricas, como a AIDS, a dengue, a anemia
infecciosa eqina e a artrite-encefalite caprina,
entre outras, apresentam as leses resultantes da
resposta imunolgica como componentes de sua
patogenia.
A resposta imune em infeces vricas tem
como objetivo a eliminao e/ou neutralizao
das partculas virais livres, pela ao de anticorpos e do complemento; alm da destruio das
clulas infectadas, pela citotoxicidade celular
dependente de anticorpo (ADCC), linfcitos T
citotxicos (CD8+) e lise por clulas natural killer
(NK). Em algumas situaes, essa resposta suciente para eliminar o vrus do organismo. No
entanto, em outras situaes, essa resposta pode
causar injria tecidual, doena e at matar o hospedeiro. Em alguns casos, comum a coexistncia do hospedeiro com o vrus, com a ocorrncia
de injrias celulares e teciduais mnimas, muitas
vezes sem o comprometimento da sade geral do
animal.
O grau de leso que a resposta imunolgica
pode produzir no hospedeiro depende, em parte,
dos rgos envolvidos. Se a infeco ocorre no
SNC ou no corao, as leses so geralmente graves, enquanto uma resposta localizada na pele,
por exemplo, possui conseqncias limitadas.

Patogenia das infeces vricas

Os vrus podem induzir imunopatologias


por diferentes mecanismos, como a induo de
auto-imunidade, imunossupresso e pela deposio de imunocomplexos, que caracteriza a reao de hipersensibilidade do tipo III. As leses
imunomediadas ocorrem com maior freqncia
em infeces persistentes ou crnicas, e principalmente em infeces por vrus no-citolticos.

6.1 Imunopatologia mediada


por imunocomplexos
A conseqncia imunopatolgica mais freqente em infeces vricas agudas ou persistentes a formao de imunocomplexos. Esses
complexos so formados por anticorpos ligados
a partculas vricas ou a antgenos virais solveis.
Quando esses imunocomplexos so produzidos
em excesso, podem resultar em imunopatologia.
Isso ocorre quando os antgenos virais no so
eliminados ecientemente ou quando a replicao do vrus no controlada de forma eciente
pelo sistema imunolgico. Dependendo do tipo
de anticorpo e da sua capacidade neutralizante,
os complexos podem carrear vrus viveis que
podem penetrar produtivamente em clulas que
possuam receptores para anticorpos (receptores
para a poro Fc), como macrfagos e linfcitos
ativados. Leses de glomerulonefrite imunomediada so freqentemente observadas em infeces vricas como a hepatite infecciosa canina, peritonite infecciosa felina, imunodecincia felina,
peste suna clssica, peste suna africana, entre
outras.
Doenas mediadas por imunocomplexos somente ocorrem quando a sua produo excede a
capacidade do organismo de remov-los dos tecidos e uidos corporais. Em condies normais,
os imunocomplexos produzidos so removidos
atravs de fagocitose por macrfagos e clulas
mesangiais antes que eles se depositem e causem
algum tipo de leso. Quando em excesso, a deposio dos imunocomplexos ocorre geralmente
em locais com funo de ltragem de lquidos
orgnicos, como os glomrulos renais, a parede
dos vasos sangneos, as membranas sinoviais e
o plexo coride. As leses causadas pela deposio dos imunocomplexos no so resultantes da

229

sua ao fsica e sim da ativao local do complemento e dos eventos inamatrios resultantes
dessa ativao.
A deposio de imunocomplexos na parede dos vasos e nos tecidos seguida do aumento
da permeabilidade vascular local, mediada por
aminas vasoativas como a histamina e serotonina. A ligao da regio Fc dos anticorpos dos
imunocomplexos a receptores Fc das membranas
provoca a liberao das aminas vasoativas provenientes de baslos, plaquetas e mastcitos que
circulam no local da deposio. A poro Fc se
liga ao componente C1 e ativa a via clssica do
complemento. Ocorre a atrao de neutrlos
para o local de deposio, e a formao do complexo de ataque membrana (MAC), o que contribui para a injria local.
Os receptores para a poro Fc das imunoglobulinas G esto presentes no plexo coride,
onde possuem distribuio periventricular. A
localizao desses receptores parece ter relevncia na distribuio das leses por deposio de
imunocomplexos observadas na infeco pelo
MVV e CAEV em pequenos ruminantes (ovinos
e caprinos).
Na anemia infecciosa eqina, os anticorpos
se ligam a vrions livres no plasma, e os imunocomplexos so depositados principalmente nos
glomrulos renais, levando glomerulonefrite
imunomediada. A circulao desses imunocomplexos tambm pode levar hemlise, resultando em anemia.
O FeLV pode induzir deposio de imunocomplexos e imunodecincia. Algumas vezes ocorrem altos nveis de antgenos virais e a
formao e deposio de imunocomplexos leva
glomerulonefrite imunomediada. Em outros
casos, ocorre depleo linfide, em parte pela
ADCC. Essa depleo leva a uma maior susceptibilidade a infeces secundrias, como estomatites crnicas, gengivites, leses de pele e abscessos
subcutneos.
As leses imunomediadas podem ocorrer
tambm como seqelas de infeces virais, sem
envolvimento direto na patogenia da infeco,
como a sndrome oftlmica que ocorre em ces
convalescentes da infeco pelo CAdV-1. A leso
caracterizada pela deposio de imunocomple-

230

xos na crnea, resultando em opacidade, conhecida como olho azul.

6.2 Imunopatologia mediada por


linfcitos T citotxicos
Os linfcitos T citotxicos (CTLs, CD8+) possuem um papel relevante na erradicao de infeces vricas dos hospedeiros, pela sua capacidade
de identicar e lisar clulas infectadas por vrus.
Os CTLs reconhecem peptdeos virais conjugados com molculas do MHC-I na superfcie das
clulas infectadas, atravs das molculas TCR +
CD8. Alm de lisar clulas infectadas, os CTLs
parecem ser capazes de erradicar certos vrus (p.
ex.: vrus da hepatite B humana), sem a necessidade de lisar as clulas infectadas, provavelmente interferindo (atravs de citocinas) com alguma
etapa da replicao viral. Dessa forma, a infeco
aguda pelo HBV geralmente erradicada por
uma resposta vigorosa mediada principalmente
por CTLs especcos para antgenos do vrus.
Por outro lado, a resposta imunolgica de
alguns pacientes no consegue erradicar a infeco e esses indivduos se tornam portadores de
infeco heptica crnica. Nesses indivduos, a
resposta mediada por CTLs fraca ou indetectvel, provavelmente devido a uma expanso clonal deciente. Essa resposta fraca e contnua tem
sido implicada na patogenia da infeco crnica,
levando a leses necro-inamatrias crnicas no
fgado, ou seja, a injria celular de intensidade
fraca, porm contnua, resultaria em um processo inamatrio persistente que resulta em hepatite crnica. Eventos semelhantes ocorrem em camundongos inoculados com o LCMV.

6.3 Imunopatologia por induo de


auto-imunidade
A induo de auto-imunidade outro mecanismo de imunopatologia que pode ocorrer em
algumas infeces virais. Nesse mecanismo, pode
ocorrer estimulao antignica por determinantes
antignicos de protenas virais que sejam semelhantes a protenas do hospedeiro ou por distrbios na ativao de linfcitos, que podem produ-

Captulo 8

zir anticorpos contra protenas prprias. Assim,


os linfcitos T que possuem papel essencial na
resposta imune contra vrus so responsveis
pela modulao da intensidade da resposta, limitando os danos causados por uma resposta
agressiva. A expanso clonal dessas clulas em
resposta a epitopos de protenas do hospedeiro,
evento que pode ocorrer em determinadas infeces vricas, est envolvido na induo de autoimunidade. Esse processo ocorre, por exemplo,
na encefalomielite murina de Theiler, em que a
resposta especca de clulas T ao vrus ocorre
junto com uma resposta imune contra a protena bsica da mielina, induzindo desmielinizao
auto-imune.

7 Imunossupresso por vrus


Grande parte das infeces vricas acompanhada por disfunes no sistema imunolgico,
muitas das quais podem ser detectadas in vivo e
demonstradas experimentalmente in vitro. Freqentemente, essas alteraes ocorrem concomitantemente com uma resposta imunolgica efetiva contra o vrus que as induziu. Por outro lado,
alguns vrus suprimem a resposta imunolgica
contra os seus antgenos, proporcionando condies para o estabelecimento de infeces prolongadas ou persistentes. As alteraes imunolgicas
causadas por infeces vricas podem aumentar
a susceptibilidade do hospedeiro a infeces secundrias, dicultar ou retardar a resposta contra
a prpria infeco, ou levar a um desequilbrio
amplo e duradouro na resposta imunolgica contra vrios agentes. Falha em responder a outros
antgenos, tanto por vacinao como infeco
natural, resposta deciente em provas de hipersensibilidade retardada e resposta proliferativa
e citotxica decientes, tm sido associadas com
diversas infeces vricas em humanos e animais.
Ativao policlonal de linfcitos B, que pode resultar em um aumento inespecco do nvel de
imunoglobulinas plasmticas e dicultar o diagnstico sorolgico da infeco, alm de reduzir
a resposta a antgenos recm-introduzidos, tambm tem sido identicada em algumas infeces.

231

Patogenia das infeces vricas

Os mecanismos envolvidos nesses eventos,


no entanto, nem sempre so facilmente elucidveis, sobretudo pela diculdade de se mimetizar
experimentalmente in vitro a complexidade das
interaes imunolgicas que ocorrem in vivo. Em
geral, os mecanismos envolvidos com imunossupresso por vrus podem ser devidos replicao viral em clulas que participam da resposta
imunolgica, alterao da resposta imunolgica
normal pela resposta especca contra o vrus ou
a efeitos indiretos da replicao e/ou de produtos virais. A Tabela 8.5 apresenta um resumo das
alteraes imunolgicas j identicadas em infeces vricas e os mecanismos potencialmente
envolvidos.

7.1 Replicao viral em clulas


envolvidas na resposta imunolgica
Diversos vrus replicam em clulas da linhagem mielide e/ou linfide, cujas clulas diferenciadas esto envolvidas com a resposta imunolgica natural e adquirida. Para alguns vrus,
essas clulas se constituem nos principais alvos
da replicao, enquanto, para outros, elas representam apenas uma parcela das populaes celulares infectadas. A infeco e destruio de clulas imunolgicas o mecanismo mais atraente e
lgico na tentativa de explicar a imunossupresso
causada por vrus. No entanto, este no o ni-

Tabela 8.5. Principais alteraes imunolgicas e seus mecanismos de induo, por diferentes grupos de vrus

Famlia/
Famlia
grupo

Mecanismos

Alteraes imunolgicas
Replicao em
Susceptibilidade Proliferao Aumento nas
Vrus
clulas
imunoglobulinfide
a infeces
imunolgicas
linas
reduzida

Ativao do Produtos de
sistema
moncitos e
imune
linfcitos Th

Protenas
virais

Picornaviridae

Flaviviridae
Arteriviridae

Coronaviridae

Orthomyxoviridae

Paramyxoviridae

+
+

+
+

+
+

Rhabdoviridae
Arenaviridae

Reoviridae

Retroviridae

Parvoviridae

+
+

Herpesviridae

Poxviridae

Adenoviridae

Fonte: adaptada de Griffin (1997).

