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V819
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INTRODUO
A presente obra foi concebida para preencher uma lacuna existente na bibliograa dedicada
Virologia Veterinria na lngua portuguesa. O crescimento notvel do ensino e pesquisa em Virologia
Animal no Brasil, nas ltimas dcadas, infelizmente no foi acompanhado por um aumento equivalente na literatura disponvel. Neste perodo, o acmulo fantstico de conhecimentos acerca da gentica e biologia dos agentes virais, proporcionado pelo desenvolvimento e popularizao das tcnicas
moleculares, tem tornado algumas obras clssicas gradativamente desatualizadas e obsoletas. Existem bons livros de Virologia Animal e excelentes tratados de Virologia Geral e Molecular na lngua
inglesa. No entanto, esses textos so temporariamente inacessveis a uma parcela considervel dos
estudantes de graduao que se interessam e ingressam no mundo fascinante da Virologia. Esta obra,
pois, tem por objetivo fornecer aos iniciantes em Virologia, que, porventura, sejam tambm iniciantes
na lngua inglesa, um contedo atualizado e abrangente da Virologia Animal, com nfase aos animais
de interesse veterinrio.
O presente texto direcionado aos iniciantes em Virologia, sejam eles estudantes de graduao,
ps-graduao ou mdicos veterinrios; e tem como objetivo fornecer informaes bsicas sobre a
estrutura, biologia, patogenia, diagnstico e controle dos principais vrus de interesse veterinrio. Os
principais aspectos da biologia molecular e replicao viral so abordados de maneira simples e de
fcil compreenso, para embasar o entendimento da patogenia, resposta imunolgica e diagnstico
dessas infeces. A omisso de informaes mais detalhadas sobre a biologia molecular dos vrus foi
intencional. Tal detalhamento est um pouco alm da informao usualmente buscada por iniciantes
em livros-texto. Por outro lado, os estudantes em nveis mais avanados podem recorrer a excelentes
livros existentes na lngua inglesa.
Um grande desao enfrentado durante a elaborao deste texto foi acompanhar a dinmica das
descobertas e constataes na rea da Virologia Molecular. A dinmica do conhecimento gerado nesta
rea exigir atividades de reviso e atualizao constantes do contedo, sob a pena de deix-lo obsoleto em poucos anos. Os avanos nas reas de vacinologia e teraputica antiviral tambm se intensicaram neste perodo, permitindo aos autores relatar as mais recentes conquistas cientco-tecnolgicas
nessas reas.
A dinmica das interaes dos vrus com os seus hospedeiros no ambiente natural tambm representa um desao para a elaborao de textos descritivos. No perodo de elaborao desta obra
aproximadamente trs anos surgiram novos vrus e novas doenas; e vrus j conhecidos cruzaram
a barreira de espcies e infectaram hospedeiros inusitados. Ou seja, a evoluo natural das infeces
vricas no ambiente natural to dinmica que exige uma reviso contnua de conceitos.
Este livro encontra-se dividido em duas partes. A parte inicial aborda os aspectos gerais da Virologia Animal, discorrendo sobre a estrutura, classicao e nomenclatura, gentica e evoluo, mtodos de deteco e identicao de vrus, aspectos gerais da replicao viral, replicao de vrus DNA
e RNA, patogenia das infeces, epidemiologia, imunidade a vrus, diagnstico laboratorial e vacinas.
Embora o enfoque desta parte seja direcionado para a Virologia Animal, os conceitos e aspectos nela
tratados so tambm aplicveis a vrus que infectam humanos. Assim, este texto pode til tambm
para os demais estudantes das reas biomdicas.
A segunda parte trata individualmente das famlias virais de importncia em medicina veterinria. Os captulos foram elaborados seguindo algumas orientaes com relao organizao e contedo. Dessa forma, cada captulo especco dividido em duas partes: a seo inicial aborda os aspectos
gerais da respectiva famlia, a estrutura dos vrions, a estrutura e organizao genmica, expresso
gnica, replicao do genoma e o ciclo replicativo. Um dos maiores desaos enfrentados na elaborao deste texto foi obter um equilbrio entre o nvel de aprofundamento nos aspectos biolgicos e
moleculares com a nfase necessria nos aspectos epidemiolgicos, clnico-patolgicos e diagnsticos.
Os aspectos moleculares da biologia dos vrus foram abordados de maneira simplicada para facilitar
o entendimento por iniciantes da rea. Um maior detalhamento nos aspectos biolgicos e moleculares
da estrutura e replicao dos vrus pode ser encontrado nos livros especializados.
A segunda parte de cada captulo especco dedicada s doenas de importncia veterinria causadas por membros das respectivas famlias. Esta seo discorre acerca das caractersticas do
agente, epidemiologia, patogenia, sinais clnicos e patologia, diagnstico, controle e prolaxia das
doenas por ele causadas. Algumas famlias possuem vrios vrus associados com doenas animais
de importncia sanitria e econmica; enquanto outras possuem poucos patgenos animais. Por isso,
a disparidade de contedo e extenso dos diferentes captulos. O ltimo captulo apresenta algumas
famlias virais que possuem importncia limitada em medicina veterinria. Algumas dessas famlias
abrigam patgenos exclusivamente humanos; outras abrigam vrus que infectam somente animais
sem interesse econmico ou afetivo; enquanto outras congregam vrus cujo interesse maior reside nos
seus aspectos biolgicos e moleculares.
Os autores
AGRADECIMENTOS
Uma obra deste porte somente poderia ser elaborada com a colaborao de vrias pessoas. E
nada mais justo do que agradecer a todos aqueles que tornaram possvel concretiz-la. Aos colegas
colaboradores, pela disposio em dedicar uma parte importante do seu tempo na elaborao dos
captulos. desnecessrio list-los aqui, pois os seus nomes se encontram nos respectivos captulos
ou sees.
Aos colegas e amigos de longa data, com quem a elaborao de um livro de Virologia Veterinria
foi tema de inumerveis conversas e planos em congressos e reunies cientcas nestes ltimos 15
anos. Janice Ciacci-Zanella, Clarice Arns, Ana Paula Ravazollo, Amauri Aleri, Luciane Lovato,
Mauro Moraes, Paulo Roehe, Luiz Carlos Kreutz e Rudi Weiblen, entre outros, o meu agradecimento
e a certeza de que este livro representa a concretizao de um sonho de todos ns.
O agradecimento aos colegas estrangeiros, que entenderam a importncia de um livro-texto
como este e dedicaram parte de seu tempo para auxiliar a elabor-lo: Drs. Julie Ridpath, John Neill,
Luis Rodriguez, Gael Kurath, Fernando Osorio, Maria Elisa Piccone, Gustavo Delhon, Elisabeth Rieder e Hernando Duque.
Devo um agradecimento especial a trs colegas que contriburam muito alm da elaborao dos
respectivos captulos, participando de vrios outros, enviando sugestes, traduzindo, revisando e reformulando os textos submetidos: Dr Luiz Carlos Kreutz, Dra. Fernanda Silveira Flores Vogel e Md.
Vet. doutoranda Renata Dezengrini.
Gostaria de externar o meu reconhecimento e gratido equipe do Setor de Virologia da UFSM,
composta por mestrandos e doutorandos, que participaram ativamente de todo o processo de elaborao, edio e reviso desta obra. Grande parte da qualidade e propriedade deste texto se deve s
interminveis discusses e revises de captulos, patrocinadas por um grupo cheio de entusiasmo
e motivao. Ao Mrio Celso S. Brum, Diego G. Diel, Evandro Winkelmann, Sabrina R. Almeida,
Sandra Arenhart, Andria Henzel, Renata Dezengrini, Mariana S e Silva, Helton dos Santos, Letcia
Frizzo da Silva e Marcelo Weiss, com certeza de que vocs possuem parte importante nessa obra.
Agradeo tambm aos colegas professores Slvia Hbner (UFPEL) e Valria Lara Carregaro
(UFSM) pelas revises e colaborao em captulos especcos. profa. Maristela Brger Rodrigues,
pela reviso gramatical; Carolina Gehlen, pela diagramao; Zlide Bayer Zucheto e prof. Honrio
Rosa Nascimento, da Editora da UFSM, pelo apoio para que a edio deste livro fosse possvel.
Alm do apoio da Editora da UFSM, parte do trabalho grco (elaborao de guras, diagramao, reviso gramatical) e pagamento de direitos autorais foram custeados com recursos da taxa de
bancada de Produtividade em Pesquisa do CNPq do Organizador. A arte nal e capa somente foram
possveis com o auxlio do Centro de Cincias Rurais, na pessoa do seu Diretor, prof. Dalvan Jos
Reinert, e da vice-reitoria, pelo Prof. Felipe Mller, a quem agradecemos.
Quero tambm manifestar o meu agradecimento e admirao pelo trabalho grco magnco
realizado pelos acadmicos do Curso de Desenho Industrial da UFSM, Lase Miolo Moraes e Mrcio
Oliveira Soriano. Eles foram os responsveis diretos por grande parte das ilustraes desta obra; e
responsveis indiretos pela parte restante, cuja confeco lhes foi subtrada pelo seu entusiasmado
aprendiz. Ao nal do trabalho, tivemos como resultados: um conjunto formidvel de ilustraes; dois
Eduardo Furtado Flores natural de Santa Maria, RS (25/10/61); com graduao (1983) e mestrado
(1989) em Medicina Veterinria pela Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Possui PhD em
Virologia Molecular pela Universidade de Nebraska/Lincoln, Estados Unidos (1995). professor do
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva da UFSM desde 1991, responsvel pelas disciplinas de Epidemiologia Geral Veterinria e Sade Pblica Veterinria na graduao; e pelas disciplinas
Epidemiologia Veterinria, Virologia Molecular e Introduo Biologia Molecular na ps-graduao.
Faz parte do Conselho Editorial da Editora da UFSM; pesquisador de produtividade em pesquisa (1C) do CNPq desde 1997; e editor adjunto de Virologia da revista Pesquisa Veterinria Brasileira.
Divide as suas atividades didticas e editoriais com a rotina de diagnstico virolgico no Setor de
Virologia (SV/UFSM) e com a orientao de bolsistas de iniciao cientca, mestrado e doutorado.
Coordena pesquisas nas reas de epidemiologia molecular e patogenia das infeces pelos vrus da
diarria viral bovina e herpesvrus bovino tipos 1 e 5.
SUMRIO
19
37
59
87
5 Replicao viral
107
137
Gustavo Delhon
165
189
237
261
295
12 Vacinas vricas
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz
327
361
Janice R. Ciacci-Zanella
14 Parvoviridae
375
15 Papillomaviridae
397
16 Adenoviridae
413
17 Herpesviridae
333
18 Poxviridae
489
19 Asfarviridae
513
Gustavo Delhon
20 Caliciviridae
525
John Neill
21 Picornaviridae
537
22 Flaviviridae
563
23 Togaviridae
593
24 Coronaviridae
613
25 Arteriviridae
639
26 Paramyxoviridae
657
27 Rhabdoviridae
Luis Rodriguez, Helena R. Batista, Paulo Michel Roehe & Gael Kurath
689
28 Orthomyxoviridae
721
Eduardo Furtado Flores, Luciane T. Lovato, Mariana S e Silva, Renata Dezengrini & Diego G. Diel
29 Bunyaviridae
755
30 Reoviridae
773
31 Retroviridae
809
839
861
Glossrio
871
PARTE I
VIROLOGIA GERAL
1 Introduo
21
21
2.1 O genoma
2.2 O capsdeo
2.3 O envelope
2.4 A matriz
23
25
28
29
3 Protenas virais
30
31
4.1 Enzimas
4.2 Outras protenas virais
4.3 Lipdios
4.4 Carboidratos
4.5 cidos nuclicos celulares
4.6 Protenas celulares
31
31
31
31
31
32
32
6 Propriedades fsico-qumicas
33
7 Bibliografia consultada
33
1 Introduo
Os vrus so os microorganismos menores e
mais simples que existem. So muito menores do
que clulas eucariotas e procariotas e, ao contrrio destas, possuem uma estrutura simples e esttica. Esses agentes no possuem a maquinaria necessria para a produo de energia metablica e
para a sntese de protenas e, por isso, necessitam
das funes e do metabolismo celular para se
multiplicar. Fora de uma clula viva os vrus so
estruturas qumicas. A sua atividade biolgica s
adquirida no interior de clulas vivas, por isso
so parasitas intracelulares obrigatrios.
O genoma viral cido ribonuclico (RNA)
ou desoxirribonuclico (DNA) codica apenas
as informaes necessrias para assegurar a sua
multiplicao, empacotamento do genoma e para
subverso de funes celulares em benefcio da
sua multiplicao. Ao contrrio de clulas eucariotas e procariotas, os vrus no crescem ou se
dividem; e sim so produzidos pela associao
dos seus componentes pr-formados no interior
da clula infectada.
A palavra vrus utilizada para designar o
agente biolgico, o microorganismo. A estrutura
fsica denominada partcula viral, partcula v-
Poxvrus
Clulas
animais
10-2
(1cm)
10-3
(1mm)
10-4
(0,1mm)
10-5
(10m)
Bactrias
10-6
(1m)
Vrus e
ribossomos
10-7
(0,1m)
Protenas
10-8
(10nm)
10-9
(1nm)
10-10
(1A)
Microscopia tica
Microscopia eletrnica
Figura 1.1. Escala logartmica mtrica, ilustrando as dimenses dos vrus comparativamente com clulas animais,
bactrias e macromolculas. O poder de resoluo das microscopias tica e eletrnica indicado por barras.
22
Captulo 1
De acordo com a estrutura bsica das partculas, dois grupos principais de vrus podem ser
reconhecidos: os vrus sem envelope e os vrus
com envelope (Figura 1.2). Os vrions mais simples so compostos pelo genoma recoberto por
uma camada simples de protena, denominada
capsdeo. Os vrus mais complexos possuem genomas longos associados com vrias protenas,
recobertos por capsdeos complexos, revestidos
externamente por uma membrana lipoprotica
de origem celular, denominada envelope. As camadas proticas que envolvem o genoma (capsdeo, envelope) so freqentemente denominadas
de envoltrios virais. Os conceitos principais relacionados estrutura e componentes dos vrions
esto apresentados no Quadro 1.1.
Genoma
Capsdeo
B
Envelope
condies ambientais que rapidamente inativariam o cido nuclico. Por isso, o capsdeo e o
envelope so crticos para a manuteno da integridade e viabilidade do genoma, que contm
as informaes essenciais para a multiplicao
do vrus. Outras funes importantes dos componentes superciais das partculas vricas so
o reconhecimento e interao com estruturas da
membrana da clula hospedeira. Essas interaes
so essenciais para a penetrao do agente na clula e incio da sua replicao.
A arquitetura e modo com que as partculas
vricas so construdas devem permitir o desempenho de duas funes fundamentais: a) proteo do genoma durante o transporte entre clulas
e entre hospedeiros, e b) liberao do genoma ntegro e vivel aps a penetrao na clula hospedeira. A evoluo fez com que a arquitetura das
partculas vricas tenha sido adequada para cumprir essas tarefas. Ou seja, os vrions so resistentes o suciente para proteger o genoma no exterior das clulas e so facilmente desintegrados ao
penetrarem na clula hospedeira, para permitir a
pronta liberao do genoma no seu interior. Essas
duas propriedades, aparentemente opostas, que
so particularmente bem evidentes em alguns vrus sem envelope, caracterizam o que se convencionou denominar de estrutura metaestvel.
VRUS - DEFINIES
E CONCEITOS
Genoma
- O genoma constitudo por RNA ou DNA.
Capsdeo
2.1 O genoma
O genoma dos vrus constitudo por molculas de cido ribonuclico (RNA) ou desoxirribonuclico (DNA), nunca pelos dois. Por isso,
esses agentes so comumente denominados de
vrus RNA ou vrus DNA. Em geral, os vrus das
diversas famlias contm apenas uma cpia do
genoma por vrion (so haplides). Uma exceo so os retrovrus, que possuem duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). A extenso,
estrutura, organizao genmica e o nmero de
genes contidos no genoma variam amplamente entre os diferentes vrus. Os menores vrus
animais (circovrus) possuem uma molcula de
DNA com aproximadamente 1.700 nucleotdeos
(1,7 quilobases, kb) como genoma; os vrus maiores possuem um genoma DNA com mais de 350
kb (poxvrus). O nmero de genes e conseqentemente o nmero de protenas codicadas
tambm varia entre os diferentes vrus. Alguns
vrus de plantas codicam apenas uma protena,
enquanto o genoma dos poxvrus codica mais
de 100.
Em geral, o genoma dos vrus muito compacto e codica apenas as protenas essenciais
para assegurar a sua replicao e transmisso.
Resumidamente, essas funes compreendem: a)
assegurar a replicao do genoma (enzimas polimerases de RNA e DNA e protenas acessrias);
b) subverter funes celulares em seu benefcio
(protease leader no vrus da febre aftosa [foot and
mouth disease virus, FMDV]) e c) empacotar o genoma (protenas do capsdeo e envelope). Essas
funes so codicadas pelo genoma de, virtualmente, todos os vrus. Alguns vrus mais complexos codicam funes adicionais que, de alguma
forma, favorecem a sua multiplicao e disseminao.
O tipo e estrutura do genoma de muitos
vrus diferem do padro clssico observado nos
cidos nuclicos de eucariotas e procariotas. Nesses organismos, o genoma constitudo por molculas de DNA de cadeia dupla (ds, double-stranded); enquanto os RNAs possuem ta simples (ss,
single-stranded). Os genomas dos vrus apresentam variaes de tipo e estrutura, que incluem
23
24
Captulo 1
Circoviridae
Parvoviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Hepadnaviridae
Polyomaviridae
Papillomaviridae
Poxviridae
Asfarviridae
25
Picornaviridae
Coronaviridae
Orthomyxoviridae
Astroviridae
Flaviviridae
Caliciviridae
Retroviridae
Arenaviridae
Reoviridae
Filoviridae
Arteriviridae
Birnaviridae
Rhabdoviridae
Togaviridae
Bunyaviridae
Paramyxoviridae
Figura 1.4. Ilustrao simplificada da morfologia dos vrions e da topologia do genoma dos vrus RNA.
2.2 O capsdeo
O capsdeo (tambm chamado de cpsula)
a camada protica que recobre externamente o
genoma. Nos vrus que no possuem envelope,
o capsdeo representa o nico envoltrio do cido nuclico viral. Alm dessa cobertura protica,
o genoma de alguns vrus encontra-se associado
com uma ou mais protenas de origem viral (p.
ex.: adenovrus e reovrus) ou da clula hospedeira (poliomavrus e papilomavrus). As protenas
que esto associadas ao genoma geralmente possuem carter bsico, sendo formadas predominantemente por aminocidos com carga positiva.
Essa estrutura, geralmente compacta (genoma +
protenas associadas), denominada core ou ncleo. O conjunto formado pelo core + capsdeo
comumente denominado nucleocapsdeo. Nos vrus envelopados, o nucleocapsdeo recoberto
26
Assim, o capsdeo pode ser formado por cpias de uma mesma protena (vrus do mosaico,
rabdovrus) ou por diferentes tipos de protenas
(mais de dez tipos diferentes nos reovrus), e todas se encontram em mltiplas cpias e so codicadas pelo genoma viral. Os capsdeos compostos por cpias mltiplas de uma mesma protena
representam um exemplo de ecincia estrutural
de armazenamento e economia de espao no genoma, pois um nico gene codica a protena necessria para formar todo o envoltrio viral. Independente do nmero de protenas que compem
o capsdeo, a associao entre essas protenas
pode resultar em capsdeos com duas simetrias
principais: icosadrica e helicoidal (Figura 1.5).
Captulo 1
27
A maioria dos vrus animais possui capsdeos icosadricos ou helicoidais, mas alguns (poxvrus, iridovrus e bacterifagos) possuem capsdeos com arquitetura mais complexa, denominados
genericamente capsdeos complexos.
Com base na arquitetura, simetria e complexidade de arquitetura, os vrions de diferentes
famlias podem ser agrupados em cinco grupos
estruturais (Figura 1.8):
1. Capsdeo icosadrico
1B
1A
2. Capsdeo helicoidal
2A
2B
28
Captulo 1
2.3 O envelope
Os vrions de vrias famlias possuem os nucleocapsdeos recobertos externamente por uma
membrana lipoprotica denominada envelope.
O envelope formado por uma camada lipdica
dupla, derivada de membranas celulares. Nessas
membranas esto inseridas um nmero varivel
de protenas codicadas pelo genoma viral. Na
maioria dos vrus, o envelope est justaposto
externamente ao capsdeo. Nos herpesvrus, entretanto, existe um espao de espessura varivel
entre o capsdeo e o envelope, que preenchido
por uma substncia protica amorfa, denominada tegumento. A quantidade e a forma adotada
pelo tegumento so variveis e, conseqentemente, determinam a variao da morfologia e
dimenses da partcula dos herpesvrus. Como o
envelope derivado de membranas celulares, e
estas so uidas e exveis, a superfcie externa
e a morfologia dos vrus envelopados so mais
exveis e menos denidas do que nos vrus sem
envelope. A estrutura de um vrion com envelope est ilustrada na Figura 1.9.
nucleocapsdeo
genoma
membrana
lipdica
envelope
glicoprotenas
29
TM
2.4 A matriz
Figura 1.10. Representao simplificada da estrutura das
glicoprotenas do envelope viral. A. Protena integral de
membrana com as regies interna (I), transmembrana
(TM) e externa (E); M. membrana lipdica; B. Duas
protenas associadas: uma integral de membrana (cinza)
associada com uma protena perifrica (preto).
Alguns vrus envelopados possuem protenas que recobrem externamente o nucleocapsdeo, mediando a sua associao com a superfcie
interna do envelope. Essas protenas, denominadas de matriz, so geralmente glicosiladas e
abundantes, podendo corresponder a at 30% da
massa total dos vrions (como nos retrovrus).
As protenas da matriz so encontradas em vrios vrus envelopados, principalmente nos vrus
RNA de polaridade negativa (exemplos: parami-
30
Captulo 1
Meio extracelular
Membrana
plasmtica
Citoplasma
Figura 1.11. Etapas do brotamento e aquisio do envelope por vrus envelopados. 1. Interao do nucleocapsdeo com
as caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope; 2-3. Insero/protuso do nucleocapsdeo atravs da
membrana; 4. Egresso da partcula completa.
PA+PB1+PB2
NP
HA
3 Protenas virais
O genoma dos vrus codica duas classes
principais de protenas: estruturais e no-estruturais. As protenas estruturais so aquelas que participam da construo e arquitetura da partcula
vrica (Figura 1.12), ou seja, esto presentes como
componentes estruturais dos vrions. Enquadram-se nessa classe as protenas do nucleocapsdeo e do envelope. As protenas do tegumento
(herpesvrus) e as protenas da matriz tambm se
constituem em protenas estruturais.
As protenas no-estruturais so aquelas codicadas pelo genoma viral e produzidas no
interior da clula hospedeira durante o ciclo replicativo, mas que no participam da estrutura
das partculas vricas. So geralmente protenas
com atividades enzimticas e/ou regulatrias
que participam das diversas etapas do ciclo replicativo do vrus e de sua interao com as organelas e macromolculas da clula hospedeira.
NA
M2
31
4.3 Lipdios
Os lipdios presentes nos envelopes virais
so tipicamente os mesmos das membranas celulares, onde os vrions adquirem o seu envoltrio
externo. Os envelopes originados da membrana
plasmtica contm principalmente fosfolipdios
(50-70%) e colesterol, enquanto os envelopes adquiridos em membranas celulares internas (nuclear, Golgi, RER) possuem pouco ou nenhum
colesterol. Os lipdios constituem entre 20 e 35%
da massa dos vrus envelopados.
4.4 Carboidratos
Os carboidratos podem estar presentes em
vrions como componentes de glicoprotenas, glicolipdios e mucopolissacardeos. Esses carboidratos esto presentes principalmente no envelope, mas os vrus complexos (poxvrus) tambm
possuem carboidratos associados com protenas
internas e/ou do capsdeo.
32
Captulo 1
33
6 Propriedades fsico-qumicas
Vrios agentes fsicos e qumicos podem
afetar a integridade funcional e infectividade dos
vrions, incluindo a temperatura e o pH. A ao
deletria da temperatura sobre a viabilidade dos
vrus possui importncia durante a manipulao
e remessa de material clnico para o diagnstico,
como tambm para a preservao de estoques virais na rotina laboratorial. Alm disso, pode ser
um fator limitante para a sua disseminao entre
hospedeiros. Temperaturas de 55 a 60C desnaturam as protenas de superfcie, sobretudo as do
envelope, em poucos minutos, tornando os vrions incapazes de interagir produtivamente com
receptores celulares e iniciar a infeco. Temperaturas ambientais altas tambm afetam negativamente a infectividade dos vrus.
Os vrus envelopados so geralmente muito
mais sensveis ao deletria de altas temperaturas sobre a infectividade. Alguns vrus, como
os paramixovrus, so particularmente susceptveis a temperaturas ambientais e tambm perdem a infectividade quando submetidos a congelamento e descongelamento. A conservao de
vrus em suspenso lquida por longos perodos
deve ser realizada a temperaturas de -70C ou em
nitrognio lquido (-196C). Outra forma segura e
eciente de armazenar vrus por longos perodos
sem perder infectividade por meio de liolizao (dessecao a temperaturas de congelamento) e conservao do material liolizado (p) a
4C ou -20C.
Para vrus em suspenso, temperaturas de 4
a 6C so compatveis com a preservao da infectividade apenas por horas ou poucos dias; temperaturas de 4 ou -20C no so indicadas para
conservao por longos perodos. A resistncia
a diferentes condies de pH varia amplamente;
alguns vrus sem envelope (rotavrus, alguns picornavrus) mantm a infectividade mesmo em
condies de pH cido e so chamados de cidoresistentes; outros, sobretudo os envelopados, so
inativados j em pH um pouco abaixo do neutro
(5 a 6) e so chamados de cido-lbeis. Agentes
qumicos que possuem ao desnaturante sobre
protenas e/ou solventes e detergentes lipdicos
possuem ao deletria sobre a infectividade dos
7 Bibliografia consultada
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determination. In: CHIU, W.; BURNETT, R.M.; GARCEA, R.L.
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CA: Academic Press, 1997. 310p.
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1990.
DULBECCO, R.; GINSBERG, H.S. Microbiologia de Davis:
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HUNTER, E. Virus assembly. In: KNIPE, D.M.; HOWLEY,
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ROSSMANN, M.G. et al. Structure of a human cold virus and
structural relationship to other picornaviruses. Nature, v.317,
p.145-153, 1985.
34
Captulo 1
Anexos
FITA DUPLA
FITA SIMPLES
Tabela 1.1. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus DNA
Famlia
Capsdeo
Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
Circoviridae
Icosadrico
No
15-22 nm,
esfrico-icosadricos
Parvoviridae
Icosadrico
No
25nm, icosadricos
Polyomaviridae
Icosadrico
No
45nm, esfrico-icosadricos
Papillomaviridae
Icosadrico
No
55nm, esfrico-icosadricos
Adenoviridae
Icosadrico
No
80-110nm, icosadricos
Herpesviridae
Icosadrico
Sim
Poxviridae
Complexo
Sim
Iridoviridae/
Asfaviridae
Complexo
Sim
Hepadnaviridae
Icosadrico
Sim
40-48nm, esfricos,
ocasionalmente pleomrficos,
partculas subvirais em excesso
35
POLARIDADE POSITIVA
Tabela 1.2. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus RNA
POLARIDADE NEGATIVA
Capsdeo
Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
Retroviridae
Icosadrico
Sim
80-100nm, esfricos
Picornaviridae
Icosadrico
No
28-30nm,
esfrico-icosadricos
Caliciviridae
Icosadrico
No
30-38nm,
esfrico-icosadricos
Astroviridae
Icosadrico
No
28-30nm, esfricos
Helicoidal
Sim
80-220nm, pleomrficos ou
aproximadamente esfricos
Arteriviridae
Icosadrico
Sim
50-70nm, aproximadamente
esfricos
Togaviridae
Icosadrico
Sim
70nm, esfricos
Flaviviridae
Icosadrico
Sim
45-60nm, esfrico
Paramyxoviridae
Helicoidal
Sim
150-300nm, pleomrficos,
aproximadamente esfricos,
filamentosos
Rhabdoviridae
Helicoidal
Sim
Filoviridae
Helicoidal
Sim
Bornaviridae
Sim
Orthomyxoviridae
Helicoidal
Sim
80-120nm, ovides,
filamentosos,
aproximadamente
esfricos, pleomrficos
Bunyaviridae
Helicoidal
Sim
80-120nm, pleomrficos
ou esfricos.
Arenaviridae
Helicoidal
Sim
50 x 300nm , esfricos ou
pleomrficos
Birnaviridae
Icosadrica
No
60nm, icosadricos
Reoviridae
Icosadrica
No
60-80nm, aproximadamente
esfricos
Coronaviridae
FITA SIMPLES
FITA DUPLA
Famlia
1 Introduo
39
39
41
41
5 Famlias de vrus
42
42
42
43
44
44
45
46
46
47
47
48
48
49
49
50
50
51
51
52
52
52
53
54
54
54
54
55
56
56
56
57
57
6 Bibliografia consultada
57
1 Introduo
40
Captulo 2
41
42
Captulo 2
5 Famlias de vrus
A seguir sero apresentadas as famlias de
vrus que contm patgenos de animais (Figuras
2.1 a 2.25). Em cada gnero, sero mencionados
os principais vrus que causam doenas em animais de interesse para a medicina veterinria, ou
seja, animais de produo e animais de companhia. Tambm sero citados os principais patgenos humanos. Cabe ressaltar, por essa razo, que
esta lista no se constitui na relao completa dos
vrus de cada famlia.
43
Gneros:
Alphaentomopoxvirus;
Betaentomopoxvirus;
Gammaentomopoxvirus.
Gnero: Asvirus
Espcie: vrus da peste suna africana
(AFSV).
tos)
44
Captulo 2
45
Gneros:
Alphapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-32);
Betapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-5);
Gammapapillomavirus: vrios papilomavrus humanos (prottipo: HPV-4);
46
Captulo 2
47
Subfamlia: Densovirinae
Gneros:
Densovirus: densovrus da Junonia coenia;
Iteravirus: densovrus da Bombyx mori;
Brevidensovirus: densovrus do mosquito
Aedes aegypti;
Pefudensovirus: densovrus da Periplaneta
fuliginosa.
Os parvovrus so vrus muito pequenos e,
at h pouco tempo, eram considerados os menores vrus de animais e/ou humanos. Os vrions
possuem um dimetro de 25 nm, no possuem
envelope e apresentam uma aparncia esfrica
microscopia eletrnica. Os vrus dessa famlia
apresentam um DNA de cadeia simples linear
de, aproximadamente, 5.2 kb. Alguns membros
dessa famlia necessitam de uma co-infeco viral para realizar a sua replicao (Dependovirus),
o que no o caso do gnero Parvovirus, no qual
esto classicados importantes patgenos de animais e humanos. A replicao ocorre no ncleo
de clulas que esto em processo de mitose, mais
especicamente na fase S do ciclo celular. Os
principais agentes de doena dessa famlia so os
parvovrus que causam doenas gastroentricas
em caninos e felinos. O parvovrus suno um
importante agente etiolgico de perdas reprodu-
48
Captulo 2
Fonte: www.vetsciences.free.fr
49
Fonte: www.fli.bund.de
50
Captulo 2
Gneros:
Alfavirus: vrus das encefalites eqinas
do leste (EEEV), oeste (WEEV) e venezuelana
(VEEV), alm de outros arbovrus zoonticos (Semliki Forest virus, SFV; Ross River virus, RRV;
Sindbis, SIN);
Rubivirus: vrus da rubola (humano).
Os togavrus possuem vrions esfricos, com
dimetro aproximado de 70 nm. O capsdeo
envolto por um envelope lipdico que apresenta
peplmeros formados por duas glicoprotenas.
O genoma consiste de uma molcula de RNA linear, de sentido positivo, com extenso de 9,7 a
11.8 kb. As protenas no-estruturais so sintetizadas a partir de uma poliprotena traduzida diretamente do RNA genmico. As protenas noestruturais so produzidas pela traduo de um
mRNA subgenmico, sintetizado a partir de uma
cpia de RNA de sentido anti-genmico. A replicao ocorre inteiramente no citoplasma e a liberao da prognie viral ocorre por brotamento na
membrana plasmtica. Os Alfavirus so transmitidos por insetos e a maioria deles zoontica.
Os EEEV, WEEV e VEEV de maior importncia
para a Veterinria esto classicados no gnero
Alfavirus. O vrus da rubola, tambm classicado nessa famlia, um agente que infecta exclusivamente humanos.
Gneros:
Flavivirus: vrus da febre amarela (YFV, humano e de primatas), vrus da dengue (humano),
vrus da encefalite japonesa (JEV), vrus Murray
Valley (MVEV), vrus do Nilo Ocidental (WNV),
vrus Wesselsbron (WBV), vrus do Louping Ill.
Com possvel exceo do vrus da dengue, os demais vrus so zoonticos;
Pestivirus: vrus da diarria viral bovina
tipos 1 e 2 (BVDV-1; BVDV-2), vrus da peste suna clssica (CSFV), vrus da doena da fronteira
(BDV);
Hepacivirus: vrus da hepatite C (humano).
51
Ordem Nidovirales
Gnero:
Coronavirus: vrus da bronquite infecciosa
das aves (IBV), coronavrus dos perus (TCoV),
vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos
(TGEV), coronavrus felino (FeCoV), vrus da peritonite infecciosa felina (FIPV), coronavrus canino (CCoV), coronavrus bovino (BCoV), coronavrus humano (HuCoV), vrus da pneumonia
asitica (SarsCoV humano);
Torovirus: torovrus eqino (EToV), torovrus bovino (BToV), torovrus suno (SToV), torovrus humano (HToV), vrus Berne (BeV), vrus
Breda (BrV).
A morfologia dos vrions, quando observada ao microscpio eletrnico, deu origem ao
nome da famlia. Os vrions do gnero Coronavrus possuem dimetro de 80 a 220 nm e forma
esfrica; os do gnero Torovrus, de 120 a 140 nm
e aparncia bacilar ou na forma de rim. Vrus de
ambos os gneros apresentam envelope lipdico
com peplmeros que se projetam externamente
por at 20 nm, e que do ao vrion o aspecto de
coroa. Os coronavrus apresentam um nucleo-
Ordem: Nidovirales
Gnero:
Arterivirus: vrus da arterite eqina (EVAV),
vrus elevador da lactato desidrogenase (LDEV),
vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV).
O nome dessa famlia originou-se da patologia induzida por esses vrus em eqinos, a arterite. Os arterivrus apresentam dimetro de 50 a 70
nm e possuem envelope. O genoma consiste de
uma molcula de RNA linear de sentido positivo,
52
Captulo 2
53
54
Captulo 2
genoma ocorre no ncleo das clulas hospedeiras. Posteriormente, o vrus liberado da clula
por brotamento na membrana plasmtica. Os vrus do gnero inuenza so os agentes etiolgicos da gripe. O vrus inuenza A causa gripe em
humanos, aves, sunos, cavalos, martas, focas e
baleias. O vrus inuenza B patgeno somente
de humanos, e os de inuenza C, de humanos e
sunos. A natureza segmentada do genoma desses vrus facilita a troca dos segmentos genmicos entre vrus das diferentes espcies quando infectam a mesma clula. Esse mecanismo permite,
eventualmente, o surgimento de vrus bastante
virulentos.
55
56
Captulo 2
Gneros:
Orthoreovirus: orthoreovrus de mamferos
(MRV), orthoreovrus de aves (ARV), orthoreovrus de babunos (BRV);
Orbivirus: vrus da lngua azul (BTV-1 a
24), vrus da encefalose eqina (EEV-1 a 7), vrus
da peste eqina (AHSV-1 a 9);
Rotavirus: rotavrus de todas as espcies (A
a G);
Coltivirus: vrus da febre do carrapato do
Colorado (CTFV);
Aquareovirus: aquareovrus A (ARV-A a
F);
Seadornavirus: virus kadipiro (KDV).
Existem ainda os gneros de vrus que infectam plantas e insetos: Cypovirus, Idnoreovirus,
Fijivirus, Oryzavirus e Phytoreovirus.
Os reovrus possuem vrions complexos,
sem envelope, compostos por duas ou trs camadas de protenas arranjadas de forma concntrica. O dimetro desses capsdeos pode variar de
60 a 85 nm e possui simetria icosadrica. O genoma consiste de molculas de RNA de cadeia
dupla. O nmero e a extenso desses segmentos
variam entre os gneros; sendo de 10 segmentos
e 23 kb para o Reovrus, 10 segmentos e 18 kb para
o Orbivrus, 11 segmentos e 16-21 kb para o Rota-
Gneros:
Aquabirnavrus: vrus da necrose pancretica infecciosa (IPNV);
Avibirnavrus: vrus da doena de Gumboro (IBDV);
Entomobirnavrus: vrus X da drosla.
Esses vrus possuem um genoma RNA linear de cadeia dupla com dois segmentos, denominados A e B. A extenso total do genoma varia
entre 5.7 e 7 kb. Os vrions so formados por um
capsdeo icosadrico, sem envelope, e dimetro
de 60 nm. Os RNAs mensageiros so sintetizados
a partir dos dois segmentos do genoma RNA e
uma poliprotena produzida e, posteriormente,
clivada. Maiores detalhes da replicao no so
conhecidos. O patgeno mais conhecido dessa famlia o IBDV, que afeta galinhas.
57
6 Bibliografia consultada
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VAN REGENMORTEL, M.H.; MAHY, B.M. Emerging issues
in virus taxonomy. Emerging Infectious Diseases, v.10, p.8-13,
2004.
Captulo 2
1 Introduo
61
61
61
63
63
65
65
65
66
67
67
68
68
68
68
69
69
70
70
73
73
3 Multiplicao de vrus
3.1 Inoculao em animais susceptveis
3.2 Inoculao em ovos embrionados
3.3 Inoculao em cultivo celular
73
74
74
75
4 Quantificao de vrus
4.1 Diluio limitante
4.2 Ensaio de placa
4.3 Outros mtodos de quantificao
81
81
81
83
84
84
84
6 Biossegurana laboratorial
85
7 Bibliografia consultada
86
1 Introduo
Os grandes avanos no entendimento dos
mecanismos de replicao, transmisso e patogenia de vrios agentes virais somente foram possveis aps o desenvolvimento de mtodos de propagao e deteco de vrus in vitro. No princpio
da Virologia, antes mesmo da classicao dos
vrus como agentes ltrveis, as alteraes produzidas nos animais durante as infeces virais
j eram observadas e descritas. No entanto, a falta de conhecimentos sobre o agente e de equipamentos adequados fez com que a diferenciao
entre as infeces fosse realizada apenas entre
as enfermidades com sinais clnicos caractersticos. Inicialmente, o nico mtodo de propagao
viral era a inoculao em animais susceptveis.
Embora essa forma de amplicao viral tenha
sido muito til nos primrdios da Virologia, esse
mtodo de amplicao restringiu o estudo dos
vrus devido diculdade de manuteno de
animais e tambm pela baixa reprodutibilidade
da maioria das enfermidades vricas.
A maior revoluo na Virologia ocorreu
aps o advento dos antibiticos, o que possibilitou o estabelecimento de cultivos celulares livres
de contaminantes bacterianos. O uso dos cultivos
celulares contribuiu de maneira decisiva para a
deteco e multiplicao dos vrus com diversas
nalidades, viabilizando o diagnstico, estudos
bioqumicos e moleculares e produo de vacinas. Nesse sentido, a citopatologia, produzida
por alguns vrus em clulas de cultivo durante a
sua replicao, uma caracterstica amplamente
utilizada para demonstrar a presena do agente
em material clnico, permitindo a realizao do
diagnstico.
As tcnicas de deteco viral foram desenvolvidas inicialmente com ns diagnstico, ou seja,
para pesquisar vrus em amostras clnicas; porm
passaram a ser utilizadas para uma ampla gama
de nalidades em laboratrios de virologia.
A conrmao da presena do vrus em tecidos, secrees ou excrees pode ser realizada
pelo uso de tcnicas que demonstrem o agente, o
efeito da replicao em cultivo celular, produtos
intermedirios do processo replicativo (protenas,
corpsculos de incluso) ou o material gentico
(DNA ou RNA viral). Muitas vezes recorre-se
realizao de duas ou mais tcnicas para a conrmao denitiva da presena do agente. A escolha de uma determinada tcnica de deteco est
diretamente relacionada com a forma de infeco
e com o tropismo do vrus por determinados tecidos e rgos. Por outro lado, a disponibilidade
de equipamentos, qualidade dos reagentes e de
pessoal capacitado para a execuo das tcnicas
tambm podem determinar a escolha da tcnica a
ser empregada. A simples deteco do agente viral em uma amostra clnica deve ser considerada
com cautela, pois a sua presena pode no ser um
indicativo seguro da etiologia da doena.
Os mtodos de deteco dos agentes virais
podem ser divididos em mtodos diretos e indiretos. Os mtodos diretos compreendem as
tcnicas em que o agente viral diretamente detectado, ou seja, a partcula viral observada e
identicada de maneira precisa. A nica tcnica
que se enquadra nesse princpio a microscopia
eletrnica. Os mtodos de deteco indireta identicam as propriedades biolgicas ou produtos
resultantes da replicao viral, como protenas
ou cidos nuclicos. Neste captulo, sero apresentadas e discutidas as tcnicas utilizadas para
a deteco de partculas vricas, protenas ou material gentico viral. A aplicao dessas tcnicas,
com nalidades diagnsticas, ser abordada no
Captulo 11. Alm disso, sero abordadas as maneiras de multiplicao, quanticao e caracterizao viral, bem como alguns aspectos de segurana laboratorial.
2 Mtodos de deteco e
identificao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia
eletrnica
A maioria dos agentes virais possui partculas vricas com caractersticas morfolgicas e
estruturais peculiares s famlias as quais pertencem. Com base nesse aspecto, o mtodo mais simples de deteco e identicao de vrus a visualizao direta das partculas na amostra (Figura
3.1). Exemplos clssicos do uso da microscopia
eletrnica (ME) com ns diagnsticos incluem a
deteco de partculas vricas em crostas de leses causadas pelo ectima contagioso dos ovinos
62
Captulo 3
Figura 3.1. Microscopia eletrnica. (A) Partculas de parapoxvrus em material coletado de leses de ovinos suspeitos
de ectima contagioso (50.000x); (B) Partculas tpicas de rotavrus em fezes bovinas diarricas (260.000x); (C) Partculas
caractersticas de calicivrus em clulas de cultivo, inoculadas com secreo nasal de um felino com doena
respiratria (40.000x); (D) Partculas tpicas de herpesvrus no ncleo de clulas de cultivo, inoculadas com material
coletado de um touro com balanopostite (48.000x); (E) Partculas do vrus da parainfluenza bovina 3 (bPI-3),
observadas em sobrenadante de cultivo celular (260.000x); (F) Arranjo cristalino de partculas tpicas de picornavrus
no citoplasma de clulas de cultivo, inoculadas com material coletado de um bovino com doena gastrentrica e
respiratria (315.000x).
63
64
Captulo 3
LEPORINO
AVES
CANINOS e
FELINOS
SUNOS
EQINOS
BOVINOS
Fonte de vrus
Eritrcitos (espcie)
Bovino e cobaia
Encefalomielite eqina
(EEEV, WEEV)
Macerado de crebro de
camundongo
Influenza eqina
Galinha e cobaia
Suspenso de crebro de
camundongo
Suno
Encefalomielite
hemaglutinante dos sunos
Fluido alantide
Galinha
Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo
Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo
Fluido alantide
Mamferos e aves
Fluido alantide
Galinha
Bronquite infecciosa
aviria (IBV)
Fludo corioalantide
Galinha
Suspenso de tecidos e
sobrenadante de cultivo
Humano do tipo O
65
+
Amostra
suspeita
Incubao
1 hora
Amostra
positiva
Amostra
negativa
2.2.2 Hemadsoro
Durante o ciclo replicativo de alguns vrus
em cultivo celular, determinadas protenas virais
so expostas na superfcie das clulas infectadas.
Algumas dessas protenas possuem a capacidade
de se ligar a eritrcitos quando esses so adicionados ao meio de cultivo. Esse processo denominado hemadsoro (HAD), e restrito interao
de alguns vrus com eritrcitos de certas espcies
de mamferos e aves. A HAD um indicativo da
presena desses vrus no material suspeito. Essa
tcnica de simples execuo, sendo empregada
2.3.1 Imunofluorescncia
A imunouorescncia (IFA) uma tcnica
de deteco de antgenos e baseia-se na reao de
anticorpos especcos com o antgeno presente
no material suspeito. Os anticorpos so conjugados com uma substncia que emite luminosidade
uorescente (uorescena) quando exposta luz
ultravioleta (UV). A presena do antgeno no material revelada pela emisso de luminosidade
uorescente. Essa metodologia pode ser aplicada
em monocamada de clulas, em esfregaos celulares, em tecidos frescos, congelados ou includos
em parana. Geralmente, o material deve ser
previamente xado em etanol, metanol ou acetona. Aps a xao, incuba-se o material com o
anticorpo especco marcado com o uorocromo
(FITC isotiocianato de uorescena ou Texas
Red). Posteriormente, sucessivas lavagens so realizadas para a remoo do anticorpo no-ligado.
O material , ento, examinado ao microscpio
de luz UV. A colorao verde-ma ou vermelha
(para anticorpos marcados com FITC e Texas Red,
respectivamente), visualizada contra um fundo
escuro, indica a presena de antgenos virais na
amostra. A emisso de uorescncia resulta da
excitao do uorocromo conjugado ao anticorpo quando exposto luz UV. O resultado nal
a observao de uma regio ou de toda a clula
corada, pois as protenas virais esto dispersas no
seu interior (Figura 3.3).
Existem basicamente duas variantes da tcnica: a imunouorescncia direta (IFD) e a indireta (IFI). Na IFD, o anticorpo primrio (monoclonal ou policlonal) especco para o agente
marcado com o uorocromo e adicionado diretamente sobre a amostra. No caso da IFI, a tcnica
realizada em duas etapas. A primeira incubao realizada com o anticorpo primrio especco para os antgenos virais e, aps a remoo
dos anticorpos que no se ligaram aos antgenos,
por sucessivas lavagens, adiciona-se o anticorpo
secundrio, marcado com o uorocromo. O anti-
66
Captulo 3
corpo secundrio (especco para a espcie animal na qual foi produzido o anticorpo primrio)
reconhece e se liga ao anticorpo primrio.
A IFA uma tcnica simples e se constitui
em uma das tcnicas mais utilizadas em Virologia, possuindo diversas aplicaes, incluindo
o diagnstico de infeces vricas. A aplicao
dessa tcnica em diagnstico ser abordada no
Captulo 11. Como desvantagens, incluem-se a
necessidade de um microscpio de luz UV e a
possibilidade de alguns tecidos ou clulas emitirem uorescncia natural, o que pode dicultar a
interpretao do resultado.
A
Imunofluorescncia
direta
Imunofluorescncia
indireta
Clula infectada
Anticorpo antivrus
Antgenos virais
Anticorpo
anti-IgG-FITC
Anticorpo
antivrus-FITC
Imunoperoxidase
direta
Imunoperoxidase
indireta
Clula infectada
Anticorpo antivrus
Antgenos virais
Anticorpo
anti-IgG-HRPO
Anticorpo
antivrus HRPO
Substrato
2.3.2 Imunoperoxidase
A tcnica de imunoperoxidase (IPX) baseiase no mesmo princpio da IFA, com a diferena
que os anticorpos so marcados com uma enzima, que pode ser a horseradish peroxidase (HRPO
67
B
Anticorpos
antivirais
Incubao da
amostra suspeita
Lavagem
Antgenos na
amostra
suspeita
Anticorpo
antivrus
Lavagem
Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Mudana
de cor
Positivo
Negativo
2.3.4 Radioimunoensaio
O mtodo de radioimunoensaio (RIA) de
deteco de antgenos foi muito utilizado antes
do surgimento dos testes de ELISA. A diferena
bsica entre os dois mtodos reside no tipo de
marcao utilizada. Na RIA, utiliza-se um istopo radioativo em vez de enzima. O mtodo
muito sensvel e pode ser automatizado, porm
os equipamentos requeridos so caros. A principal restrio do teste refere-se ao uso de substncias radioativas e ao descarte dos reagentes.
Dessa forma, a tcnica encontra-se em desuso
progressivo.
68
2.3.5 Imunocromatografia
A imunocromatograa uma tcnica de
visualizao simples, geralmente realizada em
dispositivos plsticos, podendo ser executada em
clnicas e ambulatrios. A prova baseada na reao antgeno-anticorpo, em que a amostra suspeita (vrus ou antgenos virais) passada atravs de
um ltro e, ento, impregnada em uma membrana, onde reagir com o anticorpo especco previamente imobilizado. A presena do antgeno
revelada pelo aparecimento de focos ou bandas
coloridas, pois os reagentes so conjugados com
substncias cromgenas. O resultado depende
essencialmente da qualidade dos reagentes. Um
dos problemas do teste o seu custo elevado. Vrios testes diagnsticos so baseados nesse princpio (Captulo 11).
Captulo 3
matriz de gar. As amostras difundem-se radialmente pelo gel e, ao se encontrarem, proporcionam a reao antgeno-anticorpo, seguida da insolubilizao e precipitao. A precipitao deste
complexo forma linhas opacas no gel (linhas de
precipitao), que podem ser visualizadas a olho
nu, com o auxlio de uma fonte de luz (ver Figura
11.9, no Captulo 11). A IDGA uma tcnica bastante difundida para a deteco de anticorpos,
porm sem muita aplicabilidade para a deteco
de antgenos ou partculas vricas.
2.3.8 Imunoblots
O princpio dos imunoblots semelhante ao
da IPX. Os antgenos virais so detectados pelo
uso de anticorpos marcados com enzimas, que
agem no substrato, provocando mudana de cor.
A diferena fundamental entre a IPX e os imunoblots que o material suspeito deve ser previamente solubilizado e imobilizado em um suporte
slido, geralmente membranas de nitrocelulose
ou nylon. A membrana , ento, incubada com
o anticorpo antiviral no-marcado (anticorpo primrio), seguido de lavagem e incubao com um
anticorpo antiespcie do anticorpo primrio (anticorpo secundrio) conjugado a uma enzima. A
presena do antgeno pesquisado revelada pela
adio do substrato, que muda de colorao pela
ao da enzima. Substratos que emitem luminosidade capturvel em lmes de raios X tambm
tm sido utilizados e aumentam a sensibilidade
da tcnica (Figura 3.6).
Existem duas variaes principais dos imunoblots: os dot/slot blots e o Western blot (WB). No
dot/slot blot, o homogenado de protenas diretamente imobilizado na membrana, em pontos
(dots) ou fendas (slots), seguida pela deteco com
os anticorpos. Essa variao da tcnica mais
simples e rpida, porm no fornece informaes acerca da massa da protena detectada. No
WB, as protenas solubilizadas so separadas por
eletroforese em um gel de poliacrilamida (SDSPAGE), transferidas para a membrana e, ento,
submetidas deteco com os anticorpos marcados. Essa tcnica permite a deteco da protena e
tambm a determinao de sua massa molecular,
pelo padro de migrao no gel.
69
Amostra positiva
Substrato
Anticorpo anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus (IgG)
Antgeno viral
Membrana
Amostra negativa
Removidos
pelas lavagens
Membrana
- + -
nsticos, deve ser realizada com cautela. O resultado positivo pode no signicar necessariamente
a associao do agente suspeito com a doena em
questo. O material gentico de agentes que produzem infeces latentes, como os herpesvrus,
pode ser detectado sem que os agentes estejam,
necessariamente, associados com a enfermidade
em questo.
A deteco de cidos nuclicos possui aplicao especial para os vrus de difcil adaptao ao cultivo celular; casos em que o material
suspeito contenha pequenas quantidades do
agente, que esteja com viabilidade comprometida por problemas de conservao e em estudos
retrospectivos. Essas tcnicas tambm possuem
aplicaes importantes na deteco de infeces
latentes, quando o nico indicador da infeco
a presena do genoma do agente.
70
Captulo 3
Filme de raios X
Amostra positiva
Amostra negativa
A
C
A
G
T
A
CA
Membrana
DNA/RNA viral
TG
Sonda marcada
CA
C CAT GACA
' 'G' T' A' C' 'T'G' T' T A T T
AT C G
Removidas
pelas lavagens
Radioatividade
Membrana
Figura 3.7. Tcnica de hibridizao de cidos nuclicos (dot blot). O material gentico do vrus extrado de tecidos e
imobilizado em reas de uma membrana. Posteriormente a membrana incubada com uma sonda com seqncia de
nucleotdeos complementar ao DNA do vrus, marcada com uma substncia radioativa. A presena do DNA viral
revelada pela marcao do filme de raios X pela emisso radioativa da sonda.
71
mers hibridizam com suas regies complementares, que se localizam nas cadeias opostas do
DNA, nas regies anqueadoras da seqnciaalvo. Os primers so sintetizados de acordo com a
seqncia a ser amplicada, e a sua especicidade
depende do seu grau de conservao e complementaridade com a seqncia-alvo. A reao de
PCR envolve a realizao de vrios ciclos (entre
30 e 40) de desnaturao (separao da ta dupla), hibridizao dos primers e polimerizao da
cadeia de DNA a partir dos primers, pela enzima
DNA polimerase. A cada ciclo o nmero de mo-
Seqncia-alvo
Molcula de DNA
270pb
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Denaturao (95C)
'''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primer 2
Reduz a
temperatura
1 ciclo
Primer 1
'''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
50-60C
Eleva a
temperatura
72C
Eleva a
temperatura
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Anelamento
dos primers
Polimerizao
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
O nmero de cpias
duplica a cada ciclo
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
30 ciclos
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Gel de agarose
250pb
Figura 3.8. Ilustrao demonstrativa da tcnica de reao em cadeia da polimerase (PCR). A partir da molcula molde
original (genoma viral), um segmento especfico amplificado por sucessivas etapas de sntese de DNA. O produto
da amplificao pode ser visualizado sob luz UV em um gel de agarose corado com brometo de etdio, aps migrao
por eletroforese. O tamanho dos produtos pode ser comparado com um marcador molecular de massa conhecida. (M)
marcador molecular, (1) controle negativo, (2) controle positivo, (3, 4 e 5) amostras teste.
72
Captulo 3
A grande difuso da PCR somente foi possvel aps a identicao de uma enzima polimerase de DNA resistente ao calor (Taq Thermophilis
aquatics), o que levou simplicao da tcnica
associado com o desenvolvimento de equipamentos cada vez mais acessveis. Essas novas tecnologias proporcionaram um domnio maior da
tcnica e o desenvolvimento de variaes, como
a nested-PCR, multiplex-PCR, RT-PCR e real-time
PCR.
A nested-PCR realizada em duas etapas. Na
primeira etapa, um determinado segmento amplicado pelo mtodo tradicional. Uma segunda
etapa , ento, realizada, utilizando-se o produto
da primeira reao como molde e um outro conjunto de primers, complementares s seqncias
localizadas internamente no produto da primeira
reao. Com isso, uma seqncia interna do primeiro produto reamplicada (Figura 3.9).
Seqncia-alvo 1
DNA molde
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primer 1
Primer 2
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primeira
reao
30 ciclos
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Produtos da
primeira
'''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''' reao
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Seqncia-alvo 2
DNA molde
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primer 3
Primer 4
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Segunda
reao
30 ciclos
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Produtos da
segunda
' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' reao
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
73
16 locais de clivagem
BoHV - 5
BoHV - 1
Eletroforese em agarose
A tcnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), alm de ser usada para separao de protenas nos passos iniciais do WB,
tambm utilizada para a deteco do genoma
e em estudos epidemiolgicos de rotavrus, cujo
genoma composto por vrios segmentos de
RNA. Uma caracterstica dos rotavrus a presena de sorogrupos (ver Captulo 30), que so
correlacionados com diferenas na extenso desses segmentos. Essas diferenas iro produzir um
padro de migrao na eletroforese, e isso ser
utilizado para a identicao do agente e classicao em sorogrupos. A metodologia consiste
na extrao do RNA a partir de fezes, separao dos fragmentos por SDS-PAGE e colorao
do gel com nitrato de prata. Aps a realizao
desse procedimento, as bandas correspondentes
aos segmentos genmicos so analisadas, e os
padres de migrao dos segmentos so comparados. O SDS-PAGE possui boa sensibilidade
e especicidade quando comparado com outras
tcnicas de deteco dos rotavrus.
3 Multiplicao de vrus
A obteno de vrus em grandes quantidades essencial para diversos procedimentos virolgicos. Aps o seu isolamento, o vrus deve ser
identicado e caracterizado. Para isso, deve ser
amplicado a partir da amostra original. Quantidades considerveis de vrus so necessrias
74
Embrio
Casca
|
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
Albumina
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
Saco da gema
|||||||||||||||||||||||||||
||
Durante muitos anos, a reproduo da doena em animais se constituiu na forma mais objetiva de deteco de vrus em material suspeito.
A inoculao de animais tambm serviu para a
amplicao do agente para diversos ns, entre
eles a produo de vacinas. Os fatores limitantes
para esse procedimento incluem o custo elevado
de manuteno, a imunidade prvia dos animais
ao agente e a baixa reprodutibilidade da enfermidade. Nos ltimos anos, questes ticas referentes ao uso experimental de animais somaram-se a
essas restries.
No princpio do sculo, os bovinos eram
inoculados com o vrus da febre aftosa (FMDV)
no epitlio lingual. Aps o desenvolvimento de
vesculas, o uido era coletado, inativado e utilizado para a produo de vacinas. A utilizao
de extratos de crebro de camundongos infectados com o vrus da raiva (RabV), para a produo
de vacinas, outro exemplo da inoculao em
animais. Com o desenvolvimento dos cultivos
celulares, essa metodologia deixou de ser utilizada. Atualmente, a multiplicao de vrus pela
inoculao de animais possui uso muito restrito,
dentre os quais se destacam a prova biolgica
para o diagnstico da raiva em camundongos
lactentes (Captulo 11). A inoculao de camun-
||
||
para a realizao de testes sorolgicos (soro-neutralizao SN, HI), produo de antgenos para
a imunizao de animais (obteno de anti-soros
ou anticorpos monoclonais) ou para uso como
imungenos em vacinas. A reproduo da manifestao clnica de uma enfermidade, sob condies experimentais, tambm requer altos ttulos
do vrus. Em resumo, a rotina de um laboratrio de virologia envolve necessariamente etapas
repetidas e contnuas de multiplicao de vrus
com nalidades diversas. Como os vrus necessitam clulas vivas para se multiplicar, sistemas
biolgicos so utilizados com esse propsito.
Trs sistemas biolgicos tm sido classicamente
utilizados para a multiplicao de vrus: animais
susceptveis, ovos embrionados de galinha (OE)
e cultivos celulares.
Captulo 3
||
||
||
||
Cavidade
alantide
||
||
||
||
||
||
||
||
Membrana
crio-alantide
75
Tabela 3.2. Vrus animais que replicam em embries de pinto e efeitos da replicao
Via de inoculao
Leso/conseqncia
Focos esbranquiados (pocks)
na membrana, morte do embrio
10-11 dias
Membrana corioalantide
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
7 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
7 dias
Membrana corioalantide
Influenza eqina
10-11 dias
Cavidade alantide
Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)
10-11 dias
Qualquer via
Morte do embrio
OVINOS
Idade do embrio
9-11 dias
Intravenosa
Morte do embrio
SUNO
Vrus
Vrus da doena de
Aujeszky (PRV)
10 dias
Membrana corioalantide
Raiva (RabV)
7 dias
Gema
Newcastle (NDV)
9-11 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
Morte do embrio
9-11 dias
Cavidade alantide
Morte do embrio
AVES
CANINOS e
FELINOS
EQINO
BOVINO
Varola bovina
Morte do embrio
Pocks na membrana crio -alantide.
-
Leses na membrana
corioalantide, invaso do sistema
nervoso central, e protuso cerebral
do embrio, morte do embrio.
Retardo do crescimento, distrofia
muscular, encefalomalcia
76
Captulo 3
suem capacidade de multiplicao quase indenida. Por estarem bem adaptadas s condies do
cultivo, so de fcil manipulao e propagao.
A maioria dos laboratrios d preferncia a esse
tipo de cultivo celular devido sua uniformidade,
estabilidade e facilidade de manuseio. Por causa
dessa alta taxa de propagao em laboratrio, as
linhas celulares podem sofrer alteraes morfolgicas e siolgicas que alteram a sensibilidade
infeco viral. No entanto, a sensibilidade infeco com alguns vrus pode ser inferior nas linhagens celulares em comparao com os cultivos
primrios, mas as vantagens citadas acima compensam este aspecto. Linhagens celulares podem
ser obtidas pela transferncia entre laboratrios
ou pela aquisio junto a bancos depositrios.
Diversas linhagens celulares so utilizadas
rotineiramente em laboratrios de virologia em
atividades de diagnstico e pesquisa. O nome
dessas linhagens geralmente est relacionado
com o rgo de origem e freqentemente contm
as letras iniciais do nome do descobridor ou outra caracterstica marcante. Alguns exemplos de
linhagens celulares comumente utilizadas em Virologia Veterinria so: MDBK (Madin-Darby bovine kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney),
CRFK (Crandell feline kidney), CRIB (cell resistant
to infection with bovine viral diarrhea vrus), RK13
(rabbit kidney), PK15 (porcine kidney 15), SK6 (swine kidney), BHK-21 (baby hamster kidney clone 21),
IBRS2 (Instituto Biolgico rim de suno clone 2), clulas Vero, entre outras.
Existem ainda cultivos de clulas que se
multiplicam em suspenso, ou seja, no necessitam de uma superfcie de contato para adeso e
multiplicao. Uma grande vantagem desse tipo
de cultivo a concentrao do nmero de clulas,
reduzindo a relao do nmero de clulas, tamanho do frasco e volume de meio utilizado. Essa
uma caracterstica desejvel e amplamente utilizada para a produo de vacinas. Clulas BHK-21
que se multiplicam em suspenso so utilizadas
para a multiplicao e produo de estoques do
RabV e o FMDV para uso em vacinas.
Alguns vrus no replicam ecientemente
em clulas de cultivo, assim, a sua amplicao
requer o uso de outro sistema biolgico, como
animais susceptveis (animais de laboratrio ou
os hospedeiros naturais) ou ovos embrionados.
77
Outros vrus no replicam em quaisquer dos sistemas biolgicos utilizados atualmente, como os
papilomavrus, vrus da hepatite C de humanos
e os vrus causador da hepatite B (famlia Hepadnaviridae).
O processamento de amostras que potencialmente contenham vrus deve ser realizado
rapidamente e seguir algumas regras para aumentar a probabilidade de deteco e multiplicao do agente. Para o diagnstico, as amostras
devem ser inoculadas em cultivos celulares o
mais brevemente possvel. A inoculao consiste
na deposio do material suspeito sobre as monocamadas, seguido de incubao por 1 a 2 horas
(perodo de adsoro). Posteriormente, o incu-
Figura 3.12. Efeito citoptico produzido pela replicao viral em clulas de cultivo. Clulas de linhagem de rim
bovino no-infectadas (A) ou inoculadas com o BoHV-1 (B); BVDV (C); BoHV-2 (D); enterovrus bovino (E); e PI-3v
(F). Pode-se observar diferentes tipos de efeito citoptico. Para descrio detalhada ver tabela 3.3.
78
Captulo 3
Tabela 3.3. Principais vrus animais, clulas susceptveis para replicao in vitro e efeito citoptico
Bovinos
Vrus
Tipo celular
Efeito citoptico
Adenovrus bovino
(BAdV)
Parainfluenza bovina
tipo 3 (bPI-3)
Vrus respiratrio
sincicial bovino (BRSV)
Rotavrus bovino
(BRV)
Coronavrus bovino
(BCoV)
Formao de sinccios.
Parvovrus bovino
(BPV)
Virus da mamilite
herptica (BoHV-2)
Vrus da leucose
bovina (BLV)
Formao de sinccios.
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
Vrus da estomatite
papular (BPSV)
Vrus da varola e
pseudovarola bovina
Rinderpest (RPV)
Sinccios grandes,
contrao, arredondamento e desprendimento
celular da monocamada. Corpsculos
intranucleares.
79
Sunos
Eqinos
Ovinos e caprinos
Vrus
Tipo celular
Efeito citoptico
BHK-21, VERO
Ectima contagioso
(ORFV)
Artrite e encefalite
caprina (CAEV)
Formao de sinccios.
Pneumonia progressiva
dos ovinos Maedi-Visna
(OPPV)
Poxvrus ovino e
caprino
Peste dos
pequenos
ruminantes (PPRV)
Herpesvrus eqino
(EHV 1, 2, 3 e 4)
Anemia infecciosa
eqina (EIAV)
Encefalomielite eqina
(EEE, WEE e VEE)
Lise celular
MDCK
Doena de Aujeszky
(PRV ou SuHV-1)
Adenovrus suno
SK6, PK-15.
Sndrome respiratria
e reprodutiva suna
(PRRSV)
Enterovrus suno
(PEV)
Parvovrus suno
(PPV)
80
Captulo 3
Caninos e Felinos
Vrus
Tipo celular
Efeito citoptico
Parvovrus
canino (CPV)
Coronavrus
canino (CCoV)
Formao de sinccios.
Rotavrus
canino
Herpesvrus
canino (CaHV)
Vrus da cinomose
(CDV)
Adenovrus canino
(CAdV)
Calicivrus felino
(FCV)
Vrus da rinotraquete
felina (FeHV)
Vrus da peritonite
infecciosa felina
(FeCoV)
Vrus da panleucopnia
felina (FPLV)
CRFK e Fe3TG.
PBMC felino.
Formao de sinccios.
Doena
de Newcastle (NDV)
Doena de
Gumboro (IBDV)
Vrus da anemia
aviria (CAV)
MDCC-MSB1.
Vrus da doena
de Marek (MDV)
CK e fibroblastos de embrio
de galinhas ou patos.
Poxvrus avirio
81
4 Quantificao de vrus
A realizao de vrias tcnicas virolgicas
requer o conhecimento da quantidade aproximada de partculas vricas presente no material.
O procedimento de quanticao denominado
titulao, e o valor obtido dito ttulo viral. Existem tcnicas diretas e indiretas para a quanticao das partculas vricas. As tcnicas diretas
baseiam-se na contagem das partculas presentes
em uma amostra e observadas ao microscpio
eletrnico. Esse mtodo capaz de informar o
nmero preciso de partculas, porm no diferencia partculas infecciosas de no-infecciosas.
Devido a essas particularidades, o mtodo direto
de quanticao viral no utilizado na rotina
laboratorial. As tcnicas indiretas possuem como
base a infectividade do vrus, que medida por
meio de um indicador biolgico. A quanticao
da infectividade de uma determinada suspenso
viral requer necessariamente o uso de sistemas
biolgicos para a replicao do agente (cultivos
celulares, OE ou animais). Como j mencionado,
os cultivos celulares so muito utilizados com
esse propsito. Para os vrus que no replicam
em cultivo, pode-se recorrer aos OE ou animais.
82
Captulo 3
Cultivos celulares
ndices acumulados
Diluio
Porcentagem (%) =
[Infectados/(infectados
+ no-infectados)] X
No-infectados
Infectados
Noinfectados
Infectados
Noinfectados
+
infectados
10
-1
41
41
41/41 =100%
10
-2
33
33
33/33 =100%
10-3
25
25
25/25 =100%
-4
17
17
17/17 =100%
10-5
11
9/11 =81%
-6
11
3/11 =27%
10-7
15
15
0/15 =0%
-8
23
23
0/23 =0%
10
10
10
Para o clculo dos ndices acumulados dos cultivos noinfectados (isto , onde no se observou ECP), soma-se os
valores dos cultivos no-infectados, iniciando-se a partir da
-8
menor diluio (10 ). J o clculo do ndice dos cultivos
infectados, realizado pelo somatrio das culturas infectadas
-1
(onde o ECP foi visualizado) a partir da maior diluio (10 ).
Assim, a diluio apresentada no Quadro 3.1 necessria para a
infeco de 50% dos cultivos celulares, obviamente estar entre
-6
-5
as diluies 10 (27% infectados) e (10 ) (81% infectados). A
distncia proporcional entre essas duas diluies calculada
da seguinte forma:
(% positivo acima de 50%) - 50
------------------------------------------------------------------------ =
(% positivo acima de 50%) - (% positivo abaixo de 50%)
Assim, tem-se:
81-50
81-27
= 0,57
distncia. A transmisso do vrus a partir das clulas inicialmente infectadas ocorre apenas para
as clulas vizinhas, pela transmisso direta entre
clulas. Aps alguns dias, so observados focos
de destruio celular nos tapetes, denominados
placas. Cada placa representa um determinado
nmero de clulas infectadas e destrudas a par-
83
tir de uma clula originalmente infectada. O nmero de placas produzidas no tapete, portanto,
corresponde ao nmero aproximado de unidades
infecciosas presentes na diluio inoculada. Para
uma melhor visualizao e contagem das placas,
os tapetes so corados com cristal violeta (Figura
3.13).
Nessa tcnica, a quanticao expressa
como unidade formadora de placas por mililitro
(PFU/mL). Para o clculo nal do ttulo, leva-se
em considerao o nmero de placas produzidas
em cada diluio e o volume utilizado para inoculao. Um exemplo de titulao, usando essa
tcnica, est descrito no Quadro 3.2. Os ensaios
em placa so utilizados principalmente para a
quanticao de vrios vrus citopatognicos (ou
citopticos), mas podem tambm ser utilizados
para vrus que no induzem citopatologia. Nesses casos, os focos (e no placas) de replicao
viral podem ser detectados e contados aps a realizao da tcnica de IPX.
Alm de quanticao viral, os ensaios de
placa so tambm utilizados com outras nalidades, incluindo: a) clonagem biolgica e puricao de vrus; b) anlise de fentipo de variantes
virais; c) ensaios de neutralizao viral por anticorpos monoclonais ou policlonais; d) testes de
atividade antiviral de compostos qumicos; e) estudos de cintica e replicao viral, entre outras.
Nmero de placas
Diluio
Rplicas
Mdia
10-1
10-2
10
incontveis
incontveis
incontveis
-
-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
Controle
168
96
35
incontveis
150
89
27
159
92,5
31
84
5 Identificao e caracterizao de
um isolado
Os termos isolado ou amostra de vrus referem-se a um vrus que foi detectado e identicado, mas que ainda no foi completamente caracterizado. O termo cepa designa um vrus cujas
principais caractersticas genotpicas e fenotpicas j foram estudadas e so conhecidas. As cepas so geralmente utilizadas como referncia
em testes de diagnstico, em pesquisas e para a
produo de reagentes.
A primeira etapa aps a deteco de um
agente viral a partir de amostras clnicas a sua
identicao. Isso pode ser realizado preliminarmente pelas caractersticas do ECP produzido nos cultivos ou pelas alteraes produzidas
no embrio de galinha. A ME pode ser utilizada
para a identicao inicial do agente, de acordo
com as suas caractersticas morfolgico-estruturais. A conrmao da identidade do agente, no
entanto, depende do uso de anticorpos especcos (IFA, IPX), de anti-soro especco (SN ou HI)
ou de mtodos de deteco e identicao de cidos nuclicos (hibridizao, PCR).
Captulo 3
85
sas caractersticas pode ser feita de vrias maneiras, das quais se destacam a ultracentrifugao.
A ultracentrifugao um mtodo relativamente
fcil, rpido e prtico, em que o material de alta
qualidade obtido. Seu princpio baseia-se na
taxa de sedimentao do vrus, que, por sua vez,
dependente do tamanho, densidade, morfologia da partcula, bem como da natureza do meio
e da fora de centrifugao. A maior restrio o
custo do equipamento, que difere das centrfugas
por atingir velocidades que variam entre 20.000 e
100.000 rotaes por minuto (RPM).
6 Biossegurana laboratorial
A manipulao em laboratrios de agentes
infecciosos, como os vrus, pode representar risco
Exemplos
Equipamento
de segurana
Equipamentos
de proteo
Procedimentos
Vrus
Nvel
BSL-1
BSL-2
BSL-3
BSL-4
Vrus no-zoonticos.
Associados com
infeces em humanos,
risco de auto-inoculao,
ingesto ou exposio
da pele e mucosas.
Agentes exticos ou
selvagens, com potencial de
transmisso por aerossol e de
produzir doena severa ou
letal.
Nenhum requerido.
Requerimentos do BSL-1 e
toda manipulao em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II. Uso de luvas,
aventais, respiradores,
conforme a necessidade.
Bancada laboratorial.
BSL-2 acrescido de
separao fsica para
corredores e reas de
circulao, porta duplas,
presso negativa nos
laboratrios, sistema de
filtrao do ar.
Adenovrus humano,
citomegalovrus, influenza A,
B e C, rubola, poliovrus,
parainfluenza, vrus da raiva.
86
7 Bibliografia consultada
BARTLETT, J.M.S; STIRLING, D. Methods in Molecular Biology:
PCR protocols. 2.ed. Totowa, NJ: Humana Press, 2003. 545p.
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285p.
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OIE. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines.
3.ed. Paris, France: OIE, 1997. 723p.
Captulo 3
1 Gentica viral
89
90
92
93
93
94
95
95
97
97
97
98
98
2 Evoluo viral
99
99
100
100
100
102
102
102
103
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2.7 Concluses
105
3 Bibliografia consultada
105
106
1 Gentica viral
As populaes virais, principalmente aquelas de vrus RNA, so excelentes modelos para
estudos de evoluo gentica. Devido ao ciclo
replicativo dos vrus ser extremamente rpido,
tanto em infeces naturais como em cultivo celular, os processos de seleo e evoluo podem
ser observados em um curto espao de tempo.
Assim, a gentica de populaes virais pode ser
considerada uma viso minimalista e simplista
da evoluo das espcies.
Ao longo de sua histria natural que pode
remeter h milhes de anos os vrus vm realizando um nmero incontvel de ciclos replicativos em seus hospedeiros, sendo constantemente
transmitidos entre hospedeiros. Alguns necessitam utilizar diferentes espcies de hospedeiros
mesmo invertebrados para assegurar a sua
manuteno na natureza. As infeces naturais
resultam em presso de seleo constante, que
acaba moldando o perl gentico e fenotpico dos
vrus, pois favorece e permite a sobrevivncia das
variantes que melhor se adaptam ao hospedeiro e
que so mais ecientemente transmitidas. Dentre
as propriedades que favorecem a sobrevivncia
e evoluo dos vrus destacam-se: a) capacidade
de replicar e ser excretado em altos ttulos; b) capacidade de se adaptar a novos tecidos, rgos
e/ou hospedeiros; c) capacidade de ser excretado
por longo tempo; d) capacidade de se reproduzir
e ser excretado sem produzir doena severa na
maioria de seus hospedeiros; e) capacidade de
escapar dos mecanismos imunolgicos do hospedeiro; f) capacidade de resistir no meio ambiente, tanto fora de clulas vivas como em animais
vertebrados ou invertebrados, assegurando a sua
sobrevivncia at alcanar um novo hospedeiro;
g) habilidade de ser transmitido verticalmente
entre hospedeiros.
Dentre as caractersticas que apresentam
relevncia na gentica das populaes virais e
facilitam a compreenso da sua evoluo, destacam-se a grande quantidade de prognie viral
produzida a partir da infeco de uma nica clula e o curto perodo de tempo de gerao. Para
se ter uma idia desta dinmica, a infeco de
uma clula, com uma nica partcula infecciosa,
90
Captulo 4
91
92
Captulo 4
1.2 Mutao
O termo mutao utilizado para designar
alteraes na seqncia de nucleotdeos no cido
nuclico genmico de um determinado organismo comparando-o com o seu parental. As mutaes surgem naturalmente como resultado da
indelidade das polimerases principalmente as
polimerases de RNA que incorporam nucleotdeos incorretos durante a replicao do genoma. Mutaes tambm podem ser induzidas por
mtodos qumicos (hipoxantina, bromodeoxiuridina) ou fsicos (raios X, ultravioleta e gama).
Acredita-se que muitas mutaes que ocorrem
naturalmente resultam na produo de vrus inviveis, ou seja, constituem-se em mutaes letais. Esses tipos de mutaes no so percebidas
e no possuem impacto na adaptao e evoluo
viral, pois os genomas mutantes so incapazes de
replicar. Logo, quando se faz referncia a mutantes, cepas, tipos ou variantes virais, sempre so
consideradas as mutaes no-letais, que permitem diferenciar o indivduo e a sua prognie do
vrus parental.
Como foi mencionado, as mutaes podem
ser espontneas (resultados de erros durante a
replicao) ou induzidas (resultados de danos
ao cido nuclico por agentes qumicos ou fsicos). As mutaes naturais so mais freqentes
nos vrus RNA (um nucleotdeo incorreto entre
103 a 104 nucleotdeos inseridos) do que nos vrus
DNA (um erro a cada 108 a 1011 nucleotdeos incorporados). A maior taxa de mutao observada nos vrus RNA deve-se menor delidade da
93
94
ses casos, o fentipo serve apenas como um parmetro para a seleo de mutantes com diferentes
habilidades replicativas in vitro.
Outro fentipo observado para a seleo
de mutantes a capacidade de replicao a diferentes temperaturas. Como j mencionado, os
mutantes TS replicam bem a temperaturas de
30-34C (denominada temperatura permissiva) e
no replicam com ecincia a 37C (temperatura no-permissiva). Mutantes adaptados ao frio
(cold adapted) replicam melhor sob temperaturas
baixas, mas retm alguma capacidade de replicar a 37C. Freqentemente, essa caracterstica
atribuda a alteraes conformacionais de determinadas protenas, especialmente as polimerases virais, dependendo da temperatura. Ou seja,
pela mudana na sua seqncia de aminocidos
em determinada temperatura, essa protena no
manteria sua conformao secundria ou terciria e perderia a sua funo. Esses mutantes podem ser utilizados em vacinas atenuadas, pois
replicam apenas em reas superciais do corpo,
sem se disseminar sistemicamente no organismo.
A alterao da gama de hospedeiros outra
caracterstica fenotpica utilizada na classicao
de mutantes. Alguns mutantes podem no replicar com a mesma ecincia nos mesmos hospedeiros que os vrus de campo, reduzindo, assim,
a sua abrangncia. Um exemplo tpico um mutante do vrus da febre aftosa (FMDV) que surgiu,
em 1997, na Tailndia. Esse mutante natural no
possua a habilidade de infectar bovinos principal espcie hospedeira do vrus infectando
apenas sunos.
Uma forma importante de seleo de mutantes a resistncia a determinadas drogas. A
presso de seleo exercida pelas drogas antivirais permite o seu uso para a seleo e pesquisa desses mutantes. Anticorpos neutralizantes
tambm podem ser utilizados para a seleo de
vrus resistentes neutralizao. Para isso, os
vrus so cultivados in vitro na presena de anticorpos neutralizantes. Os mutantes originados
que eventualmente no forem reconhecidos pelos anticorpos por alteraes nas protenas de
superfcie so rapidamente amplicados e se
Captulo 4
95
Genoma A
1.6.1 Recombinao
Classicamente, o termo recombinao utilizado para designar um intercmbio de seqncias genticas entre dois genomas. Esse processo
muito estudado em molculas de DNA e ocorre, com grande freqncia, na maioria das clulas eucariotas e procariotas. Alguns mecanismos
de reparo do DNA, por exemplo, baseiam-se em
eventos de recombinao gentica entre os cromossomos homlogos. Mecanismos semelhantes
so observados em vrus DNA e parecem fazer
parte do seu processo evolutivo. Esse processo
envolve o alinhamento de duas molculas com
seqncias semelhantes, a clivagem da cadeia
contnua do DNA, o intercmbio de uma regio
do genoma e a religao da cadeia de DNA, originando molculas hbridas ou recombinantes
(Figura 4.1). Por causa da necessidade do alinhamento de seqncias entre molculas semelhantes, este processo denominado recombinao
homloga. Na biologia dos vrus, recombinaes
podem ocorrer entre dois vrus de uma mesma
espcie viral ou, ocasionalmente, entre o genoma
viral e o DNA da clula hospedeira.
A recombinao homloga parece ser comum entre os vrus DNA e aqueles que apresentam molculas de DNA intermedirias de sua
replicao, como os retrovrus. Em clulas infectadas, esse processo realizado com o auxlio de
Genoma B
96
Captulo 4
Genoma A
A polimerase
troca de molde
Genoma B
A
5
pro
Rns
E1
E2
pro
Rns
E1
E2
NS5B
NS5A
NS5B
NS4-A NS4-B
NS5A
Insero Duplicao
N
pro
Rns
E1
E2
Ns3
NS2-3
NS5B
Duplicaes
D
5
NS4-A NS4-B
Ns3
Ns2
C
5
NS5A
Insero
B
5
NS4-A NS4-B
NS2-3
pro
pro
Rns
E1
NS2-3
E2
pro
Ns3
NS4-A NS4-B
NS5A
NS5B
E
5
NS4-A
Ns3
Rns
E1
E2
NS4-B
NS5A
NS5B
Ns2
Deleo
Figura 4.3. Ilustrao de genomas do vrus da diarria viral bovina (BVDV) contendo alteraes genticas. A) Genoma
do vrus de campo no-citoptico; B-E) Genomas de mutantes citopticos gerados por recombinao gentica; B)
Genoma contendo uma insero de seqncia celular; C) Genoma contendo uma insero de gene celular e
duplicao do gene na protena NS3; D) Genoma contendo duplicaes dos genes Npro e NS3; E) Genoma defectivo
contendo uma deleo que abrange os genes das protenas estruturais e a NS2.
97
1.6.2 Ressortimento
Esse mecanismo exclusivo dos vrus que
possuem o genoma RNA segmentado (ortomixovrus, buniavrus, arenavrus, reovrus e birnavrus) e pode ocorrer quando h uma infeco
concomitante por duas cepas do mesmo vrus.
Nesses casos, os segmentos genmicos recmreplicados so redistribudos de maneira irregular na prognie viral, resultando em vrions
que contm uma mistura de segmentos dos dois
vrus parentais. Esse mecanismo tem sido bem
documentado nos vrus da inuenza e tem sido
responsabilizado pelo surgimento de cepas altamente patognicas resultantes do ressortimento
entre vrus avirios e de mamferos (Figura 4.4).
Esses eventos ocorrem com maior freqncia em
sunos, que podem ser infectados tanto por vrus
avirios como por vrus de mamferos. De fato,
vrias cepas do vrus da inuenza que causaram
surtos em humanos e sunos podem ter resultado
de ressortimento entre vrus previamente existentes. Do ponto de vista evolutivo, o ressortimento representa um importante evento para o
vrus, pois resulta em uma alterao gentica e
fenotpica muito rpida.
Vrus parental B
Vrus parental A
Prognie A
Prognie A/B
Prognie B
98
Captulo 4
Vrus parental B
Vrus parental A
Co-infeco de
um hospedeiro
Prognie
Fentipo misto
Sem alteraes no genoma
Possvel: Host range alterado
Resistentes neutralizao
1.7.3 Poliploidia
A grande maioria dos vrus animais haplide, ou seja, possui apenas uma cpia do genoma nos vrions. Os retrovrus se constituem
em excees, pois os vrions contm duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). Porm, os
paramixovrus podem, ocasionalmente, apresentar mltiplas cpias de seu genoma encapsidados em mltiplos nucleocapsdeos em uma
nica partcula vrica, fenmeno denominado
poliploidia.
Existem descries de isolados do vrus do
sarampo que, ecientemente, produzem vrions
com, pelo menos, duas cpias do genoma. Essas
duas molculas de RNA so complementares e
possuem mutaes diferentes, existindo a necessidade da presena das duas tas para ocorrer a
replicao.
99
2 Evoluo viral
100
quirido tambm um variado repertrio de protenas, para uma melhor manipulao das funes
celulares, do sistema imunolgico do hospedeiro
e para a produo de uma prognie mais abundante.
Captulo 4
genoma viral com o cido nuclico de outros vrus ou das clulas hospedeiras. A recombinao
do genoma pode ocorrer entre vrus diferentes,
inclusive entre vrus que pertenam a famlias
distintas. Os vrus so muito ativos na obteno
de seqncias genmicas por recombinao com
outros vrus durante a sua evoluo, e essa caracterstica tem dicultado a construo de rvores logenticas nicas, que facilitem uma classicao lgica e nica. Como resultado dessas
recombinaes, vrus de grupos muito distintos
podem possuir genes relacionados e seqncias
homlogas.
A recombinao pode ocorrer entre regies
do prprio genoma viral (recombinao intramolecular), resultando em duplicao de genes,
delees e inseres, com a transformao em
novos genes. Assim, uma determinada seqncia
de nucleotdeos pode duplicar-se vrias vezes e,
dessa maneira, originar famlias de genes, como
ocorre nos poxvrus e no vrus da peste suna
africana (ASFV).
Os vrus tambm podem obter novos genes
mediante a sntese de uma nova seqncia de
nucleotdeos ou pelo uso de seqncias abertas
de leitura (ORFs; open reading frame) alternativas.
Combinaes desses mecanismos j foram descritas, como a duplicao de um gene acompanhada
de mudana de ORF.
Esses processos de recombinao seguem
ocorrendo e podem ter conseqncias diversas
na biologia dos vrus, incluindo alteraes na
especicidade de hospedeiro, tropismo tecidual,
patogenicidade e virulncia, como tambm podem resultar na emergncia de novos vrus.
101
102
Captulo 4
aftosa, caracterizada por febre e leses vesiculares na boca, focinho, patas e em regies do corpo
com abrases ou leses mecnicas.
As anlises logenticas de isolados do VSV
de vrias regies da Amrica Central e do Norte
tm demonstrado que as seqncias de cepas de
uma mesma regio geogrca apresentam um
alto grau de conservao, mesmo quando isoladas a grandes intervalos de tempo (at 30 anos).
Essa caracterstica no observada para os vrus
isolados na mesma poca em diferentes regies.
A distribuio logentica mostra um melhor
agrupamento dos vrus por regies geogrcas. A
evoluo desse vrus depende de presses de seleo relacionadas com fatores ecolgicos, como
os vetores que transmitem o vrus e os animais
reservatrios que o mantm. Para esse vrus, no
foi detectada a evoluo por presso imunolgica seletiva, que muito evidente para o vrus da
inuenza, por exemplo.
103
104
adulta e os nveis de anticorpos maternos desaparecerem. Esses coelhos foram desaados com
uma cepa de virulncia grau III. A mortalidade
foi superior a 90% no primeiro ano e somente
30% no stimo ano.
Embora a mixomatose tenha sido introduzida deliberadamente na Austrlia, pode-se considerar que esse foi um caso de enfermidade emergente. Humanos infectaram coelhos europeus
com o vrus da mixomatose, uma espcie na qual
o vrus produz uma doena muito mais severa. A
emergncia de uma enfermidade pode estar relacionada com uma mudana evolutiva no agente
causal, porm a enfermidade pode emergir mesmo na ausncia de mutaes virais.
No caso da mixomatose na Austrlia, o vrus
evoluiu, reduzindo a sua virulncia. No entanto,
no h um consenso de que todos os vrus evoluem no sentido da atenuao. muito comum
se considerar que os vrus evoluem para uma
forma inofensiva para o seu hospedeiro, o que,
provavelmente, poderia ser melhor para o futuro
da populao viral. Aos parasitas interessa no
produzir muitos danos na populao hospedeira,
para que esses sobrevivam e permitam a sua amplicao e transmisso. Contudo, o xito evolutivo de uma espcie depende essencialmente da
gerao de uma descendncia numerosa, e isso
no est necessariamente associado com atenuao da doena nos hospedeiros.
Captulo 4
105
1918 foi recriado em laboratrio. O mais marcante deste fato que esta pandemia ocorreu muito
antes da identicao do vrus da inuenza, que
somente foi isolado no princpio dos anos 1930.