+
+

232

co e talvez nem seja o mecanismo mais relevante


envolvido na supresso da resposta imunolgica
por vrus.
Na verdade, na grande maioria das infeces vricas imunossupressivas estudadas, o percentual de clulas de determinada populao que
infectada raramente atinge 1%. Essa pequena
proporo infectada dicilmente seria suciente
para explicar a decincia imunolgica associada
com essas infeces.
O HIV, por exemplo, infecta linfcitos
TCD4+. Em clulas quiescentes, o vrus se encontra em um estado de latncia, sem o genoma integrado nos cromossomos celulares. Por ocasio
da ativao dessas clulas, que seguida da integrao do provrus DNA, a replicao viral iniciada. A frao de linfcitos TCD4+ circulantes
que infectada situa-se em torno de 0,01 a 1%,
sendo que menos de 10% destas produzem prognie viral. Essa proporo de clulas infectadas
no justica as severas alteraes imunolgicas
observadas nos pacientes soropositivos, indicando a participao de outros mecanismos na imunossupresso.
J o IBDV, um birnavrus de galinhas, infecta liticamente populaes de linfcitos B que esto em diviso, resultando em imunossupresso
profunda pela extensiva perda dessas clulas.
Nos animais afetados, ocorre uma disfuno na
resposta humoral, mediada por linfcitos B.
Dentre os vrus animais que infectam clulas
do sistema imunolgico se incluem: a) vrus que
infectam linfcitos T: vrios retrovrus animais
(p. ex.: FeLV e FIV) e GHV-2 (vrus da doena de
Marek); b) vrus que infectam linfcitos B: birnavrus (IPNV e IBDV), vrus da leucemia murina
(MuLV), retrovrus smio, BVDV e BLV; c) vrus
que infectam clulas da linhagem monocticamacrofgica: VEEV, LCMV, vrus da inuenza,
vrus Maedi-Visna, CAEV, vrus da parainuenza, vrus da peste suna africana (ASFV). ASFV,
vrios coronavrus, circovrus, arterivrus (PRRSV, EAV, LDEV), EIAV e ALV.

7.2 Imunossupresso associada com a


ativao do sistema imune
Muitas alteraes da resposta imunolgica
ocorrem no contexto da resposta desencadeada

Captulo 8

contra o vrus infectante. Seriam, portanto, conseqncias inevitveis da resposta necessria


para combater este agente e montar uma resposta duradoura que proteja contra reinfeces. Nesse sentido, decincias imunolgicas podem ser
resultantes de: a) ativao generalizada de linfcitos T sem os sinais apropriados (muitos dos
quais morrem por apoptose); b) produo anormal (quantitativa e qualitativamente) de citocinas; c) depleo de linfcitos T vrus-especcos
pela sua ativao em resposta ao agente. A participao desses mecanismos na imunossupresso
evidenciada pelo fato de que os nveis mximos
de supresso coincidem com o aparecimento da
resposta imunolgica especca e erradicao do
agente. Esse tipo de imunossupresso tem sido
detectado em infeces pelo vrus da inuenza,
vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV), entre
outros.

7.3 Produtos de moncitos e linfcitos


ativados
Vrias interleucinas so produzidas por clulas especializadas em resposta a infeces vricas, incluindo os interferons do tipoI (IFN alfa
e beta), IL-2 e receptor de IL-2, entre outras. A
maioria dessas interleucinas atua modulando
e estimulando a resposta celular e/ou humoral
contra o agente infeccioso. No entanto, j foram
identicados vrios fatores produzidos por moncitos e linfcitos ativados que inibem a resposta
imunolgica. A resposta contra o vrus de Newcastle, por exemplo, caracterizada pela reduo
da atividade dos linfcitos T citotxicos contra
um segundo vrus, associada com supresso dos
nveis de IFN. As interleucinas 4 e 10 (IL-4, IL-10)
produzidas por linfcitos ativados suprimem a
funo de moncitos/macrfagos.

7.4 Protenas virais


Diversas protenas codicadas por vrus interferem com a resposta imunolgica do hospedeiro, retardando ou suprimindo esta resposta,
permitindo, assim, a replicao e disseminao
do vrus no hospedeiro (Tabela 8.6). Algumas
dessas protenas podem ser secretadas pelas clulas infectadas e interferir com a funo de clulas

233

Patogenia das infeces vricas

Tabela 8.6. Protenas virais que interferem com a resposta imunolgica do hospedeiro

Mecanismo efetor
Famlia
Lise celular mediada por
anticorpos e complemento

Apresentao de antgenos
peloMHC-I a linfcitos
citotxicos

Produo de citocinas por


macrfagos

Produo de citocinas por


linfcitos Th

Vrus

Protena viral
Vrus

Protena-alvo

Vrus do herpes simplex

gE+gI
gC

Poro Fc das Igs


C3b

Vrus vaccinia

VCP

C3b+C4b

Adenovrus

E3/19K

Cadeia pesada MHC-I

Vrus do herpes simplex

ICP47

TAP

Citomegalovrus

UL-18

Beta 2-microglobulina

Vrus do mixoma (Pox)

TNF

Vrus vaccina

TNF
IL-1 beta

Cowpox

?
crmA

TNF
IL-1 beta

Orthopox

orfB8R

IFN gama

Tanapox

38kDa

IFN gama, IL-2, IL-5

Vrus do mixoma

37kDa

IFN gama

Fonte: adaptada de Griffin (1997).

no-infectadas. J foi demonstrado, por exemplo,


que a hemaglutinina do vrus da inuenza afeta
diretamente a funo de neutrlos. Outras protenas virais podem se ligar a receptores de superfcie celular e interferir com a sua funo. Por
exemplo, as glicoprotenas gE e gI do HSV (e provavelmente de outros alfaherpesvrus) se ligam
na poro Fc das imunoglobulinas, impedindo
que ocorra a ativao do complemento na superfcie de clulas infectadas e prevenindo, assim, a
destruio dessas clulas. Protenas virais podem
tambm atuar como superantgenos, ligando-se a
receptores de linfcitos T e estimulando-os at a
exausto e depleo. A protena E3/19 K dos adenovrus se liga com a cadeia pesada da molcula
de MHC-I, retendo-a no retculo endoplasmtico. Assim, as clulas infectadas pelos adenovrus
no apresentam peptdeos virais associados com
o MHC-I e no so reconhecidas pelos linfcitos
Tc. Alguns poxvrus e herpesvrus tambm suprimem a expresso de MHC-I na superfcie das

clulas infectadas. Os poxvrus codicam protenas que so secretadas pelas clulas infectadas e
interferem com a ao de interleucinas produzidas em resposta infeco. Alguns desses vrus
codicam uma protena que se liga ao fator de
necrose tumoral (TNF) e o impede de se ligar
superfcie das clulas infectadas. O vrus do mixoma codica uma protena homloga ao receptor do interferon gama (IFN ). Os vrus da vaccinia e cowpox codicam protenas que se ligam e
inibem a funo da IL-1, IFN- e TNF.
Em resumo, a infeco e alterao da funo
de clulas envolvidas na resposta imunolgica
no o nico mecanismo de imunossupresso
causado por vrus. provvel que a imunossupresso observada nas infeces vricas, em sua
maioria, deva-se interao de mltiplos fatores,
que incluem citocinas/interleucinas, infeco e
disfuno de clulas imunolgicas e efeitos de
protenas virais especcas.

234

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RESPOSTA IMUNOLGICA CONTRA VRUS


Luiz Carlos Kreutz

1 Introduo

239

2 Resposta imune inata

239

2.1 Interferon tipo I


2.2 Sistema complemento
2.3 Clulas natural killer

240
242
242

2.4 Clulas dendrticas


2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK
2.4.2 O papel das DCs na resposta imune adquirida

243
243
243

3 Resposta imune adquirida

244

3.1 Reconhecimento de antgenos pelo sistema imunolgico


3.1.1 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos B
3.1.2 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T

244
244
245

3.2 Resposta imune celular


3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na imunidade antiviral

249
250

3.3 Resposta imune humoral


3.4 Respostas primria e secundria/memria imunolgica

250
252

3.5 As imunoglobulinas na defesa antiviral


3.5.1 Mecanismos de ao das imunoglobulinas

253
254

3.6 O papel da resposta humoral e celular na imunidade antiviral

255

4 Mecanismos virais de evaso da resposta imune


4.1 Infeces latentes no sistema nervoso central
4.2 Variaes antignicas
4.3 Induo de tolerncia
4.4 Integrao do material gentico viral no genoma do hospedeiro
4.5 Infeco de stios imunologicamente privilegiados
4.6 Interferncia com funes do sistema imunolgico

256
256
256
257
257
257
258

5 Consideraes finais

258

6 Bibliografia consultada

258

1 Introduo

2 Resposta imune inata

A imunidade ou resistncia do hospedeiro


contra infeces vricas depende da atuao integrada da resposta imune inata e da resposta
imune adquirida. Os mecanismos envolvidos na
resposta imune inata atuam imediatamente aps o
contato do hospedeiro com os antgenos virais,
no possuem capacidade de discriminao entre
os vrus e no necessitam de exposio prvia
para serem desencadeados. Os mecanismos envolvidos na resposta imune adquirida, por sua vez,
desenvolvem-se seqencialmente e de forma
mais lenta e sincronizada, resultando na induo
de clulas efetoras, que iro combater o agente, e
de clulas de memria, que possuem vida longa
e que sero efetivamente reestimuladas em exposies posteriores ao mesmo agente.
A diviso entre a resposta imune inata e
adquirida no absoluta, e essas duas formas
de resposta esto interligadas, atuando conjuntamente no combate aos agentes agressores. Os
principais protagonistas da conexo entre essas
respostas so as clulas dendrticas (dendritic cells,
DCs). Essas clulas circulam pelos tecidos perifricos, onde capturam antgenos, e se dirigem aos
rgos linfides secundrios, onde estimulam as
clulas linfides. Alm disso, as infeces vricas
so acompanhadas de estmulos qumicos e celulares que formam uma intrincada rede de informaes, que visam maximizar o mecanismo imunolgico mais efetivo contra a maioria dos vrus:
os linfcitos T citotxicos (Tc).
Os componentes da imunidade inata so ativados precocemente aps a infeco e se encarregam de limitar e restringir a replicao viral at
que os mecanismos da resposta imune adquirida
tenham sido desencadeados. Na resposta inata
contra vrus, atuam principalmente o interferon
do tipo I (IFN-I), clulas natural killer (NK) e os
componentes ativos do complemento. A resposta
imune adquirida mediada por clulas (linfcitos T) e por molculas circulantes (anticorpos),
produzidas por clulas derivadas dos linfcitos
B. As citocinas (ou interleucinas [ILs]) so peptdeos produzidos por uma variedade de clulas
que moderam e inuenciam a funo de outras
clulas do sistema imunolgico.

A resposta imune inata (tambm denominada natural ou inespecca) mediada por clulas e
molculas. Previamente estimulao dessa resposta, mecanismos naturais de proteo contra a
penetrao de patgenos, como a pele, os plos,
o muco, enzimas, peptdeos antivirais e anti-bacterianos representam as barreiras iniciais contra
os agentes infecciosos. A ausncia ou disfuno
desses mecanismos provavelmente resultaria em
um aumento da freqncia e da severidade das
infeces. Embora sejam considerados componentes da imunidade inata, essas barreiras no
sero abordadas nessa reviso. Aqui, ser dado
enfoque aos mecanismos imunolgicos naturais
que efetivamente participam da imunidade antiviral e, principalmente, que cooperam com a ativao da resposta imune especca.
A resposta imune inata assim denominada
em razo de algumas caractersticas peculiares,
tais como: a) atua imediatamente aps o contato com o agente; b) no discrimina diferentes
tipos de antgenos; c) atua com intensidade relativamente constante e d) no possui memria.
questionvel se, agindo isoladamente, a resposta
inata seria capaz de erradicar uma infeco vri-

240

Captulo 9

os receptores celulares tambm parece estimular


a produo de IFN-I. Qualquer clula nucleada
capaz de produzir IFN-I em resposta a uma infeco por vrus, mas evidncias recentes indicam
que as DCs plasmacitides (pDCs) representam a
principal fonte dessa citocina.
O IFN-I produzido por clulas infectadas
secretado no meio extracelular e se distribui localmente, interagindo com as clulas vizinhas
e induzindo um estado de resistncia antiviral
(Figura 9.2). Essa interao mediada por receptores especcos na superfcie celular, que esto
amplamente distribudos nos tecidos. A ligao
do IFN-I aos receptores desencadeia uma srie
de sinais intracelulares que induzem a transcrio de genes cujos produtos esto envolvidos na
resposta mediada pelos IFNs. Os principais efeitos antivirais do IFN-I so devidos degradao
de RNAs mensageiros (mRNA) e inibio da traduo. Dessa forma, esta citocina inibe a sntese
de protenas na clula-alvo, tornando-a um meio
imprprio para a replicao viral, uma vez que
os vrus dependem integralmente da maquinaria
celular de sntese protica para a sua replicao.

ca estabelecida. No entanto, os seus mecanismos


efetores se constituem em obstculos importantes, que retardam a progresso do processo infeccioso, controlando-o temporariamente e, assim,
permitindo o desenvolvimento da imunidade especca. Os principais componentes da resposta
inata contra vrus so representados pelo IFN-I,
sistema complemento, clulas NK e DCs. Esses
mecanismos so desencadeados seqencialmente
aps a infeco vrica e antecedem o desenvolvimento dos mecanismos especcos (Figura 9.1).

2.1 Interferon
O primeiro obstculo infeco viral representado pelos IFN-I, que foram justamente
identicados pela sua capacidade de interferir
com a replicao viral. O IFN-I compreende dois
tipos principais: interferon alfa (IFN- ) e interferon beta (IFN- ), que so produzidos por vrios
tipos de clulas em resposta s infeces vricas.
Vrios vrus so potentes indutores de IFN-I, e
a sua induo est associada com a produo de
RNA de ta dupla no interior da clula durante a
replicao viral. A interao de alguns vrus com

4
1

Aumento da
expresso
do MHC-I

Ativao de:
Clulas NK;
Linfcitos Tc;
Macrfagos.

Estado de -resistncia antiviral


(inibio da sntese protica, degradao de mRNA)

Figura 9.2. Induo e principais funes do IFN-I na resposta imune inata. A presena de RNA de fita dupla em
clulas infectadas por vrus induz a produo de IFN-I (1), que secretado no meio extracelular (2). O IFN-I interage
com receptores nas clulas vizinhas (3) e desencadeia uma srie de reaes que resultam na induo de um estado de
resistncia antiviral (4). O IFN-I tambm promove um aumento na expresso do MHC-I (5), alm de ativar clulas NK,
linfcitos Tc e macrfagos (6).

241

Resposta imunolgica contra vrus

O IFN-I desencadeia uma srie de reaes


intracelulares que levam expresso da enzima
2-5-adenilato sintetase. Essa enzima sintetiza
oligmeros de adenina (oligo-A), que, por sua
vez, ativam a endorribonuclease RNAse L. A
ativao da RNAse L resulta na degradao de
mRNA celulares e virais. Alm disso, o IFN-I
promove a ativao da enzima protena kinase R
(PKR), que fosforila e inativa o fator de iniciao
da traduo (elongation initiation factor 2 - eIF-2).
Com isso, a traduo de mRNAs celulares e virais
tambm ca inibida. Outro grupo de IFN-I induz
um estado antiviral pela induo das protenas
Mx, que tambm contribuem para a inibio da
sntese protica celular.

O IFN-I atua tambm como fator de sobrevivncia para as pDCs, promove o desenvolvimento, maturao e atividade microbiocida dos
macrfagos e ativa as clulas NK, que, por sua
vez, interagem sinergisticamente com as DCs.
Alm de seu papel na imunidade inata, o
IFN-I possui um papel importante no desenvolvimento da imunidade especca, por meio de
diferentes mecanismos, tais como: a) induo da
expresso de molculas do complexo de histocompatibilidade principal do tipo I (MHC-I), o
que favorece o processamento e a apresentao
de antgenos endgenos; b) ativao das DCs,
produzindo um aumento da expresso de receptores e produo de citocinas; c) estimulao da

10

8
Fagcito

9
12
11

7
NK

Clula
infectada

Linfcitos Tc

5
3

Dcs
Clulas vizinhas

Figura 9.3. Mecanismos efetores associados com a resposta imune inata. A infeco viral (1) resulta na produo e
secreo de IFN-I pelas clulas infectadas (2). O IFN-I secretado induz um estado de resistncia antiviral nas clulas
vizinhas (3); ativa clulas NK (4), DCs (5), linfcitos Tc (6) e estimula a atividade fagoctica dos macrfagos (7).
Simultaneamente, a presena de vrions pode levar ativao do complemento (8); cujos componentes ativados
atraem e ativam fagcitos (9, 10), opsonizam vrions, facilitando a fagocitose (11) ou promovem a lise de vrus
envelopados (12).

242

sobrevivncia e proliferao de linfcitos T de


memria; d) estimulao da produo de interferon gama (IFN- ) pelas DCs e linfcitos T; e)
participao direta e indireta na diferenciao e
atividade dos linfcitos B. Os mecanismos de ativao e as atividades desempenhadas pelo IFN-I
na resposta imune infeces vricas esto ilustrados nas Figura 9.2 e 9.3.

2.2 Sistema complemento


O sistema complemento composto por um
conjunto de protenas presentes no plasma sangneo na forma inativa. Essas protenas podem
ser ativadas pela presena de complexos imunes,
formados pela ligao de imunoglobulinas com
antgenos (via clssica de ativao), pela deposio espontnea do componente C3b do complemento na superfcie de microorganismos (via alternativa) ou devido ligao com protenas que
se ligam manose (via da lecitina). A ativao
do complemento por qualquer uma dessas vias
resulta em uma cascata de ativao seqencial,
com a formao de molculas intermedirias que
possuem diversas atividades biolgicas, principalmente ligadas ativao do processo inamatrio. Dentre as funes dos componentes ativados do complemento destacam-se: opsonizao;
quimiotaxia e ativao de neutrlos e outras
clulas inamatrias; degranulao de mastcitos com conseqente vasodilatao e aumento da
permeabilidade capilar e formao do complexo
de ataque membrana (membrane attack complex,
MAC), formado pela associao dos componentes C5-9 e que se inserem na membrana de clulas
infectadas ou no envelope de vrions, resultando
na sua destruio.
O componente mais importante do complemento denominado C3, que, a partir da ativao da cascata, clivado de forma contnua e espontnea, gerando os produtos C3a e C3b. Uma
vez produzido, o C3b se deposita em superfcies
que no possuam cido silico, como o envelope
de diversos vrus, e, assim, desencadeia a cascata
de ativao do complemento, que culmina com a
formao do MAC e com a destruio do vrion. A
presena de cido silico na superfcie das clulas
animais (e eventualmente em algumas bactrias

Captulo 9

e fungos) torna-as resistentes ao complemento,


pois inibe a ligao de alguns componentes que
do continuidade cascata e posterior formao
do MAC.

2.3 Clulas natural killer


As clulas natural killer (NK) so derivadas
de progenitores linfides da medula ssea e foram
assim denominadas em razo de sua capacidade
de destruir clulas tumorais e clulas infectadas
por vrus na ausncia de um reconhecimento antgeno-especco. Constituem o que se convencionou chamar de terceira populao de linfcitos
(linfcitos B, T e clulas NK). Por no possurem
marcadores especcos de linfcitos B ou de linfcitos T, foram inicialmente chamadas de clulas
nulas (null cells). As clulas NK esto presentes
principalmente nos tecidos linfides perifricos e
atuam direta, pela capacidade de destruir clulas
infectadas, e indiretamente mediante a secreo
de citocinas. A atividade das clulas NK precede
a ativao da resposta imune especca. A destruio de clulas infectadas por vrus realizada
inicialmente pelas clulas NK e, posteriormente,
pelos linfcitos Tc.
A capacidade das clulas NK em distinguir
clulas infectadas de clulas no-infectadas est
relacionada com a presena de receptores inibidores da destruio (killing inhibitory receptors = KIR)
na sua superfcie. Esses receptores reconhecem as
molculas do complexo de histocompatibilidade
principal do tipo I (MHC-I), que esto presentes
na superfcie de virtualmente todas as clulas do
organismo. A expresso do MHC-I est geralmente reduzida em clulas infectadas por vrus e
em clulas tumorais. Dessa forma, utilizando os
receptores KIR, as clulas NK podem detectar se
uma clula est expressando molculas do MHCI em nveis normais. A ligao dos KIR em molculas do MHC-I inibe a ao das clulas NK. No
caso da expresso das molculas de MHC-I estar
reduzida, essa clula torna-se alvo de destruio
pelas clulas NK.
O mecanismo utilizado pelas clulas NK
para destruir as clulas-alvo semelhante ao utilizado pelos linfcitos Tc. O contato com a clula
infectada estimula as NK a liberarem perforinas

243

Resposta imunolgica contra vrus

no meio extracelular. As perforinas so protenas


semelhantes aos componentes C5-C9 do complemento e produzem pequenos poros na membrana plasmtica da clula-alvo. As clulas NK liberam ento as granzimas, que penetram por estes
poros e induzem morte celular por apoptose.
Durante a resposta inata, as clulas NK destroem clulas infectadas independentemente do
reconhecimento de antgenos especcos. No curso da resposta imune especca e aps a produo
de anticorpos antivirais, as clulas NK tambm
podem participar da destruio de clulas infectadas. Nesse caso, anticorpos produzidos contra
antgenos virais se ligam em antgenos virais presentes na superfcie das clulas infectadas. Essa
ligao facilita o seu reconhecimento pelas clulas NK, pois estas possuem receptores para a poro Fc das imunoglobulinas. Essa atividade denominada citotoxicidade celular dependente de
anticorpos (antibody dependent cellular citotoxicity,
ADCC) e tambm pode ser mediada por outras
clulas que possuem receptores para a poro Fc
(macrfagos, neutrlos e eosinlos).
Alm de destruir clulas infectadas por vrus, as clulas NK contribuem para a defesa antiviral pela secreo de vrias citocinas, incluindo
o IFN- e fator de necrose tumoral alfa (TNF- ).
Essas clulas tambm possuem receptores para
vrias citocinas (IL-2, IL-12 e TNF- ) que podem
inuenciar na sua atividade.