Os segmentos genmicos de RNA do vrus foram
recuperados de amostras de pulmo xadas em
formalina, que estavam guardadas, e tambm de
tecidos de uma vtima da pandemia de 1918 que
havia sido enterrada na permafrost (terra permanentemente congelada, no Alasca). Por meio de
metodologia de gentica reversa, foi possvel recriar o vrus em laboratrio e estudar algumas de
suas caractersticas. As seqncias dos genes do
vrus de 1918 so relacionadas com o vrus H1N1
avirio, mais do que com qualquer outro isolado
H1N1 de mamfero. Esses achados aumentaram
a preocupao atual com os casos de inuenza
de origem aviria pelo vrus H5N1, que pode
infectar humanos. At o momento, no h evidncias de que este vrus possua a habilidade de
ser transmitido entre humanos, pois a replicao
viral connada ao trato respiratrio inferior e
provoca a morte de pessoas em poucos dias. Porm, medida que o nmero de pessoas infectadas aumente, a probabilidade de mutaes que
permitam a transmisso entre humanos tambm
aumentar.
Os trs tipos de alteraes evolutivas descritas, drift e shift antignico e inseres na hemaglutinina conferem ao vrus da inuenza uma maior
aptido biolgica, uma vez que podem reinfectar
uma populao parcialmente imune ou ampliar
o tropismo tecidual, produzindo uma prognie
mais abundante.
2.7 Concluses
Os vrus so os mestres das mudanas e
evoluo gentica. importante conhecer as estratgias que esses agentes utilizam para melhor
reconhecer enfermidades produzidas por vrus
emergentes e por vrus conhecidos que produzam doenas atpicas. medida que se intensica
a explorao pecuria e se aumenta a densidade
dos animais, torna-se necessria a implementao
de programas sanitrios especiais que reduzam a
possibilidade de introduo de novos patgenos
nas criaes. importante considerar tambm
que todos os vrus so importantes, mesmo os
que aparentemente no produzem enfermidades no homem ou em animais, pois esses agentes podem alterar a sua gama de hospedeiros e
produzir enfermidades devastadoras. Exemplos
recentes incluem a infeco de humanos, ces e
106
felinos com novos subtipos do vrus da inuenza, o surgimento do SARS-CoV, que matou centenas de pessoas na sia e a inusitada infeco
de mamferos marinhos com variantes do CDV,
causando alta mortalidade no mar Mediterrneo.
Assim, tendo em vista a sua plasticidade e capacidade de adaptao e evoluo, nenhum vrus
pode ser considerado sem importncia.
3 Bibliografia consultada
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Captulo 4
REPLICAO VIRAL
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz
1 Introduo
109
109
3 Etapas da replicao
110
3.1 Adsoro
111
3.2 Penetrao
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie celular
3.2.2 Penetrao aps endocitose
3.2.3 Outros mecanismos de penetrao
114
114
114
117
118
118
118
119
119
121
122
126
131
131
132
4 Bibliografia consultada
134
1 Introduo
A produo de prognie gentica e fenotipicamente semelhante ao vrus parental se constitui
no evento central da existncia e perpetuao dos
vrus na natureza. Por isso, por uma viso evolutiva simplista, a multiplicao dos vrus possui
uma nalidade nica e objetiva: produzir prognie vivel. As alteraes da siologia celular, associadas com as infeces virais que podem resultar em doena e at em morte do hospedeiro ,
so meras conseqncias das interaes do vrus
com as clulas; interaes que so absolutamente
necessrias para o agente atingir esse objetivo.
Os vrus so os organismos mais simples
que existem: os mais simples so compostos por
uma molcula de cido nuclico envolta por uma
camada protica. Quando esto fora de clulas
vivas, os vrus so estruturas qumicas, desprovidas de qualquer atividade biolgica. No possuem metabolismo prprio, no so capazes de
produzir autonomamente nem os componentes
mnimos para a sua multiplicao. Por isso, necessitam utilizar as organelas e o metabolismo
celular para replicar o seu genoma e produzir as
protenas necessrias para a construo de novas
partculas vricas. Esses agentes s adquirem atividade biolgica dentro de clulas vivas. Mesmo
os vrus mais complexos e evoludos so dependentes de processos biolgicos celulares para a
sua multiplicao. Por isso, os vrus so, tradicionalmente, classicados como parasitas intracelulares obrigatrios.
O termo replicao que em sua origem signica a sntese de molculas de cidos nuclicos
a partir de um molde tem sido universalmente
utilizado para designar o processo de multiplicao dos vrus como um todo e assim ser utilizado neste texto. Este captulo abordar os aspectos
gerais da replicao dos vrus; os aspectos peculiares de cada famlia sero abordados nos captulos especcos.
110
3 Etapas da replicao
A multiplicao dos diferentes vrus apresenta vrias etapas em comum, apesar da diversidade estrutural, do tipo e da organizao
genmica e das diferentes estratgias de replicao. Essas etapas ocorrem de forma ordenada e
seqencial e envolvem interaes complexas entre as protenas e o genoma viral com organelas e
macromolculas celulares. O ciclo replicativo de
todos os vrus inclui necessariamente as etapas
de adsoro, penetrao, desnudamento, expresso gnica (transcrio e traduo), replicao do
genoma, morfognese/maturao e egresso. Essas etapas esto ilustradas esquematicamente na
Figura 5.1.
A maior parte dos conhecimentos sobre os
mecanismos biolgicos e moleculares da multiplicao dos vrus somente foi obtida a partir
do estabelecimento dos cultivos celulares. Aps
a inoculao do vrus em clulas cultivadas in
vitro, os cultivos so deixados em repouso para
que as partculas vricas iniciem gradativamente a entrar em contato com a superfcie celular.
Essa etapa denominada adsoro. Imediatamente aps a adsoro, os vrions penetram nas clu-
Captulo 5
9
1
Citoplasma
4
7
6
Ncleo
Aps a remoo do material que foi inoculado e durante um perodo varivel, apenas uma
pequena quantidade de infectividade pode ser
detectada no sobrenadante. Esse perodo em que
o vrus virtualmente desaparece denominado
eclipse e coincide com as fases iniciais da infeco.
A durao da fase de eclipse depende do ciclo replicativo de cada vrus, que varia entre quatro a
seis horas nos picornavrus e mais de 40 horas em
alguns herpesvrus. A fase de eclipse seguida
por um perodo em que a prognie viral vai sendo produzida e gradativamente liberada pelas
clulas, acumulando-se no sobrenadante (Figura
5.2). Essa fase denominada maturao. Nos vrus
que produzem lise celular, a quantidade de vrus
no sobrenadante aumenta at atingir um plat,
que coincide com a perda da integridade funcional e estrutural das clulas. A partir da, o ttulo
viral no sobrenadante tende a decrescer gradativamente dependendo do vrus devido ina-
111
Replicao viral
Maturao
Inativao
Eclipse
Inoculao
Horas
3.1 Adsoro
A primeira etapa da replicao a ligao
especca das partculas vricas na superfcie das
clulas hospedeiras evento denominado adsoro . Essa ligao mediada por protenas da
superfcie dos vrions (viral attachment proteins,
VAPs) que interagem com os receptores na superfcie das clulas. Nos vrus sem envelope, a
funo de ligao exercida pelas protenas do
capsdeo; nos vrus envelopados, pelas glicoprotenas do envelope. Os receptores celulares para
os vrus so geralmente protenas (glicoprotenas)
ou carboidratos (presentes em glicoprotenas ou
em glicolipdios da membrana). Em comparao
com os receptores proticos, os carboidratos so
menos especcos, pois podem estar presentes em
uma variedade de molculas de membrana. Alguns vrus so estritamente dependentes de um
receptor especco (exemplos: rinovrus, poliov-
rus, vrus da febre aftosa [FMDV]) enquanto outros podem utilizar receptores alternativos para
iniciar a infeco (exemplo: herpesvrus, alguns
togavrus). A capacidade de utilizar mais de um
receptor para iniciar a infeco pode representar
uma vantagem evolutiva, pois oferece a esses vrus a possibilidade de infectar diferentes tipos de
clulas e/ou hospedeiros.
Os receptores celulares para vrus so molculas de membrana que desempenham funes
diversas na biologia celular e que, ocasionalmente, servem para os vrus se ligarem e iniciarem
a infeco. Os receptores celulares para vrios
vrus animais j foram identicados (Tabela 5.1).
Na maioria dos casos, a presena dos receptores
determina o espectro de hospedeiros e o tropismo
do vrus. Conseqentemente, a presena e distribuio dos receptores tambm so determinantes
fundamentais da patogenia da infeco. O nmero de receptores na superfcie de uma clula parece ser extremamente varivel. Essas molculas
podem ser raras e especcas de algumas clulas
ou abundantes e amplamente distribudas em vrias clulas.
Em alguns casos, as interaes entre as VAPs
e os receptores no so sucientes para permitir
o incio da infeco. Nesses casos, a interao dos
vrions com protenas adicionais da membrana
celular, denominadas co-receptores, necessria
para que ocorra a penetrao. Por exemplo, a interao inicial dos adenovrus com a clula hospedeira envolve a ligao da protena ber com
um receptor celular. Essa interao no suciente para assegurar a penetrao, mas necessria para que a protena viral penton interaja com
uma segunda molcula da membrana celular a
vitronectina e resulte em penetrao. O vrus
da imunodecincia humana (HIV-1) liga-se ao
receptor CD4 e utiliza como co-receptor um receptor de citocina. A interao inicial do vrus do
herpes simplex humano (HSV-1) com as clulas
mediada pela interao da glicoprotena gC (ou
gB) com o sulfato de heparina na superfcie celular. A fuso e penetrao, no entanto, dependem
de interaes secundrias entre a gD (e tambm a
gH) com outras molculas da membrana.
112
Captulo 5
Vrus RNA
Vrus DNA
Tabela 5.1. Receptores celulares e mecanismos de penetrao dos principais vrus animais
.
Forma/local de Penetrao
Famlia
Vrus
Receptor Viral
Herpesviridae
Herpes simplex
Pseudoraiva
Fuso na membrana
plasmtica
Adenoviridae
Adenovrus 2
Endocitose dependente
de clatrina
Poxviridae
Vaccinia
Polyomaviridae
SV-40
Papillomaviridae
Papilomavrus
bovino
Endocitose dependente
de clatrina
Parvoviridae
Parvovrus
canino
Receptor da transferrina
Endossomos
Asfarviridae
Peste suna
africana
nd
Endossomos
Arteriviridae
Vrus elevador da
desidrogenase lctica
Endossomos
Coronaviridae
Endossomos
Coronavrus
humano 229E
CD13 (Aminopeptidase)
Membrana plasmtica
Orthomyxoviridae
Vrus da influenza
cido silico
Paramyxoviridae
Vrus do sarampo
CD46
Membrana plasmtica
Togaviridae
Semliki Forest
Flaviviridae
CD46 bovino
Endossomos
Rhabdoviridae
Vrus da raiva
Filoviridae
Caveola
Retroviridae
HIV-1
Membrana plasmtica
Bunyaviridae
Vrus Hantaan
Integrinas ("3)
Picornaviridae
Integrinas (!v)
Endocitose
Caliciviridae
nd
nd
Endossomos
Reoviridae
Reovrus
Endossomos
Rotavrus
* Adaptado de Klasse et al. (1998); de Pelkmans e Helenius (2003) e referncias selecionadas. CAR: receptor de virus
b
coxsackie B e adenovirus. no determinado.
Replicao viral
113
114
3.2 Penetrao
A penetrao a etapa subseqente adsoro e envolve a transposio da membrana
plasmtica, permitindo a introduo do nucleocapsdeo (genoma viral + protenas) no interior
da clula, local onde ocorrero a expresso gnica e a replicao do genoma. A transposio da
membrana pode ocorrer na superfcie celular ou
j no interior do citoplasma, a partir de vesculas
produzidas por endocitose, fagocitose ou macropinocitose. Dependendo da biologia do vrus, a
penetrao pode ocorrer sem prvia internalizao
(se ocorrer na superfcie celular) ou aps internalizao (se ocorrer a partir de vesculas intracitoplasmticas). No entanto, a internalizao de
vrions em vesculas endocticas no assegura a
ocorrncia de penetrao. A internalizao em
vesculas ou a penetrao direta so processos
que ocorrem imediatamente aps a ligao dos
vrions aos receptores da membrana plasmtica.
Ao contrrio da adsoro, a internalizao e
penetrao so processos dependentes de energia
e no ocorrem ecientemente a 4C. Uma forma
de sincronizar o incio da infeco viral in vitro
realizar adsoro a 4C durante uma hora (ocorre
adsoro sem penetrao) e, a seguir, transferir o
cultivo para 37C, quando ocorrer a penetrao
simultnea das partculas vricas adsorvidas.
As etapas iniciais da infeco viral tm sido
estudadas com o recurso da ME e com a utilizao de qumicos que inibam a internalizao e/
ou a acidicao de vesculas intracelulares (i.e.,
endossomos). Dessa forma, quando a infeco
por um vrus prevenida por substncias inibidoras da endocitose, deduz-se que a sua penetrao dependa de prvia internalizao; quando
a infeco inibida por agentes que previnam a
acidicao dos endossomos, conclui-se que o
pH cido dessas organelas seja necessrio para a
penetrao.
Em geral, os vrus penetram nas clulas utilizando um (ou alternativamente mais de um)
dos seguintes mecanismos: a) penetrao por
fuso na superfcie celular; b) penetrao aps
endocitose (mediada por clatrina, caveolina ou
agrupamentos de lipdios); c) fagocitose. Esses
mecanismos esto ilustrados na Figura 5.3.
Captulo 5
115
Replicao viral
se assegura a internalizao e o transporte dos vrions aos locais de expresso gnica e replicao;
e) a penetrao a partir dos endossomos reduz os
riscos de deteco pelo sistema imunolgico, pois
no deixa protenas virais expostas na superfcie
celular; e f) o ambiente endossomal se acidica
gradativamente, o que auxilia na ativao dos
mecanismos de fuso e penetrao.
Microtbulos
H+
H+
H+
H+
Retculo endo
H+
plasmtico
H+
Ncleo
?
E
Meio extracelular
Citoplasma
Figura 5.3. Principais mecanismos de penetrao dos vrus nas clulas hospedeiras. A) Penetrao na superfcie
celular, por fuso com a membrana plasmtica; B) Penetrao por fuso aps endocitose mediada por clatrina; C)
Penetrao por fuso aps endocitose mediada por caveolina; D-E) Penetrao aps endocitose mediada por
agrupamentos de lipdios.
116
Captulo 5
117
Replicao viral
3.3.3.2 Macropinocitose
A macropinocitose um processo celular
no especco (pode ocorrer na ausncia de ligantes aos receptores) de internalizao de volumes
grandes de uidos e de regies de membrana.
Substncias internalizadas por essa via tambm
so direcionadas aos endossomos e lisossomos.
O vrus da vaccinia (poxvrus) pode penetrar por
essa via, uma vez que os seus vrions so muito
grandes para serem internalizados por endocitose mediada por clatrina. O vrus HIV tambm parece utilizar essa via para infectar macrfagos.
118
Captulo 5
119
Replicao viral
DNA viral atravs do poro nuclear. O adenovrus tipo 2 transportado ao longo dos microtbulos at as proximidades do ncleo e liga-se a
lamentos dos poros nucleares. Aps, com o auxlio das importinas, e pela ligao com histonas,
ocorre a desmontagem do vrion e o DNA viral
translocado para o interior do ncleo.
120
Captulo 5
Vrus DNA
Poxviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Polyomaviridae
Papillomaviridae
(Classe I)
dsDNA
Vrus RNA
Vrus que realizam
transcrio reversa
Circoviridae
Parvoviridae
(Classe II)
Hepadnaviridae
(Classe VII)
ssDNA
Reoviridae
Birnaviridae
(Classe III)
Retroviridae
(Classe VI)
pdsDNA
ssRNA
(+)
dsRNA
(+ / -)
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Bunyaviridae
Filoviridae
(Classe V)
ssRNA
(-)
Picornaviridae
Flaviviridae
Caliciviridae
Astroviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Togaviridae
(Classe IV)
ssRNA
(+)
ssDNA
.dsDNA
.dsDNA
dsDNA
mRNA
Traduo
Protena
Figura 5.4. Estratgias de produo de RNA mensageiros (mRNA) e expresso gnica das diferentes classes de vrus.
Nos vrus da classe I, os promotores virais so reconhecidos por fatores celulares, e os genes so transcritos pela
RNApolII celular, resultando em mRNAs traduzveis pelos ribossomos (1). Nos vrus da classe II, o genoma DNA de
fita simples linear (parvovrus) ou circular (circovrus) , inicialmente, convertido em fita dupla e transcrito pela
RNApolII (2). Apenas as cadeias negativas dos vrus da classe III (genoma RNA de fita dupla) so transcritas pela
polimerase viral, originando os mRNA (5). O genoma dos vrus da classe IV (RNA fita simples de polaridade
positiva) pode ser diretamente traduzido, em toda a sua extenso (flavivrus, picornavrus) ou parcialmente (outros)
(7). Nestes, o restante dos mRNA so produzidos pela transcrio do RNA intermedirio pela polimerase viral. Nos
vrus da classe V, o genoma RNA de polaridade negativa transcrito pela polimerase presente nos vrions (6). Nos
hepadnavrus (classe VII), os mRNA so produzidos pela transcrio do DNA viral pela RNApolII e fatores celulares
(3). Nos retrovrus (classe VI), os mRNA so produzidos pela transcrio do provrus DNA (uma cpia do RNA
genmico) pela RNApolII e fatores celulares, aps a integrao do provrus ao genoma celular (4).
e processamento de DNA e RNA. Isso s possvel porque esses vrus trazem, nos vrions, as
enzimas e fatores auxiliares para a transcrio e
processamento dos seus mRNA.
Os vrus RNA, com exceo dos retrovrus,
no dependem da maquinaria celular de transcri-
121
Replicao viral
122
Captulo 5
para cumprir as etapas de expresso gnica e replicao do seu genoma. Baltimore (1971) props
a classicao dos vrus em seis grupos, de acordo com o tipo de genoma, local e estratgia de
replicao. Essa classicao foi posteriormente
ampliada para contemplar novos vrus e estratgias identicadas, resultando em sete grupos
ou classes (Tabela 5.2). A seguir sero abordados
os principais aspectos da replicao de cada um
desses grupos. Os detalhes da replicao dos vrus de cada famlia sero abordados nos captulos especcos.
rus. A contribuio dos fatores virais na replicao desses vrus, no entanto, varia muito entre as
diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA mais
simples (circovrus, parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
pois os seus genomas codicam poucos produtos associados com funes replicativas. Por outro lado, os vrus DNA complexos (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquinaria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral.
A replicao da maioria dos vrus DNA
ocorre no ncleo da clula hospedeira. O genoma
desses vrus contm regies regulatrias que so
reconhecidas pela maquinaria celular de transcrio e, assim, podem utiliz-la para a produo
Tabela 5.2 Classificao dos vrus de acordo com o tipo de genoma, local de replicao e estratgia utilizada para
produzir os mRNAs.
Classe
Genoma
Local de replicao
Famlias
Ia. Ncleo
Polyomaviridae
Papillomaviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Ib. Citoplasma
Poxviridae
Asfarviridae
II
Ncleo
Parvoviridae
Circoviridae
III
Citoplasma
Reoviridae
Birnaviridae
IV
IVa.Traduo integral
do genoma
Flaviviridae
Picornaviridae
IVb.Traduo parcial
do genoma; mRNAs
subgenmicos
Astroviridae
Caliciviridae
Togaviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Citoplasma
Va. Ncleo
V
Orthomyxoviridae
Bornaviridae
Vb. Citoplasma
Bunyaviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Paramyxoviridae
Filoviridae
VI
Citoplasma/ncleo
Retroviridae
VII
Ncleo/citoplasma
Hepadnaviridae
123
Replicao viral
dos mRNA necessrios sntese de suas protenas. Em diferentes graus, esses vrus tambm
utilizam enzimas e fatores celulares para o metabolismo de nucleotdeos, para a sntese de DNA
e replicao do genoma.
Os poxvrus e asfarvrus se constituem em
excees, pois trazem, nos vrions, as enzimas e
fatores necessrios para a transcrio e modicao dos mRNA e codicam as enzimas e fatores
requeridos para a replicao do genoma. Mesmo
assim, so dependentes da maquinaria celular de
sntese protica. A replicao desses vrus ocorre
inteiramente no citoplasma.
O mecanismo de replicao do genoma
tambm apresenta diferenas entre as famlias,
devido a peculiaridades de estrutura, topologia
e organizao genmica. A replicao do genoma circular de ta dupla dos poliomavrus, por
exemplo, realizada quase que exclusivamente
por enzimas e fatores celulares. A sntese das novas cadeias utiliza um primer de RNA e ocorre de
forma bidirecional e semidescontnua, a exemplo
da replicao do DNA celular. A replicao dos
genomas DNA de ta simples (circovrus e parvovrus) tambm envolve a participao predomi-
Genoma dsDNA
Transcrio
genes iniciais
mRNA
Traduo
3
Replicao
DNA Prognie
Transcrio
genes tardios
mRNA
Vrions
Egresso
Traduo
6
Protenas
iniciais (NS)
Morfognese
Morfognese
Protenas tardias
(estruturais)
Figura 5.5. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ia (Adenoviridae, Herpesviridae, Polyomaviridae e Papillomaviridae).
Os genes iniciais so transcritos antes da replicao do genoma (1) e geralmente codificam protenas no-estruturais
(NS) envolvidas nas etapas seguintes da replicao (2). Essas protenas, isoladamente ou em conjunto com fatores
celulares, atuam na replicao do genoma (3). Os genes tardios so transcritos aps a replicao do genoma (4) e
codificam protenas estruturais em sua maioria (5). As protenas estruturais so importadas para o ncleo, onde
ocorre a morfognese (6).
124
Captulo 5
Genoma DNA
(encapsidado)
Transcrio
inicial
mRNA iniciais
Traduo
Protenas
iniciais (NS)
DNA
livre
DNA prognie
Replicao
5
Transcrio 7
mRNA
intermedirios
6 Traduo
Protenas
intermedirias
mRNA
tardios
Morfognese
Vrions
Egresso
Transcrio
Traduo
9
Morfognese
Protenas
tardias
Figura 5.6. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ib (Poxviridae e Asfarviridae). Os genes iniciais so transcritos pela
RNA polimerase viral ainda com o DNA parcialmente encapsidado, resultando nos mRNAs (1) que so traduzidos
nas protenas iniciais (2). Essas protenas participam do desnudamento completo do genoma (3), na sua replicao (4)
e na transcrio (5) dos genes que codificam as protenas intermedirias (6). Estas protenas esto envolvidas na
transcrio dos genes tardios (7), que codificam principalmente protenas estruturais (8). Estas protenas participam
da morfognese dos vrions, juntamente com o DNA recm-replicado (9).
125
Replicao viral
tos que interferem com a resposta do hospedeiro infeco, dicultando o reconhecimento das
clulas infectadas pelo sistema imunolgico do
hospedeiro.
Genoma DNA
(cadeia simples)
Transcrio 4
mRNA
DNA ss (-)
DNA ss (+)
Morfognese 5
Vrions
Egresso
Traduo
Morfognese 5
Protenas estruturais
e
No-estruturais (NS)
Figura 5.7. Ciclo replicativo dos vrus da classe II (Parvoviridae e Circoviridae). O genoma DNA de cadeia simples ,
inicialmente, convertido em DNA de cadeia dupla por polimerases e fatores auxiliares da clula hospedeira (1).
Apenas uma das cadeias (DNA de sentido negativo) transcrita pela RNA polimerase II celular, originando os
mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde so traduzidos (3). A replicao do genoma
depende da interao entre fatores celulares e virais e resulta na sntese de cpias de DNA de cadeia simples de
sentido positivo (4) e negativo (5). As molculas de DNA recm-replicadas so ento includas nos vrions, atravs de
interaes especficas com as protenas do capsdeo (6).
126
Captulo 5
Genoma DNA
(Parcialmente ds)
1
A cadeia dupla
completada
DNAccc
Egresso
7
mRNA
Transcrio
parcial
Traduo
Protenas estruturais
e polimerase
Vrions
DNApds
PgRNA
Transcrio
completa
5
Transcrio
reversa
Sntese da
cadeia complementar
CDNA
Figura 5.8. Ciclo replicativo dos vrus da classe VII (Hepadnaviridae). O DNA genmico , inicialmente, convertido
em uma molcula circular de cadeia dupla completa ccc (1). Essa molcula transcrita pela RNA pol II celular,
originando inicialmente mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde sero traduzidos em
protenas estruturais e no-estruturais (3). RNAs com a extenso integral do genoma (pgRNA) so, ento, produzidos
(4) e exportados para o citoplasma. A polimerase viral recm-produzida realiza a transcrio reversa do pgRNAs,
resultando em cDNA (5), que convertido em DNA de cadeia dupla (6). Capsdeos contendo o DNA de cadeia
parcialmente dupla podem voltar ao ncleo e reiniciar o ciclo (7) ou participar da morfognese das partculas vricas
(8).
genoma logo no incio da infeco. Uma vez produzida, essa enzima se encarrega de replicar o
genoma, produzindo cpias de RNA de sentido
antigenmico, que servem de molde para a sntese de mais cpias de sentido genmico. Por isso,
o genoma desses vrus dito infeccioso, ou seja, a
sua introduo por mtodos articiais em clulas
permissivas (transfeco) resulta na ocorrncia
de todas as etapas do ciclo replicativo e na produo de prognie viral.
Por outro lado, o genoma dos vrus RNA de
polaridade negativa no pode ser traduzido, pois
possui o sentido complementar ao mRNA. Esses
vrus solucionaram esse problema de forma diferente: trazem associado ao material gentico
algumas molculas da polimerase de RNA (replicase). Uma vez no interior da clula, a replicase
sintetiza cpias de RNA de sentido antigenmico
que servem de mRNA para a sntese das protenas virais. Esses RNAs tambm servem de molde
para a sntese de mais cpias de RNA de sentido
genmico. O genoma dos vrus RNA de polaridade negativa no infeccioso, ou seja, a sua
introduo (desprovido de protenas) em clulas
permissivas no resulta na ocorrncia das etapas
127
Replicao viral
seguintes da replicao. Em resumo, a necessidade da polimerase de RNA para replicar o genoma foi suprida, de formas diferentes, tanto pelos
vrus RNA de sentido positivo como pelos vrus
RNA de sentido negativo.
A replicao do genoma dos vrus RNA
ocorre em duas etapas. A primeira etapa envolve
a sntese de um RNA de sentido antigenmico,
tambm denominado replicativo intermedirio
(RI). Nos vrus RNA de polaridade positiva, o
RI possui polaridade negativa; nos vrus RNA
de polaridade negativa, o RI possui polaridade
positiva. A segunda etapa envolve a sntese de
RNA de sentido genmico, utilizando o RI como
molde. Em alguns vrus RNA de sentido positivo
(Classe IVb), o RI tambm serve de molde para a
sntese de mRNAs. Embora essas duas etapas faam parte do processo replicativo, s vezes, recebem denominaes diferentes: a sntese de RNAs
de polaridade positiva denominada transcrio;
a sntese da cpia negativa de RNA denominada replicao. Essas duas etapas so realizadas
pelas replicases virais, pois as clulas eucariotas
no possuem enzimas e funes para replicar o
RNA. Alm das replicases, esses vrus codicam
outras protenas no-estruturais (NS) com funes diversas e que auxiliam, de algum modo,
na replicao do genoma. Atividades de helicase,
protease, ligao no RNA, ATPase, ribonuclease,
RNA
anti-genmico
(-)
4
Replicao
3
1,6
Traduo
Poliprotena
Morfognese
Vrions
Egresso
Clivagem
7
Morfognese
Protenas no-estruturais
Protenas estruturais
Figura 5.9. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVa (Picornaviridae e Flaviviridae). A ORF nica do genoma
traduzida em toda a sua extenso logo aps o desnudamento, resultando da produo de uma longa poliprotena (1).
medida que vai sendo produzida, essa poliprotena vai sendo clivada por proteases celulares e/ou virais dando
origem s protenas individuais, entre as quais a RNA polimerase viral (2). A RNA polimerase responsvel pela
replicao do genoma, que ocorre via produo de um intermedirio RNA de sentido negativo (3, 4). As novas cpias
de RNA de sentido positivo so, ento, utilizadas em novos ciclos de traduo (6), replicao (3,4) e/ou participam da
morfognese da prognie viral (7).
128
Captulo 5
Replicao
3
Traduo
parcial
Poliprotena
regio 5
Clivagem
RNA
anti-genmico
(-)
Replicao
Transcrio
mRNA
subgenmicos
Vrions
Egresso
Traduo
7
Protenas
no-estruturais
Morfognese
Morfognese
Protenas
estruturais
Figura 5.10. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVb (Coronaviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Caliciviridae e
Astroviridae). O RNA genmico de sentido positivo traduzido parcialmente, resultando em uma poliprotena (1) que
clivada em protenas no-estruturais, incluindo a replicase (2). A replicase recm-produzida replica o genoma em toda a
sua extenso, produzindo uma molcula de RNA de sentido antigenmico (3). O RNA anti-genmico serve de molde
para a transcrio e produo de vrios RNAm subgenmicos de extenses variveis (4), cuja traduo resulta nas
protenas estruturais (5). Posteriormente tambm so produzidas cpias inteiras do genoma RNA de sentido positivo (6),
que serviro de molde para ciclos adicionais de replicao (3) e sero oportunamente encapsidadas (7).
129
Replicao viral
Nos vrus com o genoma segmentado, a transcrio dos segmentos genmicos de RNA tambm
resulta em dois tipos de RNAs, com funes diferentes (mRNAs para a traduo; RI RNAs para a
replicao). Os mRNAs e RIs, derivados de cada
segmento, no entanto, possuem tamanhos aproximados. Os mRNAs possuem alguns nucleotdeos a mais e a estrutura cap na extremidade 5
e uma cauda poliA na extremidade 3. Os RNAs
RI, sem cap ou poliA so produzidos tardiamente
na infeco e servem exclusivamente de molde
para a replicao e produo de segmentos de
RNA genmicos. Todas as etapas de transcrio
e replicao desses vrus ocorrem com o genoma
intimamente associado com protenas, principalmente a nucleoprotena (NP), formando o complexo ribonucleoprotena (RNP).
Os arenavrus e os vrus do gnero Phlebovirus (Bunyaviridae) apresentam uma estratgia peculiar de expresso de alguns de seus genes. Os
RNA genmicos possuem polaridade negativa
e a maioria dos genes expressa pela estratgia
descrita acima. No entanto, um dos segmentos
genmicos contm seqncias codicantes de
protena tanto no sentido do genoma (sentido negativo) como no sentido antigenmico. Essa es-
Replicao
3
1, 5
Transcrio
mRNA
2
Morfognese
Vrions
Egresso
Traduo
6
Morfognese
Protenas estruturais
No-estruturais + NP
Figura 5.11. Ciclo replicativo dos vrus da classe V (Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridade, Orthomyxoviridae
e Bunyaviridade). Os genes individuais so transcritos pela RNA polimerase presente nos vrions, produzindo
mRNAs correspondentes a cada gene (1). A traduo desses mRNA resulta em protenas estruturais e NS (2). As
protenas NS, incluindo a replicase, participam da replicao do genoma. A replicao ocorre via sntese de RNAs de
sentido antigenmico (3), que servem de molde para a sntese de RNAs de sentido genmico (4). As molculas de
RNA de sentido genmico servem de molde para novos ciclos de transcrio (5), replicao (3, 4) e sero
posteriormente encapsidadas (6).
130
Captulo 5
deo com os complexos pr-formados entre o genoma e outras protenas estruturais. A liberao
dos vrions maduros ocorre de forma ineciente
aps a lise celular. As molculas de RNA genmico possuem funes distintas: as molculas de
RNA de polaridade negativa servem apenas de
molde para a transcrio. A funo aparente das
molculas genmicas de RNA positivo apenas
parear com as cadeias negativas. J as molculas
de RNAs de sentido positivo, produzidas durante a infeco, possuem duas funes: podem ser
traduzidas em protenas (mRNAs) e/ou servem
de molde para a sntese das cadeias negativas (Figura 5.12).
Pr-capsdeos
+ mRNA
Genoma RNA
(cadeia dupla)
1,6
Morfognese
inicial
Transcrio
primria e
secundria
mRNA
2
Morfognese
Vrions
Egresso
Traduo
6
Morfognese
Protena no-estruturais
Protenas estruturais
Figura 5.12. Ciclo replicativo dos vrus da classe III (Reoviridae e Birnaviridae). A replicase viral trazida nos vrions
realiza a transcrio primria, produzindo mRNAs (1), que so traduzidos em protenas estruturais e no-estruturais
(2). Esses mRNAs formam complexos com as protenas estruturais recm-produzidas (3) e, no interior desses
complexos, servem de molde para a sntese de RNAs de sentido negativo, com a participao das protenas NS (4). As
molculas de RNA de cadeia dupla, resultantes da replicao (4), servem de molde para a transcrio secundria (5) e
para etapas adicionais de replicao (4). Essas molculas, j conjugadas com algumas protenas estruturais,
eventualmente participam da morfognese pela associao com as demais protenas do capsdeo (6).
131
Replicao viral
ssDNA
Transcrio
reversa
1
fator viral, o genoma dos retrovrus o nico genoma viral a ser sintetizado exclusivamente por
enzimas e fatores celulares (Figura 5.13).
Sntese da
cpia complementar
Morfognese
7
dsDNA
(provrus)
3
Traduo
5
Pol+In
Protenas do
capsdeo
Integrao
Provrus DNA
Integrado
Vrions
Splicing +Traduo
6
Egresso
Morfognese
Glicoprotenas
do envelope
Figura 5.13. Ciclo replicativo dos vrus da classe V (Retroviridae). Logo aps o desnudamento, a enzima viral
transcriptase reversa (RT) sintetiza uma molcula de DNA complementar ao RNA genmico (1) que, em seguida,
convertida em DNA de cadeia dupla (dsDNA), tambm pela ao da RT (2). Esta molcula de dsDNA, denominada
provrus, penetra no ncleo e integrada no genoma da clula hospedeira pela atividade viral integrase (3). Os genes
presentes no provrus so, ento, transcritos pela RNA polII celular, originando mRNAs de extenso subgenmica (4)
para a traduo nas protenas do envelope (5). A transcrio do provrus em toda a sua extenso resulta em mRNAs de
extenso genmica (6), que podem ser traduzidos nas outras protenas estruturais e polimerase viral (7) ou participam
da morfognese das partculas virais (8).
132
Captulo 5
Meio extracelular
Membrana plasmtica
Citoplasma
Figura 5.14. Maturao intracelular e egresso dos vrus sem envelope. Os componentes do capsdeo interagem entre si
e com o genoma (1), resultando na formao de partculas vricas infecciosas (2), que so liberadas por lise celular (3).
133
Replicao viral
envelope e completar a sua morfognese/maturao, podem ser liberados por exocitose sem induzir necessariamente lise da clula.
Os vrus RNA de sentido negativo, alguns
vrus RNA de sentido positivo (togavrus) e os retrovrus completam a morfognese e a maturao
Meio extracelular
Membrana plasmtica
Citoplasma
Figura 5.15. Maturao intracitoplasmtica de vrus envelopados por brotamento em membranas celulares internas.
Interao dos nucleocapsdeos com as caudas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento e transporte no interior
de vesculas (2), liberao por exocitose (3).
Meio extracelular
4
Membrana plasmtica
2
1
Citoplasma
Figura 5.16. Brotamento e maturao de vrus envelopados na membrana plasmtica. Interao do nucleocapsdeo
com a protena matriz e/ou caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento atravs da
membrana plasmtica e aquisio do envelope (2, 3), egresso de partculas infecciosas (4).
134
4 Bibliografia consultada
BEAUD, G. Vaccinia virus DNA replication: a short review.
Biochimie, v.77, p.774-779, 1995.
BOEHMER, P. E.; LEHMAN, I.R. Herpes simplex virus DNA
replication. Annual Review of Biochemistry, v.66, p.347-384,
1997.
Captulo 5
Replicao viral
135
SODEIK, B. Mechanisms of viral transport in the cytoplasm.
Trends in Microbiology, v.8, p.465-472, 2000.
TAVIS, J.E. The replication strategy of the hepadnaviruses. Viral
Hepatitis Review, v.2, p.205-218, 1996.
WHITE, D.O.; FENNER, F. Medical Virology. 4.ed. San Diego,
CA: Academic Press, 1994. 610p.
WHITTAKER, G.R.; KANN, M.; HELENIUS, A. Viral entry
into the nucleus. Annual Review of Cell and Developmental
Biology, v.16:627-651, 2000.
WIMMER, E. Cellular Receptors for Animal Viruses. New
York, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. 526p.
1 Introduo
139
2 Poliomavrus
140
3 Papilomavrus
3.1 O ciclo replicativo
3.2 O genoma dos PpVs
3.3 Expresso dos genes iniciais
3.4 Replicao do DNA e interferncia com o ciclo celular
3.5 Expresso dos genes tardios
3.6 Concluses
4 Adenovrus
4.1 O ciclo replicativo
4.2 O genoma dos AdVs
4.3.Expresso dos genes iniciais
4.4 Replicao do DNA viral
4.5 Expresso dos genes tardios
4.6 Concluses
5 Herpesvrus
5.1 O ciclo replicativo
5.2 O genoma dos HVs
5.3 Os genes virais
5.4 Expresso gnica
5.5 Replicao do DNA viral
5.6 Expresso gnica durante a infeco latente
1
140
142
142
144
145
146
146
147
147
147
148
148
150
151
151
151
151
153
154
154
156
156
156
156
157
158
159
160
5.7 Concluses
6 Poxvrus
160
160
160
160
161
162
163
7 Bibliografia consultada
163
1 Introduo
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hospedeira, associada com fatores codicados pelo
vrus. A contribuio relativa dos fatores virais
na replicao desses vrus, no entanto, varia muito entre as diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA pequenos (parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
ou seja, os seus genomas codicam poucos produtos associados com funes replicativas. Por
outro lado, os vrus DNA grandes (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquinaria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral. Dessa
forma, qual seria a estratgia mais eciente para
a manuteno desses vrus na natureza? Na verdade, ambas, pois tanto os vrus DNA pequenos
como os grandes tm conseguido se perpetuar,
sugerindo que uma perfeita adaptao a um nicho tecidual mais importante do que a complexidade do genoma e a estratgia de replicao.
Ou
Poliomavrus
Papilomavrus
Adenovrus
Parvovrus
Herpesvrus
Poxvrus
Figura 6.1. Ilustrao da replicao do genoma dos principais vrus DNA. Os estgios intermedirios foram propostos
a partir de estudos fsico-qumicos e, microscopia eletrnica, realizados a diferentes intervalos aps a infeco.
140
Captulo 6
2 Poliomavrus
A famlia Polyomaviridae contm um nico
gnero, Polyomavirus, que inclui o prottipo da
famlia, o vrus smio 40 (SV-40), e os vrus JC e
BK, que tm sido, esporadicamente, associados
com tumores em humanos. Os poliomavrus
(PoVs) so vrus DNA pequenos, sem envelope,
de simetria icosadrica, que infectam um amplo
espectro de hospedeiros desde pssaros at humanos . As infeces pelos PoVs so geralmente
subclnicas. No entanto, a infeco de clulas que
no suportam uma replicao produtiva freqentemente resulta em transformao neoplsica.
Por isso, os PoVs so tambm conhecidos como
os pequenos vrus DNA tumorais.
Apesar de sua pequena importncia clnica,
os PoVs foram alvo de intensivos estudos biolgicos e moleculares, principalmente devido s
suas propriedades tumorignicas. As pesquisas
com os PoVs elucidaram importantes aspectos
da biologia celular. Dentre as maiores descobertas resultantes do estudo dos poliomavrus destacam-se: a) estrutura do DNA superenrolado,
b) estrutura e funo da origem da replicao do
DNA, c) estrutura e funo dos promotores, d) descoberta dos enhancers e o seu papel na expresso
gnica, e) descoberta do mecanismo de splicing
alternativo dos transcritos (RNA mensageiros,
mRNA) e f) replicao do DNA cromossmico.
141
cado. Os mRNA virais produzidos so processados por splicing e exportados para o citoplasma,
onde so traduzidos. As protenas virais recmproduzidas so transportadas de volta ao ncleo,
onde participam da replicao do genoma e, posteriormente, da montagem das partculas vricas.
Durante esse processo, os mRNA e as protenas
virais necessitam interagir com componentes da
maquinaria celular responsvel pela exportao
e importao nuclear de macromolculas. A morfognese das partculas virais ocorre no ncleo.
As partculas recm-formadas so transportadas
1
7
Ncleo
5a
Transformao
celular
Citoplasma
9
Clula permissiva
Clula no-permissiva
Figura 6.2. Ciclo replicativo dos poliomavrus em clulas permissivas (A) e no-permissivas (B). A) Aps a penetrao
do vrion (1), o genoma desnudo no interior do ncleo (2), onde os genes iniciais so transcritos pela maquinaria
celular de transcrio (3). Os mRNAs so traduzidos nas protenas iniciais, ou seja, os antgenos T (4). Os antgenos T
ingressam no ncleo e interagem com o DNA viral e com fatores da clula hospedeira, resultando na replicao do
genoma (5). Aps a replicao, os genes tardios so transcritos (6) e a traduo dos mRNAs origina as protenas
estruturais (7) que ingressam no ncleo e interagem com o genoma para formar as novas partculas vricas (8). Os
vrions se acumulam no ncleo, so exportados em vesculas para o citoplasma e liberados por lise celular ou por
exocitose (9). Em clulas no-permissivas (B), as etapas 1 a 4 ocorrem normalmente. No entanto, o antgeno T falha em
interagir com os fatores celulares, no ocorrendo a replicao do DNA viral, nem a transcrio e expresso dos genes
tardios. O DNA viral persiste no ncleo da clula (5a) e os genes dos antgenos T continuam sendo expressos (3, 4),
podendo levar imortalizao e transformao celular. No h replicao do genoma e nem produo de prognie
viral.
142
Captulo 6
143
m RNA iniciais
m RNA tardios
Enhancer
72
72
TATA
21 21 22
III
II
Aux-2
ORI
Core
Promoter inicial
I
Aux-1
320
240
160
80
0/5243
5163 bp
PL Ori PE
VP2
Organizao genmica
do SV-40
ST
VP3
LT
17kT
VP1
Figura 6.3. Estrutura e organizao do genoma do SV-40 (inferior) e organizao das regies regulatrias da
transcrio e replicao (superior). ORI: origem de replicao; PE: promotor dos genes iniciais; PL: promotor dos
genes tardios; lT: mRNA do gene do antgeno T grande; sT: mRNA do gene do antgeno T pequeno; VP1, VP2 e VP3:
mRNA das protenas estruturais. >>: stios de ligao do antgeno; I: stio de regulao negativa da transcrio dos
mRNA iniciais; II: stios de ligao e separao do DNA para o incio da replicao; III: stios de regulao positiva da
transcrio dos genes tardios.
144
dica que esta protena regula a sua prpria expresso. Quando a quantidade de antgeno lT, na
clula infectada, atinge nveis altos, a ocupao
desses stios pelo prprio antgeno lT regula negativamente a transcrio do seu gene.
A prxima etapa do ciclo replicativo a replicao do genoma viral. Como o genoma dos
PoVs no codica os produtos necessrios sua
prpria replicao, esses vrus dependem integralmente de enzimas e fatores celulares para replicar o seu DNA. No entanto, apenas um pequeno nmero de clulas no organismo encontra-se
na fase S do ciclo celular, fase em que a clula expressa os fatores necessrios para a replicao do
DNA nuclear. A maioria das clulas do organismo j so diferenciadas ou so clulas que necessitam estmulos externos (fatores de crescimento, hormnios ou outros estmulos mitognicos)
para iniciar o ciclo celular. Os PoVs, assim como
outros vrus DNA, solucionaram esse problema
ao desenvolverem mecanismos para estimular as
clulas a entrarem em fase S e, assim, produzirem os fatores necessrios replicao do seu genoma. Dessa maneira, o SV-40 capaz de infectar
de forma persistente clulas renais diferenciadas
e que no esto em diviso de seu hospedeiro
natural.
A replicao do DNA cromossmico das clulas ocorre durante a fase S do ciclo celular, mas
a sntese e o acmulo dos fatores necessrios
replicao do DNA iniciam na fase anterior (G1).
A transio entre as fases G1 e S controlada parcialmente pela protena do retinoblastoma (pRb)
e pelas protenas relacionadas p107 e p130. Em
clulas que no esto em diviso, as protenas da
famlia Rb impedem o incio da fase S pelo seqestro de fatores de transcrio que ativam os
genes das enzimas relacionadas com a replicao
do DNA, incluindo a DNA polimerase . Aps o
estmulo mitognico, a ciclina D liga-se nas cdk
4 e cdk 6, ativando-as, o que leva hiperfosforilao da protenas Rb e resulta na liberao dos
fatores de transcrio (E2F) e incio da fase S.
Outros fatores tambm esto envolvidos no
controle da transio entre as fases G1 e S. O fator
de transcrio p53 pode prevenir a sntese noprogramada de DNA e bloquear o incio da fase
S quando so detectadas leses no DNA celular.
Captulo 6
145
Antgeno T
Domnio J
Hsc70
L
X
C
X
E
N
L Liga na ORI
S
ATPase
Zn
Liga na p53
Liga na p53
pRB
p53
p107
p300
HR
p130
Figura 6.4. Estrutura funcional do antgeno T do SV-40. Nessa representao, esto indicados os motivos funcionais
do lT. Domnio J: stio de ligao da protena Hsc70; LXCXE: stio de ligao das protenas da famlia pRb; NLS: sinal
para localizao nuclear; stio de ligao na ORI; stio de ligao de Zn+; stio com atividade ATPase; stios de ligao
nas protenas p53; HR: stio envolvido na determinao do host range.
146
dos tardios no bem conhecido. A redistribuio dos nucleossomos nas regies regulatrias
do genoma possivelmente desempenhe alguma
funo nesse processo, pois resulta na exposio
dos stios regulatrios dos genes tardios para o
reconhecimento pelo aparato celular de transcrio. O promotor que direciona a expresso dos
mRNA tardios possui alguns motivos presentes
tambm nos stios regulatrios dos genes iniciais,
incluindo as seqncias para a ligao do antgeno lT.
Dois mRNA tardios principais so transcritos na direo oposta aos mRNA iniciais e
sofrem splicing alternativo. Os mRNA pequenos
so traduzidos na protena VP1 do capsdeo, e os
transcritos grandes originam a VP2 e VP3. Como
a seqncia que codica a VP3 est contida na
seqncia da VP2, a VP3 poderia ser produzida
pela clivagem da protena VP2. No entanto, tem
sido demonstrado que a traduo e sntese da
VP3 e VP2 so independentes.
A quantidade de mRNA tardios nas clulas
infectadas muito superior a dos mRNA iniciais.
Isso se explica pelo fato de que uma nica partcula vrica contm 360 molculas de VP1. Portanto, para uma prognie viral de 105 vrions por clula, so necessrias 3.6 x 107-8 molculas de VP1.
Assumindo que cada molcula de mRNA pode
originar de 5.000 a 10.000 molculas de VP1, mais
de 30.000 molculas de mRNA da VP1 seriam necessrias para a produo de protena suciente
para encapsidar a prognie viral. O acmulo da
prognie de minicromossomos durante a replicao do DNA viral, com a conseqente amplicao dos moldes DNA e a ativao da transcrio
pelo antgeno lT, so os responsveis pelos nveis
altos de mRNA tardios nas clulas infectadas.
Recentemente, foi relatado que microRNAs
(miRNAs) so transcritos do genoma do SV-40
em fases tardias da infeco. Os miRNAs so
pequenos (aproximadamente 20 nt) e desempenham funes regulatrias na expresso gnica
de eucariotas. A hibridizao desses miRNAs
com determinados mRNA-alvos resulta no silenciamento dos genes correspondentes. Esse silenciamento pode ocorrer por interferncia com a
traduo ou pela degradao dos mRNA. Assim,
Captulo 6
2.7 Concluses
A importncia crtica de uma nica protena o antgeno lT em vrias etapas do ciclo
replicativo, como a transcrio, induo da fase S
e replicao do DNA, constitui-se em um aspecto
nico da famlia Polyomaviridae. O antgeno lT o
protagonista principal e possui vrias atividades
147
O ciclo replicativo dos PpVs est estreitamente associado com o processo de diferenciao
3 Papilomavrus
148
Captulo 6
E6
LCR
AL
P7185
PL
CE
L1
E7
P7940
P89
E8
P890
7946/1
7000
1000
E1
BPV-1
6000
2000
P2443
3000
5000
P3080
L2
4000
E3
AE
E5
E4
E2
149
Vrus introduzido
por microleses
Diferenciao dos
queratincitos
Replicao dos
papilomavrus
Estrato crneo
Camadas
granulares
Vrions maduros
Camadas
espinhosas
superiores
Camadas
espinhosas
inferiores
Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4
Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(substituem as
amplificadoras)
Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)
Figura 6.6. Diferenciao do epitlio cutneo e etapas da replicao dos papilomavrus em infeces benignas (notumorais). As fases de diferenciao celular esto apresentadas esquerda da figura; e as etapas do ciclo replicativo
esto apresentadas direita.
150
Captulo 6
Em resumo, a E6 e a E7 atuam sobre reguladores importantes do ciclo celular e da sobrevivncia das clulas infectadas, com o objetivo de
proporcionar tempo suciente para assegurar a
replicao e produo de prognie viral em clulas diferenciadas. A progresso do ciclo e a diferenciao celular so eventos mutuamente excludentes. De fato, a progresso no-programada do
ciclo celular em clulas diferenciadas geralmente
leva morte celular. Assim, a E6 e a E7, ao inuenciarem simultaneamente o ciclo celular e o
mecanismo de sobrevivncia, so capazes de resolver o impasse que levaria morte celular.
Alm do papel da E6 e E7, experimentos in
vitro tm demonstrado que a E5 do BPV-1 ativa
o receptor para o fator de crescimento derivado
das plaquetas (PDGF), uma protena que se liga
ao PDGF e proporciona o sinal mitognico. Assim, por mimetizar o PDGF, a E5 capaz de criar
sinais adicionais para criar um ambiente de fase
S propcio replicao viral.
151
3.6 Concluses
Os PpVs dependem da diferenciao do epitlio para completar o seu ciclo de replicao, e
a expresso dos seus genes regulada medida
que as clulas basais migram em direo superfcie do epitlio. Os produtos virais no apenas
controlam a expresso gnica dos genes virais e
a replicao do DNA viral como tambm modulam o ciclo celular e os programas de apoptose
para assegurar a produo de prognie viral. Em
algumas circunstncias, infeces abortivas, sem
a realizao completa do ciclo replicativo viral,
podem ocorrer. A exemplo de outros vrus DNA
pequenos, essas infeces abortivas podem resultar em transformaes neoplsicas.
4 Adenovrus
A Adenoviridae uma famlia de vrus DNA
grandes, no-envelopados, que infectam vertebrados e produzem enfermidade leve no trato
respiratrio, gastrintestinal e genitourinrio. Os
adenovrus (AdVs) possuem a capacidade de infectar uma grande variedade de clulas que no
esto em diviso. Por isso, tm sido muito utilizados como vetores para a transferncia de genes e
tambm para vacinas vetoriais. Por essas razes,
a biologia molecular dos AdVs conhecida com
detalhes.
152
Captulo 6
Leader:
2 i
3
x y
L5
L4
ML
L3
L2
E3 (tardio)
L1
IX
E1B
VA
E3
E1A
10
L1 (iniciais)
20
30
40
50
60
70
80
90
100
E2A
E2B
IV a2
E4
Figura 6.7 Estrutura do genoma e mapa de transcrio dos adenovrus. A linha dupla representa o genoma. Os
nmeros abaixo representam as unidades genmicas. Os transcritos iniciais (E: early) so representados por setas
finas; os transcritos tardios (L: late) so representados por setas espessas. A extenso das setas corresponde regio
codificante dos mRNAs. A maioria dos transcritos tardios inicia na regio prxima unidade 16 do mapa e contm
uma regio lder composta por trs seqncias (1, 2 e 3). As regies entre as seqncias lder e as respectivas setas so
removidas por splicing (representam os ntrons).
Biologia foi a descoberta do splicing de RNA realizada durante estudos de expresso gnica.
A maioria das unidades de transcrio codica uma srie de polipeptdeos com funes
relacionadas. Por exemplo, a unidade E1A codica duas protenas que ativam a transcrio e
induzem a clula hospedeira a entrar na fase S,
enquanto a E2 codica trs protenas que atuam
na replicao do DNA viral.
153
154
Captulo 6
51 bp, localizadas nas regies terminais repetidas, servem de origem de replicao (ori). Duas
protenas virais codicadas pela regio E2, a protena pr-terminal (pTP) e a polimerase de DNA,
se ligam nas primeiras 20 bases da ori. Uma terceira protena da E2, a protena ligante do DNA
(DBP), juntamente com fatores celulares, ligamse um pouco abaixo (na direo 3) e interagem
com o complexo pTP/polimerase. A principal
funo da pTP servir de primer para a iniciao da replicao do DNA viral. Essa protena ,
posteriormente, clivada para originar a TP, que
permanece ligada s extremidades 5 do genoma.
A DBP forma multmeros em uma das cadeias
do DNA, provocando a separao das cadeias,
evento que necessrio para a elongao das cadeias-lhas. A sntese de DNA se inicia na extremidade de uma das cadeias e se prolonga at a
outra extremidade, resultando em uma molcula
de cadeia dupla recm-replicada e uma molcula
parental de cadeia simples. No segundo estgio,
a cadeia simples deslocada na reao inicial serve
de molde para a sntese da cadeia complementar.
Em clulas de cultivo, a replicao do DNA viral
se inicia 5 a 10 horas aps a infeco e continua
at a morte celular. Uma ilustrao simplicada
da replicao do genoma dos AdVs est apresentada na Figura 6.8. Maiores detalhes sobre este
mecanismo esto apresentados no Captulo 16.
155
Segunda
etapa
Primeira
etapa
Tp
5
3
3
5
Tp
.pTp
OH
3
.pTp
OH
-OH
-OH
Lineariza
3
5
3
5
5
3
Circulariza
5
3
3
5
3
5
Figura 6.8. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. A cadeia no-replicada circulariza ento
para a formao de uma nova origem de replicao. A replicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao
longo da cadeia, que, em seguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNA esto
replicadas.
156
4.6 Concluses
Os adenovrus codicam uma srie de produtos envolvidos na interferncia com os mecanismos de regulao do ciclo celular. As protenas
E1A so ativadores promscuos de vrios genes
virais e tambm induzem a clula a entrar em
fase S. Por outro lado, os efeitos indiretos dessa
ativao podem levar a clula infectada apoptose. Por isso, os AdV codicam tambm produtos
com atividade antiapopttica. Com isso, o vrus
tem tempo suciente para completar o seu ciclo
replicativo. No hospedeiro, os AdVs interferem
com o reconhecimento de clulas infectadas pelo
sistema imunolgico, tambm com o objetivo de
preservar a integridade das clulas infectadas
pelo tempo necessrio para a concluso do ciclo. Os AdVs tm sido intensivamente estudados
como potenciais vetores para terapia gentica e
vacinas contra vrus.
5 Herpesvrus
Os herpesvrus (HVs) so vrus grandes
(120-200 nm de dimetro), com envelope, que
possuem uma molcula de DNA de cadeia dupla linear como genoma. A famlia Herpesviridae
dividida em trs subfamlias, de acordo com
aspectos biolgicos e moleculares em comum:
Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae. Todos os herpesvrus possuem a capacidade de estabelecer infeces latentes em seus
hospedeiros. Os herpesvrus so encontrados em
praticamente todas as espcies de vertebrados.
Captulo 6
157
A
B
R4
R3
R2 R1
C
D
E
UL
UL
Us
Us
158
Captulo 6
Classe
do gene
Promotor
TATAA
TIF SP1 SP1 SP1 ICP4 SP1 TIF SP1
ICP4
IE (ICP4)
- 300
+1
E (TK)
TATA
+1
TATAA Inr
L (UL38)
DAS
-30
+20
+1
As protenas IE ICP4, ICP27 e ICP22 regulam a expresso dos outros genes virais e, portanto, so indispensveis para a continuao do
ciclo replicativo. A deleo experimental do gene
do ICP4, o mais importante transativador viral,
resulta em um vrus incapaz de replicar. Outras
funes dos genes IE incluem a inibio de splicing de mRNA (ICP27), a modulao do sistema
de degradao das protenas celulares (ICP0) e a
reduo da expresso das ciclinas indutoras da
fase S (ICP22/Us1.5). A expresso das protenas
IE alcana o pico mximo em 2 a 4 horas aps
a infeco. Como o ICP4 capaz de reprimir a
sua prpria expresso, acredita-se que contribua
para a supresso dos genes IE, que observada
nas fases tardias da infeco.
159
160
5.7 Concluses
Os herpesvrus possuem um genoma mais
complexo e codicam vrias protenas envolvidas nos processos replicativos. Com isso, esses
vrus so capazes de replicar em uma variedade
de clulas, independente do seu estado de diviso ou diferenciao. Ao contrrio do que ocorre
com os vrus DNA pequenos (polioma, papiloma
e adeno), os HV no necessitam induzir as clulas
a entrarem na fase S, pois codicam e/ou trazem
nos vrions grande parte dos fatores necessrios
replicao de seu genoma. No entanto, dependem da maquinaria celular de transcrio e processamento dos mRNAs. A replicao dos HVs
geralmente induz uma supresso da sntese de
macromolculas das clulas, geralmente levando
a alteraes metablicas incompatveis com a vida
celular. O estabelecimento de infeco latente se
constitui em uma estratgia muito eciente para
Captulo 6
6 Poxvrus
6.1 O ciclo replicativo
Os poxvrus (PoxV) so vrus DNA que realizam o seu ciclo replicativo incluindo a replicao do genoma integralmente no citoplasma,
uma propriedade que comum tambm ao vrus
da peste suna africana (ASFV), nico membro da
famlia Asfarviridae. Como as enzimas celulares
que participam da sntese de RNA e DNA esto
localizadas no ncleo, os PoxV devem trazer nos
vrions as suas prprias enzimas e fatores auxiliares. Esse cenrio ilustra o nvel de independncia
relativa que esses vrus conseguiram atingir em
relao clula hospedeira. No entanto, embora
codiquem grande parte das enzimas e fatores
de transcrio, os PoxV ainda so dependentes
de vrios fatores auxiliares da clula hospedeira.
O ciclo replicativo dos PoxV foi estudado in vitro,
utilizando-se o vrus da vaccinia (VV) como modelo. Apesar da sua complexidade, o ciclo replicativo do VV relativamente rpido, e a prognie
viral pode ser detectada j oito horas ps-infeco (pi).
161
Repetio invertida
10 kbp
Seqncias nicas
160 kbp
Seqncias repetidas
0,9 kbp 1,3 kbp
Repetio invertida
10 kbp
Seqncias repetidas
1,3 kbp 0,9 kbp
Figura 6.11. Estrutura do genoma dos poxvrus. O genoma consiste de uma molcula contnua de DNA de fita dupla,
sem extremidades livres. Nas duas extremidades, situam-se regies repetidas invertidas de aproximadamente 10 kb
cada. As seqncias nicas abrangem o restante do genoma.
162
Captulo 6
6.5 Concluses
Os PoxVs esto entre os vrus mais complexos de animais e trazem nos vrions e/ou
codicam um nmero grande de enzimas e fatores necessrios transcrio, processamento de
seus mRNAs e replicao do genoma. Por isso,
independem da maquinaria celular de sntese
de RNA e DNA e realizam o ciclo replicativo inteiramente no citoplasma da clula hospedeira.
Os PoxVs tambm codicam uma srie de produtos que antagonizam a resposta imunolgica
do hospedeiro, permitindo, assim, que o ciclo
replicativo seja completado com a mnima interferncia dos mecanismos anti-virais. A facilidade
da manipulao do genoma, assim como a sua
extenso e capacidade de suportar a insero de
grandes segmentos de DNA, tm feito dos PoxV
vrus adequados para a construo de vetores vacinais.
7 Bibliografia consultada
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Cap.4, p.101-111.
Captulo 6
1 Introduo
1.1 Diversidade de estrutura, organizao e funcionalidade dos genomas
1.2 Stios de replicao
1.3 Infidelidade das replicases e diversidade gentica
1.4 Outras protenas virais envolvidas na replicao
7
167
167
169
169
169
169
2.1 Genomas com uma nica ORF, sem produo de mRNA subgenmicos
2.1.1 Estrutura e organizao do genoma
2.1.2 Traduo e replicao do genoma
171
171
172
174
174
174
176
176
177
178
179
180
181
182
182
183
184
5 Retrovrus
184
6 Bibliografia consultada
185
1 Introduo
Os vrus RNA compem um grupo amplo
e diverso de vrus que infectam desde insetos e
plantas at vertebrados superiores. So os nicos
organismos que possuem RNA como genoma, e,
por isso, precisaram se adaptar a certas condies
impostas pelas clulas hospedeiras para poder se
multiplicar. As clulas eucariotas no possuem
enzimas e reaes para a sntese de RNA a partir de moldes RNA, etapa necessria para a replicao do genoma desses vrus. No entanto, a
evoluo viral solucionou este impasse, pois o
genoma de um vrus RNA codica a sua prpria
enzima replicativa (RNA polimerase dependente
de RNA ou replicase). Em alguns vrus RNA, a
replicase e os fatores auxiliares para a replicao
do genoma so produzidos pela traduo direta do genoma, logo no incio do ciclo replicativo.
Em outros vrus RNA, o genoma no traduzido
diretamente e os vrions carreiam a enzima replicase e os fatores necessrios para a replicao do
genoma.
A replicao do genoma dos vrus RNA
(com exceo dos retrovrus) ocorre em duas etapas e envolve a sntese de molculas intermedirias (RNA complementar ou antigenmico). O
RNA antigenmico serve, ento, de molde para
a sntese de RNA de sentido genmico. A sntese de RNA com sentido de mensageiro (mRNA
ou sentido positivo) denomina-se transcrio, e
a sntese de RNA genmico denomina-se replicao. Na verdade, transcrio e replicao so
termos equivalentes utilizados para designar a
sntese de molculas de RNA a partir de moldes.
A mesma enzima replicase, possivelmente assistida por uma combinao diferente de fatores auxiliares ou submetida a modicaes qumicas,
responsvel tanto pela transcrio como pela
replicao. O complexo enzimtico envolvido na
transcrio geralmente chamado de transcriptase; e o complexo responsvel pela replicao
denominado replicase.
Os retrovrus apresentam uma estratgia
de replicao nica, que difere dos demais vrus
RNA. Esses vrus possuem um genoma RNA
com sentido positivo, mas que no traduzido
diretamente. A replicao do genoma ocorre pela
produo de uma molcula de DNA complementar (provrus) que integrada aos cromossomos
celulares. A transcrio desse provrus pela RNA
polimerase II celular (RNApol II) resulta na produo do RNA para ser includo como genoma
nas partculas vricas.
A natureza do seu genoma resultou em algumas conseqncias biolgicas e evolutivas
para os vrus RNA: a) a maioria deles realiza o
seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
das clulas hospedeiras, b) poucos deles utilizam
o processamento de RNA (splicing) para a gerao
de diversidade de protenas; c) a alta taxa de erro
das replicases virais, associada com a ausncia de
autocorreo, resulta em uma alta freqncia de
mutaes, o que contribui para a grande variabilidade gentica e antignica desses vrus.
168
Captulo 7
Os retrovrus representam uma exceo entre os vrus RNA. O seu genoma possui polaridade positiva, porm no traduzido diretamente
pelos ribossomos. A replicao dos retrovrus
envolve a transcrio reversa (sntese de DNA a
partir de RNA), integrao do DNA proviral nos
cromossomos da clula hospedeira e transcrio
do provrus pelo aparato celular de transcrio.
Apesar dessa diversidade, praticamente todos esses vrus convergem para um evento central comum: a produo de mRNA reconhecveis
e traduzveis pela maquinaria celular de traduo. A nica exceo composta pelos genes que
codicam protenas no-estruturais (e estruturais
em alguns casos) entre os vrus RNA de sentido
positivo, que podem ser traduzidos diretamente
do genoma.
Tabela 7.1. Classificao dos vrus RNA de acordo com a estrutura, organizao e polaridade do genoma e local
intracelular de replicao
Replicao
RNA genmico
ss/ds
Polaridade
Topologia
Segmentos
Local intracelular
Picornaviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Flaviviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Caliciviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Astroviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Togaviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Coronaviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Arteriviridae
ss
Positiva
Linear
Citoplasma
Retroviridae
ss
Positiva
Linear
2 (idnticos)
Ncleo/citoplasma
Birnaviridae
ds
Ambas
Linear
Citoplasma
Reoviridae
ds
Ambas
Linear
10-12
Citoplasma
Rhabdoviridae
ss
Negativa
Linear
Citoplasma
Filoviridae
ss
Negativa
Linear
Citoplasma
Bornaviridae
ss
Negativa
Linear
Ncleo
Paramyxoviridae
ss
Negativa
Linear
Citoplasma
Orthomyxoviridae
ss
Negativa
Linear
7-8
Ncleo
Bunyaviridae
ss
Negativa ou
ambissense
Linear
Citoplasma
Arenaviridae
ss
Ambissense
Linear
Citoplasma
Famlia
169
170
Captulo 7
Picornaviridae (FMDV)
7 - 8.5kb
ORF nica
5'
VPg
VP4
VP2
VP3
VP1
2A
2B
2C
3A 3B
3C
polyA 3'
3D
pro
ms
E1
E2
NS2-3
NS4-A
NS4-B
NS5A
poliC3'
NS5B
5'
VPg
p32
NTPase
P30
VpG
ORF2
capsdeo
ORF3
poliA3
mRNA subgenmico
Astroviridae
6.8kb
ORF1b
ORF1a
5'
VPg
ORF2
Capsdeo
Pol
Pro
poliA3'
mRNA subgenmico
ORF1
Cap
5'
NsP1
NsP2
NsP3
NsP4
E3
E2
poliA3'
E1
mRNA subgenmico
Arteriviridae 13 - 15kb
Cap
ORFs2-7
ORF 1b
ORF 1a
LLL
a 2b
3
4
3
poliA
mRNA subgenmicos
Coronaviridae
Cap
27 - 32kb
ORF1a
5'
L
Pol
5-7 ORFs
ORF1b
2
HE
poliA
mRNA subgenmicos
Figura 7.1. Estrutura e organizao do genoma dos vrus RNA de sentido positivo. As linhas contnuas representam o RNA
genmico; os retngulos representam os genes. A localizao das ORFs e dos mRNA subgenmicos tambm est indicada.
171
Tabela 7.2. Principais caractersticas do genoma dos vrus RNA de polaridade positiva
Famlia
Genoma (kb)
5'
Extenso (kb)
Extremidades
3'
RNA
subgenmicos
Picornaviridae
7,2 - 8,5
VPG*, IRES
poliA
no
Flaviviridae
9,6 - 12,3
cap**,IRES***
poliC****
no
Astroviridae
6,8
VPG
poliA
sim (1)
Caliciviridae
7,3 - 8,3
VPG
poliA
sim (1)
Arteriviridae
13 - 15
cap
poliA
sim (6)
Togaviridae
9,7 - 11,8
cap
poliA
sim (1)
27 - 32
cap
poliA
sim (5-7)
Coronaviridae
172
Captulo 7
(Figura 7.2). Essa poliprotena clivada seqencialmente, medida que produzida, originando os precursores intermedirios e, nalmente,
as protenas virais maduras. Nos picornavrus,
as clivagens so realizadas essencialmente por
proteases virais; nos membros da famlia Flaviviridae, essas clivagens so realizadas por proteases
virais e celulares.
Uma das protenas maduras produzidas
pela traduo do genoma a replicase viral (polimerase de RNA dependente de RNA), que se encarrega de replicar o genoma. A replicao ocorre
em duas etapas: a) sntese de uma molcula de
RNA complementar (com a extenso do genoma)
e b) sntese de cpias de RNA de sentido genmico a partir do RNA complementar. As molculas de RNA de sentido genmico possuem trs
funes: a) servem de mRNA para a produo da
poliprotena; b) servem de molde para a sntese
de RNA complementar; e c) so encapsidadas
ORF nica
5'
VPg
VP4
VP2
VP3
VP1
2A
2B
2C
3A 3B
3C
3'
3D
IRES
-3'
5'-
Poliprotena
Clivagem
P1
Clivagem
Protenas estruturais
L
VP4
VP2
VP3
P3
P2
VP1
2A
2B
2C
Protenas no-estruturais
3A 3B
3C
3D
Figura 7.2. Organizao do genoma e expresso gnica de um picornavrus (vrus da febre aftosa, FMDV). A estrutura
IRES, reconhecida pelos ribossomos, est demonstrada na regio 5' no-traduzida. A ORF nica e longa traduzida
pelos ribossomos em uma longa poliprotena, que vai sendo clivada por proteases celulares medida que
produzida. As clivagens seqenciais originam precursores intermedirios e, finalmente, as protenas virais maduras.
173
-3'
5'-
Encapsidamento (4)
Traduo (1)
2
Replicao
Protenas
3'-
-5'
Figura 7.3. Ilustrao simplificada das etapas de replicao dos vrus das famlias Picornaviridae e Flaviviridae. O
genoma RNA , inicialmente, traduzido em protenas (1). A RNA polimerase produzida nesta etapa sintetiza o RNA
complementar (2) e, a seguir, cpias de sentido genmico (3). Alm de ser traduzido em protenas, o RNA de sentido
genmico serve de molde para a sntese do RNA complementar e, posteriormente, encapsidado nas novas partculas
vricas (4).
174
Captulo 7
poliadenilada. Os genes que codicam as protenas no-estruturais esto localizadas nos dois
teros prximos extremidade 5, e os genes das
protenas estruturais ocupam o tero restante do
genoma. Uma caracterstica comum a todos esses vrus a produo de mRNA subgenmicos
(mRNAsg), em nmero e extenso variveis, que
so traduzidos nas protenas estruturais.
175
5'
Cap
NsP1
NsP2
NsP3
NsP4
E3
E2
3'
E1
A(n)
Traduo
Poliprotena
Clivagem
NSP1
NSP2
Protenas noestruturais
NSP3
Replicao
NSP4
Transcrio
5
RNA antigenmico (negativo)
Transcrio
Cap
m RNA subgenmico
A (n)
Traduo
Poliprotena
Clivagem
C
E3
E2
E1
Protenas estruturais
Figura 7.4. Ilustrao esquemtica da expresso gnica e replicao dos togavrus (vrus Sindbis).
176
Captulo 7
177
crio dos diferentes genes, chamado de atenuao da transcrio, o que resulta na produo
de quantidades de protenas de acordo com a
necessidade do vrus. Os bornavrus apresentam
alguns aspectos nicos, como a transcrio e replicao nuclear, splicing alternativo dos transcritos primrios policistrnicos, uso diferencial de
sinais de incio e trmino de transcrio. Esses
aspectos os distinguem dos paramixovrus, lovrus e rabdovrus.
As seguir, sero abordados os principais
aspectos da expresso gnica e replicao do vrus da estomatite vesicular (VSV), um membro
da famlia Rhabdoviridae. Grande parte das informaes se aplica tambm aos outros membros da
ordem Mononegavirales.
dos na Figura 7.5. Variaes na extenso do genoma, no nmero de genes e na extenso das regies
intergnicas (IR) so encontradas nos vrus das
diferentes famlias. Porm, todos eles possuem
um grupo principal de genes em comum e a organizao genmica muito semelhante.
O genoma do VSV formado por uma molcula de RNA linear de ta simples, com aproximadamente 11 kb. Os rabdovrus, em geral,
codicam um mnimo de cinco genes, na ordem
3 N P M G L 5, e o VSV codica outras
duas pequenas protenas (C e C) em outra fase
de leitura do gene P. Nos paramixovrus, vrias
protenas so produzidas a partir do gene P, pela
utilizao de diferentes cdons de iniciao, traduo de diferentes ORFs e por um mecanismo
de edio. Neste mecanismo, so adicionadas
uma, duas ou trs guaninas (G) em um determinado ponto do mRNA, resultando em mudana
de fase de leitura a partir deste local. Prximo
extremidade 3, existe uma regio no-codicante, que transcrita em um polinucleotdeo denominado lder. A seqncia lder possui 47 nt (no
A
Rhabdoviridae (VSV)
(11-15kb)
P
B
Paramyxoviridae
(15-16kb)
N
P/C/V
L
5'
C
Filoviridae
(19kb)
NP
VP35
VP40
GP
VP30 VP24
Figura 7.5. Estrutura e organizao do genoma de trs vrus representativos das famlias que compem a ordem
Mononegavirales. A) Rhabdoviridae (vrus da estomatite vesicular, VSV); B) Paramyxoviridae (vrus da cinomose,
CDV); C) Filoviridae (vrus Ebola). O genoma consiste de uma molcula linear de RNA de polaridade negativa,
representada pelo trao contnuo. Os blocos representam os genes, com regies intergnicas (IRs) entre eles. N ou NP):
nucleoprotena; P: fosfoprotena (C e V, produtos secundrios do gene P); M (VP40): protena da matriz; G:
glicoprotena do envelope; F: protena de fuso; H: protena de ligao aos receptores, hemaglutinina; L: polimerase
viral. VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP30: nucleoprotena
menor; VP24: protena do envelope. O nmero de genes pode variar entre os vrus de cada famlia.
178
Captulo 7
3.1.2 Transcrio
Aps a penetrao e perda do envelope, o
nucleocapsdeo (RNA + protena) serve de molde
Regio intergnica IR
Terminao
Iniciao
AUACUUUUUUUGAUUGUC
UAUGA
A
AA
Lder = 47nt
IR
N = 1333
AA
AA
AA
AA
AA
AA
AA
N
mRNA
AA
AA
IR
M = 838
P = 821
AA
AACAG
G
IR
IR
m7
AA
AA
AA
AA
AA
AA
AA
P AA
mRNA
AA
AA
M
mRNA
AA
AA
AA
5
AA
AA
AA
L = 6380
G = 1672
AA
G
mRNA
AA
AA
L
mRNA
AA
Figura 7.6. Organizao do genoma e estratgia de transcrio do vrus da estomatite vesicular (VSV) da famlia
Rhabdoviridae. O genoma representado pela linha contnua (as extremidades 3' e 5' e a seqncia lder esto
indicados). Os blocos representam os genes, com o nmero respectivo de nucleotdeos. Acima do genoma est
apresentada a seqncia comum das regies intergnicas (IR), com os sinais para a terminao e incio da transcrio
dos genes subseqentes. Abaixo do genoma, esto representados os mRNAs produzidos pela transcrio seqencial
dos genes. O nmero relativo de mRNAs decresce medida que a transcrio se distancia do seu incio. N)
nucleoprotena; P) fosfoprotena; M) protena da matriz; G) glicoprotena do envelope; L) polimerase.
179
etapas iniciais do ciclo. Mltiplas cpias da protena N se conjugariam fortemente com o transcrito lder, provocando um sinal de antiterminao,
que interferiria com a capacidade da replicase de
reconhecer os sinais de terminao presentes no
nal de cada gene, resultando na sntese de uma
molcula de RNA complementar com a extenso
do genoma (Figura 7.7). Outro modelo para a
troca do modo de transcrio descontnua para
a replicao sugere que dois complexos enzimticos diferentes seriam responsveis por cada um
desses mecanismos. A fosforilao da protena P,
que faz parte do complexo, converteria o complexo transcriptase (que realiza a transcrio descontnua) em complexo replicase (que realiza a
transcrio contnua).
O RNA antigenmico serve de molde para a
sntese das cpias genmicas. Esse processo facilitado pela inexistncia de sinais de terminao
da transcrio neste sentido do RNA. Tanto a sntese de RNA antigenmico como a de RNA genmico so seguidas pela imediata encapsidao
dos RNAs recm-produzidos pela protena N. As
etapas de transcrio e replicao do genoma do
VSV esto ilustradas na Figura 7.7.
mRNA
mRNA
mRNA
mRNA
mRNA
AA
AA
RNA pol
AA
AA
AA
AA
AA
AA
AA
AA
Transcrio (1)
RNA pol
Replicao (2)
RNA antigenmico (+)
Replicao (3)
5
RNA genmico (-)
Figura 7.7. Etapas da transcrio e replicao do genoma do vrus da estomatite vesicular (VSV). A linha contnua
representa a molcula de RNA genmico, recoberta por mltiplas cpias da nucleoprotena. No incio do ciclo
replicativo, a transcrio descontnua resulta em mRNAs individuais de cada gene (1). Em uma determinada etapa,
com o acmulo da nucleoprotena (N), o complexo replicase realiza a sntese da molcula de RNA complementar (2),
que serve de molde para a sntese de molculas de RNA genmico (3). Note que tanto o RNA genmico (-) quanto o
RNA antigenmico ou complementar (+) permanecem recobertos por molculas da protena N (ou NP) durante os
processos de transcrio e replicao. As etapas ilustradas acima so comuns aos vrus da ordem Mononegavirales.
180
Captulo 7
Traduo
B. mRNA
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG
AAA(n)-3
8-13nt
15-22nt
Transcrio (1)
8-13nt
Cap-5---------GA
3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)
5-AGCGAAAGCAGG
GGAACAAAGAUGA-5
Replicao
3
CCUUGUUUCUACU-3
Figura 7.8. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. A) RNA genmico (vRNA); B)
mRNA; C) RNA antigenmico. A transcrio para a sntese de mRNA utiliza nucleotdeos com cap subtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA ou genmico a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem
dos RNA antigenmicos, pela presena de 8-13 nt adicionais com cap e cauda poliA.
Cada segmento genmico transcrito individualmente pelo complexo transcriptase. O processo se inicia pela subtrao de seqncias de 8
a 13 nt, com cap na extremidade 5, de mRNAs
celulares. Essa atividade atribuda PB1, ou
seja, essa enzima literalmente furta os segmentos
iniciais de mRNAs celulares. Esses nucleotdeos
servem de primer para o incio da transcrio,
alm de possurem a estrutura cap, que necessria para a traduo dos mRNA virais. A transcrio termina 15 a 22 nt antes da extremidade
5 de cada segmento, e seguida pela adio de
uma cauda de poliA. Os mRNAs virais no so,
portanto, exatamente complementares aos RNAs
genmicos: possuem uma extenso de 8 a 13 nt
em sua regio 5 e no possuem os 15-22 nt terminais, sendo substitudos por uma cauda poliA.
A replicao dos RNA genmicos (vRNA)
ocorre em duas etapas: sntese do RNA antigenmico (complementar) e sntese de RNA genmico (vRNA), utilizando o RNA antigenmico
como molde. A sntese do RNA antigenmico
no envolve a subtrao de nucleotdeos com
cap de mRNA celulares; inicia-se exatamente na
extremidade 3 do genoma e termina exatamente na extremidade 5. Dessa forma, o RNA antigenmico exatamente complementar ao RNA
genmico. A transio entre a transcrio iniciada por primer + cap para a transcrio independente de primer + cap parece envolver complexos
transcriptase/replicase diferentes. O acmulo da
protena NP e alteraes especcas na composio do complexo polimerase seriam responsveis
pela transio entre transcrio e replicao. A Figura 7.8 apresenta a estrutura dos vRNA, mRNA
e RNAs antigenmicos produzidos durante a replicao dos vrus da inuenza A.
181
genmico (sentido positivo) e outras esto presentes no RNA complementar (sentido negativo).
As ORFs que esto no sentido do genoma ocupam a metade 3 do genoma e no so traduzidas
diretamente. Como o genoma no traduzido
diretamente pelos ribossomos, esses vrus necessitam trazer, nos vrions, a sua enzima transcriptase/replicase e, por isso, so classicados juntamente com os vrus RNA de sentido negativo.
Os arenavrus possuem dois segmentos de
RNA como genoma: um segmento grande (large
= L) e outro segmento pequeno (small = S). Cada
um desses segmentos contm dois genes (Figura
7.9A). No segmento grande, o gene L possui polaridade negativa, ou seja, a sua ORF est presente
no RNA complementar. Para que a protena seja
expressa, esse gene transcrito pela polimerase
viral, originando um mRNA, que , ento, traduzido (Figura 7.9B). Por outro lado, o gene Z possui
polaridade positiva (a ORF est presente no RNA
genmico do segmento L). No entanto, este gene
no expresso pela traduo direta do genoma.
A sua expresso somente ocorre aps a sntese do
RNA complementar, a partir do qual o mRNA ,
ento, produzido (Figura 7.9B). A expresso deste
gene segue o mesmo padro dos genes expressos
atravs de mRNA subgenmicos, caractersticos
de algumas famlias de vrus RNA. No segmento
S, o gene NP possui polaridade negativa e a sua
expresso depende da sntese de mRNA. O gene
GP possui polaridade positiva e a sua expresso
segue o mesmo padro do gene Z do segmento L:
sntese do RNA complementar e transcrio do
seu mRNA. A estratgia ambissense de codicao de protenas encontrada ainda em vrus de
alguns gneros da famlia Bunyaviridae (Tospovrus e Phlebovrus).
A replicao do genoma segue o padro dos
outros vrus RNA e ocorre por intermdio de um
RNA complementar de sentido antigenmico. A
diferena que o RNA complementar serve de
molde para a sntese do RNA genmico e tambm para a sntese do mRNA de um dos genes.
Em resumo, os genomas ambissense possuem
genes que so expressos de maneira semelhante
aos genomas RNA de sentido negativo (as ORFs
esto presentes no RNA complementar); e genes
182
Captulo 7
que so expressos como nos vrus RNA de sentido positivo (as ORFs esto presentes no sentido
genmico, embora no sejam traduzidas diretamente).
A
Z
- 5'
3' -
GP
- 5'
3' -
Traduo
mRNA
-5'
3'Transcrio (3)
L
5' -
- 3'
RNA complementar
Z
Replicao (2)
Z
- 5'
3' -
RNA genmico
Transcrio (1)
mRNA
5' -
- 3'
Traduo
Protena L
183
Gene (nt)
Cadeia (+)
5'
3'
Protena (aa)
L1=3854
3' 3 (1267)
5' pp
Cadeia (-)
L2=3916
2 (1269)
L3=3901
1 (1275)
M1=2304
2 (736)
M2=2203
1 (708)
M3=2241
NS (721) + NSC (681)
S1=1416
1 (455) + 1s (120)
S2=1331
2 (418)
S3=1198
NS (366)
S4=1196
3 (365)
Figura 7.10. Organizao do genoma dos vrus do gnero Orthoreovirus da famlia Reoviridae. O genoma composto
por 10 segmentos de RNA de fita dupla, sendo que apenas uma das cadeias codificante (sentido positivo). No
segmento L1, so mostradas as duas cadeias, os demais mostram apenas a cadeia codificante. Os diferentes segmentos
apresentam uma organizao semelhante, possuindo uma ORF central flanqueada por pequenas regies notraduzidas nas extremidades 5' e 3'. A nomenclatura e nmero de aminocidos de cada protena esto apresentados
direita. Note que oito segmentos codificam apenas uma protena cada; os segmentos M3 e S1 codificam dois produtos
cada.
4.2 Transcrio
A transcrio inicial ocorre ainda no interior
dos capsdeos, logo aps a penetrao dos vrions
no citoplasma da clula hospedeira, e apenas as
cadeias negativas so transcritas. Os mRNAs in-
184
Captulo 7
Genoma
Cap
U5
.gag
pol
env
U3
AAAA
RNA
Genoma (ds)
RNA (+)
5'
3'
3'
5'
U3
U5
.gag
pol
env
U3
U5 DNA
U5
DNA
celular
AAAA
RNA
RNA (-)
Integrao (2)
Transcrio (1)
Provrus Integrado
mRNA (+)
5'
3'
Traduo (2)
DNA
celular
U3
U5
DNA
.gag
pol
env
U3
Replicao (3)
Transcrio (3)
RNA (+)
3'
5'
5'
3'
Protena
Genoma (ds)
RNA (-)
5 Retrovrus
Os retrovrus apresentam uma estratgia
peculiar de replicao do genoma que difere dos
demais vrus RNA (Figura 7.12). Embora esses
vrus codiquem as suas protenas no sentido do
genoma (por isso so considerados vrus RNA
de sentido positivo), o genoma no traduzido
Genoma
Cap
U5
.gag
pol
env
U3
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1 Introduo
1.1 Conceitos bsicos
8
191
191
193
193
196
196
197
197
197
199
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201
202
202
202
207
209
209
211
212
213
215
217
218
Colaboraram em sees especcas: Janice Ciacci Zanella (Apoptose por vrus); Luiz Carlos Kreutz
(Padres principais de infeco) e Mariana S e Silva (Imunopatologia em infeces vricas).
1
220
221
212
222
222
223
225
225
225
226
226
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226
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228
8 Bibliografia consultada
229
230
230
230
231
232
232
232
234
1 Introduo
O termo patogenia ou patognese , aplicado s infeces vricas, refere-se ao conjunto
de mecanismos pelos quais os vrus produzem
doena em seus hospedeiros (pato = doena, gnese = origem, produo). A denio de doena como sendo qualquer manifestao resultante
de alteraes da siologia do organismo abrange
um leque muito amplo de condies. Manifestaes patolgicas incluem desde aumentos leves
da temperatura corporal, alteraes de nimo e
apetite, at condies severas que, eventualmente, resultam na morte do hospedeiro. Na maioria
das doenas, a patogenia multifatorial, resultante da alterao de fatores endgenos ou exgenos, raramente determinadas por um fator nico. Com as infeces vricas no diferente, pois
as conseqncias dependem das interaes entre
inmeros fatores do agente e do hospedeiro.
Grande parte dos sinais clnicos observados
nas doenas vricas conseqncia da resposta
do hospedeiro injria celular e tecidual. Por sua
vez, essa injria pode resultar de efeitos diretos
ou indiretos da replicao viral ou pode, ainda,
ser conseqncia da resposta imune do hospedeiro contra as clulas infectadas. De fato, a patogenia de vrias doenas vricas est mais intimamente ligada aos mecanismos imunolgicos
do hospedeiro do que s conseqncias diretas
da replicao viral nos tecidos. Em resumo, a patogenia das infeces vricas determinada pela
combinao entre os efeitos diretos e indiretos da
replicao viral e as respostas do hospedeiro infeco.
Os mecanismos pelos quais os vrus produzem doenas em seus hospedeiros podem ser
examinados em diferentes nveis. As clulas so
as unidades fundamentais do organismo, nas
quais os vrus se multiplicam. Por isso, as clulas
se constituem nos locais de origem dos eventos
ligados infeco vrica que podem resultar em
doena. A replicao dos vrus, muitas vezes, interfere com mecanismos siolgicos essenciais
da clula hospedeira, alterando as suas funes
em benefcio da replicao viral. A alterao de
processos celulares envolvidos na biossntese de
macromolculas e na manuteno da homeostase
celular, por exemplo, podem resultar em disfun-
Captulo 8
Efeito no hospedeiro
Morte do hospedeiro
Lise celular
Disfuno celular,
efeito citoptico ou
transformao celular
DOENA CLNICA
PERCEPTVEIS VISUALMENTE
192
Exposio sem
infeco
INFECO SUBCLNICA
VISUALMENTE
IMPERCEPTVEIS
Figura 8.1. O conceito iceberg das infeces vricas. Note que a maioria das infeces vricas no resulta em efeitos
perceptveis em nvel de hospedeiro. As manifestaes clnicas, quando ocorrem, constituem-se em reflexos da
disfuno e patologia em nvel celular e tecidual.
doena, ou causam doena leve, respectivamente. A virulncia de um vrus pode ser medida de
vrias formas, incluindo o percentual de animais
que adoece ou morre aps inoculao experimental, grau de severidade dos sinais clnicos, nvel e
intensidade de alteraes histolgicas, entre outras.