2.4 Clulas dendrticas


As clulas dendticas (DCs) constituem uma
populao heterognea de clulas que diferem
entre si em relao origem, fentipo, localizao, funo e necessidades para o desenvolvimento. As DCs que se originam de progenitores
mielides da medula ssea so semelhantes aos
moncitos e so denominadas de DCs mielides
(mDCs). Por outro lado, as DCs que se originam
dos progenitores linfides so denominadas de
DCs plasmacitides (pDCs) e se assemelham aos
plasmcitos. As mDCs so encontradas em quase todos os tecidos e rgos, com exceo do
crebro, dos olhos e dos testculos. So especialmente abundantes nos linfonodos, na pele e em
tecidos subjacentes a superfcies mucosas, locais

freqentes de penetrao de agentes virais. As


clulas de Langerhans (LC), por exemplo, esto
localizadas na epiderme; DCs intersticiais esto
localizadas na derme, nas mucosas e em tecidos
perifricos. Por outro lado, as pDCs encontramse principalmente nos rgos linfides, como a
medula ssea, timo, bao, tonsilas e linfonodos.
As mDCs desempenham a importante funo de
apresentar antgenos aos linfcitos T e transferir
antgenos aos linfcitos B, eventos que se constituem no principal elo entre a imunidade inata e
a imunidade adquirida. Alm disso, as pDCs so
as principais clulas produtoras de IFN-I durante
as infeces virais e participam ativamente da estimulao das clulas NK.

2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK


As DCs estimulam as clulas NK por meio
de mediadores solveis e tambm por contato direto. A interao entre as DCs e as clulas NK
importante para a ativao das prprias DCs. A
ativao das DCs pelas clulas NK depende de
contato direto, da proporo NK:DCs e de citocinas como o TNF- . Clulas NK pr-ativadas por
IL-2 so potentes estimuladoras das DCs, agindo
tanto de forma isolada como em sinergismo com
estmulos inamatrios, como os lipopolissacardeos (LPS). A interao entre as clulas NK e
DCs parece ocorrer nos locais da infeco, onde
existem DCs imaturas residentes e para onde
migram as clulas NK em resposta a estmulos
inamatrios. Essa interao pode ocorrer tambm nos linfonodos e em outros rgos linfides
secundrios, para onde as DCs migram aps capturar antgenos nos tecidos perifricos.

2.4.2 O papel das DCs na resposta


imune adquirida
As DCs constituem o principal elo entre a
imunidade inata e a imunidade adquirida. As
DCs so especializadas na captura e apresentao de antgenos aos linfcitos T, evento essencial
para a estimulao dessas clulas em resposta a
antgenos. Por sua vez, a estimulao de linfcitos
Th resulta na produo de citocinas que ativam
tanto a resposta mediada por clulas (Tc) como a
resposta humoral (linfcitos B plasmcitos). Os

244

estmulos para a proliferao dessas clulas so


fornecidos por mediadores solveis (citocinas ou
interleucinas) produzidos pelas prprias DCs, ou
no microambiente dos linfonodos, onde os linfcitos so ativados.
As DCs encontram-se nos principais locais
de penetrao dos vrus e tambm nos linfonodos
e em outros tecidos linfides secundrios. Conseqentemente, o contato dos vrus ou de suas
protenas com as DCs praticamente inevitvel
e fundamental para que as DCs processem adequadamente os antgenos virais e os apresentem
s diferentes populaes de linfcitos.
Os mecanismos envolvidos na resposta imune inata contra vrus esto ilustrados na Figura
9.3.

3 Resposta imune adquirida


Os mecanismos imunolgicos especcos
contra as infeces vricas so desencadeados
aps a estimulao direta ou indireta dos linfcitos T e B pelos antgenos virais e possuem como
caractersticas principais: especicidade (cada clula reconhece apenas um determinante antignico); diversidade (capacidade de reconhecer uma
grande variedade de antgenos) e memria imunolgica (capacidade de produzir uma resposta
qualitativa e quantitativamente diferente em exposies subseqentes a um determinado antgeno). Alm disso, a resposta imune especca se
caracteriza pela tolerncia a antgenos do prprio
organismo.
De acordo com os mecanismos efetores, a
resposta imune especca pode ser dividida em
celular e humoral. A resposta celular mediada pelos linfcitos T auxiliares (T helper ou Th)
e linfcitos Tc. A resposta humoral mediada
pelos anticorpos produzidos pelos plasmcitos,
clulas derivadas dos linfcitos B. Embora sejam
tratados separadamente com ns didticos, os
mecanismos envolvidos nessas duas respostas
so complementares e atuam conjuntamente no
combate s infeces vricas. A importncia relativa desses mecanismos, no entanto, varia entre
os diferentes vrus, de acordo com a sua biologia.
Para alguns vrus, a resposta mediada por linfci-

Captulo 9

tos Tc fundamental na erradicao da infeco;


para outros, a resposta humoral desempenha um
papel mais importante na proteo. O conhecimento dos mecanismos especcos envolvidos na
resposta imunolgica contra cada vrus fundamental para a elaborao de vacinas.
A etapa inicial da resposta imunolgica especca o reconhecimento de antgenos pelos
linfcitos Th, Tc e B. Em resposta ao contato com
o antgeno, os linfcitos Th secretam vrias citocinas, que estimulam a atividade de outras clulas
envolvidas na resposta imunolgica. Os linfcitos
Tc reconhecem e destroem clulas infectadas por
vrus e tambm secretam algumas citocinas. Estimulados pelo contato com o antgeno, os linfcitos B proliferam e se diferenciam em plasmcitos.
Os anticorpos, produzidos pelos plasmcitos so
protenas solveis que possuem diversas funes
no combate aos agentes invasores.

3.1 Reconhecimento de antgenos pelo


sistema imunolgico
A capacidade de distinguir antgenos prprios de antgenos no-prprios (neste caso, os
antgenos virais) se constitui no evento central
da resposta imune adquirida. Antgenos noprprios devem ser reconhecidos como tal, e o
seu reconhecimento deve induzir uma resposta
que resulte na sua eliminao e/ou inativao.
Por outro lado, os antgenos prprios devem ser
igualmente reconhecidos, porm devem ser tolerados. Ou seja, antgenos do prprio organismo
no devem estimular uma resposta imunolgica. A resposta imunolgica especca contra vrus mediada por diferentes subpopulaes de
linfcitos: os linfcitos Th, Tc e B. Essas trs populaes de linfcitos apresentam mecanismos
efetores distintos e reconhecem os antgenos de
formas diferentes. A seguir sero apresentados
os mecanismos de reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos B e T.

3.1.1 Reconhecimento de antgenos


pelos linfcitos B
Os linfcitos B reconhecem os antgenos virais atravs de receptores de membrana denomi-

245

Resposta imunolgica contra vrus

nados BCRs (B cell receptors). Os BCRs so molculas de imunoglobulinas das classes IgD e IgM,
que possuem uma regio altamente varivel, capaz de se ligar a uma variedade muito grande de
determinantes antignicos. Os BCRs podem se
ligar a antgenos de qualquer natureza qumica,
sejam protenas, carboidratos, lipdios ou outras
macromolculas, ou seja, os linfcitos B podem
reconhecer e responder a antgenos proticos e
no-proticos, desde que esses possuam regies
complementares s regies variveis dos seus
BCRs. Isso faz com que os linfcitos B reconheam antgenos na sua forma nativa, solvel ou
no, sem a necessidade de processamento prvio.
No caso dos vrus, os principais antgenos reconhecidos pelos linfcitos B so as protenas de
superfcie dos vrions, devido a sua localizao
e acessibilidade aos BCRs. Protenas virais inseridas em membranas celulares, alm de protenas secretadas pelas clulas infectadas, tambm
podem estimular os linfcitos B. Os linfcitos B
tambm podem reconhecer antgenos virais capturados e armazenados na superfcie das DCs,
sob a forma de pequenas esferas (icossomos). Do
ponto de vista de proteo, os anticorpos induzidos contra protenas de superfcie (do capsdeo
ou envelope) possuem importncia especial, pois
podem se ligar e neutralizar a infectividade dos
vrus.
Os locais de contato entre os antgenos e os
linfcitos B locais de reconhecimento do antgeno so principalmente os rgos linfides perifricos, dentre estes, os linfonodos.

3.1.2 Reconhecimento de antgenos


pelos linfcitos T
O reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T mais complexo e requer que o antgeno
seja previamente processado e apresentado por
clulas e molculas especializadas. Os linfcitos T no so capazes de responder a antgenos
em sua forma nativa, solvel ou no, e somente
so estimulados por antgenos proticos, ou seja,
apenas as protenas virais estimulam a resposta
celular. Dependendo da sua origem e da forma
como so processadas, as protenas virais podem
ser reconhecidas pelos linfcitos Th, pelos Tc ou

por ambos. A forma de reconhecimento de antgenos por esses dois tipos de linfcitos, no entanto, diferente:

3.1.2.1 Reconhecimento de antgeno


pelos linfcitos Th
Os linfcitos Th reconhecem antgenos virais
atravs de seus receptores de membrana, denominados TCRs (T cell receptors), juntamente com
a molcula acessria CD4. Por isso, so tambm
chamados de linfcitos T CD4+. Para que um antgeno protico seja reconhecido pelo complexo
TCR+CD4 e estimule o linfcito Th, ele deve ser
previamente processado e apresentado de forma
adequada por clulas especializadas. O processamento do antgeno protico envolve a sua internalizao por endocitose ou fagocitose, clivagem
enzimtica em peptdeos de 12 a 16 aminocidos
e conjugao dos peptdeos com molculas do
complexo de histocompatibilidade principal do
tipo II (MHC-II). Esses processos ocorrem em
compartimentos citoplasmticos especializados
(endossomos, fagossomos e retculo endoplasmtico). Os complexos MHC-II + peptdeo so, ento, transportados at a superfcie celular, onde
cam expostos espera do reconhecimento pelos
linfcitos Th. O reconhecimento dos complexos
MHC-II + peptdeos realizado pelos receptores
TCR+CD4 existentes na membrana dos linfcitos
Th e resulta na ativao desses linfcitos. Essa
via de apresentao denominada exgena, pois
ocorre com protenas extracelulares que so previamente internalizadas e processadas. Protenas
estruturais dos vrions, protenas virais secretadas pelas clulas infectadas ou extravasadas no
meio extracelular aps a lise celular podem ser
processadas desta maneira e ser apresentadas
aos linfcitos Th. Em resumo, os linfcitos Th reconhecem antgenos virais proticos, desde que
devidamente processados e apresentados em associao com molculas do MHC-II por clulas
especializadas (Figura 9.4).
Embora um nmero grande de clulas do organismo seja capaz de capturar protenas e outras
macromolculas no meio externo e process-las,
somente um grupo restrito de clulas expressa
molculas do MHC-II. Dentre estas, incluem-se

246

Captulo 9

Linfcito Th

1
4

2
3

ncleo
Clula apresentadora
de antgeno (APC)

Figura 9.4. Apresentao de antgenos virais extracelulares e resposta por linfcitos Th. Antgenos virais
extracelulares so internalizados por endocitose e/ou fagocitose (1) e processados proteoliticamente no interior de
vesculas (2), gerando peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-II no retculo endoplasmtico (3). Os
complexos peptdeo-MHC-II so transportados at a superfcie celular (4), onde so reconhecidos pelos linfcitos Th
(5). Os linfcitos Th, estimulados por esse contato, secretam interleucinas (6) que possuem diversas aes
modulatrias sobre as clulas envolvidas na resposta imunolgica.

as clulas da linhagem monoctica/macrofgica


(moncitos, macrfagos, CDs, clulas interdigitantes e LC), algumas clulas endoteliais e os
linfcitos B. Ou seja, somente essas clulas so capazes de apresentar antgenos virais presentes no
meio extracelular (exgenos) aos linfcitos Th. As
clulas que possuem como funo precpua a captura, processamento e apresentao de antgenos
aos linfcitos Th so denominadas genericamente
clulas apresentadoras de antgenos (APCs) prossionais e, dentre estas, destacam-se as DCs e os
macrfagos. Embora no se constituam em APCs
prossionais, os linfcitos B tambm apresentam
antgenos virais de forma eciente aos linfcitos
Th. A via exgena de apresentao de antgenos

aos linfcitos Th est representada esquematicamente na Figura 9.4.

3.1.2.2 Reconhecimento de antgeno


pelos linfcitos Tc
Os linfcitos Tc reconhecem protenas virais
atravs dos TCRs, juntamente com a molcula
acessria CD8. Por isso, essas clulas tambm so
chamadas de linfcitos T CD8+. Para que as protenas virais sejam reconhecidas pelos receptores
TCR+CD8 e estimulem os linfcitos Tc, tambm
devem ser adequadamente processadas e apresentadas. No entanto, essa forma de processamento e apresentao somente ocorre com as

247

Resposta imunolgica contra vrus

protenas sintetizadas no interior das clulas durante a infeco, e no com protenas extracelulares que so internalizadas. Por isso, essa via de
apresentao denominada endgena. Protenas
virais produzidas no interior das clulas durante
o ciclo replicativo so clivadas enzimaticamente
em peptdeos de 8 a 12 aminocidos, que so conjugados com molculas do MHC-I. Os complexos
MHC-I+peptdeos virais so transportados at
a superfcie celular, onde cam expostos (Figura 9.5). Esse um processo siolgico e resulta
tambm na apresentao de fragmentos de protenas celulares. No entanto, apenas os peptdeos
resultantes da clivagem das protenas virais so
capazes de estimular os linfcitos Tc. O reconhe-

cimento dos complexos MHC-I+peptdeo realizado pelos complexos TCR+CD8 existentes na


membrana dos linfcitos Tc. Essa interao gera
estmulos que, em conjunto com citocinas produzidas pelos Th e DCs, levam ativao dos linfcitos Tc. Resumindo, os linfcitos Tc reconhecem
protenas virais endgenas, aps o seu processamento e conjugao com molculas do MHC-I.
Como, virtualmente, todas as clulas do organismo com exceo dos neurnios expressam o
MHC-I, a infeco de quaisquer dessas clulas
por vrus ir resultar no reconhecimento e resposta mediada por linfcitos Tc. Acredita-se, no
entanto, que as DCs sejam mais efetivas na induo dos linfcitos Tc, pois, alm da apresentao

Linfcito Tc

7
6

1
5

Replicao viral
...
prossegue...

4
3

ncleo

Qualquer clula nucleada

Figura 9.5. Apresentao de antgenos virais endgenos e resposta por linfcitos Tc. Aps a penetrao do vrus (1), as
protenas virais so produzidas pelo aparato celular de traduo (2). Parte dessas protenas so processadas pelos
proteassomos (3), resultando em peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-I no RE (4). Esses complexos
so transportados at a superfcie celular (5), onde sero reconhecidos pelos linfcitos Tc (6). Ativados pelo contato
com o antgeno e por citocinas, os linfcitos Tc liberam o contedo citotxico de seus grnulos (7), destruindo a clula
infectada.

248

Captulo 9

do MHC-I+ peptdeos, so capazes de fornecer


os sinais adicionais para a ativao integral dos
Tc. Essa via de apresentao e reconhecimento de
antgenos muito importante na resposta a infeces vricas, pois permite ao sistema imunolgico
reconhecer clulas infectadas por vrus e ativar o
mecanismo mais efetivo para a sua destruio, os
linfcitos Tc. Tanto as protenas estruturais como
as no-estruturais produzidas durante a replicao viral podem ser processadas e apresentadas
aos linfcitos Tc. A via endgena de apresentao
de antgenos aos linfcitos Tc est representada
esquematicamente na Figura 9.5.

As DCs desempenham um papel muito importante no processo de apresentao de antgenos a outras clulas do sistema imunolgico. As
DCs podem ser infectadas por uma variedade de
vrus e, assim, apresentar fragmentos de protenas virais conjugadas com o MHC-I aos linfcitos
Tc. Alm de apresentar esses antgenos, as DCs
fornecem estmulos qumicos (citocinas) para a
ativao integral desses linfcitos (Figura 9.6). As
DCs podem detectar vrions ou protenas virais
atravs de receptores do tipo TLR 7 e 9, resultando em uma cascata de eventos intracelulares que
as induzem a produzir citocinas e acelerar o seu

Linfcito Th

2a

2b

3
1

Clula
dendrtica

Linfcito Tc

Linfcito B

8
5

CTL

Plasmcito

9
Clula infectada

Figura 9.6. Interaes entre as DCs e os linfcitos e estimulao da resposta adquirida. As DCs so capazes de
apresentar peptdeos exgenos aos linfcitos Th (1), estimulando-os a produzir citocinas do tipo Th1 (2a) ou Th2 (2b).
O reconhecimento de antgenos em soluo ou nos icossomos da superfcie das DCs (3), juntamente com as citocinas
do tipo Th2, estimula os linfcitos B a proliferar (4) e se diferenciar em plasmcitos, que so clulas secretoras de
anticorpos (5). Os linfcitos Tc podem reconhecer antgenos endgenos na superfcie de clulas infectadas ou nas
DCs (6). Este reconhecimento, juntamente com as citocinas do tipo Th1 (2a), ativa os linfcitos Tc que se tornam CTLs
(7). Ao reconhecerem o mesmo padro antignico (MHC-I+ peptdeo viral) na membrana de clulas infectadas (8), os
CTLs descarregam o seu arsenal citotxico que resulta em apoptose e morte celular (9).

Resposta imunolgica contra vrus

processo de maturao. As DCs possuem prolongamentos citoplasmticos denominados dendritos, que aumentam a sua superfcie, facilitando, com isso, a interao com as demais clulas
do sistema imunolgico. As DCs so capazes de
capturar e armazenar antgenos em pequenas esferas na sua superfcie, denominadas icossomos.
Dessa forma, as DCs podem oferecer e transferir
antgenos para outras DCs, para macrfagos e
mesmo para os linfcitos B. As interaes entre
as DCs e as clulas envolvidas na resposta imune
adquirida esto ilustradas na Figura 9.6
O contato entre os antgenos e as clulas do
sistema imunolgico apresentao e reconhecimento de antgenos ocorre principalmente nos
linfonodos e outros tecidos linfides secundrios.
Nesses tecidos, o microambiente existente favorece as interaes entre o antgeno, as DCs e outras
APCs, linfcitos T e B e clulas acessrias, resultando na estimulao eciente de uma gama de
clulas envolvidas com a resposta imunolgica
especca. Alm de se constituir no evento central da imunidade adquirida, o reconhecimento
de antgeno e a conseqente estimulao de populaes de linfcitos T e B representa a etapa
inicial da resposta imunolgica especca.

3.2 Resposta imune celular


A resposta imune especca mediada por
clulas representada pela atividade dos linfcitos T, pois a participao das demais clulas (macrfagos, DCs e clulas NK) faz parte da resposta
inata e ocorre de forma inespecca. Os mecanismos efetores dos linfcitos Th e Tc so distintos.
Os linfcitos Th modulam a resposta imunolgica atravs das citocinas, que agem estimulando e
modulando a atividade de uma variedade de clulas do sistema imune. Os linfcitos Tc possuem
a funo precpua de identicar e destruir clulas
infectadas por vrus.
De acordo com as citocinas produzidas, dois
tipos de respostas mediadas por linfcitos Th podem ser identicadas: as respostas do tipo Th1 e
Th2. A resposta do tipo Th1 caracterizada pela
secreo de IFN-I, IL-2, IL-12 e TNF- . Essas citocinas atuam principalmente na estimulao
da imunidade celular (linfcitos Tc, DCs, clulas

249

NK e macrfagos). A resposta do tipo Th2 caracteriza-se pela secreo de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10,
citocinas que atuam principalmente na ativao
da imunidade humoral. Essas citocinas possuem
papel importante na ativao, proliferao e diferenciao de linfcitos B e secreo de anticorpos, ou seja, as citocinas produzidas pelos Th em
resposta ao antgeno estimulam tanto a resposta
celular como a resposta humoral. O balano entre
as respostas do tipo Th1 e Th2 depende da biologia de cada vrus e de suas interaes com o
sistema imunolgico.
A funo principal dos Tc na resposta antiviral a destruio de clulas infectadas por
vrus. Para muitas infeces vricas, a resposta
celular, mediada pelos Tc, representa a forma
mais eciente de combate e erradicao da infeco. A ativao dos linfcitos Tc ocorre aps
o reconhecimento de antgenos apresentados por
clulas infectadas. Esta ativao depende de dois
estmulos bsicos: a estimulao resultante do
reconhecimento dos complexos peptdeo-MHC-I
na superfcie das clulas clulas infectadas e as
citocinas produzidas pelas DCs ou pelos linfcitos Th ativados (Figura 9.6). Os complexos peptdeo-MHC-I so reconhecidos exclusivamente
pelo TCR e CD8 dos linfcitos Tc. Aps a sua
ativao, esses linfcitos tornam-se competentes
para destruir as clulas que apresentem o mesmo complexo peptdeo-MHC-I que induziu a sua
estimulao. Esses complexos sero encontrados
nas clulas que albergam o vrus infectante. Os
linfcitos Tc ativados e capazes de destruir clulas infectadas so denominados CTLs (citotoxic T
lymphocytes). Ao entrar em contato com a clula
infectada, os linfcitos Tc aderem a ela por meio
do complexo TCR/CD8 e de outras molculas de
superfcie. Essas interaes resultam na reorganizao do citoesqueleto, polarizando o linfcito
Tc com o objetivo de descarregar o seu arsenal
citotxico sobre a clula infectada. Entre os componentes citotxicos dos linfcitos Tc encontramse as perforinas, que possuem a capacidade de
induzir a formao de poros na clula-alvo. Os
linfcitos Tc tambm secretam as granzimas, que
penetram nas clulas atravs dos poros e ativam
mecanismos intracelulares que culminam com a
morte programada da clula (apoptose). Poste-

250

riormente, o linfcito Tc desprende-se da clula


e parte em busca de novas clulas-alvo, caracterstica que lhe confere o codinome de serial killer
entre as clulas do sistema imunolgico. O mecanismo de destruio celular pelos linfcitos Tc
similar ao desencadeado pelas clulas NK.