A virulncia dos vrus determinada geneticamente e pode variar entre isolados de uma
mesma espcie viral. No entanto, fatores do hospedeiro podem interferir com e modular a virulncia desses agentes. Embora em alguns vrus a
virulncia possa ser mapeada em um ou poucos
genes, para a maioria dos vrus essa uma caracterstica multifatorial. Em geral, os genes virais
envolvidos na virulncia podem ser divididos em
quatro classes: a) genes cujos produtos afetam a
capacidade replicativa do vrus; b) produtos gnicos que inuenciam a capacidade do vrus se
disseminar no hospedeiro; c) produtos virais que
se contrapem resposta imunolgica do hospedeiro e d) produtos virais txicos para a clula
lgico etc. A resistncia infeco pode ser devida a mecanismos naturais (resistncia natural
ou inata) ou adquiridos (resistncia adquirida). O
termo imunidade muito utilizado para designar
a resistncia, principalmente a resistncia adquirida. O termo refratariedade se refere a um grau de
resistncia absoluta a um determinado agente, e
uma caracterstica da espcie animal, e no do
indivduo.
O tropismo a predileo de um vrus por
determinadas clulas ou tecidos e pode ser determinado por uma variedade de fatores celulares que so necessrios para a replicao viral. O
principal fator determinante do tropismo e que
possui inuncia direta no padro de distribuio e localizao das infeces a presena de
receptores especcos para o vrus. Maiores detalhes sobre os mecanismos envolvidos com o
tropismo celular dos vrus sero abordados ao
longo do texto.
193
194
Captulo 8
Tabela 8.1. Protenas virais responsveis por efeitos especficos sobre mecanismos e estruturas das clulas
hospedeiras
Efeito
Alvo
elF-4G
2A, 3A
Desconhecido
2B, 2C
Proliferao de vesculas
membranosas
Desconhecido
Desconhecida
MAP4
3C
Inibio da transcrio
Vrus Sindbis
Desconhecida
Na, K-ATPase?
Paramixovrus
Membrana plasmtica
E1B-55K, E4-34K
Desconhecida
elF-4E
Herpesvrus
Produto do gene
vhs (ribonuclease)
mRNA celular
Vrus do herpes
simplex
ICP 27
Inibio do transporte e
processamento de mRNA celular
Desconhecido
Vrios vrus
Desconhecida
Despolimerizao do citoesqueleto
Filamentos de actina.
Vrus
Protena(s)
2A
Poliovrus
pro
Adenovrus
para a produo de suas protenas, em detrimento das protenas celulares. A inibio da traduo de mRNA celulares, e no de mRNA virais,
uma forma de subverso utilizada pelos vrus
para favorecer a sntese de suas protenas. Esses
mecanismos so utilizados por vrios vrus, incluindo o vrus da estomatite vesicular (VSV),
o poliovrus, o vrus da febre aftosa (FMDV), os
adenovrus, entre outros. Essa interferncia pode
ter efeitos deletrios para a clula hospedeira,
que tem a sua sntese protica reduzida ou mesmo suprimida.
A inibio da sntese de DNA celular outro mecanismo utilizado por vrus RNA e DNA
durante a sua replicao. Essa inibio pode proporcionar uma disponibilidade maior de precursores (nucleotdeos), protenas e estruturas celulares para a sntese dos cidos nuclicos virais e
replicao do genoma. possvel tambm que a
inibio da sntese de DNA celular, em alguns casos, seja uma mera conseqncia da inibio da
sntese protica da clula hospedeira pelo vrus.
195
A replicao de alguns vrus resulta na formao de estruturas com morfologia mais ou menos denidas no citoplasma ou no ncleo da clula infectada. Essas estruturas so denominadas
genericamente corpsculos de incluso e so
formadas pelo acmulo de complexos de transcrio e replicao, produtos intermedirios da
replicao, protenas estruturais e no-estruturais, capsdeos, nucleocapsdeos e vrions em determinados locais da clula. A localizao dos corpsculos de incluso reete o local de replicao
do respectivo vrus. Os corpsculos de Negri so
formados no citoplasma de neurnios infectados
pelo vrus da raiva; os corpsculos citoplasmticos de Lenz so caractersticos da infeco pelo
CDV. A replicao dos reovrus acompanhada
da formao de grandes estruturas citoplasmticas denominadas virossomos, que podem ocupar
grande parte do citoplasma. Os virossomos so
os locais de acmulo de cidos nuclicos e protenas virais e onde ocorrem os mecanismos de
replicao do genoma e montagem das partculas
vricas. A replicao dos herpesvrus neuropatognicos (herpesvrus bovino tipo 5 [BoHV-5],
vrus da doena de Aujeszky [PRV]) resulta na
formao de corpsculos nucleares em neurnios
do sistema nervoso central (SNC). A presena de
corpsculos de incluso tem sido utilizada no
diagnstico histopatolgico de algumas viroses,
pela facilidade de observao e pelas suas caractersticas tintoriais (podem ser basoflicos ou acidoflicos).
Pelo exposto, ca evidente que as interaes
entre os produtos virais e os componentes celulares, durante o ciclo replicativo dos vrus, so
extremamente complexas e podem resultar em
uma variedade de alteraes da siologia celular.
Grande parte dessas alteraes foi investigada e
caracterizada em clulas de cultivo. Conseqentemente as informaes provenientes desses estudos devem ser analisadas com cautela. No obstante, possvel que grande parte das alteraes
observadas in vitro ocorra tambm in vivo. provvel tambm que as interaes entre os vrus e
as clulas hospedeiras sejam ainda mais complexas no animal, pela participao de componentes
orgnicos ausentes nos frascos de cultivo. Nesse
sentido, os componentes celulares e humorais do
sistema imunolgico (citocinas e anticorpos) de
196
Captulo 8
197
Mucosa
conjuntival
Pele
Mucosa
respiratria
Mucosa
orofarngea
Mucosa
urogenital
Mucosa
intestinal
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
198
Captulo 8
Tabela 8.2. Vrus animais que penetram no hospedeiro atravs da pele ou de superfcies mucosas
Via de penetrao
Vrus
Mordeduras de vertebrados
Transmisso iatrognica
199
Tabela 8.3. Principais vrus que penetram pelo trato respiratrio para iniciar a infeco do hospedeiro
Famlia
Vrus
Herpesviridae
Adenoviridae
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Coronaviridae
Picornaviridae
Caliciviridae
Herpesviridae
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Flaviviridae
200
Captulo 8
201
202
netrao pelos herpesvrus, que so, ento, transportados at gnglios nervosos regionais.
Embora com menor freqncia, fmeas que
desenvolvem infeces genitais tambm podem
transmitir o vrus para o macho durante a cpula, o que favorece a disseminao do agente, pois
o macho infectado pode transmitir o agente para
outras fmeas.
Captulo 8
203
Superfcie corporal
Seios linfticos
revestidos por
macrfagos
Capilar
linftico
Capilar
sangneo
Histicito
Tecido
conjuntivo
Tecido
linfide
Veia
Vaso
linftico
aferente
Vaso
linftico
eferente
Ducto
torcico
Linfonodo
Figura 8.4. Trajeto dos vrus que penetram pela pele ou mucosas superficiais para atingir o sangue e se distribuir
sistemicamente.
em clulas endoteliais e so liberados diretamente na circulao; d) vrios vrus replicam em clulas mononucleares do sistema linforreticular
(moncitos/macrfagos; linfcitos) e podem ser
liberados no sangue.
Em vrias infeces vricas, duas etapas de
viremia ativa podem ser detectadas. A viremia primria resulta da replicao viral nos stios iniciais,
geralmente atinge baixa magnitude, mas permite
a disseminao do vrus aos rgos secundrios
de replicao, denominados rgos-alvo. A replicao viral nesses tecidos produz uma viremia secundria, caracterizada por uma presena macia
de vrus no sangue e disseminao ainda maior
da infeco. Os resultados da viremia so variveis e, freqentemente, resultam em infeco de
vrios tecidos perifricos, com resultados que dependem do tropismo, da patogenicidade e virulncia do vrus. Uma conseqncia freqente de
viremia em animais a transmisso transplacentria do vrus ao feto, podendo resultar em uma
variedade de condies que vo desde uma infeco transitria at a morte fetal, seguida de abortamento. As etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e disseminadas esto ilustradas
na Figura 8.5.
204
Infeco
Excreo
Replicao primria
Superfcie corporal
Captulo 8
Herpesvrus
Influenza
Paramixovrus
Rotavrus
Papilomavrus
Coronavrus
Pele
Mucosas
Trato respiratrio
Trato digestivo
Linfonodos
Viremia
primria
Medula
ssea
Msculo
Pele
Lumpy skin
Encfalo
CDV,
Togavrus
Flavivrus
Endotlio
vascular
Transmisso
iatrognica
ou por vetores
Glndula salivar
ou rins
Raiva (g.salivar)
Arenavrus
Trato respiratrio
(pulmes)
Arenavrus
hantavrus
Replicao secundria
Epitlio
respiratrio
rgos/tecidos
Bao
Viremia
secundria
Sangue
CDV
Rinderpest
Fgado
Replicao secundria
rgos/tecidos
Sangue
Excreo
Figura 8.5. Etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e sistmicas: papel da viremia na disseminao das
infeces.
205
206
nos tecidos. O mecanismo de penetrao utilizado pelos vrus depende da sua biologia e tambm
da estrutura e relaes do endotlio vascular, que
varia muito entre os diferentes tecidos. Os possveis mecanismos utilizados, j demonstrados
para alguns vrus, esto ilustrados na Figura 8.6 e
descritos a seguir:
1) Penetrao passiva pelo espao entre as
clulas endoteliais. Esse mecanismo possvel
em alguns endotlios que apresentam fenestras
entre as clulas endoteliais, como o plexo coride
no SNC. Aps atravessar esta barreira, os vrus
podem infectar as clulas epiteliais do plexo coride e ganhar acesso ao uido crebro-espinhal
e, assim, disseminar-se pelos espaos ocupados
por esse uido. Exemplos de vrus que provavelmente utilizam essa via de invaso incluem
o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV) e o
retrovrus (MVV). Os vasos dos tbulos renais,
pncreas, clon e leo tambm apresentam fenestras que podem servir para a penetrao dos vrus nos tecidos a partir do sangue;
2) Os vrions podem ser transportados atravs do endotlio vascular por endocitose, seguida de transporte vesicular intracitoplasmtico e
exocitose na face oposta da clula endotelial. Para
que essas duas formas de invaso possam ocorrer, a concentrao de vrions no sangue deve ser
alta e contnua, e o uxo sangneo no local deve
ser lento, para permitir o contato e aderncia das
partculas vricas ao endotlio e/ou penetrao
pelos espaos interendoteliais;
3) Alguns vrus podem infectar as clulas
endoteliais e/ou clulas adjacentes e completar o
seu ciclo replicativo nessas clulas. Assim, a sua
prognie pode ser liberada atravs da superfcie
basal ou basolateral dessas clulas e infectar clulas teciduais subjacentes. Essa forma de invaso
tecidual j foi demonstrada para os picornavrus,
retrovrus, alfavrus e parvovrus. As clulas de
Kpfer, que esto localizadas entre as clulas
endoteliais dos sinusides hepticos, servem de
porta de entrada para vrus que so veiculados
no sangue. Os vrus podem ser transportados
passivamente ou replicarem ativamente nessas
clulas;
4) Os vrus que produzem viremia associada
a clulas, em moncitos ou linfcitos, podem ser
transportados atravs da parede vascular no in-
Captulo 8
terior das clulas infectadas. As clulas mononucleares do sangue esto freqentemente atravessando a parede vascular e penetrando nos tecidos
em resposta a estmulos inamatrios e podem
funcionar como verdadeiros cavalos de Tria,
transportando os vrus para os tecidos. O movimento de clulas atravs do endotlio em direo
aos tecidos denominado diapedese. Essa forma
de invaso tem sido demonstrada para o CDV,
vrus da febre amarela (YFV) e tambm para explicar a penetrao do vrus da imunodecincia
humana adquirida (HIV) no encfalo.
2
1
3
Lmen
do vaso
Tecido
207
lite caprina (CAEV), replicam no SNC e produzem doena neurolgica, porm parecem atingir
o encfalo pela via hematgena. Dentre os vrus
animais que utilizam a via nervosa para invadir o
encfalo e causar doena neurolgica se incluem
o BoHV-5, o PRV, o EHV, o vrus da raiva, o vrus da encefalite eqina venezuelana (VEEV) e
o vrus da doena de Borna (BDV). Em modelos
animais, o VEEV parece tambm utilizar a via
hematgena para invadir o encfalo e produzir
encefalite. Embora os vrus que se disseminam
pela via nervosa e replicam no sistema nervoso
sejam denominados classicamente vrus neurotrpicos, esses agentes so capazes de infectar
uma variedade de clulas. De fato, a replicao
inicial desses vrus ocorre geralmente no epitlio
e em tecidos adjacentes aos locais de penetrao,
aps a qual os vrions penetram nas terminaes
nervosas.
O mecanismo de penetrao dos vrus em
neurnios parece ser similar ao utilizado para
iniciar a infeco de outras clulas. Aps a penetrao e desnudamento, o nucleocapsdeo
transportado passivamente ao longo dos processos neuronais (dentritos e axnios) por transporte axoplsmico rpido. O vrus pode ocasionalmente replicar nos axnios ou dendritos, mas
este um processo lento e no requerido para
a disseminao. Drogas que inibem o transporte
axonal (p. ex.: colchicina) tambm bloqueiam a
progresso dos vrus o longo dos axnios.
Essa forma de disseminao tem sido estudada com detalhes nos alfaherpesvrus, em que o
transporte neural at os gnglios sensoriais e autonmicos essencial para o estabelecimento de
infeco latente, que, por sua vez, crtica para a
manuteno desses vrus na natureza (Figura 8.7).
Aps a replicao na mucosa nasal ou genital,
os vrions penetram em terminaes dos nervos
que se distribuem nas camadas subjacentes. Os
vrions ntegros ou partculas subvirais so transportados em vesculas ao longo dos microtbulos
dos axnios ou dendritos at os corpos neuronais
que se localizam nos gnglios nervosos regionais
(gnglio trigmeo, no caso de infeco oronasal;
gnglios sacrais, no caso de infeco genital). O
transporte axonal de substncias das terminaes
nervosas em direo ao corpo neuronal deno-
208
Captulo 8
Transporte retrgrado
Latncia
Crebro
Reativao
Transporte antergrado
Mucosa nasal
Gnglio trigmeo
Figura 8.7. Disseminao neural dos alfaherpesvrus animais do epitlio respiratrio para os gnglios sensoriais
durante a infeco aguda (transporte retrgrado) e do corpo dos neurnios para o epitlio nasal durante a reativao
da infeco latente (transporte antergrado). Durante a infeco aguda (e menos freqentemente durante a
reativao), pode ocorrer transporte antergrado em direo ao SNC, com invaso e replicao viral no encfalo.
209
a determinados tipos celulares ou tecidos, e apenas estes podem ser infectados naturalmente. Por
isso, a distribuio de receptores nos tecidos e rgos um determinante importante da patogenia
dos vrus. Existem vrios exemplos de mutaes
naturais ou induzidas nas protenas virais de ligao nos receptores que resultam em alterao
no tropismo e/ou na virulncia do vrus mutante. Esses exemplos ilustram a importncia das
interaes vrion-receptores como determinantes
do tropismo e da patogenia das infeces vricas.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Embora aparentemente seja o principal determinante do tropismo, a presena dos receptores no o nico fator que determina a capacidade do vrus infectar um determinado tipo celular.
Para alguns vrus DNA e retrovrus, a transcrio dos genes virais pode ser inuenciada pela
presena de fatores de transcrio e/ou inibidores celulares. A penetrao em clulas que no
210
Captulo 8
vrions, que ocorre com ecincia diferente conforme o tipo celular. Assim, o tropismo desses vrus parcialmente determinado pela capacidade
de determinadas clulas de clivar a protena viral
de fuso. Esses exemplos ilustram a variedade de
fatores celulares que podem ser determinantes
do tropismo dos vrus por determinados tipos
celulares.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
211
cional, pois o vrus se dissemina ao longo de circuitos neuronais sinapticamente ligados e infecta
as populaes de neurnios que recebem bras
dos neurnios previamente infectados. Durante
a transmisso transinptica, alguns vrions podem se disseminar localmente e infectar clulas
vizinhas, mas esta infeco ca geralmente limitada. O egresso de vrions dos corpos neuronais
no SNC, por outro lado, pode resultar em disseminao local e infeco de outros neurnios e
tambm de clulas da glia.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
212
Captulo 8
213
podem ser expelidos pela tosse, espirro, expectoraes ou durante a ingesto de gua e alimentos.
Esses agentes so transmitidos por contato direto
ou indireto e alguns podem ser veiculados por
aerossis a distncias relativamente grandes.
214
Captulo 8
Vilosidade
Rotavrus
Astrovrus
Calicivrus
Coronavrus
Adenovrus
Torovrus
Torovrus
Astrovrus
Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
Epitlio do Dome
(clulas M)
Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)
Placas de Peyer
Linfonodo
Parvovrus
Torovrus
Figura 8.13. Ilustrao simplificada da estrutura do epitlio do intestino delgado (A) e local de replicao de alguns
vrus entricos (B).
215
216
Captulo 8
aquele de ocorrncia mais freqente para explicar os distrbios neurolgicos associados com as
infeces vricas do SNC, a ocorrncia de doena
neurolgica grave sem infeco neuronal macia
tambm tem sido descrita em infeces vricas.
Isso demonstra que alguns vrus podem causar
disfuno neuronal grave sem infeco ou morte
de um nmero signicativo dessas clulas, o que
poderia explicar, em parte, os casos de recuperao clnica que eventualmente ocorram aps
infeces neurolgicas. Em muitos casos, ocorre
a infeco de um nmero varivel de clulas da
micrglia, de astrcitos e de oligodendrcitos,
com um envolvimento pouco signicativo de
neurnios. possvel que produtos virais txicos
para os neurnios sejam liberados por essas clulas no meio extracelular. A liberao de citocinas
e outros mediadores qumicos inamatrios tambm tm sido implicados na disfuno neuronal
observada nessas infeces. Em particular, o xido ntrico que produzido por clulas da glia em
resposta infeco vrica pode ser deletrio para
os neurnios. De fato, tem sido demonstrado que
as interaes entre clulas inamatrias e neurnios podem resultar em toxicidade e disfuno
neuronal, sem necessariamente induzir a morte
de neurnios. Os mecanismos efetores celulares
e humorais da resposta inamatria tambm
podem potencialmente contribuir para a injria
e disfuno neuronal. Esses mecanismos podem
explicar, em parte, a ocorrncia de doena neurolgica severa e at mesmo fatal, desacompanhada de infeco neuronal signicativa, como ocorre em algumas situaes.
Alm das infeces neurolgicas agudas
com conseqncias clnico-patolgicas variveis
e freqentemente fatais alguns vrus estabelecem infeces persistentes no sistema nervoso.
Uma parte das infeces agudas resulta em morte do hospedeiro dentro de poucos dias, tendo,
assim, importncia epidemiolgica limitada (p.
ex.: encefalites eqinas por alfavrus e avivrus,
raiva e cinomose). Por outro lado, as infeces
persistentes podem ter conseqncias epidemiolgicas mais importantes, pela perpetuao da
infeco nos hospedeiros. Para estabelecer uma
infeco persistente, o vrus no pode matar as
clulas infectadas; ele deve manter a sua replica-
217
essa ocorrncia pode demorar anos. A persistncia do vrus no SNC, aps a infeco aguda,
pode ser favorecida por mutaes que resultem
na produo de vrus defectivos. Outra forma de
infeco persistente no SNC a estabelecida pelo
retrovrus MVV, nos quais o vrus estabelece infeco crnica em clulas da linhagem macrofgica com produo de vrus ausente ou espordica.
O vrus da doena de Borna (BDV) de eqinos
tambm estabelece infeco persistente no sistema nervoso, porm a produo de vrus parece
ser contnua, apesar de ocorrer em nveis baixos.
218
Captulo 8
219
BVDV
ncp ou cp
Soropositivo, sem o vrus
ncp
Bezerro PI
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos
ncp ou cp
Atrofia da retina
Cegueira
Embrio muito
susceptvel
Bezerros saudveis
soropositivos
Imunotolerncia (PI)
Efeitos na
fertilizao,
implantao
Leses no SNC
Abortos
40
80
120
160
200
240
280
D I A S D E G E S TA O
Figura 8.14. Efeitos da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo vrus da diarria viral bovina (BVDV). As
conseqncias da infeco dependem do status imunolgico da fmea, da cepa do vrus (biotipo e virulncia) e do
estgio de desenvolvimento do embrio/feto.
220
Captulo 8
Infeco Aguda
Infeco Latente
Infeco Persistente
Infeco Persistente
temporria
Replicao viral
Manifestaes clnicas
221
gico do animal em combater e erradicar a infeco. Visto por outro ngulo, o carter transitrio
dessas infeces se deve incapacidade dos vrus
persistir no animal na presena da resposta imunolgica. As infeces persistentes ou crnicas
tambm podem ser vistas sob duas ticas: a) do
ponto de vista do hospedeiro, a persistncia do
agente em seus tecidos reete a incapacidade do
sistema imunolgico de erradic-lo; e b) do ponto
de vista do agente, a persistncia o resultado
de estratgias evolutivas, que foram desenvolvidas para se adaptar ao hospedeiro e escapar da
vigilncia do sistema imunolgico, garantindo,
assim, a sua permanncia no animal.
222
com o hospedeiro. Para alguns vrus, o estabelecimento de infeco persistente uma regra
e ocorre em, virtualmente, todos os indivduos
infectados. Em outras palavras, a persistncia
uma caracterstica biolgica inerente s relaes
daquele vrus com os seus hospedeiros. Esse tipo
de infeco persistente se prolonga por tempo indeterminado, provavelmente por toda a vida do
animal. Essas so as infeces persistentes clssicas
e so caractersticas das infeces pelos retrovrus animais, alm de outros vrus. Em outros
grupos de vrus, infeces persistentes podem
ser estabelecidas aps a infeco aguda, em um
nmero varivel de indivduos, e a persistncia
geralmente possui durao varivel, no necessariamente indenida. Nesses casos, a persistncia
uma conseqncia provvel e muitas vezes
freqente da infeco, mas no se constitui em
regra ou padro biolgico da infeco por esses
vrus. Alm disso, grande parte dos animais que
se tornam portadores consegue erradicar a infeco aps algum tempo, determinando o m da
persistncia, ou seja, so infeces persistentes temporrias (Figura 8.15).
Algumas infeces persistentes so acompanhadas de sinais clnicos crnicos, que podem ser
brandos ou graves; outras vezes a infeco absolutamente inaparente. Vrias infeces crnicas
resultam em patologias progressivas de desenvolvimento lento (MVV, CAEV, vrus da pneumonia progressiva dos ovinos [OPPV] e FeLV),
em imunopatologia ou imunodecincia (EIAV,
FIV e LCMV) ou no desenvolvimento de neoplasias malignas (vrus da leucose aviria [ALV] e
BLV). Essas patologias so mais comumente observadas nas infeces persistentes clssicas.
Os locais de persistncia do vrus no so
necessariamente os mesmos em que o vrus replicou e produziu patologias na fase aguda e, freqentemente, incluem stios de acesso restrito do
sistema imunolgico. Os padres de replicao e
excreo viral durante as infeces crnicas tambm so muito variveis. Em algumas infeces,
a replicao viral contnua e ocorre em nveis
moderados a altos; em outras, os nveis de replicao so muito baixos, com pouca ou nenhuma
excreo viral. J as infeces latentes so caracterizadas por longos perodos de absoluta ausncia de replicao viral intercaladas com episdios
espordicos de reativao, replicao e excreo
viral.
Captulo 8
aguda. Subseqentemente, por diferentes mecanismos, o agente consegue coexistir com uma
resposta imune que mantm um controle parcial
da infeco, sem conseguir elimin-la totalmente.
Os nveis de replicao nesse tipo de infeco variam de acordo com o vrus. Alguns vrus mantm nveis considerveis de replicao de forma
contnua; outros apresentam uma replicao
mnima, s vezes, de difcil deteco. As infeces pelos retrovrus animais (EIAV, BLV, FeLV,
CAEV, entre outras), BTV e infeco persistente
pelo BVDV so exemplos clssicos de infeces
vricas persistentes.
No caso dos retrovrus, a manuteno da infeco se deve integrao denitiva de cpias
DNA do genoma viral nos cromossomos das
clulas hospedeiras, ou seja, as clulas infectadas cam persistentemente infectadas e, caso se
multipliquem, transmitem o genoma viral para
a sua prognie. Assim, geraes sucessivas de
clulas produzem vrus infecciosos ao longo da
vida do animal. No caso do BLV, a manuteno
da infeco persistente deve-se principalmente a
divises celulares contnuas e transmisso do genoma viral para a prognie, do que produo
de vrus infecciosos. interessante observar que
os retrovrus, alm de inserir o seu material gentico nos cromossomos do hospedeiro, tambm
sofrem contnuas mutaes que contribuem para
a sua perpetuao no animal infectado.
As infeces persistentes pelo BVDV somente ocorrem em animais que tenham sido infectados intra-uterinamente, entre os 40 e 120 dias de
gestao. Esses animais se tornam imunotolerantes e so incapazes de montar uma resposta imunolgica contra o vrus infectante. Assim, o vrus
pode replicar continuamente em altos ttulos no
tecido linforreticular e epitlios dos animais, sem
a interferncia do sistema imunolgico.
223
224
Captulo 8
Tabela 8.4 Stios de persistncia de vrus que estabelecem infeces latentes ou persistentes nos hospedeiros
Tipo
Famlia/subfamlia
Vrus
Espcie
Local de persistncia
BoHV-1
bovina
BoHV-5
bovina
BoHV-2
bovina
CaHV-1
canina
FHV-1
felina
CpHV
caprina
PRV
suna
EHV-1, 3 e 4
eqina
GaHV-1
aves
Herpesviridae/
Betaherpesvirinae
PCMV (SHV-2)
suna
Herpesviridae/
Gammaherpesvirinae
MCFV (AHV-1)
ruminantes
Clulas linfoblastides.
EHV-2 e 5
eqina
Clulas linfoblastides.
DAdV-A
aves
BLV
bovina
Linfcitos B.
Maedi/ Visna
ovina
Moncitos e macrfagos.
CAEV
caprina
FIV/FeLV
felina
EIAV
eqina
Macrfagos e linfcitos.
ALV
aves
Vrus Jaagsiekte
OPAV
ovina
Coronaviridae
FIPV
felina
Macrfagos.
Paramyxoviridae
CDV*
canina
SNC (oligodendrcitos).
Caliciviridae
FCV
felina
Flaviviridae
BVDV, BDV e
CSFV**
bovina, ovina e
suna
Alphaherpesvirinae
MDV (GaHV-2)
aves
Linfcitos T.
Adenoviridae
EAdV-2
eqina
Parvoviridae
PPV***
suna
Reoviridae
BTV
bovina e ovina
Clulas hematopoiticas.
Hepadnaviridae
DHBV, WHBV,
GSHBV
patos, gansos,
marmotas, esquilos
ovinos
Hepatcitos.
Latente
Herpesviridae/
Alphaherpesvirinae
Adenoviridae
Persistente
Retroviridae
225
Famlia/subfamlia
Vrus
Espcie
Local de persistncia
BPV-1 a 7
bovina
Clulas epiteliais.
CaPV
canina
Clulas epiteliais.
EPV-1 e 2
eqina
Clulas epiteliais.
Adenoviridae
CAdV-1
canina
Asfarviridae
ASFV
suna e bubalina
Circoviridae
PCV-1 e 2
suna
Picornaviridae
FMDV
bovina, suna
e ovina
Mucosa da orofaringe.
PRRSV
suna
EAV
eqina
TGEV
suna
IBV
aves
BDV
eqina
Persistente temporria
Papillomaviridae
Arteriviridae
Coronaviridae
Bornaviridae
* Alguns animais que se recuperam da doena ficam portadores,mas no excretam o vrus, que replica em nveis baixos no SNC.
**Fetos infectados em determinada fase de gestao ficam imunotolerantes e nascem persistentemente infectados.
***Alguns fetos infectados no tero se tornam imunotolerantes e ficam portadores, excretando o vrus por longos perodos.
226
conseqncia, aps penetrar e ter o seu ciclo replicativo interrompido, o vrus estabelece infeces latentes nesses neurnios, ou seja, a infeco de clulas semi-permissivas infeco ltica
o mecanismo responsvel pela persistncia dos
alfaherpesvrus nos seus hospedeiros. Sob determinadas condies, esses neurnios que abrigam
o genoma viral se tornam permissivos, o que desencadeia a reativao e replicao viral.
Captulo 8
227
228
Captulo 8
6 Imunopatologia em infeces
vricas
O sistema imunolgico o responsvel pela
proteo do organismo contra agentes agressores, porm a ativao da resposta imune nem
sempre capaz de controlar a infeco. Alm
disso, em determinadas situaes, a resposta
produzida pode induzir leses imunomediadas,
determinando a ocorrncia da doena. Vrias doenas vricas, como a AIDS, a dengue, a anemia
infecciosa eqina e a artrite-encefalite caprina,
entre outras, apresentam as leses resultantes da
resposta imunolgica como componentes de sua
patogenia.
A resposta imune em infeces vricas tem
como objetivo a eliminao e/ou neutralizao
das partculas virais livres, pela ao de anticorpos e do complemento; alm da destruio das
clulas infectadas, pela citotoxicidade celular
dependente de anticorpo (ADCC), linfcitos T
citotxicos (CD8+) e lise por clulas natural killer
(NK). Em algumas situaes, essa resposta suciente para eliminar o vrus do organismo. No
entanto, em outras situaes, essa resposta pode
causar injria tecidual, doena e at matar o hospedeiro. Em alguns casos, comum a coexistncia do hospedeiro com o vrus, com a ocorrncia
de injrias celulares e teciduais mnimas, muitas
vezes sem o comprometimento da sade geral do
animal.
O grau de leso que a resposta imunolgica
pode produzir no hospedeiro depende, em parte,
dos rgos envolvidos. Se a infeco ocorre no
SNC ou no corao, as leses so geralmente graves, enquanto uma resposta localizada na pele,
por exemplo, possui conseqncias limitadas.
229
sua ao fsica e sim da ativao local do complemento e dos eventos inamatrios resultantes
dessa ativao.
A deposio de imunocomplexos na parede dos vasos e nos tecidos seguida do aumento
da permeabilidade vascular local, mediada por
aminas vasoativas como a histamina e serotonina. A ligao da regio Fc dos anticorpos dos
imunocomplexos a receptores Fc das membranas
provoca a liberao das aminas vasoativas provenientes de baslos, plaquetas e mastcitos que
circulam no local da deposio. A poro Fc se
liga ao componente C1 e ativa a via clssica do
complemento. Ocorre a atrao de neutrlos
para o local de deposio, e a formao do complexo de ataque membrana (MAC), o que contribui para a injria local.
Os receptores para a poro Fc das imunoglobulinas G esto presentes no plexo coride,
onde possuem distribuio periventricular. A
localizao desses receptores parece ter relevncia na distribuio das leses por deposio de
imunocomplexos observadas na infeco pelo
MVV e CAEV em pequenos ruminantes (ovinos
e caprinos).
Na anemia infecciosa eqina, os anticorpos
se ligam a vrions livres no plasma, e os imunocomplexos so depositados principalmente nos
glomrulos renais, levando glomerulonefrite
imunomediada. A circulao desses imunocomplexos tambm pode levar hemlise, resultando em anemia.
O FeLV pode induzir deposio de imunocomplexos e imunodecincia. Algumas vezes ocorrem altos nveis de antgenos virais e a
formao e deposio de imunocomplexos leva
glomerulonefrite imunomediada. Em outros
casos, ocorre depleo linfide, em parte pela
ADCC. Essa depleo leva a uma maior susceptibilidade a infeces secundrias, como estomatites crnicas, gengivites, leses de pele e abscessos
subcutneos.
As leses imunomediadas podem ocorrer
tambm como seqelas de infeces virais, sem
envolvimento direto na patogenia da infeco,
como a sndrome oftlmica que ocorre em ces
convalescentes da infeco pelo CAdV-1. A leso
caracterizada pela deposio de imunocomple-
230
Captulo 8
231
Tabela 8.5. Principais alteraes imunolgicas e seus mecanismos de induo, por diferentes grupos de vrus
Famlia/
Famlia
grupo
Mecanismos
Alteraes imunolgicas
Replicao em
Susceptibilidade Proliferao Aumento nas
Vrus
clulas
imunoglobulinfide
a infeces
imunolgicas
linas
reduzida
Ativao do Produtos de
sistema
moncitos e
imune
linfcitos Th
Protenas
virais
Picornaviridae
Flaviviridae
Arteriviridae
Coronaviridae
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae
+
+
+
+
+
+
Rhabdoviridae
Arenaviridae
Reoviridae
Retroviridae
Parvoviridae
+
+
Herpesviridae
Poxviridae
Adenoviridae
+
+
232
Captulo 8
233
Tabela 8.6. Protenas virais que interferem com a resposta imunolgica do hospedeiro
Mecanismo efetor
Famlia
Lise celular mediada por
anticorpos e complemento
Apresentao de antgenos
peloMHC-I a linfcitos
citotxicos
Vrus
Protena viral
Vrus
Protena-alvo
gE+gI
gC
Vrus vaccinia
VCP
C3b+C4b
Adenovrus
E3/19K
ICP47
TAP
Citomegalovrus
UL-18
Beta 2-microglobulina
TNF
Vrus vaccina
TNF
IL-1 beta
Cowpox
?
crmA
TNF
IL-1 beta
Orthopox
orfB8R
IFN gama
Tanapox
38kDa
Vrus do mixoma
37kDa
IFN gama
clulas infectadas. Os poxvrus codicam protenas que so secretadas pelas clulas infectadas e
interferem com a ao de interleucinas produzidas em resposta infeco. Alguns desses vrus
codicam uma protena que se liga ao fator de
necrose tumoral (TNF) e o impede de se ligar
superfcie das clulas infectadas. O vrus do mixoma codica uma protena homloga ao receptor do interferon gama (IFN ). Os vrus da vaccinia e cowpox codicam protenas que se ligam e
inibem a funo da IL-1, IFN- e TNF.
Em resumo, a infeco e alterao da funo
de clulas envolvidas na resposta imunolgica
no o nico mecanismo de imunossupresso
causado por vrus. provvel que a imunossupresso observada nas infeces vricas, em sua
maioria, deva-se interao de mltiplos fatores,
que incluem citocinas/interleucinas, infeco e
disfuno de clulas imunolgicas e efeitos de
protenas virais especcas.
234
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1 Introduo
239
239
240
242
242
243
243
243
244
244
244
245
249
250
250
252
253
254
255
256
256
256
257
257
257
258
5 Consideraes finais
258
6 Bibliografia consultada
258
1 Introduo
A resposta imune inata (tambm denominada natural ou inespecca) mediada por clulas e
molculas. Previamente estimulao dessa resposta, mecanismos naturais de proteo contra a
penetrao de patgenos, como a pele, os plos,
o muco, enzimas, peptdeos antivirais e anti-bacterianos representam as barreiras iniciais contra
os agentes infecciosos. A ausncia ou disfuno
desses mecanismos provavelmente resultaria em
um aumento da freqncia e da severidade das
infeces. Embora sejam considerados componentes da imunidade inata, essas barreiras no
sero abordadas nessa reviso. Aqui, ser dado
enfoque aos mecanismos imunolgicos naturais
que efetivamente participam da imunidade antiviral e, principalmente, que cooperam com a ativao da resposta imune especca.
A resposta imune inata assim denominada
em razo de algumas caractersticas peculiares,
tais como: a) atua imediatamente aps o contato com o agente; b) no discrimina diferentes
tipos de antgenos; c) atua com intensidade relativamente constante e d) no possui memria.
questionvel se, agindo isoladamente, a resposta
inata seria capaz de erradicar uma infeco vri-
240
Captulo 9
2.1 Interferon
O primeiro obstculo infeco viral representado pelos IFN-I, que foram justamente
identicados pela sua capacidade de interferir
com a replicao viral. O IFN-I compreende dois
tipos principais: interferon alfa (IFN- ) e interferon beta (IFN- ), que so produzidos por vrios
tipos de clulas em resposta s infeces vricas.
Vrios vrus so potentes indutores de IFN-I, e
a sua induo est associada com a produo de
RNA de ta dupla no interior da clula durante a
replicao viral. A interao de alguns vrus com
4
1
Aumento da
expresso
do MHC-I
Ativao de:
Clulas NK;
Linfcitos Tc;
Macrfagos.
Figura 9.2. Induo e principais funes do IFN-I na resposta imune inata. A presena de RNA de fita dupla em
clulas infectadas por vrus induz a produo de IFN-I (1), que secretado no meio extracelular (2). O IFN-I interage
com receptores nas clulas vizinhas (3) e desencadeia uma srie de reaes que resultam na induo de um estado de
resistncia antiviral (4). O IFN-I tambm promove um aumento na expresso do MHC-I (5), alm de ativar clulas NK,
linfcitos Tc e macrfagos (6).
241
O IFN-I atua tambm como fator de sobrevivncia para as pDCs, promove o desenvolvimento, maturao e atividade microbiocida dos
macrfagos e ativa as clulas NK, que, por sua
vez, interagem sinergisticamente com as DCs.
Alm de seu papel na imunidade inata, o
IFN-I possui um papel importante no desenvolvimento da imunidade especca, por meio de
diferentes mecanismos, tais como: a) induo da
expresso de molculas do complexo de histocompatibilidade principal do tipo I (MHC-I), o
que favorece o processamento e a apresentao
de antgenos endgenos; b) ativao das DCs,
produzindo um aumento da expresso de receptores e produo de citocinas; c) estimulao da
10
8
Fagcito
9
12
11
7
NK
Clula
infectada
Linfcitos Tc
5
3
Dcs
Clulas vizinhas
Figura 9.3. Mecanismos efetores associados com a resposta imune inata. A infeco viral (1) resulta na produo e
secreo de IFN-I pelas clulas infectadas (2). O IFN-I secretado induz um estado de resistncia antiviral nas clulas
vizinhas (3); ativa clulas NK (4), DCs (5), linfcitos Tc (6) e estimula a atividade fagoctica dos macrfagos (7).
Simultaneamente, a presena de vrions pode levar ativao do complemento (8); cujos componentes ativados
atraem e ativam fagcitos (9, 10), opsonizam vrions, facilitando a fagocitose (11) ou promovem a lise de vrus
envelopados (12).
242
Captulo 9
243
244
Captulo 9
245
nados BCRs (B cell receptors). Os BCRs so molculas de imunoglobulinas das classes IgD e IgM,
que possuem uma regio altamente varivel, capaz de se ligar a uma variedade muito grande de
determinantes antignicos. Os BCRs podem se
ligar a antgenos de qualquer natureza qumica,
sejam protenas, carboidratos, lipdios ou outras
macromolculas, ou seja, os linfcitos B podem
reconhecer e responder a antgenos proticos e
no-proticos, desde que esses possuam regies
complementares s regies variveis dos seus
BCRs. Isso faz com que os linfcitos B reconheam antgenos na sua forma nativa, solvel ou
no, sem a necessidade de processamento prvio.
No caso dos vrus, os principais antgenos reconhecidos pelos linfcitos B so as protenas de
superfcie dos vrions, devido a sua localizao
e acessibilidade aos BCRs. Protenas virais inseridas em membranas celulares, alm de protenas secretadas pelas clulas infectadas, tambm
podem estimular os linfcitos B. Os linfcitos B
tambm podem reconhecer antgenos virais capturados e armazenados na superfcie das DCs,
sob a forma de pequenas esferas (icossomos). Do
ponto de vista de proteo, os anticorpos induzidos contra protenas de superfcie (do capsdeo
ou envelope) possuem importncia especial, pois
podem se ligar e neutralizar a infectividade dos
vrus.
Os locais de contato entre os antgenos e os
linfcitos B locais de reconhecimento do antgeno so principalmente os rgos linfides perifricos, dentre estes, os linfonodos.
por ambos. A forma de reconhecimento de antgenos por esses dois tipos de linfcitos, no entanto, diferente:
246
Captulo 9
Linfcito Th
1
4
2
3
ncleo
Clula apresentadora
de antgeno (APC)
Figura 9.4. Apresentao de antgenos virais extracelulares e resposta por linfcitos Th. Antgenos virais
extracelulares so internalizados por endocitose e/ou fagocitose (1) e processados proteoliticamente no interior de
vesculas (2), gerando peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-II no retculo endoplasmtico (3). Os
complexos peptdeo-MHC-II so transportados at a superfcie celular (4), onde so reconhecidos pelos linfcitos Th
(5). Os linfcitos Th, estimulados por esse contato, secretam interleucinas (6) que possuem diversas aes
modulatrias sobre as clulas envolvidas na resposta imunolgica.
247
protenas sintetizadas no interior das clulas durante a infeco, e no com protenas extracelulares que so internalizadas. Por isso, essa via de
apresentao denominada endgena. Protenas
virais produzidas no interior das clulas durante
o ciclo replicativo so clivadas enzimaticamente
em peptdeos de 8 a 12 aminocidos, que so conjugados com molculas do MHC-I. Os complexos
MHC-I+peptdeos virais so transportados at
a superfcie celular, onde cam expostos (Figura 9.5). Esse um processo siolgico e resulta
tambm na apresentao de fragmentos de protenas celulares. No entanto, apenas os peptdeos
resultantes da clivagem das protenas virais so
capazes de estimular os linfcitos Tc. O reconhe-
Linfcito Tc
7
6
1
5
Replicao viral
...
prossegue...
4
3
ncleo
Figura 9.5. Apresentao de antgenos virais endgenos e resposta por linfcitos Tc. Aps a penetrao do vrus (1), as
protenas virais so produzidas pelo aparato celular de traduo (2). Parte dessas protenas so processadas pelos
proteassomos (3), resultando em peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-I no RE (4). Esses complexos
so transportados at a superfcie celular (5), onde sero reconhecidos pelos linfcitos Tc (6). Ativados pelo contato
com o antgeno e por citocinas, os linfcitos Tc liberam o contedo citotxico de seus grnulos (7), destruindo a clula
infectada.
248
Captulo 9
As DCs desempenham um papel muito importante no processo de apresentao de antgenos a outras clulas do sistema imunolgico. As
DCs podem ser infectadas por uma variedade de
vrus e, assim, apresentar fragmentos de protenas virais conjugadas com o MHC-I aos linfcitos
Tc. Alm de apresentar esses antgenos, as DCs
fornecem estmulos qumicos (citocinas) para a
ativao integral desses linfcitos (Figura 9.6). As
DCs podem detectar vrions ou protenas virais
atravs de receptores do tipo TLR 7 e 9, resultando em uma cascata de eventos intracelulares que
as induzem a produzir citocinas e acelerar o seu
Linfcito Th
2a
2b
3
1
Clula
dendrtica
Linfcito Tc
Linfcito B
8
5
CTL
Plasmcito
9
Clula infectada
Figura 9.6. Interaes entre as DCs e os linfcitos e estimulao da resposta adquirida. As DCs so capazes de
apresentar peptdeos exgenos aos linfcitos Th (1), estimulando-os a produzir citocinas do tipo Th1 (2a) ou Th2 (2b).
O reconhecimento de antgenos em soluo ou nos icossomos da superfcie das DCs (3), juntamente com as citocinas
do tipo Th2, estimula os linfcitos B a proliferar (4) e se diferenciar em plasmcitos, que so clulas secretoras de
anticorpos (5). Os linfcitos Tc podem reconhecer antgenos endgenos na superfcie de clulas infectadas ou nas
DCs (6). Este reconhecimento, juntamente com as citocinas do tipo Th1 (2a), ativa os linfcitos Tc que se tornam CTLs
(7). Ao reconhecerem o mesmo padro antignico (MHC-I+ peptdeo viral) na membrana de clulas infectadas (8), os
CTLs descarregam o seu arsenal citotxico que resulta em apoptose e morte celular (9).
processo de maturao. As DCs possuem prolongamentos citoplasmticos denominados dendritos, que aumentam a sua superfcie, facilitando, com isso, a interao com as demais clulas
do sistema imunolgico. As DCs so capazes de
capturar e armazenar antgenos em pequenas esferas na sua superfcie, denominadas icossomos.
Dessa forma, as DCs podem oferecer e transferir
antgenos para outras DCs, para macrfagos e
mesmo para os linfcitos B. As interaes entre
as DCs e as clulas envolvidas na resposta imune
adquirida esto ilustradas na Figura 9.6
O contato entre os antgenos e as clulas do
sistema imunolgico apresentao e reconhecimento de antgenos ocorre principalmente nos
linfonodos e outros tecidos linfides secundrios.
Nesses tecidos, o microambiente existente favorece as interaes entre o antgeno, as DCs e outras
APCs, linfcitos T e B e clulas acessrias, resultando na estimulao eciente de uma gama de
clulas envolvidas com a resposta imunolgica
especca. Alm de se constituir no evento central da imunidade adquirida, o reconhecimento
de antgeno e a conseqente estimulao de populaes de linfcitos T e B representa a etapa
inicial da resposta imunolgica especca.
249
NK e macrfagos). A resposta do tipo Th2 caracteriza-se pela secreo de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10,
citocinas que atuam principalmente na ativao
da imunidade humoral. Essas citocinas possuem
papel importante na ativao, proliferao e diferenciao de linfcitos B e secreo de anticorpos, ou seja, as citocinas produzidas pelos Th em
resposta ao antgeno estimulam tanto a resposta
celular como a resposta humoral. O balano entre
as respostas do tipo Th1 e Th2 depende da biologia de cada vrus e de suas interaes com o
sistema imunolgico.
A funo principal dos Tc na resposta antiviral a destruio de clulas infectadas por
vrus. Para muitas infeces vricas, a resposta
celular, mediada pelos Tc, representa a forma
mais eciente de combate e erradicao da infeco. A ativao dos linfcitos Tc ocorre aps
o reconhecimento de antgenos apresentados por
clulas infectadas. Esta ativao depende de dois
estmulos bsicos: a estimulao resultante do
reconhecimento dos complexos peptdeo-MHC-I
na superfcie das clulas clulas infectadas e as
citocinas produzidas pelas DCs ou pelos linfcitos Th ativados (Figura 9.6). Os complexos peptdeo-MHC-I so reconhecidos exclusivamente
pelo TCR e CD8 dos linfcitos Tc. Aps a sua
ativao, esses linfcitos tornam-se competentes
para destruir as clulas que apresentem o mesmo complexo peptdeo-MHC-I que induziu a sua
estimulao. Esses complexos sero encontrados
nas clulas que albergam o vrus infectante. Os
linfcitos Tc ativados e capazes de destruir clulas infectadas so denominados CTLs (citotoxic T
lymphocytes). Ao entrar em contato com a clula
infectada, os linfcitos Tc aderem a ela por meio
do complexo TCR/CD8 e de outras molculas de
superfcie. Essas interaes resultam na reorganizao do citoesqueleto, polarizando o linfcito
Tc com o objetivo de descarregar o seu arsenal
citotxico sobre a clula infectada. Entre os componentes citotxicos dos linfcitos Tc encontramse as perforinas, que possuem a capacidade de
induzir a formao de poros na clula-alvo. Os
linfcitos Tc tambm secretam as granzimas, que
penetram nas clulas atravs dos poros e ativam
mecanismos intracelulares que culminam com a
morte programada da clula (apoptose). Poste-
250
Captulo 9
251
relativamente curta; as clulas de memria possuem vida longa. Tanto os BCRs presentes na
membrana dos linfcitos B de memria como as
imunoglobulinas secretadas pelos plasmcitos
possuem a mesma especicidade dos BCRs do
Vaso aferente
1
Th
5
2
7
Proliferao
Crtex
Diferenciao
Centros
germinativos
10
Clula de
memria
Linfonodo
Ativao
Clulas
dendrticas
Plasmcitos
11
Vaso eferente
Figura 9.7. Mecanismos envolvidos na estimulao dos linfcitos B e produo de anticorpos. Partculas vricas ou
antgenos virais drenados pela linfa nos tecidos perifricos penetram nos linfonodos pelos vasos aferentes (1). Esses
antgenos podem ser reconhecidos diretamente pelos linfcitos B (2) ou em icossomos na superfcie das DCs (3).
Tanto as DCs como os linfcitos B podem processar e apresentar antgenos virais aos linfcitos Th (4, 5), que secretam
citocinas em resposta (6). Estas citocinas atuam nos linfcitos B, estimulando a sua proliferao (7) e diferenciao em
plasmcitos (8) ou em clulas de memria (9). Os plasmcitos secretam grande quantidade de anticorpos (10) que tm
acesso aos lquidos corporais (11). Clulas fagocticas e/ou DCs podem tambm penetrar nos linfonodos j com
antgenos virais capturados nos tecidos perifricos e os apresentar aos linfcitos Th e B.
252
Captulo 9
uma resposta proliferativa e de diferenciao rpida e intensa. Essa resposta denominada resposta imune secundria. Embora mais estudados
em linfcitos B, pela facilidade de quanticao
dos anticorpos, os eventos envolvidos na resposta primria e secundria provavelmente ocorram
de forma semelhante aos linfcitos T. A resposta
primria a um determinado vrus pode resultar
de infeco natural ou de vacinao e prepara o
sistema imunolgico para responder e montar
uma resposta secundria caso ocorra uma reexposio posterior ao agente.
A memria imunolgica de linfcitos B e T
diferente. A produo contnua de anticorpos
especcos tem sido detectada vrias dcadas
aps a infeco por alguns vrus. Como a vida
mdia dos anticorpos no organismo de poucas
semanas, isto indica que ocorre uma produo
contnua de anticorpos para que os nveis sejam
mantidos. Uma possvel explicao para esse fato
de que linfcitos B de memria seriam constantemente reestimulados a se diferenciarem em
plasmcitos secretores de Igs, pois os plasmcitos possuem vida curta. O contato freqente com
o antgeno e as conseqentes reestimulaes
podem decorrer da reexposio ao prprio microorganismo ou resultar de reatividade cruzada
com antgenos semelhantes, prprios ou heterlogos. Alm disso, recentemente foi observado
que as DCs possuem a capacidade de armazenar
antgenos em seus dendritos por perodos prolongados e liber-los lentamente para os linfcitos de memria, provocando a sua reestimulao
contnua. Isso poderia proporcionar uma estimulao prolongada no somente dos linfcitos de
memria, mas tambm de linfcitos que ainda
no haviam sido estimulados (naive ou virgens).
Estes, ao chegarem aos rgos linfides, encontrariam com o antgeno pela primeira vez, gerando novamente uma resposta imune primria e,
conseqentemente, a produo de mais linfcitos
de memria.
Ao contrrio da fase efetora da resposta humoral cuja produo de anticorpos pode persistir por longos perodos a fase efetora da resposta
celular de curta durao. A presena prolongada de linfcitos Th e Tc efetores seria deletria
para o organismo, pois a secreo persistente de
253
dos linfcitos de memria, que proliferam e se diferenciam em clulas efetoras, a exemplo do que
ocorreu na resposta primria, porm com muito
maior ecincia e rapidez. O resultado a produo de linfcitos Th e Tc efetores e de plasmcitos
secretores de anticorpos, que se encarregam de
combater o vrus invasor.
254
3.5.1 Mecanismos de ao
das imunoglobulinas
As Igs possuem vrias atividades biolgicas
que potencialmente podem estar envolvidas na
resposta antiviral. Algumas dessas atividades j
foram demonstradas in vivo e a sua participao
na resposta antiviral parece ser inquestionvel;
outras somente foram demonstradas inequivocadamente in vitro e/ou possuem um papel controverso na resposta imunolgica contra os vrus. A
seguir so listadas as principais atividades antivirais dos anticorpos (essas atividades na defesa
contra vrus esto ilustradas na Figura 9.8):
Neutralizao: a interao dos vrions com
os receptores celulares para o incio da infeco
mediada por regies especcas das protenas
de superfcie dos vrions (anti-receptores). Anticorpos produzidos contra essas regies possuem
a capacidade de se ligar aos vrions e impedir a
interao com os receptores celulares, neutralizando a sua infectividade. Esses anticorpos so
denominados genericamente neutralizantes e
constituem uma parcela do total de anticorpos
produzidos contra os vrus. Anticorpos com atividade neutralizante so direcionados contra protenas de superfcie dos vrions. A neutralizao
de partculas virais pode ocorrer por Igs da classe IgA, presente nas mucosas e em secrees; ou
por IgM e IgG, presentes no plasma sangneo.
Um dos desaos da vacinologia a induo de
proteo slida nas mucosas, pela estimulao de
IgA com capacidade de neutralizar as partculas
vricas nos locais mais freqentes de penetrao
viral (sistema respiratrio, digestrio e reprodutivo) e, assim, impedir a instalao da infeco.
A neutralizao da infectividade o mecanismo
mais direto de ao dos anticorpos contra vrus e,
talvez, o mais importante;
Aglutinao: as IgM e IgG possuem a capacidade de aglutinar partculas virais e, com
isso, facilitar a sua remoo mediada pelo sistema complemento e por clulas fagocticas;
Captulo 9
255
Tc
6
Figura 9.8. Atividades dos anticorpos na resposta contra vrus. Neutralizao da infectividade (1), aglutinao (2),
opsonizao e fagocitose (3), ativao do complemento (4), lise de vrus envelopados mediada por complemento (5),
ADCC (6) e lise celular mediada por complemento dependente de anticorpos (7).
256
Captulo 9
257
258
5 Consideraes finais
inquestionvel o avano no entendimento dos mecanismos imunolgicos estimulados
durante as infeces vricas. Os imunologistas
aprendem imunologia com os vrus, cujas interaes com o sistema imunolgico so repletas de
estratgias para driblar ou conviver com os mecanismos imunolgicos e, assim, perpetuar-se nas
Captulo 9
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10
1 Introduo
263
263
265
269
270
273
274
274
4 Doenas em populaes
275
276
276
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279
280
281
281
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284
285
285
287
287
288
288
289
289
289
290
290
8 Bibliografia consultada
293
1 Introduo
A epidemiologia estuda as doenas em populaes, investigando os seus determinantes, a
sua dinmica e distribuio. Os fatores envolvidos na manuteno e transmisso das infeces
vricas nas populaes so mltiplos e participam de interaes complexas, s vezes, de difcil
compreenso. A complexidade dessas interaes
muito varivel entre as viroses. Existem infeces vricas que so mantidas na populao por
uma cadeia sucessiva de infeces agudas entre
hospedeiros de uma nica espcie animal. Essas
infeces apresentam, portanto, uma epidemiologia relativamente simples. Outras viroses conseguem persistir na populao graas a infeces
persistentes ou latentes. Por outro lado, alguns
vrus desenvolveram a capacidade de infectar vrias espcies de hospedeiros e a sua manuteno,
na natureza, possvel pela ocorrncia de ciclos
alternados de infeco nessas espcies.
Infeco de espcies silvestres, transmisso
por artrpodes, longos perodos de incubao ou
de sobrevivncia no meio ambiente, transmisso
vertical, variabilidade gentica e antignica, entre outras, fazem parte do arsenal de estratgias
utilizadas pelos vrus para assegurar a sua sobrevivncia como espcie. Alguns vrus fazem uso
concomitante de vrias dessas estratgias, o que
torna a sua epidemiologia extremamente complexa, favorecendo a sua manuteno no ambiente e
dicultando o seu controle.
Penetrao
Excreo
Fonte de
infeco
Novo hospedeiro
Transmisso
264
Captulo 10
Tecidos
Descamaes
cutneas
Urina,
fezes
Secrees
oronasais
Sangue,
linfa
Secrees
urogenitais,
smen
Fetos, fluidos e
membranas fetais
Colostro
e leite
265
Mucosa
conjuntival
Pele
Mucosa
urogenital
Mucosa
respiratria
Mucosa
orofarngea
Mucosa
intestinal
266
Captulo 10
maioria das vezes, para designar espcies silvestres, essa denominao pode tambm ser utilizada para designar animais domsticos que sirvam
de fontes de infeco e, como tal, mantenham e
transmitam agentes infecciosos. Geralmente, as
principais espcies que servem de reservatrios
de agentes virais na natureza so as espcies de
origem desses agentes, tambm chamadas de
hospedeiros ou reservatrios naturais. No entanto,
mesmo espcies que no se constituam nos hospedeiros naturais de determinados vrus podem,
ocasionalmente, servir de reservatrios. Deve ser
enfatizado que algumas espcies que abrigam
agentes virais na natureza e que se constituem,
portanto, em reservatrios desenvolvem a enfermidade devido infeco. Nesse sentido, os
agentes que conseguem infectar e se manter em
espcies animais sem causar doena apresentam
uma grande vantagem, pois possuem uma maior
probabilidade de perpetuao e transmisso.
Exemplos de espcies reservatrios so as aves
aquticas e migratrias, para os vrus da inuenza A; pssaros e outras aves, para os alfavrus;
roedores silvestres, para os arenavrus e hantavrus; morcegos de vrias espcies, para diversos
vrus (Nipah, Hendra, vrus da raiva).
Os morcegos hematfagos e carnvoros silvestres (raposas, ces silvestres, raccons) so reservatrios do vrus da raiva e podem transmitilo a vrias espcies silvestres e domsticas (Figura
10.4). Os pssaros e outras aves silvestres so
reservatrios do vrus do Nilo Ocidental (WNV)
e dos vrus das encefalites do leste (EEEV) e oeste (WEEV) e podem transmiti-los para eqinos,
aves domsticas (faises, emas) e, ocasionalmente, para humanos (Figura 10.5). Sudeos silvestres
(warthogs) so reservatrios do vrus da peste suna africana (ASFV) e podem transmiti-lo para sunos domsticos. Nesses exemplos, independentemente se as espcies mencionadas constituem-se
nos hospedeiros naturais do agente e em alguns
casos parecem s-lo , na prtica, desempenham
o papel de reservatrios, pois abrigam e transmitem o agente para outras espcies de interesse. O
termo reservatrio, portanto, teria uma denio
mais funcional do que ecolgica.
267
Hospedeiros terminais
Hospedeiros terminais
Ciclo
natural
Hospedeiros
acidentais
Figura 10.5. Ciclo natural dos vrus da encefalites eqina do leste (EEEV), oeste (WEEV) e vrus do Nilo Ocidental
(WNV) e infeco de hospedeiros acidentais.
268
Captulo 10
Hospedeiros
acidentais
Ciclo
natural
Hospedeiros
acidentais
Figura 10.6. Ciclo natural do vrus da cinomose e transmisso acidental para espcies de vida livre.
269
transmisso por mosquitos. Em alguns desses casos, a infeco tambm rpida e fatal, o que diculta a transmisso do agente a partir do animal
infectado. Casos de transmisso do WNV entre
pessoas, por transfuso sangnea, via placenta e pela amamentao j foram relatados, mas
representam excees e possuem importncia
epidemiolgica restrita. Pessoas infectadas pelos
hantavrus tambm no participam ativamente
na transmisso do agente. Acredita-se que as espcies em que um determinado vrus cause doena severa e mortalidade considervel no se
constituam em seus hospedeiros naturais, e sim
acidentais. A tendncia que os vrus no causem
doena severa em seus hospedeiros naturais devido a um processo evolutivo que, eventualmente, tenha resultado em um equilbrio na interao
Vias de excreo
Secrees oronasais e
expectoraes
vrus respiratrios
vrus entricos
vrus hepticos
arenavrus, hantavrus
CDV
Fezes
Urina
Exemplos
Tipos de vrus/infeco
outros vrus
sistmicos
Fetos/membranas e fluidos
fetais
PRRSV
vrus
sistmicos
vrus que
infectam o feto
vrus sistmicos
Sangue e linfa
Pele, descamaes e
exsudaes cutneas
270
Captulo 10
Contato direto
Direta
Contato indireto
Veculos
Horizontal
Biolgicos
Indireta
Vetores
Mecnicos
Area
Transmisso
Transovariana
Transplacentria
Vertical
Perinatal
Colostro/leite
271
BVDV), focinho-pele (vrus da mamilite herptica [BoHV-2]), contato pele-pele (poxvrus, papilomavrus) e pela cpula (BoHV-1, vrus do
exantema coital dos eqinos [EHV-3], PRRSV).
Nessas formas de transmisso, o agente trans-
Famlia
Mecanismo de transmisso
Parvoviridae
Circoviridae
Papillomaviridae
Adenoviridae
Poxviridae
Herpesviridae
Asfarviridae
Picornaviridae
Caliciviridae
Arteriviridae
Togaviridae
Flaviviridae
Indireta por vetores (WNV), contato direto e indireto (fecaloral, respiratria [BVDV, vrus da peste suna clssica
[CSFV]), transplacentria (BVDV).
Coronaviridae
Arenaviridae
Bunyaviridae
Orthomyxoviridae
Rhabdoviridae
Paramyxoviridae
Reoviridae
Retroviridae
272
Captulo 10
273
274
Captulo 10
infectados experimentalmente por uma variedade de vrus humanos e animais, embora a infeco natural por esses agentes nessas espcies no
tenha sido descrita. Essa caracterstica tem sido
explorada para estudos de patogenia e outros
aspectos da biologia desses agentes. provvel
que a resistncia infeco natural (ou a ausncia
de casos de infeco natural) de algumas dessas
espcies deva-se falta de oportunidade de infeco mais do que resistncia propriamente dita,
ou seja, possvel que algumas dessas espcies
poderiam ser infectadas tambm in vivo, desde
que providas as condies necessrias para tal (p.
ex.: contato apropriado com animais que estejam
excretando o vrus e penetrao do agente pela
via adequada).
275
Infeco aguda
Infeco latente
Infeco persistente
Infeco persistente
temporria
Replicao viral
Manifestaes clnicas
Figura 10.8. Padres de ocorrncia das infeces e perodo de transmissibilidade em diferentes tipos de infeces
virais.
276
Captulo 10
Excreo viral
Infeco aguda
Infeco persistente
Dias
Meses, anos
Figura 10.9. Infeces persistentes de vrus de animais: vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV).
277
Reativao da infeco
Situaes de
estresse etc.
Excreo
viral
Infeco aguda
Infeco latente
Estabelecimento da latncia
Figura 10.10. Infeces latentes de vrus animais: vrus da doena de Aujeszky (PRV).
278
Captulo 10
Hospedeiros
acidentais
Ciclo natural
Hospedeiros
acidentais
Figura 10.11. Ciclo natural dos alfavrus e WNV em animais silvestres e infeco acidental de humanos e espcies
domsticas.
Figura 10.12. Evoluo do vrus da influenza A H5N1 por meio de infeces em vrias espcies.
279
280
Captulo 10
Ambientes, solo,
instalaes etc.
Meses
animais. Os retrovrus, arenavrus, alguns herpesvrus, parvovrus e alguns togavrus so freqentemente transmitidos aos fetos/neonatos.
Em alguns desses vrus (retrovrus e arenavrus),
os fetos ou recm-nascidos infectados tornam-se
portadores e servem de fontes contnuas e permanentes de infeco. Uma forma especial de
perpetuao por esse mecanismo descrita para
o BVDV, um pestivrus (famlia Flaviviridae) de
ruminantes (Figura 10.14). A infeco de fetos
bovinos entre os 40 e 120 dias de gestao freqentemente resulta na produo e nascimento
de bezerros imunotolerantes, persistentemente
infectados (PI). Os bezerros PI podem ser clinicamente saudveis (embora freqentemente apresentem crescimento retardado e susceptibilidade
aumentada a outras doenas) e excretam o vrus
em secrees e excrees em grandes quantidades durante toda a vida. Os animais PI representam o principal meio de perpetuao do BVDV
na natureza, servindo de fonte de vrus para as
infeces agudas e outras infeces fetais persistentes. As infeces fetais que resultam em morte
fetal e abortamento possuem um menor impacto
epidemiolgico, ainda assim os restos fetais (feto,
uidos, membranas) ou objetos inanimados con-
Bezerro saudvel,
soropositivo,
no-infectado.
aborto;
mumificao;
natimorto.
Infeco fetal
Anos
Excreo viral
Bezerro persistentemente
infectado
Figura 10.14. Transmisso vertical e infeco persistente pelo vrus da diarria bovina (BVDV).
281
taminados podem servir de veculos para a transmisso do agente e facilitar a sua diseminao.
4 Doenas em populaes
4.1 Definio de populao
Em epidemiologia, dene-se populao como
o grupo de indivduos no qual se est estudando aspectos relacionados sade e doena. A
partir desse conceito, pode-se derivar duas de-
282
Captulo 10
283
N de casos novos
Incidncia (%) = _______________________
x 100
Populao de risco (mdia) x tempo
284
Os eventos de doena ocorrem continuamente com o decorrer do tempo, com freqncia e distribuio temporal que podem variar de
acordo com diversos fatores. Dependendo da
distribuio da freqncia ao longo do tempo,
trs padres principais de ocorrncia podem ser
reconhecidos: doenas de ocorrncia espordica,
endmica e epidmica (Figura 10.16). Os termos endemia e epidemia so utilizados para designar doenas de ocorrncia endmica e epidmica, respectivamente. Os termos enzotica e epizotica
so utilizados para referir-se a doenas animais.
Porm, como mencionado anteriormente, os termos epidemiolgicos clssicos (endemia, epidemia) so tambm utilizados em epidemiologia
veterinria.
N de novos casos
Doena Espordica
Tempo
B
Doena Endmica
N de novos casos
Tempo
C
N de novos casos
Captulo 10
Doena Epidmica
Epidemia
em ponto
Epidemia de
propagao
Tempo
285
na maioria e doena em uma minoria dos indivduos, ou seja, a infeco raramente causa a doena. Assim, a infeco seria endmica e a doena
seria espordica (p. ex.: a infeco pelo BLV em
bovinos endmica; a ocorrncia do linfossarcoma causado pelo BLV espordica); c) o agente
no est presente na populao na maior parte
do tempo, sendo esporadicamente introduzido.
Quando introduzido, ocasiona os eventos de
doena (p. ex.: casos de febre aftosa nos estados
do Rio Grande do Sul e Mato Grosso do Sul nos
ltimos anos).
286
Captulo 10
287
288
Captulo 10
289
infectou humanos e eqinos na Austrlia, estando, at ento, limitado quele continente. Evento
similar ocorreu na Malsia e Indonsia, onde o
vrus Nipah (tambm um morbilivrus de morcegos) infectou e provocou doena em pessoas e
grande mortalidade em sunos. Outro exemplo
de infeco vrica restrita geogracamente o associado ao vrus ebola, cujos eventos epidmicos
concentram-se quase que exclusivamente na frica Central. As infeces pelos vrus das encefalites eqinas do leste e oeste (EEEV, WEEV) tambm possuem certa delimitao geogrca, que
determinada pelas interaes do agente com seus
vetores e hospedeiros. Esses agentes, no entanto,
tm sido tambm detectados fora de seus nichos
ecolgicos originais, o que pode, eventualmente,
caracterizar uma expanso de sua abrangncia.
A restrio geogrca de muitas dessas viroses pode possuir carter apenas circunstancial
e pode ser modicada ocasionalmente, acompanhando alteraes ecolgicas ou epidemiolgicas. A doena do Nilo Ocidental (WNV), causada
por um avivrus transmitido por insetos e cujos
hospedeiros naturais so vrias espcies de pssaros e outras aves silvestres, por exemplo, estava historicamente restrita ao nordeste do continente africano, a alguns pases do Oriente Mdio
e europa mediterrnea (casos isolados). Introduzida, em 1999, nos Estados Unidos, a infeco
pelo WNV rapidamente se disseminou e se tornou endmica no pas e est avanando na direo sul em pases da Amrica Central e Caribe.
Outro exemplo recente de expanso geogrca
foi o vrus da lngua azul (BTV), que atingiu rebanhos ovinos da Holanda, Alemanha e Blgica,
em 2006, provavelmente a partir da frica, onde
a infeco endmica.
290
Captulo 10
ambiente natural, infectando pequenos mamferos silvestres. Os vrus que circulam nas populaes silvestres nesses perodos denominados
enzoticos , embora capazes de infectar eqinos
e pessoas, produzem baixos nveis de viremia e
so virtualmente apatognicos para essas espcies. Periodicamente esses vrus sofrem mutaes
que os tornam patognicos e capazes de produzir
altos nveis de viremia em eqinos. Esses vrus
denominados epizoticos so, ento, transmitidos aos eqinos, nos quais so amplicados e
disseminados nessa espcie e tambm para humanos, causando epidemias/epizootias de grandes propores. Os surtos peridicos de VEE so
exemplos da reemergngia de doenas devido a
mutaes/alteraes genticas de vrus preexistentes no ecossistema.
O PRRSV foi inicialmente identicado como
patgeno de sunos no nal dos anos 1980, nos
EUA, e no incio dos anos 1990, na Europa. A hiptese mais aceita que o agente tenha se originado de um vrus muito semelhante de roedores
(lactate dehidrogenase elevating virus, LDEV). O
LDEV teria sido transmitido de roedores para sudeos silvestres na Europa h, aproximadamente,
um sculo. Posteriormente, teria sido transmitido
a sunos domsticos e introduzido nos EUA no
incio de sculo 20 pela importao de animais.
A partir da, o vrus teria evoludo na espcie
suna paralelamente nos dois continentes. Qual
a razo, ento, para o seu surgimento apenas
nos anos 1980-1990? A explicao mais plausvel
que, embora presente nesses pases h dcadas,
a grande disseminao teria apenas ocorrido nas
duas ltimas dcadas, por modicaes drsticas
nas prticas de manejo, comercializao, intercmbio intensivo de reprodutores e uso indiscriminado da inseminao articial.
O coronavrus causador da SARS (SARSCoV) emergiu na sia, em 2003, como um vrus
novo na populao humana. O seu surgimento
parece ter envolvido a interao de fatores ecolgicos e virais. Estudos epidemiolgicos iniciais indicavam as civetas (civet cats) pequenos
carvvoros silvestres domesticveis e utilizados
tambm para alimentao humana como provvel origem do agente. Estudos mais recentes,
no entanto, indicam uma espcie de morcego
291
292
Captulo 10
293
transmisso do que pela sua incapacidade de infectar outras espcies. Nesses casos, a barreira interespcies seria circunstancial e tnue e, por isso,
potencialmente temporria. Exemplos de agentes
virais que ultrapassam a barreira entre espcies
e se tornam capazes de infectar novos hospedeiros tm sido cada vez mais freqentes. Nesse
sentido, acredita-se que mais de 70% das viroses
emergentes em humanos teve origem zoontica,
tendo sido adquirida de animais em um passado mais ou menos recente. De especial interesse
para a sade humana e animal a imensurvel
gama de agentes infecciosos existentes em animais silvestres. A histria recente tem demonstrado que essa gama freqentemente contempla
populaes humanas e de animais domsticos
com novos vrus potencialmente patognicos.
8 Bibliografia consultada
princpios
294
RICO-HESSE, R. et al. Emergence of a new epidemic/epizootic
Venezuelan equine encephalitis virus in South America.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United
States of America, v.92, p.5278-5281, 1995.
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SCHWABE, C.W. Veterinary medicine and human health. 3.
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1997.
STUDDERT, M.J. Virus infections of equines (virus infections
of vertebrates s.). Amsterdam: Elsevier Science, 1996. 380p.
Captulo 10
epidemiology.
London:
DIAGNSTICO LABORATORIAL
DAS INFECES VRICAS
Eduardo Furtado Flores
11
1 Introduo
297
298
299
4 Mtodos de diagnstico
299
302
302
304
308
309
311
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316
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320
320
6 Bibliografia consultada
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321
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323
323
325
325
326
1 Introduo
A elaborao do diagnstico laboratorial das
infeces vricas animais depende de aes coordenadas do veterinrio de campo e dos tcnicos
de laboratrio. Os resultados dos testes laboratoriais, isoladamente, possuem pouco signicado
se no forem interpretados luz de conhecimentos de epidemiologia, patogenia e imunologia
das doenas. Por isso, o diagnstico laboratorial
contribui com uma parte das informaes necessrias soluo do problema sanitrio sob investigao. A outra parte, necessariamente, deve ser
provida pelos tcnicos encarregados da investigao clnico-patolgica e epidemiolgica; e da
coleta e remessa do material.
A coleta e acondicionamento adequados do
material a ser examinado so crticos para o sucesso do diagnstico laboratorial. Se as tcnicas
laboratoriais j apresentam diculdades intrnsecas, a sua realizao com material em condies
imprprias diculta a realizao das tcnicas
e reduz a probabilidade de obter o diagnstico correto. Por essa razo, amostras cuja coleta
e acondicionamento tenham sido inadequados
possuem um valor limitado para a realizao do
diagnstico.
O material para exame deve ser acompanhado de um histrico clnico e epidemiolgico detalhado. O histrico importante para a formulao
de hipteses sobre os possveis determinantes da
doena e para o planejamento e direcionamento
das tcnicas e reagentes a serem empregados. Ou
seja, grande parte da estratgia laboratorial de
diagnstico depende das informaes que acompanham a amostra.
A elaborao do diagnstico pode ser comparada com a montagem de um quebra-cabea.
As informaes clnicas, patolgicas e epidemiolgicas colhidas a campo se constituem em parte
das peas; e as informaes obtidas com a realizao das tcnicas laboratoriais representam as
peas restantes. Essa analogia ilustra bem a importncia dos diferentes componentes do intrincado complexo de informaes necessrias para
a elucidao dos fatores que levam ocorrncia
das doenas.
298
ns diagnsticos. A descrio detalhada das tcnicas aqui abordadas foi apresentada no Captulo
3, e a sua aplicao no diagnstico individual das
doenas ser abordada nos captulos especcos.
2 Aplicaes do diagnstico
virolgico
O diagnstico laboratorial de infeces vricas possui aplicaes muito mais amplas e abrangentes do que a de suporte investigao clnica.
Mesmo em enfermidades que possam ser diagnosticadas clinicamente e/ou com auxlio da histopatologia, a conrmao da etiologia por mtodos virolgicos e/ou sorolgicos recomendvel
e, em muitos casos, imprescindvel.
A investigao clnica e epidemiolgica de
eventos de doena em indivduos ou em populaes freqentemente requer a complementao ou
conrmao por tcnicas laboratoriais. As variaes na apresentao clnica das viroses, a ocorrncia de sndromes distintas associadas com o mesmo agente ou, ainda, a ocorrncia de manifestaes
clnicas semelhantes produzidas por diferentes
vrus, fazem dos testes laboratoriais importantes
recursos auxiliares ao diagnstico clnico. Alm
disso, as infeces vricas freqentemente cursam
sem sinais clnicos perceptveis ou com sinais inespeccos, tornando a conrmao laboratorial um
requisito essencial para o seu diagnstico.
Criaes em diferentes nveis (propriedades,
regies, pases e continentes) tm empregado esforos para erradicar e/ou evitar a introduo de doenas vricas de importncia sanitria estratgica,
como a febre aftosa, peste suna clssica e africana,
doena de Aujeszky, inuenza aviria, entre outras. Nesses casos, a existncia de um sistema integrado e gil de monitoramento, capaz de detectar e
identicar esses agentes rapidamente, constitui-se
em uma ferramenta essencial para a manuteno
da condio sanitria dessas criaes.
As zoonoses vricas, como a raiva, inuenza H5N1, hantavirose, febres hemorrgicas, febre
amarela, encefalomielites eqinas, doena do Nilo
Ocidental, entre outras, possuem grande importncia em sade pblica, o que justica a manuteno
de sistemas integrados e contnuos de vigilncia
Captulo 11
299
determinar a ocorrncia, prevalncia e distribuio de enfermidades vricas especcas so freqentemente realizados e utilizam testes diagnsticos, principalmente testes sorolgicos.
A deciso de se adotar medidas de controle
e/ou erradicao de doenas vricas depende do
conhecimento prvio sobre a situao da respectiva infeco na populao. Este conhecimento
pode ser obtido por estudos soro-epidemiolgicos que fazem parte de um estudo descritivo inicial, denominado diagnstico de situao. A tomada de decises, a natureza das medidas adotadas
e avaliaes peridicas do andamento e sucesso
de programas de controle tambm dependem
dos resultados obtidos em testes diagnsticos.
As aplicaes do diagnstico virolgico laboratorial so amplas e abrangentes e contemplam desde investigaes clnicas em nvel individual at programas de controle e erradicao
de doenas em nvel nacional ou continental. Por
essa razo, as tcnicas de diagnstico esto sob
contnuo aperfeioamento para contemplar os
diferentes graus de exigncia. Novas tcnicas e
variaes de tcnicas j existentes so relatadas
continuamente em publicaes especializadas e
muitas delas acabam sendo incorporadas ao arsenal de tcnicas disponveis para o diagnstico
de viroses animais.
Praticidade
Simplicidade
Custo baixo
Sensibilidade
Tcnica
diagnstica
Rapidez
Especificidade
Repetibilidade
Capacidade de
Automatizao
4 Mtodos de diagnstico
Os mtodos de diagnstico virolgico podem ser classicados em diretos e indiretos. Os
mtodos diretos so utilizados para detectar o vrus, antgenos ou cidos nuclicos virais. A deteco pode ser realizada diretamente em amostras
clnicas ou aps a multiplicao do agente em
cultivos celulares, ovos embrionados ou animais
susceptveis. Os mtodos indiretos detectam anticorpos especcos contra o vrus, isto , detectam
a resposta do hospedeiro infeco e, por isso, a
sua denominao.
300
Dentre as tcnicas diretas, destaca-se a microscopia eletrnica (ME) que permite a visualizao de partculas vricas diretamente no material clnico ou aps a multiplicao do agente
em cultivo celular. Esse mtodo rpido e permite a identicao de partculas vricas viveis
e tambm inviveis. No entanto, a tcnica exige
equipamento caro e pessoal altamente treinado,
aplicvel somente a alguns vrus e no possui
boa sensibilidade.
O isolamento em cultivo celular (ICC) permanece sendo o mtodo mais utilizado para investigar a presena de vrus em material clnico.
Aps a multiplicao em clulas de cultivo, o vrus pode ser identicado pela produo de efeito
citoptico (ECP) caracterstico ou pela deteco
de antgenos ou cidos nuclicos nas clulas infectadas, ou, ainda, por neutralizao com soro
imune especco. O ICC um dos mtodos mais
sensveis de deteco de vrus, porm a demora
na obteno dos resultados se constitui na sua
principal restrio em relao a outros mtodos.
Uma das vantagens do mtodo a obteno do
vrus vivel, o que permite a sua caracterizao e
estudos posteriores.
A inoculao de ovos embrionados (OE) ou de
animais susceptveis j foi amplamente utilizada
para o diagnstico e deteco de vrus. No entanto, atualmente esse mtodo possui aplicao
restrita a poucos vrus e a algumas situaes especcas. Mtodos que se utilizam da capacidade
hemaglutinante (hemaglutinao) ou hemadsorvente (hemadsoro) de alguns vrus tambm tm
sido utilizados em diagnstico virolgico, porm
so aplicveis somente a um grupo restrito de
agentes.
A deteco de antgenos virais pelo uso de anticorpos especcos um dos mtodos mais utilizados para a deteco e identicao de vrus. A
deteco pode ser realizada em amostras clnicas
(secrees, smen, sangue, urina, fezes etc.), tecidos (obtidos por bipsia ou necropsia) ou em
clulas de cultivo aps a multiplicao do agente.
As tcnicas de imunouorescncia (IFA) e imunoperoxidase (IPX) tm sido amplamente utilizadas
em diagnstico, sobretudo, pela boa sensibilidade, especicidade, rapidez, custo baixo e facilidade de execuo. O desenvolvimento de kits
Captulo 11
Microscopia
eletrnica
Tecidos
Secrees
Excrees
Pesquisa de
antgenos
Isolamento
e identificao
Pesquisa de
cidos nuclicos
Hemaglutinao
301
devem ser interpretados luz dos conhecimentos sobre a biologia e epidemiologia do agente e
da resposta imunolgica do hospedeiro. Detalhes
sobre a interpretao dos resultados de exames
sorolgicos para diferentes vrus sero abordados na seo 4.2.
Os principais mtodos diretos e indiretos de
diagnstico, com o seu princpio, propriedades,
restries e aplicaes esto apresentados nas Tabelas 11.1 e 11.2, respectivamente.
Tabela 11.1. Princpios, propriedades e restries dos principais mtodos diretos de diagnstico virolgico
Mtodo
Princpio
Propriedades
Restries
Aplicaes
Microscopia
eletrnica
Visualizao das
partculas vricas
coradas com metais
pesados em um
microscpio
Equipamento caro;
Exige pessoal
treinado;
Baixa sensibilidade;
Aplicao restrita a
alguns vrus.
Infeces entricas
(rotavrus, coronavrus,
astrovrus);
Infeces cutneas
(poxvrus, herpesvrus).
Isolamento em
cultivo celular
Observao do efeito
citoptico e/ou deteco
de produtos virais aps
a sua multiplicao em
clulas de cultivo.
Sensvel;
O agente fica disponvel
para estudos posteriores;
Implementao e
execuo relativamente
simples.
Hemaglutinao
(HA)
Observao da
capacidade do vrus de
aglutinar eritrcitos.
Rpida;
Boa sensibilidade;
Boa especificidade;
Fcil execuo.
Aplicvel ao um grupo
restrito de vrus;
Hemaglutinao
inespecfica;
Necessidade de
espcies doadoras de
hemcias;
No automatizvel.
Imunofluorescncia (IFA).
Protenas virais so
detectadas por
anticorpos especficos
conjugados com um
marcador fluorescente
(IFA) ou com uma
enzima (IPX).
Rpida (minutos ou
poucas horas);
Simples, baixo custo;
Boa sensibilidade e
especificidade;
Detecta tambm vrus
invivel;
Pode informar sobre
sorotipos;
Disponvel em kits;
Aplicvel a virtualmente
todos os vrus.
Simples e prtica;
Disponvel em kits;
Rpida;
Boa sensibilidade e
especificidade.
No automatizvel;
Especificidade e
sensibilidade podem
deixar a desejar;
Custo alto por amostra.
Especfica;
Sensvel;
Necessita quantidades
mnimas da amostra;
Potencialmente aplicvel
a todos os vrus;
Rpida (PCR);
Automatizvel (PCR).
Custo alto;
Requer equipamento
e pessoal treinado;
Tcnica sofisticada.
Aplicvel a virtualmente
todos os vrus conhecidos;
Pode ser realizada em
qualquer amostra clnica.
Imunoperoxidase
(IPX).
A presena do antgeno
Testes imunoenzimticos/cromatogr que reage com o
anticorpo especfico
ficos
imobilizado ou aps
migrao, revelada
pela mudana de cor.
Deteco de
cidos nuclicos
(PCR,
hibridizao).
302
Captulo 11
Tabela 11.2. Princpios, propriedades e restries dos principais mtodos indiretos de diagnstico virolgico
Mtodo
Princpio
Propriedades
Restries
Aplicaes
Imunodifuso
em gar (IDGA)
Observao de linhas
de precipitao no
gar, produzidas pela
formao de
complexos antgenoanticorpos.
Simples execuo e
implementao;
Custo baixo;
Sensibilidade razovel;
Resultados em 24-72 h.
Reaes inespecficas
freqentes;
Sensibilidade limitada;
Qualidade do antgeno
crtica;
Somente qualitativa (no
permite a quantificao dos
anticorpos).
Soroneutralizao
(SN)
Anticorpos presentes
no soro previnem a
replicao do vrus e a
produo de efeito
citoptico nos cultivos.
Sensvel;
Especfica;
Custo reduzido;
Qualitativa (sim/no) e
quantitativa (ttulo de
anticorpos);
Similar neutralizao in
vivo.
Virtualmente todos os
vrus que replicam em
cultivo celular.
ELISA
Anticorpos presentes no
soro ligam-se aos
antgenos imobilizados
em placas de poliestireno
e so detectados por
anti-anticorpos
conjugados com
enzimas.
Requer equipamento;
Kits comerciais podem
ter custo alto;
No disponvel para
todos os vrus;
Qualidade do antgeno
crtica.
Inibio da
hemaglutinao
(HI).
Anticorpos antivirais
impedem a atividade
hemaglutinante do vrus.
Rpida;
Sensvel;
Especfica;
Custo baixo.
Somente aplicvel a
vrus hemaglutinantes;
Requer animais
doadores de eritrcitos;
Inibidores inespecficos
podem dar falso positivo;
No-automatizvel.
Vrus
hemaglutinantes de
aves e mamferos (ver
tabela captulo 3).
Fixao do
Complemento.
A presena de anticorpos
leva ativao do
complemento e lise de
eritrcitos.
Boa sensibilidade e
especificidade.
Demorada;
Trabalhosa;
No automatizvel;
Requer animais doadores
de eritrcitos.
Anticorpos presentes no
soro se ligam em
antgenos especficos
imobilizados e so
detectados por anticorpos
marcados com FITC.
Rpida;
Boa sensibilidade;
Simples.
Reaes inespecficas;
Exige microscpio de UV;
Pode no detectar nveis
baixos de anticorpos;
No automatizvel.
Imunocromatografia
A presena do anticorpo
que reage com o antgeno
revelada pela mudana
de cor.
Simples e prtica;
Disponvel em kits;
Rpida;
Boa sensibilidade e
especificidade.
No automatizvel;
Especificidade e
sensibilidade podem deixar
a desejar;
Custo individual alto.
303
Figura 11.3. Fotos de microscopia eletrnica de material enviado para diagnstico virolgico. A) Bipsia de pele de
glndula mamria de vacas com mamilite. Partculas tpicas de herpesvrus (setas) (magnificao 60.000x); B) Clulas
de cultivo inoculadas com macerado de crebro de bezerros com doena neurolgica. Partculas vricas envelopadas
tpicas de herpesvrus (42.000x); C) Crostas na juno mucocutnea oral de ovinos com doena vesicular-crostosa.
Partculas tpicas de parapoxvrus (100.000x). D) Fezes de bezerro com diarria. Partcula de 75-80 nm semelhante a
rotavrus (75.000x); E) Fezes de bezerro com diarria. Partcula envelopada com aproximadamente 80 nm, sugestiva de
coronavrus (120.000x). E) Sobrenadante de cultivo inoculado com secrees nasais de bezerros com doena
respiratria. Partcula envelopada semelhante a herpesvrus (260.000x).
304
Captulo 11
305
306
Captulo 11
Tecidos
rgos
Antgenos virais
Secrees
Smen
Efeito citoptico (ECP)
Sangue
3 - 5 dias
Inoculao
Soro
Fezes
Processamento
(ver texto)
Cultivo celular
cidos nuclicos
Figura 11.4. Protocolo para isolamento e identificao de vrus pela inoculao em cultivo celular. As amostras so
inicialmente processadas e inoculadas em clulas susceptveis aos vrus suspeitos. Os cultivos so monitorados por
alguns dias para o aparecimento de efeito citoptico (ECP). Ao final da terceira passagem do material ou quando
aparecer ECP os cultivos so submetidos identificao do agente por tcnicas de deteco de antgeno ou de cidos
nuclicos. A presena de vrus no-citopticos deve ser monitorada por IFA ou IPX. Deve-se proceder trs passagens
do material antes de consider-lo negativo para vrus.
307
de galinha. Na Tabela 3.2 (Captulo 3), esto listados os vrus que replicam em ovos embrionados,
as vias de inoculao e as alteraes produzidas
nos embries.
Inoculao
intracerebral
Camundongos
lactentes
Resultado
Doena neurolgica
Morte
Sem manifestaes
Figura 11.5. Protocolo para o diagnstico de raiva animal. Impresses do crebro do animal suspeito so submetidas
imunofluorescncia direta (IFD) para a deteco de antgenos virais. Em caso positivo, o diagnstico comunicado
imediatamente. Aps, uma suspenso do crebro macerado inoculada pela via intracerebral em camundogos
lactentes, que so observados por at 30 dias. Em casos positivos, os animais apresentam sinais neurolgicos severos e
morrem geralmente entre os dias 8 e 20. A ausncia de manifestaes clnicas e morte ao final do perodo indicam que
o material negativo para vrus. A prova biolgica deve ser realizada nas amostras que foram positivas na IFD e,
principalmente, nas amostras que foram negativas.