3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na


imunidade antiviral
Clulas infectadas por vrus podem produzir
milhes de novas partculas virais em um perodo
de poucas horas. A disseminao dos vrions entre as clulas ocorre pela liberao de partculas
virais no meio extracelular ou pela transmisso
direta dos vrions entre clulas. A transmisso
direta entre clulas minimiza a possibilidade de
um encontro indesejado dos vrions com as clulas e molculas do sistema imunolgico. Nesse
caso, as nicas defesas das clulas infectadas so
a produo de IFN-I e a apresentao dos antgenos virais associados ao MHC-I. Dessa forma,
a presena do vrus no interior das clulas pode
ser detectada pelas clulas vizinhas (via IFN-I) e
pelos linfcitos Tc.
A estratgia do organismo em utilizar os
linfcitos Tc para destruir precocemente clulas
infectadas muito apropriada, pois prefervel
destruir pequenas fbricas de vrions a tentar inativar milhes de partculas vricas disseminadas
no organismo e com o potencial de infectar novas clulas. O processamento e apresentao de
protenas virais aos linfcitos Tc em fases iniciais
da infeco permite ao hospedeiro identicar e
destruir as clulas infectadas antes do incio da
produo da prognie viral. No obstante, alguns
vrus desenvolveram estratgias para evitar ou
retardar o reconhecimento de clulas infectadas,
a m de assegurar a concluso do ciclo replicativo e a liberao de prognie viral.

3.3 Resposta imune humoral


A resposta especca humoral mediada
pelas imunoglobulinas (Igs), popularmente conhecidas como anticorpos. As Igs so produzidas
e secretadas pelos plasmcitos, que so clulas
originadas da proliferao e diferenciao dos

Captulo 9

linfcitos B em resposta a antgenos (Figura 9.7).


As Igs apresentam cinco classes principais, com
estrutura e funes diferentes: IgG, IgM, IgA, IgE
e IgD. Imunoglobulinas das classes IgM e IgD so
tambm encontradas na superfcie dos linfcitos
B, onde servem de receptores (BCRs) para o reconhecimento de antgenos por essas clulas.
Devido aos mecanismos de diversidade e
especicidade, cada linfcito B e a sua prognie
possuem BCRs idnticos entre si e com a capacidade para reconhecer um nico determinante antignico. Felizmente, o organismo possui bilhes
de linfcitos B com BCRs diferentes e, por isso,
capazes de reconhecerem e responderem a uma
variedade virtualmente innita de antgenos. A
capacidade de reconhecimento de antgenos pelos linfcitos B depende exclusivamente do BCR
e, conseqentemente, os linfcitos B podem reconhecer antgenos solveis e tambm antgenos
no-proticos. Ou seja, os linfcitos B reconhecem
os antgenos em sua forma nativa, sem a necessidade de processamento e apresentao prvios,
como ocorre com os linfcitos T.
A ativao dos linfcitos B depende da sua
interao com os antgenos virais (via BCR) e da
ao de citocinas secretadas pelos linfcitos Th,
tambm em resposta ao reconhecimento do antgeno. As DCs desempenham um papel fundamental nesse processo, pois podem transferir antgenos aos linfcitos B por meio dos icossomos
e, simultaneamente, apresentar antgenos ao linfcitos Th (Figuras 9.6 e 9.7).
Por outro lado, os linfcitos B, aps reconhecerem um antgeno, podem interagir diretamente
com os linfcitos Th, em um processo de estimulao recproca. importante ressaltar que os linfcitos B, alm de secretarem imunoglobulinas,
tambm so excelentes APCs, ou seja, podem
apresentar antgenos associados ao MHC-II aos
linfcitos Th. As citocinas produzidas pelos Th,
juntamente com o reconhecimento do antgeno
pelo BCR, resultam em estimulao, proliferao
e diferenciao dos linfcitos B em plasmcitos,
clulas secretoras de anticorpos. As DCs tambm
podem fornecer citocinas importantes para uma
adequada estimulao dos linfcitos B.
O contato com o antgeno e as citocinas produzidas pelos Th estimulam os linfcitos B a se

251

Resposta imunolgica contra vrus

multiplicarem de forma rpida e abundante. As


clulas resultantes dessa proliferao podem ter
dois destinos: a grande maioria se diferencia em
plasmcitos e uma minoria se diferencia em clulas de memria. Os plasmcitos possuem vida

relativamente curta; as clulas de memria possuem vida longa. Tanto os BCRs presentes na
membrana dos linfcitos B de memria como as
imunoglobulinas secretadas pelos plasmcitos
possuem a mesma especicidade dos BCRs do

Vaso aferente
1

Th
5

2
7

Proliferao

Crtex

Diferenciao

Centros
germinativos
10

Clula de
memria

Linfonodo

Ativao

Clulas
dendrticas

Plasmcitos

11

Vaso eferente

Figura 9.7. Mecanismos envolvidos na estimulao dos linfcitos B e produo de anticorpos. Partculas vricas ou
antgenos virais drenados pela linfa nos tecidos perifricos penetram nos linfonodos pelos vasos aferentes (1). Esses
antgenos podem ser reconhecidos diretamente pelos linfcitos B (2) ou em icossomos na superfcie das DCs (3).
Tanto as DCs como os linfcitos B podem processar e apresentar antgenos virais aos linfcitos Th (4, 5), que secretam
citocinas em resposta (6). Estas citocinas atuam nos linfcitos B, estimulando a sua proliferao (7) e diferenciao em
plasmcitos (8) ou em clulas de memria (9). Os plasmcitos secretam grande quantidade de anticorpos (10) que tm
acesso aos lquidos corporais (11). Clulas fagocticas e/ou DCs podem tambm penetrar nos linfonodos j com
antgenos virais capturados nos tecidos perifricos e os apresentar aos linfcitos Th e B.

252

linfcito B que os deu origem. A estimulao e


proliferao dos linfcitos B ocorrem nos rgos
linfides secundrios, sobretudo nos linfonodos.
Os anticorpos produzidos so secretados no meio
extracelular e atravs dos vasos eferentes podem
ter acesso corrente sangnea e, posteriormente, aos tecidos. Os processos de reconhecimento
do antgeno, proliferao e diferenciao dos linfcitos B esto ilustrados esquematicamente na
Figura 9.7.

3.4 Respostas primria e


secundria/memria imunolgica
Os linfcitos possuem um perodo de vida
relativamente curto aps a sua produo a partir dos progenitores linfides na medula ssea.
No entanto, a sua sobrevivncia pode ser prolongada desde que encontrem o antgeno que os
estimule a proliferar e se diferenciar, ou seja, os
linfcitos que no encontram o antgeno que os
estimule possuem vida curta; aqueles que encontram o antgeno complementar ao seu BCR tm a
sua vida prolongada. Dessa forma, a presena de
antgenos especcos no organismo literalmente
resgata os linfcitos da morte, estimulando-os a
proliferar e se diferenciar, gerando uma resposta
imune, denominada resposta primria. O principal
evento da resposta primria a expanso dos
clones de linfcitos que possuem receptores para
os antgenos introduzidos pela primeira vez no
organismo. Porm, a maioria das clulas originadas pela expanso clonal se diferenciar em clulas de vida curta, os plasmcitos. Os plasmcitos
exercem a sua funo de secreo de Igs e sobrevivem por algumas semanas ou meses. Felizmente, aps a expanso clonal, uma frao pequena
dos linfcitos estimulados no se diferencia em
plasmcitos, e sim em clulas de memria. Estas mantm a capacidade de reconhecimento do
mesmo antgeno que as estimulou (pois possuem
os BCRs com especicidade idntica aos da clula original) e sobrevivem no organismo por um
longo tempo. As clulas de memria habitam a
medula ssea e circulam pelo organismo. Ao encontrarem o mesmo antgeno que as estimulou
previamente (vrions ou protenas virais), essas
clulas respondem rapidamente, produzindo

Captulo 9

uma resposta proliferativa e de diferenciao rpida e intensa. Essa resposta denominada resposta imune secundria. Embora mais estudados
em linfcitos B, pela facilidade de quanticao
dos anticorpos, os eventos envolvidos na resposta primria e secundria provavelmente ocorram
de forma semelhante aos linfcitos T. A resposta
primria a um determinado vrus pode resultar
de infeco natural ou de vacinao e prepara o
sistema imunolgico para responder e montar
uma resposta secundria caso ocorra uma reexposio posterior ao agente.
A memria imunolgica de linfcitos B e T
diferente. A produo contnua de anticorpos
especcos tem sido detectada vrias dcadas
aps a infeco por alguns vrus. Como a vida
mdia dos anticorpos no organismo de poucas
semanas, isto indica que ocorre uma produo
contnua de anticorpos para que os nveis sejam
mantidos. Uma possvel explicao para esse fato
de que linfcitos B de memria seriam constantemente reestimulados a se diferenciarem em
plasmcitos secretores de Igs, pois os plasmcitos possuem vida curta. O contato freqente com
o antgeno e as conseqentes reestimulaes
podem decorrer da reexposio ao prprio microorganismo ou resultar de reatividade cruzada
com antgenos semelhantes, prprios ou heterlogos. Alm disso, recentemente foi observado
que as DCs possuem a capacidade de armazenar
antgenos em seus dendritos por perodos prolongados e liber-los lentamente para os linfcitos de memria, provocando a sua reestimulao
contnua. Isso poderia proporcionar uma estimulao prolongada no somente dos linfcitos de
memria, mas tambm de linfcitos que ainda
no haviam sido estimulados (naive ou virgens).
Estes, ao chegarem aos rgos linfides, encontrariam com o antgeno pela primeira vez, gerando novamente uma resposta imune primria e,
conseqentemente, a produo de mais linfcitos
de memria.
Ao contrrio da fase efetora da resposta humoral cuja produo de anticorpos pode persistir por longos perodos a fase efetora da resposta
celular de curta durao. A presena prolongada de linfcitos Th e Tc efetores seria deletria
para o organismo, pois a secreo persistente de

253

Resposta imunolgica contra vrus

citocinas e a atividade citoltica continuada poderiam resultar em imunopatologia. Aps a fase


efetora, as clulas T de memria so encontradas
com freqncia mais alta e podem responder com
mais rapidez e ecincia a estmulos antignicos
secundrios. A rapidez e ecincia com que as
clulas T de memria se deslocam para os stios
de infeco e respondem a estmulos secundrios
faz com que no seja necessria a preexistncia
de clulas efetoras para gerar uma resposta protetora.
Uma das questes fundamentais na resposta
imune est relacionada com os mecanismos que
garantem a sobrevivncia e manuteno das clulas T e B de memria. A estabilidade da memria dos linfcitos Tc, por exemplo, mantida por
divises celulares lentas e continuadas. As clulas B de memria podem ser mantidas por estimulaes paralelas, ou seja, por citocinas produzidas pelas clulas Th e DCs em resposta a outros
antgenos. No entanto, embora a medula ssea
apresente o ambiente ideal para a manuteno,
replicao e sobrevivncia dessas clulas, acredita-se que a reexposio e contato com o antgeno
sejam importantes para a manuteno das clulas
B de memria. Com isso, as reestimulaes contribuiriam para a reposio das clulas secretoras
de Igs e a conseqente manuteno dos nveis de
anticorpos circulantes.
O conhecimento dos eventos que ocorrem
durante a resposta primria e secundria fundamental para o entendimento das bases imunolgicas da proteo induzida por vacinas. A
vacinao induz uma resposta primria, com a
conseqente expanso de clones de linfcitos B
e T especcos para os antgenos vacinais. Com
isso, so produzidos plasmcitos e linfcitos T
efetores, que possuem vida curta; e, principalmente, clulas B e T de memria, que possuem
vida longa e so capazes de responder ao mesmo
padro antignico que induziu a sua proliferao. A infeco subseqente de um animal vacinado ir induzir uma resposta secundria, com
estimulao e proliferao muito mais rpida e
intensa de linfcitos T e B, pois o nmero dessas
clulas especcas para o antgeno agora muito
maior, resultado da expanso clonal da resposta
primria. Esta infeco resulta em estimulao

dos linfcitos de memria, que proliferam e se diferenciam em clulas efetoras, a exemplo do que
ocorreu na resposta primria, porm com muito
maior ecincia e rapidez. O resultado a produo de linfcitos Th e Tc efetores e de plasmcitos
secretores de anticorpos, que se encarregam de
combater o vrus invasor.

3.5 As imunoglobulinas na defesa


antiviral
A importncia dos anticorpos na imunidade
antiviral tem sido muito discutida e parece variar de acordo com a biologia do vrus e tambm
com o estgio da infeco (infeco primria versus reinfeco). Como os anticorpos aparecem
apenas tardiamente durante a infeco primria,
acredita-se que desempenhem um papel secundrio na erradicao dessa infeco. O papel principal nesses casos seria assumido pelos linfcitos
Tc. Os anticorpos teriam participao mais efetiva na proteo em casos de reinfeco, quando
atuariam limitando e restringindo a penetrao e
disseminao do vrus no organismo. Alm dessa
diferena, a importncia relativa dos anticorpos
e da imunidade celular variam de acordo com a
biologia e interaes de cada vrus com o hospedeiro.
Os principais locais de produo de anticorpos pelos plasmcitos so os centros germinativos dos linfonodos e as regies equivalentes
dos outros rgos linfides secundrios. As Igs
esto presentes nos uidos do organismo (plasma sangneo, saliva, lgrima, urina, colostro/
leite, muco, secrees, lquido cfalo-raquidiano
e lquido sinovial) e so capazes de se ligar especicamente no determinante antignico que
induziu a sua formao. Para vrias infeces
virais, a quantidade de Igs especcas presentes
no soro sangneo pode ser correlacionada com
proteo. Por isso, esse parmetro utilizado
para o monitoramento dos provveis nveis de
proteo e da necessidade de novas imunizaes.
Considerando-se que a resistncia antiviral devese, em grande parte, atividade dos linfcitos Tc
(que efetivamente destroem clulas infectadas), a
quanticao dos anticorpos no pode ser considerada o indicador nico de proteo. No obs-

254

tante, a sorologia muito utilizada para se avaliar


os nveis de imunidade como um todo, visto que
os mtodos para detectar e quanticar a funo
de linfcitos T so de difcil aplicao.

3.5.1 Mecanismos de ao
das imunoglobulinas
As Igs possuem vrias atividades biolgicas
que potencialmente podem estar envolvidas na
resposta antiviral. Algumas dessas atividades j
foram demonstradas in vivo e a sua participao
na resposta antiviral parece ser inquestionvel;
outras somente foram demonstradas inequivocadamente in vitro e/ou possuem um papel controverso na resposta imunolgica contra os vrus. A
seguir so listadas as principais atividades antivirais dos anticorpos (essas atividades na defesa
contra vrus esto ilustradas na Figura 9.8):
Neutralizao: a interao dos vrions com
os receptores celulares para o incio da infeco
mediada por regies especcas das protenas
de superfcie dos vrions (anti-receptores). Anticorpos produzidos contra essas regies possuem
a capacidade de se ligar aos vrions e impedir a
interao com os receptores celulares, neutralizando a sua infectividade. Esses anticorpos so
denominados genericamente neutralizantes e
constituem uma parcela do total de anticorpos
produzidos contra os vrus. Anticorpos com atividade neutralizante so direcionados contra protenas de superfcie dos vrions. A neutralizao
de partculas virais pode ocorrer por Igs da classe IgA, presente nas mucosas e em secrees; ou
por IgM e IgG, presentes no plasma sangneo.
Um dos desaos da vacinologia a induo de
proteo slida nas mucosas, pela estimulao de
IgA com capacidade de neutralizar as partculas
vricas nos locais mais freqentes de penetrao
viral (sistema respiratrio, digestrio e reprodutivo) e, assim, impedir a instalao da infeco.
A neutralizao da infectividade o mecanismo
mais direto de ao dos anticorpos contra vrus e,
talvez, o mais importante;
Aglutinao: as IgM e IgG possuem a capacidade de aglutinar partculas virais e, com
isso, facilitar a sua remoo mediada pelo sistema complemento e por clulas fagocticas;

Captulo 9

Opsonizao: o revestimento de partculas


vricas por molculas de imunoglobulinas (IgM e
IgG) facilita a ligao e remoo dessas partculas pelas clulas fagocticas, via receptores para a
poro Fc das Igs. A ativao do sistema do complemento tambm gera fragmentos capazes de
opsonizao viral (C3b);
Ativao do complemento: a ligao das
Igs aos antgenos resulta em alteraes tridimensionais na sua regio Fc, expondo stios de
ligao para o componente C1 do complemento,
iniciando a sua ativao em cascata. O resultado
a estimulao de vrios mecanismos da imunidade inata (vasodilatao, aumento da permeabilidade capilar, quimiotaxia para fagcitos, entre
outros) e a formao do MAC sobre a superfcie
dos vrions, o que pode resultar na inativao
da infectividade dos vrus envelopados. A ligao de anticorpos em protenas virais inseridas
na membrana de clulas infectadas pode ativar o
complemento e levar formao do MAC. Com
isso, a clula infectada pode sofrer lise osmtica.
Esse mecanismo pode tambm ocorrer com bactrias;
Citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos (ADCC): durante a replicao de alguns vrus, certas protenas virais
podem ser inseridas na membrana plasmtica da
clula infectada. Anticorpos especcos so produzidos contra essas protenas e se ligam a elas na
superfcie celular. Com isso, a clula infectada se
torna alvo para algumas clulas do sistema imunolgico que possuem receptores para a poro
Fc das Igs (clulas NK e neutrlos) e destroem
a clula. Embora a ADCC tenha sido amplamente demonstrada in vitro, a sua importncia in vivo
ainda desconhecida;
Outras atividades dos anticorpos: embora as Igs desempenhem funes bencas para a
manuteno da integridade e funcionalidade do
organismo, pelo combate a agentes infecciosos
potencialmente nocivos, eventualmente podem
participar de processos que so prejudiciais ao
hospedeiro. A presena de grande quantidade
de antgenos no plasma sangneo pode levar
formao disseminada de complexos antgenoanticorpo. Esses complexos geralmente so removidos pelas clulas fagocticas. No entanto,
quando esto em excesso, depositam-se em locais

255

Resposta imunolgica contra vrus

Tc
6

Figura 9.8. Atividades dos anticorpos na resposta contra vrus. Neutralizao da infectividade (1), aglutinao (2),
opsonizao e fagocitose (3), ativao do complemento (4), lise de vrus envelopados mediada por complemento (5),
ADCC (6) e lise celular mediada por complemento dependente de anticorpos (7).

como as superfcies articulares e tbulos renais


e, freqentemente, causam imunopatologia. O
revestimento de vrions com anticorpos sem atividade neutralizante pode, ao invs de neutraliz-lo, potencializar a sua infectividade. Essas Igs
so reconhecidas por clulas que possuem receptores para a poro Fc (moncitos e macrfagos),
resultando na internalizao eciente de vrions
recobertos com anticorpos, facilitando a infeco
dessas clulas, ou seja, os anticorpos aumentam
a ecincia de penetrao desses vrions. Esse
mecanismo denominado Antibody Dependent
Enhancement (ADE) e tem sido descrito para v-

rios vrus, dentre os quais o vrus da dengue, o


coronavrus felino e o vrus da imunodecincia
humana (HIV). O papel da ADE na patogenia
dessas doenas, no entanto, ainda tema de debates.

3.6 O papel das respostas celular e


humoral na imunidade antiviral
Os avanos no estudo da imunologia antiviral tm resultado na emergncia de importantes
componentes e mecanismos anteriormente relegados a papis secundrios na resposta imune,

256

como as DCs. No entanto, o papel exato de cada


componente na intrincada cadeia de relaes celulares e moleculares que resultam na eliminao
de uma determinada infeco vrica ainda no
est satisfatoriamente esclarecido. O esclarecimento desses mecanismos depende do entendimento detalhado da biologia e da patogenia de
cada infeco e das interaes peculiares de cada
vrus com o sistema imunolgico. No obstante,
pode-se armar que os linfcitos Tc so fundamentais na erradicao da infeco primria, pela
destruio das clulas infectadas. Os anticorpos
no teriam grande participao no combate infeco primria, pois aparecem tardiamente no
curso da infeco. Seriam de fundamental importncia por ocasio de uma reexposio ao agente,
prevenindo e/ou limitando a infeco atravs de
neutralizao viral e de outros mecanismos que
restringiriam a disseminao do vrus no organismo. Caberia aos linfcitos Th o papel de coordenar e moderar as duas respostas (humoral,
mediada por linfcitos B; e celular, mediada por
linfcitos Tc) pela secreo de citocinas.