308
suna africana (ASFV). Esse mtodo j foi utilizado para a deteco de vrios vrus, incluindo o
BTV, vrus da estomatite vesicular (VSV), poxvrus ovino, entre outros. No entanto, este sistema
tem sido gradualmente substitudo por mtodos
que no utilizam animais e que produzem resultados equivalentes ou superiores.
Captulo 11
+
Amostra
suspeita
Eritrcitos
Incubao
1 hora
Amostra
positiva
Amostra
negativa
309
310
Captulo 11
Material
Secrees
Sangue
Excrees
Fluidos
ELISA
Imunoblot
Cromatografia
Clulas
IFA
IPX
Imunoblot
Tecidos
rgos
Fresco
Congelado
Parafinizado
IFA
IPX
- IFA
- IPX
IFA
IPX
Imunoblot
Cromatografia
311
312
ma viral em cultivos celulares previamente inoculados com o material suspeito. Essas tcnicas
possuem especial utilidade para detectar quantidades muito pequenas do material gentico; para
vrus que no multiplicam com ecincia em
cultivo celular e tambm para detectar o agente
j inativado em amostras inadequadamente conservadas. Tambm possuem aplicao especial
para a deteco de infeces latentes, nas quais
o genoma do vrus permanece inativo nas clulas
do hospedeiro.
A seguir ser dado enfoque para a utilizao
das tcnicas de deteco de cidos nuclicos com
ns diagnsticos.
Captulo 11
tanto os vrus RNA como os vrus DNA necessitam da produo de RNAs durante a sua replicao. O dot/slot blot so verses simplicadas
dessas tcnicas, nas quais o cido nuclico detectado diretamente na membrana, sem a separao prvia por eletroforese.
313
314
Captulo 11
315
Soro
Plasma
Secrees
Pesquisa de
anticorpos
Imunodifuso
ELISA
Soroneutralizao
Inibio da hemaglutinao
Fixao do complemento
Imunoblots
Imunocromatografia
Aglutinao em ltex
Imunofluorescncia
Radioimunoensaio
316
Captulo 11
4.2.2 Soro-neutralizao
O teste de soro-neutralizao (SN) utilizado para se detectar anticorpos que possuem capacidade de neutralizar a infectividade do vrus.
O teste geralmente utilizado com soro sangneo, mas pode ocasionalmente utilizar outros
uidos corporais que possuam anticorpos. Nesse
teste, examina-se o soro suspeito frente a um vrus-padro previamente conhecido e quanticado. O teste realizado em microplacas de 96 cavidades, nas quais se incubam diluies crescentes
do soro-teste com uma quantidade constante do
vrus (geralmente 100-200 DICC50 por cavidade)
por um determinado tempo. Aps esse perodo,
durante o qual os anticorpos presentes no soro se
ligam e neutralizam o vrus, so adicionadas as
clulas de cultivo. As placas, contendo a mistura
soro-vrus-clulas, so incubadas a 37C em atmosfera com 5% de C02 por 48 a 96 h. A presena
de anticorpos neutralizantes na diluio testada
previne a produo de ECP pelo vrus nos cultivos (Figura 11.10). O aparecimento de ECP indica
a ausncia de anticorpos neutralizantes sucientes para neutralizar o vrus, na respectiva diluio. Os cultivos podem ser corados com cristal
violeta para facilitar a leitura dos resultados. Os
Soro-teste
Antgeno-padro
Reao antgeno-anticorpo
Figura 11.9. Tcnica de imunodifuso em gel de gar (IDGA). O antgeno padro depositado no orifcio central e as
amostras-teste so colocadas nos orifcios perifricos da roseta perfurada na camada de gar. Durante as 48-72 h de
incubao, antgeno e anticorpos se difundem radialmente a partir dos respectivos orifcios. O encontro entre
antgenos e anticorpos resulta em precipitao e formao de uma linha opaca no local. A formao desta linha indica
que a amostra positiva para anticorpos contra o antgeno especfico.
317
+
Vrus-padro
Soro-teste
Incubao
(2 - 24 h)
Inoculao
em cultivo
2-4 dias
ECP +
Soro negativo
318
Captulo 11
de prevenir a hemaglutinao denominada ttulo inibidor da HA. A tcnica de HI est representada esquematicamente na Figura 11.11.
+
Soro-teste
Vrus-padro
hemaglutinante
Incubao
1 hora
Adio de
eritrcitos
Incubao
1 hora
Amostra
negativa
Amostra
positiva
4.2.4 ELISA
Os testes do tipo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) so realizados em microplacas de
poliestireno de 96 cavidades e utilizam anticorpos marcados com enzimas (peroxidase ou fosfatase alcalina). Embora tenham sido originalmente planejados para a deteco de antgenos (pela
ligao especca de anticorpos marcados), a sua
maior utilizao atual tem sido para a deteco
de anticorpos. Desde a sua descrio inicial, em
1971, essa tcnica tem tido uma aplicao notvel nas diversas reas da pesquisa e diagnstico
em Biologia. A sua adaptao para uso como teste sorolgico literalmente revolucionou o campo
do diagnstico e controle de infeces humanas e
animais. A tcnica possui muitas variaes, cujas
aplicaes so indicadas para casos especcos.
Como tcnica sorolgica, tem sido utilizada para
a deteco de anticorpos contra praticamente
todos os vrus de interesse veterinrio, por isso
a sua enumerao se faz desnecessria. No entanto, a sua aplicabilidade e utilidade no so
as mesmas para todos os vrus, principalmente
por questes relacionadas pureza do antgeno e
ocorrncia de reaes inespeccas, entre outras.
Pode ser utilizada individualmente ou em rebanhos, constituindo-se em uma tcnica de grande
aplicao em estudos epidemiolgicos e programas de combate a viroses em grandes populaes. Tambm tem sido usada para a deteco
de anticorpos no leite, como forma de identicar
rebanhos positivos para determinados vrus. As
principais vantagens da tcnica incluem a especicidade, sensibilidade, rapidez (resultados em
2-3 horas), custo relativamente baixo, praticidade
e capacidade de automao (em uma placa podem ser testadas 96 amostras). Geralmente produz resultados qualitativos (positivo/negativo),
mas pode ser adaptada para uma avaliao semiquantitativa dos anticorpos. A tcnica pode ser
adaptada tambm para a deteco de isotipos especcos de imunoglobulinas (IgG, M, E), sendo
particularmente til no diagnstico de algumas
infeces vricas agudas (p. ex: dengue, hantavirose, infeco pelo vrus Junin, WNV, encefalites
eqinas), nos quais os nveis de IgM esto au-
319
mentados na fase aguda. Possui aplicao especial quando utilizada em conjunto com vacinas
com marcadores antignicos, em programas de
controle de doenas de importncia sanitria estratgica como a doena de Aujesky. Nesse caso,
o vrus vacinal contm deleo em um dos genes
que codica as glicoprotenas do envelope. Animais vacinados com essa vacina podem ser diferenciados dos animais infectados pelo vrus de
campo pelo uso de um teste ELISA que detecta
anticorpos contra a protena deletada. Esse sistema tem sido utilizado nos programas de controle
e erradicao da doena de Aujeszky na Europa,
Estados Unidos e Japo. Tambm tem sido utilizado na erradicao dessa doena de granjas de
sunos no estado de Santa Catarina.
As maiores restries ao uso tecnologia de
ELISA para o diagnstico se referem necessidade dos aparelhos para a lavagem das placas
e para a leitura da reao (espectofotmetro).
Para laboratrios com grande rotina diagnstica,
no entanto, esses custos se diluem pelo teste de
grande nmero de amostras. Uma ilustrao esquemtica da tcnica de ELISA est apresentada
na Figura 11.12.
4.2.5 Imunofluorescncia/
imunoperoxidase
Antgeno
viral
Incubao
soro-tes te
-
Lavagem
Anticorpos no
soro-teste
Anticorpo
antiespcie
Lavagem
Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Mudana
de cor
Positivo
Negativo
320
Captulo 11
4.2.6 Imunoblots
321
Sinais clnicos
Resposta
imunolgica
Vrus
10
12
14
16
18
Isolamento viral
Antgenos
cidos nuclicos
Sorologia
Sorologia pareada
322
Captulo 11
323
Recebimento da
amostra e histrico
Registro
Formulao da hiptese
etiolgica
5.4 Histrico
Todo o material para exame deve ser acompanhado por um histrico detalhado, no qual
devem constar informaes referentes amostra,
que podem ser necessrias para a elaborao do
diagnstico. Laboratrios de diagnstico geralmente possuem formulrios prprios que especicam as informaes requeridas em cada caso.
O histrico deve ser anexado na parte exterior
do recipiente, para evitar o seu umedecimento e
inutilizao. Se includo no interior do recipiente,
deve ser acondicionado em sacos plsticos prova dgua.
Encaminhamento
Virologia
Patologia
toxicologia
Bacteriologia
micologia
Realizao da tcnica
Leitura do teste
Interpretao do resultado
Envio do resultado
Amostras de soro geralmente so acompanhadas de uma requisio especca (p. ex.: sorologia para BLV). Nesses casos, o encaminhamento simples. Algumas vezes, as amostras
so acompanhadas de um histrico clnico, sem
a indicao do exame requerido. Nesses casos, o
tcnico deve denir, com base no histrico, qual
o agente suspeito e encaminhar a amostra para o
respectivo exame. Pode-se tambm contatar o veterinrio que submeteu a amostra para inquiri-lo
sobre a natureza do exame solicitado. Em labora-
324
Captulo 11
325
sangue integral deve ser centrifugado baixa rotao, e a capa ogstica deve ser cuidadosamente removida, ressuspendida em meio de cultivo e
inoculada nos cultivos. O smen deve ser diludo
em soro fetal bovino (1:5 ou 1:10) para reduzir a
toxicidade. Materiais destinados a outros mtodos de diagnstico so submetidos a um processamento apropriado a cada tipo de exame.
326
6 Bibliografia consultada
BAKER,
J.C.
Bovine
respiratory
syncytial
virus:
immunopathogenesis, clinical signs, diagnosis and prevention.
Infectious Diseases and Food Animal Practice, v.8, p.62-68,
1993.
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Wiley-Liss, 1987. 397p.
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diarrhea virus in formalin-xed, parafn-embedded tissues.
Veterinary Pathology, v.29, p.27-32, 1992.
Captulo 11
VACINAS VRICAS
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz
12
1 Introduo
329
2 Formas de imunizao
329
329
331
3 Objetivos da vacinao
331
4 Tipos de vacinas
332
333
334
334
334
339
342
342
343
344
345
346
347
5 Adjuvantes
347
6 Controle de qualidade
350
350
8 Falhas vacinais
352
353
10 Drogas antivirais
354
356
12 Bibliografia consultada
358
1 Introduo
No sculo 18, a varola afetava e matava milhes de pessoas em todo o mundo. Naquela poca, a prtica utilizada para evitar a doena era a
exposio das pessoas a uma pequena quantidade
de material obtido de leses cutneas de varola.
Isto tinha como objetivo provocar uma infeco
controlada, que seria seguida de resposta imunolgica e proteo frente a uma nova exposio ao
agente. A prtica, conhecida como variolao, era
originria da China e, embora bastante difundida
nas reas endmicas, no era considerada segura,
j que uma signicativa parcela dos indivduos
que eram submetidos ao procedimento desenvolvia a doena aps a exposio.
Em seus estudos sobre a varola humana,
o mdico Edward Jenner observou que os ordenhadores de vacas afetadas pela varola bovina
no desenvolviam a forma humana da enfermidade, o que sugeria algum tipo de proteo
cruzada. Em 1796, para comprovar a sua teoria,
Jenner coletou material de leses de varola do
bere de uma vaca e o administrou a um menino
de oito anos de idade. Alguns meses mais tarde,
ele exps esta criana ao vrus da varola humana
(smallpox) que, conrmando suas suspeitas, no
produziu a doena. Jenner demonstrou, com esta
prtica, que a exposio prvia ao vrus da varola bovina, um patgeno de baixa virulncia,
conferia proteo frente ao desao com o vrus
da varola, antigenicamente relacionado ao vrus
bovino, porm mais virulento. Posteriormente,
na dcada de 1870, Louis Pasteur utilizou o termo vacina (do Latim, vaccinia; termo derivado de
vaca) como forma de homenagem a Jenner, para
designar a prtica da administrao de patgenos a indivduos sadios com o objetivo de induzir resposta imunolgica, numa poca em que as
bases tericas da imunizao ainda eram pouco
conhecidas.
As vacinas consistem em microorganismos
ou fraes destes que, quando administradas a
um indivduo, induzem uma resposta imunolgica capaz de proteger frente ao contato posterior
com o agente original. A resposta imunolgica
que induzida resulta do desenvolvimento de
clulas efetoras e de clulas de memria. A va-
2 Formas de imunizao
O termo imunizao se refere induo de
imunidade frente a um determinado agente ou
antgeno. De acordo com a participao do sistema imunolgico na produo dessa imunidade,
dois tipos principais de imunizao podem ser
reconhecidos: imunizao passiva ou ativa. A
imunizao passiva pode ser natural (pela placenta, colostro ou gema) ou articial (administrao de soro hiperimune). A imunizao ativa
ocorre pela exposio do animal ao agente infeccioso (infeco) ou por vacinao.
330
Nvel de anticorpos
Captulo 12
Imunidade passiva
Imunidade ativa
Semanas (meses)
331
Vacinas vricas
3 Objetivos da vacinao
A imunidade ativa pode resultar tanto da exposio ao patgeno por infeco natural quanto
da administrao do antgeno em vacinas especcas. Como resultado, o sistema imunolgico do
hospedeiro estimulado pelo antgeno ao qual
foi exposto. A magnitude e durao da resposta imunolgica dependem de fatores do hospedeiro, como a presena de anticorpos adquiridos
passivamente, idade e imunocompetncia do
hospedeiro; e de vrios fatores da vacina. Como
regra, considera-se que a resposta imunolgica
mais efetiva e duradoura aquela induzida pela
infeco natural. Portanto, quanto mais as vacinas mimetizarem a infeco natural, melhor ser
a resposta imunolgica. Por isso, acredita-se que
as vacinas com vrus replicativos (ou vivos) sejam as mais efetivas, pois so as que mais se assemelham infeco natural.
Alm da vacinao clssica, outras formas
de imunizao ativa tm sido ocasionalmente utilizadas em alguns sistemas. Por exemplo, leitoas
susceptveis ao parvovrus suno (PPV) podem
ser expostas a fezes ou a ambientes contaminados com o vrus, de modo a adquirirem a infeco (que benigna nesses animais) e se tornarem
imunes. Posteriormente, se forem expostas ao
agente durante a gestao, estaro imunizadas e
os seus fetos estaro protegidos contra a infeco.
Da mesma forma, alguns pecuaristas mantm o
hbito de expor os cordeiros s crostas de ectima
332
A induo de resposta imunolgica mediada por linfcitos T (imunidade celular), que pode
ser obtida de acordo com o tipo de vacina utilizada, uma das mais efetivas defesas do organismo
contra os vrus. Igualmente importante a capacidade de estimular a produo de anticorpos
neutralizantes, capazes de neutralizar os vrions
circulantes e, dessa forma, evitar a infeco de
novas clulas.
De modo ideal, espera-se que uma vacina
seja capaz de conferir proteo prolongada do indivduo frente a uma nova exposio ao agente,
caracterizando a imunidade de longa durao.
Espera-se, portanto, a estimulao de memria
imunolgica, que ir permitir uma resposta imunolgica mais intensa frente a uma nova exposio ao vrus. Vacinas contra vrus de animais
devem apresentar caractersticas especcas, tais
como: facilidade de administrao, custo de aquisio acessvel, estabilidade do produto durante
o armazenamento e, aps a inoculao no organismo, adequao para programas de vacinao
em massa e capacidade de estimular imunidade
forte e duradoura. Devem ainda causar o menor
nmero possvel de efeitos colaterais, e no afetar
o desempenho produtivo dos animais.
Em termos prticos, os objetivos da vacinao incluem: a) prevenir a infeco (imunidade
esterilizante), o que virtualmente impossvel
com as vacinas atuais. Mesmo em animais adequadamente vacinados, a exposio subseqente seguida de replicao inicial do agente; b)
prevenir a doena clnica e suas conseqncias
(esse objetivo pode ser alcanado por vrias vacinas animais); c) atenuar a doena clnica e suas
conseqncias (para algumas viroses, as vacinas
somente conseguem atenuar ou reduzir a intensidade e severidade dos sinais, reduzindo as conseqncias da doena); d) proteger o feto. Para
vrias viroses (diarria viral bovina e parvovirose suna, por exemplo), as maiores conseqncias
da infeco resultam das perdas fetais. Nesses
casos, a vacinao objetiva imunizar as mes
para que a sua resposta imunolgica proteja e
impea a infeco fetal; e) proteger os neonatos.
Para viroses que afetam os animais nas primeiras semanas de vida (rotavirose, coronavirose),
a imunizao das fmeas visa conferir proteo
Captulo 12
4 Tipos de vacinas
Diferentes tipos de vacina contra vrus esto
licenciados para uso veterinrio, sendo a maioria composta por vrus inativados ou por vrus
vivos atenuados. A utilizao de novas tecnologias, principalmente envolvendo a manipulao
gentica (tecnologia de DNA recombinante), tem
originado inmeros estudos e expectativas no
surgimento de novas opes de vacinas. Algumas vacinas recombinantes j esto no mercado,
enquanto vrias outras esto em fase de desenvolvimento ou de testes. Para algumas dessas
vacinas, no entanto, muitos estudos ainda so necessrios para a comprovao de sua segurana e
eccia; motivo pelo qual ainda possuem pouca
participao no mercado veterinrio. Por outro
lado, algumas vacinas produzidas por mtodos
clssicos, h dcadas, ainda conservam o seu espao devido sua eccia e segurana. Vacinas
autgenas de uso individual, produzidas com
material coletado do animal a ser vacinado, so
ainda uma das melhores formas de controle da
papilomatose bovina e canina, demonstrando
maior ecincia se comparadas com outros tipos
de vacinas. Os diferentes tipos de vacinas contra
vrus, j licenciadas ou ainda em fase de desenvolvimento, esto apresentados na Tabela 12.1.
333
Vacinas vricas
Tipo
Caractersticas/propriedades
Gnero
Vrus patognicos
Vrus heterlogos
Vrus naturalmente atenuados;
1. Replicativas
(vrus vivo)
Vetores virais
Vrus inativado
2. No-replicativas
(sem vrus vivo)
Subunidades de vrus;
Produtos de vrus
Protenas recombinantes;
Peptdeos sintticos.
3. DNA/RNA
Vacinas replicativas
(vrus vivo)
Vrus
patognico
Vetores
vacinais
Vrus
heterlogo
Vrus
atenuado
Naturalmente
atenuado
Passagens
em cultivo
celular
Atenuao por
mtodos clssicos
Passagens Passagens
em ovos
em animais
embrionados
Vetores
virais
Atenuao por
manipulao gentica
Deleo
de genes
Vacinas
diferenciais
Vetores
bacterianos
Vrus temperaturasensvel
334
Captulo 12
335
Vacinas vricas
capaz de estimular resposta imunolgica sem resultar no desenvolvimento de sinais clnicos importantes. O tipo de imunidade obtido aquele
considerado ideal para uma vacina, havendo estimulao dos mecanismos da resposta imunolgica inata e adaptativa. Nesta ltima, so geradas
respostas celular (linfcitos Th e Tc) e humoral
(linfcitos B, anticorpos), alm de imunidade
de mucosas, o que conveniente no caso de se
buscar proteo contra uma infeco natural que
ocorra em superfcies mucosas.
Esse tipo de vacina, entretanto, no considerado totalmente seguro para todos os vrus, em
razo da possibilidade, embora rara, de reverso
virulncia da cepa viral original. Por esse motivo, a sua administrao no recomendada para
indivduos imunodeprimidos, nos quais pode
causar a doena. Cabe ressaltar que as mutaes
que so induzidas nos processos de atenuao viral so produzidas ao acaso e, na maioria das vezes, so desconhecidas. Isso signica que difcil
prever as circunstncias nas quais poderia ocorrer a reverso virulncia. Por exemplo, algumas
cepas atenuadas de vrus da laringotraquete infecciosa das galinhas (ILTV) so capazes de reverter-se forma virulenta aps algumas passagens
em aves no vacinadas. Dessa forma, a utilizao
dessa vacina reservada somente para as regies
onde o vrus endmico ou em surtos da doena.
Vacinas atenuadas contra o herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1) e vrus da diarria viral bovina
(BVDV) retm a sua capacidade de infectar o feto
e causar perdas reprodutivas, por isso no devem
ser administradas a fmeas prenhes.
Os vrus atenuados utilizados em vacinas
podem ser pouco patognicos naturalmente ou
podem ser atenuados por mtodos articiais. A
maioria das vacinas atenuadas disponveis atualmente foi obtida pela atenuao proposital do
agente, por diferentes mtodos.
Marek, para proteger os pintos contra o sorotipo 1 oncognico. O sorotipo 2 pode ser isolado
de galinhas, e o tipo 3 pode ser isolado de perus, sendo ambos apatognicos, mas capazes de
proteger as galinhas contra os tumores induzidos
pelo vrus patognico. Provavelmente a grande
maioria dos vrus animais apresente alguma cepa
pouco virulenta circulando na populao ou naturalmente atenuada e que poderia ser utilizada
como vacina. No entanto, o procedimento mais
utilizado para a produo de vacinas atenuadas
a induo de atenuao de cepas originalmente
patognicas.
336
Captulo 12
minado nmero de passagens, pode ser conrmada por ensaios laboratoriais e pela inoculao
do vrus na espcie de interesse. Essa uma etapa
indispensvel para a certicao da vacina como
atenuada e estvel.
337
Vacinas vricas
A atenuao que pode ser obtida nos herpesvrus um bom exemplo da produo de vacinas
atenuadas por deleo. Esses vrus possuem um
gene que codica a enzima timidina quinase (TK),
associada com a capacidade do vrus de replicar
em neurnios e ser neurovirulento. J os genes
que codicam as glicoprotenas do envelope gE,
gI e gC no so essenciais viabilidade e replicao viral. A eliminao do gene da TK produz
um vrus mutante atenuado, com capacidade reduzida ou nula de produzir infeces neurolgicas. A deleo simultnea de outro gene resulta
em um vrus vacinal ainda mais atenuado e mais
seguro e, ao mesmo tempo, capaz de estimular a
resposta imunolgica do hospedeiro. No Brasil,
uma vacina atenuada obtida por deleo de genes
(gE negativa) est licenciada para uso contra a
doena de Aujeszky dos sunos. Outras vacinas
desse tipo encontram-se em desenvolvimento
para o BoHV-1 e BoHV-5. Vacinas contra alguns
poxvrus animais tambm foram obtidas pela deleo do gene da TK, enzima que tambm est
envolvida na capacidade de replicao e virulncia desses vrus.
338
indica que os animais foram infectados com o vrus de campo. Animais somente vacinados no
reagem positivamente no teste.
As vacinas diferenciais so comercializadas
acompanhadas do teste diagnstico especco,
que permite diferenciar a resposta vacinal da
resposta induzida pelo vrus de campo. Esta estratgia possibilita a implantao de programas
Captulo 12
339
Vacinas vricas
340
Captulo 12
vrus recombinante , ento, utilizado para imunizar ces. O resultado a induo de resposta
imunolgica contra os antgenos do poxvrus irrelevante neste caso, pois este no um vrus de
ces mas principalmente contra as protenas H
e F, conferindo proteo aos ces contra o CDV
(Figura 12.4). O poxvrus do canrio tambm serve de vetor para vacinas contra o vrus do Nilo
Ocidental (WNV) para uso em eqinos.
A raiva em carnvoros silvestres da Blgica e
Frana tem sido controlada com o emprego de um
vetor poxvrus (vaccinia) expressando a glicoprotena G do RabV. Esta vacina de administrao
Poxvrus do canrio
Sntese
de cDNA
Genes da
protenas
HeF
cDNA
Y Y
Y
Multiplicao
Y
Y Y
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
Imunizao
Figura 12.4. Princpio das vacinas replicativas baseadas em vetores virais. Os genes de protenas estruturais
imunognicas do vrus de interesse so sintetizados como cDNA e inseridos no genoma de um vrus vetor,
geralmente de outra espcie animal. Este vrus vetor amplificado em cultivo celular at atingir altos ttulos e, ento,
utilizado para imunizar os animais da espcie de interesse. Os animais imunizados desenvolvem resposta
imunolgica contra as protenas do vrus vetor e contra a protena heterloga, conferindo proteo contra o vrus de
interesse. O exemplo se refere vacina contra a cinomose, em que as glicoprotenas H e F do CDV foram inseridas no
genoma do poxvrus do canrio, que , ento, utilizado para imunizar ces.
Vacinas vricas
341
342
Captulo 12
Vacinas no-replicativas
(sem vrus vivo)
Vacinas
inativadas
Vacinas de
subunidades
Protenas
recombinantes
Vacinas de
peptdeos
sintticos
Vacinas de
DNA e RNA
343
Vacinas vricas
344
Captulo 12
Vrus de interesse
NA
HA
Purificao
das protenas
HA
NA
Administrao
ao hospedeiro
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
|
A base dessas vacinas semelhante s anteriores, com a diferena que a protena viral de
interesse no extrada dos vrions, e sim produzida em organismos recombinantes. O gene
de interesse removido do vrus e inserido no
genoma de bactrias ou leveduras, que passam a
produzir a protena em grande quantidade, possibilitando a sua puricao e administrao na
forma de vacina (Figura 12.7). Este sistema, alm
de produzir uma maior quantidade da protena
imunoprotetora, tambm seguro e de baixo custo. A vacina atual contra a HBV, licenciada e disponvel para a imunizao humana, foi produzida a partir da clonagem de genes que codicam
o antgeno de superfcie do HBV (HBsAg) em
levedura. Os antgenos produzidos pelas leveduras recombinantes so subseqentemente puricados e utilizados como vacina. A administrao
dessa protena ao hospedeiro estimula o desenvolvimento de resposta imunolgica especca
contra o vrus.
Utilizando o sistema de bactrias ou leveduras, genes que codicam capsdeos virais tambm
podem ser clonados em plasmdeos e produzidos em grande escala. As protenas produzidas
se organizam em uma estrutura semelhante ao
vrus original, porm vazio (virus-like particles), e
podem ser utilizadas como vacina. Como essas
partculas virais no possuem cidos nuclicos
e capacidade de replicao, so desprovidas de
infectividade e totalmente seguras. Embora essas
partculas j tenham sido produzidas experimentalmente para vrias espcies de rotavrus, calicivrus, picornavrus e orbivrus, ainda no esto
licenciadas no mercado veterinrio. Alternativamente, vrus de plantas, como o vrus do mosaicotabaco, podem servir como vetores de antgenos
vacinais, que so administrados a plantas transgnicas que produzem o antgeno. Vacinas que
utilizam esta estratgia de plantas transgnicas j
foram desenvolvidas contendo genes do FMDV
e do BoHV-1. Recentemente, foi produzida e est
disponvel no comrcio uma vacina recombinan-
345
Vacinas vricas
Vrus de interesse
gp70
Clonagem do
gene da gp70
em bactria ou
levedura
Multiplicao
em grande
escala
Purificao
da protena
gp70
Administrao
ao hospedeiro
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
|
346
Captulo 12
no organismo hospedeiro, o DNA transportado at o ncleo das clulas locais, onde o gene
ser transcrito, a protena produzida e, posteriormente, apresentada ao sistema imunolgico. O
resultado a estimulao de resposta imunolgica humoral e celular contra esta protena e, como
conseqncia, contra o vrus que a possui em sua
estrutura.
As vias de administrao mais utilizadas
para as vacinas de DNA so a intramuscular e
a intradrmica, atravs das quais os plasmdeos
podem ser injetados associados a lipdeos catinicos ou atravs da metodologia de balstica
(gene-gun).
Nos experimentos realizados at o presente,
os nveis de anticorpos detectados aps a vacinao ainda so baixos. De fato, para induzir uma
resposta imunolgica satisfatria, necessria a
inoculao de uma grande quantidade de DNA.
Por isso, a administrao das vacinas atravs de
gene-gun tem se mostrado mais eciente frente s
demais vias, j que possibilita administrar grandes quantidades de DNA, capazes de gerar resposta imune de maior magnitude. Porm, as diculdades prticas da adoo desse mtodo para
aplicao da vacina tornam remota a sua adoo
na rea veterinria.
Embora o mecanismo de ao das vacinas de
DNA seja aparentemente simples, pouco ainda
conhecido sobre a maneira exata pela qual desencadeiam a resposta imunolgica. Sabe-se que
a produo dos antgenos imunognicos ocorre
intracelularmente no organismo hospedeiro, portanto, no existem os riscos observados nas vacinas vivas, tais como infeco, produo de latncia e desenvolvimento de imunidade contra o
vetor vacinal. Os peptdeos resultantes so reconhecidos como no-prprios, sendo, ento, processados por clulas apresentadoras de antgenos
e expostos s clulas do sistema imune, via MHC
classe I e II, resultando na induo de resposta de
linfcitos Tc e Th, respectivamente. A resposta de
linfcitos Tc uma das principais vantagens das
vacinas de DNA em relao aos outros tipos de
vacinas no-replicativas, que somente estimulam
linfcitos Th. Diversos estudos indicam que a resposta humoral e celular resultante bastante satisfatria e, experimentalmente, no foram detec-
347
Vacinas vricas
5 Adjuvantes
Os adjuvantes so substncias que tm a funo de potencializar a resposta imunolgica induzida por vacinas no-replicativas, constitudas
por vrus inativados, subunidades ou protenas
recombinantes. As protenas na forma solvel e
os antgenos puricados e de baixo peso molecular que compem essas vacinas podem ser pouco imunognicos, mas apresentam um aumento
acentuado na sua imunogenicidade quando so
combinadas com adjuvantes. Por isso, com exceo das vacinas atenuadas (compostas de vrus
vivo) e das vacinas de DNA e RNA, as outras for-
348
Captulo 12
Tabela 12.2. Propriedades e restries das vacinas vricas replicativas (vivas) e no-replicativas (no-vivas)
Replicativas
N-replicativas
Sim
No
Longa
Curta
No
Sim
Pequena
Grande
Uma (geralmente)
Vrias
Via de administrao
Injetvel ou oral
Injetvel
Estabilidade trmica
Lbil
Estvel
Raro
No
No recomendado
Sim
Caracterstica
Imunidade mediada por linfcitos TcD8+
Durao da imunidade
Necessidade de adjuvante
Quantidade de antgeno por dose
Nmero de doses
Tabela 12.3. Principais adjuvantes utilizados em vacinas de uso veterinrio e seu mecanismo de ao
Tipo de adjuvante
Forma de ao
Exemplos
Sais inorgnicos
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno.
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno,
estimulao de macrfagos
Adjuvante completo de
Freund.
Estimulao de macrfagos
e induo da liberao de
citocinas.
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno.
Liberao do antgeno
encapsulado no citosol,
estimulando linfcitos T
citotxicos.
Lipossomos, virossomos,
ISCOMs.
Estmulo de clulas T
citotxicas ou de clulas
dendrticas.
Interleucinas 1, 2 e 12;
Interferon alfa e gama.
Componentes de
bactrias
Partculas lipdicas
Citocinas
349
Vacinas vricas
LPS,
adjuvante
de Freund
Sais de
alumnio
Lipossomos,
polmeros de
manose
Persistncia
do antgeno
Macrfago,
clula dendrtica
Sntese de
citocinas
Processamento
e apresentao
de antgeno
Estimulao de linfcitos
Th, Tc e B
Potencializao
da imunidade
Somente compostos contendo alumnio, hidrxido de alumnio ou fosfato de alumnio esto atualmente aprovados para uso humano. J
na rea veterinria, as substncias mais utilizadas como adjuvantes so o leo mineral e os sais
minerais baseados em alumnio, embora outros
compostos estejam sendo testados experimentalmente. A principal diculdade em identicar
350
novos adjuvantes que, embora muitos resultados experimentais em animais demonstrem boa
capacidade imunoestimuladora, esses compostos
freqentemente so txicos para os animais.
6 Controle de qualidade
Durante o processo de desenvolvimento e
produo, as vacinas devem ser submetidas a
testes para assegurar a sua inocuidade e capacidade imunognica. Dentre os testes realizados
incluem-se os de esterilidade (para assegurar
a ausncia de contaminao bacteriana ou fngica), inocuidade (para certicar que no causa
efeitos indesejveis), estabilidade (para vericar
a estabilidade gentica e fenotpica dos vrus atenuados; ou para atestar a estabilidade do antgeno, no caso de vacinas inativadas) e potncia
(capacidade imunognica).
Dentre esses testes, os de potncia assumem
uma importncia especial, pois avaliam a capacidade da vacina de induzir uma resposta imunolgica adequada. Em geral, esses testes so
realizados na espcie animal para qual a vacina
destinada. No entanto, animais de laboratrio
(cobaias, coelhos) podem tambm ser utilizados,
desde que se avalie previamente a resposta imunolgica dessas espcies e se compare esta com
a resposta do hospedeiro natural. A capacidade
imunognica de uma vacina pode ser avaliada
pela deteco e quanticao dos anticorpos produzidos em resposta imunizao ou por testes
de desao.
A quanticao da resposta sorolgica induzida o mtodo mais utilizado para se avaliar
o potencial imunognico de antgenos vacinais.
Para isso, um grupo de animais vacinado e anticorpos especcos contra o vrus so pesquisados
por tcnicas sorolgicas como soroneutralizao
(SN) ou ELISA, a diferentes intervalos aps a vacinao. Alm da quanticao da resposta sorolgica a curto prazo (30, 60 dias), pode-se acompanhar os animais por um perodo mais longo, a
m de monitorar-se a durao da resposta induzida. A maior restrio desse mtodo refere-se ao
fato de que quantica apenas a resposta humoral.
Portanto, mais apropriado para a avaliao de
vacinas no-replicativas, que induzem resposta
predominantemente humoral. Para alguns vrus,
Captulo 12
7 Conservao e administrao de
vacinas
As vacinas podem ser administradas por
diferentes vias, que so denidas pelas caractersticas do antgeno ou do vrus vacinal, do tipo
Vacinas vricas
351
352
Captulo 12
8 Falhas vacinais
As vacinas vricas so utilizadas para conferir proteo contra exposies posteriores ao
agente, impedindo que as infeces resultem em
doena clnica. Se a resposta imunolgica decorrente da vacinao for de amplitude e magnitude adequadas, dever minimizar a replicao e a
disseminao do vrus no organismo e prevenir
a ocorrncia de manifestaes clnicas. No entanto, algumas vezes, no se obtm o efeito protetor
esperado, por razes diversas. Em geral, as falhas vacinais podem ser atribudas a problemas
intrnsecos da vacina, de sua conservao ou administrao, ou tambm a falhas do animal em
responder vacinao (Figura 12.9).
Vrias famlias de vrus, principalmente as
de genoma RNA, possuem sorotipos ou variantes antignicos que possuem distribuio variada
na populao. Dessa forma, pode ser importante tipicar a cepa de campo de algumas espcies
de vrus antes de se recomendar a vacina mais
apropriada para uma determinada regio. Um
exemplo disto tem sido o IBV, contra o qual esto disponveis vrias cepas vacinais diferentes.
Os isolados tm sido caracterizados por SN ou
PCR, seguido de seqenciamento ou clivagem
do genoma com enzimas de restrio. O resultado da caracterizao comparado com a das cepas vacinais e pode-se optar pela cepa que mais
se assemelhe ao vrus de campo. Outro exemplo
tem sido a vacina autgena utilizada para o controle do PCV, j que isolados de outras regies
ou empresas produtoras conferem uma proteo
Falhas vacinais
Falhas
da vacina
cepa incorreta;
pouco antgeno;
antgeno no-protetor;
pouco adjuvante/
adjuvante incorreto.
Falhas na conservao/
administrao
conservao inadequada;
administrao inadequada;
animal com imunidade passiva;
animal j infectado.
Falhas
do animal
imunidade passiva;
animal j infectado;
animal imunodeprimido;
animal doente;
variao individual.
353
Vacinas vricas
lote. Para espcies criadas em grandes concentraes, como na avicultura industrial, a viabilidade
de vacinas orais compostas de vrus sensveis ao
cloro pode ser comprometida com a excessiva
clorao da gua, que utilizada como veculo
vacinal. Finalmente, deve ser considerada a interferncia de desinfetantes empregados excessivamente para a antissepsia que precede a administrao parenteral de vacinas vivas.
Cabe ressaltar que a ocorrncia de doena
branda em animais vacinados no signica necessariamente uma falha vacinal. As vacinas so
produzidas para proteger os animais da doena
clnica. No entanto, algumas delas no conseguem cumprir integralmente este objetivo e, mesmo animais vacinados, podem desenvolver um
quadro clnico discreto. Se esta vacina for efetiva
na reduo signicativa da gravidade da doena,
quando comparada com animais no-vacinados,
pode-se armar que a mesma cumpriu parcialmente o seu objetivo.
354
Captulo 12
que a resposta de cada organismo muito peculiar. Contudo, os mais envolvidos so os antgenos derivados dos cultivos de clulas ou de ovos
embrionados utilizados para o cultivo do vrus.
Pessoas ou animais alrgicos a albumina do ovo
podem apresentar hipersensibilidade imediata
e desenvolver choque analtico em resposta a
vacinas cujo vrus foi amplicado em ovos embrionados. Um efeito adverso menos deletrio
a opacidade da crnea em ces decorrente da vacinao contra a hepatite viral canina com o adenovrus canino tipo 1 (CAdV-1). Este problema
tem sido evitado pela utilizao do CAdV-2 na
formulao vacinal, em vez do CAdV-1.
O uso de vacinas pode favorecer a seleo
de novas variantes antignicas dos vrus. A imunizao parcial do rebanho apontada como uma
das causas de presso seletiva que favorece o surgimento de novas variantes do vrus, as quais podem substituir o vrus de campo. Em galinhas,
tem sido bem evidente o surgimento peridico
de novas variantes do IBV e do IBDV, apesar da
massiva utilizao de vacinas contra esses patgenos.
10 Drogas antivirais
A abordagem convencional para o controle
das doenas virais tem sido o desenvolvimento de vacinas efetivas, o que no tem sido possvel para um nmero considervel de agentes.
Em virtude disso, uma nfase muito grande tem
sido dada para a busca de drogas antivirais, sobretudo em medicina humana. No entanto, o
desenvolvimento de drogas antivirais muito
mais difcil do que o desenvolvimento de drogas
antibacterianas, embora as perspectivas a longo
prazo sejam encorajadoras. A diculdade de se
obter drogas antivirais aplicveis a humanos e
animais se deve principalmente ao fato de a replicao viral utilizar fundamentalmente o metabolismo das clulas hospedeiras para replicar.
Desse modo, o equilbrio para evitar a replicao
viral e no causar toxicidade para a clula muito sensvel. Apesar disso, o conhecimento sobre
a bioqumica da replicao viral tem aumentado
sensivelmente e permitido o desenvolvimento de
355
Vacinas vricas
Tabela 12.4. Drogas antivirais disponveis para o tratamento de infeces vricas humanas
Droga
Vrus
Vidarabina
herpesvrus
anlogo de nucleosdeo
polimerase viral
Aciclovir
herpes simplex
(HSV)
anlogo de nucleosdeo
polimerase viral
Ganciclovir e
valganciclovir
citomegalovrus
anlogo de nucleosdeo
polimerase viral
Anlogos de
nucleosdeo inibidores
da transcriptase
reversa: Zidovudina
(AZT), Didanosina
(ddI), Zalcitabina (ddC),
Stavudina (d4T),
Lamivudina (3TC)
retrovrus (HIV)
anlogo de nucleosdeo
transcriptase reversa
No nucleosdeos
inibidores da
transcriptase reversa:
Nevirapina, Delavirdina
retrovrus (HIV)
anlogo de nucleosdeo
transcriptase reversa
Inibidores da protease:
Saquinavir, Ritonavir,
Nelfinavir
HIV
anlogo de peptdeo
protease do HIV
Ribavirina
amplo espectro:
HSV, HCV,
rubola, sarampo
triazol carboxamida
mutgeno de RNA
Ribavirina
amplo espectro:
HSV, HCV,
rubola, sarampo
triazol carboxamida
mutgeno de RNA
Amantadina,
Rimantadina
vrus da
influenza A
amina tricclica
protena da matriz,
hemaglutinina
Relenza, Tamiflu
vrus da
influenza A e B
mimtico do cido
neuramnico
inibidor da
neuraminidase
Meconaril
picornavrus
cclico pequeno
Interferons
vrus da hepatite
BeC
protena
ativa protenas de
defesa
Tipo qumico
Alvo
356
Captulo 12
dores de carne bovina, suna e de frango. Paralelamente, no mbito interno, foi possvel observar,
nas ltimas dcadas, o aumento expressivo do
interesse por animais de companhia, estimulando o desenvolvimento de um mercado bastante
especco de produtos alimentares e de medicamentos.
Nesse sentido, as vacinas desempenham
um papel fundamental no controle e erradicao
de vrias doenas virais humanas e animais. No
mercado veterinrio de vacinas, os animais de
produo apresentam a maior parcela no faturamento (88,1%), enquanto os animais de companhia j respondem por 9,3%. Somados todos os
tipos de vacinas contra patgenos de animais, no
ano de 2004, esse tipo de produto foi o que apresentou o maior faturamento (31,5%) no mercado
de produtos veterinrios no Brasil. Atualmente,
so licenciadas 433 diferentes vacinas para a linha veterinria, sendo que nem todas esto no
mercado. Na Tabela 12.5, encontram-se listadas
as vacinas vricas licenciadas no pas.
Diante da perspectiva futura de desenvolvimento e licenciamento de novas vacinas baseadas na metodologia de DNA recombinante,
muito provavelmente algumas das vacinas atuais
podero ser, gradativamente, substitudas por
opes mais seguras e ecientes para proteger os
animais de doenas vricas.
Tabela 12.5. Vacinas de uso veterinrio, para as diferentes espcies animais, licenciadas para produo e
comercializao no Brasil
Espcie
Sunos
Eqinos
Ovinos e Caprinos
Vrus
Tipo
parvovrus suno
inativada
inativada
inativada
inativada
vrus da raiva
vrus da raiva
357
Vacinas vricas
Vrus
Tipo
vrus da cinomose
parvovrus canino
vrus da raiva
coronavrus canino
calicivrus felino
vrus da raiva
vrus da raiva
Caninos
Felinos
Bovinos
Aves
rotavrus bovino
coronavrus bovino
atenuada
atenuada, inativada
atenuada, inativada
inativada
reovrus avirio
inativada,
atenuada por termossensibilidade
pneumovrus avirio
atenuada, inativada
vrus da laringotraquete
atenuada
358
12 Bibliografia consultada
ABBAS, A.K.; LICHTMAN, A.H.; POBER, J.S. Cellular and
Molecular Immunology. 4.ed. Philadelphia: W.B. Saunders,
2000. 553p.
ANDRE, F.E. Vaccinology: past achievements, present roadblocks
and future promises. Vaccine, v.21, p.593-595, 2003.
BABIUK, L.A. et al. Nucleic acid vaccines: research tool
or commercial reality. Veterinary Immunology and
Immunopathology, v.76, p.1-23, 2000.
BRAMWELL, V.W.; Perrie, Y. The rational design of vaccines.
Drug Discovery Today, v.10, p.1527-1534, 2005.
BREWER, J.M. (How) do aluminium adjuvants works?
Immunology Letters, v.102, p.10-15, 2006.
Captulo 12
PARTE II
VIROLOGIA ESPECIAL
CIRCOVIRIDAE
Janice Reis Ciacci Zanella
13
1 Introduo
363
2 Classificao
363
364
4 Replicao
366
367
368
368
369
371
371
372
372
373
374
374
6 Bibliografia consultada
374
1 Introduo
Os membros da famlia Circoviridae possuem vrions icosadricos, sem envelope, com 14
a 26 nm de dimetro. O genoma DNA circular de
ta simples (1.7-2.3 kb) um dos menores entre
os vrus animais. Os circovrus so encontrados
com freqncia em vrias espcies, mas os sunos
se constituem nos nicos mamferos nos quais o
vrus j foi isolado. A famlia dos circovrus animais composta por trs vrus avirios e dois sunos. Os circovrus avirios so: o vrus da anemia
infecciosa das galinhas (CAV), o vrus da doena das penas e bicos dos psitacdeos (BFDV) e o
circovrus dos pombos (PiCV). Dois circovrus j
foram identicados em sunos: o PCV-1 e o PCV2. O PCV-1 um contaminante comum de clulas
de cultivo de rim (PK-15) e no tem sido associado com doena em animais. J o PCV-2 tem
sido associado com diferentes sndromes clnicas,
denominadas conjuntamente de circovirose suna. Com exceo do PCV-1, as infeces com os
circovrus animais so associadas com doenas
potencialmente fatais. Nessas doenas, as leses
nos tecidos linfides e imunossupresso so freqentes.
Na dcada de 1990, houve vrias descries
de outros circovrus ou circovirus-like vrus, principalmente em aves (canrios, avestruzes, gansos, dentre outros). O nico circovrus humano
at hoje classicado, o torquetenovrus (TTV),
foi isolado de casos de hepatite ps-transfuso.
Esse vrus foi previamente classicado na fam-
2 Classificao
Os circovrus foram identicados, pela primeira vez, em 1974, como contaminantes de uma
linhagem de clulas renais de sunos (PK-15) e
foram inicialmente descritos como partculas
semelhantes aos picornavrus. Posteriormente,
a caracterizao do cido nuclico extrado de
partculas vricas puricadas demonstrou que os
vrions continham uma molcula de DNA de ta
simples circular. O nome circovrus suno ou circovrus porcino (PCV) foi proposto por Tischer
e colegas (1974), em reconhecimento ao primeiro
vrus animal a possuir um genoma DNA circular. Essa denominao foi, posteriormente, adotada pelo Comit Internacional de Taxonomia de
Vrus (ICTV) quando os membros da Circoviridae
foram descritos como uma famlia de vrus (Tabela 13.1). Em seguida, o BFDV e o CAV foram
tambm caracterizados e classicados conjunta-
Gnero
Espcie
Ano de reconhecimento
(caracterizao)
Doena
PCV1
Circovirus
Sunos
1974 (1982)
Nenhuma
CAV
Gyrovirus
Galinha
1979 (1989)
Anemia infecciosa
das galinhas
BFDV
Circovirus
Pssaros psitacdeos
1984 (1989)
PiCV
Circovirus
Pombos
1993 (2000)
Mortalidade associada
com definhamento e
anorexia
PCV2
Circovirus
Sunos
1997 (1998)
Circovirose suna ou
sndrome multissistmica
do definhamento dos
sunos (SMDS)
364
Captulo 13
Criomicroscopia
Mapa tridimensional
CAV
PCV2
CAV
BFDV
Figura 13.1. Vrions da famlia Circoviridae. Esquerda: criomicroscopia eletrnica do CAV (A); PCV-2 (B) e
CAV/BFDV (C). Direita: mapa tridimensional dos respectivos vrions.
365
Circoviridae
PCV1
PCV2
BFDV
19.1-26.5
16.8-20.7
15-16
14-20.7
1.33-1.37
1.33-1.37
1.378
91S
57S
2298/2319
1759
1768
1993
50
36
28
27, 23, 17
Vrus
Coeficiente de sedimentao
Extenso do genoma (nt)
Massa da protena do
vrion (kDa)
Fonte: adaptada de Todd (2000).
nmico como pela cadeia complementar, estratgia denominada ambissense. No genoma dos
PCVs, trs ORFs esto presentes no sentido do
DNA complementar ao genoma (C1, 2 e 3) e uma
ORF est presente na seqncia correspondente
ao DNA genmico (V1) (Figura 13.2A).
O genoma do CAV possui polaridade negativa, ou seja, as seqncias codicadoras esto
presentes no DNA complementar (e nos mRNAs
transcritos a partir da cpia genmica). O DNA
complementar apresenta trs ORFs que codicam uma protena estrutural (VP1) e duas noestruturais (VP2 e VP3) (Figura 13.2B). A VP3
est associada com a induo de apoptose em
clulas do timo de galinhas infectadas. A VP2
atua auxiliando a VP1 a adotar uma conformao
adequada para a construo do capsdeo. Todos
os isolados do CAV identicados at o presente
pertencem ao mesmo sorotipo, e todos so patognicos quando inoculados experimentalmente
em animais.
Os genomas do PCV-1 e PCV-2 so semelhantes na sua organizao e apresentam 76% de
homologia. Nesses genomas, existem seis ORFs
potenciais, mas apenas trs codicam protenas
j identicadas: ORF1, ORF2 e ORF3 (Figura
13.2A). A ORF1 codica uma protena, a Rep, essencial para replicao do DNA viral, enquanto
a ORF2 codica a protena do capsdeo. A ORF3
codica uma protena viral no essencial para
replicao, mas com um papel importante na induo de apoptose. A anlise do genoma de vrios isolados do PCV-2 da Europa, Amrica do
Norte, sudeste asitico e do Brasil demonstraram
que esses vrus so muito semelhantes entre si,
366
Captulo 13
Stem-loop
Regio do promotor
C2
AA
5'
C3
C1
PCV-2
CAV
V1
C3
2.298 nt
1.767 nt
C1
C2
Figura 13.2. Estrutura e organizao do genoma dos circovrus. A) Estrutura e regies codificantes do genoma do PCV2; B) Estrutura e regies codificantes do genoma do CAV; C - ORFs presentes no DNA complementar; V - ORF
presente no DNA de sentido genmico. No genoma do CAV, o mRNA correspondente as trs ORFs est representado
internamente.
4 Replicao
Os circovrus so os menores vrus capazes
de replicao autnoma em clulas de mamferos.
Devido sua simplicidade genmica e estrutural,
a replicao requer a participao de vrias protenas das clulas hospedeiras e ocorre durante
a fase S do ciclo celular. A replicao do genoma
ocorre no ncleo das clulas e envolve a sntese
de uma molcula de DNA de ta dupla (replicativo intermedirio). Aps a sntese do replicativo
intermedirio, o genoma , provavelmente, replicado pelo mecanismo de crculo rolante.
367
Circoviridae
ORF1
ORF2
ORF3
5'
AAAAn
3'
Vp2
Vp3
4
VP1
DNA fita dupla
(replicativo
intermedirio)
5
5
DNA circular
fita simples
Prognie
viral
Figura 13.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo do CAV. A etapa inicial a sntese da cadeia de DNA
complementar ao DNA genmico (1). O DNA de fita dupla (replicativo intermedirio) transcrito pela maquinaria
celular, originando um mRNA de 2.1 kb (2). Este mRNA contm trs ORFs e traduzido em trs protenas (3). O DNA
de fita dupla serve de molde para a replicao, com a produo de cpias genmicas do DNA (4). Este DNA , ento,
encapsidado por mltiplas cpias da VP1 (5).
no produz efeito citoptico. O CAV pode tambm ser cultivado em pintos de um dia e em ovos
embrionados de galinha.
368
5.1.1 Epidemiologia
A SMDS foi diagnosticada inicialmente em
rebanhos de alto padro sanitrio no Canad,
porm tambm pode atingir plantis de ciclo
completo ou unidades produtoras de leites de
tamanhos variados (maiores que 50 matrizes) ou,
ainda, unidades de segundo e terceiro stios de
produo (crechrios e terminadores). Os sunos
so mais freqentemente afetados entre as 5 e 16
semanas de idade, e a morbidade e mortalidade
variam de acordo com a fase em que a doena
surge e com o manejo da criao. Cerca de 50%
dos sunos afetados morrem em menos de oito
dias. Os demais animais podem sobreviver, mas
a maioria evolui para o denhamento extremo,
sem perspectiva de recuperao. Poucos animais
sobrevivem e, mesmo assim, apresentam um
mau desempenho produtivo.
O principal problema da SMDS a sua durao nos rebanhos, podendo persistir por vrios
meses se medidas apropriadas de controle no
forem adotadas. Na mdia, h um aumento de
trs vezes nas taxas de mortalidade na creche e
Captulo 13
369
Circoviridae
infectado desenvolver uma resposta imunolgica efetiva, o PCV-2 pode infectar clulas em vrios rgos, produzir leses e, assim, agravar o
quadro clnico. Um desequilbrio das substncias
mediadoras da imunidade, morte de linfcitos e
falhas na reposio de clulas linfides colaboram para esta imunodecincia. Ainda no est
claro porque apenas uma parcela dos leites infectados desenvolve a doena. A explicao pode
estar relacionada com a presena de co-fatores infecciosos e no-infecciosos, que so responsveis
pelo aumento dos nveis de replicao do PCV-2
nos sunos com SMDS (Figura 13.4). Sabe-se que
os animais que desenvolvem a infeco subclnica apresentam uma carga viral inferior quela
presente nos animais que desenvolvem a SMDS.
Estes animais tambm desenvolvem ttulos superiores de anticorpos neutralizantes contra o PCV2.
VIREMIA
Co-fatores
infecciosos
SMDS
Infeco subclnica
PCV-2
PCV-2
rgos
Sangue
Sem leses
CD8+
Tecido
no-linfide
Sangue
BeT
Moncitos
Atrofia do timo
Moncitos
Tecido
Linfide
Pneumonia
Hepatite
Nefrite
Enterite
Clulas dendrticas
B (apoptose) e T
Fagcitos
Depleo linfocitria
Infiltrao histiocitria
370
Do ponto de vista clnico, trs fatores principais so sugeridos para explicar a grande variao no nmero de animais afetados por lote:
o efeito individual, o efeito leitegada e o efeito
manejo (fatores de risco). O efeito individual
decorrente da gentica individual do animal,
da herana imunolgica e da sua capacidade de
responder adequadamente s infeces. O efeito
leitegada sugere um importante papel da matriz como possvel reservatrio do vrus e/ou na
transferncia de imunidade passiva aos leites.
O efeito manejo ou fatores de risco causadores
de estresse, como densidade elevada, ambiente
inadequado, baixa qualidade do ar, da gua e
da rao, misturas de leites com procedncias e
idades diferentes, falhas na limpeza/desinfeco
e a no-realizao de vazio sanitrio so muito
importantes. A considerao desses fatores indispensvel no planejamento de medidas de controle da SMDS.
A SMDS a forma clnica mais importante
associada com o PCV-2, mas o vrus tambm est
relacionado com outras manifestaes clnicas.
Os sinais mais importantes so o emagrecimento
progressivo, anorexia, aumento de volume dos
linfonodos, diarria crnica e dispnia, que no
regridem com tratamentos antimicrobianos. Palidez nas mucosas, ictercia e lcera gstrica tambm podem ocorrer. Outros sinais, alguns deles
relacionados com infeces secundrias como
a pneumonia enzotica, colibaciloses, doena de
Glasser (H. parasuis), salmonelose, infeces de
pele por Staphylococcus podem estar presentes.
Infeces causadas por outros vrus, como o PPV
e o PRRSV, podem exacerbar os sinais clnicos,
resultando em doena mais severa e taxa maior
de mortalidade.
As leses macroscpicas mais importantes
incluem a hipertroa de linfonodos (inguinais,
submandibulares, mesentricos e mediastnicos),
atroa do timo e ausncia de colabamento pulmonar. Entretanto, essas leses nem sempre esto
presentes e, portanto, no podem ser utilizadas
como um indicador seguro da SMDS. O infartamento dos linfonodos geralmente acompanha
os estgios precoces da infeco, e esses rgos
podem retornar ao tamanho normal ou mesmo
reduzido. Alguns linfonodos podem apresentar
Captulo 13
371
Circoviridae
5.1.3 Diagnstico
O diagnstico da SMDS deve ser realizado
com base na anlise dos sinais clnicos, leses macro e microscpicas e deteco de antgenos ou
cidos nuclicos virais nos tecidos. A imunoistoqumica (IHC) e reao em cadeia da polimerase
(PCR) so muito utilizadas para demonstrar a
presena do agente.
Como esta sndrome cursa com sinais variados e produz imunossupresso que predispe a
ocorrncia de outras doenas, trs aspectos devem ser considerados para o diagnstico:
sinais clnicos: emagrecimento progressivo, problemas respiratrios e/ou diarria;
leses macroscpicas: aumento de volume
de linfonodos, hipotroa do timo e consolidao
pulmonar com pulmes no-colabados. Leses
microscpicas: depleo de linfcitos nos linfonodos e bao, inltrao de histicitos, pneumonia intersticial. A presena de corpsculos de
incluso basoflicos no citoplasma de macrfagos
possui valor diagnstico limitado, pois aparece
somente em cerca de 30% dos casos;
deteco de antgenos ou de cidos nuclicos do agente associados com as leses, por IHC
ou PCR, respectivamente.
372
Captulo 13
se realize uma limpeza geral com o uso de detergentes, antes do uso dos desinfetantes. Estes
devem ser utilizados na dosagem recomendada
para inativao do vrus. Os desinfetantes mais
ecazes para o PCV-2 so aqueles base de uma
mistura de peroximonosulfato de potssio e cloreto de sdio, seguidos pelos desinfetantes base
de hidrxido de sdio, de amnia quaternria, de
hipoclorito de sdio e dos derivados fenlicos.
Para prevenir a entrada do PCV-2 em granjas livres, deve-se seguir risca as medidas de
biossegurana. Essas medidas devem ser tanto
externas (controle de visitantes, veculos, acesso
de animais, introduo de sunos e smen), quanto internas (uso de desinfetantes, controle de
vetores, manejo das instalaes e reduo de estresse). Estudos recentes demonstraram a presena do PCV-2 no smen de cachaos de algumas
centrais de inseminao articial do pas, achado
que deve merecer ateno especial.
5.2.1 Epidemiologia
O CAV est presente em praticamente todos
os pases que possuem avicultura comercial, e a
infeco mais freqente em lotes de matrizes
acima de 20 a 25 semanas de idade. As galinhas
se constituem na nica espcie susceptvel in-
Circoviridae
373
374
5.2.3 Diagnstico
O diagnstico da AIG deve ser realizado
com base nas combinaes entre os sinais clnicos, leses macro e microscpicas e na deteco
de antgenos ou cidos nuclicos do CAV nos rgos das aves afetadas. As tcnicas de IHC, IFA
e PCR so amplamente utilizadas para demonstrar a infeco pelo CAV. O isolamento viral no
um mtodo recomendado para o diagnstico,
pois demorado e caro. No entanto, o vrus replica em clulas MDCC-MSB1, que so clulas
de linhagem de linfoma que se multiplicam em
suspenso. O vrus tambm pode ser isolado pela
inoculao de ovos embrionados. Anticorpos no
soro podem ser detectados por imunouorescncia indireta, soroneutralizao ou ELISA (testes
comerciais j esto disponveis).
Captulo 13
6 Bibliografia consultada
CHAE, C. A review of porcine circovirus 2-associated syndromes
and diseases. The Veterinary Journal, v.169, p.326-336, 2005.
BRENTANO, L. Anemia infecciosa das galinhas. In: BRECHIERI
JR.; A. MACARI, M. Doenas das aves. Campinas: FACTA, 2000.
Cap.5.9, p. 339-350.
CIACCI-ZANELLA, J.,R.; MORES, N. Diagnostic of PostWeaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS) in Swine in
Brazil Caused by Porcine Circovirus Type 2 (PCV-2). Arquivo
Brasileiro de Medicina Veterinria e Zootecnia, Belo Horizonte,
MG, v. 55, p. 522-527, 2003.
CROWTER, R.A. et al. Comparison of the structures of three
circoviruses: Chicken Anemia Virus, Porcine Circovirus Type 2,
and Beak and Feather Disease Virus. Journal of Virology, v.77,
p.13036-13041, 2003.
DARWICH, L.; SEGALS, J.; MATEU, E. Pathogenesis of
Postweaning Multysistemic Wasting Syndrome caused by
Porcine Circovirus 2: an immune riddle. Archives of Virology,
v.149, p.857-874, 2004.
MADEC F. et al. La maladie de lamaigrissement du porcelet
(MAP) en France. 1. Aspects descriptifs, impact en levage.
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LUKERT, P.D.; ALLAN, G.M. In: Straw, B.E. et al. Eds. Diseases
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TISCHER, I. et al. Characterization of papovavirus and
picornavirus like particles in permanent pig kidney cell lines.
Zentralbl Bakterio. Parasitenkd Infektionskr Hyg Abt 1 Orig,
v.26, p.153-167, 1974.
TODD, D. Circoviruses: immunosuppressive threats to avian
species: a review. Avian Pathol, v.29, p.373-394, 2000.
TODD, D. et al. Genome sequence determinations and analysis
of novel circoviruses from goose and pigeon. Virology, v.286,
p.354-362, 2001.
PARVOVIRIDAE
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato dos Santos Costa
14
1 Introduo
377
2 Classificao
377
378
4 Replicao
381
381
384
384
384
384
387
388
388
388
389
391
391
392
392
393
394
395
395
6 Bibliografia consultada
395
1 Introduo
Os membros da famlia Parvoviridae so vrus pequenos, esfricos, com capsdeo icosadrico, que possuem uma molcula de DNA linear de
ta simples como genoma. O nome da famlia deriva do tamanho dos vrions (parvus = pequeno).
Uma caracterstica marcante dos parvovrus
a dependncia de clulas na fase S do ciclo celular ou em diviso, para a sua replicao. Essa dependncia se deve ao requerimento da maquinaria celular para a sntese de DNA e replicao do
genoma viral, devido ao nmero restrito de genes e funes codicadas pelo genoma do vrus.
Os parvovrus possuem somente quatro genes,
distribudos em duas regies codicantes (open
reading frames ORFs) sobrepostas no genoma
DNA de ta simples de 5 quilobases (kb). Alm
disso, alguns vrus dessa famlia dependem de
infeco conjunta com outros vrus (adenovrus
ou herpesvrus) para completarem o seu ciclo replicativo. Esses vrus so agrupados no gnero
Dependovirus e no h relatos de enfermidades
animais associadas com esses agentes.
A dependncia de clulas na fase S do ciclo celular exerce uma grande inuncia sobre a
patogenia das infeces pelos parvovrus. As infeces por esses vrus afetam preferencialmente
rgos que apresentam clulas em multiplicao,
como as clulas da medula ssea, clulas embrionrias e clulas precursoras do epitlio intestinal
(clulas das criptas intestinais). Os parvovrus
apresentam uma grande estabilidade no ambiente, podendo manter a sua infectividade durante
meses, em determinadas condies, e so muito
restritos quanto espcie hospedeira.
Os primeiros relatos de enfermidades causadas por parvovrus em animais datam de mais
de 100 anos e se referiam panleucopenia felina
(FPL). Posteriormente, foram descritos o vrus
da enterite dos visons (MEV), em 1947, e o parvovrus canino (CPV) em 1978. As enfermidades
causadas por esses trs agentes so muito semelhantes e cursam com enterite e leucopenia. A infeco por esses agentes pode, ainda, estar associada com mortalidade e malformaes fetais.
O parvovrus suno (PPV) produz infeces
subclnicas em animais jovens e adultos, porm
responsvel por perdas reprodutivas importantes quando infecta fmeas prenhes. Outros parvovrus tambm so responsveis por enfermidades em gansos, roedores e humanos. Existem
tambm os parvovrus isolados em galinhas, coelhos e eqinos, porm ainda no foram relatadas
enfermidades associadas com esses agentes. O
parvovrus bovino (BPV) encontra-se amplamente disseminado na populao bovina, no entanto,
a sua importncia clnico-patolgica questionvel. Alm de sua importncia como patgenos,
vrios parvovrus tm sido utilizados como vetores para a transferncia de DNA em animais.
Em geral, esses vetores podem carrear at 5 kb de
DNA heterlogo, tendo como vantagem a ausncia ou fraca resposta imune do animal contra o
vetor, permitindo a sua ampla utilizao.
2 Classificao
Segundo o Comit Internacional de Taxonomia Viral (ICTV), a famlia Parvoviridae composta por duas subfamlias: Parvovirinae e Densovirinae. A primeira agrupa os parvovrus que
infectam vertebrados e, por isso, os seus membros sero discutidos mais detalhadamente neste
captulo. A segunda contm vrus que infectam
insetos e, aparentemente, no possuem importncia em medicina veterinria. Os principais
parvovrus de interesse veterinrio esto listados
na Tabela 14.1.
A subfamlia Parvovirinae dividida em
cinco gneros: Parvovirus, Erythrovirus, Dependovirus, Amdovirus (ADMV-like viruses) e Bocavirus
(BPV-like viruses). O gnero Erythrovirus representado pelo parvovrus humano, o B19, que causa abortos e doena exantematosa em crianas; e
por outros vrus de primatas, como o parvovrus
do macaco rhesus (RhPV) e o parvovrus smio
(SPV).
A maioria dos gneros abriga vrus que replicam de forma autnoma. Por outro lado, os Dependovirus so dependentes de adenovrus para
replicar e, por isso, so chamados adeno-associated
virus (AAV). Os AAV tm sido utilizados como
vetores de expresso, por serem apatognicos e
por no induzirem resposta imune nos animais
inoculados.
378
Captulo 14
Amdovirus Bocavirus
Dependovirus
Parvovirus
Gnero
Abreviatura
Hospedeiros
Parvovrus de galinha
ChPV
galinhas
Vrus da panleucopenia
felina
FPLV
gatos
panleucopenia, enterite,
hipoplasia cerebelar
Parvovrus canino
CPV
ces
leucopenia, miocardite,
enterite
MEV
panleucopenia, enterite
RPV
mo-pelada
(racoon)
panleucopenia, enterite
MMV ou MVM
camundongos
Parvovrus suno
PPV
sunos
infertilidade, aborto,
mumificao fetal
Parvovrus de gansos
GPV
gansos
hepatite, miocardite
MDPV
patos
hepatite, miocardite
AAV-1 a 6
vrias espcies
subclnica
BPV
bovinos
subclnica
CnMV
ces
AMDV
Espcie
Parvovrus de patos
Muscovy
Vrus adeno-associados
Parvovrus bovino
Manifestaes Clnicas
subclnica
deformidades congnitas
diarria
encefalopatia
Parvoviridae
Os vrions apresentam uma grande resistncia inativao no meio ambiente, que pode
ser creditada sua estrutura simples e compacta,
desprovida de envelope. A estrutura vrica estvel sob pH entre 3 e 9, e a temperatura de 56C
por 60 minutos. Por outro lado, a infectividade
pode ser inativada com desinfetantes base de
formalina, hipoclorito de sdio e agentes oxidantes. Outra caracterstica dos parvovrus a
capacidade de aglutinar eritrcitos de sunos, de
cobaias e/ou de macacos rhesus, dependendo da
379
espcie do vrus. A maioria dos parvovrus possui uma gama de hospedeiros e tropismo muito
restritos. No entanto, alguns vrus podem sofrer
mutaes e ampliar a sua gama de hospedeiros.
Um exemplo foi a substituio de dois aminocidos na protena VP2 do FPLV, que permitiu ao
vrus utilizar o receptor da transferrina (TfR) presente em clulas de ces e, assim, estabelecer o
CPV como um novo patgeno canino.
As partculas virais so formadas por trs
classes de protenas: VP1, VP2 e VP3, com exceo do AMDV (vrus da doena das martas
Aleutian), que possui apenas as duas primeiras.
A massa molecular das protenas varia entre 80 e
86 kDa (VP1), 64-75 kDa (VP2) e 60-62 kDa (VP3).
Essas protenas so codicadas a partir de uma
nica ORF no genoma viral, sendo a VP1 e VP2
originadas por splicing alternativo do RNA mensageiro (mRNA). A VP3 formada a partir da
clivagem de 15 a 20 aminocidos da regio amino-terminal da VP2. A VP3 somente detectada
em partculas inteiras, ou seja, em partculas que
contm o genoma viral completo, pois h produo de grande quantidade de partculas defectivas que apresentam genomas incompletos ou
ausentes.
O capsdeo formado por 60 cpias da VP2
e poucas cpias da VP1 e da VP3. Quando observada por cristalograa, a protena VP2 apresenta oito cadeias estruturais em forma de barril- ,
estrutura que conservada em outros vrus icosadricos. Essas estruturas so ligadas por alas
que esto expostas na superfcie do vrion e so
responsveis pela estabilidade das partculas no
ambiente. A VP2 possui ainda epitopos que induzem a produo de anticorpos neutralizantes
juntamente com a VP3, e pequenas diferenas
nesta protena podem determinar o tropismo por
diferentes tecidos e hospedeiros.
Na superfcie dos vrions, podem ser observadas estruturas caractersticas, como protuberncias (spikes), depresses (dimples) e estruturas
na forma de cilindros circundados por depresses (canyons) (Figura 14.1). Essas estruturas
possuem funes biolgicas importantes, como o
reconhecimento e ligao a receptores celulares
(depresses) e determinao das caractersticas
imunognicas (projees).
380
Captulo 14
a replicao do genoma viral, e a NS2 est associada com a formao dos capsdeos, controle da
expresso gnica e tambm participa da replicao do genoma. As protenas produzidas a partir da outra ORF (VP1 e VP2) fazem parte da estrutura do capsdeo. As protenas VP1 e VP2 so
traduzidas a partir de um mesmo mRNA, aps
splicing, e compartilham a maior parte de sua seqncia de aminocidos. A diferena entre a VP1
e VP2 resulta da utilizao de diferentes cdons
de iniciao pelos ribossomos. A VP3 composta por uma seqncia de aminocidos da regio
amino-terminal da VP2. Os mRNAs, produzidos
pela transcrio do genoma, possuem 5 cap e so
poliadenilados na extremidade 3.
O genoma viral apresenta de 6 a 10 seqncias palindrmicas, que possibilitam a formao
de estruturas em forma de grampo nas regies
terminais (Figura 14.2). Essas estruturas so es-
VP1 e VP2
NS1 e NS2
NS1
NS2
VP1
VP2
ORF
5kb
Figura 14.2 Ilustrao esquemtica da estrutura e organizao do genoma e dos transcritos do parvovrus canino
(CPV). A figura superior representa o DNA genmico com as extremidades 5' e 3' flexionadas sobre si; a localizao
das duas ORFs e os stios de iniciao da transcrio (setas). A figura inferior mostra os trs transcritos (1, 2 e 3), com as
respectivas ORFs e locais de processamento. As linhas contnuas representam a cadeia de RNA, e os retngulos
representam as ORFs codificantes das respectivas protenas. NS1 e NS2: protenas no-estruturais; VP1 e VP2:
protenas do capsdeo.
381
Parvoviridae
4 Replicao
A replicao dos parvovrus autnomos
ocorre no ncleo das clulas hospedeiras e depende de fatores celulares que esto presentes somente quando a clula est em fase S ou G2. Algumas caractersticas da patogenia das infeces
por parvovrus dependem das clulas em mitose.
Por exemplo, a infeco de fetos (parvovrus suno e felino) ou de animais recm-nascidos (CPV)
favorecida pela presena de um grande nmero
de clulas em diviso. A infeco pode ser sistmica em fetos e em animais recm-nascidos, mas
geralmente restrita a tecidos com clulas em mitose, como o epitlio intestinal, em animais com
mais idade.
Em fetos felinos ou em gatos recm-nascidos, a infeco afeta o cerebelo; enquanto em ces
com at seis semanas de idade, o miocrdio o stio preferencial de infeco pelos parvovrus. Em
animais mais velhos, as clulas que se encontram
em diviso so, principalmente, as clulas linfides e as clulas das criptas do intestino. A replicao do parvovrus nessas clulas pode produzir linfopenia ou enterite, respectivamente.
Usualmente, a replicao dos parvovrus in
vitro restrita a clulas da espcie hospedeira,
como as PK-15 (rim de suno) para o PPV; CRFK
(rim de gato) para o FPLV. O CPV constitui-se
em exceo, pois replica em clulas MDCK (rim
de co o hospedeiro) e pode multiplicar-se tambm em clulas da linhagem CRFK.
A determinao do tropismo celular ou tecidual do vrus depende de seqncias especcas
de aminocidos na superfcie dos vrions, importantes para o reconhecimento e ligao aos receptores celulares. No CPV, o tropismo determinado por trs aminocidos da VP2 (posies 93,
300 e 323). O tropismo de cepas no-patognicas
do PPV, como a NADL-2, e patognicas, como a
Kresse, determinado por diferenas em um aminocido na projeo da VP2 (posio 436), e em
dois aminocidos que circundam a depresso.
382
Captulo 14
VP1 e VP2
NS1 e NS2
NS1
NS2
VP1, VP2/3
Vrion
Figura 14.3. Etapas da expresso gnica e replicao dos parvovrus autnomos. O genoma DNA de fita simples
(ssDNA) , inicialmente, convertido em DNA de fita dupla (dsDNA) por enzimas celulares (1), seguido da expresso
(transcrio, traduo) das protenas NS1 e NS2 (2). A protena NS1 essencial nas etapas seguintes da replicao do
genoma (3), para a expresso das protenas estruturais (4) e tambm na fase final da replicao do DNA (5). Os
genomas recm-replicados so encapsidados pelas protenas estruturais VP1 e VP2/3, originando as novas partculas
vricas (6,7).
383
Parvoviridae
Monmero
ssDNA
Monmero
dsDNA
Dmero dsDNA
Clivagem
enzimtica
384
pletada, no entanto, a produo de capsdeos vazios pode ocorrer em menos tempo. Os capsdeos
vazios apresentam uma conformao diferente
das partculas virais completas. O processo de replicao dos parvovrus produz corpsculos de
incluso intranucleares grandes. A liberao dos
vrions ocorre por lise das clulas infectadas.
Captulo 14
5.1.1 Epidemiologia
O FPLV pode causar doena em todos os
membros da famlia dos feldeos. O vrus possui
distribuio mundial pela sua natureza altamente contagiosa e pela alta capacidade de persistir
no meio ambiente. Cerca de 75% dos gatos com
um ano de idade, no-vacinados e clinicamente
saudveis, apresentam anticorpos contra o FPLV.
Portanto, a maioria dos gatos susceptveis exposta e infectada pelo vrus durante seu primeiro
ano de vida. Nesses animais, a infeco geralmente subclnica.
A doena com sinais clnicos tpicos ocorre
mais freqentemente nos animais jovens no vacinados, embora os lhotes vacinados tambm
possam desenvolver a enfermidade. Isso ocorre
pela interferncia da imunidade materna com a
resposta vacinal. Na verdade, existe uma relao
inversa entre a incidncia da doena e a idade
dos animais, ou seja, a incidncia da enfermidade
diminui medida que a faixa etria aumenta.
A transmisso do vrus ocorre pelo contato
direto ou indireto dos animais susceptveis com
os animais infectados ou com as suas secrees.
O vrus pode estar presente em todas as secrees
corpreas de gatos infectados, porm mais consistentemente encontrado nas fezes diarricas. A
rota fecal-oral considerada a principal forma
de transmisso. Pela alta resistncia do FPLV no
ambiente, a transmisso por fmites contaminados pode desempenhar um importante papel na
propagao da infeco.
385
Parvoviridae
Gatos SPF
(> 3 semanas de idade)
Exposio ao vrus
Anticorpos
insuficientes
Anticorpos
suficientes
Viremia
(2 a 7 dias)
Necrose do
tecido linfide
Atrofia linfide
Medula ssea
Jejuno
e leo
Infeco
subclnica
Leucopenia
Infeces
bacterianas
secundrias
Necrose
das criptas
Septicemia,
CID
Recuperao
bito
386
Captulo 14
Exposio ao vrus
Feto
(estgio de gestao)
Incio
Infertilidade
Morte fetal
Reabsoro
Tero
mdio
Abortos
Mumificao
fetal
Filhotes
(2-3 semanas)
Tero
final
Crebro
Nervo tico
Retina
387
Parvoviridae
5.1.3 Diagnstico
O achado de intensa leucopenia em gatos
com histrico e sinais clnicos compatveis com
a FPL suciente para se estabelecer um diagnstico presuntivo. Entretanto, o diagnstico denitivo depende da realizao de outros testes,
como a microscopia eletrnica (ME) das fezes,
isolamento viral, sorologia e imunouorescncia
(IFA). Nos casos fatais, as alteraes histopatolgicas intestinais so consideradas patognomnicas.
Podem ser realizados testes de hemaglutinao (HA) a partir de amostras fecais, uma vez que
o FPLV aglutina eritrcitos de sunos. O isolamento viral em cultivo celular tambm pode ser
utilizado para a conrmao da etiologia. Nesse
caso, clulas primrias felinas ou clulas de linhagem de origem felina, como a CRFK, podem
ser utilizadas.
Testes comerciais de ELISA para a deteco
de antgenos virais nas fezes esto disponveis
no comrcio. Pode-se tambm realizar a tcnica
de IFA em tecidos para a deteco de antgenos
virais. Outro recurso diagnstico a tcnica de
PCR, para a identicao de DNA viral em tecidos, fezes ou em clulas infectadas.
A pesquisa de anticorpos pode ser realizada
por soroneutralizao (SN), imunouorescncia
indireta (IFI) e ELISA, porm os resultados devem ser interpretados com cautela, em razo da
grande disseminao da infeco. Nesse sentido,
somente a sorologia pareada ou a deteco de
IgM so indicativos de infeco recente. A tcnica de inibio da hemaglutinao (HI) tambm
388
Captulo 14
5.2.1 Epidemiologia
A parvovirose canina surgiu no nal dos
anos 1970, apresentando altas taxas de morbidade e mortalidade. A gravidade da doena observada nessa poca foi atribuda falta de imunidade natural da populao canina contra o novo
vrus. Atualmente, os ces so mais resistentes
ao CPV, provavelmente pelas vacinaes e pela
resistncia natural contra a doena. Entretanto, a
incidncia da infeco se mantm alta em animais
com idade entre seis semanas e seis meses.
Os lhotes dessa faixa etria, quando novacinados, so altamente susceptveis ao desenvolvimento da doena. Os anticorpos maternos
so protetores contra a infeco nas primeiras semanas de vida. No entanto, em um determinado
momento, os nveis de anticorpos so insucientes para proteger da doena e, em contrapartida,
bloqueiam o desenvolvimento de uma resposta
imune efetiva pelas vacinas. Esse perodo conhecido como janela de susceptibilidade e
pode explicar porque alguns animais, mesmo
Parvoviridae
389
390
Captulo 14
Exposio ao vrus
Viremia
Medula
ssea
Neutropenia
Tecido
linfide
Criptas
intestinais
Linfopenia
Necrose
epitelial
Imunossupresso
Quebra da
barreira
intestinal
Outros tecidos
(miocrdio,
esfago, rins,
fgado, pulmes)
Diarria
hemorrgica
Bacteremia, endotoxemia,
septicemia, SIRS, CID, FMO
Recuperao
bito
Figura 14.7 Patogenia da parvovirose canina. SIRS= sndrome da resposta inflamatria sistmica, CID= Coagulao
intravascular disseminada, FMO= Falncia mltipla de rgos.
B
Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
Vilosidade
Cripta
Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)
Figura 14.8 Ilustrao da patogenia das leses provocadas pelo parvovrus canino (CPV) no epitlio intestinal. A)
Vilosidade intestinal com estrutura normal; B) Vilosidade afetada. A destruio das clulas das criptas pela
replicao viral resulta em reposio deficiente das clulas absortivas das vilosidades. Com isso, ocorrem necrose e
descamao epitelial, achatamento das vilosidades e exposio da lmina prpria.
391
Parvoviridae
5.2.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo na rotina clnica
geralmente feito pelo histrico, sinais clnicos
e hemograma. Porm, o diagnstico denitivo
de parvovirose exige a identicao do vrus por
testes especcos. Testes de ELISA para a deteco de antgenos virais nas fezes esto disponveis no mercado brasileiro. Outros testes, como
a identicao do vrus por HA, sorologia pareada por HI e SN, testes de ELISA para a deteco
de IgM, deteco dos vrions por ME podem ser
utilizados para o diagnstico denitivo. Em casos clnicos, a grande concentrao de partculas
virais nas fezes (pode chegar at 109 partculas/
grama) e a estabilidade viral favorecem a utilizao da ME. Uma alternativa a imunomicroscopia (IME) eletrnica, na qual os anticorpos so
adicionados s suspenses fecais para a formao
de complexos que favorecem a visualizao.
O isolamento do vrus a partir de fezes ou
de tecidos pode ser realizado em clulas de origem canina, como as MDCK e A-72, e/ou em clulas CRFK de origem felina.
392
5.3.1 Epidemiologia
A infeco pelo PPV est amplamente distribuda na populao suna de todo o mundo. Uma
das razes para isso a grande estabilidade do
vrus no ambiente. Dessa forma, uma granja infectada pode manter o vrus durante meses, mesmo quando a higiene aparentemente satisfatria. Nas maiores regies produtoras de sunos,
como o meio oeste dos Estados Unidos, a infeco
pelo PPV enzotica na maioria dos rebanhos e,
Captulo 14
com poucas excees, todas as porcas apresentam imunidade contra o agente. Alm disso, uma
grande proporo das leitoas naturalmente infectada com o PPV antes da cobertura, desenvolvendo imunidade protetora contra o vrus, que
provavelmente persiste por toda a vida.
A introduo do PPV no rebanho pode ocorrer pela aquisio de reprodutores infectados.
Quando o agente introduzido em um rebanho
negativo, a disseminao rpida e muitas fmeas apresentam falhas reprodutivas. Em alguns
casos, a infeco pode ser controlada e o vrus
pode at ser erradicado da propriedade, principalmente em criaes pequenas (com menos de
100 matrizes). Nesses casos, a reduo da incidncia da doena ocorre pela reduo ou ausncia de
animais susceptveis, uma vez que a imunidade
conferida pela infeco natural longa e slida.
Os surtos em granjas em que no h controle por
vacinao podem ocorrer em perodos cclicos
(normalmente a cada trs a quatro anos), pela reduo gradativa dos nveis de anticorpos.
As maiores fontes de infeco, para os animais susceptveis dentro de uma granja, so as
instalaes contaminadas. O PPV muito resistente a variaes de temperatura e a vrios desinfetantes comuns. Pode, portanto, permanecer
infeccioso em excrees e secrees de animais
infectados por vrios meses. A ampla distribuio do agente tambm levanta hipteses sobre a
possibilidade de alguns sunos serem persistentemente infectados e excretarem o vrus periodicamente. Alm disso, h evidncias da ocorrncia
de portadores imunotolerantes que sobreviveram
infeco durante a fase fetal. No entanto, esses
casos so raros e ainda no esto comprovados.
Os machos podem desempenhar um papel importante na disseminao do PPV, uma vez que
o vrus pode ser encontrado nos testculos. Alm
disso, os machos tambm podem atuar como vetores para a disseminao do vrus entre fmeas
susceptveis.
Estudos sorolgicos demonstraram a grande prevalncia e disseminao do vrus no Brasil, principalmente nos estados de Minas Gerais,
Santa Catarina e Rio Grande do Sul. No entanto,
acredita-se que o PPV esteja disseminado em todas as regies criadoras de sunos.
A transmisso do vrus ocorre pelas vias
oronasal e transplacentria. A imunidade passiva
393
Parvoviridae
394
Captulo 14
Rebanho
afetado
Normal
Reduzido
11.5
< 9.5
20-40%
4-7%
7-12%
< 0,6%
1-4%
1,0%
2-6%
< 3%
> 4%
Normal
Normal
Parmetro
Nmero total de leites
nascidos
Vivos e mortos
% de leitegadas c/ < 9
Natimortos
Fetos mumificados
Intervalo desmame-cio
5.3.3 Diagnstico
A presena da infeco pelo PPV deve ser
investigada sempre que houver aumento nos ndices de retorno ao cio e atraso na data de pario, associados com a presena de fetos mumicados e leitegadas com nmero reduzido de
leites, especialmente em fmeas de primeiro
ou segundo parto. Leitegadas, contendo alguns
leites normais e outros mumicados, freqentemente em diferentes estgios de desenvolvimento, so fortes indicativos da infeco. Esses sinais
geralmente no so acompanhados por outras
manifestaes clnicas nas fmeas.
O material a ser remetido para o laboratrio
para conrmao do diagnstico deve incluir fetos mumicados, restos fetais e fragmentos de tecidos necrticos. Pode-se, ainda, enviar amostras
de soro pareado das fmeas (isto , uma amostra coletada no momento da falha reprodutiva e
outra coletada com 2 a 4 semanas de intervalo),
amostras de soro dos fetos abortados, dos leites
natimortos ou dos leites antes da ingesto do
colostro.
Os fetos mumicados podem apresentar
grande quantidade de antgenos virais, que podem ser detectados por ELISA e IFA. Pode-se,
ainda, detectar o vrus por HA, realizada com
eritrcitos de cobaias. Tecidos e uidos fetais so
indicados para serem testados por esta tcnica.
Nos casos em que a infeco ocorre no perodo
inicial da gestao, a presena do vrus de difcil
deteco.
Em geral, os testes sorolgicos so recomendados apenas quando tecidos de fetos mumicados no so disponveis. O uso de sorologia apresenta restries devido ampla disseminao
da infeco, o que diculta a interpretao dos
resultados. Nesse sentido, testes como a HI, SN
e ELISA podem ser utilizados para o diagnsti-
395
Parvoviridae
6 Bibliografia consultada
CONNER, M.E.; RAMIG, R.F. Viral enteric diseases. In:
NATHANSON, N. (ed). Viral Pathogenesis. Philadelphia:
Lippincott-Raven, 1997. Cap.30, p.713-743 .
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BONAGURA, J.D. Kirks current veterinary therapy XIII.
Philadelphia: Saunders, 2000. p.136-140.
GAMOH, K. et al. The pathogenicity of canine parvovirus type2b, FP84 strain isolated from a domestic cat, in domestic cats.
The Journal of Veterinary Medical Science, v.65, p.1027-1029,
2003.
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GREENE, C.E. Infectious diseases of the dog and cat. 2.ed.
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GUILFORD, W,G.; STROMBECK, D.R. Gastrointestinal tract
infections, parasites, and toxicoses. In: GUILFORD, W.G. et al.
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Infectious diseases of the dog and cat. 2.ed. Philadelphia:
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HOSKINS, J.D. Update on canine parvoviral enteritis. Veterinary
Medicine, v.92, p.694-709, 1997.
396
Captulo 14
PAPILLOMAVIRIDAE
Amauri A. Alfieri, Sheila R. Wosiacki & Alice F. Alfieri
15
1 Introduo
399
2 Classificao
400
402
402
5 O ciclo replicativo
404
404
404
404
405
6 Patogenia
405
7 Patologia
405
8 Papilomavrus e tumores
406
9 Diagnstico
407
10 Imunologia
407
11 Imunoprofilaxia
408
409
12.1 Papilomatose
12.2 Hematria enzotica e tumores no trato digestrio superior de bovinos
13 Bibliografia consultada
409
410
411
1 Introduo
Os vrus da famlia Papillomaviridae infectam
diferentes espcies de mamferos e aves e caracterizam-se pela propriedade oncognica, que
responsvel pela produo de leses tumorais,
benignas e malignas, nos epitlios cutneo e mucoso. Em medicina veterinria, as leses ocasionadas pela infeco com os papilomavrus determinam prejuzos econmicos considerveis
bovinocultura tanto por perdas diretas, causadas
pela morte de animais, quanto indiretas, representadas por redues na produtividade e no valor comercial dos animais e subprodutos como o
couro. Em bovinos, a correlao entre a infeco
pelo papilomavrus e o desenvolvimento de neoplasias tem sido extensivamente avaliada, no
apenas pela repercusso econmica da infeco,
mas tambm por ser um modelo experimental interessante para o estudo do sinergismo com fatores ambientais na etiologia das neoplasias.
A infeco por membros da famlia Papillomaviridae ocasiona enfermidades semelhantes nas
diversas espcies acometidas e est amplamente
distribuda em todo o mundo. As leses cutneas so comumente denominadas papilomatose
ou apenas verrugas, e so relatadas em quase todas as espcies de mamferos e em algumas aves
e animais marinhos. A infeco do epitlio mucoso geralmente est associada com a formao de
tumores malignos. Em seres humanos, a infeco
pelo papilomavrus est intimamente associada
ao cncer do colo do tero; e, em bovinos, a tumores vesicais (hematria enzotica bovina) e no
trato digestrio superior (caraguat).
A ocorrncia de papilomas cutneos em humanos descrita h sculos e est presente em relatos de origem grega e romana. As leses mucosas do colo do tero foram amplamente relatadas
na Idade Mdia, ocasio em que todas as doenas
sexualmente transmissveis eram consideradas
como ocasionadas por um nico agente. O estudo do papilomavrus animal tambm tem uma
longa histria. Em 1898, MFadycan e Hobday relataram a etiologia infecciosa do papilomavrus
oral canino (COPV). No entanto, o primeiro papilomavrus animal foi identicado somente em
1933, por Richard Shope, que estudou o cottontail
400
Captulo 15
Biologia/patologia
Espcies
Espcies/n de tipos
Alphapapillomavirus
15
Papilomavrus humano 32
Betapapillomavirus
Papilomavrus humano 5
Gammapapillomavirus
Papilomavrus humano 4
Deltapapillomavirus
Leses fibropapilomatosas em
ungulados. Infeces interespcies
so relatadas.
Papilomavrus do alce
europeu
Epsilonpapillomavirus
Papilomavrus bovino 5
Zetapapillomavirus
Papilomavrus eqino 1
Etapapillomavirus
Lotapapillomavirus
Papilomavrus Mastomys
natalensis
Thetapapillomavirus
Kappapapillomavirus
Lambdapapillomavirus
Mupapillomavirus
Papilomavrus humano 1
Nupapillomavirus
Papilomavrus humano 41
Xipapillomavirus
Papilomavrus bovino 3
Omikronpapillomavirus
Papilomavrus do Phocoena
spinipinnis
Pipapillomavirus
2 Classificao
A famlia Papillomaviridae encontra-se em
ativa expanso. Uma caracterstica viral de grande importncia para a classicao a impossibilidade de isolamento dos papilomavrus em
cultivo celulares convencionais, o que diculta o
processo de identicao e experimentao, as-
401
Papillomaviridae
parar o termo tipo de papilomavrus nos padres taxonmicos espcie e gnero e investigar a relao entre a classicao taxonmica e
as propriedades biolgicas e patolgicas. Assim,
a famlia Papillomaviridae foi avaliada em bases logenticas e, atualmente, composta por 16 gneros (Tabela 15.1). Alguns desses agrupamentos
logenticos coincidem com as propriedades biolgicas e patolgicas, enquanto outros divergem,
mostrando apenas relaes moleculares.
Os papilomavrus so altamente espcie/
tecido-especcos e tm sido descritos em diversas espcies de mamferos, como seres humanos,
animais domsticos e selvagens, assim como em
algumas espcies de aves. Infeces entre diferentes espcies hospedeiras so relatadas; no
entanto, nenhum caso de infeco produtiva foi
comprovado na segunda espcie. As espcies de
papilomavrus que infectam animais esto apresentadas na Tabela 15.2. A classicao por sorotipos no utilizada para a sistemtica dos papilomavrus, que se baseia na espcie hospedeira,
na origem e extenso das leses, e no genoma
viral, sendo referido como gentipos virais.
O gene L1, que codica a principal protena
do capsdeo, o mais conservado do genoma viral
e tem sido utilizado para a identicao de novos
tipos de vrus. Um novo isolado de papilomavrus reconhecido quando, aps o seqenciamento da seqncia codicante L1 (ORF, seqncia
aberta de leitura, L1), houver diferena superior
a 10% com os papilomavrus conhecidos e com
seqncias disponveis em bancos genmicos.
Diferena entre dois e 10% na homologia dene
um subtipo, e inferior a 2% dene uma variante
viral.
Espcie/tipo
Outros papilomavrus
OvPV-2
BPV-2
Epsilonpapillomavirus
Zetapapillomavirus
Etapapillomavirus
Thetapapillomavirus
Xipapillomavirus
BPV-4 e BPV-6
Pipapillomavirus
No-classificado
Deltapapillomavirus
Espcies
Kappapapillomavirus
Lambdapapillomavirus
402
3 Estrutura e propriedades
dos vrions
Os papilomavrus so pequenos vrus oncognicos no-envelopados, com 52 a 55 nm de
dimetro. O capsdeo viral, com simetria icosadrica, composto por 72 capsmeros, sendo 60
capsmeros que se ligam de forma hexavalente
e 12, de forma pentavalente. Os capsmeros so
arranjados em superfcies com triangulao T = 7,
originando microscopia eletrnica o aspecto arredondado (Figura 15.1). Cada capsmero composto por duas protenas codicadas pelo vrus:
a protena principal (L1) e a protena secundria
(L2). Partculas semelhantes ao vrus (VLPs) podem ser produzidas pela expresso somente da
protena L1 ou pela combinao das protenas L1
e L2. Os vrions apresentam coeciente de sedimentao (S20, W) de 300 e densidade no cloreto
de csio de 1.34 g/mL.
O cido nuclico dos papilomavrus consiste
de uma molcula de DNA de ta dupla circular,
com 7.3 a 8 kpb. Nos vrions e nas clulas hospedeiras, o genoma est conjugado com histonas,
formando um complexo semelhante cromatina
celular. A massa molecular do cido nuclico
de 5.0 x 106 daltons e representa 12% da massa do
vrion. A partcula viral resistente s condies
do meio ambiente e a solventes lipdicos, como o
ter e o clorofrmio.
Captulo 15
Fonte: www.oralcancerfoundation.org
Regio conservada e
expressa aps a integrao
s
R
LC otoreres
E6
m do
proegula
r
e
7945
E7
1000
7000
E1
L1
6000
BPV - 1
5000
2000
3000
4000
E4
E2
L2
E5
Regio pouco, ou
no-expressa
aps a integrao
Regio interrompida
aps a integrao
403
Papillomaviridae
Tamanho
(aminocidos)
E1
605
E2
306
E4
120
E5
44
E6
137
E7
127
L1
495
L2
469
Funo
Em conjunto com a E2, a primeira protena a ser produzida.
uma helicase dependente de ATP que separa as cadeias do DNA
viral e age como fator de elongao na replicao do DNA. Atua
como protena regulatria de oncogenes virais.
Est envolvida tanto no controle da transcrio quanto na replicao
do DNA. Atua como protena regulatria de oncogenes virais.
404
5 O ciclo replicativo
5.1 Adsoro, penetrao
e desnudamento
A infeco pelo papilomavrus iniciada
com a adsoro dos vrions superfcie das clulas basais do epitlio. O receptor responsvel
pela ligao dos vrions uma molcula conservada, presente na membrana celular, porm a
sua identidade no conhecida. O vrus penetra,
provavelmente, por meio de endocitose e transportado pelo citoesqueleto em direo ao ncleo.
Durante essa etapa, ocorre a desestruturao e a
perda do capsdeo viral, processo ainda pouco
compreendido. Utilizando os poros nucleares, o
DNA viral penetra no ncleo da clula hospedeira.
Captulo 15
405
Papillomaviridae
6 Patogenia
Cada papilomavrus apresenta especicidade por uma nica espcie animal, na qual se
replica de forma produtiva. Alguns tipos virais
podem infectar uma segunda espcie animal.
Nesses casos, produzem uma infeco no-produtiva, ou seja, sem a produo de vrions infecciosos, como ocorre no sarcide eqino, que um
exemplo de infeco heterloga ocasionada pelos
BPV-1 e BPV-2.
Os papilomavrus so tambm tecido-especcos, com tropismo por clulas do epitlio
escamoso. Os receptores celulares responsveis
por esse tropismo ainda no so conhecidos, no
entanto, alguns tipos de papilomavrus apresentam tropismo pelo epitlio cutneo e outros pelo
epitlio mucoso. Outro aspecto importante que
os papilomavrus necessitam da diferenciao
celular do epitlio. Portanto, o cultivo em clulas indiferenciadas no pode ser realizado com
xito, visto que as clulas podem ser infectadas,
mas no ocorre a infeco produtiva. O ciclo de
replicao viral completado nos processos de
diferenciao das clulas epiteliais. Inicialmente,
o vrus infecta os queratincitos basais, provavelmente por meio de microleses; expressa parte
dos seus genes nas camadas basal e suprabasal;
replica o genoma viral na regio de diferenciao
das camadas espinhosa e granular; expressa os
genes estruturais e transfere o DNA para as clulas da camada escamosa, onde a prognie viral
nalmente liberada aps a descamao celular
normal do epitlio. Ou seja, as diferentes etapas
7 Patologia
A infeco pelo papilomavrus pode ocasionar alteraes na morfologia e funo celular.
Essas alteraes so reexos das mudanas genticas e siolgicas que se acumulam por longos
perodos de tempo, levando perda progressiva
do controle do ciclo celular, imortalizao celular
e transformao tumoral.
Nas clulas epiteliais transformadas, podem
ser observadas alteraes do tipo hiperplasia e
hipertroa. As clulas germinativas no so permissivas replicao viral e, ao se dividirem e se
deslocarem para a superfcie, disseminam o vrus
a todas as clulas irms que, ento, passam por
processos de transformao e de proliferao de
forma displsica, induzidos pelo vrus. A camada celular ca mais espessa, com clulas vacuolizadas, adquirindo a aparncia clssica de papiloma. Assim, o aspecto de verruga deve-se
proliferao e no destruio celular. medida
que as clulas infectadas passam pelo processo
de diferenciao e queratinizao, elas se tornam
permissivas replicao viral. Os vrions podem
reinfectar as clulas adjacentes, sendo esta a razo
pela qual os papilomas cutneos so contagiosos
e aparecem agrupados. A infeco de vrias clulas basais origina colnias celulares sobrepostas,
com a aparncia de verruga em forma de couve-or.
406
Captulo 15
Vrus introduzido
por microleses
Diferenciao dos
queratincitos
Replicao dos
papilomavrus
Estrato crneo
Camadas
granulares
Vrions maduros
Camadas
espinhosas
superiores
Camadas
espinhosas
inferiores
Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4
Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(subsitituem as
ampllficadoras)
Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)
8 Papilomavrus e tumores
A progresso neoplsica um processo sem
perspectiva para o vrus, visto que a clula transformada no mais permissiva maturao dos
vrions. O genoma viral incorporado pela clula,
mantido como um elemento extracromossmico,
com replicaes sincronizadas com o ciclo celular, ou pode at mesmo ser perdido pelas clulas
transformadas.
O papilomavrus est associado com neoplasias, incluindo carcinomas urogenitais e cncer do trato respiratrio superior em humanos,
cncer de pele em humanos e coelhos, cncer do
canal alimentar superior e de bexiga em bovinos,
407
Papillomaviridae
9 Diagnstico
A maioria das viroses pode ser diagnosticada por tcnicas tradicionais de Virologia, como
os cultivos celulares, a microscopia eletrnica ou
a sorologia. Entretanto, nenhum desses mtodos
rotineiramente utilizado para a deteco do papilomavrus.
A histologia possibilita a identicao de
neoplasia intra-epitelial, que pode estar associada com vrus de potencial oncognico e que so
de risco para a progresso do cncer. Por meio
da histologia, no possvel identicar o tipo de
papilomavrus associado com o efeito citoptico.
A interpretao histolgica tambm dicultada
quando as alteraes vrus-associadas so mnimas, alm de no permitir a identicao de infeco latente.
A tcnica de imunoistoqumica um mtodo com baixa sensibilidade e especicidade e que
exige a presena de grande concentrao de protenas virais. Apesar de ainda estar sob avaliao,
a sorologia para o diagnstico de rotina do HPV
tem mostrado algumas vantagens. No momento,
a tcnica de VLP-ELISA (ensaio imunoenzimtico com partculas semelhantes a vrus) ainda
apresenta baixa especicidade e sensibilidade.
A impossibilidade do cultivo dos papilomavrus em sistemas in vitro de cultivos celulares
tem direcionado o desenvolvimento de tcnicas de diagnstico baseadas na identicao do
DNA viral. As principais tcnicas utilizadas para
10 Imunologia
As leses benignas produzidas na infeco
cutnea e mucosa pelo papilomavrus apresentam
tendncia de regresso espontnea. No entanto,
algumas infeces com curso clnico prolongado
e que determinam leses extensas podem, ocasionalmente, progredir para o cncer.
Infeces pelo papilomavrus, ocasionando
leses benignas, podem ser encontradas tanto
em animais imunossuprimidos quanto imunocompetentes. Casos de papilomatose persistente
geralmente so observados em animais imunossuprimidos. Um grande nmero de animais com
408
papilomatose em um rebanho pode estar relacionado com fatores qumicos ou mecanismos imunomodulados, que podem ativar o vrus latente. A relao entre o nmero de clulas CD4+ e
CD8+ no sangue perifrico de animais infectados
com o papilomavrus signicativamente menor
quando comparada com animais no-infectados,
sugerindo uma depleo linfocitria.
A maior susceptibilidade de animais jovens
infeco pelo papilomavrus deve-se falta de
reconhecimento do patgeno pelo sistema imune. Aps a infeco primria, os animais tornamse menos susceptveis ou mesmo resistentes a
novas infeces.
A regresso e o desaparecimento de leses
benignas apresentam evidncias do desenvolvimento de imunidade sistmica, uma vez que
todas ou a maioria das leses regridem simultaneamente. Aps o desaparecimento das leses,
ocorre um perodo de resistncia reinfeco
pelo mesmo tipo viral que ocasionou as leses.
Entretanto, outro tipo viral pode produzir nova
infeco com a produo de leses. A imunidade
reinfeco mediada por anticorpos neutralizantes produzidos contra as protenas do capsdeo viral, principalmente contra a protena L1. A
imunidade humoral tem importncia na preveno de infeco, mas no efetiva para a regresso das leses.
Anticorpos contra as protenas iniciais E1 e
E2 (encontradas no incio da infeco e responsveis pelos eventos primrios da replicao viral)
e contra E6 e E7 (que so protenas envolvidas na
transformao celular), so detectados em diferentes estgios da infeco. Os anticorpos contra
E1 e E2 permanecem constantes e os anticorpos
contra E6 e E7 declinam mais tardiamente.
A regresso dos papilomas se deve a eventos celulares da imunidade, onde so encontrados
inltrados de linfcitos T nas leses em processo
de regresso. Os tipos celulares (CD8+/CD4+),
predominantes nas diferentes camadas celulares
do epitlio, podem variar de acordo com o tipo
de papilomavrus envolvido na infeco.
Por m, deve-se, ainda, considerar que aspectos genticos, nutricionais e imunolgicos
relacionados ao hospedeiro e caractersticas pr-
Captulo 15
11 Imunoprofilaxia
As pesquisas de vacinas contra o papilomavrus so prejudicadas pela incapacidade do
vrus de replicar em cultivos celulares e tambm pela diculdade de adaptao em cultivos
de tecidos. Os primeiros estudos realizados com
vacinas contra os diferentes tipos de papilomavrus bovino foram realizados na dcada de 1990,
quando se sugeriu a existncia de imunidade
tipo-especca para esse vrus.
Sucessos na prolaxia e na regresso de
tumores epidermais e do trato digestrio foram
obtidos em bovinos, tanto utilizando vacinas
convencionais quanto vacinas produzidas por
engenharia gentica. Inicialmente, dois tipos de
vacinas foram considerados: vacinas prolticas,
que induziriam anticorpos vrus-neutralizantes
prevenindo a infeco, e vacinas teraputicas,
que promoveriam a regresso das leses j estabelecidas, antes que a progresso maligna tivesse
incio.
Diferentes estratgias para a elaborao de
vacinas tm sido utilizadas para o controle da infeco pelo papilomavrus, destacando-se entre
elas: a) vacina autgena, preparada a partir de
macerado de papilomas cutneos do animal de
origem. Esse tipo de vacina tem sido utilizado em
bovinos, caninos e coelhos, e experimentos controlados indicam um efeito positivo na regresso
das leses; b) extratos heterlogos de papilomas
cutneos, semelhantes a vacinas autgenas, preparados a partir de leses obtidas de diversos
animais; c) vacina de vrus puricado. Este foi o
primeiro tipo de vacina testada em bovinos e protege contra subseqentes desaos com vrus homlogos; d) protenas recombinantes expressas
em bactrias induzem a formao de anticorpos
neutralizantes produzidos contra epitopos conformacionais. Como vacina proltica, utiliza-se
a protena L1 do capsdeo viral; e, para a regresso
tumoral, so utilizadas as protenas iniciais E1,
E2, E6 e E7. Para o BPV-4, a vacina com a protena
Papillomaviridae
12 Doenas de importncia em
medicina veterinria causadas por
papilomavrus
12.1 Papilomatose
A papilomatose cutnea caracterizada pela
formao de tumores benignos no epitlio cutneo e mucoso de vrias espcies animais, destacando-se as domsticas (bovinos, ovinos, sunos, eqinos e caninos), de laboratrio (coelhos
e hamsters), selvagens (ursos, alces), mamferos
aquticos (golnhos, peixes-boi), outros animais
aquticos (tartarugas marinhas), aves (papagaios)
e tambm os seres humanos.
A papilomatose cutnea geralmente acomete indivduos jovens e/ou imunocomprometidos.
Os papilomas cutneos podem ser encontrados
em diversas localizaes anatmicas e com os
mais variados tamanhos e morfologias, incluindo
desde papilomas planos at em forma de gro
de arroz e couve-or.
A papilomatose bovina uma enfermidade
infecto-contagiosa de grande importncia na pecuria mundial, tanto para as exploraes leiteiras quanto de corte. A enfermidade pode causar
409
prejuzos econmicos considerveis, destacandose a reduo no consumo de alimentos e conseqente perda de peso e/ou queda na produo
de leite, predisposio a mastites e a outras infeces secundrias e reduo na qualidade do couro. Os prejuzos esto intimamente relacionados
com a localizao anatmica e extenso das leses
encontradas. Surtos de papilomatose cutnea bovina com prevalncias variadas so relatados em
diversos estados brasileiros.
O BPV-1 causa bropapilomas em tetos, pnis e em outras localizaes anatmicas; o BPV-2
tambm causa bropapilomas em diversas localizaes anatmicas, inclusive no esfago e rmen.
Alm disso, responsvel pelo desenvolvimento
de papilomas cutneos comuns. Em associao
com a ingesto crnica de samambaia (Pteridium
aquilinum), o BPV-2 tambm implicado na etiologia da hematria enzotica bovina; o BPV-3
tem sido isolado de papilomas cutneos comuns;
o BPV-4 tambm isolado de leses cutneas e,
quando em associao ao consumo crnico de
samambaia, pode causar tumores no trato digestrio superior, popularmente conhecidos como
caraguat; o BPV-5 causa bropapilomas em
forma de gro de arroz no bere e tetos; e o BPV6 tambm o agente etiolgico de papilomas
localizados na glndula mamria. Em 2007, no
Japo, foram descritos dois novos tipos de BPV
(BPV-7 e BPV-8) em leses cutneas, ainda no
classicados em nvel de espcie.
A papilomatose eqina um distrbio dermatolgico no muito comum, causada pelo papilomavrus eqino tipo 1 (EqPV-1). A infeco
geralmente autolimitante e caracterizada por
pequenas leses localizadas na regio da cabea
e pescoo. Mais comum que a papilomatose cutnea em eqinos a infeco heterloga de eqinos com o BPV-1 ou BPV-2, resultando na produo do sarcide eqino. Essa infeco, mesmo
no sendo produtiva, promove o aparecimento
de grandes massas tumorais. O tratamento pode
ser realizado por extirpao cirrgica ou com
produtos imunoestimulantes, tais como a aplicao intralesional de BCG. A papilomatose ovina,
causada pelo OvPV-1 e OvPV-2, no uma doena de importncia econmica, ocorre em uma pequena parcela da populao ovina e no provoca
leses extensas.
410
A papilomatose suna ocorre com maior freqncia na bolsa escrotal e interfere com a libido,
tanto pela dor localizada quanto pela presena de
aderncias. O agente etiolgico da papilomatose
suna ainda no foi caracterizado.
A papilomatose canina pode ser encontrada
sob duas formas. A primeira e mais importante
a forma oral, conhecida como papilomatose oral
canina. Essa forma ocasionada pela infeco
com o COPV, e caracteriza-se pelo aparecimento
de pequenos papilomas pedunculados (1-2 cm de
comprimento) na cavidade oral, podendo estender-se desde a gengiva at o palato. Os animais
podem apresentar tambm leses ao redor da
boca e olhos. As implicaes dessa forma de papilomatose so: a diculdade de alimentao e o
mal-estar. A segunda forma, menos comum, a
papilomatose cutnea propriamente dita, causada pelo CPV-1. Essa infeco pode causar leses,
geralmente em pequeno nmero, distribudas em
vrias regies do corpo do animal.
Captulo 15
411
Papillomaviridae
13 Bibliografia consultada
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412
Captulo 15
ADENOVIRIDAE
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato dos Santos Costa
16
1 Introduo
415
2 Classificao
415
417
4 Replicao
419
5 O ciclo replicativo
419
421
421
422
426
427
427
428
428
428
428
429
7 Bibliografia consultada
430
1 Introduo
A famlia Adenoviridae abriga um grupo de
vrus icosadricos grandes, sem envelope, com
genoma DNA de ta dupla linear. A denominao dessa famlia originou-se do primeiro vrus
do grupo, que foi isolado a partir de explantes
de glndulas adenides humanas em 1953. No
ano seguinte, o primeiro adenovrus de interesse
veterinrio foi isolado de casos de hepatite canina. Desde 2002, o International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) classica os membros da
famlia em quatro gneros: Mastadenovirus, Aviadenovirus, Atadenovirus e Siadenovirus.
A partir do primeiro isolado, o vrus serviu
de modelo para estudos de composio e organizao estrutural dos capsdeos com simetria
icosadrica. Alm disso, os adenovrus tambm
foram os primeiros modelos para a descrio das
interaes entre vrus e receptores celulares, em
estudos de cristalograa.
O conhecimento acerca da estrutura e organizao dos vrions e do genoma favoreceu a utilizao desses vrus como vetores de expresso
e viabilizou a produo de vrus quimricos, em
esforos para o desenvolvimento de vacinas noconvencionais, assim como para a terapia gentica. Alm disso, esses conhecimentos impulsionaram o desenvolvimento de mtodos baseados
em DNA desnudo, pois foi demonstrado que o
sucesso desta abordagem estava associado com a
ecincia da introduo articial do genoma nas
clulas hospedeiras. A exemplo do primeiro isolado, a maioria dos adenovrus est envolvida em
infeces respiratrias, mas esses vrus podem
tambm estar associados com infeces do trato
digestivo, de clulas parenquimatosas do fgado
e de clulas endoteliais, com diferentes nveis de
patogenicidade em vrias espcies.
Alguns membros da famlia possuem impacto na medicina veterinria. Como exemplo,
pode-se citar o adenovrus canino (CAdV), que
apresenta dois representantes: o CAdV-1 e o
CAdV-2. O primeiro o agente causal da hepatite
infecciosa canina, e o segundo est envolvido na
etiologia de uma doena respiratria multicausal, conhecida como tosse dos canis. Alm destes,
2 Classificao
Seguindo os critrios de classicao preconizados pelo ICTV, os adenovrus so agrupados
de acordo com vrias caractersticas, que incluem
a morfologia do vrion, estrutura e organizao
do genoma, replicao, reatividade antignica e
propriedades biolgicas. So reconhecidos quatro gneros na famlia Adenoviridae: Mastadenovirus (com 25 espcies, das quais 20 ocialmente
aceitas e cinco em estudo), Avianadenovirus (nove
espcies, seis aceitas), Atadenovirus (sete espcies,
uma aceita) e Siadenovirus (duas espcies). Vrias
dessas espcies apresentam isolados que podem
ser diferenciados entre si em sorotipos, de acordo
com a reatividade sorolgica.
Uma lista das espcies j descritas em animais est apresentada na Tabela 16.1. Existe um
consenso, no entanto, que essa lista provavelmente subestimada, com base no nmero de isolados j identicados em humanos. Seis espcies
de adenovrus j foram descritos em humanos
(adenovrus humano tipo A at F), abrangendo
mais de 50 sorotipos.
As caractersticas genmicas e antignicas
podem ser complementares e, algumas vezes,
resultam em novas classicaes e agrupamentos de vrus, inclusive em novos gneros, como o
Atadenovirus e Siadenovirus. O gnero Atadenovirus, que possui como prottipo o adenovrus ovino 287 (adenovrus ovino tipo D) foi criado, agrupando tambm vrus de bovinos anteriormente
classicados como Mastadenovirus e com vrus
de origem aviria, como o vrus da sndrome da
queda de postura (adenovrus de patos tipo A),
classicado anteriormente como Aviadenovirus.
Essa nova classicao baseada principalmente
em diferenas na organizao genmica e na similaridade do gene que codica a protena hexon
desses vrus.
416
Captulo 16
Gnero Mastadenovirus
Gnero Aviadenovirus
Gnero Atadenovirus
Gnero Siadenovirus
Abreviatura
Enfermidade/hospedeiro
Adenovrus bovino
(3 espcies)
CAdV-1
CAdV-2
Adenovrus eqino
(2 espcies)
EAdV-A, EAdV-B
Adenovrus ovino
(3 espcies)
Adenovrus suno
(3 espcies)
Adenovrus caprino
(Proposto)
GAdV-A
Adenovrus avirio
(5 espcies)
Adenovrus de
gansos
GoAdV
Adenovrus bovino
(2 espcies)
BAdV-D, BAdV-E
Adenovrus cervdeo
DeAdV
Adenovrus de patos A
DAdV-A
Adenovrus ovino D
OAV-D
Adenovrus de perus A
TAdV-A
Adenovrus canino
417
Adenoviridae
As propriedades sorolgicas foram as primeiras utilizadas para a classicao dos adenovrus que apresentam caractersticas peculiares.
Por exemplo, alguns determinantes antignicos
presentes na regio interna dos hexons determinaram a classicao em gneros. H epitopos
presentes nos pentons, localizados nos vrtices
do capsdeo icosadrico, que tambm denem
a especicidade de gneros. A classicao em
sorotipos determinada pela reatividade com
anticorpos neutralizantes e tambm com anticorpos inibidores da hemaglutinao. Os epitopos
envolvidos com essas propriedades esto localizados na superfcie dos hexons e bras. Uma caracterstica interessante que anticorpos contra
os epitopos localizados na bra e no seu boto
terminal possuem fraca atividade neutralizante. Assim, a determinao estrutural sorolgica
da famlia baseada na dominncia relativa de
alguns determinantes, dependendo dos testes
utilizados, mais do que na sua localizao nos
vrions.
B
Ncleo
PT
V
VII
X
DNA
Capsdeo
III
II
IV
IIIa
VIII
VI
IX
Figura 16.1. Estrutura dos vrions da famlia Adenoviridae. A) Microscopia eletrnica de um adenovrus.
Representao esquemtica de uma partcula vrica com os seus constituintes.
418
Captulo 16
Leader:
2 i
3
x y
z
L5
L4
ML
L3
L2
E3 (tardio)
L1
IX
E1B
VA
E3
E1A
10
L1 (iniciais)
20
30
40
50
60
70
80
90
100
E2A
E2B
IV a2
E4
Figura 16.2. Representao grfica da organizao genmica e dos transcritos dos adenovrus. Os transcritos iniciais
so designados E (early), e os transcritos tardios so denominados L (late). Cada seta representa um mRNAs diferente
produzido a partir da transcrio e processamento dos transcritos primrios.
419
Adenoviridae
4 Replicao
Os adenovrus possuem representantes em
vrias espcies de hospedeiros. A replicao do
genoma desses vrus ocorre no ncleo das clulas
hospedeiras e resulta na produo de corpsculos de incluso basoflicos. Em geral, a replicao in vivo associada aos sistemas respiratrio
ou gastrintestinal, mas outros tecidos e clulas
tambm podem ser envolvidos. A replicao dos
adenovrus pode interferir ou modular a resposta imunolgica do hospedeiro, podendo resultar
em infeces persistentes e oportunistas.
Vrios adenovrus so capazes de produzir
tumores quando inoculados experimentalmente
em hamsters recm-nascidos, porm ainda no foram descritos como agentes de tumores em seus
hospedeiros naturais. Os adenovrus geralmente
replicam em altos ttulos em clulas primrias e
linhagens celulares, independentemente da fase
do ciclo celular. A replicao acompanhada por
alteraes na siologia celular e produo de efeito citoptico (ecp), culminando com a lise celular,
que necessria para a liberao dos vrions.
As linhagens celulares utilizadas para amplicao dos adenovrus in vitro geralmente so
espcie-especcas. O CAdV replica em clulas
da linhagem MDCK (Madin Darby canine kidney);
enquanto o adenovrus eqino amplicado em
clulas primrias de rim, pulmo e ovrio de
eqinos. O vrus da sndrome de queda de postura de galinhas (adenovrus de patos tipo A) re-
5 O ciclo replicativo
A interao inicial dos vrions com a superfcie das clulas-alvo ocorre pela ligao das extremidades globulares das bras dos pentons com
os receptores celulares, que so molculas de
integrinas especcas. Essas integrinas so denominadas receptores de adenovrus e vrus Coxsackie (CAR) e so os receptores para os adenovrus
humanos mais estudados. Existem aproximadamente 105 molculas de receptores na superfcie
de cada clula. A ligao inicial aos receptores
seguida por uma segunda interao, entre a base
da protena penton e um co-receptor presente na
membrana plasmtica, pertencente famlia das
integrinas. Uma delas seria a vitronectina.
A internalizao do complexo vrion/receptor ocorre por endocitose dependente de clatrina.
As vesculas endocticas so transportadas em
direo ao ncleo. Durante o trnsito, ocorre a reduo gradativa do pH no interior das vesculas.
A reduo no pH promove alteraes na estrutura da partcula viral, a desintegrao do capsdeo
e a liberao do genoma associado com protenas.
H evidncias de que o transporte para o ncleo
da clula mediado pelos hexons, que se associariam aos microtbulos celulares. A desintegrao
completa das partculas ocorre nas proximidades
dos poros nucleares, atravs dos quais o genoma,
ainda associado com algumas protenas, translocado para o interior do ncleo. Entre a ligao
dos vrions aos receptores at a penetrao do genoma no ncleo podem transcorrer aproximadamente duas horas.
A transcrio dos genes virais realizada
pela RNA polimerase II e fatores celulares, que
reconhecem mltiplos promotores dos genes
iniciais e intermedirios, alm de um promotor
que controla a expresso dos genes tardios. Esses
genes esto distribudos nas duas tas do DNA
genmico do vrus (Ver Figura 16.2).
420
Os produtos dos genes de expresso imediata (E1A) esto envolvidos no controle do ciclo
celular, pela expresso de fatores de transcrio
e de replicao do DNA viral, promovendo um
ambiente favorvel para a replicao do vrus.
Nesta regio genmica, encontram-se os genes
que modulam a resposta imune inata do hospedeiro e o ciclo celular, interferindo na atividade
de interleucinas, como o fator de necrose tumoral
(TNF), na produo de molculas do complexo
de histocompatibilidade maior tipo 1 (MHC-I)
ou, ainda, no mecanismo de induo da apoptose. As interaes dos adenovrus com as clulas
hospedeiras, especialmente na regulao do ciclo
celular e no antagonismo da resposta imunolgica, foram tratadas com maior profundidade no
captulo referente replicao dos vrus DNA
(Captulo 6).
Na regio E2, esto presentes os genes cujos
produtos esto envolvidos na replicao do DNA
viral, como as protenas de ligao s tas simples de DNA, que esto associadas aos complexos de replicao; e tambm a DNA polimerase
viral. A protena precursora da protena terminal
(pTP), que se encontra ligada covalentemente s
extremidades do genoma viral, tambm pertence a este grupo de genes. Acredita-se, ainda, que
a pTP tambm esteja associada ao processo de
morfognese dos vrions.
A regio E3 do genoma dos adenovrus possui genes que codicam fatores de virulncia.
Um dos principais produtos um polipeptdeo
de 19 kDa que se liga cadeia pesada do complexo maior de histocompatibilidade I (MHC-I),
provocando a sua reteno em compartimentos
intracelulares e reduzindo a sua expresso na superfcie celular. Como conseqncia, ocorre uma
reduo na capacidade dos linfcitos T citotxicos
reconhecerem e destrurem clulas infectadas pelos adenovrus. Outro produto dessa regio (14,5
kDa) inibe a cascata de eventos ativados pelo fator de necrose tumoral (TNF), que promove a lise
de clulas infectadas. Finalmente, os produtos da
regio E4 esto envolvidos na regulao da replicao viral e do ciclo celular.
Aps a expresso dos genes iniciais, a prxima fase do ciclo replicativo a replicao do
Captulo 16
421
Adenoviridae
Segunda
etapa
Primeira
etapa
Tp
5
3
3
5
Tp
.pTp
OH
3
.pTp
OH
-OH
-OH
Lineariza
3
5
3
5
5
3
Circulariza
5
3
3
5
3
5
Figura 16.3. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada, de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. A cadeia no-replicada circulariza para a
formao de uma nova origem de replicao. A replicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao longo da
cadeia, que, em seguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNA esto
replicadas.
422
Captulo 16
1
Citoplasma
2
H+
H+
H+
H+
8
5
11
Egresso por
lise celular
10
Ncleo
Figura 16.4. Representao esquemtica do ciclo de replicao dos adenovrus. O vrion se liga a receptores
especficos na membrana plasmtica (1) e internalizado por endocitose mediada por clatrina (2). A acidificao
progressiva do interior do endossoma (3) leva desestruturao da partcula vrica e liberao do genoma prximo
aos poros nucleares (4). A translocao do genoma para o ncleo seguida da transcrio dos genes iniciais (5), cujos
mRNAs so traduzidos nos ribossomos (6), resultando em protenas que atuam na replicao do genoma (7). Aps a
replicao do genoma, so transcritos os genes tardios (8), cujos mRNAs so traduzidos nas protenas estruturais (9),
que penetram no ncleo e, juntamente com as cpias do DNA genmico recm-produzidas, participam da
morfognese das partculas vricas (10). A prognie viral liberada por lise celular (11).
Adenoviridae
6.1.1.1 Epidemiologia
O vrus excretado nas secrees e excrees dos ces infectados. A excreo pela urina
pode persistir por mais de seis meses aps a recuperao clnica, e estes animais so a principal
fonte de disseminao do CAdV-1. Os animais
susceptveis adquirem a infeco pelo contato
direto, pela via oronasal ou conjuntival; ou indireto, a partir de fmites contaminados. Alm dos
ces domsticos, as raposas e outros candeos silvestres so susceptveis infeco pelo CAdV-1,
e so considerados potenciais reservatrios do
vrus.
A infeco pelo CAdV-1 tem sido descrita
em vrios pases europeus, nos EUA e tambm
no Brasil. Acredita-se que esse agente apresente
distribuio mundial. No entanto, a utilizao
massiva de vacinas contra o CAdV a partir da dcada de 1960, aliada com proteo cruzada por
anticorpos decorrentes da infeco natural pelo
CAdV-2, tm reduzido a ocorrncia de casos da
HIC em populaes caninas de vrias partes do
mundo. Estudos prvios ao uso extensivo de
vacinas em vrios pases (Alemanha, pases escandinavos, EUA e Japo) demonstraram que a
prevalncia de anticorpos contra o CAdV variava
entre 30 e 60% entre os ces testados. Um estudo
sorolgico realizado, em 2006, com ces sem histrico de vacinao em Santa Maria, Rio Grande
do Sul, revelou 43% (353/817) de amostras positivas.
423
424
Captulo 16
Exposio ao vrus
Dias
Endotlio
Imunocomplexos
Edema de crnea
uvete
Rins
Fgado
Endotlios dos
demais rgos
Ttulo de anticorpos
Baixo
Hepatite aguda
Alto
Infeco Imunocomplexos
inaparente Glomerulonefrite
Necrose
centrolobular
Complicaes
oculares
Coagulao intravascular
disseminada (CID),
Falncia mltipla de rgos
bito
Nefrite
intersticial
bito ou
recuperao
Hepatite
crnica
Figura 16.5. Achados clnicos e laboratoriais em casos de hepatite infecciosa canina. As barras horizontais
correspondem ocorrncia cronolgica e durao dos respectivos achados clnicos e laboratoriais.
425
Adenoviridae
A uvete anterior e o edema de crnea, tambm conhecidas como olho azul, podem ser as
nicas alteraes clnicas observadas em ces
com infeces inaparentes (Figura 16.5). O edema
de crnea pode ser acompanhado por dor ocular,
blefaroespasmo e fotofobia. As leses oculares
geralmente so brandas, com resoluo espontnea aps duas a trs semanas. Em casos mais
severos, podem ocorrer glaucoma e/ou lcera de
crnea. O surgimento das alteraes oculares so
um indicativo de que o animal apresenta resposta imunolgica contra o vrus, e pode ser considerado um indicativo de bom prognstico. Essas
alteraes ocorrem pela deposio de complexos
imunes no endotlio vascular do corpo ciliar.
Corpsculos de incluso podem ser observados nos tecidos-alvo de replicao viral. As incluses no ncleo dos hepatcitos so estruturas
arredondadas, escuras, circundadas por um halo
claro, resultante da migrao da cromatina e do
nuclolo para a periferia nuclear. As incluses
tambm podem ser encontradas no encfalo de
ces que morrem com sinais de encefalite e nas
clulas do epitlio tubular renal de ces com nefrite por deposio de complexos imunes.
6.1.1.3 Diagnstico
Os achados clnicos e de patologia clnica
no so patognomnicos para a hepatite infecciosa canina. Os achados hematolgicos iniciais
so de leucopenia, neutropenia e linfopenia, pela
infeco dos linfonodos e da medula ssea. Durante a fase de recuperao, geralmente ocorrem
neutrolia e linfocitose (Figura 16.6). Trombocitopenia com ou sem alterao da funo plaquetria ocorrem freqentemente.
Pirexia
Leucopenia
Linfocitose
Neurotrofilia
ALT
FA
Coagulopatia
Proteinria
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Dias a partir do incio da infeco
426
Captulo 16
427
Adenoviridae
428
6.5.1 Aviadenovirus
A infeco de aves pelos aviadenovirus cursa
principalmente com manifestaes respiratrias e
digestivas. A etiopatogenia dessas doenas pode
estar relacionada com infeces concomitantes
com outros vrus, como o birnavrus (doena de
Gumboro) ou o circovrus (vrus da anemia infecciosa).
Captulo 16
Dentre as infeces respiratrias por adenovrus em aves, destaca-se a bronquite das codornas, produzida pelo adenovrus avirio A (Fowl
adenovirus A; FAdV-A). A infeco de codornas
jovens pelo FAdV-A pode resultar em mortalidade de 100%. No entanto, as taxas de mortalidade
em aves com mais de quatro semanas de idade
so reduzidas para menos de 25%. A infeco
tambm pode produzir enterite e diarria. Os
sinais clnicos so mais freqentes nas codornas
de cabelo branco (Colinus virgianianus) e nas codornas japonesas (Coturnix coturnix japonica). Os
efeitos so devastadores e podem inviabilizar a
criao aps a ocorrncia de surtos. As aves que
se recuperam da infeco desenvolvem imunidade duradoura. O controle da enfermidade baseiase em medidas preventivas, destinadas a evitar a
introduo do vrus na criao, como a quarentena de aves a serem introduzidas e desinfeco
das instalaes.
O diagnstico pode ser realizado pelo isolamento do vrus do trato respiratrio e do intestino de aves durante a infeco aguda.
Cinco adenovrus avirios tm sido associados com surtos de doena em frangos (FAdV
tipos A, B, C, D e E). Essas epidemias se caracterizam por mortalidade elevada, podendo atingir at 30%. O curso da doena de trs a quatro
dias e caracteriza-se por hepatomegalia e hemorragias. A hepatite pode ser demonstrada pela
presena de corpsculos de incluso intranucleares eosinoflicos e material granular e brilar. A
infeco pelos adenovrus avirios A ou B (Fowl
adenovirus B; FAdV-B) pode ocorrer concomitantemente com a infeco pelo birnavrus ou pelo
circovrus.
6.5.2 Siadenovirus
Apenas uma espcie de siadenovirus tem
sido associada com enfermidade em aves, o adenovrus de perus A (Turkey adenovirus A; TAdVA). Essa espcie de vrus possui trs membros
que infectam aves: o adenovrus de perus tipo 3
(Turkey adenovirus 3; TAdV-3), o adenovrus de
faises (Pheasant adenovirus 1; PAdV-1) e o vrus
da enterite hemorrgica dos perus (Turkey haemorrhagic enteritis virus; THEV). Esses vrus esto
429
Adenoviridae
associados com trs sndromes distintas: a esplenomegalia dos frangos de corte (TAdV-3), a doena do bao marmreo dos faises (PAdV-1) e a
enterite hemorrgica dos perus (THEV).
Em faises, a doena do bao marmreo acomete aves com 12 a 32 semanas. Em frangos, a esplenomegalia geralmente se desenvolve em aves
com mais idade. A enterite hemorrgica acontece
em perus com idade superior a quatro semanas,
com maior freqncia entre as sete e nove semanas. Aparentemente, as aves mais jovens so
mais resistentes.
Os sinais comuns s infeces por esses trs
agentes incluem depresso, diarria hemorrgica
e morte, geralmente uma semana aps a infeco. Existem evidncias de imunossupresso. O
curso da doena em perus pode ser de 10 dias,
apresentando-se de forma aguda ou superaguda.
A mortalidade pode atingir 60% em perus; 20%
em faises e at 10% em frangos, dependendo do
isolado do vrus. A principal forma de transmisso desses vrus a horizontal, pela via fecal-oral,
no existindo evidncias de transmisso vertical.
As leses no bao dos faises so consideradas patognomnicas, com hiperplasia retculoendotelial e a presena de corpsculos de incluso intranucleares nas clulas. Esplenomegalia,
edema pulmonar e congesto com contedo hemorrgico nos intestinos podem ser observados
na necropsia. Os corpsculos de incluso podem
ser detectados tambm em linfcitos B e em clulas mononucleares.
O diagnstico da infeco pode ser realizado
pelo isolamento dos TAdV-A aps a inoculao
de material suspeito em clulas linfoblastides ou
por inoculao de perus com cinco a dez semanas
de idade (para o THEV). Antgenos virais podem
ser detectados por IFA no bao, no intestino e em
rgos linfides. As tcnicas de ELISA e IDGA
podem ser utilizadas para deteco de antgenos
em macerados de tecidos. A tcnica de PCR tem
sido descrita para a deteco do genoma viral em
amostras de tecidos. A sorologia pareada pode
tambm ser empregada, podendo ser utilizadas
as tcnicas de HI ou SN.
O controle baseado principalmente na vacinao. Existe uma vacina atenuada disponvel
para faises e perus. Essa vacina fornecida na
6.5.3 Atadenovirus
A infeco mais importante por adenovrus
em frangos a causada pelo adenovrus de patos
A (Duck adenovirus A, DAdV-A). Alm de frangos, esse vrus produz infeces em patos e gansos. A doena causada pelo DAdV-A conhecida
como sndrome da queda da postura (EDS, egg
drop syndrome) ou EDS-76, em referncia ao ano
do primeiro diagnstico realizado na Irlanda do
Norte e Holanda, em 1976. Nesse mesmo ano, a
doena foi descrita em aves reprodutoras do Rio
Grande do Sul. As aves afetadas apresentaram
queda de postura aps a aplicao de vacinas
contra a doena de Marek, importadas, e que haviam sido produzidas em embries de pato.
Atualmente, a infeco encontra-se disseminada mundialmente. A disseminao ocorreu
principalmente por transmisso vertical a partir
de reprodutoras infectadas e/ou pela utilizao
de vacinas contaminadas. Na Amrica do Norte,
onde no houve a utilizao de vacinas contaminadas, o impacto econmico foi menor. No
obstante, neste continente, o vrus j foi isolado
de patos e gansos selvagens. Os vrus isolados de
pintos e patos da Europa apresentam maior virulncia se comparados com aqueles isolados de
patos nos EUA.
Tem sido observada uma associao da doena com matrizes de ovos marrons em comparao com matrizes poedeiras de ovos brancos,
e o primeiro sinal observado a despigmentao
dos ovos. A maioria dos pases desenvolvidos
conseguiu a erradicao do vrus de criaes comerciais de aves reprodutoras.
A principal forma de transmisso do DAdVA a vertical, e a fmea geralmente permanece
soronegativa at o incio da postura. A transmisso horizontal, pela via orofecal, tambm pode
ocorrer, porm a disseminao do vrus lenta.
As aves positivas no transmitem o vrus aps a
45 semana de idade. A transmisso pode ocorrer entre galinhas, entre patos e entre gansos por
430
Captulo 16
desenvolvem anticorpos at o incio da fase reprodutiva. Portanto, aves positivas para o vrus
podem ser soronegativas; e a deteco de anticorpos deve ser realizada principalmente aps o
pico da postura.
A eliminao de matrizes positivas o mtodo denitivo para a erradicao da infeco
das criaes. Pode-se tambm recorrer a mtodos
mais conservadores, como a incubao somente
de ovos de reprodutoras com idade superior a 45
semanas. A vacinao de lotes realizada com vacina inativada (adjuvante oleoso) e deve ser realizada antes da 18 semana de idade. Essa doena
tem sido eliminada em alguns pases mediante a
preveno do contato de frangos com aves aquticas, pela desinfeco regular dos equipamentos
e pela clorao da gua de bebida.
7 Bibliografia consultada
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HERPESVIRIDAE
Ana Cludia Franco1 & Paulo Michel Roehe
17
1 Introduo
435
2 Classificao e nomenclatura
435
436
436
436
438
438
4.1 O ncleo
4.2 O capsdeo
4.3 O tegumento
4.4 O envelope
4.5 O genoma
5 Replicao
5.1 O ciclo replicativo
5.2 Infeco latente
440
441
445
447
447
447
454
457
459
463
465
465
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467
467
472
472
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476
478
478
479
479
7 Bibliografia consultada
481
481
484
485
1 Introduo
A palavra herpes origina-se da palavra grega herpein, que signica rastejar ou rastejamento.
Esta palavra est relacionada com as primeiras
observaes das leses causadas por vrus desta
famlia, leses que pareciam rastejar na superfcie da pele das pessoas afetadas. Alm desta,
outra propriedade muito importante apresentada por, virtualmente, todos os herpesvrus a capacidade de causarem infeces inaparentes ou
latentes. Assim, uma vez infectado por um herpesvrus, o hospedeiro permanece portador do
vrus na forma latente. A latncia caracterizada
pela ausncia de replicao viral e de sinais clnicos, e dura toda a vida do hospedeiro. Durante
esse perodo, o animal pode no apresentar sinais
clnicos e raramente excreta o vrus. No entanto,
a infeco latente pode ser ocasionalmente reativada por situaes de estresse, ocasies em que
o vrus re-excretado pelo hospedeiro e pode se
disseminar para indivduos susceptveis.
Os herpesvrus so muito antigos e, aparentemente, vm co-evoluindo com os seus hospedeiros h quase um bilho de anos. As vrias semelhanas observadas na estrutura de diferentes
herpesvrus sugerem que eles tenham surgido de
um ancestral comum, que parece ter dado origem
a duas linhagens: uma representada pelo herpesvrus alfa, beta e gama, que infectam aves e mamferos; e a outra representada pelos herpesvrus de animais de sangue frio. Estudos genticos
sugerem que os herpesvrus evoluram paralelamente aos seus hospedeiros, o que explica o alto
nvel de adaptao observado entre esses agentes
e os seus hospedeiros naturais.
A capacidade dos herpesvrus de causar infeces latentes duradouras nos seus hospedeiros
naturais, sem causar doena grave ou mortalidade, possibilita a transmisso viral entre hospedeiros de forma altamente ecaz. Esse no o
caso das infeces de hospedeiros acidentais, aos
quais os herpesvrus no se encontram to bem
adaptados. Nesses casos, infeces fatais podem
ocorrer, como nas infeces de bovinos e ces
com o herpesvrus suno tipo 1 (SuHV-1).
Os herpesvrus esto amplamente distribudos na natureza. A maioria das espcies animais
2 Classificao e nomenclatura
Os membros da famlia Herpesviridae so
classicados em trs subfamlias, de acordo com
suas propriedades biolgicas: Alphaherpesvirinae,
Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae. Alm des-
436
Captulo 17
437
Herpesviridae
Subfamlia
Gnero
Varicellovirus
Alphaherpesvirinae
Simplexvirus
Espcie
Enfermidade
Herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1)
Rinotraquete infecciosa
bovina/vulvovaginite pustular
infecciosa/balanopostite pustular
infecciosa, abortos.
Herpesvrus bovino
tipo 2 (BoHV-2)
Herpesvrus bovino
tipo 5 (BoHV-2)
Herpesvrus canino
tipo 1 (CaHV-1)
Herpesvrus caprino
tipo 1 (CpHV-1)
Herpesvrus eqino
tipo 1 (EHV-1)
Herpesvrus eqino
tipo 3 (EHV-3)
Herpesvrus eqino
tipo 4 (EHV-4)
Herpesvrus felino
tipo 1 (FeHV-1)
Herpesvrus suno
tipo 1 (SuHV-1)
Doena de Aujeszky ou
pseudoraiva
Herpesvrus galdeo
tipo 2 (GaHV-2)
Doena de Marek
Herpesvrus galdeo
tipo 3 (GaHV-3)
Doena de Marek
Herpesvrus galdeo
tipo 1 (GaHV-1)
Mardivirus
Iltovirus
Vrus
no-classificados
Herpesvrus bovino
tipo 4 (BoHV-4)
Herpesvrus ovino
tipo 2 (OvHV-2)
Herpesvrus ovino
tipo 1 (OvHV-1)
Adenomatose pulmonar
associada a herpesvrus
Herpesvrus suno
tipo 2 (SuHV-2)
Citomegalovrus de sunos
438
Captulo 17
3 Propriedades gerais
dos herpesvrus
A incluso de um vrus na famlia Herpesviridae realizada com base na estrutura da partcula viral, no tipo e estrutura do genoma. Os
vrions dos herpesvrus consistem de um ncleo
(ou core) contendo uma molcula de DNA de ta
dupla linear; um capsdeo icosadrico de aproximadamente 100 a 110 nm de dimetro envolvendo o ncleo; uma camada protica amorfa,
chamada tegumento, que recobre o capsdeo; e
um envelope lipoprotico contendo espculas de
glicoprotenas na sua superfcie (Figura 17.1). O
dimetro dos vrions varia entre 120 e 300 nm.
As partculas no possuem uma forma bem denida, podendo ser aproximadamente esfricas
ou apresentar contorno irregular. Dentre as razes para a variao do dimetro e da forma dos
vrions esto a presena de quantidade varivel
de tegumento e a sua distribuio irregular nas
partculas.
Os herpesvrus conhecidos apresentam algumas caractersticas biolgicas em comum, a
saber:
codicam um grande nmero de enzimas
relacionadas com o metabolismo de nucleotdeos, sntese do cido nuclico e processamento
de protenas;
B
tegumento
capsdeo
genoma
ncleo
protenas (core)
membrana
lipdica
glicoprotenas
envelope
Fonte: A) Dra Linda Stannard. Web.uct.ac.za. B) Adaptada de Dr. Marko Reschkes Group, Marburg.
Figura 17.1. Vrions de membros da famlia Herpesviridae. A) Fotografia de microscopia eletrnica do vrus do herpes
simplex humano (HSV-1), o prottipo da famlia. B) Ilustrao simplificada de uma partcula vrica com os seus
componentes.
439
Herpesviridae
4.1 O ncleo
O ncleo (ou core) de um vrion maduro
contm o genoma viral conjugado com algumas
protenas codicadas pelo vrus. Em alguns herpesvrus, o DNA parece estar suspenso por uma
massa proteincea, que consiste de brilas que cam tambm embebidas na parte interna do capsdeo viral. O genoma parece estar compactado
em uma forma toride ou de fuso e possui as extremidades livres, o que caracteriza os genomas
lineares.
4.2 O capsdeo
Os capsdeos dos herpesvrus so icosadricos e possuem um dimetro aproximado de 100
nm. Esta estrutura composta por 162 capsmeros, sendo 12 capsmeros pentamricos localizados nos 12 vrtices e 150 capsmeros hexamricos
constituindo as faces triangulares do icosaedro.
Os capsmeros so arranjados formando uma
simetria icosadrica do tipo T = 16. Em preparaes de vrions, trs tipos de capsdeos podem
ser observados sob microscopia eletrnica (ME):
os capsdeos do tipo A so desprovidos da estrutura toride (ncleo) interna; os capsdeos do
tipo B contm as protenas que se conjugam
ao genoma, mas so desprovidos de DNA e, nalmente, os capsdeos que contm o DNA e as
protenas associadas so denominados C. Pelo
menos quatro tipos de protenas virais esto presentes na estrutura dos capsdeos.
4.3 O tegumento
O tegumento a camada protica que preenche o espao entre o capsdeo e o envelope.
4.4 O envelope
Estudos de microscopia eletrnica tm demonstrado que o envelope dos herpesvrus possui uma aparncia tipicamente trilaminar. O envelope viral origina-se de seces de membranas
celulares alteradas e contm numerosas protruses de glicoprotenas. Essas protruses so mais
numerosas e mais curtas do que as presentes na
superfcie de outros vrus envelopados. Alm de
conter vrias glicoprotenas, o envelope tambm
contm lipdeos. O nmero e a quantidade relativa de glicoprotenas do envelope viral variam
de acordo com o vrus. Assim, o HSV-1 codica
pelo menos onze glicoprotenas, enquanto o nmero de molculas de glicoprotenas individuais
pode chegar a 1.000 por vrion. As glicoprotenas
do HSV-1 j identicadas so: a gB, gC, gD, gE,
gG, gH, gI, gK e gM. Essas glicoprotenas desempenham importantes funes, incluindo a ligao a receptores celulares, fuso, penetrao e
transporte das partculas virais entre clulas. No
entanto, algumas delas no so essenciais para a
replicao do vrus in vitro e podem ser deletadas
experimentalmente sem afetar a capacidade do
vrus replicar em cultivo celular. As glicoprotenas do envelope tambm medeiam as interaes
dos vrions com o sistema imunolgico e se constituem em importantes alvos de anticorpos, muitos deles com atividade neutralizante.
440
4.5 O genoma
Os genomas extrados de vrions e caracterizados at o presente so constitudos por molculas de DNA lineares de ta dupla. Nos vrions,
essas molculas so compactadas ou empacotadas na forma de um toride ou fuso, com as extremidades livres, porm prximas. Os genomas
lineares circularizam imediatamente aps a sua
liberao no interior das clulas hospedeiras.
O genoma possui entre 125 e 235 quilopares
de bases (kbp), dependendo da espcie viral. O
genoma do HSV-1 j foi seqenciado inteiramente e possui 152.2 kpb. Os genomas dos herpesvrus variam com relao extenso, composio
(contedo de GC-AT) e presena de seqncias
repetidas. A composio de bases do DNA dos
herpesvrus varia de 31 a 75% de G-C em relao
ao total de nucleotdeos. A composio de GC no
genoma do HSV-1 de 68%. Alm disso, a distribuio do contedo de GC tambm pode ser
desigual ao longo do genoma. A variao na extenso do genoma est associada principalmente
com a presena de seqncias terminais e internas repetidas. Por outro lado, delees parciais
tambm j foram relatadas, o que tambm pode
resultar em variaes na extenso do genoma.
Os genomas dos herpesvrus so organizados de formas diferentes com relao localizao e nmero de seqncias repetidas terminais e
internas. De acordo com a organizao genmica,
esses vrus so divididos em seis grupos designados pelas letras A a F (ver Figura 6.9; Captulo 6).
A Figura 17.2 apresenta genomas representativos
de trs desses grupos.
O genoma dos herpesvrus possui mais de
70 genes, sendo que a maioria das protenas codicadas e as suas funes j foram identicadas
ou deduzidas. Curiosamente, parte desses genes
(35 genes no caso do HSV-1) codica protenas
que no so essenciais para a replicao do vrus
em cultivo celular. Os genes situados nas regies
nicas (UL e US) esto presentes em apenas uma
cpia no genoma, enquanto os genes localizados
nas seqncias repetidas esto presentes em mais
cpias. O signicado biolgico dessas duplicaes gnicas no conhecido. Os genes esto distribudos nas duas cadeias do DNA em orientaes obviamente opostas. Assim, a expresso dos
Captulo 17
A
DR
DR
Regio UL
EHV-2 (192kb)
B
Regio UL
IR
US
IR
BoHV-1 (137kb)
C
a
Regio UL
a' b
US b'
HSV-1 (152kb)
5 Replicao
Considerando-se que os membros da subfamlia Alphaherpesvirinae so os que apresentam
maior importncia em medicina veterinria,
esta seo abordar a replicao dos vrus dessa
subfamlia.
Dois ciclos replicativos com caratersticas
distintas podem ser reconhecidos na biologia dos
alfaherpesvrus: a infeco aguda ou produtiva
(ciclo ltico) e a infeco latente (Figura 17.3).
441
Herpesviridae
Ativadores
celulares
Infeco primria
Expresso dos
genes alfa
bloqueada
Expresso dos
genes alfa
Expresso dos
genes beta
Repressores
celulares
Expresso do LAT
Reativao
Replicao
do genoma
?
Expresso dos
genes gamma
Infeco latente
estabelecida
Manuteno
da latncia
Estresse,
Corticides
Prognie
viral
Infeco
produtiva
dos gnglios sensoriais e autonmicos, mas parece ocorrer tambm em menor escala em outros
tipos celulares. O estabelecimento da infeco
latente caracterizado pela interrupo do ciclo
replicativo logo aps a penetrao do genoma no
ncleo celular. Com isso, no h expresso gnica
signicativa, no ocorrendo produo de protenas virais, replicao do genoma ou produo
de prognie viral. Assim, o genoma viral permanece inativo no ncleo dos neurnios pelo resto
da vida do animal. Em determinadas situaes,
geralmente associadas com estresse, o genoma
ativado e a expresso gnica reiniciada, resultando na retomada da infeco produtiva e na
produo de prognie viral. O estabelecimento
e reativao da latncia representam pontos-chave na biologia dos herpesvrus, pois permitem a
permanncia indenida do vrus nos hospedeiros, acompanhada de episdios espordicos de
reativao e excreo viral.
A replicao produtiva ltica ocorre nos locais de penetrao do vrus no hospedeiro (epitlios e tecidos subjacentes) e, provavelmente,
tambm em neurnios, antes do estabelecimento
e durante a reativao da infeco latente. Esse
ciclo caracteriza-se pela expresso de todos os genes virais, replicao do genoma e produo de
prognie viral infecciosa. A ocorrncia do ciclo
replicativo completo incompatvel com a sobrevivncia das clulas hospedeiras.
A infeco latente ocorre em classes especcas de neurnios, principalmente em neurnios
442
sem a necessidade de internalizao por endocitose e acidicao dos endossomos. A fuso entre
o envelope e a membrana plasmtica ocorre com
a participao da gD, do heterodmero gH-gL e
da gB. A transio entre o processo de adsoro e
a penetrao muito rpida e ocorre em poucos
minutos.
Aps a fuso, algumas protenas do tegumento se dissociam do nucleocapsdeo e permanecem no citoplasma, enquanto outras so transportadas at o ncleo. O nucleocapsdeo, ainda
associado com algumas protenas do tegumento, liga-se aos microtbulos celulares e , assim,
transportado at as proximidades dos poros nucleares. Os nucleocapsdeos, ento, associam-se
aos complexos dos poros nucleares, ocorrendo
a sua desintegrao e a liberao do genoma no
interior do ncleo. Os restos do capsdeo cam
retidos no lado citoplasmtico da membrana nuclear.
Acredita-se que o genoma circularize imediatamente aps a penetrao no ncleo. Assim,
os mecanismos de transcrio e replicao do
DNA viral ocorreriam em genomas circularizados. A transcrio do genoma viral se inicia logo
aps a sua penetrao no ncleo. O DNA viral
transcrito pela RNA polimerase II celular com
o auxlio de fatores celulares e virais. A sntese
de protenas virais regulada de forma precisa,
pois a expresso de genes virais ocorre de forma
coordenada e em ordem seqencial, em forma de
uma reao em cascata. Vrios produtos dos genes virais so enzimas e protenas que se ligam
ao DNA, envolvidas no processo de replicao
do genoma.
De acordo com a cintica de expresso e
com a funo de seus produtos, os genes virais
so divididos em trs grupos principais: genes
alfa (immediate early ou de transcrio imediata),
beta (early ou iniciais) e gama (late ou tardios). Os
genes alfa e beta so expressos abundantemente
antes da replicao do genoma, enquanto os genes gama somente so expressos em quantidades
signicativas aps a replicao do DNA viral.
Os primeiros genes a serem transcritos so
os genes alfa, e a sua transcrio inicia imediatamente aps a liberao do genoma no interior do
Captulo 17
ncleo. A transcrio desses genes requer a presena de uma protena que componente do tegumento viral, chamada VP16 ou TIF. Essa protena se conjuga com um fator celular e estimula
a transcrio de quatro genes, cujos produtos so
as protenas ICPO, ICP4, ICP22, ICP27 e ICP47.
Essas protenas tm, como principal funo, estimular a transcrio dos genes beta.
Os produtos dos genes beta, por sua vez,
so, principalmente, enzimas e protenas acessrias envolvidas no metabolismo de nucleotdeos
e na replicao do genoma, incluindo a polimerase viral. Dentre esses produtos incluem-se as
enzimas timidina quinase (TK) e ribonucleotdeo
redutase (RR), que catalisam a sntese de nucleotdeos trifosfato. As protenas beta tambm
incluem protenas de ligao ao DNA, helicase
(UL9) e a prpria DNA polimerase viral. Assim,
a expresso dos genes beta seguida de intensa
sntese de nucleotdeos e replicao do genoma.
Aps a replicao do genoma, o terceiro grupo de genes expresso (genes tardios ou gama).
Os produtos desses genes se constituem principalmente em protenas estruturais do ncleo,
capsdeo e envelope, que so, ento, utilizadas na
construo das partculas vricas. De acordo com
a cintica de expresso e funo, os genes tardios
podem ser divididos em gama-1 e gama-2.
Vrias protenas virais so modicadas aps
a sua sntese, modicaes que incluem clivagem
proteoltica, fosforilao e glicosilao, entre outras. A maioria dessas modicaes ocorre por
ao de enzimas celulares, embora algumas enzimas virais possam tambm estar envolvidas
nesses processos.
Simultaneamente expresso das protenas
virais, ocorre a inibio da transcrio de genes,
do processamento e transporte de mRNAs e
sntese de protenas da clula hospedeira. Esses
eventos so induzidos por protenas virais e tm
como objetivo subverter a maquinaria celular
para o processamento e transporte de mRNA virais e sntese de protenas virais.
A maioria das protenas dos genes beta importada para o ncleo celular, onde se conjugam
com o genoma, formando os stios pr-replicativos. Esses stios so os locais de iniciao da sn-
443
Herpesviridae
ICP8
UL9
Iniciao
Helicase/
primase
3
Complexo
polimerase
Replicao
tipo Theta
UL9
5'
3' 5'
Replicao
por crculo
rolante
444
Captulo 17
o viral, provavelmente porque o complexo gIgE pode se ligar s junes celulares e mediar o
movimento de vrions ao longo dessas junes.
Quando os herpesvrus se multiplicam em clulas
completamente permissivas, o ciclo replicativo
completado em aproximadamente 18-20 horas. O
ciclo replicativo produtivo dos alfaherpesvrus
est ilustrado na Figura 17.5.
As clulas infectadas com os alfaherpesvrus
no sobrevivem infeco, por causa de severas
alteraes estruturais e bioqumicas que ocorrem
em conseqncia da replicao viral. Entre as alteraes estruturais, podem-se citar as alteraes
na cromatina celular, duplicao e dobramento
de membranas celulares, fragmentao e disperso das membranas do complexo de Golgi, insero de protenas virais em membranas celulares,
rearranjo da rede de microtbulos e formao de
corpsculos de incluso intranucleares. Entre as
alteraes bioqumicas celulares, incluem-se o
bloqueio da sntese de protenas celulares, degradao de mRNAs celulares, bloqueio da transcrio e reduo da sntese de RNA celular, inibio
do processamento de mRNA e degradao seletiva de protenas celulares. Ainda, os herpesvrus
podem interferir com o ciclo de diviso celular.
Foi demonstrado que protenas codicadas pelo
HSV-1 e tambm pelo BoHV-1 se ligam a protenas envolvidas no ciclo de diviso celular, como
a ciclina D3. Neste caso especco, os produtos
virais acabam por interferir com o processo de
morte celular programada, ou apoptose, mantendo a clula viva durante a infeco.
Os alfaherpesvrus replicam em uma variedade de clulas in vitro, incluindo clulas primrias e linhagens celulares da espcie homloga. A
replicao caracterizada por disseminao rpida nos cultivos e destruio dos tapetes celulares, em razo da lise celular induzida pelo vrus.
Alm de replicar em clulas da espcie homloga, os diferentes herpesvrus podem ser adaptados para replicar em clulas de outras espcies
animais. Os cultivos celulares utilizados para o
isolamento e multiplicao dos diferentes herpesvrus sero abordados nas respectivas sees.
445
Herpesviridae
16
1
15
2
Protenas alfa
Protenas beta
Protenas gama
10
13
mRNA-
mRNA-
mRNA-
12
9
4
14
11
8
Ncleo
Citoplasma
Figura 17.5. Ciclo replicativo dos alfaherpesvrus. Aps a ligao aos receptores, a penetrao ocorre por fuso do
envelope com a membrana plasmtica na superfcie celular (1). Os nucleocapsdeos so transportados ao longo dos
microtbulos (2) at os poros nucleares, onde ocorre o desnudamento e a liberao do genoma no interior do ncleo
(3). Segue-se a transcrio dos genes alfa (4) que so traduzidos nas protenas alfa (5), cuja funo principal ativar a
transcrio dos genes beta (6). As protenas beta (7) esto envolvidas na sntese de nucleotdeos trifosfato e na
replicao do genoma (8). Os genes gama somente so transcritos aps a replicao do DNA (9) e codificam
principalmente protenas estruturais (10). Parte dessas protenas penetra no ncleo e forma pr-capsdeos, nos quais o
genoma introduzido (11). Os nucleocapsdeos adquirem o envelope por brotamento atravs da membrana nuclear
interna (12). Podem perder o envelope ao atravessar a membrana nuclear externa e serem reenvelopados no aparelho
de Golgi (13), ou so enviados em vesculas at o Golgi (14). Os vrions envelopados so transportados em vesculas
do trans-Golgi at a superfcie celular (15), onde so liberados por exocitose (16).
446
Captulo 17
Infeco
Transporte retrgrado
Latncia
Crebro
Reativao
Transporte antergrado
Excreo
Mucosa nasal
Gnglio trigmeo
Figura 17.6. Patogenia da infeco latente dos alfaherpesvrus. Aps a replicao primria, os nucleocapsdeos so
transportados pelo fluxo axoplsmico retrgrado at os corpos neuronais localizados nos gnglios sensoriais e
autonmicos. Nestes neurnios, o vrus replica produtivamente ou estabelece infeco latente. Sob certas condies,
a infeco latente pode ser reativada e resulta em replicao produtiva. Os vrions produzidos so transportados de
volta aos locais de replicao primria, onde replicam e so excretados. O acesso dos vrions ao encfalo pode ocorrer
tanto durante a infeco aguda quanto aps a reativao.
447
Herpesviridae
6 Herpesvrus de interesse
veterinrio
A seguir, sero abordadas as principais doenas animais causadas por herpesvrus, dando
nfase quelas que afetam animais de produo
e de companhia. As doenas sero apresentadas
por espcie animal, seguindo-se a ordem de classicao taxonmica das subfamlias.
BoHV-1
Doena genital
(IPV/IBP)
BoHV-5
Meningo-encefalite
BoHV-1
Doena
respiratria (IBR)
BoHV-1
Abortos
BoHV-2
Mamilite
448
Captulo 17
6.1.1.1 Epidemiologia
O vrus causador da IBR foi isolado pela
primeira vez nos Estados Unidos em 1956. A
partir de ento, inmeros estudos tm revelado
a sua ampla distribuio em praticamente todo
o mundo. Alguns pases europeus, como a Dinamarca e a Finlndia, conseguiram erradicar a
infeco, tendo obtido essa condio por meio da
identicao e eliminao de animais soropositivos. Outros pases, como a Alemanha e Sua,
tm implementado programas de erradicao do
BoHV-1 por meio da vacinao compulsria dos
rebanhos, identicao e eliminao gradual dos
animais portadores.
No Brasil, o BoHV-1 foi isolado, pela primeira vez, de um caso de vulvovaginite na Bahia,
em 1978. Vrios relatos posteriores conrmaram
a ampla distribuio do vrus no pas, tanto pelo
isolamento viral quanto pela deteco de anticorpos. Dados sobre prevalncia de infeces pelo
BoHV-1 demonstram variaes entre 8 e 82% em
vrias regies do pas. provvel que exista atualmente, no Brasil, uma parcela muito pequena
de rebanhos livres do BoHV-1 (ou BoHV-5, como
ser comentado a seguir). Estima-se, ainda, que o
nvel mdio de prevalncia da infeco nos rebanhos situe-se entre 30 a 70%. Para uma populao
bovina de aproximadamente 190 milhes de cabeas, pode-se estimar uma populao potencialmente infectada de 57 a 133 milhes de cabeas.
As infeces pelo BoHV-1 podem ser transmitidas pelo contato direto e indireto entre animais, porque o vrus disseminado atravs de
secrees respiratrias, oculares e genitais, sendo
excretado em grandes quantidades por animais
durante a infeco aguda. Nessa fase, os animais
excretam o vrus por at 15-16 dias em ttulos de
at 107 TCID50/ml. Em casos de reativao da infeco latente, a excreo de vrus ocorre por um
perodo menor (2 a 7 dias, geralmente) e em menores quantidades. No obstante, a excreo viral
que ocorre durante a reativao representa uma
importante forma de transmisso e perpetuao
do vrus na natureza. Por isso, os animais latente-
449
Herpesviridae
meiros sinais clnicos da infeco (congesto local, presena de secrees, leses vesiculares ou
erosivas). Durante essa fase, altos ttulos virais
so produzidos e excretados nas secrees, o que
favorece a transmisso do vrus para outros animais.
Aps a replicao inicial, o vrus invade as
terminaes nervosas de neurnios sensoriais e
transportado atravs de uxo axnico retrgrado
at os corpos neuronais nos gnglios regionais.
Nesses locais, o vrus estabelece infeco latente, durante a qual no h expresso de antgenos
virais ou replicao. Existem tambm evidncias
de que, aps a infeco primria, o vrus possa
realizar uma viremia, provavelmente associada
a moncitos e linfcitos, atravs da qual o vrus
poderia disseminar-se no organismo animal e
causar infeces fetais e abortos.
Eventualmente, sob a inuncia de fatores
externos, como estresse ou tratamento com glicocorticides, pode ocorrer a reativao da infeco
latente, ocasio em que ocorre a produo de partculas virais infecciosas nas clulas nervosas e o
transporte dessas partculas de volta ao stio de
infeco primria. Nesses stios, o vrus replica e
excretado em secrees, podendo ser transmitido para outros animais. A reativao da infeco
latente pode, ocasionalmente, ser acompanhada
de sinais clnicos geralmente moderados.
450
Vulvovaginite pustular/balanopostite
pustular
A maioria das infeces genitais por herpesvrus em bovinos esto associadas com amostras
de BoHV-1.2b. A IPV aguda se desenvolve aps
a infeco do trato genital da fmea durante a
cobertura ou inseminao articial. Pode, ainda,
ocorrer por contato da mucosa com secrees contaminadas com o vrus. Aps um curto perodo de
incubao (1 a 3 dias), a vulva se apresenta hipermica, edemaciada e com vesculas distribudas
Captulo 17
6.1.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo da infeco por
herpesvrus bovinos feito com base no histrico
da propriedade, sinais clnicos e leses observadas ao exame clnico. A suspeita clnico-patolgica, no entanto, deve ser conrmada por exames
laboratoriais. Durante infeces agudas, devem
ser realizados testes para a deteco de vrus, antgenos ou DNA viral em amostras clnicas. As
amostras geralmente utilizadas para a deteco
de vrus so: suabes nasais e oculares, vaginais,
de prepcio ou coletadas das reas com leses
451
Herpesviridae
Diagnstico virolgico
Um diagnstico rpido pode ser realizado
por imunouorescncia (IFA) com anticorpos especcos, em cortes ou impresses de tecidos ou,
ainda, em esfregaos de secrees. Nesses casos,
o resultado pode ser obtido dentro de uma a duas
horas. Usualmente, alm da IFA, suspenses de
tecidos ou secrees so preparadas e inoculadas em cultivos celulares, visando ao isolamento do agente. Este o procedimento padro de
diagnstico virolgico para o BoHV-1. Tanto o
BoHV-1 como o BoHV-5 produzem um efeito citoptico (ECP) bastante evidente em vrios tipos
de clulas, incluindo cultivos primrios e linhagens estabelecidas. Via de regra, os cultivos primrios so mais sensveis para o isolamento viral
do que linhagens contnuas. Entretanto, em razo
de maior praticidade, clulas de linhagem (p. ex.:
clulas da linhagem de rim de bovino, MDBK)
so as mais utilizadas para o isolamento viral. O
BoHV-1 e BoHV-5 geralmente causam ECP visvel entre 24 e 72 horas aps a inoculao. Em
alguns casos, quando a concentrao de vrus no
material original muito baixa, pode ser necessrio fazer mais de uma passagem do material inoculado. Raramente so necessrias mais do que
duas ou trs passagens. Ao nal da terceira passagem, caso no haja evidncia de ECP, o material considerado negativo para vrus. Se houver
ECP compatvel com herpesvrus, a identidade
do agente deve ser conrmada por IFA ou imunoperoxidase (IPX), utilizando-se conjugados ou
anticorpos monoclonais apropriados.
A deteco de DNA viral em amostras clnicas por PCR tambm pode ser utilizada, apresentando as vantagens de rapidez, especicidade e sensibilidade. Esta tcnica, no entanto, tem
aplicao restrita para o diagnstico de infeces
agudas pelo BoHV-1. Possui aplicao importante na deteco da infeco latente, quando a pre-
Diagnstico sorolgico
Caso no tenha sido possvel obter amostras
de tecidos ou secrees na fase aguda, a infeco
pode ser diagnosticada por meio de testes sorolgicos. Para tal, devem-se realizar duas coletas
de soro: a primeira durante a fase aguda e a segunda trs a quatro semanas aps. Um aumento
de quatro vezes no ttulo de anticorpos entre as
duas coletas indicativo da infeco e pode conrmar o diagnstico. Em fmeas em reproduo,
conveniente fazer uma coleta de soro antes da
gestao e manter a amostra congelada. Se houver qualquer problema reprodutivo de natureza
infecciosa suspeita, uma nova coleta, aps o surgimento do problema (p. ex.: aborto), deve ser
realizada, sendo ambas as amostras remetidas ao
laboratrio.
Por outro lado, a deteco de anticorpos no
soro, em um teste isolado, indica somente que o
animal teve contato prvio com o agente, seja por
infeco natural (ou seja, potencial portador) ou
por vacinao. Portanto, a deteco de anticorpos
em uma amostra isolada de soro possui signicado limitado quando o objetivo diagnosticar um
evento de doena clnica.
As tcnicas sorolgicas mais utilizadas para
o diagnstico sorolgico do BoHV-1 so o ELISA
e a soro-neutralizao (SN). importante ressaltar que esses testes no so capazes de diferenciar os anticorpos produzidos contra o BoHV-1
daqueles produzidos contra o BoHV-5.
Alm do seu uso como suporte investigao clnica, esses testes tm sido amplamente
utilizados em inquritos epidemiolgicos, certicao de rebanhos e triagem de reprodutores
destinados coleta e comercializao de smen.
importante enfatizar que a deteco de anticorpos contra o BoHV-1 com exceo de anticorpos induzidos por vacinao indicativa da
condio de portador.
A Tabela 17.2 apresenta um resumo das manifestaes clnicas associadas com os herpesvrus bovinos, o material a ser enviado para o laboratrio e as tcnicas de diagnstico utilizadas.
452
Captulo 17
Tabela 17.2. Manifestaes clnicas, material a ser coletado e tcnicas utilizadas para o diagnstico das principais
herpesviroses de bovinos
Manifestao
Doena respiratria
Aborto
Vulvovaginite
Balanopostite
Mamilite
Agente provvel
Material/diagnstico
Diagnstico laboratorial
BoHV - 1.1
Secrees nasais
1. Isolamento
2. Imunofluorescncia (IFA) de clulas
descamativas
3. PCR
1. Isolamento
2. Imunoistoqumica (IHC)
3. Histopatologia
Soro pareado
1. Isolamento
2. PCR
3. IHC
4. Histopatologia
Soro da vaca
Pesquisa de anticorpos
1. Isolamento
2. PCR
Soro pareado
Pesquisa de anticorpos
Smen, secrees
prepuciais
1. Isolamento
2. PCR
Soro pareado
Pesquisa de anticorpos
1. Isolamento
2. Microscopia eletrnica
3. IFA
BoHV - 1.1
BoHV - 1.2
BoHV - 1.2
BoHV - 2
Doena vesicular ou
crostosa generalizada
(PLSD)
Doena
neurolgica
Soro pareado
Pesquisa de anticorpos
BoHV - 5
Secrees nasais,
crebro
1. Isolamento
2. IFA
3. IHC
4. PCR
5. Histopatologia
Soro pareado
Pesquisa de anticorpos
Herpesviridae
453
454
Captulo 17
6.1.2.1 Epidemiologia
455
Herpesviridae
tendem a ocorrer em reas tropicais e subtropicais, onde, possivelmente, espcies de ruminantes selvagens podem ser reservatrios do agente.
Anticorpos neutralizantes contra o BoHV-2 j foram detectados em elefantes, bfalos e ruminantes selvagens. A BHM mais comum em gado
leiteiro e em gado de corte submetido explorao intensiva e sob condio de estresse. Vacas
de primeira cria geralmente desenvolvem leses
mais severas e abundantes, que so registradas
mais comumente durante o outono, quando a
temperatura ambiental diminui. De fato, os relatos da enfermidade tm sido mais freqentes em
regies que apresentam temperaturas baixas. O
trauma fsico pode ser um fator importante na
patogenia das leses pelo BoHV-2 e postula-se
que as freqentes rachaduras da pele das tetas
que ocorrem durante o outono poderiam, ao menos parcialmente, explicar essa ocorrncia estacional das leses. Aliado a esse fator, o edema
siolgico do bere e tetas pode contribuir para
o desenvolvimento das leses.
A doena pode disseminar-se rapidamente
entre os animais durante o outono e inverno. A
forma de transmisso do vrus ainda no foi bem
esclarecida, mas, provavelmente, ocorra por contato direto ou indireto, atravs de uidos vesiculares e crostas contaminadas. A transmisso por
meio de equipamentos de ordenha tem sido investigada, mas no h resultados conclusivos. A
participao do ordenhador ou de insetos como
vetores para a transmisso mecnica tem sido
considerada, embora no tenha sido conrmada
experimentalmente. Na fase aguda, o vrus pode
ser transmitido aos bezerros durante a mamada,
e estes animais podem desenvolver leses vesiculares no focinho ou nas comissuras labiais.
O BoHV-2, provavelmente, estabelea infeco latente aps a infeco aguda. Essa hiptese
reforada pelo desenvolvimento freqente de
leses nas tetas imediatamente aps o parto, sem
fontes externas de infeco. As alteraes siolgicas, que ocorrem prximo e durante o parto,
promoveriam o estmulo para reativao natural.
No entanto, a biologia da infeco latente por
esse vrus necessita ser mais bem investigada.
456
6.1.2.3 Diagnstico
A ocorrncia de mamilite vesicular ou crostosa em vacas leiteiras deve ter a sua etiologia investigada, pois outros agentes virais podem tambm estar envolvidos. Outras enfermidades de
pele podem se manifestar de forma semelhante
mamilite herptica bovina. Dentre essas, podem
ser citadas: urticria, picadas de inseto, infeces
pelos vrus do Pseudocowpox e Vaccinia. Estas ltimas so comuns no Brasil, principalmente na
regio Sudeste. Por isso, o diagnstico clnicoepidemiolgico deve ser, sempre que possvel,
acompanhado de comprovao virolgica e/ou
sorolgica (ver Tabela 17.2).
Para o diagnstico laboratorial da infeco
pelo BoHV-2, so indicadas amostras de uido vesicular, crostas e soro sangneo coletados
durante a fase aguda da doena. As chances de
isolamento so maiores quando o lquido vesicular coletado antes da ruptura das vesculas. Em
amostras coletadas das vesculas rompidas h algumas horas ou de leses crostosas, dicilmente
se consegue isolar o agente. Por isso, recomendase a coleta de uido de vesculas ntegras, com o
auxlio de seringas com agulhas nas. Alternativamente, o material pode ser coletado com suabes. Para o sucesso do isolamento, a temperatura
Captulo 17
de conservao do material (4C) tambm crtica. reas de leses podem ser incisadas e xadas
em formol 10% e enviadas para diagnstico histolgico ou microscopia eletrnica. As margens
das leses podem ser dissecadas, colocadas em
meio essencial mnimo e enviadas para serem
submetidas a exames virolgicos.
O contedo de partculas do vrus pode ser
muito alto no uido de vesculas frescas, o que
caracterstico de viroses vesiculares. O vrus presente pode ser propagado facilmente em cultivos
celulares primrios, assim como em linhas celulares j estabelecidas. Clulas primrias de bovinos
e clulas de linhagem de rim bovino (MDBK) so
indicadas para o isolamento e cultivo do vrus.
Deve-se ressaltar que, quando a suspeita etiolgica for BoHV-2, os cultivos devem ser incubados
a 32C, pois o vrus no replica bem a 37C. Nas
clulas de cultivo, o vrus produz ECP, caracterizado pela formao de massas celulares multinucleadas (sinccios) que aumentam em nmero e
dimetro medida que se prolonga a incubao.
Aps poucos dias, os sinccios tornam-se conuentes, estendendo-se por todo o tapete celular,
que acaba por se desprender da superfcie dos
frascos. Em estgios avanados, o vrus produz
sinccios grandes, multinucleados, com incluses
eosinoflicas intranucleares. A identicao do
BoHV-2 isolado em cultivos celulares embora
o ECP seja caracterstico e inconfundvel com outros vrus pode ser feito por SN com soro hiperimune ou por IFA.
O BoHV-2 pode tambm ser identicado por
ME aps colorao negativa. A ME pode ser realizada em uido vesicular obtido de leses frescas
ou em fragmentos de pele obtidos por bipsia.
Alm disso, um diagnstico rpido pode ser realizado pela colorao de Giemsa em microscopia
tica, com material obtido por bipsia da periferia
das leses vesiculares recentes. Esse mtodo permite a visualizao de incluses intranucleares.
O diagnstico sorolgico de infeces por
BoHV-2 pode ser realizado por SN ou ELISA em
soros pareados. A sorologia tem aplicao quando se deseja detectar os portadores em uma populao de bovinos, uma vez que a condio de
soropositivo indica a infeco latente.
457
Herpesviridae
de 1,5 a 3 kb nas extremidades. Com base em anlise de restrio genmica, os isolados de campo
podem ser divididos em dois grupos: o grupo
da cepa DN-599, que abrange os isolados norteamericanos; e o grupo Movar 33/63, que abriga
os isolados europeus. Alguns isolados europeus
e asiticos no se enquadram em nenhum desses
grupos. Os padres de clivagem enzimtica do
genoma do BoHV-4 diferem marcadamente dos
outros herpesvrus de bovinos.
Os isolados de campo caracterizados at o
presente no apresentam grande diversidade antignica e, aparentemente, pertencem ao mesmo
sorotipo. Apenas diferenas discretas podem ser
detectadas com o uso de alguns anticorpos monoclonais (AcMs). O BoHV-4 no apresenta relao antignica com os outros herpesvrus de
bovinos.
A replicao do BoHV-4 em cutivos celulares lenta e pouco eciente, parecendo depender
de clulas em diviso. Alm de clulas bovinas, o
vrus replica em determinadas clulas de origem
humana.
6.1.3.1 Epidemiologia
A infeco pelo BoHV-4 parece estar amplamente distribuda na populao bovina, embora
o nmero de estudos sorolgicos seja restrito.
At o presente, a infeco j foi diagnosticada na
Amrica do Norte, Europa e em alguns pases
africanos e asiticos. Em alguns locais da frica,
a soroprevalncia atinge 70% dos bovinos amostrados, enquanto na Blgica foram observados ndices de 15 a 30% e na Alemanha, de 18 a 38%.
Alm de bovinos e ovinos, o vrus j foi
isolado de gatos domsticos, o que constitui um
achado incomum para os herpesvrus de ruminantes.
458
Captulo 17
459
Herpesviridae
6.1.4.1 Epidemiologia
Em virtude da sua grande similaridade com
o BoHV-1, a prevalncia e distribuio da infeco
pelo BoHV-5, mundialmente, desconhecida. As
infeces aparentes pelo BoHV-5 apresentam caractersticas epidemiolgicas peculiares, afetando
animais jovens, com baixa morbidade e elevada
mortalidade. Como nas infeces por outros herpesvrus, em funo da latncia e da ocorrncia
de infeces subclnicas, a proporo de animais
que desenvolve enfermidade clnica no um indicador apropriado do nmero de animais efetivamente infectados. Curiosamente, a infeco
parece ser causa de morbidade e mortalidade importante somente em pases do Hemisfrio Sul,
embora tenha sido descrita no Hemisfrio Norte
h muito tempo. At 1993, somente duas amostras de BoHV-5 haviam sido isoladas nos EUA.
A baixa ocorrncia de encefalites por herpesvrus
em pases do Hemisfrio Norte, segundo alguns
autores, poderia estar associada aos extensivos
programas de vacinao contra o BoHV-1, cuja
imunidade conferiria proteo tambm contra o
BoHV-5.
Na atualidade, no possvel precisar a
real prevalncia e distribuio das infeces pelo
BoHV-5, uma vez que no existem testes sorol-
460
Captulo 17
Herpesviridae
461
cegueira, pressionamento da cabea contra anteparos, ataxia, decbito, convulses. Freqentemente esses sinais manifestam-se em crises, cujos
espaamentos e intensidade intensicam-se gradativamente. Esses sinais nem sempre esto presentes em todos os casos e diferentes combinaes de sinais, com intensidades diferentes, tm
sido relatados. Em alguns casos, uma depresso
profunda o nico sinal evidente. Na grande
maioria dos animais que apresenta sinais neurolgicos, a enfermidade progride para o bito,
embora casos de recuperao aps sinais moderados tenham sido descritos. O curso clnico dura
de poucas horas (8-12) a vrios dias e culmina
com decbito, convulses e morte. Sinais respiratrios (hiperemia, corrimento nasal, diculdade
respiratria) tm sido relatados tanto em infeces naturais como experimentais. Abortos tambm tm sido relatados em rebanhos acometidos
de surtos de infeco neurolgica. Embora atualmente se acredite que a grande maioria dos casos
de doena neurolgica historicamente atribudos
ao BoHV-1 pela confuso em sua identicao
tenham sido de fato causados pelo BoHV-5, alguns casos de doena neurolgica comprovadamente causados pelo BoHV-1 tambm j foram
relatados.
possvel tambm que o BoHV-5 possa produzir infeces genitais, pois o vrus j foi isolado de smen de touros e de episdios de aborto.