4 Mecanismos virais de evaso da


resposta imune
A ocorrncia contnua de doenas virais somente possvel devido ao sucesso desses microorganismos em produzir infeces, resistir ou
escapar dos mecanismos antivirais do hospedeiro e se disseminar para outros hospedeiros susceptveis. Hospedeiros imunes impedem a progresso da infeco, o que reduz drasticamente
a possibilidade de transmisso do vrus para outros animais. Dezenas ou centenas de milhares de
anos de coexistncia, alm da rapidez com que
os vrus se multiplicam e evoluem geneticamente, permitiram o desenvolvimento de estratgias
que lhes permitem evitar ou resistir s defesas do
hospedeiro, causando infeces produtivas, agudas ou crnicas, e garantindo a sua manuteno e
perpetuao na natureza. Dentre os mecanismos
utilizados pelos vrus para compatibilizar a sua
existncia e perpetuao, apesar dos mecanismos imunolgicos do hospedeiro, destacam-se
os seguintes: infeces latentes no sistema nervoso central, variaes antignicas, induo de

Captulo 9

tolerncia, integrao do material gentico viral


no genoma do hospedeiro, infeco de stios imunologicamente privilegiados e interferncia com
funes do sistema imunolgico.

4.1 Infeces latentes no sistema


nervoso central
O estabelecimento de infeces latentes
um eciente mecanismo de perpetuao no hospedeiro utilizado pelos vrus da famlia Herpesviridae. A fase de latncia, que se segue infeco
aguda, caracterizada pela presena do genoma
viral inativo em neurnios, sem sntese protica
ou produo de prognie viral. Como conseqncia, a infeco desses neurnios no detectada
pelo sistema imunolgico e essas clulas podem
manter o material gentico viral indenidamente. No entanto, sob determinadas circunstncias,
geralmente associadas com estresse, ocorre a
reativao e a retomada da replicao viral nos
neurnios infectados. Os vrions produzidos migram pelos axnios de volta aos locais de replicao primria, de onde so excretados, podendo
infectar outros hospedeiros. O estabelecimento e
reativao de infeces latentes, portanto, constituem-se em estratgias dos herpesvrus para
escapar do sistema imunolgico e garantir a sua
perpetuao no hospedeiro e na populao. Infeces latentes ocorrem com os herpesvrus bovino tipo 1 e 5 (BoHV-1 e 5), herpesvrus suno
(doena de Aujeszky), herpesvrus felino tipo 1
(FHV-1), herpesvrus eqinos tipo 1 e 4 (EHV-1 e
4), entre outros.

4.2 Variaes antignicas


Alteraes na seqncia de aminocidos de
determinantes antignicos em protenas de superfcie dos vrions permite o escape da neutralizao por anticorpos e uma estratgia muito
utilizada pelos vrus, principalmente os vrus
RNA. Essas alteraes surgem como resultado
dos erros cometidos pela enzima RNA polimerase viral durante a replicao do genoma. Como
conseqncia, aminocidos diferentes so freqentemente incorporados durante a sntese das
protenas virais, alterando a sua seqncia e es-

Resposta imunolgica contra vrus

trutura, podendo resultar no no-reconhecimento pelos anticorpos produzidos contra os epitopos


originais. Vrions com alteraes antignicas podem, assim, escapar da resposta imune existente
naquele momento no hospedeiro, principalmente
da imunidade humoral, e infectar novas clulas.
A presena desses novos determinantes antignicos elicitar a sntese de anticorpos com uma nova
especicidade. Porm, novas variaes podero
ser posteriormente produzidas e novamente alguns variantes podem escapar da neutralizao.
Essas variaes antignicas discretas, geralmente
associadas com a acumulao de mutaes em
ponto, so denominadas genericamente de antigenic drift e tm sido bem caracterizadas nos vrus
da inuenza, embora ocorram tambm em outros
vrus. Alteraes antignicas mais drsticas ocorrem quando os vrus da inuenza trocam entre si
os genes que codicam as protenas do envelope
(HA e NA), resultando em vrus antigenicamente
muito diferentes dos parentais. Esse mecanismo
denominado antigenic shift e tem sido implicado
no surgimento de vrus de maior patogenicidade,
responsveis por epidemias de grandes propores.

4.3 Induo de tolerncia


Em condies normais, o sistema imunolgico possui tolerncia, ou seja, no reage contra os
antgenos do prprio organismo. Ocasionalmente o sistema imunolgico pode se tornar tolerante
tambm a antgenos estranhos, contra os quais
deveria produzir uma resposta. Um exemplo o
que ocorre quando fetos bovinos so infectados
por cepas no-citopticas do vrus da diarria viral bovina (BVDV) entre os 40 e 120 dias de gestao. Nessa fase, o sistema imunolgico do feto
ainda est imaturo e no reconhece os antgenos
virais como estranhos. Com isso, no ocorre a estimulao e proliferao de linfcitos B e T e, como
conseqncia, o feto ca incapaz de montar uma
resposta contra o vrus. Os fetos imunotolerantes nascem persistentemente infectados (PI) pelo
BVDV e excretam o vrus continuamente em secrees e excrees. Os animais PI se constituem
no ponto-chave da epidemiologia do BVDV, pois
so fontes contnuas de vrus para os outros ani-

257

mais. Essa condio s possvel pela tolerncia


do sistema imunolgico aos antgenos virais.

4.4 Integrao do material gentico viral


no genoma do hospedeiro
Os vrus da famlia Retroviridae podem persistir no hospedeiro durante toda a sua vida, mesmo na presena da resposta imune. O mecanismo
de persistncia resulta de dois aspectos da biologia desses vrus: a) possuem a capacidade de inserir cpias do seu genoma nos cromossomos das
clulas hospedeiras e b) possuem a enzima denominada transcriptase reversa, responsvel pela
transcrio reversa do genoma (RNA para DNA),
mas que no corrige os seus prprios erros. Com
isso, a cada ciclo so produzidas populaes de
vrus compostas por indivduos com pequenas
diferenas genticas entre si (quasiespecies). A
insero do material gentico viral garante que
a infeco seja permanente, e as alteraes antignicas que resultam de cada ciclo de replicao
viral asseguram que alguns vrions produzidos
possam escapar da resposta imune para infectar
novas clulas. Dentre as infeces por retrovrus
animais destacam-se a anemia infecciosa eqina
e a imunodecincia felina.

4.5 Infeco de stios imunologicamente


privilegiados
Os tecidos e rgos aos quais os componentes do sistema imunolgico no possuem acesso
imediato e irrestrito so denominados genericamente stios de privilgio. Os neurnios do SNC,
por exemplo, no expressam de forma constitutiva as molculas do MHC-I, o que diculta o
reconhecimento da infeco celular e a ao dos
linfcitos Tc. Conseqentemente, os vrus que infectam neurnios so privilegiados, pois as clulas hospedeiras no denunciam a sua presena.
Por outro lado, a falta de expresso de molculas
do MHC-I pode ser considerada um mecanismo
de proteo, evitando a destruio de clulas to
importantes. Da mesma forma, a barreira hematoenceflica restringe o acesso de algumas clulas
imunolgicas ao SNC. So tambm considerados
stios de privilgio as clulas da epiderme (onde

258

ocorrem infeces pelos vrus da papilomatose),


as clulas germinativas das gnadas (onde pode
ocorrer a infeco pelo vrus da sndrome reprodutiva e respiratria dos sunos, PRRSV), retina,
clulas dos tbulos renais (utilizadas pelos hantavrus e arenavrus) e tecidos fetais (diversos vrus).

4.6 Interferncia com funes do


sistema imunolgico
Os estudos sobre as relaes vrus-clula e
sobre a biologia dos vrus permitiram elucidar
vrios mecanismos utilizados pelos vrus para
subverter o sistema imunolgico, por meio da interferncia com a funo das clulas e molculas
imunolgicas. Essa interferncia freqentemente
leva a decincias na resposta imunolgica, conseqncias denominadas genericamente de imunossupresso. Cada vrus utiliza uma estratgia
especca, dependendo da sua biologia, o que
torna impraticvel enumer-las aqui. No entanto,
como mecanismos gerais, citam-se: a) destruio,
inibio ou induo da maturao das DCs, o
que altera o padro de secreo de citocinas e de
expresso de receptores nas DCs, resultando em
prejuzo nas suas relaes com as demais clulas
do sistema imunolgico, principalmente os linfcitos T; b) destruio ou alterao das funes
dos linfcitos T; c) interferncia com a apresentao de antgenos, inibindo a ao das protenas
TAP-1 e TAP-2 e inibio da formao do complexo peptdeo-MHC-I no retculo endoplasmtico (RE); d) produo de protenas que inibem
a funo das citocinas; e) produo de protenas
que protegem a clula infectada da ao do IFN-I
e do TNF- e f) infeco dos linfcitos B, induzindo alterao na secreo de imunoglobulinas.

5 Consideraes finais
inquestionvel o avano no entendimento dos mecanismos imunolgicos estimulados
durante as infeces vricas. Os imunologistas
aprendem imunologia com os vrus, cujas interaes com o sistema imunolgico so repletas de
estratgias para driblar ou conviver com os mecanismos imunolgicos e, assim, perpetuar-se nas

Captulo 9

espcies animais. Observando a trajetria desses


fascinantes microorganismos e de suas complexas interaes celulares e moleculares, percebese o quanto ainda h para descobrir em relao
aos mecanismos imunolgicos protetores. Tanto
verdade que o surgimento do HIV renovou o
interesse dos pesquisadores pela imunologia. A
partir de ento, o descobrimento de novas infeces e o desao de vencer velhos conhecidos fez
da imunologia uma das reas do conhecimento
que mais rapidamente acumula informaes.
Paralelamente aos avanos no conhecimento das interaes dos vrus com o sistema imunolgico e dos mecanismos utilizados por esses agentes para se perpetuarem no hospedeiro
surgem importantes linhas de pesquisa na rea
de desenvolvimento de vacinas. Um dos maiores avanos dos ltimos anos foi a elucidao do
papel central das DCs na resposta s infeces
virais. Essas clulas se constituem no elo de ligao entre mecanismos imunolgicos naturais
e especcos. Juntamente com a descoberta da
importncia das DCs, novos questionamentos direcionam as investigaes futuras que, necessariamente, devero considerar a manipulao de
vetores virais para maximizar a resposta imune
com vistas produo de vacinas.

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