J foi demonstrado que o vrus, associado a uma
pequena percentagem de moncitos e linfcitos
perifricos, pode produzir uma viremia transitria. Esta seria uma das possveis explicaes para
a origem das infeces fetais e abortos. No entanto, estudos para denir a patogenia desse tipo de
quadro ainda no foram realizados.
consensual que a reativao da infeco
latente pelos herpesvrus animais raramente cursa com sinais clnicos. No entanto, o desenvolvimento de sinais clnicos discretos, a exemplo do
que ocorre com outros herpesvrus, parece no
ser to raro, e a sua deteco depende de um
exame mais acurado. No caso do BoHV-5, foi demonstrado que tanto a reativao natural quanto
a induzida por dexametasona parecem ser freqentemente acompanhadas de sinais neurolgicos, que podem ser moderados e passageiros
462
6.1.4.3 Diagnstico
Doena neurolgica de curso fatal, principalmente em bezerros, sugestiva de infeco pelo
BoHV-5. Nesses casos, o diagnstico diferencial
de raiva, listeriose, babesiose e encefalopatia espongiforme deve ser realizado. O diagnstico clnico-epidemiolgico deve ser, sempre que possvel, acompanhado de comprovao virolgica
e/ou sorolgica (ver Tabela 17.2). Em casos de
doena neurolgica em bovinos, o material enviado para o laboratrio de virologia (crebro)
inicialmente testado para a raiva e, se negativo,
deve ser testado para o BoHV-5. Utilizando-se o
crebro suspeito, pode-se realizar vrios testes
para comprovar a etiologia: a) IFA ou IPX em impresses frescas de tecido nervoso; b) isolamento
viral; c) PCR; d) nos casos em que secrees nasais acompanham a amostra, a realizao de IFA
no sedimento das clulas descamativas pode fornecer um diagnstico rpido e convel.
Para isso, amostras de crebro e bulbo olfatrio devem ser remetidas resfriadas para tentativas de isolamento viral e/ou IFA. Fragmentos
de crebro, acondicionados em formol a 10%, so
teis para exames histolgicos. Encefalite nosupurativa, inltrao linfocitria perivascular,
gliose focal ou difusa e corpsculos de incluso
nos neurnios so achados comuns em casos de
encefalite pelo BoHV-5. Secrees nasais e/ou
brnquicas e pulmonares tambm so teis para
o diagnstico. Amostras de soro pareadas, coletadas dos animais que, eventualmente, recuperem-se da doena neurolgica podem auxiliar na
elaborao do diagnstico.
A tcnica padro de diagnstico do BoHV-5
o isolamento viral em cultivo celular no qual o
vrus produz ECP tpico de herpesvrus seguido de conrmao por IFA ou IPX. Em amostras
clnicas conservadas de forma imprpria, no entanto, o isolamento do vrus pode ser problemtico. Nesses casos, deve-se recorrer a tcnicas de
Captulo 17
463
Herpesviridae
6.1.5.1 Epidemiologia
Forma africana
Os hospedeiros naturais do agente da forma
africana da MCF e transmissores para outras espcies so os gnus (Conochaetes taurinus e Conochaetes gnu, em ingls, denominados wildebeest).
No organismo desses animais, o vrus encontra-se fortemente associado com clulas, sendo
raramente transmissvel entre animais adultos.
Entretanto, a administrao de corticosterides,
assim como a ocorrncia de estresse (por exemplo, transporte para zoolgicos) pode induzir a
excreo de vrus. No perodo perinatal, o vrus
pode ser detectado em secrees nasais, oculares
e nas fezes de neonatos. Durante as temporadas
de pario dos gnus, os povos africanos que convivem com esses animais acreditam que o vrus
seja transmitido para bovinos pelo contato com
a placenta, secrees placentrias ou pelas secrees dos recm-nascidos.
Forma no-africana
A forma no-africana da MCF uma doena
infecciosa sistmica que ocorre em bovinos e outros ruminantes domsticos e silvestres, podendo
ocorrer tambm em sunos. O OvHV-2 agente etiolgico dessa forma apresenta a espcie
ovina como hospedeira natural. Nestes animais,
464
Captulo 17
Tabela 17.3. Principais achados clnico-patolgicos em surtos de febre catarral maligna diagnosticados no Rio Grande
do Sul.
465
Herpesviridae
466
6.2.1.1 Epidemiologia
O CpHV-1 foi inicialmente isolado na Califrnia, em 1975, de quadros de enterite severa em
cabritos com poucos dias de vida. Posteriormente, o vrus foi detectado em rebanhos caprinos na
Sua. Embora a distribuio do agente no tenha
sido investigada, estudos sorolgicos e virolgicos demonstram que a infeco est presente em
vrios pases europeus, Austrlia, Nova Zelndia, Canad e Estados Unidos, em nveis de prevalncia variveis. Em pases que possuem a caprinocultura comercial bem desenvolvida, como
a Grcia e a Itlia, os nveis de prevalncia podem
atingir entre 30 e 50% dos animais.
Embora a infeco pelo CpHV-1 tenha sido
descrita somente nos hospedeiros naturais, o
CpHV-1 possui a capacidade de infectar espcies
heterlogas. Anticorpos contra o CpHV-1 j foram detectados em algumas espcies silvestres,
especialmente cervdeos. Cordeiros e bezerros
inoculados experimentalmente no desenvolvem
sinais clnicos, porm replicam o vrus e apresentam soroconverso. A exemplo do BoHV-1, que
replica e estabelece infeco latente passvel de
reativao em cabras, o CpHV-1 capaz de re-
Captulo 17
467
Herpesviridae
6.2.1.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo CpHV-1, em
casos clnicos suspeitos, pode ser realizado pelo
isolamento do agente em clulas primrias ou
contnuas de origem caprina ou ovina. O vrus
produz ECP semelhante aos outros alfaherpesvrus. Conjugados policlonais contra o BoHV-1
produzem reao cruzada em testes de IFA e podem ser utilizados diretamente em tecidos ou em
clulas de cultivo inoculadas. Uma vez isolado,
o CpHV-1 pode ser diferenciado do BoHV-1 por
anlise de restrio enzimtica.
Episdios de aborto tm sido investigados
pelo uso de PCR com primers especcos em tecidos de fetos abortados. Anticorpos contra o
CpHV-1 podem ser investigados por SN ou ELISA, e a realizao de sorologia pareada pode indicar infeco aguda recente. Esses testes tambm
tm sido utilizados em inquritos sorolgicos em
rebanhos caprinos e em animais silvestres.
468
6.3.1.1 Epidemiologia
At a dcada de 1980, a infeco pelo SuHV1 estava presente de forma endmica em praticamente todos os pases que possuam expresso
na suinocultura. A crescente repercusso econmica da doena, sobretudo devido s restries
ao comrcio de animais e produtos, motivou vrios pases a empreender programas de controle
e erradicao. Atualmente, a infeco considerada erradicada em sudeos domsticos na Frana, Alemanha, ustria, Sua, Dinamarca, Reino
Unido e nos Estados Unidos. Todavia, o SuHV-1
continua circulando nas populaes de sudeos
silvestres nos Estados Unidos, Alemanha, Polnia, Frana, Itlia, dentre outros. Dessa forma,
programas de vigilncia epidemiolgica devem
continuar nas regies de risco, pois as populaes de sudeos silvestres podem atuar como reservatrios do vrus, o que diculta a erradicao
completa da doena.
No Brasil, a doena foi inicialmente diagnosticada em 1912, e, posteriormente, foi identicada em todos os estados das regies Sul, Sudeste e
Centro-Oeste, alm da Bahia e Cear. Nos ltimos
anos, a infeco tem sido mais freqentemente
relatada em Santa Catarina (SC), o que fez com
que fosse implementado um programa estadual
de erradicao. O programa, nanciado por um
esforo de parcerias rmadas entre a indstria,
associao de produtores e governo, tem obtido
sucesso em, gradualmente, erradicar o PRV de
rebanhos sunos do estado. Desde julho de 2004,
a doena de Aujeszky no identicada em SC.
Em 2003, pela primeira vez, foram diagnosticados surtos da doena em sunos no Rio Grande
Captulo 17
Herpesviridae
469
470
Captulo 17
6.3.1.3 Diagnstico
Em reas endmicas ou de risco, a ocorrncia de doena neurolgica em leites jovens (uma
a duas semanas), sinais respiratrios em vrias
faixas etrias e abortos devem suscitar uma investigao etiolgica, na qual o SuHV-1 deve
ser considerado como um potencial suspeito. Se
a infeco causada por uma amostra virulenta
e cursa com sinais tpicos, uma anlise do curso
clnico-patolgico do evento, associada com os
achados de necropsia, podem levar a um diagnstico presuntivo relativamente seguro. No entanto, a conrmao etiolgica imprescindvel
tambm pelo carter regulatrio do qual se reveste a enfermidade.
O diagnstico laboratorial realizado pela
identicao do vrus em tecidos e/ou em secrees de sunos doentes. O diagnstico rpido
feito usualmente por testes de IFA direta em tonsilas, pulmo, traquia, bao, rins, fgado e crebro. O isolamento do vrus pode ser realizado
a partir dessas amostras. O SuHV-1 replica em
uma variedade de clulas de origem suna, sejam
cultivos primrios ou linhagens contnuas, nas
quais produz um efeito citoptico tpico. O vrus pode tambm ser multiplicado em clulas de
origem bovina, como clulas de cornetos nasais.
Os isolados de campo podem ser adaptados a replicar em clulas de linhagem bovina, como as
MDBK. Aps o aparecimento do ECP que um
indicativo forte da identidade do agente o vrus
pode ser identicado por IFA ou IPX nos cultivos
inoculados. A neutralizao viral com anti-soro
especco uma alternativa para a identicao
do vrus. Em alguns laboratrios, so utilizados
testes de PCR para a deteco do genoma viral
em amostras suspeitas. Esta tcnica possui aplicao especial para detectar infeces latentes.
Herpesviridae
Alternativamente, o diagnstico de um
episdio de doena aguda pode ser estabelecido por anlise sorolgica de soro pareado. Para
isso, amostras de soro devem ser coletadas dos
animais doentes durante o curso da doena e trs
a quatro semanas aps. Um aumento de ttulo
de anticorpos igual ou superior a quatro vezes
entre as coletas indicativo de infeco recente.
Com base nisso, testes sorolgicos que permitam
quanticar os anticorpos no soro (p. ex.: testes de
SN ou ELISA) podem ser utilizados para a conrmao do agente responsvel pelo episdio.
Vrios testes sorolgicos podem ser utilizados,
mas o teste de ELISA mais sensvel, rpido e
econmico do que o teste de SN. Variaes desse
teste, quando usados em conjunto com vacinas
diferenciais, permitem distinguir animais vacinados daqueles infectados naturalmente.
471
472
uso de uma vacina com vrus atenuado com deleo no gene da gE. Este uso permitido apenas
para sunos destinados ao abate.
Existem vrias estratgias de erradicao da
pseudoraiva, como a eliminao total do rebanho,
teste e remoo com ou sem vacinao, ou vacinao por um determinado perodo de tempo antes da remoo. Os fatores que inuenciam qual
opo escolher basicamente so os seguintes: a
prevalncia de animais infectados no rebanho e
na regio, a necessidade nanceira e estratgica
de eliminar o problema o mais rpido possvel
(barreiras para exportao de carnes e reprodutores) e o custo do programa.
Devido capacidade do SuHV-1 de estabelecer infeco latente sem a manifestao de
sinais clnicos, os sunos infectados, mas aparentemente sadios, so considerados potenciais disseminadores do vrus. Assim, torna-se cada vez
mais importante que os suinocultores exijam a
certicao sanitria ocial, emitida pelo Ministrio da Agricultura, dos rebanhos que fornecem
reprodutores para a sua criao.
Captulo 17
6.4.1.1 Epidemiologia
A infeco pelo EHV-1 enzotica na maioria das populaes eqinas e uma parcela signicativa dos animais de reas endmicas apresenta
anticorpos contra o agente. Entretanto, a maioria
dos testes sorolgicos no capaz de diferenciar
anticorpos contra EHV-1 e EHV-4, devido extensa reatividade cruzada entre os dois vrus. Assim, a prevalncia da infeco pelo EHV-1, com
base em testes sorolgicos, somente poder ser
determinada com o uso de testes que diferenciem
a resposta imunolgica dirigida a esses dois vrus.
O EHV-1 transmitido de forma horizontal,
por contato direto e indireto entre animais susceptveis e animais que esto excretando o vrus. O
vrus excretado durante a infeco aguda e durante episdios de reativao da infeco latente.
Geralmente, a durao e magnitude de excreo
viral so signicativamente superiores durante a
infeco aguda. No entanto, a excreo aps a reativao suciente para permitir a transmisso
do vrus. Por isso, animais latentemente infectados so importantes fontes de infeco e manuteno da infeco nos rebanhos. Os eqinos so
os nicos hospedeiros naturais conhecidos deste
agente e animais de todas as idades podem ser
afetados.
Herpesviridae
473
474
6.4.1.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo EHV-1 pode
ser realizado pelo isolamento e identicao viral
a partir de amostras clnicas. As amostras a serem
coletadas e enviadas ao laboratrio incluem o
pulmo, bao, fgado e timo fetais. Suabes nasais,
lquido cfalo-raquidiano, medula e sangue total
tambm podem ser utilizados para o isolamento
viral em caso de encefalomielite (Tabela 17.4). O
EHV-1 capaz de se multiplicar em cultivos celulares de outras espcies, alm da eqina, o que
auxilia a diferenci-lo do EHV-4, que s se multiplica em clulas de origem eqina. Clulas RK-13
(rim de coelhos) e Vero (de primatas) so rotineiramente utilizadas para o isolamento e multiplicao do EHV-1 em laboratrios de virologia.
Em cultivos celulares, o EHV-1 produz ECP
tpico de herpesvrus: arredondamento celular,
Captulo 17
475
Herpesviridae
Tabela 17.4. Manifestaes clnicas e material para diagnstico nas herpesviroses de eqinos
Vrus
Doena (condio)
Conjuntivite, faringite
6.4.2.1 Epidemiologia
O exantema coital eqino apresenta ampla
distribuio em populaes de eqinos, ocorrendo de forma endmica na maioria dos pases que
possuem rebanhos numerosos. A transmisso do
vrus ocorre principalmente por contato direto,
durante o coito, e, possivelmente, o agente pode
ser transmitido tambm por vetores mecnicos,
como moscas contaminadas com secrees vaginais.
476
6.4.2.3 Diagnstico
O diagnstico laboratorial da infeco pelo
EHV-3 pode ser realizado pelo uso de testes sorolgicos (SN) pareados ou pelo isolamento e identicao do vrus a partir de secrees e raspados
da mucosa afetada (ver Tabela 17.4). Suabes coletados de leses genitais ou orais so submetidos
ao isolamento viral em clulas de origem eqina.
Deve-se ressaltar que vrios isolados do vrus so
temperatura-sensveis, dessa forma, os cultivos
celulares inoculados com o material suspeito devem ser mantidos a 33-34C. A identicao do
vrus por IFA ou IPX deve ser realizada com cautela, pois o vrus compartilha alguns determinantes antignicos com o EHV-1. Assim, a identicao denitiva pode ser obtida pela neutralizao
com soro hiperimune especco.
Captulo 17
6.4.3.1 Epidemiologia
A infeco pelo EHV-4 apresenta-se disseminada nas populaes de eqinos, e uma grande
parcela dos animais apresenta anticorpos contra
o vrus. Cabe ressaltar, no entanto, que os anticorpos contra o EHV-4 no podem ser distinguidos daqueles direcionados contra o EHV-1 por
testes sorolgicos de rotina. Assim, no se pode
saber, com certeza, qual a parcela dos animais
soropositivos nestes testes foi exposta a cada um
dos agentes. Ou seja, no total de animais soropositivos contra o herpesvrus eqino, deve-se considerar que uma parcela pode ter sido infectada
com cada um destes vrus, alm de possveis infeces mistas.
Durante a infeco respiratria aguda, o
vrus excretado em secrees nasais e expectoraes e pode ser transmitido por contato direto
ou indireto. A transmisso por aerossis pode
tambm ocorrer, mas depende da quantidade de
vrus excretada, das condies climticas (temperatura, umidade, ventos) e da distncia entre os
animais. A faixa etria mais freqentemente afetada pela infeco de potros de dois meses a um
ano de idade.
477
Herpesviridae
6.4.3.3 Diagnstico
O diagnstico de infeces respiratrias em
eqinos deve necessariamente considerar o EHV4 como um dos agentes suspeitos (ver Tabela
17.4). No entanto, a sintomatologia e o histrico
so apenas presuntivos, pois outros agentes podem estar envolvidos no quadro clnico. Assim,
deve-se proceder a investigao etiolgica com o
auxlio de testes laboratoriais. Em geral, pode-se
recorrer ao isolamento e identicao do vrus
em amostras clnicas ou sorologia pareada, com
amostras coletadas durante a fase aguda e aps a
recuperao clnica. Para o isolamento, so recomendadas amostras de secrees nasais (coletadas com suabes) ou sangue total, dando-se preferncia para as secrees. O isolamento deve ser
realizado em clulas primrias ou de linhagem
de origem eqina. A diferenciao entre EHV-1 e
EHV-4 pode ser obtida pela inoculao do material suspeito em clulas eqinas (ED, derme eqina) e RK-13 (rim de coelhos). O EHV-1 capaz de
replicar e produzir ECP em ambas as linhagens,
enquanto o EHV-4 somente se multiplica nas clulas da espcie homloga.
Os testes sorolgicos de eleio so a SN e o
ELISA. A SN pode ser realizada para vericar o
aumento do ttulo de anticorpos entre a fase aguda e a convalescena e, assim, conrmar a etiologia do evento clnico. Recentemente, um teste
de ELISA foi desenvolvido para diferenciar entre
anticorpos contra o EHV-1 e EHV-4.
478
6.5.1.1 Epidemiologia
A infeco pelo CaHV-1 est distribuda
mundialmente em caninos domsticos e tambm
em candeos de vida selvagem. A doena causada pelo vrus ocorre principalmente em lhotes
de at duas semanas de idade. Estudos de soroprevalncia so limitados, mas demonstram que
entre 30 a 100% dos ces domsticos apresentam
anticorpos contra o CaHV-1, indicando a ampla
distribuio do vrus entre os ces.
A transmisso do CaHV-1 ocorre pelo contato direto ou indireto dos neonatos com secrees oro-nasais e vaginais durante ou logo aps
o parto. A transmisso pelo coito, assim como infeces intra-uterinas, tambm podem ocorrer.
Aps a resoluo da infeco primria, ocorre o estabelecimento de infeces latentes, que
persistem por toda a vida do animal. Os animais
latentemente infectados podem periodicamente
excretar vrus no ambiente durante os episdios
de reativao. Nessas ocasies, o vrus pode ser
transmitido para animais susceptveis.
Captulo 17
479
Herpesviridae
6.5.1.3 Diagnstico
A presena de leses caractersticas, como
petquias, na superfcie dos rins e edema pulmonar, juntamente com a observao de corpsculos
de incluso intracitoplasmticos, so indicativos
da infeco pelo CaHV-1.
O diagnstico denitivo da infeco feito
pela demonstrao de antgenos virais em cortes
de tecido atravs da tcnica de IFA ou pelo isolamento viral. O isolamento pode ser realizado
em clulas de origem canina, a partir de amostras
de tecidos como pulmes e rins de animais afetados.
poxvrus avirios como vetores, tm sido testadas, porm sem resultados promissores.
6.6.1.1 Epidemiologia
A infeco pelo FHV-1 distribuda mundialmente. Anticorpos contra o agente podem ser
detectados em mais de 70% dos gatos de criaes
ou abrigos. Nos gatos domsticos criados com
pouco contato com outros animais, a prevalncia
de aproximadamente 50%. No Brasil, a ocorrncia da infeco e doena tem sido relatada em
vrias regies. Sorologia positiva tambm j foi
demonstrada entre felinos selvagens criados em
cativeiro, que tambm so susceptveis ao vrus.
A transmisso do agente ocorre principalmente pelo contato direto ou indireto com descargas nasais. O vrus pode ser transmitido tambm
por aerossis e, com menor freqncia, por fmites contaminados. A mortalidade maior entre
lhotes com menos de seis meses de idade. Gatos
que sobrevivem infeco aguda desenvolvem a
infeco latente e a reativao da infeco, permitindo a transmisso do vrus a outros animais. Os
gatos portadores da infeco latente so os reservatrios do FeHV-1 e constituem a principal fonte de disseminao do agente nos gatis e abrigos
de animais.
480
6.6.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo pode ser estabelecido pelo histrico e pelos sinais clnicos. No
entanto, deve-se buscar conrmao laboratorial,
pois outros agentes causam doena respiratria
em felinos.
O isolamento do vrus pode ser realizado
pela inoculao de secrees nasais, conjuntivais
e farngeas ou, ainda, de macerados de mucosa
farngea, ocular ou nasal, em clulas de linhagem
ou primrias de origem felina. O FeHV-1 produz
efeito citoptico caracterstico dos herpesvrus,
com arredondamento e desprendimento celular
do tapete, formao de aglomerados de clulas
Captulo 17
481
Herpesviridae
6.7.1.1 Epidemiologia
A produo de aves atualmente desenvolvida de forma bastante intensiva, o que favorece
a rpida disseminao de agentes infecciosos em
uma criao. A MD altamente contagiosa, e a
infeco ocorre por inalao de poeira contaminada com o vrus presente nos criatrios. O MDV
pode persistir por longos perodos no meio ambiente e to ubquo que, virtualmente, todas as
aves domsticas do mundo acabam entrando em
contato com o agente em alguma fase de suas vidas. A infeco nem sempre induz manifestaes
clnicas, o que diculta a determinao da prevalncia e incidncia da infeco. A enfermidade ocorre comumente em galinhas, mas tambm
tm sido descrita em perus, codornas e faises.
A partir dos anos 1960, a despeito do uso
de vacinas, surtos de MD, causados por amostras cada vez mais virulentas, vm ocorrendo no
mundo todo. No Brasil, os frangos criados industrialmente recebem uma vacina contra MD com
a cepa HVT no primeiro dia de vida. As aves de
ciclo longo, como poedeiras, matrizes e avs, recebem uma combinao de vacinas dos sorotipos
1 (CVI 988/Rispens) e 3 (HVT). A vacinao reduz, mas no impede a infeco nem a excreo
viral, o que favorece a seleo de cepas mutantes
e, conseqentemente, problemas para o controle
desta enfermidade. O MDV continua sendo um
importante patgeno na produo avcola e tem
sido intensivamente estudado por pesquisadores
no mundo, porm pouco estudado no Brasil.
482
e bursa de Fabricius (BF), onde pode ser detectado j 24 horas ps-infeco (pi). A partir desses
rgos, o vrus infecta os linfcitos B e T e atinge
um pico de replicao entre os dias 3 e 7 pi. Essas
infeces so citolticas e causam atroa da BF e
timo, resultando em grave imunossupresso.
Aps a fase citoltica inicial, a infeco passa fase latente em linfcitos T a partir dos dias
6 e 8 pi. Durante esse perodo, o vrus pode ser
transportado por linfcitos at a pele, onde uma
infeco produtiva ocorre nos folculos das penas. O MDV um vrus estritamente associado
com clulas, e partculas virais livres somente so
produzidas pela replicao nos folculos das penas. A partir dessa replicao, o agente excretado para o ambiente, geralmente entre os dias 10
e 14 pi.
A terceira fase da infeco consiste em uma
infeco citoltica secundria que envolve tambm o sistema nervoso. Nessa fase, leses inamatrias importantes podem ser detectadas no
crebro e nos nervos de galinhas adultas, por
volta dos dias 9 a 15 pi. Uma quarta fase da infeco caracterizada pelo desenvolvimento de
linfomas malignos de linfcitos T que se formam
a partir do dia 12. Essa diviso da patogenia em
quatro fases pode no ser to clara quando h
infeco pelas amostras vv+ e quando a latncia
no estabelecida.
Linfcitos T, transformados pelo vrus e linhagens celulares derivadas de linfomas primrios, mantm os genomas virais integrados ao
DNA celular, um aspecto nico entre os herpesvrus. Nas infeces latentes com os demais herpesvrus, o genoma latente permanece em uma
forma epissomal no ncleo das clulas hospedeiras. O genoma do MDV contm vrios oncogenes, destacando-se o que codica a protena Meq,
membro da famlia de oncogenes Jun/Fos. A composio gentica do hospedeiro inui decisivamente no resultado e gravidade da infeco pelo
MDV. Protenas do complexo maior de histocompatibilidade (MHC) so fortemente associadas
resistncia ou susceptibilidade gentica ao vrus.
A polineurite crnica, paralisia transitria
e os linfomas viscerais, observados inicialmente
como sinais e leses caractersticos da MD, esto
aos poucos ocorrendo com menor freqncia. As-
Captulo 17
6.7.1.3 Diagnstico
A disponibilidade de AcMs que reagem somente contra o MDV (e no contra o HVT) um
pr-requisito para a identicao de tecidos ou
clulas infectadas com este vrus. Esses AcMs podem ser utilizados em tcnicas de IFA ou IPX. Em
tecidos infectados com o MDV, independente da
linhagem da ave ou virulncia da amostra, quantidades detectveis de antgenos virais podem ser
identicadas na BF, timo ou bao, a partir do dia
3 pi. Os mesmos testes podem ser utilizados para
identicar antgenos do MDV em cultivos celulares inoculados com material suspeito, quando o
ECP visvel.
483
Herpesviridae
Tabela 17.5. Principais diferenas clnicas e patolgicas entre a doena de Marek e a leucose aviria.
Caracterstica
Doena de Marek
Leucose aviria
Idade afetada
2 - 7 meses
4 - 10 meses (+ de 16 semanas)
Paralisias
Comuns
Ausentes
Leses macroscpicas
Fgado
Nervos
Pele
Bursa (tumores)
Bursa (atrofia)
Intestinos
Corao
Comum
Comum
Comum
Raro
Comum
Raro
Comum
Comum
Ausente
Raro
Comum
Raro
Comum
Raro
Sim
No
No
Sim
Interfolicular
Sim
No
Intrafolicular
Leses microscpicas
Clulas pleomrficas
Cls. blsticas
uniformes
Infiltrado na ris
Tumor na bursa
484
tumores. Entretanto, com o surgimento de amostras mais virulentas do MDV, tornou-se comum
o uso combinado de vacinas mistas contendo o
MDV-2 e HVT. Quando algumas amostras ainda mais virulentas surgiram, a primeira amostra
apatognica de MDV (CVI 988-Rispens) comeou
a ser utilizada em uma vacina viva modicada.
Atualmente esta amostra vem sendo amplamente
utilizada na confeco de vacinas contra a MD.
Uma das principais restries das vacinas
disponveis contra a MD a sua incapacidade
de induzir imunidade esterilizante. Conseqentemente galinhas previamente vacinadas podem
ser infectadas e disseminar o vrus de campo a
outros animais. Esta provavelmente a fonte de
amostras de MDV virulento que circula entre
populaes de galinhas e pode contribuir para o
surgimento de amostras cada vez mais virulentas.
Partculas virais do MDV podem se manter viveis por longos perodos na poeira dos
galpes, mas so sensveis ao tratamento com
detergentes, etanol e isopropanol a 70%. O uso
de prticas de higiene do ambiente e das pessoas que tm acesso s aves pode tambm limitar
a introduo e disseminao do agente nos criatrios. Alm disso, o uso de quarentena e teste
de aves de reposio podem tambm diminuir
a presso de infeco e prevenir a ocorrncia de
novos surtos.
Captulo 17
6.7.2.1 Epidemiologia
Os principais hospedeiros naturais do ILTV
so as galinhas, embora a doena j tenha sido
observada tambm em faises e perus. Aves de
todas as idades podem ser infectadas, mas os sinais clnicos mais caractersticos so observados
em aves adultas.
O ILTV apresenta uma distribuio mundial, tendo sido identicado em todos os pases
que tm avicultura comercial desenvolvida. No
Rio Grande do Sul, o primeiro surto de LT em galinhas foi descrito em 1974. O primeiro surto da
doena em perus, no Brasil, foi relatado em 2004.
O vrus transmitido de forma horizontal,
e a transmisso ocorre quando as aves infectadas
excretam o vrus pelas vias ocular e respiratria.
Aerossis e secrees contaminadas entram em
contato direto ou indireto com aves susceptveis,
possibilitando a infeco de novos hospedeiros e
a disseminao do vrus no lote.
485
Herpesviridae
forma bastante grave da infeco, com altas taxas de morbidade e mortalidade. Por outro lado,
amostras de baixa virulncia podem causar uma
forma subclnica da infeco. Nos surtos mais
agudos, a morbidade pode atingir de 90 a 100%,
e a mortalidade pode chegar a 70%. Nestes casos,
as aves podem morrer em at dois a trs dias psinfeco. Mais freqentemente, a mortalidade
muito baixa (at 2%).
A infeco afeta principalmente a traquia e
laringe e caracterizada por tosse e dispnia. Em
casos hiperagudos (raros), a tosse pode no ser
observada, ocorrendo somente dispnia, cianose
e morte sbita. Os sinais clnicos mais observados na fase aguda so: descarga nasal e traqueal
e tosse. Pode ser observado ainda: conjuntivite,
edema periorbital e ceratite; e as aves podem eliminar uma secreo traqueal mucosa e hemorrgica. As aves tendem a se recuperar em 7 a 10
dias ps-infeco.
As leses associadas com infeco pelo ILTV
se localizam predominantemente nas vias areas
superiores. Freqentemente observa-se congesto acentuada da mucosa da laringe e traquia,
que, em fases mais avanadas, podem se apresentar hemorrgicas e com exsudato caseoso.
Corpsculos de incluso intranucleares podem
ser observados nas clulas epiteliais da traquia.
A infeco com amostras menos virulentas pode
resultar em leses bem mais leves, em que apenas um edema facial, sinusite e conjuntivite so
observados.
A infeco pelo ILTV induz a produo de
anticorpos neutralizantes, mas os ttulos de anticorpos no apresentam correlao direta com
proteo. Dessa forma, mesmo animais soropositivos ao ILTV so susceptveis doena e podem
desenvolver sinais clnicos quando infectados
com o vrus de campo. Alm disso, foi demonstrado que aves bursectomizadas no produzem
anticorpos anti-ILTV, mas podem car protegidas contra uma reinfeco, indicando a importncia da imunidade celular.
6.7.2.3 Diagnstico
7 Bibliografia consultada
O ILTV pode ser isolado a partir de amostras clnicas (traquia e pulmes) inoculadas na
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Captulo 17
POXVIRIDAE
Cludio Wageck Canal
18
1 Introduo
491
2 Classificao
491
493
3.1 O genoma
493
4 Replicao
495
497
497
497
498
498
498
499
499
499
500
500
501
502
502
503
503
503
503
504
504
505
505
506
506
508
509
509
7 Bibliografia consultada
511
1 Introduo
Os membros da famlia Poxviridae infectam
diversas espcies de invertebrados e vertebrados, incluindo o homem. Os poxvrus foram os
primeiros vrus estudados intensivamente em
laboratrio, pois podem ser visualizados sob microscopia tica. Tambm foram os primeiros vrus a serem multiplicados e titulados em cultivo
celular, puricados sicamente e caracterizados
quimicamente.
A histria da imunologia e a vacinologia
est fortemente ligada a esses vrus, pois as observaes iniciais de proteo, associada com
exposio deliberada a agentes infecciosos se devem a Edward Jenner, nos clssicos estudos com
os vrus da varola bovina e humana. Alm disso,
o agente da varola tambm foi o primeiro vrus
erradicado da populao humana, em 1979, aps
dcadas de programas macios de vacinao em
todo o mundo.
Apesar da erradicao da varola, considerada uma das principais molstias infecciosas
humanas em todos os tempos, o interesse nos
poxvrus tem se renovado nos ltimos anos. Parte desse interesse se deve possibilidade de se
utilizar o genoma dos poxvrus para clonar e expressar genes heterlogos para uso em vacinas,
como foi feito na vacina utilizada para o controle
da raiva silvestre em candeos na Europa. Outra
fonte recente de interesse nesses vrus advm da
temeridade do seu uso potencial em bioterrorismo. Os poxvrus tambm so muito estudados
como exemplos de interaes complexas entre os
vrus e seus hospedeiros, pois o seu genoma codica uma srie de protenas que interagem com
os mecanismos imunolgicos desencadeados em
resposta infeco.
As principais propriedades dos poxvrus
so: a) possuem vrions grandes e complexos; b)
os vrions contm diversas enzimas para a sntese
e modicao de RNAs mensageiros (mRNA); c)
o genoma consiste de uma molcula de DNA de
2 Classificao
Os membros da Poxviridae so subdivididos em duas subfamlias: Entomopoxvirinae, que
contm vrus que infectam insetos; e Chordopoxvirinae, cujos membros infectam os vertebrados e
sero os objetos deste captulo. A subfamlia Chordopoxvirinae formada por oito gneros, denominados Orthopoxvirus, Capripoxvirus, Suipoxvirus,
Leporipoxvirus, Avipoxvirus, Molluscipoxvirus, Yatapoxvirus e Parapoxvirus. O prottipo da famlia
o vrus da vaccinia (VV), cujos hospedeiros naturais e origem permanecem controversos. Esse
vrus foi isolado inicialmente de bfalos, mas parece ter sido transmitido para esses animais por
humanos. A Tabela 18.1 apresenta a classicao
das principais espcies de poxvrus que infectam
os animais domsticos e a sua distribuio geogrca. Os membros de um gnero so relacionados gentica e antigenicamente entre si, alm de
possurem a morfologia das partculas e a gama
de hospedeiros similares. No entanto, tambm
existe alguma reatividade sorolgica cruzada entre vrus de diferentes gneros, apesar da identidade gentica ser menor do que 75%. A Figura
18.1 apresenta uma rvore logentica para ilustrar a relao gentica entre os gneros e espcies
dessa famlia.
492
Captulo 18
Tabela 18.1. Principais poxvrus que infectam os animais domsticos e o homem, seus hospedeiros e
distribuio geogrfica.
493
Poxviridae
96
100
100
Vrus yabapox
Vrus da varola ovina
99
75
Orthopoxvirus
Vrus do mixoma
100
53
Yatapoxvirus
Capripoxvirus
Leporipoxvirus
Suipoxvirus
Parapoxvirus
100
Avipoxvirus
Molluscipoxvirus
0,1
Figura 18.1. rvore filogentica construda a partir da anlise do gene que codifica a DNA polimerase de espcies dos
diferentes gneros da famlia Poxviridae. A anlise foi realizada pelo mtodo de Neighbor-Joining (10.000 repeties)
e utilizada a matriz de substituio Dayhoff Matrix Model (PAM). O comprimento dos ramos dado pelo nmero de
substituies por stio.
3.1 O genoma
O genoma dos poxvrus consiste de uma
molcula de DNA linear de ta dupla com 130
kb (parapoxvrus) a 300 kb (avipoxvrus). O genoma contm seqncias repetidas invertidas
do tipo hairpin (ITRs) de 0,1 a 12,4 kb nas extremidades e uma regio nica longa que ocupa a
regio central (Figura 18.3). As duas cadeias de
DNA que compem o duplex so unidas entre si
nas extremidades por curvas (loops). As regies
que formam as curvas so ricas em A-T e no so
complementares, no permitindo o pareamento
entre elas.
Aproximadamente 50 seqncias genmicas
completas de diferentes poxvrus j foram obtidas, permitindo uma descrio detalhada da estrutura, organizao genmica e dos genes individuais. Nos Chordopoxvirus, o nmero de genes
de aproximadamente 150, embora mais de 300
genes j tenham sido deduzidos no genoma do
poxvrus do canrio. Aproximadamente 90 dos
150 genes so conservados no genoma de todos
os Chordopoxvirus e codicam produtos que par-
494
Captulo 18
Tbulos de
superfcie
Orthopoxvirus
Tbulos de
superfcie
Parapoxvirus
Corpo
lateral
Membrana
do ncleo
Membrana
externa
Envelope
Envelope
Corpos
laterais
Membrana
do ncleo
Membrana
externa
Figura 18.2. Vrions de membros da famlia Poxviridae (esquerda: fotos de microscopia eletrnica; direita: ilustrao
esquemtica dos vrions). A, B) Vrions do gnero Orthopoxvirus; C, D) Vrions do gnero Parapoxvirus. Barra = 100
nm.
Repetio invertida
Seqncias nicas
Repetio invertida
10 kbp
160 kbp
10 kbp
Seqncias repetidas
0,9 kbp
1,3 kbp
Seqncias repetidas
1,3 kbp
0,9 kbp
Figura 18.3. Ilustrao esquemtica da estrutura do genoma dos poxvrus. O genoma constitudo por uma molcula
de DNA de cadeia dupla cuja regio mais longa nica e apresenta as cadeias complementares e pareadas. Prximas
s extremidades do genoma existem regies repetidas na orientao inversa, ricas em A-T, que no so exatamente
complementares e, por isso, no esto pareadas. As extremidades do genoma so unidas entre si, formando uma
inflexo (loop) e conferindo continuidade molcula de DNA.
495
Poxviridae
4 Replicao
A maioria dos poxvrus replica com ecincia em cultivos celulares, com exceo dos parapoxvrus, poxvrus de sunos e vrus do Molluscum contagiosum. Esses vrus tambm podem ser
multiplicados em ovos embrionados de galinhas,
onde produzem placas (focos) esbranquiadas
(pocks) na membrana corioalantide.
Os poxvrus codicam todas as enzimas necessrias para a transcrio e replicao do genoma viral. Tambm trazem, nos vrions, as enzimas para a produo e modicao dos mRNA
para a sntese de suas protenas, o que os tornou
independentes do ncleo celular. Aps a fuso
do vrion com a membrana plasmtica ou aps a
endocitose, o ncleo viral liberado no citoplasma, onde ocorrem todas as etapas do ciclo replicativo.
O processo de expresso gnica caracterizado pela transcrio temporal de trs classes de
genes (genes iniciais, intermedirios e tardios).
A transcrio de cada grupo de genes requer a
presena de fatores de transcrio especcos que
so produzidos pelos genes do grupo precedente. A transcrio iniciada pela RNA polimerase viral e outros fatores presentes no ncleo do
vrion, e resulta na produo de mRNAs alguns
minutos aps a penetrao, ainda no genoma no
totalmente desnudo. Os mRNAs do VV so detectados 20 minutos aps a penetrao e atingem
picos em aproximadamente 1 a 2 horas aps. As
protenas produzidas pela traduo desses mRNAs completam o desnudamento do genoma e
a transcrio de aproximadamente 100 genes iniciais. Essas etapas ocorrem previamente ao incio
da replicao do DNA.
Em clulas infectadas pelo VV, a replicao do DNA se inicia aproximadamente 1 a 2
horas aps a infeco e resulta na produo de
at 10.000 cpias do genoma por clula, metade
das quais ser empacotada na prognie viral.
Em outros poxvrus, o incio da replicao pode
ser mais tardio, como nos parapoxvrus (4-6 h)
e poxvrus avirios (12-16 h). O incio da replicao parece ocorrer em ambas as extremidades
do genoma e envolve a clivagem das cadeias de
DNA no stio de iniciao, seguida de replicao
496
Captulo 18
que a produo da prognie dos poxvrus tambm seja um processo complexo e que necessite
vrias horas para ser completada. A replicao e
a produo de vrions ocorrem em determinados
locais do citoplasma, denominados viroplasmas
ou fbricas de vrus. Os vrions envelopados so
liberados atravs de brotamento, e os vrions
no-envelopados podem ser liberados por brotamento ou lise da clula. Ambas as formas dos
vrions so infecciosas, embora as formas envelopadas infectem novas clulas mais rapidamente
e parecem ser mais importantes na disseminao
do vrus no organismo do hospedeiro. O ciclo replicativo dos poxvrus est ilustrado esquematicamente na Figura 18.4.
1
7
2
8
11
3
9
Ncleo
Citoplasma
12
10
14
13
Figura 18.4. Ciclo replicativo dos poxvrus. Os vrions se ligam a receptores de superfcie e penetram por fuso do
envelope com a membrana plasmtica, liberando o ncleo (core) no citoplasma (1). As enzimas trazidas nos vrions
sintetizam os mRNAs dos genes iniciais (2) que so traduzidos em protenas iniciais (3). As protenas iniciais
participam do desnudamento completo do genoma (4), na sua replicao (5) e na transcrio dos genes intermedirios
(6), cujos mRNAs so traduzidos em protenas (7). As protenas intermedirias esto envolvidas principalmente na
transcrio dos genes tardios (8), e participam das fases finais de replicao (resoluo e separao das molculasfilhas de DNA) (11,12). As protenas tardias(9) fazem parte da estrutura vrica e participam da morfognese dos
ncleos virais (10), que adquirem o envelope pelo brotamento no aparelho de Golgi (13) e so liberados da clula (14).
Poxviridae
497
498
Captulo 18
Rssia. Os hospedeiros naturais do vrus so vrias espcies de roedores silvestres. Estes animais
atuam como reservatrios do vrus, a partir dos
quais pode ser transmitido para vrias espcies
domsticas e silvestres. As caractersticas clnicas
e as doenas associadas so muito semelhantes s
causadas pelo VV, embora os vrus sejam antigenicamente distintos. Em vacas leiteiras, as leses
esto geralmente connadas aos tetos. Nos gatos,
a doena mais facilmente reconhecida e afeta
principalmente os animais que vivem em reas
rurais e so bons caadores. Outro fato que indica
que os roedores se constituem nos hospedeiros
naturais do vrus que a doena tem maior incidncia no outono, quando a populao de roedores maior. Nos gatos, os sinais clnicos iniciam
com pequenas ppulas na cabea e membros anteriores, podendo ulcerar, seguido pela formao
de crostas. Uma apresentao mais rara envolve
coriza, conjuntivite e pneumonia, provavelmente
advinda de contaminao bacteriana secundria
ou imunodepresso causada pelo vrus da leucemia felina (FeLV) e vrus da imunodecincia felina (FIV). Eventualmente os gatos podem transmitir a doena para o homem, que geralmente
desenvolve uma nica erupo maculopapular
na mo ou na face. A seguir, podem advir sinais
sistmicos, como nusea, febre e adenopatia. O
curso da doena mais severo em crianas e, embora raro, pode resultar em morte. Vrios surtos
da doena em zoolgicos so descritos na literatura, especialmente afetando os grandes felinos
(chita, ocelote, lince, jaguar, puma, leo e pantera), alm de rinocerontes, elefantes e ocapis, com
as chitas apresentando uma alta taxa de mortalidade.
O diagnstico pode ser conrmado por histopatologia, ME ou isolamento do vrus. Doenas
causadas pelo VV, vrus da mamilite herptica
(herpesvrus bovino tipo 2 BoHV-2), devem ser
consideradas no diagnstico diferencial da doena em bovinos. As medidas prolticas tm pouco impacto no controle e preveno da doena.
499
Poxviridae
introduo do vrus em colnias de camundongos atravs de soro de camundongo, lquido asctico, tumores e tecidos. Algumas linhagens so
mais resistentes, e a apresentao clnica pode ser
leve ou inaparente (C56BL/6, AKR), j outras so
muito sensveis (BALB/c, C3H, DBA).
A infeco pelo vrus da ectromelia tem sido
extensivamente utilizada como modelo para o estudo da patogenia de infeces vricas sistmicas.
Aps a penetrao e replicao prxima ao local
de entrada (geralmente a pele), onde a replicao produz uma pequena leso papular, o vrus
replica nos linfonodos regionais e produz uma
viremia primria. Esta viremia permite ao vrus
atingir vrios rgos, entre eles o fgado e o bao,
onde replica e produz necrose. Essa replicao
seguida de uma viremia secundria, pela qual o
vrus atinge outros rgos, inclusive a pele, produzindo as leses mculo-papulares e vesiculares
caractersticas. Estas leses so seguidas de prurido intenso e ulcerao e se constituem na via
de excreo do agente. Dentre os modelos de patogenia, o do vrus da ectromelia um dos mais
clssicos, e muitas informaes sobre a patogenia
das infeces vricas foram obtidas a partir desse
modelo.
A introduo desse vrus em uma colnia
tem conseqncias devastadoras, desta forma, o
diagnstico deve ser feito rapidamente. A varola dos camundongos pode ser diagnosticada por
histopatologia, sendo observados corpsculos de
incluso citoplasmticos eosinoflicos nas bordas
das leses de pele. Atravs de ME, podem ser observados vrions em qualquer tecido infectado. O
vrus tambm pode ser isolado em cultivos de clulas de embrio de camundongo e identicado
por tcnicas imunolgicas.
A preveno e o controle so baseados na
quarentena e regras de importao de vrus, de
camundongos e seus produtos que podem carrear o vrus. O monitoramento sorolgico regular
das colnias tambm deve ser feito, principalmente para diagnosticar as infeces subclnicas.
500
doena: uma em que as leses vesiculares se desenvolvem e outra que apresenta leses mltiplas na mucosa oral.
5.2.1.1 Epidemiologia
As varolas ovina e caprina ocorrem no sudoeste da sia, ndia e na maior parte da frica,
embora a distribuio geogrca dos dois vrus
seja diferente. Essa distribuio geogrca distinta sugere que essas doenas sejam causadas por
vrus diferentes. Contudo, estes vrus no podem
ser diferenciados atravs de sorologia e a anlise
de restrio do genoma indica que so geneticamente muito semelhantes. As cepas de vrus da
varola dos ovinos parecem ser mais relacionadas
com o vrus da pele nodulosa (lumpy skin) do que
com o vrus da varola dos caprinos.
Nos animais infectados, o vrus excretado nas exsudaes e descamaes de leses de
pele, alm de secrees nasais e oculares durante
a fase aguda da doena. A infeco ocorre pela
inalao de aerossis ou por feridas e abrases na
pele, alm da picada de insetos. A estabulao e
o connamento dos animais facilitam esta forma
de transmisso.
Aps a recuperao clnica da doena, os
animais cam imunes a reinfeces pelo mesmo
vrus. Por isso, em reas endmicas, a doena
generalizada e a mortalidade so raras. J em rebanhos livres da doena, a sua introduo pode
resultar em surtos graves. Animais de todas as
idades so susceptveis, embora os mais jovens
sejam acometidos com maior severidade.
Captulo 18
501
Poxviridae
5.2.2.1 Epidemiologia
A LSD disseminou-se progressivamente
durante o ltimo sculo por toda a frica, onde
segue causando surtos com grande freqncia. O
agente foi responsabilizado por somente um surto
fora desse continente, em Israel, em 1989. A principal forma de disseminao da doena atravs
de picadas de insetos hematfagos. Por isso os
surtos geralmente ocorrem em pocas de grande
abundncia desses vetores (estaes chuvosas).
502
Captulo 18
5.3.1.1 Epidemiologia
O poxvrus suno especco dessa espcie,
e a infeco distribuda mundialmente. Durante
a infeco aguda, o vrus excretado pela saliva e
em secrees conjuntivais dos animais infectados
e tambm est presente nos uidos das leses.
Crostas e escaras podem abrigar o vrus vivel no
ambiente durante meses. A transmisso do vrus
pode ocorrer por contato direto ou indireto entre animais e tambm mecanicamente atravs de
piolhos (Hematopinus suis). Os piolhos infectados
podem abrigar o vrus infeccioso por at dois meses. Outros insetos hematfagos tambm podem
503
Poxviridae
504
5.6.1.1 Epidemiologia
Os avipoxvrus so distribudos mundialmente e as suas infeces tm sido descritas h
sculos. Criaes de galinhas, perus e pombos
podem sofrer perdas considerveis em algumas
pocas do ano, geralmente relacionadas com a
presena de um maior nmero de vetores transmissores do agente. O avipoxvrus de galinhas
altamente infeccioso para galinhas e perus, raramente para pombos e nada para os patos e canrios. J o poxvrus de perus virulento para os
patos.
Captulo 18
505
Poxviridae
5.7.1.1 Epidemiologia
Os hospedeiros naturais do vrus so as espcies de coelhos das Amricas, Sylvilagus brasiliensis, na Amrica do Sul, e S. bachmani na Amrica do Norte. Nesses hospedeiros, o vrus causa
um broma cutneo benigno. Contudo, nos coelhos da Europa (Oryctolagus cuniculus), o vrus
causa uma doena generalizada que geralmente
fatal. Na dcada de 1950, o vrus foi introduzido
na populao de O. cuniculus da Europa, Chile
e Austrlia para o controle biolgico dessas populaes. Num primeiro momento, mais de 99%
da populao de coelhos infectados morria, e a
doena tornou-se endmica nessas regies. Aps
um determinado perodo, foram detectadas cepas de vrus atenuadas, assim como populaes
de coelhos resistentes. Nos locais onde a doena
ainda se manifesta, as epidemias ocorrem sazo-
506
Captulo 18
5.8.1.1 Epidemiologia
O vrus ocorre em todas as regies do mundo onde existem criaes de ovinos e caprinos e
mantido nas populaes por infeces persistentes e tambm pela sua longa sobrevivncia em
crostas secas no ambiente. O vrus pode permanecer vivel em crostas secas nas pastagens durante vrios meses e at anos. A disseminao da
doena pode ocorrer por contato direto ou indireto por fmites e, principalmente, por pastagens
contaminadas. Alm das pastagens, as instalaes, estbulos e utenslios podem abrigar o vrus
vivel por longo tempo e servir de veculo para
a sua transmisso. Forragens abrasivas contaminadas com o vrus facilitam a instalao da infeco e podem resultar em infeco disseminada.
Cordeiros tambm podem adquirir a infeco ao
mamarem nas ovelhas com leses nas tetas. Em
criaes intensivas, a infeco se dissemina rapidamente, principalmente em connamentos de
cordeiros para engorda.
A enfermidade afeta animais de todas as
idades, mas mais grave em cordeiros lactentes
que perdem peso e podem at morrer de inanio
por no se alimentarem devido s leses nas comissuras orais. Condies decientes de higiene,
decincia de vitamina A, estresse e outras condies que causem imunodepresso predispem
ocorrncia de surtos severos. Infeces subclnicas provavelmente tambm ocorram.
As taxas de morbidade aps a introduo do
agente em rebanhos livres podem atingir 100%,
mas a mortalidade geralmente baixa e deve-se
principalmente a complicaes secundrias e
inanio em cordeiros jovens.
507
Poxviridae
O vrus tambm pode infectar espcies silvestres que compartilham pastagens com caprinos e ovinos afetados e, ocasionalmente, ces e
humanos envolvidos na criao dessas espcies
podem tambm ser infectados.
5.8.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo baseia-se nos dados clnicos e epidemiolgicos. As leses crostosas so tpicas, inicialmente afetam poucos animais e rapidamente se disseminam para todos os
animais jovens que nunca foram infectados ou
vacinados. Em rebanhos virgens, a enfermidade
se alastra e infecta animais de todas as idades. Ao
exame microscpico, podem ser observadas clulas em forma de balo e corpsculos de incluso
do tipo B nas leses epiteliais.
O diagnstico clnico, aliado ao histrico e
informaes epidemiolgicas, , geralmente, suciente para denir a etiologia da doena. No entanto, o vrus pode ser identicado por ME a partir
de crostas coletadas dos animais doentes. O vrus
pode tambm ser isolado em clulas cutneas ou
de testculo de embrio ovino. Na prtica clnica,
o diagnstico geralmente clnico, podendo ser
acompanhado de conrmao por ME.
508
Captulo 18
509
Poxviridae
Doenas que cursem com estomatite em bovinos, como a infeco pelos vrus da febre aftosa
(FMDV), da diarria viral bovina (BVDV) e peste
bovina (RPV) devem ser consideradas no diagnstico diferencial.
O controle da doena feito por medidas
de higiene adequadas para evitar a propagao
do agente. No existem vacinas comerciais disponveis. Recentemente, uma vacina heterloga,
baseada no agente do ectima contagioso dos ovinos, foi desenvolvida, mas no h consenso com
relao a sua eccia.
510
Captulo 18
demonstrou que os avipoxvrus poderiam servir de vetores ecazes e seguros de vacinas para
mamferos. A sua multiplicao natural restrita
s aves, contudo, a sua inoculao em clulas de
mamferos resultou na expresso de genes inseridos no seu genoma e a inoculao em mamferos
induziu uma imunidade protetora. Essa imunizao na ausncia de replicao produtiva eliminou
a possibilidade de disseminao do vetor a partir do animal vacinado para os contatos ou meio
ambiente. Alm disso, a utilizao deste vetor em
espcies que no so reservatrios dos avipoxvrus torna improvvel a ocorrncia de recombinao que altere a patogenicidade do vetor. A outra
grande vantagem da utilizao dos avipoxvrus
como vetores a possibilidade de aplicao em
animais com imunidade prvia contra o VV.
Na ltima dcada, houve um grande nmero
de relatos da utilizao de uma cepa de poxvrus
de canrio (canaripox) atenuada recombinante em
animais e humanos, cando bem determinada a
sua segurana e eccia na induo de proteo.
Uma vacina experimental contra o vrus da AIDS
(HIV) foi produzida pela insero do gene da
gp160 no genoma desse poxvrus. Vrias vacinas
de uso veterinrio, baseadas no poxvrus do canrio, esto disponveis comercialmente no Brasil e em outros pases. Dentre estas se incluem: a)
vacina contra o vrus da cinomose canina (CDV),
na qual o poxvrus vetor contm os genes das glicoprotenas H e F; b) vacina contra o vrus da leucemia felina (FeLV), em que o vrus vetor contm
o gene da glicoprotena de superfcie do FeLV; c)
vacina contra o vrus do Nilo Ocidental (WNV)
para uso em eqinos, no qual o gene da principal
glicoprotena de superfcie do WNV foi inserido
no genoma do vrus vetor. Essa estratgia to
promissora e o desenvolvimento das vacinas
to gil, que se pode antecipar que o nmero de
vacinas animais, utilizando o poxvrus do canrio como vetor, ampliar-se- signicativamente
nos prximos anos. Pode-se especular tambm
que a utilizao criteriosa de poxvrus recombinantes, como vetores vacinais, propiciar a preveno, erradicao e cura de algumas doenas
que causam impacto na sade animal.
511
Poxviridae
7 Bibliografia consultada
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ASFARVIRIDAE
Gustavo Delhon1
19
1 Introduo
515
2 Classificao
515
515
4 Replicao
517
4.1 Adsoro
4.2 Penetrao
517
517
517
517
518
518
519
520
5.1 Epidemiologia
520
521
523
5.3 Imunidade
5.4 Diagnstico
5.5 Controle e profilaxia
523
523
524
6 Bibliografia consultada
524
1 Introduo
A famlia Asfarviridae constituda por apenas uma espcie viral, o vrus da peste suna
africana (ASFV), origem da sua denominao.
O ASFV um vrus DNA envelopado, grande
e complexo, que compartilha vrios aspectos da
estrutura do genoma e estratgia de replicao
com os poxvrus. A replicao do ASFV ocorre
no citoplasma das clulas hospedeiras, em stios
perinucleares bem denidos, denominados fbricas de vrus. Esse vrus exibe uma regulao temporal da expresso gnica e apresenta a estrutura do genoma similar aos poxvrus, incluindo as
seqncias repetidas invertidas terminais, uma
regio central conservada e regies variveis nos
segmentos terminais do genoma.
O ASFV o agente etiolgico da peste suna africana (ASF), uma enfermidade severa e
muito importante de sunos, principalmente no
continente africano. A ASF tem sido observada
desde os primrdios do sculo 20 no sul e no leste
da frica e inicialmente era caracterizada pelos
aspectos clnico-patolgicos semelhantes aos da
peste suna clssica (CSF). No entanto, foi observado, posteriormente, que essas duas enfermidades so muito diferentes. Na segunda metade
do sculo 20, a ASF foi detectada no sul e oeste
da Europa e posteriormente em Cuba, Repblica Dominicana, Haiti e Brasil. Atualmente, a ASF
est erradicada da maioria dos pases, mas permanece enzotica na frica subsaariana.
Na frica, o ASFV se mantm em ciclos selvticos com infeco de sudeos selvagens e de
carrapatos do gnero Ornithodoros. A capacidade
de infectar carrapatos faz do ASFV o nico arbovrus entre os vrus DNA. Os sudeos selvagens
infectados com o ASFV geralmente so assintomticos e apresentam baixos nveis de viremia.
Por outro lado, a infeco de sunos domsticos
resulta em conseqncias diversas manifestaes
clnicas, que vo desde infeces subclnicas at
doena altamente fatal.
2 Classificao
O ASFV o nico membro no gnero Asvirus e tambm da famlia Asfarviridae, uma fam-
516
Captulo 19
Envelope externo
Capsdeo
Membrana interna 1
Membrana interna 2
Ncleo ou core
Matriz ou capa do
ncleo
200 nm
Figura 19.1. Vrions da famlia Asfarviridae. A) Fotografia de microscopia eletrnica de um vrion do ASFV; B)
Ilustrao esquemtica de um vrion e seus componentes.
codicada pela regio mais conservada do genoma. Entre essas, esto as protenas de membrana e outras protenas estruturais, alm de protenas recentemente envolvidas nas diversas etapas
de morfognese das partculas vricas.
Outras protenas do ASFV apresentam seqncias similares a protenas ou enzimas celulares, incluindo aquelas que participam do metabolismo de nucleotdeos, da replicao e reparo
do DNA, da transcrio e da modicao de protenas, e tambm as protenas requeridas para
atividades enzimticas que esto presentes nos
vrions ou so induzidas em clulas infectadas.
O ASFV tambm codica protenas que medeiam as interaes vrus-clula hospedeira, determinam a virulncia e interferem em mecanismos que favorecem a replicao viral na clula
hospedeira, incluindo homlogos dos inibidores
de apoptose celulares (IAP), Bcl-2, IkB, protenas
semelhantes lecitina e protenas CD2. Notavelmente, vrias protenas que inuenciam na virulncia e no espectro de hospedeiros esto entre as
mais variveis entre os isolados do ASFV.
Os vrions do ASFV so estveis sob condies ambientais, resistindo a amplas variaes de
temperatura e pH. O vrus preserva a viabilidade
aps seis meses em embutidos, ou aps anos em
carnes congeladas, indicando que os subprodu-
517
Asfarviridae
4 Replicao
O vrus capaz de replicar em uma variedade de clulas de origem suna e pode tambm ser
adaptado para multiplicar em linhagens celulares de outras espcies. Grande parte dos conhecimentos sobre a biologia do ASFV foi adquirida a
partir de estudos sobre a sua replicao em cultivos celulares.
4.1 Adsoro
Vrias protenas virais se ligam a componentes da superfcie da clula hospedeira, incluindo a protena conservada p12 (p061R), a
protena estrutural p54, e a protena de membrana p30 (tambm chamada de p32 e de pCP204L).
Evidncias sugerem a participao da p72 e p54
na ligao do vrus com a membrana celular, e da
p30 na internalizao do vrion. No entanto, anticorpos neutralizantes contra essas protenas no
so sucientes para conferir proteo em camundongos. Embora a identidade dos receptores que
medeiam a adsoro e penetrao do ASFV no
seja conhecida, molculas potencialmente envolvidas no papel de receptor tm sido detectadas
na superfcie de macrfagos sunos.
4.2 Penetrao
A internalizao do ASFV nas clulas independente de temperatura e de energia, mas
um processo dependente de reduo do pH, o
que sugere o mecanismo de endocitose mediada
por receptor. Neste caso, a fuso do envelope do
ASFV com a membrana celular ocorreria nos endossomos. Tem sido sugerido que os ncleos dos
vrions seriam transportados no sentido retrgrado ao longo dos microtbulos at os stios de
518
Captulo 19
Asfarviridae
4.5 Morfognese
A replicao viral ocorre primariamente em
fbricas virais que so inicialmente observadas s
6-8 horas aps a infeco. Entre 12 e 24 horas pi
As fbricas virais contm um acmulo denso de
um material membranoso amorfo, e uma quantidade crescente de capsdeos vazios imaturos e de
partculas virais maturas.
Durante os estgios iniciais da morfognese,
a principal protena estrutural, p72, recrutada
do citoplasma e se associa com membranas do RE.
Estruturas membranosas laminares adotam uma
forma polidrica que progride para a formao
do capsdeo na face convexa, e da capa do core na
superfcie cncava da membrana. A observao
de que as membranas precursoras dos vrions
apresentam duas camadas bilipdicas contguas
com a membrana do RE, alm da presena de
protenas virais associadas a essa organela; e de
protenas virais no lmen do RE (pXP124L), nas
fbricas virais e em vrions puricados, sugerem
que um colapso nas cisternas do RE permitiria
que as suas membranas formassem as membranas internas do vrion.
A p54, uma protena de ligao com a clula
hospedeira e que se liga dinena, tambm crtica para os eventos precoces envolvendo o recrutamento dos precursores das membranas ao RE.
Essa protena essencial para a replicao viral e
sua supresso inibe a morfognese anteriormente
formao dos precursores do envelope. Concomitantemente formao do capsdeo, a camada
protica do core se forma na face interna da membrana e compreeende principalmente produtos
da protelise das poliprotenas p220 e p62. O processamento das poliprotenas ocorre juntamente
519
520
Captulo 19
Transmisso por
carrapatos
Infeco de
sunos
domsticos
Possvel transmisso
sem a participao
de carrapatos
Transmisso por
carrapatos
Adulto
persistentemente
infectado
5.1 Epidemiologia
Na frica subsaariana, o ASFV mantido
em um ciclo selvtico entre os sudeos selvagens
e os carrapatos do gnero Ornithodoros (Figura 19.2). Os warthogs (Potamochoerus aethiopicus)
so os principais hospedeiros naturais, mas o
vrus tambm foi demonstrado em populaes
de bushpigs (sunos selvagens, P. porcus) e javalis
(Sus scrofa ferus). Tentativas de reproduzir a infeco em outras espcies animais no obtiveram
sucesso.
Na natureza, o vrus encontrado em populaes de carrapatos Ornithodoros sp., onde pode
persistir durante anos. Nos carrapatos, o vrus
pode ser transmitido pela via sexual e tambm
de forma vertical para a prognie, contribuindo
para a sua perpetuao na natureza. Os carrapatos infectados se constituem no elo entre as
populaes de warthogs e os sunos domsticos,
podendo introduzir a infeco principalmente
em criaes de sunos ao ar livre. Uma vez introduzido em criaes domsticas, o vrus pode ser
disseminar entre os animais por contato direto e
indireto, sem a participao dos carrapatos. Em
sunos com a infeco aguda, o vrus detectado em todas as secrees e excrees, incluindo
a secreo ocular, nasal, farngea, genital, urina e
fezes. A transmisso natural entre sunos provavelmente ocorre pela via oronasal.
Diferentemente dos sunos domsticos, a
infeco de warthogs geralmente subclnica e
Ciclo em criaes
domsticas
Infeco de
carrapatos
Ciclo
silvestre
Transmisso
transovariana
Warthogs jovens
Inoculao
do vrus
521
Asfarviridae
522
prostaglandina E por macrfagos infectados podem ser responsveis pela agregao plaquetria
e trombocitopenia. A brinlise e desbrinogenemia parecem estar associadas com a liberao
de ativadores do plasminognio por macrfagos
ativados em resposta infeco. As leses observadas em casos crnicos tm sido atribudas
a componentes auto-imunes, incluindo a deposio de complexos imunes e induo de inamao nos rins, pulmes e pele.
Diferentes genes do ASFV e diferentes regies gnicas esto associados com a patogenia e
a virulncia da infeco em sunos domsticos,
mas no afetam a replicao do vrus em macrfagos in vitro. Dois desses genes, o UK (DP96R) e
o 23-NL (DP71L ou 114L), esto localizados prximos regio altamente varivel do genoma e se
constituem em provveis fatores de virulncia e,
portanto, alvos para a manipulao gentica para
a produo de mutantes vacinais.
A infeco de sunos domsticos pode resultar em diferentes formas clnicas, variando desde
infeco subclnica at doena fatal, dependendo
de fatores virais e do hospedeiro. Na forma aguda da doena, o perodo de incubao varia entre
cinco e 15 dias. Os animais infectados apresentam febre (41-42C), anorexia, congesto, cianose
da pele, aumento da freqncia cardaca e respiratria, descarga nasal, incoordenao, vmito e
nalmente coma e morte. Os animais infectados
com o ASFV geralmente morrem entre dois e nove
dias aps a infeco. Os achados patolgicos na
infeco aguda incluem leucopenia, linfopenia de
linfcitos T e B, trombocitopenia, apoptose de clulas mononucleares e de linfcitos, hemorragias
nos linfonodos, no fgado, nos rins, e nos tratos
respiratrio e gastrintestinal, congesto da pele e
de membranas serosas e grave edema pulmonar
interlobular.
A infeco subaguda dura aproximadamente trs a quatro semanas, e os animais apresentam febre remitente, perda de peso, pneumonia,
dispnia, insucincia cardaca e edema nas articulaes. Hemorragias nos linfonodos e em outros tecidos podem ser observados na necropsia,
mas no so to freqentes como nas infeces
agudas.
A infeco persistente pelo ASFV tem sido
descrita em warthogs e em sunos domsticos que
Captulo 19
523
Asfarviridae
5.3 Imunidade
A resposta humoral e celular so componentes importantes da imunidade contra o ASFV.
Anticorpos anti-ASFV so capazes de proteger
os sunos de uma infeco grave e fatal. Embora
anticorpos neutralizantes direcionados s protenas virais p30, p54 e p72 sejam encontrados em
animais convalescentes, estes no so sucientes
para conferir proteo. Linfcitos T CD8+, que se
desenvolvem em seis a sete dias aps a infeco,
parecem desempenhar um importante papel na
resposta imune protetora contra o ASFV.
Em sunos que sobrevivem infeco observa-se imunidade slida contra a cepa homloga.
Animais que sobrevivem infeco por cepas de
virulncia moderada ou por variantes atenuadas
desenvolvem uma resistncia de longa durao
ao desao frente a vrus homlogos, mas raramente frente a vrus heterlogos.
5.4 Diagnstico
O reconhecimento de surtos de ASF aguda
no difcil quando os achados clnico-patolgicos e epidemiolgicos so analisados. No entanto,
a diculdade ocorre no diagnstico de infeco
subaguda, crnica e subclnica, principalmente
em pases onde a enfermidade endmica em
sunos criados ao ar livre.
Sempre que possvel, o diagnstico da ASF
deve ser conrmado por testes laboratoriais, e
para isto uma gama de tcnicas est disponvel.
Nestes testes incluem-se mtodos para deteco
de vrus, antgenos e cidos nuclicos virais, alm
de anticorpos especcos. O teste de hemadsoro
(HAD) um teste sensvel e rotineiramente utilizado para detectar o ASFV aps inoculao em
cultivo celular. No entanto, nem todas as cepas
do ASFV apresentam atividade de hemadsoro.
Essas cepas podem, ento, ser identicadas pelo
efeito citoptico (ECP) seguido da deteco de
antgenos virais por imunouorescncia. Isolados de campo do ASFV replicam bem em cultivos de moncitos e macrfagos sunos, e podem
ser adaptados a replicar em clulas de linhagem,
com as PK-15 e Vero.
Vrios testes de ELISA tm sido desenvolvidos para a deteco de anticorpos especcos
contra o ASFV e so particularmente teis para
o diagnstico rpido e em grande escala. Recentemente, mtodos baseados na reao da polimerase em cadeia (PCR) e PCR em tempo real tm
sido desenvolvidos, constituindo-se em mtodos
sensveis e especcos de deteco do agente,
mesmo em estgios pr-clnicos da infeco.
O diagnstico diferencial deve considerar a
peste suna clssica, babesiose, tripanossomase,
erisipela, pasteurelose, salmonelose e antrax.
524
6 Bibliografia consultada
BLASCO, R. et al. Variable and constant regions in African swine
fever virus DNA. Virology, v.168, p.330-338, 1989.
DIXON, L.K. et al. African swine fever virus proteins involved
in evading host defence systems. Veterinary Immunology and
Immunopathology, v.100, p.117-134, 2004.
ESTEVEZ, A.; MARQUEZ, M.I.; COSTA, J.V. Two-dimensional
analysis of African swine fever virus proteins and proteins
induced in infected cells. Virology, v.152, p.192-206, 1986.
GOMEZ-PUERTAS, P. et al. The African swine fever virus
proteins p54 and p30 are involved in two distinct steps of virus
attachment and both contribute to the antibody-mediated
protective immune response. Virology, v.243, p.461-471, 1998.
HINGAMP, P.M. et al. A ubiquitin conjugating enzyme encoded
by African swine fever virus. The EMBO Journal, v.11, p.361366, 1992.
Captulo 19
CALICIVIRIDAE
John Neill1
20
1 Introduo
527
2 Histrico e classificao
527
528
529
531
531
531
531
532
532
5 Outros calicivrus
5.1 Vrus dos lees marinhos de San Miguel
5.2 Lagovrus (vrus da doena hemorrgica dos coelhos)
5.3 Norovrus e sapovrus
533
533
533
534
6 Diagnstico e controle
534
7 Bibliografia consultada
535
1 Introduo
A famlia Caliciviridae possui importantes
patgenos de animais, incluindo o calicivrus
felino (FCV), o vrus do exantema vesicular dos
sunos (VESV), o vrus dos lees marinhos de San
Miguel (SMSV) e o vrus da doena hemorrgica dos coelhos (RHDV). Alm disso, calicivrus
tambm j foram isolados de ces, macacos, bovinos, martas, galinhas, rpteis, anfbios e insetos.
Geralmente, os calicivrus esto associados doenas do trato respiratrio, doenas gastrintestinais ou doenas sistmicas. Em humanos, os calicivrus so importantes causas de gastrenterites,
principalmente em crianas e idosos.
Os calicivrus possuem um amplo espectro
de hospedeiros e devido a similaridades de morfologia, dimenses e propriedades fsicas, foram
originalmente classicados na famlia Picornaviridae. Possuem vrions pequenos, sem envelope,
e apresentam como genoma uma molcula de
RNA linear de ta simples e polaridade positiva.
Com o desenvolvimento das tcnicas de biologia
molecular, foi possvel realizar uma anlise mais
precisa desses vrus, principalmente da seqncia de nucleotdeos do genoma e das protenas
codicadas. Com essas informaes, percebeu-se
que os calicivrus no eram relacionados aos picornavrus, e assim foram classicados em uma
nova famlia, denominada Caliciviridae.
A famlia Caliciviridae composta por quatro gneros: Vesivirus, Lagovirus, Norovirus e Sapovirus. Os vesivrus e lagovrus infectam principalmente animais. Os norovrus e sapovrus
infectam primariamente humanos, mas j foram
tambm encontrados em bovinos e sunos. Atualmente, discute-se a possibilidade de que animais
domsticos possam ser os reservatrios dos calicivrus que infectam humanos.
2 Histrico e classificao
Os calicivrus foram originalmente descritos nos Estados Unidos, em meados da dcada
de 1930, associados com uma doena vesicular
contagiosa grave, posteriormente denominada
528
Captulo 20
Os calicivrus entricos humanos foram descritos pela primeira vez aps anlises por meio
de imunoeletromicroscopia em amostras de fezes obtidas de surtos de diarria em crianas de
escolas de Norwalk, Ohio, em 1968. Esse vrus,
denominado de agente Norwalk, tem sido, desde
ento, membro de um grande grupo de calicivrus causadores de gastrenterite em humanos. Esses vrus gastrentricos, denominados vrus pequenos de morfologia arredondada (small round
structured virus = SRSV), no possuem as depresses peculiares na forma de clice observadas por
microscopia eletrnica nos calicivrus e, por isso,
no foram classicados na famlia Caliciviridae.
Um segundo grupo de vrus, os calicivrus humanos clssicos (HuCVs), que possuem as tpicas
depresses em forma de clice na superfcie, causam doenas entricas idnticas aquelas causadas
pelo SRSV. Os vrus originalmente classicados
como SRSV compem agora o gnero Norovirus e
o HuCVs so classicados no gnero Sapovirus.
3 Estrutura e propriedades
dos vrions
Os calicivrus so vrions pequenos (27-40
nm), icosadricos, sem envelope, formados por
180 cpias idnticas de uma nica protena, arranjadas em 90 dmeros, com a forma de arcos. A
associao dessas unidades forma 32 depresses
em forma de clice na superfcie dos vrions. A
forma dessas depresses suscitou o termo calicivrus. Os vrions so relativamente resistentes
ao calor e desinfetantes, ter e clorofrmio, mas
no resistem muito a condies de pH baixo (3
a 5). A densidade das partculas vricas varia entre 1.33 e 1.41 g/cc. Outras caractersticas fsicas
e moleculares importantes dos calicivrus encontram-se discriminadas na Tabela 20.1. A Figura
20.1 apresenta uma micrograa eletrnica de colorao negativa de um calicivrus e um modelo
de reconstruo tridimensional de uma partcula
do vrus Norwalk.
Tabela 20.1. Propriedades biolgicas, estruturais e moleculares dos vrus pertencentes a famlia Caliciviridae.
Norovirus
Sapovirus
Humanos, sunos,
camundongos
Humanos, bovinos,
sunos
Hepatite, doena
Hemorrgica
Hepatite, doena
hemorrgica
Hepatite, doena
hemorrgica
Sim
No
Apenas o norovrus
murino
Apenas o calicivrus
1
entrico suno
Sim
Sim
No
Sim
7.35
7.65
7.4
Lagovirus
Vesivirus
Espectro de
hospedeiros
Sinais clnicos
Replicao em
cultivo celular
Morfologia tpica de
calicivrus (ME)
Amplo
Coelhos, lebres
Leses vesiculares,
abortos, infeco do
Trato respiratrio
superior
Nmero de ORFs
Extenso da ORF1
(aminocidos)
1763-18782
2345
1790
2281
Massa da protena
do capsdeo (kDa)
73-78 ; 59-61
60
58-60
58-60
Apenas a cepa adaptada em cultivo; 2 FCV-SMSV/VESV; 3 Protena precursora do capsdeo; 4 Protena do capsdeo madura
529
Caliciviridae
B
B
Figura 20.1. Vrions da famlia Caliciviridae. A) Fotografia de microscopia eletrnica de colorao negativa de um
calicivrus tpico; B) Modelo tridimensional de uma partcula do vrus Norwalk.
ORF1
Vpg
p32
P5.6
P39 (NTPase)
P30
P13 (VpG)
AAA(n)
ORF2
ORF3
Figura 20.2. Estrutura e organizao do genoma do calicivrus felino (FCV). A posio e massa molecular das protenas
codificadas pelas ORFs esto indicadas.
530
Captulo 20
Vesivirus
VPg
polyA
Protenas no-estruturais
ORF1
VPg
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
Lagovirus
ORF3
VPg
polyA
Protenas no-estruturais
ORF1
Protena do capsdeo
VPg
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
Norovirus
VPg
polyA
Protenas no-estruturais
ORF1
VPg
RNA subgenmico ?
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
Sapovirus
ORF3
VPg
polyA
Protena do capsdeo
Protenas no-estruturais
ORF1
VPg
RNA subgenmico ?
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
Figura 20.3. Organizao genmica dos vrus dos gneros Vesivirus, Lagovirus, Norovirus e Sapovirus. A linha
contnua representa o RNA genmico com a protena de ligao do genoma (VPg) na extremidade 5' e a cauda poliA na
extremidade 3'. Os RNAs mensageiros subgenmicos (tanto os j caracterizados como os provveis) esto
demonstrados abaixo da regio da qual eles so transcritos. Os retngulos abaixo do RNA genmico representam as
ORFs com a provvel posio das respectivas protenas. Nos lagovrus e sapovrus, a protena do capsdeo pode ser
produzida tanto pela traduo direta do genoma e clivagem a partir da protena no-estrutural como pela traduo de
um mRNAsg.
531
Caliciviridae
4 Calicivrus de importncia
em medicina veterinria
4.1 Calicivrus felino
O calcivrus felino (FCV) um agente cosmopolita, e considerado um patgeno importante de feldeos. comum em gatos domesticados, e j foi isolado de guepardos na Austrlia,
e de diversas outras espcies de felinos em zoolgicos. O agente tambm j foi isolado de casos
de glossite em ces. At o presente, apenas um
nico sorotipo foi identicado, isso provavelmente porque o anti-soro produzido contra uma
cepa do FCV reage com todos os isolados. Essas
reaes sorolgicas cruzadas devem-se principalmente presena de seqncias conservadas de
aminocidos na protena do capsdeo, e que so
importantes para a ligao do vrus aos receptores celulares. Algumas diferenas na proteo
4.1.1 Epidemiologia
A infeco pelo FCV parece estar amplamente difundida nas populaes de felinos domsticos e tambm tem sido detectada em alguns
feldeos silvestres. A transmisso natural ocorre
por contato direto ou indireto por fmites contaminados ou por aerossis. O vrus pode ser carreado mecanicamente entre animais pelo prprio
homem. O FCV prontamente transmitido por
animais durante a infeco aguda. No entanto, a maior fonte de vrus parece ser os animais
cronicamente infectados, que so portadores
subclnicos da infeco. O estado de portador
se desenvolve aps a fase aguda da doena, e
importante na manuteno do FCV na populao
felina. Os gatos infectados cronicamente apresentam o FCV nas tonsilas e faringe, onde o vrus
replica em nveis baixos durante meses ou at
anos. Essa replicao em baixos nveis nas tonsilas e a constante disseminao ocorre mesmo
na presena de anticorpos protetores. O estresse
pode participar na recrudescncia da infeco e
aumento da excreo viral. O vrus excretado
em secrees oro-nasais.
Recentemente, alguns estudos demonstraram que calicivrus antigenicamente distintos do
vrus original pode ser recuperado de gatos com
infeco crnica. Isso demonstra que as mutaes
produzidas durante a replicao, uma caracterstica comum dos vrus RNA, importante no estabelecimento e manuteno da infeco crnica.
532
agente. As infeces mais severas so caracterizadas por rinite, traquete e pneumonia, e produo
de vesculas na cavidade oral, as quais evoluem
para ulceraes do epitlio. As leses vesiculares
so geralmente restritas s cavidades nasal e oral.
O quadro clnico tambm apresenta febre, anorexia e descarga ocular e nasal. Uma sndrome de
claudicao transitria pode tambm ser observada em gatinhos e se caracteriza por dor muscular, edema das articulaes (poliartrite) e laminite. A infeco de fmeas prenhes pode resultar
em abortos. Nas infeces com cepas de FCV
mais virulentas, a mortalidade pode atingir 30%
em gatos com idade inferior a 12 semanas, e est
geralmente associada com extensiva pneumonia
e consolidao pulmonar. Alm disso, cepas altamente virulentas tm sido descritas recentemente, associadas com surtos caracterizados por
ictercia, edema e alta mortalidade. O estado de
portador crnico pode se estabelecer em animais
que se recuperam da infeco.
Captulo 20
533
Caliciviridae
5 Outros calicivrus
5.1 Vrus dos lees marinhos de San
Miguel
O vrus dos lees marinhos de San Miguel
(SMSV) j foi isolado de muitas espcies de cetceos e pinpedes (focas, lees marinhos, elefantes
marinhos, lobos marinhos e morsas), e tambm
de peixes marinhos. Anticorpos contra diversos
sorotipos do SMSV e do VESV tm sido detectados nessas espcies. Dessa forma, props-se que
as populaes de mamferos marinhos possam
servir de reservatrios, a partir das quais o SMVS
e o VESV poderiam ser reintroduzidos nas espcies domsticas. De fato, o SMSV pode infectar
animais, como os sunos e bovinos, e pode ser
propagado em cultivos celulares de primatas.
Outros vrus que pertencem ao gnero Vesivirus
infectam primatas (Pan-1), bovinos (Bos-1), cetceos (Tor-1) e rpteis (Cro-1), e ilustram a diversidade de espcies que podem ser infectadas. Recentemente, o SMSV causou uma infeco em um
laboratorista, adicionando assim os humanos em
seu espectro de hospedeiros.
534
Captulo 20
sibilidade de transmisso entre espcies. A caracterizao molecular de calicivrus isolados de humanos e animais tem demonstrado uma grande
similaridade. Recombinaes genticas j foram
observadas nesses vrus e deram origem a novas
variantes.
6 Diagnstico e controle
O diagnstico da infeco causada pelo calicivrus tem sido realizada pelo isolamento viral e
por testes de soroneutralizao (SN). O isolamento permite a multiplicao do vrus em cultivos
de clulas susceptveis, a partir de amostras clnicas. No entanto, o isolamento restrito aos calicivrus que replicam em cultivos celulares, como o
FCV, SMSV e VESV. Por outro lado, as infeces
por todos os calicivrus podem ser diagnosticadas utilizando a SN para pesquisar anticorpos no
soro de animais convalescentes. Testes de ELISA tambm tm sido utilizados para diagnosticar sorologicamente as infeces por calicivrus
humanos e podem tambm ser adaptados para
detectar antgenos virais em amostras clnicas. O
uso do teste evita a necessidade de se realizar o
isolamento e/ou SN, que so mais demorados e
laboriosos.
A utilizao da microscopia eletrnica de
transmisso tambm tem sido utilizada extensivamente no diagnstico das infeces por calicivrus. No entanto, essa tcnica no muito sensvel e somente detecta amostras que possuam
mais de um milho de partculas virais por mililitro. Alm disso, necessrio que as amostras
sejam coletadas no pico da replicao viral, o que
pode reduzir o tempo ideal de coleta para poucas
horas.
Com a caracterizao molecular de diversas
cepas de calicivrus, testes de diagnstico mais
rpidos, sensveis e baratos foram desenvolvidos.
Os testes mais notveis so aqueles baseados na
reao em cadeia da polimerase (PCR). Primers
para a PCR de todos os gneros de calicivrus,
tm sido descritos e podem ser utilizados para o
diagnstico.
Com exceo do calicivrus felino, no existem vacinas disponveis para o VESV ou para os
outros calicivrus animais.
Caliciviridae
7 Bibliografia consultada
GREEN, K.Y. et al. Taxonomy of the caliciviruses. The Journal of
Infectious Diseases, v.181, p.S322-330, 2000.
HERBERT, T.P.; BRIERLEY, I.; BROWN, T.D. Detection of the
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535
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PICORNAVIRIDAE
Elizabeth Rieder & Mrio Celso S. Brum
21
1 Introduo
539
2 Classificao
540
541
4 Replicao
543
546
546
547
548
549
551
552
552
554
555
556
5.2
5.3
5.4
5.5
5.6
5.7
5.8
557
558
558
559
559
559
560
6 Bibliografia consultada
560
1 Introduo
A famlia Picornaviridae uma das mais antigas e variadas famlias virais, abrangendo mais
de 200 vrus classicados em nove gneros. Esses
vrus tm sido muito utilizados como modelos
em pesquisas de diversos aspectos da Virologia.
Os membros desta famlia os picornavrus so
vrus pequenos, icosadricos, sem envelope e
possuem uma molcula de RNA linear de polaridade positiva como genoma. O nome da famlia
derivado de pico (pequeno) e RNA, em referncia
ao genoma de cido ribonuclico. A famlia abriga importantes patgenos humanos e animais,
como o poliovrus humano (agente da poliomielite ou paralisia infantil) e o vrus da febre aftosa
(foot and mouth disease virus, FMDV).
Em 1897, Loefer e Frosch apresentaram
a descoberta inovadora de um agente ltrvel
como causa da febre aftosa (foot and mouth disease, FMD) e, em seguida, a primeira evidncia
de que uma doena animal poderia ser causada
por um vrus. Em 1909, o poliovrus foi descrito
como o agente etiolgico da poliomielite humana
por Landteiner e Popper. Enders e colaboradores, em 1949, foram os primeiros a multiplicar o
Vrus
Doena
Espcie
Poliovrus (PV)
poliomielite (meningite)
humanos
Coxsackie
humanos
Hepatite A
hepatite tipo A
humanos e macacos
Echovrus
humanos
Rinovrus
resfriado
humanos, macacos
febre aftosa
eqinos
pato domstico
Encefalomiocardite (EMCV)
miocardite, encefalite
sunos, roedores
sunos
bovinos
540
Captulo 21
2 Classificao
Os picornavrus so atualmente subdivididos em nove gneros: Enterovirus (vrus de sunos e smios), Cardiovirus (encefalomiocardite,
EMCV e vrus de Theiler), Rhinovirus (rinovrus
humano), Hepatovirus (vrus da hepatite A), Erbovirus, Teschvirus (vrus da polioencephalomielite
dos sunos), Aphtovirus (FMDV e vrus da rinite
eqina) e Parechovirus (antigo echovrus 22 e 23).
Curiosamente, os picornavrus de diferentes gneros possuem homologia de nucleotdeos inferior a 45% entre si (menos de 34% de similaridade
em nvel de aminocidos). Por exemplo, os enterovrus humanos que apresentam 111 sorotipos
so divididos em quatro grupos genticos (A, B,
C e D).
At recentemente, cada sorotipo de picornavrus era designado como uma espcie viral
separada. A nova denio adota a seguinte regra: uma espcie de picornavrus uma classe ou grupo taxonmico (polythetic) de sorotipos
relacionados logeneticamente ou isolados que
compartilham: a) uma limitada abrangncia de
hospedeiros e receptores celulares; b) um grau
signicante de compatibilidade nos processos
proteolticos, replicao, montagem e recombinao gentica; c) mapas genmicos essencialmente
idnticos. Logo, a classicao atual baseada
em diversos parmetros, incluindo morfologia,
organizao genmica, estratgias de replicao,
padres de clivagem de protenas e identidade
gentica.
Com base nesses critrios, alguns enterovrus foram reclassicados do gnero Enterovirus
para formar os gneros Hepatovirus e Parechovirus. Os enterovrus e hepatovrus, que infectam
os hospedeiros via trato digestivo, so altamente
resistentes ao pH baixo do estmago e a enzimas
proteolticas do trato digestivo. Por outro lado,
os rinovrus e outros vrus que replicam no trato
respiratrio so lbeis em ambientes cidos (Tabela 21.2). A caracterstica de instabilidade a pH
inferior a 7,0 do FMDV resulta em diferenas no
desnudamento durante a infeco de clulas de
cultivo, comparado com outros picornavrus, e,
provavelmente, tambm interfere em termos de
especicidade tecidual e rgos alvos nos hospedeiros.
Gnero
Estabilidade ao pH
Densidade
Buoyant
Coeficiente de
sedimentao
Aphthovirus
Lbil, < 7
1,43 - 1,45
142 - 146S
Cardiovirus
Estvel, 3 - 9
1,34
160S
Enterovirus
Estvel, 3 - 9
1,34
160S
Hepatovirus
Estvel
1,34
160S
Rhinovirus
Lbil, < 6
1,40
160S
541
Picornaviridae
B
RNA
VP1
VP
VP3
VP2
VP1
VP2
VP3
Figura 21.1. Partculas vricas da famlia Picornaviridae. A) Fotos de microscopia eletrnica de vrions do FMDV em colorao
negativa. B) Representao esquemtica do vrion e seus componentes.
542
Captulo 21
ORF
3' UTR
5' UTR
VPg
VP4
VP2
VP3
VP1
2A
2B
2C
3A 3B
3C
3D
poly (A)
Traduo
Poliprotena
P1
P3
P2
Clivagem
Protenas estruturais
Protenas no-estruturais
Protease
L
VP4
VP2
VP3
VP1
2A
2B
2C
3A 3B
3C
3D
(VPg)
Replicao do genoma
Alterao da transcrio, traduo
e processamento protico celular
Encapsidao do genoma
Figura 21.2. Organizao do genoma do vrus da febre aftosa (FMDV), mostrando os componentes do RNA (linha), os
genes e os produtos primrios da traduo (retngulos em branco) e os produtos finais da clivagem (retngulos em
cinza). A funo das protenas est resumida abaixo da figura.
543
Picornaviridae
Seqncia
GNRA
IV
Rica em A-C
IRES tipo I
II
III
VI
Regio rica
em pirimidinas
Regio varivel
AUG
Regio
codificante
4 Replicao
A primeira etapa no ciclo replicativo dos
picornavrus a interao dos vrions com os
receptores celulares. Os receptores so determinantes do tropismo tecidual, tendo uma inuncia fundamental na patogenia da doena. Cada
grupo de vrus ou at mesmo cada vrus apresenta um mecanismo de penetrao nico. Alguns
picornavrus (FMDV e rinovrus) so internalizados por endocitose, e a penetrao do genoma
ocorre a partir da vescula endoctica acidicada.
No poliovrus e, provavelmente, em alguns outros, a penetrao ocorre na membrana plasmtica, sem a necessidade de internalizao. Tem
sido proposto que a VP1 do poliovrus penetraria
na membrana, formando poros atravs dos quais
o genoma seria ejetado para o interior da clula.
Essa atividade da VP1 dependente de sua ligao ao receptor, que provoca alteraes na sua
estrutura. Nos vrus que so internalizados por
endocitose, o processo de internalizao acompanhado de uma srie de alteraes conformacionais no capsdeo viral, levando ao desnudamento
e liberao do genoma no citoplasma celular.
Durante as ltimas duas dcadas, vrias
molculas de superfcie celular foram identicadas como receptores para os picornavrus. A
maioria desses receptores pertence superfamlia das imunoglobulinas (Ig), incluindo o VCAM1, ICAM-1, CAR e CD155 (receptor de poliovrus), e superfamlia das integrinas, como 2 1,
v 1, v 3, v 6, v 8 (parechovrus humano 1
[hPEV1], echovrus 1, aftovrus e alguns enterovrus como o Coxsackie A9 [CAV9]). Outros receptores, como os similares ao SCR (decay-acceleranting factor [DAF]) e molculas LDL (VLDL-R),
so tambm utilizados.
544
Captulo 21
A replicao do RNA ocorre aps alguns ciclos de traduo e maturao das protenas. A replicao ocorre em duas etapas, e realizada pela
polimerase RNA dependente de RNA (3Dpol), com
o auxlio de protenas virais e celulares. O RNA
genmico inicialmente transcrito em molculas
complementares (sentido negativo), que so usadas como molde para a sntese de mltiplas cpias de RNA genmico. Dentre estes, alguns so
traduzidos em protena, enquanto outros sero
includos nas partculas virais (Figura 21.4).
Embora as etapas bsicas da replicao sejam razoavelmente conhecidas, pouco se conhece
sobre os detalhes desses processos e sobre as funes das seqncias e estruturas cis-acting contidas no RNA dos picornavrus. Duas questes
ainda no esclarecidas se referem sntese da
cadeia negativa e ao modo como a polimerase viral reconhece o RNA viral entre os outros mRNA
poliadenilados celulares.
Devido ausncia de atividade de correo
da polimerase 3Dpol, erros so freqentemente produzidos durante a replicao, resultando
na incorporao de nucleotdeos incorretos. Em
razo disso, cada novo genoma contm aproximadamente uma mutao. Logo, a populao de
RNA viral consiste de quasispecies, uma coleo
de membros geneticamente diferentes, que podem se adaptar rapidamente a novos ambientes
por seleo.
As etapas nais do ciclo replicativo envolvem a montagem dos capsdeos e a maturao
dos vrions por clivagem da VP0 em VP2 e VP4.
Os mecanismos de montagem e maturao ainda necessitam maior entendimento. Em termos
gerais, os produtos da clivagem da regio P1
pela 3Cpro so organizados em uma estrutura
protmera, contendo uma cpia das protenas
VP0 (VP2 e VP4), VP1 e VP3. Cinco protmeros
podem formar pentmeros, e doze pentmeros
formam o capsdeo. Partculas intermedirias
tm sido identicadas em clulas infectadas por
picornavrus, incluindo protmeros, pentmeros,
partculas contendo RNA e com uma VP0 no clivada e, ainda, partculas com a VP0 no-clivada
e sem o RNA (capsdeo vazio). O ciclo replicativo
dos picornavrus est ilustrado na Figura 21.4.
545
Picornaviridae
1
Vpg
Precursores
do capsdeo
Polimerase
Fatores auxiliares
(helicase, protease)
Vpg
Complexo
replicativo
AAA
AAA
AAA
AAA
Procapsideo
AAA
AAA
Ncleo
5'
Prognie
viral
5'
RI
Replicao
do genoma
Figura 21.4. Ciclo replicativo dos picornavrus. 1) Ligao aos receptores; 2) Penetrao; 3) Traduo do RNA
genmico; 4) Clivagem dos precursores proticos; 5) Replicao do genoma, via produo de um RNA intermedirio
(complementar); 6) Morfognese; 7) Egresso por lise celular.
ribossomos. Como foi visto, os RNAs dos picornavrus possuem a estrutura IRES, que permite
que os ribossomos se liguem ao RNA e iniciem
a traduo. A traduo direcionada pelo IRES
altamente eciente e rpida, fazendo com que o
ciclo de replicao seja completado em poucas
horas (~3-5 horas) e com que uma clula infectada possa produzir at 106 partculas vricas. Esse
mecanismo faz com que a infeco pelos picornavrus resulte em inibio da sntese protica celular. J com duas horas de infeco, a traduo de
mRNA celulares est praticamente parada, sendo
substituda pela traduo de mRNAs virais.
Uma caracterstica marcante dos picornavrus a sua alta capacidade citoltica em clulas
de cultivo. As alteraes morfolgicas das clulas
iniciam com arredondamento celular, aumento
da refratilidade, retrao, picnose nuclear, dege-
546
nerao e desprendimento das clulas da monocamada. Um pequeno nmero de partculas suciente para formar um foco infeccioso no tapete
celular, que geralmente comea entre um e sete
dias aps a infeco. Quando presente em grandes concentraes, os picornavrus podem causar a lise completa da monocamada em poucas
horas. Alguns vrus necessitam um perodo de
adaptao para produzirem os efeitos citopticos
caractersticos. Nenhum cultivo celular capaz
de suportar a replicao de todos os picornavrus. Geralmente, utilizam-se clulas de origem
humana ou de primatas no-humanos para os
vrus que infectam humanos; e clulas da espcie
hospedeira para a propagao dos vrus de interesse veterinrio.
Alguns animais de laboratrio so susceptveis infeco pelos picornavrus e a sua infeco
experimental consegue reproduzir alguns aspectos da infeco. Alguns dos vrus dessa famlia
(poliovrus, Coxsackie e alguns enterovrus) podem ser inoculados experimentalmente em primatas no-humanos e camundongos. Os vrus de
interesse veterinrio, como o FMDV, podem ser
inoculados em espcies susceptveis, como sunos
ou bovinos, e tambm em animais de laboratrio,
como as cobaias e os camundongos lactentes.
5 Picornavrus de interesse
veterinrio
A seguir sero descritas as principais enfermidades causadas pelos membros da famlia Picornaviridae que possuem interesse veterinrio. A
enfermidade de maior destaque a febre aftosa,
seguida da doena vesicular dos sunos. A febre
aftosa (FMD) a enfermidade animal que possui
maior repercusso em nvel mundial, devido a
sua alta infecciosidade e contagiosidade, perdas
na produtividade e prejuzos econmicos por
causa dos embargos comerciais. A doena vesicular dos sunos, por ser confundvel com a febre
aftosa, tambm possui certa importncia. Porm,
a sua ocorrncia restrita a determinadas regies
faz com tenha uma importncia reduzida no cenrio mundial. Os outros vrus possuem menor
importncia clnica e, assim, sero abordados
Captulo 21
547
Picornaviridae
Regio
Sorotipo presente
Oceania
rea livre
Amrica do Norte
rea livre
Amrica Central e
Caribe
rea livre
Amrica do Sul
A, O e C
frica
SAT1, 2, 3, A, O, C
sia
A, O, C, sia1
548
Captulo 21
5.1.2 O agente
O FMDV pertence ao gnero Aphthovirus,
apresentando sete sorotipos (A, O, C, SAT-1,
SAT-2, SAT-3 e sia 1). Cada tipo possui um amplo nmero de subtipos antigenicamente relacionados, porm diferenciveis sorologicamente. Os
tipos e sorotipos produzem doena clinicamente
indistinguvel, porm apresentam diferentes distribuies geogrcas e situaes epidemiolgicas. Por exemplo, os sorotipos SAT-1, SAT-2 e
SAT-3 nunca se difundiram alm do continente
africano. Outro exemplo o FMDV tipo C, que
permaneceu oculto durante muitos anos, sendo
quase considerado extinto, at que ressurgiu em
um surto da regio Amaznica do Brasil em 2004.
Algumas variaes de virulncia entre sorotipos
e subtipos podem ser observadas. Aps a infeco com um determinado sorotipo, o animal estar protegido contra a infeco pelo mesmo sorotipo, mas permanece susceptvel infeco por
um sorotipo diferente. Ou seja, no h proteo
cruzada entre os diferentes sorotipos, em razo
das diferenas antignicas entre eles. A diferena
antignica entre subtipos dentro de um tipo pode
ser acentuada em alguns casos, e os nveis de neutralizao cruzada podem ser insucientes para
conferir proteo. Essa situao pode resultar em
comprometimento da eccia das vacinas.
549
Picornaviridae
Estado/Provncia
Espcie
Sorotipo
2000
Paraguai
Argentina
Brasil
Colmbia
Uruguai
Formosa
Rio Grande do Sul
Antiquia
Artigas
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Sunos e bovinos
FMDV A
FMDV O
FMDV O
FMDV O
FMDV O
2001
Argentina
Uruguai
Brasil
Buenos Aires
Soriano
Rio Grande do Sul
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV A
FMDV A
FMDV A
2002
Paraguai
Venezuela
Canind
Bovinos
Bovinos
FMDV O
FMDV O
2003
Bolvia
Paraguai
Bolvia
Argentina
Chuquisaca
Boqueron
La Paz
Salta
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Sunos e bovinos
FMDV O
FMDV A e O
FMDV O
FMDV O
2004
Peru
Brasil
Colmbia
Brasil
Lima
Par
Santander
Amazonas
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV O
FMDV O
FMDV A
FMDV C
Colmbia
Equador
Brasil
Bogot
Manibi
Mato Grosso do Sul
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV A
FMDV O
FMDV O
Argentina
Brasil
Corrientes
M.Grosso do Sul e
Paran
Esmeralda
M. Grosso do Sul
Pichincha
Bovinos
Bovinos
FMDV A
FMDV O
Bovinos
Bovinos
Bovinos e bfalos
???
FMDV O
FMDV O
2006
Pas
2005
Tabela 21.4. Surtos de febre aftosa diagnosticados na Amrica do Sul e notificados OIE durante os anos de 2000 a
2006.
Equador
Brasil
Equador
5.1.3 Epidemiologia
A transmisso do FMDV entre os animais
pode ocorrer de vrias formas. As principais so
a transmisso direta pelo contato de animais susceptveis com animais infectados e por contato
indireto, pelo contato dos animais com fmites
ou subprodutos contaminados. A disseminao
ocorre pelo contato com secrees e excrees
oriundas de animais infectados, transporte de
animais, em exposies, feiras, remates, entre
outras. A disseminao indireta pode ocorrer
por meio de pessoas (trabalhadores, produtores
550
Captulo 21
551
Picornaviridae
552
ronria e nas tetas. Acompanhando o desenvolvimento das vesculas, salivao excessiva e descarga nasal podem ser observadas. As vesculas
podem variar de 0,5 a 1 cm de dimetro e encontram-se preenchidas com um uido que possui
altas concentraes de vrus. As leses progridem
rapidamente, rompendo-se e formando reas ulceradas e erodidas que rapidamente cicatrizam.
Antes da resoluo completa das leses pode
ocorrer a infeco secundria, agravando ainda
mais o quadro. Como conseqncia das leses,
ocorre um comprometimento da funcionalidade
do rgo, o que explica a anorexia, diculdade de
movimentao e amamentao. Seqelas podem
incluir deformidades e inclusive a perda completa do casco.
O perodo de incubao de dois a 21 dias
(mdia de 3 a 8), mas o vrus geralmente eliminado do organismo antes dos sinais clnicos desaparecerem. A morbidade pode atingir os 100%, mas
a mortalidade muito baixa em animais adultos.
Em animais jovens, os ndices de mortalidade so
freqentemente altos, podendo ser atribudo
capacidade do vrus de infectar o msculo cardaco. A leso resultante no miocrdio conhecida
como corao tigrado. Alm das leses observadas nos epitlios citados anteriormente, o vrus
pode replicar e produzir leses nos pilares do rmen. Em bovinos leiteiros, freqentemente ocorre uma queda na produo leiteira por causa das
leses na pele do bere e a replicao do vrus na
glndula mamria. Abortos podem ocorrer devido s conseqncias sistmicas da infeco e no
como resultado da infeco fetal.
5.1.5 Imunidade
A proteo imunolgica conferida pela infeco natural ou pela vacinao mediada por
anticorpos neutralizantes. Existe uma forte correlao entre nveis desses anticorpos e proteo.
No h evidncias de que a imunidade celular
desempenhe um papel relevante na proteo da
infeco com o FMDV. A imunidade especca
para o sorotipo e subtipo com o qual o animal
foi infectado ou vacinado, ou seja, a imunidade
conferida contra um sorotipo no ir proteger o
animal da infeco clnica com outro sorotipo.
Captulo 21
A evoluo gentica do FMDV bastante rpida devido s altas taxas de mutao. Isto resulta em diversidade antignica, o que pode ocasionar falhas na proteo pelos anticorpos. Esse fato
possui implicao direta na seleo de amostras
usadas para produo de antgenos vacinais, em
que se deve utilizar variantes virais imunodominantes que so capazes de induzir proteo para
um amplo nmero de variantes do mesmo sorotipo.
Os animais recm-nascidos que possuem
imunidade passiva adquirida da me esto protegidos da infeco. Essa imunidade proporcional condio imunolgica da me e quantidade de colostro ingerido pelo recm-nascido. A
vida mdia da imunidade passiva para bovinos e
sunos em torno de 21 dias, podendo ser detectada at os quatro ou cinco meses de idade. Esse
tipo de imunidade possui inuncia direta na
resposta do animal vacinao.
5.1.6 Diagnstico
A caracterstica da alta infecciosidade do
FMDV e as srias implicaes sanitrias da infeco exigem um diagnstico urgente e preciso. A
possibilidade de FMD deve ser considerada sempre que houver doena vesicular em ruminantes
ou sunos, devido ao fato de outros vrus produzirem leses similares. A apresentao clnica pode
auxiliar, porm no suciente para o diagnstico denitivo. Podem ocorrer infeces mistas, de
variantes com virulncia alterada ou, ainda, com
manifestaes clnicas mascaradas pela imunidade parcial do rebanho. Por essas razes, a suspeita clnico-epidemiolgica deve necessariamente
ser conrmada por testes laboratoriais.
O diagnstico da FMD realizado pela demonstrao do vrus ou de antgenos virais em
tecidos e uidos de animais infectados. A investigao sorolgica pode ser empregada, porm
em razo da diculdade de diferenciao entre
resposta sorolgica vacinal daquela induzida
pela infeco natural, no recomendvel para
regies endmicas ou onde a vacinao praticada. Em casos suspeitos de FMD, a noticao
do servio ocial veterinrio obrigatria e premente. A coleta, transporte e processamento da
Picornaviridae
amostra devem ser realizados por pessoal tcnico capacitado e em laboratrios de segurana
credenciados.
Os materiais de eleio para o diagnstico
da enfermidade incluem fragmentos do epitlio
e uido coletado de vesculas no rompidas ou
recentemente rompidas. O material deve ser misturado em partes iguais de meio de transporte
contendo glicerol e meio fosfatado (0,04 M). No
caso de falta de meio de transporte, meio essencial mnimo ou PBS podem ser utilizados. Por
causa da fragilidade do vrus a variaes de pH,
recomenda-se manter um pH entre 7,2 e 7,6 na
amostra. Em casos suspeitos de infeco subclnica ou com leses discretas, pode-se coletar sangue com anticoagulante e/ou soro. Na presena
da mortalidade de animais jovens, tecidos, como
o msculo cardaco, tireide e linfonodos, podem
ser coletados. Quando as leses so discretas ou
suspeita-se de infeces subclnicas e convalescentes, pode-se coletar sangue com anticoagulantes e uido esofgico-faringeano (OP), com
auxlio de coletores do tipo probang. O OP deve
possuir restos celulares e ser livre de sangue ou
lquido ruminal. Aps a coleta, o lquido deve
ser misturado com meio de transporte (0,08M soluo de fosfato, 0.01% albumina srica bovina,
antibiticos, 0,002% vermelho de fenol e com pH
7,2). O material coletado deve ser acondicionado
em um recipiente limpo e vedado para evitar o
vazamento da amostra ou a penetrao de contedo que possa alterar o pH, inativando o vrus.
O transporte deve ser realizado imediatamente
aps a coleta e sob refrigerao (4C ). Em situaes nas quais o intervalo entre a coleta e a chegada ao laboratrio forem superiores a 24 horas,
as amostras devem ser congeladas em nitrognio
lquido ou gelo seco.
Os testes de rotina utilizados para o diagnstico da FMD so: isolamento viral, xao de complemento e ELISA de captura. Para o isolamento
viral, uma frao do tecido deve ser macerada e
o sobrenadante inoculado em cultivo celular. Se
o material coletado for o lquido vesicular, pode
ser inoculado diretamente. Os cultivos primrios
de tireide bovina so as clulas de eleio para o
isolamento do FMDV, mas cultivos primrios de
rim de bovino, suno e cordeiros tambm podem
553
554
Captulo 21
555
Picornaviridae
5.1.8 Vacinas
As vacinas contra a FMD so produzidas
a partir de preparaes de vrus cultivados em
cultivos celulares e inativados quimicamente. Essas preparaes so combinadas com adjuvantes
para potencializar a resposta imune. O processo
de produo altamente tecnicado e desenvolvido em laboratrios de segurana para evitar
escape de vrus. Diferentes testes para assegurar
a qualidade e determinar a massa antignica, potncia e inocuidade so realizados antes da liberao de um lote de vacinas. Vacinas formuladas
com adjuvantes base de hidrxido de alumnio,
com ou sem saponina, so indicados somente
para ruminantes. As vacinas com adjuvante oleoso (dupla emulso) podem ser utilizadas para
sunos e ruminantes. A capacidade imunognica
entre os sorotipos varivel, ou seja, para o soro-
556
Captulo 21
5.1.9 Perspectivas
A febre aftosa responsvel pelas maiores
restries ao comrcio internacional de animais
e seus subprodutos. Quando um surto ocorre em
um determinado pas, seus parceiros comerciais
interrompem a importao de animais, produtos animais e freqentemente de outros produtos agrcolas. Tais circunstncias resultam em
perdas permanentes de mercado para os pases
afetados. Muito tem sido realizado para melhorar as vacinas e mtodos de diagnsticos, assim
como para o desenvolvimento de terapias para
conter a propagao viral. No entanto, nenhuma
alternativa ainda est disponvel comercialmente, abrindo uma rea interessante para pesquisa
e desenvolvimento. A febre aftosa clinicamente
semelhante e assim pode ser confundida com
a rinotraquete infecciosa bovina (IBR), lngua
azul, mamilite herptica e peste bovina. Tambm
semelhante estomatite vesicular, doena vesicular suna e exantema vesicular dos sunos. Por
isso, testes rpidos e capazes de diferenciar entre
essas enfermidades so necessrios.
Picornaviridae
557
558
Captulo 21
varia entre 4 e 28 dias, e os sinais clnicos caracterizam-se por febre, anorexia, depresso, evoluo
para sinais neurolgicos como tremores e incordenao, convulses, coma e morte. A patogenicidade inuenciada pela amostra viral, idade e
condio imunolgica dos animais. Em casos severos, a mortalidade pode atingir at 75%, principalmente em animais jovens. A transmisso
ocorre por contato com animais infectados ou por
objetos contaminados com o vrus. Aps a penetrao, o vrus replica no trato alimentar e linfonodos associados, disseminando-se por viremia,
onde atinge e infecta o sistema nervoso central.
As leses neurolgicas incluem gliose, manguitos
perivascular e degenerao neuronal. O diagnstico realizado atravs do isolamento viral em
cultivo celular (primrio ou linhagem) de origem
suna e demonstrao do agente por imunouorescncia. O diagnstico diferencial deve ser feito
de outras enfermidades que infectam o sistema
nervoso central, como peste suna africana, peste
suna clssica, raiva entre outras. O controle pode
ser realizado pelo do uso de vacina inativadas ou
atenuadas, alm de medidas de isolamento, quarentena e desinfeco.
559
Picornaviridae
560
Captulo 21
logo aps a introduo do vrus no avirio, e esses ndices se reduzem com o estabelecimento
da infeco na criao. O diagnstico realizado
atravs do isolamento viral a partir de macerados do crebro de pintos doentes. O isolamento
pode ser feito pela inoculao via intracerebral
em pintos de um dia, o que reproduz a enfermidade neurolgica em at 28 dias. Outra forma de
isolamento viral a inoculao no saco da gema
de ovos embrionados de 5-7 dias de incubao.
Aps 12 dias, os embries so necropsiados e a
presena de atroa muscular da perna e morte
embrionria indicativa da presena do agente.
Pelo fato do AEV no produzir efeito citoptico
em clulas de cultivo, a tcnica de isolamento no
recomendada para o diagnstico. A deteco de
anticorpos atravs de SN ou ELISA podem auxiliar no diagnstico. O controle da enfermidade
realizado pela depopulao da granja ou pelo
uso de vacinas atenuadas ou inativadas.
6 Bibliografia consultada
AGOL, V.I.; PAUL, A.V.; WIMMER, E. Paradoxes of the
replication of picornaviral genomes. Virus Research, v.62, p.129147, 1999.
Picornaviridae
561
RIEDER, E.; WIMMER, E. Cellular receptors of Picornaviruses:
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CA: Academic Press, 2000. 1162p.
FLAVIVIRIDAE
Julia F. Ridpath & Eduardo Furtado Flores
22
1 Introduo
565
565
565
566
567
4 Classificao
568
568
570
571
571
572
576
579
582
589
589
5 Bibliografia consultada
590
1 Introduo
A famlia Flaviviridae abriga vrios vrus
de importncia em sade humana e animal. Os
membros dessa famlia possuem vrions pequenos, envelopados, que contm uma molcula de
RNA linear de polaridade positiva como genoma.
A famlia dividida em trs gneros: Flavivirus
(do latim avus amarelo), Pestivirus (do latim
pestis peste) e Hepacivirus (do grego heptos fgado). A famlia Flaviviridae foi estabelecida h
poucos anos e abriga vrios vrus anteriormente classicados na famlia Togaviridae (avivrus
e pestivrus), alm dos hepacivrus, que foram
identicados posteriormente.
Os avivrus (denominao dos membros
do gnero Flavivirus) so transmitidos primariamente por insetos. O prottipo desse gnero
(e da famlia) o vrus da febre amarela (YFV),
responsvel por doena severa em humanos em
regies tropicais/equatoriais. O YFV mantido
na natureza por meio de infeces alternadas em
mamferos silvestres e insetos e, ocasionalmente,
transmitido a humanos. Os vrus do Nilo Ocidental (WNV) e das encefalites japonesa (JEV) e
Saint Louis (SLEV) so tambm vrus zoonticos
de importncia em sanidade animal. O vrus da
dengue possui grande importncia como patgeno humano. O gnero Pestivirus inclui o vrus da
peste suna clssica (CSFV), o vrus da diarria viral bovina (BVDV) e o vrus da doena da frontei-
B
Protenas do capsdeo
Genoma RNA
Membrana lipdica
Glicoprotena E
Glicoprotena M
Figura 22.1. Morfologia e estrutura das partculas vricas da famlia Flaviviridae. A) Foto de microscopia eletrnica de
vrions do vrus do Nilo Ocidental (WNV); B) Ilustrao esquemtica de uma partcula vrica com os seus
componentes.
566
Captulo 22
vrus susceptveis inativao por solventes orgnicos e detergentes. O envelope contm duas
(avivrus e hepacivrus) ou trs (pestivrus) glicoprotenas virais inseridas.
O genoma consiste de uma ta simples de
RNA de polaridade positiva, com 9 a 12.3 kb. Esta
molcula de RNA apresenta duas regies notraduzidas (UTRs) prximas s extremidades
5 e 3 e possui uma nica fase aberta de leitura
(ORF) (Figura 22.2). Durante o ciclo replicativo,
no ocorre a produo de RNA mensageiros subgenmicos. As protenas estruturais so codicadas no tero prximo extremidade 5; enquanto
os genes das protenas no-estruturais localizamse nos dois teros prximos extremidade 3. A
ORF traduzida em uma longa poliprotena, que
clivada em protenas individuais medida que
produzida. A estrutura e organizao genmica
comparada dos vrus pertencentes aos trs gneros da famlia esto apresentados na Figura 22.2.
Gnero Flavivirus
11 Kb, 5' UTR cap
5' UTR
3' UTR
Pre-M
NS1
NS2A
NS2B
NS3
NS4B
NS4A
NS5
Gnero Pestivirus
12,3 Kb, 5' UTR IRES
5' UTR
pro
3' UTR
p7
rns
E1
E2
NS2-3
NS4-A
NS4-B
NS5A
NS5B
Gnero Hepacivirus
9,4 Kb, 5' UTR IRES
3' UTR
5' UTR
C
E1
E2
NS2
N S3
NS4A
NS4B
NS5A
NS5B
Protenas no-estruturais
Protenas estruturais
Protena estrutural imunodominante
Figura 22.2. Estrutura e organizao genmica comparada de vrus dos trs gneros da famlia Flaviviridae.
567
Flaviviridae
Genoma RNA
cadeia positiva
Replicao
RNA
Traduo
RNA
cadeia negativa
Poliprotena
Protenas
no-estruturais
Clivagem
ps-traduo
Protenas
estruturais
Prognie RNA
cadeia positiva
Prognie
viral
Figura 22.3. Representao esquemtica do ciclo replicativo dos vrus da famlia Flaviviridae.
de clivagem desta poliprotena e atuam na replicao do genoma. A replicao do genoma envolve a sntese de uma molcula de RNA de sentido
antigenmico (polaridade negativa). Esse RNA
serve de molde para a sntese do RNAs de polaridade positiva que serviro para mais etapas de
traduo e, posteriormente, sero encapsidados
como genoma da prognie viral. As protenas estruturais so utilizadas na montagem e construo da prognie viral. A morfognese das novas
partculas virais ocorre na regio perinuclear do
citoplasma, em associao com as membranas do
complexo de Golgi e do retculo endoplasmtico
liso. As partculas recm-formadas aparecem em
vacolos no citoplasma e a sua liberao ocorre pela fuso dessas vesculas com a membrana
plasmtica. A ruptura da clula no parece ser
um pr-requisito para a liberao dos vrions. As
conseqncias da replicao viral para a siologia
e integridade das clulas variam de acordo com
o vrus e com a clula hospedeira, e vo desde infeces absolutamente inaparentes (avivrus em
clulas de mosquitos; BVDV no-citoptico em
clulas de mamferos) at lise e destruio celular
(avivrus em clulas de vertebrados; BVDV citoptico em linhagens celulares de bovinos).
568
Captulo 22
Extenso
5'
Multiplicao
eficiente em
cultivo
Flavivirus
11kb
5' cap
Pestivirus
12.5kb IRES
Hepacivirus
9,6kb
Gnero
Genoma
IRES
4 Classificao
De acordo com propriedades biolgicas,
ecolgicas e moleculares, os membros da Flaviviridae so divididos em trs gneros: Flavivirus,
Pestivirus e Hepacivirus. A seguir, so descritas as
principais caractersticas dos vrus de cada gnero.
Homologia de seqncias de
nucleotdeos ou de aminocidos
As diferentes espcies de vrus classicados
no gnero Flavivirus so mais divergentes entre si
quando comparadas com a divergncia existente
entre os membros dos gneros Pestivirus e Hepacivirus. No entanto, as estruturas secundrias nas
regies UTRs 5 e 3 do RNA genmico so conservadas entre as espcies desse gnero. De acordo com essas caractersticas, os vrus do gnero
Flavivirus podem ser divididos em trs grupos
genmicos. Alguns desses vrus no apresentam
vetores artrpodes conhecidos:
Flavivrus transmitidos por carrapatos:
vrus Gadget Gully, Kyasanur Forest, Langat,
Louping Ill, febre hemorrgica Omsk, Powassan,
Royal Farm, Tick-borne encephalitis (TBEV), Seabird tick-borne, Kadam, Meaban, Saumarez Reef
e vrus Tyuleniy;
Hospedeiros
Humanos
Animais
domsticos
Animais
silvestres
Vetores
artrpodes
Caractersticas antignicas
Todos os vrus do gnero Flavivirus so antigenicamente relacionados entre si. No entanto,
testes de neutralizao viral tm sido utilizados
para identicar sorogrupos entre os vrus altamente relacionados. Com base na similaridade
antignica detectada nesses testes, a maioria dos
vrus do gnero tem sido classicada em um dos
oito sorogrupos: dois sem vetor conhecido (Modoc e Rio Bravo); dois transmitidos por carrapatos (TBEV e Tyuleniy) e quatro transmitidos por
mosquitos (Uganda S, dengue, Ntaya e JEV). No
entanto, alguns vrus, incluindo o prottipo da
famlia, o YFV, no se enquadram em nenhum
desses sorogrupos.
Origem geogrfica
Enquanto os avivrus, como gnero, apresentam uma ampla distribuio geogrca, as es-
569
Flaviviridae
Vetores
A maioria dos avivrus (78%) mantida,
amplicada e disseminada mediante ciclos de
transmisso natural que requerem artrpodes
hamatfagos que transmitem o vrus para os
hospedeiros vertebrados (Figura 22.4). A necessidade do vetor artrpode se d, basicamente, em
razo da inecincia de transmisso direta entre
os hospedeiros vertebrados. No h evidncia do
desenvolvimento de doena nos hospedeiros invertebrados aps a infeco, sugerindo que a interao do vrus com o inseto bem equilibrada.
Os vetores mais comumente utilizados pelos vrus do gnero Flavivirus so os mosquitos (50%),
seguidos pelos carrapatos (28%).
Hospedeiros
O espectro de hospedeiros dos avivrus inclui uma variedade de espcies de vertebrados e
de artrpodes. Os artrpodes adquirem a infeco
ao ingerir o sangue de um vertebrado infectado e
so responsveis pela manuteno desses vrus
na natureza (Figura 22.4). Os ciclos de transmisso natural sero discutidos posteriormente, nas
caractersticas ecolgicas.
Apresentao clnica
Os avivrus variam amplamente no seu potencial patognico. Mais de 50% produzem doena clnica em humanos e muitos so patognicos
para diferentes espcies animais, como aves, sunos, eqinos, caninos, grouse (espcie de ave do
Hemisfrio Norte) e musaranhos. Os avivrus
patognicos podem ser divididos em trs categorias maiores: aqueles que produzem infeco no
sistema nervoso central (SNC), acompanhada de
meningoencefalite (WNV e SLEV); os associados
com febre, artralgia e eritemas (dengue), e aqueles associados com febre hemorrgica (YFV).
Caractersticas ecolgicas
A maioria dos avivrus mantida na natureza por meio da replicao alternada em hospe-
Vertebrado humano
ou animal domstico
Mosquito ou carrapato
Vertebrado silvestre
Pode no ocorrer ou
insignificante para a disseminao
Figura 22.4. Ciclo de transmisso natural dos flavivrus. O vrus mantido em ciclos alternados em aves, mamferos
silvestres e mosquitos e apenas ocasionalmente transmitido para o homem ou para animais domsticos.
570
Captulo 22
571
Flaviviridae
Tabela 22.2. Vrus do gnero Flavivirus associados com enfermidades de importncia veterinria.
Vrus
Vetores
Espcie afetada
Apresentao clnica
Ocorrncia
Encefalite
japonesa (JEV)
Mosquitos
Eqinos, suinos
Encefalite, nascimento de
leites fracos e inviveis
sia
Carrapatos
Principalmente ovinos,
mas tambm humanos,
bovinos, sunos,
eqinos, cervdeos e
red grouse cativos
Encefalite
Mosquitos
Principalmente ovinos,
mas tambm humanos,
bovinos, caprinos,
sunos, eqinos, mulas,
camelos, cobaias,
coelhos, ces e aves
silvestres
Abortos, hepatite,
hemorragias, malformaes
congnitas
frica
Nilo Ocidental
(WNV)
Mosquitos
Principalmente pssaros,
mas tambm causa
doena importante em
humanos e eqinos.
Encefalite, doena febril
Infecta + de 30 espcies
de invertebrados e + de
150 espcies de aves.
Israel turkey
meningoencephalitis
Mosquitos
Perus
Encefalite
Israel
Kunjin
Mosquitos
Eqinos
Encefalite
Austrlia
Eqinos
Encefalite
Austrlia
Louping ill
Wesselsbron
(WBV)
dem ocasionalmente ser infectados e vacas prenhes podem apresentar aborto ou parir bezerros
fracos e/ou inviveis.
O diagnstico pode ser realizado pelo isolamento viral e por testes de soroneutralizao (SN).
O isolamento viral realizado pela inoculao
intracerebral em camundongos lactentes. Como
medida de controle, uma vacina viva modicada
tem sido utilizada. No entanto, esta vacina no
recomendada para uso em animais prenhes e sua
eccia questionada. Por essas razes, as medidas de controle so basicamente direcionadas ao
controle dos mosquitos vetores.
572
Captulo 22
Flaviviridae
4.1.4.1 O agente
O WNV pertence ao complexo antignico
do JEV e SLEV e apresenta reatividade sorolgica cruzada com vrios vrus desse complexo,
o que diculta o seu diagnstico por mtodos
imunolgicos. Os isolados do WNV podem ser
divididos em duas linhagens genticas: os vrus
da linhagem 1 circulam na Amrica do Norte
(desde 1999), Europa, sia e Austrlia; os vrus
da linhagem 2 tm sido isolados da frica subsaariana e Madagascar. Os vrus da linhagem 1 podem ser divididos em quatro cls, que possuem
distribuio geogrca e virulncia distintas; os
isolados norte-americanos pertencem ao cl B e
so altamente virulentos para camundongos, ao
contrrio da maioria dos outros vrus das duas
linhagens.
O WNV, introduzido nos Estados Unidos
em 1999, possui uma alta homologia de nucleotdeos (99,7%) com um vrus isolado de surtos
em Israel poucos anos antes, o que indica a sua
provvel origem. Esse vrus apresenta virulncia
para corvos americanos (Corvus brachyrynchos) e
para outras espcies de pssaros (pardais, pssaros cantores), o que o distingue de outros WNV
que circulam na frica e Austrlia. Isolados atenuados do WNV, provavelmente descendentes
do vrus original introduzido nos EUA, tm sido
identicados em aves em alguns estados norteamericanos e na Amrica Central. provvel que
esta variao genotpica e fenotpica se constitua
em um reexo da adaptao gradativa do WNV
aos novos hospedeiros. Assim, diferenas genotpicas e fenotpicas (virulncia, preferncia por
vetores, adaptao a novos hospedeiros) possivelmente sero identicadas em isolados do
WNV das Amricas nos prximos anos.
4.1.4.2 Epidemiologia
Um resumo da distribuio geogrca do
WNV, com base em relatos clnicos, virolgicos e
573
574
pardais), chadriiformes (aves de banhados), corujas e falconiformes desenvolvem nveis de viremia sucientes para infectar uma grande parcela
dos mosquitos que realizam o repasto sangneo.
Pombos, pica-paus, gansos, marrecos e patos no
desenvolvem altos ttulos de vrus no sangue e,
assim, no infectam uma parcela signicativa
dos mosquitos. Corvdeos, gralhas e pardais so
altamente infecciosos para mosquitos e tambm
apresentam mortalidade de aproximadamente
40% quando infectados. Os chadriiformes (aves
pernaltas de regies alagadias) e anseriformes
(ganso domstico) so altamente susceptveis
infeco e enfermidade. Os psitacdeos e galinceos so menos susceptveis. O papel de aves
migratrias na disseminao do WNV ainda
desconhecido, mas a rpida difuso do vrus nas
Amricas aponta para uma provvel participao dessas aves.
Os nveis de viremia desenvolvidos por
eqinos e humanos alm de outros mamferos
no so sucientes para infectar ecientemente
os mosquitos e proporcionar a transmisso. Assim, estas espcies no participam da transmisso do agente atravs de vetores. Outras formas
de transmisso, pouco freqentes e de importncia epidemiolgica questionvel, j foram descritas. Algumas espcies de rs e rpteis (crocodilos
jovens), alm de hamsters, podem desenvolver
nveis de viremia compatveis com a transmisso
atravs de mosquitos, mas o seu papel na transmisso natural do vrus desconhecido.
O carter epidmico e o grande nmero de
pessoas infectadas nos EUA permitiram o reconhecimento de novas formas de transmisso at
ento ignoradas. Assim, foi demonstrado que o
WNV pode ser transmitido de mes virmicas
para os fetos atravs da placenta e tambm para
os recm-nascidos, pelo colostro e leite. O vrus
pode ser transmitido por transfuso sangnea
e tambm por transplantes de rgos. Essas formas provavelmente no possuem importncia
epidemiolgica em reas endmicas, mas devem
ser consideradas em situaes de epidemias. H
tambm relatos de infeco de tcnicos de laboratrio que, acidentalmente, se inocularam o agente durante a manipulao laboratorial.
Em animais, a transmisso do WNV sem
o envolvimento de mosquitos foi demonstra-
Captulo 22
575
Flaviviridae
sua alta susceptibilidade, os eqinos no produzem nveis de viremia sucientes para infectar insetos e, assim, servir de amplicadores do vrus.
Ou seja, os eqinos infectados no disseminam o
vrus atravs de insetos hematfagos. Evidncias
sorolgicas indicam que a maioria das infeces
em eqinos assintomtica ou leve, passando
despercebida por criadores e tratadores. Acredita-se que apenas 15-20% das infeces resulte
em manifestaes clnicas, aps um perodo de
incubao de 3 a 14 dias. Aps a replicao inicial
nas proximidades do stio de inoculao, o vrus
alcana os linfonodos regionais e, subseqentemente, o sangue, atravs do qual invade o SNC
aps atravessar a barreira hematoenceflica. No
SNC, o vrus infecta e destri neurnios e tambm outras clulas, o que contribui para a sintomatologia neurolgica. A maioria das infeces
no-fatais seguida da erradicao do vrus do
organismo pelo sistema imunolgico.
Os sinais clnicos variam entre os surtos e
entre os animais afetados. Os sinais mais comumente relatados so: anorexia, fraqueza, depresso, incoordenao, ataxia e decbito. Hipertermia nem sempre est presente. Bruxismo, andar
em crculos, hiperexcitabilidade, pressionamento
da cabea contra anteparos e convulses tambm
tm sido relatados. As taxas de letalidade em
eqinos variam entre 25 e 45%. No surto ocorrido
nos EUA, em torno de 1/3 dos animais morreu
ou foi sacricado devido sua extrema condio.
Animais que sobrevivem 2-3 semanas aps o aparecimento dos sinais geralmente se recuperam;
b) Aves: a infeco pelo WNV j foi detectada em mais de 150 espcies de aves domsticas e silvestres. A susceptibilidade das aves
infeco varia amplamente de acordo com a espcie. Dentre as espcies domsticas, os gansos
so os mais susceptveis e, freqentemente, desenvolvem doena neurolgica quando infectados. Taxas de mortalidade de 25 a 40% tm sido
relatadas em infeces naturais, e de at 75% em
infeces experimentais. Por outro lado, galinceos e psitacdeos esto entre as espcies menos
susceptveis infeco. Dentre as espcies silvestres, os passeriformes (pssaros de vrias espcies, entre os quais os pardais, rabos-de-palha,
pssaros cantores), corvdeos e charadriiformes
(aves pernaltas de banhados) so as mais susceptveis. Essas espcies desenvolvem altos nveis
de viremia e excretam grandes quantidades de
vrus. Nas aves que desenvolvem a doena, os
sinais caractersticos incluem depresso, letargia, penas arrepiadas, alm de sinais neurolgicos como: ataxia, paralisia, movimentos de pedalagem, torcicolo, opisttono e incoordenao.
A morte geralmente sobrevm em menos de 24
horas. As taxas de mortalidade so geralmente
elevadas. Em pardais e corvdeos, mais de 50%
dos animais que manifestam sinais clnicos vo a
bito. Alm da espcie, fatores como a idade das
aves e a cepa viral inuenciam nas conseqncias
clnico-patolgicas da infeco. Acredita-se que a
infeco seja subclnica ou leve em grande parte
das espcies de aves infectadas naturalmente;
c) Humanos: a exemplo dos eqinos, aproximadamente 80% das infeces humanas pelo
WNV so subclnicas. Dentre os pacientes que
desenvolvem a doena, a grande maioria apresenta uma doena aguda autolimitante, caracterizada por hipertermia, cefalia, fadiga, dores
musculares e fraqueza. Algumas pessoas apresentam sinais gastrintestinais, pequenas manchas
avermelhadas na pele e eritemas. Rigidez e dor
no pescoo, diculdade de concentrao tambm
tm sido relatados e podem perdurar por semanas e at meses. A doena neuroinvasiva (meningite, encefalite) ocorre em menos de 1% das
pessoas infectadas, e mais comum em idosos e
em pessoas imunocomprometidas. A severidade
da doena neurolgica varia desde desorientao leve at coma e morte. No surto ocorrido nos
EUA, 9% das pessoas que apresentaram doena
neuroinvasiva foram a bito. Aproximadamente
10% dos pacientes que apresentam doena neurolgica desenvolvem paralisia cida, semelhante
da poliomielite.
4.1.4.4 Diagnstico
Para o diagnstico, amostras do encfalo devem ser utilizadas na tentativa de isolamento viral. Em aves, podem-se utilizar amostras de rim,
corao, crebro e intestino. O isolamento viral
pode ser realizado em clulas Vero ou em clulas de rim de coelho (RK-13). Aps a produo
576
Captulo 22
577
Flaviviridae
Espcie
Abreviatura
Vrus da peste
suna clssica
CSFV
Hospedeiro
Sunos, ovinos?
Vrus da diarria
viral bovina tipo 1
BVDV- 1
Ruminantes domsticos
e silvestres, sunos
BVDV- 2
Ruminantes domsticos
e silvestres, sunos
Vrus da doena da
fronteira dos ovinos
BDV
Ovinos, caprinos,
cervdeos, sunos?
Girafas
Vrus HoBi
Bovinos?
Vrus Pronghorn
Antlope Pronghorn
Apenas trs dos critrios utilizados para diferenciar espcies do gnero Flavivirus so utilizados para diferenciar os pestivrus: hospedeiro
de origem, reatividade sorolgica e homologia de
nucleotdeos do genoma. Os critrios ecolgicos,
espcie e distribuio geogrca dos vetores no
so utilizados, pois esses vrus no so transmitidos por insetos. O critrio da apresentao clnica
no utilizado, pois variaes das cepas dentro
das espcies podem afetar a apresentao clnica
(p. ex.: existem cepas de alta e baixa virulncia do
CSFV). Alm disso, a infeco por diferentes espcies de pestivrus pode determinar quadros clnicos semelhantes (p. ex.: malformaes congnitas em ovinos podem ocorrer tanto pela infeco
transplacentria pelo BDV como pelo BVDV).
Assim, a classicao das espcies dos pestivrus utiliza trs critrios:
a) hospedeiro de origem: o critrio mais
problemtico a ser estabelecido e pode no se
constituir em um indicador denitivo para a diferenciao. Os pestivrus foram originalmente
classicados como BVDV, CSFV e BDV, baseados na espcie hospedeira da qual foram isola-
578
Captulo 22
Ramo do BDV
Cepas tpicas
de BDV
Ramo do CSFV
Isolado de
ovino
Cepas de
CSFV
tpicas
Ovelha Chamois
Reindeer
HoBi
Girafa
Ramo do BVDV-2
Ramo do BVDV-1
Antlope
Pronghorn
Figura 22.5. Agrupamento filogentico de isolados de pestivrus com base na homologia de nucleotdeos do gene da
pro
protena N .
Flaviviridae
4.2.1.1 Epidemiologia
Afora os pases que j erradicaram o CSFV e
aqueles que esto em vias de erradicao, o vrus
579
580
(2006), Crocia (2006), Equador (2007), Nicargua (2007) e Rssia (2007). Em todos esses casos,
a infeco cou restrita a uma ou poucas propriedades e foi aparentemente controlada por aes
imediatas de combate.
O conhecimento da real situao da enfermidade em muitos pases dicultado pela falta
de programas ociais efetivos de vigilncia, pela
existncia de presses poltico-econmicas, que
evitam a divulgao de dados, e pelo possvel
efeito da vacinao em mascarar a circulao do
agente e a ocorrncia da doena. Por essas razes,
acredita-se que a incidncia real da doena supere, em muito, os relatos ociais.
A infeco pelo CSFV ocorre principalmente por via oronasal, embora os animais possam
tambm se infectar atravs de outras superfcies
mucosas, da conjuntiva ou de abrases da pele.
Embora a aerossolizao seja mnima a partir das
excrees e secrees dos animais infectados, o
vrus pode sobreviver em fmites e em ambientes contaminados por at duas semanas. Alm
da transmisso direta e indireta entre animais,
produtos sunos frescos, congelados ou curtidos
podem manter o vrus vivel e servir de veculos
para a infeco pela via oral. Nesse sentido, a importao de produtos sunos contaminados tem
sido responsabilizada pela introduo do agente
em reas livres. A transmisso indireta atravs de
pessoas, de animais silvestres e de fmites pode
ocorrer, embora o modo exato como o vrus se
dissemina entre criaes ainda no seja conhecido.
Captulo 22
581
Flaviviridae
4.2.1.3 Diagnstico
A maioria das amostras do CSFV circulantes
possui baixa virulncia, o que diculta o diagnstico clnico, principalmente em animais adultos.
Da mesma forma, a infeco pode apresentar um
perodo de incubao de vrias semanas no
caso de rebanhos o que requer vrios ciclos de
amplicao at se tornar clinicamente aparente.
Isso geralmente retarda o diagnstico e a adoo
de medidas de combate, e pode comprometer o
sucesso dessas medidas. Por isso, um diagnstico
pr-clnico seria de enorme benefcio para o combate a essa enfermidade.
Pelo fato da CSF no apresentar sinais patognomnicos, o diagnstico da enfermidade deve
ser conrmado pelo isolamento viral ou pela deteco de antgenos virais no sangue ou nos tecidos. Os testes de eleio para esta nalidade so a
582
Captulo 22
Flaviviridae
4.2.2.1 Epidemiologia
O BVDV apresenta distribuio mundial e
praticamente todos os pases que possuem bovinocultura signicativa j relataram a sua presena. A infeco pelo BVDV j foi descrita em vrias
espcies silvestres, porm a relevncia epidemiolgica desses achados permanece incerta. Recentemente, os pases escandinavos implementaram
programas de erradicao. Com base no sucesso
inicial desses programas, pases como Alemanha, Frana, Estados Unidos e Rssia tambm
iniciaram programas de erradicao do BVDV.
No entanto, a erradicao do vrus desses pases
583
584
Captulo 22
585
Flaviviridae
BVDV
ncp ou cp
Soropositivo, livre do vrus
ncp
Bezerro PI
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos
ncp ou cp
Atrofia da retina
cegueira
Embrio muito
susceptvel
Bezerros saudveis
soropositivos
Imunotolerncia (PI)
Efeitos na
fertilizao,
implantao
Leses no SNC
Abortos
40
80
120
160
200
240
280
D I A S D E G E S TA O
Figura 22.6. Conseqncias da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo BVDV, de acordo com o bitipo do vrus e
com o estgio de gestao.
586
Infeco persistente
O estabelecimento da infeco persistente
ocorre quando o feto infectado entre os 40 e 120
dias de gestao (Figura 22.6). Os fetos infectados
nesse perodo desenvolvem imunotolerncia ao
vrus infectante e o seu organismo jamais consegue erradicar o vrus. Esses animais tornam-se
portadores permanentes e excretam o vrus continuamente em secrees e excrees. Os bezerros que nascem PI so geralmente soronegativos.
Os fetos que so infectados aps o 125 dia de
gestao so considerados imunocompetentes e
podem desenvolver uma resposta imunolgica
que, freqentemente, resulta na erradicao do
agente. Os fetos congenitamente infectados podem apresentar alguns defeitos em decorrncia
da infeco transplacentria ou podem nascer
aparentemente normais. Os animais PI podem
apresentar crescimento retardado, malformaes
congnitas ou ser aparentemente saudveis. Alguns apresentam crescimento retardado e so
mais susceptveis a infeces secundrias. Como
descrito anteriormente, apenas cepas de BVDV
no-citopticas podem estabelecer infeces persistentes. Animais persistentemente infectados
com o BVDV representam o maior reservatrio
do vrus na natureza e, por isso, so considerados mantenedores do vrus na natureza. A maioria dos animais PI morre nos primeiros meses
de vida, no entanto, alguns deles podem viver
at os dois anos ou mais. Existem vrios relatos
Captulo 22
587
Flaviviridae
ncp
cp
Bezerro PI
BVDV ncp
5' UTR
N
p7
pro
rns
E1
NS4-A NS4-B
NS2-3
E2
NS2-3
NS5A
NS5B
NS2-3
NS3
No-citoptico (ncp)
Citoptico (cp)
Figura 22.7. Etiopatogenia da doena das mucosas (DM). Em bezerros nascidos imunotolerantes e persistentemente
infectados com um BVDV ncp, mutantes cp podem ser gerados a partir de mutaes do vrus original. A replicao do
par de vrus (ncp/cp) leva ao desenvolvimento da enfermidade, que apresenta curso fatal. A principal diferena
molecular entre os vrus ncp e cp a expresso da protena NS3 pelo vrus cp, enquanto o ncp expressa apenas o
precursor NS23.
4.2.2.3 Diagnstico
Deve-se suspeitar de infeco pelo BVDV
sempre que houver uma ocorrncia de perdas
embrionrias, abortos, malformaes fetais, nascimento de animais fracos ou morte perinatal.
Alm disso, casos de doena entrica e/ou respiratria com componentes hemorrgicos (melena,
petquias em mucosas, serosas etc.), eroses e ulceraes no trato digestivo tambm so sugestivos dessa infeco. Essas manifestaes ocorrem
principalmente, mas no exclusivamente, em
588
Captulo 22
589
Flaviviridae
deve-se recorrer a medidas bsicas de biossegurana e testar, para vrus, todos os animais antes
de ingressarem na propriedade. Com essa medida, possvel manter rebanhos livres da infeco,
pois a principal forma de introduo da infeco
por meio de animais infectados (na fase aguda ou persistente). Bezerros (potencialmente PI)
e vacas prenhes soropositivas (potencialmente
carreando fetos PI) devem ser especialmente considerados, pois representam potenciais formas de
introduo do vrus nos rebanhos. Em rebanhos
suspeitos de possuir animais PI ou com histrico
de casos clnicos suspeitos de BVDV, o controle
deve enfatizar a identicao e remoo desses
animais.
Nos pases escandinavos, o programa de erradicao tem por principal objetivo a identicao e a remoo dos animais PI. Nesses pases, a
vacinao no foi utilizada como parte do programa de erradicao devido ao fato de que, com
a vacinao, se perde o indicador sorolgico da
presena da infeco no rebanho. A incidncia do
BVDV era relativamente baixa, o que encorajou a
implementao do programa de erradicao sem
a utilizao da vacinao. Alm disso, a importao de animais, o transporte e a densidade eram
relativamente baixos quando comparadas com
outros pases. Em pases em que a prevalncia
do BVDV prxima ou acima de 50%, associada
com grande movimentao e importao de animais, programas de controle e erradicao provavelmente devem utilizar a vacinao do rebanho
alm da identicao e eliminao dos animais
PI.
lhas prenhes, o vrus capaz de atravessar a barreira transplacentria e infectar o feto, resultando
em abortamentos, nascimento de cordeiros fracos
e inviveis, alm de malformaes congnitas.
Em animais que nascem a termo, as conseqncias da infeco dependem da fase de gestao em que ocorreu a infeco. Quando a infeco ocorrer aps os 80 dias de gestao, pode
ocorrer o nascimento de cordeiros com cobertura
escassa e anormal de l, geralmente pequenos,
fracos e com graus variveis de tremor. Outros
cordeiros infectados pelo BDV podem apresentar
anormalidades esquelticas, como uma desproporcionalidade dos membros anteriores, cabeas
pequenas e ossos nos.
Similarmente ao BVDV em bovinos, os cordeiros podem nascer persistentemente infectados
com o BDV e excretar o vrus continuamente. No
entanto, sabe-se que cordeiros que nascem PI
do BDV apresentam uma viabilidade reduzida
quando comparados aos bezerros PI do BVDV.
A sua importncia da epidemiologia da infeco
incerta, mas provavelmente menor do que no
BVDV, devido sua baixa viabilidade e pouco
tempo de vida.
O diagnstico da infeco pelo BDV pode
ser realizado por isolamento viral ou por imunoistoqumica nos tecidos. Existem poucas vacinas e kits de diagnstico para o BDV disponveis
no mercado mundial.
590
Captulo 22
Espcies reconhecidas
Vrus da hepatite C (HCV)
hepatitis C virus
Espcies provisrias
GB virus B
5 Bibliografia consultada
BAKER, J.C. Clinical aspects of bovine virus diarrhea infection.
Revue Scientique et Technique (International Ofce of
Epizootics), v.9, p.25-41, 1990.
BAKER, J.C. The clinical manifestations of bovine viral diarrhea
infection. The Veterinary Clinics of North America. Food
Animal Practice, v.11, p.425-445, 1995.
BAKER, J.C. The clinical manifestations of bovine viral diarrhea
infection The Veterinary Clinics of North America. Food Animal
Practice, v.11, p.425-445, 1995.
BEAUDEAU, F. et al. Evaluation of a blocking ELISA for the
detection of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) antibodies
in serum and milk. Veterinary Microbiology, v.80, p.329-337,
2001.
BECHER, P.; ORLICH, M.; THIEL, H.J. RNA Recombination
between persisting pestivirus and a vaccine strain: generation of
cytopathogenic virus and induction of lethal disease. Journal of
Virology, v.75, p.6256-6264, 2001.
Flaviviridae
591
MEYERS, G.; THIEL, H.J. Molecular characterization of
pestiviruses. Advances in Virus Research, v.47, p.53-118, 1996.
OLAFSON, P. et al. An apparently new transmissible disease of
cattle. The Cornell Veterinarian, v.36, p.205-213, 1946.
PENSAERT, M.B. (Ed). Virus infections of porcines. New York,
NY: Elsevier, 1989.
TOGAVIRIDAE
Eduardo Furtado Flores
23
1 Introduo
595
2 Classificao
595
597
4 Replicao
598
598
5 Epidemiologia
601
602
602
603
603
606
607
608
608
609
609
610
610
610
610
611
611
611
611
7 Bibliografia consultada
611
1 Introduo
A famlia Togaviridae abrange um grupo de
vrus envelopados que possuem uma molcula
de RNA de cadeia simples e polaridade positiva
como genoma. A denominao Toga deriva da
aparncia frouxa do envelope viral lembrando
a vestimenta romana , observada nas primeiras
imagens dos vrions obtidas por microscopia eletrnica. No entanto, estudos posteriores demonstraram que o envelope desses vrus encontra-se
intimamente associado ao nucleocapsdeo. Esta
famlia composta por dois gneros: Alfavirus e
Rubivirus. O gnero Alfavirus abriga vrios patgenos humanos e animais, cuja principal caracterstica em comum a transmisso por vetores
artrpodes. O gnero Rubivirus abriga apenas o
vrus da rubola, um patgeno exclusivo de humanos e que no transmitido por insetos. Classicamente, a Togaviridae era uma famlia maior e
inclua os avivrus, pestivrus e outros vrus at
ento pouco caracterizados. Diferenas moleculares levaram os avivrus (e os pestivrus) a serem reclassicados na famlia Flaviviridae.
Os alfavrus so considerados arbovrus
(arthropod borne virus) clssicos, juntamente com
os avivrus e os buniavrus. Dentre os alfavrus
de interesse veterinrio, destacam-se os vrus
das encefalites eqinas do leste (EEEV), oeste
(WEEV) e venezuelana (VEEV), alm de outros
arbovrus de encefalites de importncia regional
em vrios pases. O prottipo da famlia o vrus
Sindbis (SIN), isolado inicialmente de mosquitos
no Egito e, ocasionalmente, associado com infeces em humanos. Apesar da sua importncia
clnica limitada, contribuies inestimveis sobre
a arquitetura da partcula viral, estrutura e funo das glicoprotenas do envelope e regulao
da expresso gnica foram obtidas com estudos
do SIN de outro alfavrus, o vrus Semliki Forest
(SFV). Nos ltimos anos, o SIN tambm tem sido
testado como vetor para terapia gnica e vacinas.
Os alfavrus podem infectar naturalmente vrias espcies de aves, pequenos mamferos
e insetos, sendo mantidos na natureza graas a
ciclos alternados nessas espcies. A distribuio
geogrca de cada espcie de alfavrus geral-
2 Classificao
A famlia Togaviridae composta por dois
gneros: Alfavirus e Rubivirus. O gnero Alfavirus abrange aproximadamente 30 espcies de
vrus, alguns dos quais tm sido associados com
doena em animais domsticos (eqinos e aves),
silvestres (aves e mamferos) e ocasionalmente
humanos. Esses vrus possuem caractersticas estruturais e morfolgicas em comum, so transmitidos por insetos e apresentam uma considervel
relao antignica. Grande parte da reatividade
antignica cruzada deve-se similaridade da
protena do capsdeo. De acordo com o grau de
similaridade antignica, os alfavrus podem ser
distribudos nos seguintes grupos: o WEEV apresenta vrios sorotipos, e o seu grupo inclui ainda
o vrus Highlands J e o SIN; o VEEV possui sete
sorotipos (I a VII), e alguns variantes dentro do
sorotipo I (AB, C, D, E e F); o EEEV possui dois
variantes antignicos (sul e norte-americano); o
grupo antignico do SFV inclui ainda os vrus
Mayaro, Getah, Ross River, ONyong-Nyong e
Chikungunya. A reatividade sorolgica cruzada
observada apenas entre vrus do mesmo grupo e no entre os gneros. Apesar de sua relao
antignica, os membros do gnero Alfavirus apresentam diferenas antignicas e moleculares, que
podem ser detectadas por testes sorolgicos e por
anlise de seqncias genmicas.
596
Captulo 23
Hospedeiros
naturais
Espcies
afetadas
Enfermidade
Vetores
Distribuio
Aves silvestres
de reas
pantanosas
Eqinos, aves
domsticas
(faises,
galinha, emas,
patos)
Doena febril,
encefalite
Mosquitos
(Culiseta
melanura, Aedes
sollicitans,
A.vexans)
Eqinos
Encefalite,
doena febril
Mosquitos (Culex
tarsalis)
Plancies centrais e
ocidentais dos EUA e
Canad
Roedores silvestres,
eqinos (vrus
epizoticos)
Eqdeos (eqinos,
asininos, burros)
Encefalite,
doena febril
Mosquitos (Culex
sp)
Amrica Central,
norte/noroeste da
Amrica do Sul
Getah
Pssaros,
mamferos
Eqinos
Doena febril
Mosquitos
Sudeste Asitico
Higlands J
Pssaros,
mamferos (?)
Eqinos
Doena febril,
encefalite
Mosquitos
Amricas
Chikungunya
(CHIK)
Primatas
Primatas,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
frica, ndia,
Sudeste
Asitico
Mayaro (May)
Primatas
Primatas,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Amrica do Sul,
Trinidad e Tobago
Onyong-nyong
(ONN)
Primatas
Humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Africa
Mamferos
silvestres
Mamferos,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Austrlia,
Ilhas do Pacfico
Sindbis (SIN)
Pssaros
Pssaros,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Norte da Europa,
frica, sia e
Austrlia
Semliki Forest
(SFV)
Pssaros
Pssaros,
humanos,
eqinos
Doena febril,
rara encefalite
Mosquitos
frica
Vrus
Encefalite
eqina do leste
(EEEV)
Encefalite
eqina do oeste
(WEEV)
Encefalite eqina
venezuelana
(VEEV)
Aves silvestres,
pequenos mamferos
Togaviridae
597
598
Captulo 23
mRNA 26S
Protenas no-estruturais
5'
Cap
NsP1
NsP2
NsP3
NsP4
Protenas estruturais
C
E3
E2
E1
3'
A(n)
Glicoprotenas do
envelope
Aproximadamente 12 kb
Fonte: adaptada de Schlesinger e Schlesinger (1996).
Figura 23.2. Estrutura e organizao do genoma dos alfavrus. As provveis funes dos produtos esto apresentadas
abaixo de cada gene.
4 Replicao
Os alfavrus replicam em uma variedade
de linhagens celulares, incluindo clulas BHK21 (baby hamster kidney cells), Vero (African green
monkey kidney), alm de cultivos primrios de
embries de galinha (CEF) e de pato. A replicao
viral nessas clulas produz altos ttulos de vrus
e acompanhada de citopatologia severa e morte celular. A replicao em clulas de mosquitos,
por outro lado, geralmente no acompanhada
de citopatologia ou alteraes aparentes na siologia celular, a exemplo do que ocorre in vivo. A
infeco natural em mosquitos persistente, sem
alteraes evidentes na siologia do vetor. Clulas C6/36, derivadas de Aedes albopictus, tambm
so rotineiramente utilizadas para amplicar os
alfavrus em laboratrio.
599
Togaviridae
ocorre mais tardiamente, ao contrrio da clivagem da nsP4, que parece ocorrer imediatamente
aps a sua produo. No vrus SIN, a atividade
polimerase foi mapeada na nsP4, que possui uma
seqncia GDD presente em vrias RNA polimerases virais. Um complexo formado pela nsP4
e por outras nsPs responsvel pela replicao
do genoma (complexo replicase), que ocorre via
sntese de uma molcula de RNA de sentido antigenmico (polaridade negativa). Esta molcula
serve inicialmente de molde para a transcrio
dos mRNAs subgenmicos (26S). A nsP2 parece
atuar na regulao da sntese da cadeia negativa
de RNA e na iniciao da sntese do mRNA subgenmico, alm de possuir atividade de protease.
A nsP1 possui atividade de metil-transferase.
Os mRNAs subgenmicos (26S) so traduzidos, originando uma poliprotena que , ento,
clivada, dando origem s protenas estruturais
Genoma
Cap
A (n)
Traduo
Poliprotena
Clivagem
NSP1
NSP2
NSP3
Replicao
NSP4
Transcrio
3
Cap
A (n)
mRNA subgenmico
Traduo
Poliprotena
Clivagem
Processamento
co- e ps-traduo
Precursor
Clivagem
Precursor
E1
Clivagem
E3
E2
600
Captulo 23
1
11
2
H+
H+
10
9
6
7a
7b
4
10
Citoplasma
Ncleo
Figura 23.4. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo dos alfavrus. 1) Ligao nos receptores celulares; 2)
Internalizao por endocitose mediada por clatrina; 3) Penetrao e desnudamento; 4) Traduo parcial do genoma e
produo das protenas no-estruturais (nsPs); 5) Sntese do RNA antigenmico; 6) Transcrio da regio das
protenas estruturais e produo do mRNA subgenmico (26S); 7) Traduo do mRNA 26S produzindo as protenas
do capsdeo (7a) e do envelope (7b). 8) Sntese do RNA genmico; 9) Morfognese dos nucleocapsdeos; 10)
601
Togaviridae
5 Epidemiologia
Os alfavrus so mantidos na natureza por
meio de ciclos alternados em hospedeiros verte-
Hospedeiros
acidentais
Ciclo natural
Hospedeiros
acidentais
Figura 23.5. Histria natural dos alfavrus. Vrias espcies de aves silvestres so os hospedeiros naturais do vrus,
enquanto aves e mamferos domsticos, alm do homem, so hospedeiros acidentais.
602
As interaes especcas entre os vrus, vetores e hospedeiros vertebrados tendem a connar cada espcie de vrus a determinadas reas
geogrcas ou nichos ecolgicos. Essa delimitao geogrca, no entanto, no absoluta e, ocasionalmente, esses vrus podem ser encontrados
fora de seus nichos ecolgicos naturais. Isso tem
ocorrido nas epizootias causadas pelo VEEV, que
atingiram o Mxico e Sul dos Estados Unidos; e
tambm com o EEEV e WEEV, que tm sido freqentemente identicados em regies remotas
da Amrica Central e do Sul. Sobreposio de
reas de ocorrncia de mais de uma espcie de
vrus tambm tem sido demonstrada para os vrus da VEE.
6 As encefalites eqinas
(ou encefalomielites eqinas)
Vrios alfavrus so associados com infeco
e enfermidade do sistema nervoso central (SNC)
de eqinos (ver Tabela 23.1). Na maioria dos casos, esses animais so hospedeiros acidentais (ou
terminais) e no participam do ciclo de transmisso desses vrus. Embora alguns alfavrus do Velho Mundo possam causar encefalite, os alfavrus
das Amricas que esto mais freqentemente
envolvidos em epizootias em eqinos e so denominados genericamente de vrus das encefalites
eqinas. Esse complexo de vrus abrange os vrus
das encefalites do Leste (EEEV), Oeste (WEEV) e
venezuelana (VEEV). As infeces por esses vrus
possuem certa delimitao geogrca, sobretudo
por condies ecolgico-ambientais que proporcionam interaes do agente com seus hospedeiros naturais e insetos vetores. No obstante, esses
vrus so freqentemente detectados fora de suas
regies originais, o que demonstra que os limites geogrcos de sua distribuio so tnues e
relativos.
A abrangncia geogrca dos vrus do complexo VEEV maior e compreende desde o Norte
da Argentina at os EUA, com atividade viral notadamente maior no Norte e Noroeste da Amrica do Sul, Amrica Central e Mxico. Nas ltimas dcadas, epizootias/epidemias associadas
ao VEEV tm vitimado centenas de milhares de
Captulo 23
603
Togaviridae
6.1.1 O agente
O VEEV pertence a um grupo de alfavrus
antigenicamente relacionados que compe o complexo VEE. O complexo VEE abrange seis diferentes subtipos e vrias espcies e variantes (Tabela
23.2). Esses vrus so agrupados de acordo com
a sua relao antignica, e cada grupo apresenta
virulncia e potencial epizotico distintos. Dentre esses, apenas os subtipos IAB e IC tm sido
associados com epizootias/epidemias e utilizam
eqinos para a sua amplicao e disseminao
e, por isso, so denominados VEEV epizoticos.
Os outros sorotipos (ID e IE) e os demais vrus
do complexo VEE possuem ocorrncia enzotica
e so geralmente avirulentos para a espcie eqina. Os vrus enzoticos so mantidos por meio de
ciclos de infeco em pequenos mamferos e insetos em orestas ou regies pantanosas, so avirulentos para eqinos e parecem no utilizar essa
espcie para amplicao e manuteno.
As caractersticas morfolgico-estruturais e
o esquema geral de replicao do VEEV parecem
no diferir muito do que foi estabelecido para os
vrus prottipos SIN e SFV. O VEEV utiliza a protena ligante da laminina como receptor celular,
mas passagens mltiplas em cultivo podem selecionar mutantes da glicoprotena E2 capazes de
se ligar ao sulfato de heparina. O VEEV apresenta um estreito espectro de vetores susceptveis,
cada espcie de vrus sendo capaz de replicar em
uma ou poucas espcies de mosquitos.
6.1.2 Epidemiologia
A distribuio dos subtipos do complexo
VEEV nas Amricas, de acordo com os surtos
ocorridos no ltimo sculo, est apresentada na
Figura 23.6. Os vrus enzoticos so mantidos
perenemente em ciclos silvestres silenciosos (sem
causar doena em espcies domsticas) nas orestas e regies pantanosas da Amrica Central
e Norte-Noroeste da Amrica do Sul. Os VEEV
epizoticos tm sido associados com epizootias
peridicas em eqinos, algumas vezes associadas
com epidemias em humanos, principalmente no
Norte e Noroeste da Amrica do Sul. As reas
604
Captulo 23
Tabela 23.2. Alfavrus do complexo VEEV, padres de transmisso, espcies afetadas, vetores e distribuio
Subtipo
II
III
Espcie
(vrus)
Variante
VEEV
AB
Epizotica
Sim
VEEV
Epizotica
Sim
VEEV
Enzotica
No
VEEV
Enzotica
Mosso das
Pedras
Enzotica
Brasil
Desconhecido
Enzotica
No
C.cedecei
Amrica do Sul
C.portesi
Everglades
Padro de Patgeno
transmisso eqino
Distribuio
Vetor
Amricas (Sul,
Mosquitos mamiferoflicos
Amrica do Sul
Mosquitos mamiferoflicos
C.aikenii; C.vomerifer,
C.pedroi,C. adamesi
C.taeniopus
Mucambo
Enzotica
No
Tonate
B (Bijou
Enzotica
Mucambo
C
(71D1252)
Enzotica
Oeste do Peru
Desconhecido
Mucambo
D
(V407660)
Enzotica
Oeste do Peru
Desconhecido
Oecieus vicarius
IV
Pixuna
Enzotica
Brasil
Desconhecido
V
VI
Cabassou
Enzotica
Brasil
Desconhecido
Rio Negro
Enzotica
Norte da Argentina
C. delpontei
605
Togaviridae
(VEEV epizoticos), capazes de serem amplicados e causarem doena grave em eqinos (Figura 23.7). O surgimento de VEEV epizoticos a
partir de vacinas mal inativadas tambm parece
ter contribudo para algumas epizootias. Recentemente foi demonstrado que os VEEV epizoticos podem se manter na natureza por vrios anos
aps o trmino das epizootias, embora o mecanismo de persistncia ainda no tenha sido determinado. Infeces agudas ou persistentes em
outras espcies animais (bovinos, roedores) e a
utilizao de outros artrpodes como vetores tm
sido sugeridos para explicar essa persistncia. A
1993, 1996
subtipo IE
1942-1946
subtipo IAB
Figura 23.6. Ocorrncia e distribuio de surtos associados com os diferentes subtipos do complexo VEEV nas
Amricas.
606
Captulo 23
Ciclo
Epizotico
Ciclo
Enzotico
Mutao/
seleo
(-)
ocasionalmente, participar da transmisso mecnica dos VEEV. Uma caracterstica nica que
diferencia os VEEV dos outros alfavrus a sua
alta infectividade em aerossis. Com isso, o vrus
poderia infectar hospedeiros por inalao. A importncia dessa via de transmisso na epidemiologia da infeco desconhecida, porm parece
ser limitada.
607
Togaviridae
6.1.4 Imunidade
A infeco natural pelo VEEV induz imunidade de longa durao, provavelmente por toda
a vida do animal. A proteo contra vrus heterlogos pode ocorrer e depende do grau de similaridade antignica entre os vrus.
608
6.1.5 Diagnstico
O diagnstico da enfermidade em eqinos
deve considerar os aspectos clnicos (doena sistmica progressivamente grave, podendo estar
associada com sinais neurolgicos), epidemiolgicos (histrico da doena na regio, presena e
exposio a mosquitos vetores, outros eqinos
afetados). Sinais tpicos de encefalite em regies
endmicas devem ser considerados potencialmente suspeitos de infeco pelo VEEV e investigados. No entanto, quadros de encefalite bem caracterizados nem sempre esto presentes, o que
pode confundir a suspeita inicial. Alm disso,
animais infectados pelo VEEV tambm podem
morrer subitamente, sem manifestar sinais clnicos evidentes.
A enfermidade causada pelo VEEV pode ser
confundida com outras doenas que produzem
manifestaes neurolgicas, como as encefalites
do oeste (WEE) e do leste (EEE), pelo vrus do
Nilo Ocidental (WNV), peste eqina, ttano, raiva, meningite bacteriana e algumas intoxicaes.
Essas doenas devem ser consideradas para o
diagnstico diferencial.
O diagnstico denitivo requer a realizao
de testes sorolgicos e/ou isolamento e identicao do vrus e/ou de antgenos virais. O diagnstico laboratorial mais empregado em eventos
epidmicos a sorologia. Testes imunoenzimticos de captura (ELISA), para detectar imunoglobulinas da classe IgM especcas para o VEEV,
so utilizados no diagnstico da infeco aguda.
A conrmao pode ser realizada por testes de
soro-neutralizao (SN) ou inibio da hemaglutinao (HI) com amostras pareadas de soro.
Captulo 23
609
Togaviridae
em perodos sem atividade viral detectvel e tambm para vacinar tcnicos de laboratrio que trabalham com o agente. Uma verso multivalente
inativada da TC-83, contendo tambm antgenos
do EEEV e WEEV, tem sido utilizada nos EUA e
em alguns pases da Amrica do Sul. A imunidade induzida por essa vacina deixa a desejar e, por
isso, no recomendada para regies endmicas.
Recentemente, uma vacina geneticamente manipulada (cepa 3526) foi desenvolvida e, provavelmente, ir substituir a TC-83, tanto para eqinos
como para humanos.
A limitao do movimento de eqinos durante os surtos no tem sido efetiva no controle
desses eventos, pois os animais so assintomticos durante um a trs dias aps a infeco. O
controle de mosquitos por inseticidas aplicados
por via area foi utilizado em alguns surtos que
apresentam envolvimento humano. A preveno
da infeco humana pode ser obtida evitando-se
a exposio aos mosquitos vetores e pelo uso de
repelentes. Essas medidas so particularmente
importantes para pessoas que vivem ou trabalham nas proximidades de eqinos em regies
endmicas com grande atividade dos vetores
(vrzeas, orestas) e durante os surtos.
6.2.1 Epidemiologia
O vrus mantido em reas alagadias de
gua salgada ou doce, prximas regio costeira,
em ciclos que envolvem vrias espcies de pssaros silvestres e uma espcie principal de mosquito, o Culiseta melanura. Esse mosquito se alimenta apenas em aves e no transmite o agente
a outros hospedeiros. As aves infectadas normalmente no desenvolvem enfermidade. O EEEV,
geralmente, aparece nas populaes de pssaros
no nal da primavera, amplicado pela transmisso entre pssaros durante o vero e atinge
nveis muito altos no nal do vero e no incio do
outono. Em algumas regies, como o sul do estado de New Jersey, esse ciclo ocorre durante todo
o ano. Em alguns anos, a infeco permanece restrita aos pssaros sem o envolvimento de eqinos e humanos. No entanto, sob certas condies
climticas, as populaes de vetores e vrus podem ser amplicadas de tal maneira que proporcionem condies para que o vrus escape de seu
nicho ecolgico. Nessas situaes, mosquitos que
se alimentam em aves e em mamferos podem
adquirir o vrus ao se alimentar em aves durante a fase virmica e transmiti-lo a outras espcies
(principalmente eqinos e humanos).
Os mosquitos de vrzeas de gua doce, Coquilletidia perturbans, e de gua salgada, Ochlerotatus sollicitans, so os principais transmissores
do agente aos eqinos, e parecem se constituir
no elo de ligao entre o ciclo silvestre e os animais domsticos. Os eventos de escape do vrus
de seu habitat e a transmisso a outras espcies
podem ocorrer em nveis baixos ao longo do ano,
mas so mais freqentes e epidemiologicamente
importantes da segunda metade do vero at o
incio do outono. Nessa poca, casos de enfermidade em pessoas, eqinos e em outras espcies
de animais domsticos ocorrem com maior freqncia. A transmisso aos eqinos ocorre exclusivamente pela picada de mosquitos que haviam
previamente realizado repasto sangneo em
aves virmicas.
610
Captulo 23
6.2.3 Diagnstico
O diagnstico clnico-epidemiolgico deve
ser conrmado por testes laboratoriais. A deteco de IgM na fase aguda por testes imunoenzimticos o mtodo de eleio. Sorologia pareada
por SN ou HI tambm podem ser realizadas. O
isolamento do vrus do sangue dicultado pela
transitoriedade da viremia. Deteco de cidos
nuclicos virais no sangue ou em tecidos (por
PCR) e de protenas em cortes de tecidos congelados ou paranizados (por imunoistoqumica)
tambm tm sido utilizados.
A vacinao de eqinos nas reas endmicas o mtodo mais eciente de controle. Vacinas
monovalentes, bivalentes (+WEEV) e trivalentes
(WEEV+VEEV) inativadas tm sido utilizadas
nessas reas. No h vacinas para uso humano.
A preveno da infeco humana deve basear-se
na preveno exposio aos vetores e no uso de
repelentes nas reas endmicas.
611
Togaviridae
agente. Embora j tenha sido detectada em outros pases das Amricas, a infeco pelo WEEV
ocorre principalmente nas plancies e vales do
Centro e Oeste dos EUA e Sul do Canad.
6.3.1 Epidemiologia
A expanso da agricultura irrigada nas plancies e vales da regio Central e Oeste dos EUA
e no Canad criou condies que favoreceram a
perpetuao do agente. O WEEV mantido em
ciclos alternados em pssaros e outras aves silvestres (e tambm domsticas) e insetos. Os mosquitos do gnero Culex sp. parecem ser os principais vetores, embora os A. melanimon e A. dorsalis
tambm sejam vetores ecientes. A agricultura
irrigada e as condies climticas apropriadas
favorecem a ocorrncia de superpopulaes de
Culex tarsalis e a conseqente manuteno da infeco. Pssaros silvestres que se alimentam de
gros nessas lavouras constituem-se nos reservatrios naturais e amplicadores do vrus. O
ciclo natural do agente envolve principalmente
pssaros, mas pode envolver tambm pequenos
mamferos silvestres. Os eqinos e humanos so
hospedeiros acidentais e parecem no participar
do ciclo de transmisso do agente. A capacidade
do WEEV em replicar em mosquitos a temperaturas relativamente baixas permite a ocorrncia
da infeco desde o incio do vero at incio do
outono, e tambm em algumas regies do Canad.
leves (hipertermia, cefalia e sonolncia); raramente ocorrem sinais neurolgicos severos, encefalite e coma. A doena geralmente mais branda
do que a associada com o EEEV, mas geralmente mais grave em crianas, podendo atingir ndices de fatalidade de at 10%.
6.3.3 Diagnstico
O diagnstico clnico-epidemiolgico deve
ser conrmado por testes laboratoriais. Os mesmos procedimentos utilizados para o VEEV so
recomendados para a conrmao laboratorial
da infeco pelo WEEV.
7 Bibliografia consultada
BRUNO-LOBO, G.; BRUNO-LOBO, M.; TRAVASSOS, J.;
PINHEIRO, F.; PAZIN, I. P. Estudos sobre arbovrus. III.
Isolamento de vrus sorologicamente relacionado ao sub-grupo
Weaster Sindbis de um caso de encefalomielite eqina no Rio
de Janeiro. An. Microbiol. v.9, pt.A, p. 183-1, 1961.
CALISHER, C. H.; KINNEY, R. M.; DE SOUZA LOPES, O.;
TRENT, D. W.; MONATH, T. H.; FRANCY, D. B. Identication
of a new Venezuelan equine encephalitis virus from Brazil. Am.
J. Trop. Med. Hyg. v.31, n. 6, p. 1260-1272, Nov. 1982.
FARRAR, M.D.; MILLER, D.L.; BALDWIN, C.A.; STIVER,
S.L.;HALL, C.L. Eastern equine encephalitis in dogs. J.Vet.
Diagn.Invest. v. 17, n. 6, p. 614-617, 2005.
FERREIRA, I. B.; PEREIRA, L. E.; ROCCO, I. M.; MARTI, A. T.;
SOUZA, L. T. M.; IVERSSON, L. B. Surveillance of arbovirus
infections in the atlantic forest region, state of So Paulo, Brazil. I:
612
Captulo 23
CORONAVIRIDAE
Luciane Teresinha Lovato & Renata Dezengrini
24
1 Introduo
615
2 Classificao
615
615
4 Replicao
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625
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627
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628
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630
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631
631
632
632
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633
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634
634
635
635
635
7 Coronavrus humanos
636
8 Bibliografia consultada
636
1 Introduo
A famlia Coronaviridae possui dois gneros:
o Coronavirus e o Torovirus. Os Coronavirus so
vrus RNA envelopados, possuem o maior genoma conhecido entre os vrus RNA e esto envolvidos principalmente em doenas respiratrias e
digestivas de animais e humanos. Em algumas
enfermidades especcas, outras manifestaes,
como a poliserosite, miocardite, hepatite, encefalomielite, nefrite e imunopatologias, podem estar
associadas com patgenos desse gnero. O envelope desses vrus apresenta longas espculas que
do partcula viral um aspecto tpico de coroa,
derivando da o nome da famlia. Outro aspecto
importante desses vrus o complexo mecanismo de replicao viral, que inclui a produo de
RNAs mensageiros (mRNA) subgenmicos. Essa
forma complexa de replicao resulta em uma
alta freqncia de recombinaes. Por essa razo,
muitos desses vrus apresentam uma grande variao antignica, com a existncia de vrios sorotipos circulantes.
Importantes doenas vricas de animais domsticos, como a bronquite infecciosa das galinhas, a gastrenterite transmissvel dos sunos e a
peritonite infecciosa dos felinos tm como agente etiolgico algum dos coronavrus. O interesse
por essa famlia aumentou recentemente devido
classicao de um novo coronavrus humano,
o vrus da pneumonia asitica (SARS-COV). Os
coronavrus humanos conhecidos antes do aparecimento do vrus da SARS eram pouco patognicos e, principalmente, envolvidos em resfriados
comuns. No gnero Torovirus, esto classicados
apenas dois vrus que causam doena em animais. Os patgenos animais desse gnero causam
diarria, sendo que o vrus Berne (BEV) infecta
eqinos e o vrus Breda (BRV) infecta bovinos.
Neste captulo, sero discutidos alguns aspectos
gerais da famlia Coronaviridae e das doenas de
interesse veterinrio com nfase para os vrus do
gnero Coronavirus. Alguns tpicos especcos
abordados para os vrus do gnero Torovirus sero mencionados no texto.
2 Classificao
Os vrus da famlia Coronaviridae esto classicados na ordem Nidovirales, juntamente com
as famlias Arteriviridae e Roniviridae. Esses vrus
apresentam diferenas morfolgicas, mas so
agrupados nessa ordem por possurem uma estratgia nica e comum de replicao. A expresso gnica desses vrus ocorre pela transcrio
de vrios mRNAs subgenmicos, sintetizados a
partir de um RNA intermedirio de polaridade
negativa.
Os coronavrus so subdivididos em trs
grupos (grupos I, II e III), de acordo com a sua
reatividade sorolgica. Dentro desses grupos, os
vrus so classicados de acordo com o seu hospedeiro natural, com a seqncia de nucleotdeos
e relaes sorolgicas. Na Tabela 24.1, so apresentados os vrus que compem os gneros Coronavirus e Torovirus.
616
Captulo 24
Tabela 24.1. Classificao dos coronavrus em grupos de acordo com a reatividade sorolgica.
Grupo antignico
Coronavirus
II
Torovirus
III
Vrus
Hospedeiro
Doena
TGEV
Suno
Gastrenterite
PRCoV
Suno
Respiratria, subclnica
PEDV
Suno
Gastrenterite
FIPV
Gatos
Peritonite
FCoV
Gatos
Enterite, assintomtica
CCoV
Ces
Enterite
HCoV-229E
Humanos
Resfriado comum
HEV
Suno
Encefalite, definhamento
BCoV
Bovino
Gastrenterite
TCoV
Perus
Enterite
MHV
Camundongos
Hepatite
HCoV-OC43
Humanos
Resfriado comum
IBV
Galinhas
Traqueobronquite, nefrite
BToV
Bovinos
Subclnica
BRV
Bovinos
Gastrenterite
EToV
Eqinos
Subclnica
BEV
Eqinos
Gastrenterite
HToV
Humanos
Gastrenterite
PToV
Sunos
Subclnica
B
M
E
S
RNA
Figura 24.1. Vrions da famlia Coronaviridae. A) Microscopia eletrnica de vrions do SARS-Co B) Ilustrao
esquemtica de um vrion com os seus componentes. M: protena de membrana; E, S: glicoprotenas do envelope; N:
nucleoprotena.; RNA: genoma.
617
Coronaviridae
0kb
5' L
30kb
RNA genmico
Pol
3'UTR
AAAAn
3'
RNA antigenmico
5'
S
RNAs mensageiros
subgenmicos
AAAAn
AAAAn
AAAAn
M
N
AAAAn
Figura 24.2. Ilustrao esquemtica do genoma dos coronavrus. L) lder; Pol) gene da replicase; S) gene da
glicoprotena; E) gene da glicoprotena; M) gene da protena de membrana; N) gene da protena do nucleocapsdeo. O
RNA de sentido antigenmico e os mRNAs subgenmicos produzidos durante o ciclo replicativo esto ilustrados
abaixo. A protena traduzida a partir de cada um desses mRNAs est indicada.
618
podem ser encontradas outras ORFs que codicam algumas protenas no-estruturais e tambm
a protena HE. A presena dessas ORFs, a sua extenso, a forma de expresso e a distribuio podem variar entre os coronavrus.
O genoma dos coronavrus est associado
com mltiplas cpias de uma fosfoprotena viral
(N), formando um nucleocapsdeo helicoidal. A
protena N possui um domnio de associao ao
RNA que facilita sua ligao ao genoma viral.
Essa protena associa-se tambm protena M
no processo de morfognese das partculas virais. Em alguns vrus, foi demonstrado que o nucleocapsdeo helicoidal est envolvido por uma
estrutura interna de, aproximadamente, 65 nm de
dimetro, que possui uma forma aparentemente
esfrica, possivelmente icosadrica (Figura 24.1).
Os coronavrus, a exemplo de outros vrus
RNA, sofrem mutaes freqentes no seu genoma em funo dos erros cometidos pela RNA
polimerase. Vrios mutantes ts (sensveis temperatura) do vrus da hepatite dos camundongos
(MHV) j foram identicados. Alm disso, alguns
coronavrus que causam doenas em animais foram originados a partir de delees no genoma
de vrus preexistentes. Este o caso do coronavrus respiratrio dos sunos (PRCoV), que se originou a partir do TGEV por uma deleo no gene
que codica a protena S. O surgimento de cepas
mais virulentas do coronavrus felino entrico
(FCoV), responsveis pela peritonite infecciosa
felina (FIP), tambm parece estar relacionado
com delees do genoma.
A alta freqncia de recombinao outro
aspecto importante na gentica dos coronavrus
que pode ter reexos importantes na patogenia e
na epidemiologia desses vrus. Embora os coronavrus no possuam um genoma segmentado, a
alta freqncia de recombinao provavelmente
possa ser explicada pela complexidade da replicao, envolvendo etapas de transcrio descontnua. O mecanismo de recombinao entre cepas
de campo j deu origem a diferentes subtipos do
vrus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV)
e alguns isolados de FCoV parecem ter se originado da recombinao entre o vrus felino e o
CCoV. Uma freqncia de recombinao de 25%
para todo o genoma foi observada no MHV, um
dos coronavrus mais estudados.
Captulo 24
4 Replicao
A primeira etapa da replicao dos coronavrus a ligao dos vrions, pela glicoprotena S,
aos receptores na membrana celular. Esses receptores j foram identicados para alguns coronavrus, mas ainda so desconhecidos para outros.
Os vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos (TGEV), da peritonite infecciosa felina (FIPV)
e, provavelmente, o coronavrus canino (CCoV)
utilizam a aminopeptidase N como receptor. A
aminopeptidase N uma metaloprotease associada membrana plasmtica. Alguns vrus, como o
coronavrus bovino (BCoV), que possuem a protena HE no envelope, podem, ainda, utilizar o
cido silico como receptor.
A penetrao dos vrions na clula hospedeira pode ocorrer por duas vias possveis. Pode
ocorrer aps endocitose, pela fuso do envelope
viral com a membrana da vescula endoctica na
presena de um pH cido para alguns coronavrus (Figura 24.3). Outros coronavrus no necessitam do pH baixo para a fuso e, nesses casos,
a penetrao ocorre pela fuso do envelope com
a membrana plasmtica na superfcie da clula.
O desnudamento do genoma ocorre logo aps a
penetrao e envolve mecanismos ainda no totalmente esclarecidos. Provavelmente necessita
da participao de fatores celulares.
Assim que o genoma liberado no citoplasma, o gene 1 (pol) traduzido em uma poliprotena, para a produo da replicase viral e outras
enzimas envolvidas com a replicao do RNA.
Apesar dos coronavrus possurem um genoma
de sentido positivo que serve como mRNA, os
demais genes no so sintetizados pela traduo
direta do RNA genmico. A polimerase viral re-
619
Coronaviridae
12
1
11
Golgi
AAAAA
7b
AAAAA
RER
AAAAA
10
AAAAA
AAAAA
AAAAA
7a
AAAAA
Ncleo
Figura 24.3. Ilustrao simplificada do ciclo replicativo dos coronavrus. 1) Ligao aos receptores celulares;
2) Internalizao por endocitose (nem todos); 3) Penetrao por fuso do envelope com a membrana
endoctica; 4) Traduo da regio 5 do genoma e produo da polimerase; 5) Sntese da cpia antigenmica;
6) Sntese dos mRNAs subgenmicos; 7a e 7b) Traduo dos mRNAs subgenmicos nas protenas
estruturais; 8) Sntese do RNA genmico; 9) Conjugao do RNA genmico com protenas do nucleocapsdeo;
10) Brotamento do nucleocapsdeo no RER ou Golgi; 11) Transporte da prognie viral em vesculas at a
membrana plasmtica; 12) Egresso por exocitose.
620
O mecanismo da sntese dos mRNA subgenmicos ainda no foi esclarecido, mas h trs hipteses para explic-lo. A primeira hiptese denomina-se transcrio iniciada pela seqncia
lder. Nesse caso, ocorreria inicialmente a transcrio da seqncia lder a partir da cpia negativa do RNA. Este transcrito se ligaria a qualquer
seqncia intergnica e serviria como primer ou
iniciador para a transcrio do mRNA a partir
dessa seqncia intergnica.
Outra hiptese seria a transcrio descontnua durante a sntese do RNA de cadeia negativa. Nesse modelo, a polimerase que est sintetizando a cpia de RNA negativa a partir do RNA
genmico faria uma parada em uma seqncia
intergnica e, em seguida, saltaria para a extremidade 3 da seqncia lder do RNA genmico
copiando esta regio. Esse processo resultaria na
produo de um mRNA subgenmico negativo
que serviria de modelo para cpias de RNA positivo.
Evidncias experimentais suportam essas
duas hipteses. Uma terceira hiptese tambm
tem sido descrita, embora seja menos provvel,
na qual mRNA subgenmicos seriam incorporados ao vrion juntamente com o RNA genmico.
Assim, os mRNA trazidos nos vrions serviriam
de modelo para a sntese de cpias negativas, que
seriam, ento, copiadas em novos mRNAs.
A traduo dos mRNA subgenmicos ocorre em ribossomos associados membrana dos
retculos endoplasmticos (RE) ou livres no citoplasma. Aps a traduo, as protenas so processadas de acordo com sua nalidade, podendo
ser fosforiladas, glicosiladas e/ou clivadas. A traduo das protenas estruturais S, M e HE realizada por ribossomos na membrana do RE. Essas
protenas so, posteriormente, glicosiladas e a
protena S clivada em S1 e S2 em alguns coronavrus. A protena N traduzida por ribossomos
livres no citoplasma e fosforilada em seguida.
A protena E passa por um processo de acilao
e localiza-se na regio perinuclear de clulas infectadas.
A replicao do RNA ocorre em complexos
de replicao associados com membranas intracitoplasmticas. Aparentemente, esses complexos
so formados pelas protenas virais e, possivel-
Captulo 24
mente, por protenas celulares associadas. Inicialmente acreditava-se que a replicao do RNA
genmico deveria ocorrer de forma contnua,
utilizando um RNA de cadeia negativa completo como modelo, em oposio aos mRNA subgenmicos produzidos na transcrio. Contudo,
evidncias recentes demonstram que a sntese do
RNA genmico tambm parece ocorrer de forma
descontnua, envolvendo uma seqncia lder.
A morfognese dos vrions inicia-se com
a associao de mltiplas cpias da protena N
com o genoma viral e a formao do nucleocapsdeo helicoidal. Em seguida, o nucleocapsdeo
interage com a protena M nas membranas do
RE ou no complexo de Golgi, levando formao
do envoltrio interno do nucleocapsdeo e ao seu
empacotamento nas partculas que brotaro para
o interior desses compartimentos. Para a formao da partcula viral, a protena E atua em conjunto com a protena M. Os vrions brotam a partir de uma estrutura especializada de membrana,
localizada entre o RE e o complexo de Golgi. Os
coronavrus se acumulam em vesculas, que so
transportadas at a membrana plasmtica, e so
liberados por exocitose. Todas as etapas do ciclo
replicativo ocorrem no citoplasma. O ciclo replicativo dos coronavrus est representado esquematicamente na Figura 24.3.
5 Coronavrus de interesse
veterinrio
A seguir, sero abordadas as principais coronaviroses de animais, de acordo com a espcie
afetada.
621
Coronaviridae
5.1.1 Epidemiologia
A TGE uma doena prevalente no Hemisfrio Norte, principalmente em reas de produo suna intensiva dos Estados Unidos e em alguns pases da Europa. Nessas regies, a doena
ocorre de forma sazonal durante o inverno, o que
atribudo alta estabilidade do vrus em baixas temperaturas e incidncia solar reduzida.
No Brasil, j houve o registro de ocorrncia da
doena, mas esta no comumente encontrada
na populao suna brasileira.
Nos ltimos anos, foi observada uma reduo na incidncia da TGE em pases europeus, e
os pesquisadores esto atribuindo essa reduo
circulao endmica do PRCOV na populao
suna. Os animais que entram em contato com o
622
5.1.3 Imunidade
Anticorpos contra o TGEV podem ser detectados no soro aos 14 dias aps a infeco, persistindo por seis meses e, possivelmente, at por
anos. Anticorpos das classes IgM, IgG e IgA esto
presentes. Os animais que se recuperam so considerados protegidos contra o vrus, entretanto,
em alguns casos, essa proteo pode ser incompleta.
A proteo parece estar relacionada com a
presena de IgA no lmen intestinal, o que foi
comprovado pela observao de que leites nascidos algumas semanas aps um surto de TGE
no eram afetados pelo vrus. Essa proteo seria conferida pelo contnuo suprimento de IgA
no colostro e no leite de fmeas que sofreram a
infeco recentemente. Estudos posteriores com-
Captulo 24
5.1.4 Diagnstico
O diagnstico presuntivo deve basear-se nas
manifestaes clnicas e nos aspectos epidemiolgicos da doena. O diagnstico denitivo necessita a realizao de testes laboratoriais de deteco
de vrus ou de antgenos virais. A imunouorescncia (IFA), realizada em cortes de criostato ou
em esfregaos de mucosa intestinal, a tcnica
mais usual de diagnstico. A imunoperoxidase
(IPX) tambm tem sido utilizada em alguns casos. O isolamento do vrus geralmente um processo demorado e, muitas vezes, infrutfero, mas
pode ser realizado em clulas de tireide ou de
testculos sunos, nas quais a replicao viral resulta na produo de efeito citoptico. A deteco
de antgenos virais nas fezes tambm pode ser
realizada pelo uso de um ensaio imunoenzimtico (ELISA). A microscopia eletrnica (ME) no
recomendada para a deteco do TGEV, porque
no h como diferenci-lo do PEDV. A sorologia
pareada (coleta de duas amostras de soro, uma
no incio da infeco e outra 14 dias aps) tam-
623
Coronaviridae
bm pode ser um auxlio ao diagnstico. A deteco de anticorpos pode ser feita pelas tcnicas de
soroneutralizao (SN) e ELISA.
grande ecincia. Atualmente o vrus endmico na Europa e em algumas regies dos Estados
Unidos. Na grande maioria dos casos, os animais
so infectados e ocorre soroconverso logo aps
o desmame. Em condies experimentais, a inoculao do vrus em leites que no receberam o
colostro reproduziu a doena respiratria; no entanto, a infeco a campo parece ser geralmente
subclnica. O vrus se propaga atravs de aerossis e pode percorrer longas distncias quando
transportado pelo vento. O controle da infeco
muito difcil pela sua facilidade de propagao
e contgio, e no existem vacinas disponveis.
Como a infeco por esse vrus no representa
um grande problema sanitrio e econmico, no
existem maiores preocupaes com o desenvolvimento de vacinas ou com o seu controle.
624
Captulo 24
5.5.1 Epidemiologia
Os coronavrus felinos infectam membros da
famlia Felidae, causando desde infeces subclnicas at a forma mais severa da doena, que a
peritonite infecciosa (FIP). A infeco pelo FCoV
muito comum em gatos domsticos, o que foi
demonstrado pela alta soropositividade na populao felina de diversos pases. Anticorpos
contra o vrus foram detectados em 80 a 90% das
amostras coletadas em gatis, e em 10 a 50% das
amostras coletadas em residncias que possuam
um nico gato, nos Estados Unidos e Europa. No
Brasil, so escassos os dados sobre a prevalncia
e distribuio do agente na populao felina. Em
So Paulo, somente uma dentre 22 amostras de
soro e efuso pleural ou peritoneal de 10 gatos
e um leo foi positiva por PCR. Em um estudo
realizado nos arquivos do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Santa Maria,
foram diagnosticados 13 casos de PIF entre 638
gatos necropsiados no perodo de 1970 a 2001.
Os animais infectados excretam o vrus em
altos ttulos nas fezes, sendo a rota fecal-oral a
forma mais freqente de transmisso. O RNA do
vrus j foi detectado em fezes de gatos saudveis, infectados natural ou experimentalmente
por perodos prolongados. Em alguns gatos, a
infeco transitria e o vrus ser erradicado do
organismo dentro de alguns meses aps a infeco. Aproximadamente 13% dos gatos permanecem infectados cronicamente, como portadores
saudveis, excretando o vrus por perodos prolongados, possivelmente por toda vida. Apenas 5
a 10% dos gatos soropositivos para o FCoV iro
desenvolver a forma severa da doena.
A presena do vrus j foi demonstrada em
populaes de felinos selvagens de vida livre ou
cativos. Em estudos realizados na frica, 25%
dos feldeos selvagens foram positivos para anticorpos no soro ou cido nuclico viral nas fezes.
O guepardo, que uma espcie em risco de extino, muito susceptvel ao vrus, e animais dessa espcie apresentam a forma clnica da doena
com maior freqncia do que gatos domsticos.
Entre os gatos domsticos, foi observada
uma incidncia mais alta da FIP em animais de
raa pura quando comparados com as raas mistas. A doena ocorre com maior freqncia em
625
Coronaviridae
5.5.3 Imunidade
Observaes clnicas e experimentais demonstraram que animais que apresentam anticorpos contra o coronavrus felino desenvolvem
uma forma mais aguda e severa da doena quando reinfectados. Essa forma conhecida como
sndrome da morte sbita. Nesses animais, as manifestaes clnicas e leses surgem rapidamente
e eles apresentam tambm um perodo menor de
sobrevivncia.
O papel dos anticorpos preexistentes na
patogenia da doena ainda no est totalmente
esclarecido, mas acredita-se que esses anticorpos
facilitariam a replicao do vrus e levariam a
uma severidade maior da doena. A replicao
mais eciente do vrus estaria associada com
uma maior capacidade de infectar macrfagos,
por causa do fenmeno da ADE (antibody dependent-enhancement), que consiste na facilitao da
penetrao viral em macrfagos em funo da
presena dos anticorpos. Nesse caso, os complexos vrus-anticorpo seriam ligados por receptores
Fc de membrana do macrfago, o que facilitaria
a sua penetrao nas clulas. Em outras palavras,
ao invs de proteger, os anticorpos aumentariam
a ecincia da penetrao e replicao viral.
A manifestao ou no dos sinais clnicos
da FIP estariam ligados resposta imune celular.
Animais que apresentam uma resposta imune
celular eciente no desenvolvem a doena. Por
626
outro lado, animais que desenvolvem uma resposta imune celular parcial apresentam a forma
no efusiva da doena. Os animais que no apresentam resposta imune desenvolvem a forma
efusiva da doena.
5.5.4 Diagnstico
O diagnstico da FIP no animal vivo apresenta diculdades e deve basear-se mais na investigao clnica do que em testes laboratoriais. A
deteco de anticorpos por IFA e ELISA tem sido
amplamente aplicada mundialmente em laboratrios de diagnstico. So considerados positivos
para o vrus os animais com ttulos moderados
a altos. Entretanto, felinos que apresentam sinais
clnicos podem ser soronegativos; assim como
animais que nunca apresentaram manifestaes
clnicas podem ter ttulos altos de anticorpos.
Ento, mesmo que o diagnstico sorolgico seja
amplamente utilizado, no deve ser considerado
denitivo. A apresentao de ttulos altos de anticorpos e de sinais clnicos compatveis com a FIP
pelo animal deve ser considerada importante. Se
o felino apresenta ttulos baixos ou soronegativo, a FIP deve car no nal da lista das suspeitas.
At h pouco tempo, o diagnstico denitivo s
era possvel aps a morte do animal, pela patologia e histopatologia. Atualmente possvel realizar o diagnstico atravs de tcnicas de biologia
molecular, e vrios protocolos de RT-PCR j foram descritos.
Captulo 24
627
Coronaviridae
5.6.1 Epidemiologia
Ces de todas as idades e raas so susceptveis infeco pelo CCoV. No entanto, os lhotes
so mais sensveis e freqentemente desenvolvem sinais clnicos de enterite, alm de apresentarem ndices maiores de mortalidade. A doena
ocorre com maior freqncia em canis, abrigos e
locais onde h convvio entre os ces. O vrus
altamente contagioso e dissemina-se rapidamente na populao canina.
A principal fonte do vrus so as fezes de
ces infectados, alm de fmites contaminados,
e a infeco ocorre principalmente pela via oral.
O vrus pode ser excretado nas fezes por at duas
semanas aps a infeco, porm alguns estudos
demonstraram a eliminao por longos perodos
(entre 37 e 180 dias). Ces sem manifestaes clnicas tambm podem excretar o vrus nas fezes
por perodos prolongados.
H evidncias sorolgicas de que o CCoV
apresenta distribuio mundial. Dados de prevalncia so variveis e alguns fatores que podem
interferir nos resultados desses estudos so listados a seguir: a) pequeno nmero de amostras
testadas; b) uso de diferentes tcnicas de deteco
de anticorpos; c) presena de amostras de soro de
ces vacinados; e d) maior importncia da imunidade local aps a infeco natural.
Estudos de prevalncia, realizados na Austrlia, demonstraram que 15,8% dos ces que
convivem com at outros dois ces no mesmo domiclio apresentavam anticorpos contra o CCoV;
enquanto 40,8% dos animais mantidos em canis
eram soropositivos. Inquritos sorolgicos, realizados na Itlia, detectaram 90,8% de animais
positivos; na Inglaterra, 76%; na Turquia, 74,3%;
e, no Japo, 44,1%. No Sul do Brasil, um estudo
com ces no-vacinados de Santa Maria detectou
50,4% (412/817) amostras positivas.
A infeco pelo CCoV tambm foi demonstrada em outros animais, como os coiotes (Canis
628
5.6.3 Imunidade
A infeco pelo CCoV restrita ao intestino
e geralmente no ocorre viremia. Portanto, os ttulos de anticorpos produzidos em resposta infeco so geralmente baixos. Em inoculaes experimentais, a presena de IgM foi inicialmente
detectada no plasma trs dias aps a inoculao.
J a IgG foi detectada entre o 4 e o 7 dia ps-inoculao. Anticorpos neutralizantes contra o vrus
podem ser detectados a partir de dez dias aps a
infeco, e pequenas quantidades de IgG, IgM e
IgA podem ser detectadas no duodeno.
A infeco natural e a vacinao com vacina
viva atenuada pela via oronasal induzem altos
nveis de IgA no intestino. Estas imunoglobulinas
esto diretamente relacionadas com a proteo
contra a infeco pelo CCoV. Vacinas atenuadas,
aplicadas pela via oral, conferem maior proteo,
pois a resposta imune mediada por IgA, associada mucosa, previne a adsoro do CCoV s clulas epiteliais das vilosidades intestinais.
A imunidade materna capaz de proteger
os neonatos por um perodo varivel, que depende do ttulo de anticorpos que a me transfere aos
lhotes. H descries de durao da imunidade
passiva por quatro a cinco semanas; no entanto, os estudos a respeito da durao da resposta
imune ao CCoV so escassos.
5.6.4 Diagnstico
A deteco do vrus nas fezes ou no intestino
constitui-se na forma mais objetiva de diagnstico, diferenciando-a da enterite por outros agentes,
como o parvovrus, o rotavrus e os picornavrus.
O diagnstico laboratorial freqentemente realizado por ME a partir das fezes. O isolamento
do vrus no muito utilizado, entretanto diferentes laboratrios obtiveram sucesso utilizando
Captulo 24
clulas primrias de rim, timo e membrana sinovial canina. As clulas de linhagem de rim canino
A-72 so particularmente susceptveis ao CCoV,
alm de clulas de embrio e de linhagem de rim
felino (CRFK). O vrus produz efeito citoptico
caracterizado pela formao de sinccios; a conrmao da identidade do agente realizada por
IFA. Esta tcnica tambm pode ser realizada em
crioseces de intestino. Existem kits baseados
em cromatograa para a deteco de antgenos
do CCoV em fezes de ces.
As tcnicas de RT-PCR e RT-PCR em tempo real realizadas diretamente das fezes tambm
tm sido utilizadas, principalmente em pesquisas. Testes de vacinas experimentais demonstraram que essas tcnicas detectam quantidades menores de vrus excretadas nas fezes, por perodos
maiores, quando comparadas com o isolamento
viral.
A sorologia de pouca utilidade, em termos
de diagnstico, por dois fatores: a) o coronavrus
est muito distribudo na populao canina e a
infeco, muitas vezes, subclnica; b) a deteco
de anticorpos no soro no indica exposio recente ao vrus. A sorologia pareada poderia ser til,
demonstrando soroconverso. Para a deteco de
anticorpos no soro, so utilizadas as tcnicas de
SN, IPX e ELISA. Um kit de ELISA que detecta
IgM est disponvel comercialmente, para uso
em clnicas e consultrios; a presena desta imunoglobulina no soro indica infeco recente pelo
CCoV.
629
Coronaviridae
Este coronavrus foi isolado de uma populao canina abrigada em um centro de recolhimento de ces de rua na Inglaterra. Os animais
apresentavam sinais clnicos semelhantes traqueobronquite infecciosa canina, tambm conhecida como tosse dos canis. No entanto, a doena respiratria no foi controlada com vacinas
comerciais contra essa sndrome, aplicadas previamente ao diagnstico laboratorial do surto.
A anlise logentica indicou que este vrus, denominado coronavrus canino respiratrio
(CRCV), apresenta uma grande homologia com
os coronavrus respiratrios de bovinos (BCoV,
98,8%) e humanos (HCoV-OC43, 98,4%), pertencentes ao grupo II do gnero coronavrus, e pequena homologia com o CCoV (cepa 1-71, 68,53%),
que classicado no grupo I. Alm disso, constatou-se a presena do gene da hemaglutinina esterase (HE) na cepa respiratria; uma caracterstica
dos coronavrus pertencentes ao grupo II. Caso
esses dados sejam conrmados, este vrus dever
ser classicado dentro da famlia Coronaviridae,
como um coronavrus canino distinto do CCoV.
Embora estudos de prevalncia sejam escassos, um trabalho recentemente publicado demonstrou soropositividade de 17,8% (160/898)
para o CRCV em ces no Japo. Um estudo retrospectivo demonstrou que amostras de soro
coletadas de ces, j em 1998, apresentavam anticorpos contra o vrus, sugerindo a existncia prvia do CRCV em ces daquele pas.
630
5.8.1 Epidemiologia
A infeco pelo BCoV resulta em alta morbidade e baixa mortalidade entre os animais infectados. As fezes so consideradas a maior fonte
de vrus infeccioso, mas os animais infectados
podem excretar o vrus tambm nas secrees
nasais.
O BCoV endmico na populao bovina,
e anticorpos contra o vrus podem ser detectados em grande parte da populao. Evidncias
indicam que o vrus mantido nos rebanhos em
bezerros e vacas que apresentam infeco clnica
ou crnica. O estado de portador e infeco persistente tambm tm sido sugeridos, mas ainda
no foram comprovados. Infeces recorrentes
no mesmo animal tambm podem ocorrer.
Estudos epidemiolgicos demonstraram a
presena desse vrus em vrios pases. O BCoV
foi detectado nas fezes de 28,1% dos animais testados em um inqurito na Turquia. Na Coria, o
BCoV foi detectado em 32 propriedades com animais que apresentavam sinais clnicos da disenteria de inverno. Nos Estados Unidos e no Canad, a presena do BCoV tem sido freqentemente
descrita nas secrees nasais e fezes de bovinos
connados que apresentam sinais de doena respiratria. Anticorpos contra esse vrus foram detectados em 89% das amostras de leite de 2.236
propriedades testadas na Sucia.
No Brasil, foram realizados poucos estudos de prevalncia, mas a presena do vrus j
foi demonstrada no estado de So Paulo. Setenta
e duas amostras fecais de bezerros com diarria
foram coletadas em vrias propriedades, e 39%
delas foram positivas para o vrus. O BCoV tambm foi detectado em amostras fecais de bovinos
adultos com diarria durante o inverno, sugerindo a ocorrncia da forma de disenteria de inverno no rebanho brasileiro. Embora o nmero de
estudos seja reduzido, provvel que a infeco
esteja amplamente difundida no rebanho bovino
brasileiro, a exemplo do que ocorre em outros pases.
Captulo 24
631
Coronaviridae
5.8.3 Imunidade
A resposta imune humoral de bovinos infeco pelo BCoV foi estudada em animais com a
forma respiratria da doena e tambm pela inoculao experimental em bezerros privados de
colostro. Alguns dias aps a infeco, so detectados anticorpos contra as protenas estruturais
S, HE, N e M. Anticorpos com atividade neutralizante so direcionados contra as glicoprotenas
de superfcie S e HE. Aps a inoculao da cepa
respiratria, o nal da excreo viral nas secrees nasais coincidiu com o aparecimento de
anticorpos neutralizantes, sugerindo um importante papel desses anticorpos na erradicao da
infeco. O papel da imunidade celular na proteo contra o BCoV desconhecido.
A neutralizao do vrus no lmen intestinal por IgA, parece ser a forma mais efetiva de
proteo contra a diarria neonatal. Nesse caso,
a imunidade passiva de grande importncia na
proteo dos bezerros nos primeiros dias de vida.
Imunoglobulinas das classes IgG1, IgG2 e IgA so
detectadas no colostro de vacas com altos ttulos
de anticorpos contra o BCoV. A queda na quantidade de anticorpos na transio de colostro para
leite tem sido apontada como uma possvel causa
5.8.4 Diagnstico
A diarria neonatal em bezerros uma sndrome de etiologia complexa com o possvel envolvimento de coronavrus, rotavrus, bactrias
entricas (E. coli e Salmonella spp.), protozorios
e parasitas. Esses agentes podem produzir a doena isoladamente ou em conjunto. Na maioria
dos casos, as manifestaes clnicas so muito
semelhantes, o que diculta a realizao do diagnstico diferencial com a determinao da causa
especca. Por essa razo, o diagnstico etiolgico denitivo requer a realizao de provas laboratoriais.
A ME realizada nas fezes a opo mais indicada para a realizao do diagnstico. A IFA
tambm pode ser aplicada para a pesquisa de
antgenos do vrus no intestino. O isolamento do
vrus pode ser realizado em clulas primrias de
rim bovino ou em clulas da linhagem Vero. O
isolamento requer o tratamento prvio do inculo com tripsina, para facilitar a penetrao e replicao viral. Os isolados de campo so difceis de
isolar e, geralmente, requerem vrias passagens
para adaptao ao cultivo celular antes de produzirem efeito citoptico. A tcnica de RT-PCR
tambm tem sido utilizada para o diagnstico do
BCoV.
632
5.9.1 Epidemiologia
O IBV est presente em todos os pases que
possuem avicultura comercial ou domstica. Surtos da doena podem ocorrer mesmo em populaes vacinadas. As cepas Massachussets (Mass)
e Connecticut (Conn) so consideradas padro
para o vrus, sendo, assim, utilizadas em vrias
vacinas. Em alguns pases, vrios sorotipos do vrus esto circulando na populao avcola, o que
diculta o diagnstico e controle.
A galinha considerada a principal e nica espcie naturalmente susceptvel ao vrus e
que desenvolve a doena. Entretanto, isolados
de coronavrus muito semelhantes ao IBV tm
sido associados com doena respiratria e renal
em criaes comerciais de faises. Os coronavrus isolados de perus no produzem doena em
galinhas e vice-versa.
O IBV transmitido principalmente por
aerossis, mas as aves se infectam tambm pela
ingesto de gua e alimentos contaminados com
material fecal. O vrus muito contagioso e encontrado em altos ttulos na traquia de aves doentes e nas fezes de aves em recuperao. O vrus
pode sobreviver por dias ou at semanas no meio
ambiente, principalmente sob baixas temperaturas. Os sinais clnicos se desenvolvem dentro de
18 a 36 horas aps o contato com as aves infectadas. A infeco geralmente resolvida em aproximadamente 14 dias.
Captulo 24
Coronaviridae
5.9.3 Imunidade
Os mecanismos imunes, associados com a
eliminao e proteo contra o IBV, ainda no esto esclarecidos, mas os diferentes ramos da resposta imune parecem estar envolvidos em maior
ou menor grau. A resposta imune inata atravs
do interferon (IFN) e a resposta imune adaptativa
atravs de anticorpos e linfcitos T parecem desempenhar um papel importante.
O grande nmero de sorogrupos e sorotipos
um fator complicador na induo da proteo
contra esse vrus. As aves naturalmente infectadas ou vacinadas com o IBV estaro protegidas
contra o vrus homlogo, mas a proteo cruzada
contra cepas heterlogas varivel.
Evidncias indicam que a resposta imune
protetora induzida principalmente por antgenos da superfcie do vrus. Estudos realizados com as protenas S1, N e M demonstraram
que apenas os eptopos de S1 foram capazes de
633
634
5.9.4 Diagnstico
O diagnstico laboratorial do IBV pode ser
realizado pelo isolamento e identicao do vrus. O material mais adequado para o isolamento
viral a traquia, cujo material pode ser coletado
com o auxlio de suabes ou fragmentos de tecido durante o exame post-mortem. Fragmentos dos
rins e dos ovidutos tambm so indicados para
o isolamento, pois o vrus pode replicar nesses
tecidos. Suabes cloacais e tonsilas cecais tambm
podem ser coletados.
O mtodo mais utilizado para o isolamento
do vrus a inoculao na cavidade alantide de
embries de galinha com nove a onze dias. As alteraes produzidas pelo vrus so o nanismo e
congesto dos vasos sangneos, visveis ao exame em ovoscpio. Em muitos casos, so necessrias trs a quatro passagens para se observar as
leses. Algumas cepas do vrus podem matar os
embries em 48 a 72 horas. O isolamento atravs
de uma ou no mximo duas passagens de 24 horas em ovos embrionados, com posterior deteco por RT-PCR, uma estratgia que tem sido
bastante utilizada por vrios laboratrios.
Outra forma de isolar o vrus a inoculao
em explantes de anel traqueal de pintos de um
dia. Nesse caso, a presena do vrus ser detectada pela ciliostase (parada do movimento ciliar)
que ocorre dois a trs dias aps a inoculao. A
utilizao de cultivos celulares no recomendada para o isolamento, porque necessria uma
adaptao prvia dos vrus aos cultivos. A propagao do IBV em cultivos celulares utilizada
somente para a realizao de tcnicas sorolgicas
e pesquisas com cepas adaptadas.
A identicao do vrus pode ser realizada
por IFA, IPX, ME ou imunodifuso em gel de
gar (IDGA). ELISA utilizando anticorpos monoclonais pode ser aplicada para detectar o vrus
e tambm para determinar os sorotipos no uido alantide ou cultivos de traquia. As tcnicas
moleculares, como RT-PCR e nested-PCR, tm
Captulo 24
sido cada vez mais utilizadas. Essas tcnicas permitem a obteno de resultados mais acurados
quando se objetiva identicar diferentes cepas
do vrus.
Para a deteco de anticorpos contra o IBV,
podem ser empregados os testes de inibio da
hemaglutinao (HI), SN, IDGA e ELISA. A sorologia complicada pela grande quantidade de
sorotipos existentes que apresentam antgenos
especcos de grupo e especcos do sorotipo. A
tcnica de ELISA rotineiramente utilizada para
monitoramentos e pesquisa e detecta antgenos
de grupo. A SN e HI so consideradas sorotipoespeccas.
635
Coronaviridae
636
7 Coronavrus humanos
Os coronavrus humanos (HCoV) so responsveis por 15-20% dos resfriados comuns
que afetam a populao. As cepas HCoV-229E
e HCoV-OC43 so freqentemente envolvidas,
embora exista uma variabilidade antignica
muito grande entre os isolados desses vrus. Os
surtos ocorrem principalmente no inverno, com
um perodo de incubao que varia entre dois e
quatro dias. Alguns dos sinais clnicos observados so: febre, dor de cabea, dor de garganta,
descarga nasal e tosse. Os indivduos infectados
so suscetveis a reinfeces com o mesmo vrus
ou com outro antigenicamente diferente. Esta segunda infeco pode resultar em sintomatologia
semelhante primeira ou em uma forma mais
branda.
Um novo coronavrus humano denominado SARS-CoV altamente patognico foi isolado
recentemente de pacientes com uma sndrome
denominada pneumonia asitica (SARS, severe
acute respiratory disease). A enfermidade foi inicialmente detectada na China, em novembro de
2002. O vrus disseminou-se, posteriormente, pela
sia, por alguns pases europeus e pelo Canad,
infectando mais de 8.000 pessoas e matando 774.
Captulo 24
8 Bibliografia consultada
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Captulo 24
ARTERIVIRIDAE
Marcelo de Lima & Fernando Abel Osorio
25
1 Introduo
641
2 Classificao
641
641
4 Ciclo replicativo
643
643
644
644
645
645
646
646
646
647
648
648
648
649
649
650
651
652
652
653
6 Perspectivas
654
7 Bibliografia consultada
654
1 Introduo
2 Classificao
Ordem: Nidovirales
Famlia: Arteriviridae
Gnero: Arterivirus
Espcies: vrus da arterite eqina (EAV), vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV), vrus elevador da lactato desidrogenase (LDEV), vrus da febre hemorrgica
dos smios (SHFV).
Vrus
Hospedeiro
Conseqncias da infeco
EAV
Eqinos
PRRSV
Sunos
LDEV
Camundongos
Infeces subclnicas em
colnias de camundongos
SHF
Macacos
642
Captulo 25
643
Arteriviridae
4 Ciclo replicativo
mudana de fase
de leitura
5
1a
traduo do genoma
1b
GS
poliprotena replicase 1a
GL
mRNA1
GN
mRNA 2
mRNA 3
mRNA 4
protenas no-estruturais
mRNA 5
replicao do
genoma
transcrio dos
mRNAs subgenmicos
RNA genmico
traduo dos
mRNA subgenmicos
mRNA 6
mRNA 7
protenas estruturais
morfognese
e egresso
Adaptado de Snijder & Meulenberg (2001).
Figura 25.3. Etapas da expresso gnica e replicao do genoma dos arterivrus (EAV). Aps a penetrao e
desnudamento, a primeira etapa a traduo direta das ORFs 1a e 1b, resultando na produo de duas poliprotenas
(replicase 1a e replicase 1ab), que sero clivadas originando as enzimas do complexo replicase (protenas NS). Essas
enzimas realizam a transcrio integral do genoma, originando uma cpia de sentido antigenmico (polaridade
negativa). Utilizando esta molcula como molde, o complexo replicase transcreve regies prximas extremidade 3',
resultando na produo de vrios mRNAsg que codificam as protenas estruturais. A transcrio integral da cpia
antigenmica resulta na produo de RNAs com a extenso genmica, que, juntamente com as protenas estruturais,
iro participar da morfognese da prognie viral. Note que para o EAV, os produtos das ORFs 2a e 2b denominam-se
protenas E e GS, respectivamente, enquanto a ORF5 codifica a GL ou gp5.
644
Captulo 25
cao produtiva em linhagens celulares no-susceptveis infeco natural pode ser produzida
por transfeco do RNA genmico. A adsoro
dos vrions superfcie das clulas hospedeiras
ocorre provavelmente pela interao da glicoprotena 5 (gp5) ou do dmero gp5/M com uma
protena de 210 kDa, localizada na membrana
plasmtica de macrfagos alveolares. Em clulas
MARC-145, uma molcula de superfcie, com caractersticas similares heparina, poderia servir
de receptor para o PRRSV. A penetrao do vrus
na clula hospedeira ocorre por endocitose mediada por receptor, e a fuso do envelope com a
membrana plasmtica dependente da reduo
de pH que ocorre nos endossomos.
A
(+) 5
genoma
(-) 3
(-) 3
(+) 5
(+) 5
(+) 5
mRNA subgenmico
B
(+) 5
( - ) 3
(+) 5
(-) 3
genoma
( - ) 3
(+) 5
(+) 5
mRNA subgenmico
Figura 25.4. Modelos propostos para a sntese de RNAs mensageiros subgenmicos (mRNAsg). A) Transcrio a
partir da molcula de RNA antigenmico (sentido negativo); B) Transcrio a partir do RNA genmico (sentido
positivo), originando RNAsg subgenmicos que serviriam de molde para a sntese dos mRNAsg correspondentes.
645
Arteriviridae
646
5 Arterivrus de importncia
veterinria
5.1 Vrus da arterite eqina
A arterite viral eqina (EVA) uma doena
infecto-contagiosa de eqinos, causada por um
membro da famlia Arteriviridae, denominado vrus da arterite eqina (equine arteritis virus, EAV).
A denominao da doena se deve caracterstica inamatria das leses produzidas pelo vrus
no endotlio dos vasos sangneos, especialmente nas arterolas. A infeco pelo EAV freqentemente se manifesta de forma subclnica ou com
sinais leves, mas tambm pode resultar em sinais
respiratrios em eqinos adultos, abortamento
em guas e em pneumonia intersticial em neonatos. Apesar da existncia de diferenas antignicas entre isolados de campo, apenas um sorotipo
do EAV reconhecido.
A infeco pelo EAV pode ocasionar grandes prejuzos econmicos para a eqideocultura,
tanto pelas perdas reprodutivas como pela reduo na performance de animais de esporte e competio. Os prejuzos geralmente se devem a: a)
surtos de aborto e/ou morte de potros neonatos;
b) reduo no valor comercial de garanhes infectados e na demanda reprodutiva desses animais;
c) recusa do mercado internacional a garanhes
e smen de garanhes portadores, e no caso de
alguns pases, de qualquer animal soropositivo;
e d) alteraes nos programas de treinamento e
reduo ou cancelamento de corridas em casos
de surtos de EVA em hipdromos.
Captulo 25
5.1.1 Epidemiologia
O primeiro isolamento do EAV foi realizado,
em 1953, nos Estados Unidos, a partir do pulmo
de um feto abortado no estado de Ohio. A partir
de ento, a infeco tem sido detectada em populaes eqinas de todo o mundo, demonstrando
a ampla disseminao do agente. Nos ltimos 10
a 15 anos, tem sido observado um aumento no
nmero de surtos de EVA nos Estados Unidos
e na Europa. O isolamento recente do vrus na
Argentina e a deteco de sorologia positiva nos
estados de So Paulo (18,2%) e Rio Grande do Sul
(2,2%) conrmam a circulao do vrus na Amrica do Sul. O aumento do comrcio internacional
de animais e smen eqino podem ter contribudo para a disseminao do EAV na populao
eqina desses pases.
A transmisso do EAV pode ocorrer por
secrees e excrees de animais infectados ou
ainda por aerossis, fmites, gua e alimentos
contaminados. A excreo do vrus nas secrees
e excrees de animais na fase aguda da infeco
ocorre por um perodo curto, que geralmente no
excede 16 dias. A transmisso por aerossis constitui-se na principal forma de disseminao do
EAV, tanto nas propriedades destinadas reproduo como em locais com grande aglomerao e
contato entre os animais. Outra via importante de
transmisso do vrus a venrea. Trata-se de uma
forma muito efetiva de transmisso, pois cerca de
85 a 100% das guas cobertas por garanhes portadores ou inseminadas com smen contaminado se infectam. A transmisso congnita tambm
pode ocorrer, resultando em abortamento ou no
nascimento de potros infectados. Nesses casos, os
tecidos fetais e a placenta so considerados importantes fontes da infeco, pois contm grande
quantidade de vrus.
A transmisso pelo smen possui grande
importncia epidemiolgica. Estima-se que entre 30 e 60% dos garanhes infectados tornam-se
persistentemente infectados e excretam o vrus
por longos perodos. O vrus pode persistir no
garanho por semanas, meses ou anos e, em alguns casos, at por toda a vida. Entretanto, uma
Arteriviridae
647
648
5.1.3 Patologia
Os isolados do EAV diferem na virulncia,
na capacidade de induzir leses e na severidade
das leses. As leses macroscpicas so o resultado das alteraes vasculares provocadas pela replicao viral. Edema, congesto e hemorragias
do tecido subcutneo nos linfonodos e vsceras
so os achados mais freqentes. As cavidades
corporais podem conter quantidade moderada
ou abundante de exsudato amarelado; e os pulmes, especialmente dos neonatos, encontramse edemaciados e contm grande quantidade de
lquido. Em alguns casos, reas multifocais ou
difusas de colorao avermelhada podem ser observadas nos pulmes, por causa de congesto e
hemorragia. O endomtrio de guas que abortaram pode se apresentar edemaciado, congesto e,
algumas vezes, com hemorragias.
As alteraes histolgicas so observadas
em vrios sistemas, porm a parede dos vasos so
os locais mais afetados. As leses mais brandas
incluem edema vascular e perivascular, com hipertroa das clulas endoteliais. Nos casos mais
severos, observa-se vasculite e necrose brinide
da tnica mdia, inltrado linfoctico abundante, freqente perda do endotlio e formao de
trombos. Os pulmes podem apresentar pneumonia intersticial de grau leve a severo, caracterizada por inltrao alveolar de macrfagos,
em menor nmero de neutrlos e formao de
membrana hialina. Alm disso, ocorre hipertroa
e hiperplasia dos pneumcitos, arterite e ebite
nos vasos pulmonares.
As leses renais, que podem ser severas,
ocorrem em fases avanadas da infeco e se caracterizam por necrose tubular, nefrite intersticial, desorganizao glomerular e hipercelularidade. As leses no epitlio do trato reprodutivo
Captulo 25
5.1.4 Imunidade
Infeces naturais ou experimentais com o
EAV resultam em imunidade duradoura contra
reinfeces com diferentes cepas do vrus. Anticorpos com atividade neutralizante podem ser
detectados entre 7 e 14 dias ps-infeco (dpi),
coincidindo com o desaparecimento do vrus da
circulao sangnea. Altos ttulos neutralizantes
so geralmente detectados em animais com infeco persistente. A excreo viral pelo smen
ocorre mesmo na presena de ttulos altos de
anticorpos neutralizantes, indicando que a imunidade humoral no suciente para prevenir a
replicao viral no trato reprodutivo dos machos.
Os potros nascidos de fmeas imunes so protegidos da doena clnica nas primeiras semanas de
vida devido transferncia passiva de anticorpos
pelo colostro.
5.1.5 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo EAV pode
ser realizado pela deteco direta do agente, de
antgenos ou do RNA viral em tecidos ou em secrees provenientes de animais infectados. A
deteco de anticorpos especcos tambm pode
ser utilizada. O isolamento do vrus pode ser realizado em clulas das linhagens RK-13, Vero ou,
ainda, em cultivos primrios de clulas pulmonares de eqinos. As amostras a serem enviadas ao
laboratrio para o isolamento do vrus incluem
suabes nasais e da nasofaringe ou amostras de
sangue com anticoagulante. Para aumentar a
probabilidade de deteco do vrus, as amostras
devem ser coletadas no incio da fase febril. Em
649
Arteriviridae
casos de aborto, o isolamento viral pode ser tentado a partir da placenta, dos uidos fetais, pulmes, fgado e tecidos linforreticulares do feto
abortado. Alm do isolamento do vrus, a deteco de antgenos pela tcnica de imunohistoqumica e a caracterizao das leses vasculares por
exames histolgicos tambm podem auxiliar na
conrmao da etiologia. Tcnicas moleculares,
como a RT-PCR, tambm tm sido utilizadas para
identicar a presena do vrus, especialmente em
amostras de smen.
A infeco pelo EAV freqentemente conrmada sorologicamente pela demonstrao de
aumento signicativo (quatro vezes ou mais) nos
ttulos de anticorpos contra o vrus. O teste de
microneutralizao na presena de complemento
amplamente utilizado, sendo um mtodo convel na identicao da infeco causada pelo
EAV. Outros testes, como ELISA, soroneutralizao e imunodifuso, tambm podem ser utilizados para o diagnstico sorolgico da infeco.
As manifestaes clnicas reprodutivas e
respiratrias causadas pelo EAV devem ser diferenciadas daquelas causadas pelos herpesvrus
eqino (EHV-1 e 4), adenovrus eqino e inuenza eqina. Infeces bacterianas e causas noinfecciosas de abortamento tambm devem ser
consideradas no diagnstico diferencial.
650
to nas taxas de mortalidade. Surtos, com caractersticas clnicas semelhantes, foram relatados
na Europa e sia no incio da dcada de 1990. A
enfermidade foi inicialmente denominada doena
misteriosa dos sunos e sndrome respiratria e infertilidade suna. A etiologia viral foi denida em 1991,
e a doena cou posteriormente conhecida como
a sndrome respiratria e reprodutiva dos sunos
(PRRS).
Atualmente, a infeco pelo PRRSV est
associada com perdas econmicas signicativas
para a suinocultura comercial de vrios pases.
Nos Estados Unidos, estima-se que a infeco
pelo PRRSV resulte em prejuzos anuais de 560
milhes de dlares indstria suincola. No Brasil, um estudo sorolgico e virolgico, realizado
entre 2003 e 2005, no demonstrou a presena da
infeco pelo PRRSV em granjas de sunos. No
entanto, tendo em vista a importncia da suinocultura brasileira no agronegcio nacional e internacional, indispensvel um monitoramento
constante dos rebanhos, assim como de animais e
material gentico introduzidos no pas.
5.2.1 Epidemiologia
A origem do PRRSV ainda permanece indenida. Especula-se que esse vrus possa ter se
originado na Europa a partir do LDEV um arterivrus de camundongos e que sunos selvagens
teriam servido como hospedeiros intermedirios
antes de o vrus adquirir a capacidade de infectar sunos domsticos. Assim, o vrus teria sido
transferido para a Amrica do Norte pela importao desses animais em 1912. Essa hiptese poderia explicar o longo perodo de evoluo independente do vrus nos dois continentes e estaria
de acordo com o momento de divergncia gentica a partir de um ancestral comum, estimado ter
ocorrido ao redor de 1880. Entretanto, apesar de
diversos estudos investigando a origem do PRRSV, ainda no existem explicaes satisfatrias
para a emergncia quase simultnea do vrus na
Amrica do Norte e Europa.
Atualmente, acredita-se que a infeco pelo
PRRSV seja endmica na maioria dos pases produtores de sunos. Evidncias sorolgicas indi-
Captulo 25
651
Arteriviridae
652
A infeco de fmeas em idade reprodutiva ou em gestao pode resultar em abortamentos, retornos ao cio, natimortalidade e fetos parcialmente ou totalmente mumicados. Machos
infectados apresentam perda de libido e reduo na qualidade do smen devido a defeitos no
acrossoma e um decrscimo na motilidade espermtica. Embora os sinais clnicos variem amplamente em freqncia e severidade, a infeco de
neonatos freqentemente resulta em sinais respiratrios graves e elevadas taxas de mortalidade.
Na maioria das infeces causadas por
PRRSV, os sinais clnicos associados a perdas reprodutivas no so especcos para uma determinada fase de gestao. Inicialmente, as perdas
reprodutivas foram associadas com abortamentos em fases tardias. No entanto, em estudos subseqentes, foram observados abortamentos nas
diferentes fases de gestao, tanto em surtos da
doena como em condies experimentais.
5.2.3 Imunidade
Diversos estudos em animais tm demonstrado uma produo reduzida de interferon alfa
e citoquinas inamatrias em resposta infeco
pelo PRRSV. Essa resposta inata de magnitude
fraca poderia ser um dos fatores responsveis
pelo aumento da ocorrncia de infeces secundrias concomitantes.
A resposta imune humoral desempenha um
importante papel na preveno de reinfeces e
na reduo da excreo viral por animais infectados. A transferncia passiva de anticorpos pelo
colostro tambm confere completa proteo aos
leites nas primeiras semanas de vida. Nveis
altos de proteo so geralmente observados
contra reinfeces com cepas homlogas, porm
proteo apenas parcial obtida frente a cepas
heterlogas. Imunoglobulinas especcas da classe IgM podem ser detectadas entre 5 e 7 dias aps
a infeco (dpi), e IgG entre os dias 7 e 10 pi. Anticorpos contra as protenas estruturais e tambm
contra algumas protenas no-estruturais (principalmente Nsp2) j foram detectados no soro de
animais convalescentes. Uma resposta humoral
de grande magnitude contra a protena do nucleo-
Captulo 25
5.2.4 Diagnstico
A suspeita de infeco pelo PRRSV deve ser
considerada em rebanhos sunos que apresentem
problemas reprodutivos e doena respiratria
em animais de qualquer idade. Como outras infeces vricas e bacterianas podem causar manifestaes clnico-patolgicas semelhantes, o
diagnstico requer necessariamente a realizao
de testes laboratoriais.
Em casos de doena clnica ou perdas reprodutivas (abortos, natimortalidade etc.), o mtodo
diagnsitco mais indicado o isolamento do vrus a partir de tecidos ou secrees de animais
afetados. O isolamento pode ser realizado a partir
do soro ou de tecidos (pulmes, tonsilas e linfonodos), pela inoculao do material suspeito em
653
Arteriviridae
654
6 Perspectivas
Apesar dos esforos direcionados ao controle e prolaxia das infeces causadas pelo PRRSV
desde a sua identicao no incio dos anos 1990,
o vrus ainda continua a causar perdas econmicas signicativas para suinocultura mundial. A
diculdade na obteno de vacinas mais ecazes
e seguras demonstra que muitos aspectos relacionados com a biologia dos arterivrus ainda no
esto completamente elucidados. Nesse sentido,
um grande avano foi alcanado com a obteno
de clones infecciosos para o EAV e PRRSV, por
meio da tecnologia de gentica reversa. Com o
uso dessa metodologia, tem sido possvel a realizao de modicaes predenidas no genoma viral (delees, inseres e/ou substituies
de nucleotdeos), possibilitando, assim, estudos
dos mecanismos moleculares relacionados com
replicao, patogenia, persistncia e imunidade.
Alm disso, a tecnologia de gentica reversa permite, ainda, a manipulao genmica, visando
ao desenvolvimento de cepas vacinais atenuadas
ou com alteraes em protenas virais para serem
utilizadas na prolaxia e controle das infeces
causadas pelos arterivrus.
7 Bibliografia consultada
ALLENDE, R. et al. Porcine reproductive and respiratory
syndrome virus: description of persistence in individual pigs
upon experimental infection. Journal of Virology, v.74, p.1083410837, 2000.
BALASURIYA, U.B.R; MACLACHLAN, N.J. The immune
response to equine arteritis virus: potential lessons for other
arteriviruses. Veterinary Immunology and Immunopathology,
v.102, p.107-129, 2004.
BLAHA, T. The colorful epidemiology of PRRSV. Veterinary
Research, v.31, p.77-83, 2000.
Captulo 25
Arteriviridae
655
PARAMYXOVIRIDAE
Clarice Weis Arns, Fernando R. Spilki
& Renata Servan de Almeida1
n
26
1 Introduo
659
2 Classificao
659
2.1 Paramyxovirinae
2.2 Pneumovirinae
659
659
3 Replicao
659
4 Propriedades fsico-qumicas
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6 O genoma
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7 O ciclo replicativo
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Renata Dezengrini foi a responsvel pelas sees Peste Bovina e Vrus da Peste dos Pequenos Ruminantes.
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9 Bibliografia consultada
686
1 Introduo
Os vrus da famlia Paramyxoviridae incluem
importantes patgenos do trato respiratrio de
animais e humanos. A famlia formada por
vrus envelopados, em sua maioria esfricos, com
projees glicoproticas de superfcie. Os vrions
possuem um nucleocapsdeo helicoidal que envolve o genoma de RNA ta simples e polaridade negativa. Os paramixovrus so responsveis
por algumas doenas de grande relevncia em
Medicina Veterinria, tanto por sua prevalncia como pelo impacto econmico na produo
animal. Dentre os paramixovrus de importncia
veterinria, destacam-se aqueles amplamente conhecidos, como o vrus respiratrio sincicial bovino (BRSV), o vrus da parainuenza bovina tipo
3 (bPIV-3), o vrus da cinomose canina (CDV), o
vrus da peste bovina (Rinderpest virus, RPV) e o
vrus da doena de Newcastle (NDV). A famlia
agrega ainda outros vrus recentemente identicados, muito importantes devido ao seu potencial
zoontico, como os vrus Hendra e Nipah. Esta
famlia tambm abrange alguns vrus de grande
importncia para a sade humana, como o vrus
respiratrio sincicial humano (HRSV) e o vrus
do sarampo (MV), dentre outros.
2 Classificao
A famlia Paramyxoviridae classicada na
ordem Mononegavirales, que inclui ainda as famlias Rhabdoviridae e Filoviridae. Na famlia Paramyxoviridae, esto includas duas subfamlias:
Paramyxovirinae e Pneumovirinae. A classicao
taxonmica atual dessa famlia est apresentada
na Tabela 26.1.
2.1 Paramyxovirinae
Esta subfamlia possui seis gneros, listados
abaixo, juntamente com o vrus prottipo de cada
gnero:
Respirovirus: vrus Sendai;
Morbillivirus: vrus do sarampo;
Rubulavirus: vrus da caxumba;
Henipavirus: vrus Hendra;
2.2 Pneumovirinae
Esta subfamlia possui dois gneros:
Pneumovirus: vrus respiratrio sincicial
humano;
Metapneumovirus: vrus da rinotraquete
dos perus.
3 Replicao
Os paramixovrus podem infectar uma ampla gama de hospedeiros, tanto naturalmente
quanto sob condies experimentais, e a infeco
assintomtica em muitas espcies. No entanto,
as infeces de relevncia clnica so restritas a
algumas delas.
A replicao desses vrus in vitro ocorre em
vrios tipos de clulas primrias e de linhagem,
principalmente de origem pulmonar e renal, homlogas espcie de origem do vrus. necessria a adaptao dos paramixovrus ao cultivo
por vrias passagens. A infeco por esses vrus
citoltica, e uma caracterstica a fuso entre
clulas, formando clulas gigantes multinucleadas (sinccios). A replicao ocorre no citoplasma
das clulas hospedeiras, porm os morbilivrus
podem produzir incluses intranucleares acidoflicas. Os vrus da parainuenza e alguns morbilivrus possuem, ainda, a propriedade de hemadsoro.
4 Propriedades fsico-qumicas
Os paramixovrus so sensveis a pH cido e
ao aquecimento a 56C por 30 minutos. A exposio a solventes lipdicos, detergentes no-inicos,
formaldedo e agentes oxidantes destri a infectividade viral. Os vrions so extremamente lbeis,
mas permanecem viveis a temperaturas de -50C
ou menos por muitos meses, porm episdios de
congelamento e descongelamento podem inativar a infectividade. Os vrions apresentam uma
densidade de 1,18 a 1,23 g/mL, determinada por
centrifugao em gradiente de sacarose.
660
Captulo 26
Tabela 26.1. Classificao dos membros da famlia Paramyxoviridae e seus respectivos hospedeiros. Os hospedeiros
naturais esto em negrito, e os secundrios esto entre parnteses.
Subfamlia
Gnero
Paramyxovirinae
Respirovirus
Espcie
Hospedeiros
Vrus da parainfluenza
bovina 3 (bPIV-3)
bovinos (e ovinos)
camundongos (sunos,
ratos, hamsters e cobaias)
primatas
Paramixovrus do salmo
do Atlntico
Salmes
Vrus da parainfluenza
humana 1 e 3 (hPIV-1 e 3)
espcies de foca
espcies de baleias,
golfinhos e focas
humanos
sunos
sunos
humanos
humanos
Yucaipa vrus
galinhas
Morbillivirus
Rubulavirus
661
Paramyxoviridae
Subfamlia
Gnero
Espcie
Hospedeiro
Vrus Nipah
Paramyxoviridae
Henipavirus
Avulavirus
Vrus TPMV-like
Pneumovirinae
Pneumovirus
Metapneumovirus
Paramixovrus avirios 2 a 9
(APMV-2 a 9)
Tupaia belangeri
bovinos (ovinos)
ovinos (bovinos)
camundongos
humanos
galinhas e perus
humanos
662
Captulo 26
Glicoprotena F
Glicoprotena
(HN,H ou G)
Protena SH
Camada lipdica
Protena M
RNA
Nucleocapsdeo Protena P
Protena N
Protena L
Paramyxoviridae
663
664
6 O genoma
O genoma dos paramixovrus constitudo
por uma molcula de RNA linear de ta simples,
polaridade negativa, com 15 a 19 quilobases (kb).
Por possuir polaridade negativa, o genoma desnudo no infeccioso quando introduzido em
clulas permissivas. Os vrions podem conter,
ocasionalmente, uma cpia simples de RNA de
polaridade positiva (RNA antigenmico). O genoma contm seqncias no-codicantes na extremidade 3 (chamada leader), com aproximadamente 50 nt, e, na extremidade 5, com 50 a 160 nt
(Figura 26.2). Essas regies so importantes para
a transcrio e replicao do genoma.
Captulo 26
7 O ciclo replicativo
Os paramixovrus so agrupados na classe
V, conforme a classicao de Baltimore (1971)
com relao s estratgias de replicao. De forma similar aos outros vrus dessa classe, todos
os processos relacionados com a replicao viral
ocorrem no citoplasma da clula hospedeira. Em
cultivos celulares, o ciclo replicativo geralmente
se completa em 14 a 30 horas, mas pode ter durao inferior. Cepas virulentas do NDV podem
completar o ciclo replicativo em aproximadamente 10 horas.
Os vrions ligam-se a receptores celulares
especcos (CD46 e CD150 para o vrus do sarampo, provavelmente glicosaminoglicanos ou
molculas semelhantes a heparina para os pneumovrus, cido silico para os demais) e penetram na clula por fuso do envelope viral com
a membrana plasmtica na superfcie celular,
em condies de pH neutro. Para que a protena precursora F0 exera sua funo fusognica,
necessria a sua prvia clivagem em F1 e F2 por
proteases celulares. Clulas infectadas podem se
fusionar, formando sinccios ou clulas gigantes
multinucleadas caractersticas, que podem produzir necrose tecidual in vivo. Uma vez no citoplasma, o nucleocapsdeo (RNA:N) transcrito
665
Paramyxoviridae
vrus do sarampo
Gnero Morbillivirus
NP
P/C/V
Subfamlia
Paramyxovirinae
3'
Gnero Respirovirus
vrus da parainfluenza 3
P/C/V
NP
HN
L
5
3'
Gnero Rubulavirus
vrus da caxumba
P/V
NP
SH
HN
3'
Gnero Pneumovirus
NS1 NS2
SH
M2
L
5
Subfamlia
Pneumovirinae
3'
Gnero Pneumovirus
NS1 NS2
SH
M2
3'
Gnero Metapneumovirus
N
pneumovrus avirio
M
M2
3'
SH
L
5
Figura 26.2. Estrutura e organizao genmica dos vrus da famlia Paramyxoviridae. As linhas finas representam o
RNA genmico; os retngulos representam os genes individuais. M) protena da matriz; H) hemaglutinina; F)
protena de fuso; L) polimerase; NP) nucleoprotena; HN) hemaglutinina-neuraminidase; P) fosfoprotena; C/V)
produtos do gene P; SH) protena pequena hidrofbica; G) glicoprotena do envelope; NS1 e NS2) protenas noestruturais; M2) protena associada ao envelope.
cpias de RNA de sentido antigenmico (polaridade positiva). As protenas N e P parecem desempenhar um papel importante nessa transio
entre transcrio e replicao, fazendo com que
o complexo replicase no reconhea os sinais de
terminao existentes nas regies intergnicas e
realize a transcrio integral do genoma e sntese
da cpia antigenmica (RNA +). Esta cpia antigenmica serve de molde para a produo de
molculas de RNA de sentido genmico (RNA -).
medida que so sintetizadas, as molculas de
RNA de sentido negativo se associam com molculas da protena N, formando nucleocapsdeos
helicoidais exveis que, posteriormente, se associam com as protenas P e L. A montagem dos
nucleocapsdeos ocorre concomitantemente com
a sntese do RNA antigenmico e genmico, e os
666
Captulo 26
RE
ED
HN
(-)
Transcrio
3
A
SH
4
A
4
N
Golgi
Traduo
Traduo
C
(+)
Sntese RNA
genmico
(-)
7
8
Figura 26.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo da familia Paramyxoviridae. 1) Ligao aos receptores; 2)
Penetrao por fuso do envelope viral com a membrana plasmtica; 3) Transcrio dos mRNA pelo complexo
polimerase; 4) Traduo das protenas virais pelos ribossomos celulares; 5) Sntese de RNA antigenmico e
replicao do RNA genmico pelo complexo polimerase; 6) Processamento e transporte das protenas do envelope e
insero na membrana plasmtica; 7) Morfognese; 8) Egresso.
8 Paramixovrus de interesse
veterinrio
As duas subfamlias dos paramixovrus
abrigam vrus associados com doenas importantes em animais. Esses vrus e as doenas que eles
causam sero abordados a seguir.
667
Paramyxoviridae
8.1.1 Epidemiologia
O BRSV possui distribuio mundial, mas
uma estimativa precisa da ocorrncia da infeco
difcil, uma vez que outros patgenos virais e
bacterianos podem estar envolvidos nos casos de
doena respiratria. A diculdade de isolamento
do agente tambm diculta o diagnstico, bem
como a ocorrncia de infeces subclnicas. Em
regies endmicas, surtos de doena respiratria
ocorrem, muitas vezes, esporadicamente, envolvendo apenas grupos de animais mais suscetveis. Em surtos naturais, a doena clnica raramente observada em animais com idade inferior
668
Captulo 26
669
Paramyxoviridae
dias aps a infeco. Nos tecidos traqueais, o vrus foi detectado precocemente s 24 horas aps
a infeco, foi isolado no dia quatro e continuou
sendo detectado alm dos 10 dias subseqentes.
Os sinais clnicos aps a infeco natural incluem pirexia (>39,5C), descarga nasal, tosse, taquipnia, respirao bucal e abdominal, ensema
pulmonar e subcutneo e ocasionalmente morte.
Infeces bacterianas secundrias, especialmente
por Pasteurella multocida, Streptococcus pneumoniae
e Mycoplasma bovis, so freqentemente detectadas em surtos de BRSV. Quando no ocorrem
infeces bacterianas secundrias, os animais se
recuperam em duas a trs semanas aps a infeco.
Os achados de necropsia incluem pneumonia intersticial multifocal, ensema alveolar disseminado com focos de atelectasia, e ensema intersticial em graus moderados. Uma caracterstica
marcante da doena o espessamento dos septos
interlobulares. Pequenas franjas conjuntivas so
evidenciadas nos bordos do pulmo e do um
aspecto fosco a essas regies. Alguns relatos descrevem uma hipertroa marcante do miocrdio
do ventrculo direito.
As mucosas da cavidade nasal, traquia e
brnquios dos animais infectados podem apresentar-se hipermicas, especialmente nos estgios
iniciais da infeco. O septo interlobular muitas
vezes aparece espessado, devido ao edema pronunciado causado por obstruo dos brnquios,
que pode levar dispnia severa. As pores
dorsal e crnio-dorsal dos pulmes podem se
apresentar normais em muitos casos, mas podem
tambm estar marcadamente distendidas, devido
ao edema e ensema intersticial e alveolar severos. Os linfonodos regionais do trato respiratrio
podem estar aumentados e edematosos.
No exame histopatolgico, possvel se observar clulas sinciciais em grande quantidade,
localizadas principalmente nos bordos dos lbulos pulmonares, nos alvolos, bronquolos e,
por vezes, em vasos linfticos. As clulas sinciciais apresentam um nmero varivel de ncleos
dispostos centralmente. H presena de ensema
alveolar crnico com bordos de septos alveolares rompidos em forma de clava, por vezes intercalados com reas de atelectasia, hipertroa
8.1.3 Imunidade
A protena F considerada a mais imunognica do BRSV, superando a protena G na induo de anticorpos neutralizantes e na imunidade
mediada por linfcitos T citotxicos. A protena F
ainda induz a produo de anticorpos inibidores
da fuso, que esto relacionados com proteo
frente infeco. A imunizao de animais com
as protenas F, G e N expressas separadamente
no vrus vaccinia conferiu proteo contra o desao com o BRSV. Um estudo realizado em animais experimentalmente infectados demonstrou
que a imunidade humoral contra a protena F
mais duradoura e de maior intensidade do que
a induzida pela protena G. Anticorpos contra as
protenas P, M e M2 tambm esto presentes em
infeces naturais.
Os anticorpos maternos contra as protenas
F, G e N presentes no soro de bezerros no conferem proteo frente infeco pelo BRSV, mas
podem reduzir a severidade da doena. Esses
anticorpos causam um decrscimo na replicao
viral nos pulmes aps o desao. A sua presena
ainda suprime a resposta imune humoral local e
sistmica infeco. Desse modo, a vacinao de
animais jovens pode ser prejudicada pela presena de anticorpos maternos.
Estudos em bovinos tm demonstrado que
a infeco pelo BRSV induz uma resposta imunolgica predominantemente de linfcitos T auxiliares do tipo Th2, que so caracterizadas pela
670
8.1.4 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo BRSV deve
se basear na deteco de antgenos virais em
amostras clnicas, alm da sorologia. Os mtodos
de escolha para a deteco de antgenos do BRSV
em amostras de pulmo so as tcnicas de imunouorescncia (IFA) e imunoperoxidase (IPX).
O exame de secrees nasais pode se constituir
em uma alternativa para o diagnstico no animal
vivo. O lavado broncoalveolar pode ser mais indicado do que os suabes nasais para a demonstrao de antgenos.
A fragilidade dos vrions do BRSV torna o
isolamento em cultivo celular trabalhoso e freqentemente infrutfero, requerendo repetidas
passagens at o aparecimento de efeito citoptico.
Cuidados especiais na conservao de amostras,
incluindo a coleta estril, manuteno dos espcimes sob refrigerao (evitar o congelamento a
-20C) e envio imediato ao laboratrio aumentam
as chances de isolamento do vrus. Tambm recomendvel a coleta de suabes nasais ou lavados
broncoalveolares de diferentes animais do rebanho. Em casos de necropsia, a coleta de reas pulmonares adjacentes s reas mais afetadas e de
reas com aspecto saudvel tambm aumentam
a probabilidade de deteco do vrus.
Para o diagnstico sorolgico, as tcnicas
de ensaio imunoenzimtico (ELISA) e soroneutralizao (SN) tm sido amplamente utilizadas.
O diagnstico tambm pode ser realizado pela
deteco do RNA viral em amostras clnicas por
RT-PCR.
Captulo 26
671
Paramyxoviridae
8.2.1 Epidemiologia
A distribuio do bPIV-3 mundial e a prevalncia de anticorpos especcos alta na populao bovina. No Brasil, a infeco endmica
com altas taxas de soropositividade nos rebanhos.
Estudos realizados no RS indicam uma prevalncia de anticorpos superior a 80% em gado de leite e corte, demonstrando a ampla disseminao
do agente. Apesar das evidncias sorolgicas da
presena do vrus no Brasil, raramente tem sido
relatado o isolamento do agente. O vrus foi isolado de um animal com doena respiratria no
RS e de um surto de abortos em bovinos no estado de Gois. A prevalncia alta da infeco, associada aos raros relatos de doena respiratria
nos rebanhos, sugere que a maioria das infeces
inaparente.
A disseminao do vrus no rebanho ocorre aparentemente por contato direto e indireto.
Fatores predisponentes para a infeco incluem
o estresse (vacinao, desmame, transporte),
excesso de lotao e ventilao inadequada, especialmente em rebanhos leiteiros estabulados.
Os ovinos tambm so susceptveis infeco e,
possivelmente, participam da epidemiologia da
672
tambm podem ser observadas. A infeco provavelmente induz uma imunossupresso localizada, o que favorece a instalao de infeces
bacterianas secundrias.
8.2.3 Imunidade
Anticorpos com atividade neutralizante,
especialmente da classe IgG2, e anticorpos inibidores da hemaglutinao so detectveis no soro
de animais convalescentes. A proteo contra o
aparecimento de sinais clnicos induzidos por
reinfeces pelo bPIV-3 est associada com altos
ttulos de anticorpos neutralizantes e presena de
resposta imune celular de memria. A imunidade de mucosas, especialmente aquela mediada
por IgA, parece ser importante na proteo contra reinfeces. No entanto, a imunidade geralmente passageira, e os animais podem se tornar
susceptveis reinfeco aps alguns meses.
8.2.4 Diagnstico
O bPIV-3 deve ser considerado em casos de
doena respiratria em bovinos jovens. A suspeita clnica deve ser conrmada por testes laboratoriais. O diagnstico laboratorial baseia-se no
isolamento do vrus em cultivo celular, a partir
de secrees nasais de animais doentes. O vrus
pode ser recuperado de secreo nasal de 7 a 9
dias ps-infeco. O vrus produz citomegalia,
arredondamento celular e formao de sinccios
em clulas primrias ou de linhagem bovina,
efeito caracterstico dos membros da famlia Paramyxoviridae.
A identicao do vrus pode ser realizada
por IFA de clulas inoculadas com o material
suspeito. O mtodo clssico de identicao a
hemaglutinao (HA) com eritrcitos de cobaias,
seguida de inibio da hemaglutinao (HI) com
anti-soro especco. Outro mtodo clssico de
diagnstico a reao de hemadsoro em cultivo celular. As tcnicas moleculares (RT-PCR) tm
sido utilizadas para a deteco do agente e seus
produtos. A sorologia pareada tambm pode auxiliar o diagnstico da infeco aguda. As tcnicas de eleio para a sorologia so a HI com eritrcitos de cobaias, a SN e ELISA.
Captulo 26
673
Paramyxoviridae
674
Captulo 26
8.5.1 Epidemiologia
A infeco pelo CDV enzotica no mundo inteiro, com a doena ocorrendo com maior
freqncia em ces jovens no-vacinados. Falhas
vacinais, associadas com esquemas de vacinao
inadequados ou mesmo com vacinas comerciais
de baixa qualidade, podem resultar na ocorrncia
de doena mesmo em ces vacinados. Em outros
pases a situao semelhante. Pases desenvolvidos que reduziram a incidncia da doena pela
vacinao massiva ainda apresentam surtos espordicos de cinomose.
O contato direto com as secrees nasais,
orais e urina de animais infectados se constitui na
principal forma de transmisso do CDV. A disseminao do vrus a curtas distncias por aerossis tambm parece ocorrer com certa freqncia.
A transmisso por fmites e no ambiente nosocomial tambm tem sido descrita. Aps a infeco,
os animais excretam o vrus nos uidos corporais
por perodos prolongados.
Grande parcela dos ces infectados no desenvolve a forma clnica da infeco. Entretanto,
existem amostras de CDV com vrios nveis de
patogenicidade. Este fato, associado com fatores
do hospedeiro, como idade, status imunolgico e
infeces secundrias, podem inuenciar na manifestao das diferentes formas clnicas da doena.
Outro aspecto importante da biologia do
CDV a gama crescente de espcies de mamferos
que se infectam naturalmente. Os danos ecolgicos associados com essas infeces puderam ser
observados nos surtos de cinomose com elevadas
taxas de mortalidade em lees e hienas no Parque Nacional do Serengueti (Tanznia, continente africano). A infeco pelo CDV fatal tambm
para outros animais domsticos, como os fures.
A infeco de gatos domsticos parece no ser
patognica, embora o CDV possa causar doena
grave em grandes felinos selvagens. O controle
desse vrus se torna difcil pelo grande nmero
de espcies selvagens que podem ser infectadas,
incluindo animais da famlia Canidae (lobos, ra-
675
Paramyxoviridae
posas, coiotes, dingo e chacal), Procyonidae (mopelada, coati e panda), Mustelidae (ferret, marta,
texugo, cangamb e lontra), Viverridae (civet) e
da famlia Felidae (leopardo, lees, tigres e guepardos). Surtos de enfermidade com alta mortalidade em focas e outros mamferos marinhos tm
sido descritos no mar Mediterrneo e atribudos
ao CDV e a outros vrus relacionados.
676
Captulo 26
8.5.3 Imunidade
A sobrevivncia do animal depende fundamentalmente do desenvolvimento de uma resposta imune celular efetiva. A resposta imune
humoral tambm importante, pois ces com
ttulos medianos de anticorpos (entre 16 e 64)
parecem estar protegidos contra a doena aguda.
Ttulos de anticorpos inferiores a 16 no protegem os ces, porm interferem com o sucesso da
vacinao. A imunidade passiva declina entre a
8a e 14a semanas de vida dos lhotes, deixandoos susceptveis infeco. Antes disso, a imunidade passiva pode comprometer o sucesso da
vacinao, pela inativao do vrus vacinal pelos
anticorpos. Diferenas antignicas entre isolados
de campo e cepas vacinais tm sido implicadas
como causa de falhas vacinais. Essas falhas resultam na ocorrncia de cinomose mesmo em ces
vacinados.
8.5.4 Diagnstico
A ocorrncia de leses cutneas e doena
respiratria em ces jovens, associadas ou no
com sinais neurolgicos, so sugestivos de cinomose. Uma linfopenia pode estar presente no hemograma de animais doentes.
O diagnstico laboratorial pode ser realizado
pela deteco de antgenos do CDV em esfregaos de clulas da conjuntiva ou de fossas nasais,
na capa ogstica e no sedimento urinrio pelas
tcnicas de IFA e IPX ou, ainda, pela deteco do
genoma viral nessas amostras por RT-PCR.
O isolamento viral no muito utilizado para o diagnstico, pois o CDV necessita de
adaptao aos cultivos celulares por vrias passagens. O vrus replica em clulas primrias e
de linhagem de origem canina, como a MDCK, e
de fures (ferrets). Outras clulas susceptveis incluem a linhagem Vero e broblastos de embrio
de galinha.
677
Paramyxoviridae
geral, as vacinas inativadas no induzem resposta satisfatria; porm novos testes realizados
com adjuvantes tm surtido resultados promissores. Vacinas vivas, contendo o vrus atenuado
do sarampo, so utilizadas com relativo sucesso
em pases da Europa. Essas vacinas no sofrem
a interferncia da imunidade passiva. Vacinas
com vrus vivo modicado e vacinas recombinantes, utilizando um poxvrus avirio como
vetor do DNA complementar (cDNA) dos genes
das protenas H e F do CDV, esto disponveis
comercialmente (Figura 26.5). Recomenda-se a
primovacinao aos 60 dias de idade, trs reforos mensais e revacinao anual. Para lhotes
oriundos de mes sabidamente no-imunizadas
e tambm em situaes de risco (canis, colnias,
pet shops), pode-se antecipar a primovacinao. O
Poxvrus do canrio
Genes da
protenas
HeF
Sntese
de cDNA
cDNA
Y
Multiplicao
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
||
Y Y YY Y
Y
Imunizao
Figura 26.5. Vacina recombinante contra o vrus da cinomose (CDV). Os genes das glicoprotenas H e F so
sintetizados como cDNA e inseridos no genoma do poxvrus do canrio. Este vrus vetor amplificado em cultivo
celular e, ento, utilizado para imunizar os ces, nos quais expressa as protenas heterlogas. Os ces imunizados
desenvolvem resposta imunolgica contra as protenas do vrus vetor e contra as glicoprotenas H e F, conferindo
proteo contra o CDV.
678
sucesso das vacinas disponveis depende da variabilidade antignica existente entre isolados do
CDV, alm da qualidade dos imungenos e da
resposta dos indivduos vacinados.
A induo de encefalite aps a vacinao
com as vacinas vivas disponveis est associada
com a imunossupresso. Os sinais neurolgicos
geralmente ocorrem entre 7 e 14 dias aps a administrao da vacina, porm o grau de imunossupresso e a presena de outras infeces podem
agravar o quadro, tornando-o sistmico. Deve-se
evitar a vacinao de fmeas lactantes em contato
com seus lhotes no-imunizados, especialmente aquelas sem histrico de vacinao. Deve-se
tambm evitar o contato de lhotes com outros
ces at a segunda imunizao. Alguns estudos
tm demonstrado que as revacinaes poderiam
ser realizadas em intervalos maiores que um ano,
pois os ces vacinados apresentam ttulos duradouros contra o vrus homlogo.
As pessoas envolvidas nos cuidados ambulatoriais com animais doentes devem utilizar
medidas de proteo (luvas descartveis, esterilizao e descarte de fmites, higiene pessoal e
do ambiente com desinfetantes), associadas com
o isolamento dos animais, prevenindo a disseminao da enfermidade no ambiente residencial e
nosocomial.
Diversos protocolos teraputicos, incluindo
a suplementao com vitamina B, aplicao de
corticosterides, soro hiperimune, drogas antivirais e outros medicamentos tm sido utilizados
para minimizar os efeitos da infeco neurolgica. Porm, nenhum desses protocolos demonstrou ecincia comprovada sobre o desfecho da
enfermidade. A cinomose permanece sendo uma
doena de prognstico desfavorvel, com altas
taxas de mortalidade, dependendo da cepa viral
e da idade dos ces. Muitos animais que se recuperam da doena aguda permanecem com seqelas neurolgicas graves.
Captulo 26
8.6.1 Epidemiologia
Estima-se que 70% dos ces urbanos possuam anticorpos contra o CPIV-2. Esse vrus, assim
como os outros agentes da traqueobronquite infecciosa canina, dissemina-se por via area e pelo
contato direto ou indireto. A transmisso ocorre
principalmente em ambientes de convvio entre
ces, com superpopulao e estresse. Reinfeces
com ou sem sinais clnicos podem ocorrer com
freqncia.
A infeco apresenta distribuio mundial.
No existem dados publicados sobre a prevalncia de anticorpos ou isolamento do vrus no Brasil. No entanto, doena com sinais clnicos semelhantes aos da tosse dos canis so freqentes na
rotina clnica, principalmente no inverno e afetando ces com idade entre seis meses e um ano.
679
Paramyxoviridae
8.6.3 Imunidade
A infeco induz a rpida produo de anticorpos neutralizantes e inibidores da hemaglutinao. Imunidade humoral de mucosas (mediada
por IgA secretria), alm da celular, so importantes para minimizar os sinais da infeco pelo
CPIV-2, protegendo contra novas exposies ao
agente.
8.6.4 Diagnstico
O diagnstico clnico baseia-se nos sinais clnicos e deve ser conrmado por exames complementares, como a radiograa torcica (espessamento da traquia e de brnquios), hemograma
e bioqumica srica.
O diagnstico laboratorial especco pode
ser realizado pelo isolamento do vrus a partir
de secrees de animais doentes em clulas de linhagem caninas. A presena de antgenos virais
em secrees nasais pode ser evidenciada pela
tcnica de IFA. Como a traqueobronquite uma
doena multicausal, deve-se tambm investigar a
presena de outros agentes concomitantes, determinando-se ainda o prognstico da doena.
680
8.7.1 Epidemiologia
A origem do APV ainda obscura, embora
os primeiros relatos da doena na frica do Sul
sugiram que o vrus possa ser um patgeno natural de aves silvestres daquele pas.
Estudos realizados no Brasil, em 1992, indicaram uma prevalncia de 65-70%. Estudos posteriores detectaram anticorpos para o APV em frangos de corte, matrizes e poedeiras nas regies Sul,
Sudeste e Nordeste, demonstrando a ampla distribuio da infeco no pas. O isolamento do APV
foi realizado a partir de perus e galinhas comerciais com sinais respiratrios; e os isolados foram
identicados como pertencentes ao subgrupo A.
As perdas econmicas devido a SHS em
frangos de corte situam-se em torno de 1 a 3%
em condies favorveis; e de 20 a 30% quando
ocorrem complicaes respiratrias ou infeces
bacterianas secundrias.
A transmisso do APV ocorre por contato
direto e indireto entre aves, por aerossis e atravs de rao, gua e cama contaminados. A transmisso geralmente associada ao contato ntimo
com superfcies contaminadas bem como a fato-
Captulo 26
681
Paramyxoviridae
primria no trato respiratrio, e replica no epitlio do trato reprodutivo. Os sinais clnicos provavelmente so reexos dos danos provocados pela
multiplicao do vrus no epitlio ciliado, tanto
na traquia como no trato reprodutivo.
Acredita-se que a maioria das infeces seja
assintomtica ou restrita a sinais clnicos leves
(aumento de secrees e espirros devido a um
processo de hiperplasia glandular). Isto se deve
ao fato de que, em condies normais, h uma reposio eciente das clulas que revestem as mucosas. Fatores que comprometem a habilidade de
reparao epitelial ou que contribuem para um
aumento da atividade secretria, como o estresse,
poeira, concentrao de gases ambientais, deprimem as defesas locais ou o sistema BALT (tecido
linfide associado aos brnquios), permitindo a
instalao de agentes bacterianos secundrios.
Isto leva a um processo inamatrio intenso,
principalmente nos condutos naso-lacrimais, nos
quais se observa secreo muco-catarral, lacrimejamento e blefarite. A persistncia de colonizao
bacteriana leva ao acometimento do tecido subcutneo da regio submandibular do tecido sseo do crnio e, ao nal, afeco das meninges,
que a fase que caracteriza a SHS.
As principais alteraes histopatolgicas
demonstram inicialmente uma injria do epitlio respiratrio, com reduo da atividade ciliar,
e, nalmente, uma perda progressiva dos clios,
congestionamento subepitelial e hiperplasia das
clulas epiteliais. Nas clulas ciliadas, so observados corpsculos citoplasmticos acidlos.
Freqentemente so observadas celulite, periostite e osteomielite dos ossos da cabea. Em muitos casos, ocorrem tambm otite externa e interna
e meningite.
No crebro, observam-se gliose, hiperemia,
concentrao perivascular de leuccitos e em menor grau, hemorragias. Alteraes degenerativas
podem ser observadas somente nas clulas de
Purkinje do cerebelo. Tambm so observados
hiperemia renal e glomerulonefrite. As aves infectadas apresentam uma degenerao marcante
dos folculos ovarianos mais desenvolvidos e dos
vulos maduros.
Os sinais clnicos iniciais em frangos de corte
incluem corrimento nasal, tosse ou espirros dis-
8.7.3 Imunidade
Tanto as infeces naturais como experimentais induzem a formao de anticorpos, detectveis aproximadamente trs semanas aps a
inoculao/infeco. Os anticorpos neutralizantes alcanam seu nvel mximo em cinco a seis
semanas ps-infeco. Anticorpos so detectados
em vrias categorias de animais, sem associao
com doena clnica, reforando a hiptese de que
a maioria das infeces so subclnicas.
A exposio do trato respiratrio a patgenos resulta na produo de anticorpos locais das
classes IgA e IgG, que so responsveis pela neutralizao do agente. Os anticorpos podem ser
682
detectados a partir de cinco dias aps o aparecimento dos sinais clnicos, pelo uso de tcnicas
como o ELISA, SN e a imunouorescncia indireta (IFI). Em infeco experimental de pintos
livres de patgenos especcos (specic pathogen
free, SPF) foi possvel detectar anticorpos a partir
do 15o dia ps-inoculao, e os nveis persistiram
at quatro semanas. A ativao do sistema imune
local e a produo de anticorpos circulantes so
mecanismos importantes para a proteo aps o
desao viral, mas a imunidade celular apresenta
uma importncia maior na defesa contra o APV.
8.7.4 Diagnstico
O quadro clnico pode apresentar variaes,
dependendo das condies ambientais e das infeces secundrias, e no existem sinais patognomnicos. Portanto, necessrio que seja realizado o diagnstico laboratorial.
A conrmao da infeco pelo APV depende da demonstrao do vrus ou antgenos virais;
ou de anticorpos especcos no soro. Mtodos sorolgicos, como a SN, IFA e ELISA, so os mtodos de escolha para diagnstico da infeco.
Em geral, o vrus mais dicilmente isolado
de frangos do que de perus. Acredita-se que este
fato possa se dar em razo do curto tempo de replicao do agente nos tecidos alvo, no estando
mais presente por ocasio do aparecimento dos
sinais clnicos. O isolamento viral raramente
bem-sucedido em aves com sinais clnicos severos, provavelmente devido a infeces secundrias. A replicao viral nos tecidos alvo tambm
pode no estar no pico no momento da coleta.
O isolamento pode ser realizado em cultivos
primrios de embrio de galinha, em ovos embrionados, em cultivos de anel de traquia (TOC)
e em linhagens celulares (principalmente Vero e
CER [chicken embryo related]). As clulas inoculadas apresentam efeito citoptico (ECP) com formao de sinccios. Nos anis de traquia, observada uma ciliostase (reduo dos movimentos
ciliares). O sucesso do isolamento viral depende
da quantidade de partculas virais viveis presentes na amostra enviada ao laboratrio e da
utilizao de tcnicas adequadas.
O uso da RT-PCR na deteco do APV em
perus e galinhas apresenta como vantagem a ca-
Captulo 26
683
Paramyxoviridae
8.8.1 O agente
O NDV pertence ao gnero Avulavirus, espcie paramixovrus avirio sorotipo 1 (APMV-1).
No gnero Avulavirus, existem ainda outros oito
sorotipos virais designados de 2 a 9. Os vrions
do NDV so pleomrcos e, muitas vezes, esfricos, com o dimetro de aproximadamente 180
nm. O NDV inativado aps trs horas a 56C
ou 30 minutos a 60C, e por ao de pH cido. Os
vrions so sensveis ao ter e so inativados por
684
quais foram isoladas amostras altamente patognicas do NDV nas regies Norte, Nordeste e
Sul. No pantanal mato-grossense, foram isoladas
amostras patognicas de NDV de diferentes aves
silvestres, muitas delas vivendo em estrito contato com aves domsticas e comerciais.
Aps cinco anos sem registros de focos, o
Brasil voltou a registrar surtos da ND em criaes
comerciais, em 2006, no Rio Grande do Sul. A
eventual ocorrncia da doena no pas acarreta a
imediata suspenso das exportaes de produtos
avcolas, com graves prejuzos para a avicultura
nacional. No Brasil, a ND controlada pela vacinao, mas existem reas declaradas livres, nas
quais a vacinao no mais praticada. Surtos da
ND so noticados esporadicamente no Brasil,
principalmente em criaes domsticas de fundo
de quintal ou em galinhas criadas de forma semiintensiva e no comercial.
A ND endmica em muitos pases, mas
muito difcil de se avaliar a sua real prevalncia no mundo. Em alguns pases onde a doena
ocorre, no h dados sobre a sua distribuio e
abrangncia, nem se ocorre somente em criaes
domsticas ou tambm em criaes comerciais.
Mesmo em aves com nalidade comercial, a estimativa da distribuio geogrca do NDV tornase confusa devido ao uso de vacinas vivas, contendo cepas virais consideradas virulentas em
outros pases. Mesmo em pases livres da doena
por muito tempo, o monitoramento sistemtico
ocasionalmente revela infeces com sinais leves,
provocadas por amostras no-virulentas, propagadas presumivelmente por aves silvestres. A
forma altamente patognica da ND representa
um problema srio para a avicultura comercial,
tanto por ser considerada uma doena enzotica
em vrios pases, quanto por ser a causa de epizootias freqentes na frica, sia, Amrica Central e em regies da Amrica do Sul. Na Europa,
a ocorrncia da doena parece ser espordica, a
despeito dos programas de vacinao.
Aves domsticas e silvestres so susceptveis ao NDV, as galinhas (Gallus gallus) esto entre as mais susceptveis e as aves aquticas esto
entre as menos suscetveis. O NDV j foi isolado em mais de 241 espcies, abrangendo 27 das
50 ordens de aves existentes. Algumas espcies
Captulo 26
685
Paramyxoviridae
8.8.4 Diagnstico
O carter estratgico do NDV, determinado
pela OIE, requer um diagnstico rpido e conclusivo da enfermidade. Em casos suspeitos e visando reduzir o risco de disseminao e difuso do
vrus, recomenda-se a realizao de necropsia por
um prossional no prprio local, com colheita e
remessa de material para o laboratrio ocial. O
material a ser enviado deve incluir fezes, suabes
traqueais ou cloacais e tecidos de animais necropsiados, devendo-se eleger aqueles com alteraes
aparentes. Esse material deve ser conservado refrigerado se o processamento for realizado dentro de 48 horas, ou congelado se a realizao dos
testes for demorar mais.
O diagnstico denitivo da infeco obtido
pelo isolamento e identicao do vrus em ovos
embrionados a partir de suabes traqueais ou cloacais, ou de macerados de rgos. Ovos SPF com
686
Captulo 26
9 Bibliografia consultada
ALEXANDER, D.J. Newcastle disease and other avian
paramyxoviruses. In: SAIF, Y.M. et al. Disease of Poultry. 11.ed.
Ames, IA: Iowa State University Press, 2003. p.63-95.
687
Paramyxoviridae
Clinical
RHABDOVIRIDAE
Luis L. Rodriguez1, Paulo Michel Roehe,
Helena Batista & Gael Kurath1
27
1 Introduo
691
2 Classificao e taxonomia
691
692
4 O ciclo replicativo
693
695
695
696
699
699
700
700
700
701
702
703
704
705
708
709
711
711
713
713
714
715
716
717
717
6 Bibliografia consultada
718
Seo geral da famlia e VSV (LLR); raiva (PMR e HB); rabdovrus de peixes (GK). Traduo da parte geral, VSV
e rabdovrus de peixes: Renata Dezengrini.
1
1 Introduo
A famlia Rhabdoviridae (ordem Mononegavirales) abriga vrus que infectam uma grande variedade de espcies, incluindo artrpodes, plantas e vertebrados. Dentre os vrus de vertebrados,
existem rabdovrus que infectam mamferos,
aves e peixes. A famlia possui alguns vrus de
grande importncia para a sade humana e animal. O vrus da raiva (RabV) causa uma das doenas mais temidas e fatais de todos os tempos, e
o vrus da estomatite vesicular (VSV) est associado com surtos de repercusso econmica importante em eqinos e em animais de produo.
Os primeiros relatos da raiva ocorreram h mais
de 2.700 anos, quando j era descrita como uma
doena grave, caracterizada por hipersalivao,
alteraes no comportamento e morte inevitvel.
A raiva tem tambm um impacto importante em
medicina veterinria, tanto pela sua ocorrncia
urbana em ces, como pela sua ocorrncia em
espcies silvestres, como o mo-pelada (Procyon
cancryvorus), esquilos, candeos silvestres, morcegos, mangostas (Cynictis penicillata), os quais
representam um risco iminente de infeco para
humanos. Os morcegos hematfagos, como o
Desmodus rotundus, tambm carreiam o vrus da
raiva, podendo transmiti-lo a animais domsticos e, ocasionalmente, para humanos. Em certas
regies, relativamente freqente a ocorrncia
de casos espordicos ou de surtos de propores
variveis em animais de criao, principalmente
em bovinos. Outra doena relevante em medicina veterinria a estomatite vesicular (VS), que
afeta os bovinos, sunos e eqinos. Em bovinos
e sunos, a VS apresenta caractersticas clnicas
muito semelhantes febre aftosa (FMD). Portanto, os surtos de VS resultam em signicativas
perdas econmicas conseqentes da interdio e
quarentena, at que se proceda ao diagnstico diferencial para descartar a FMD.
Devido sua ampla distribuio na natureza e capacidade de infectar vrias espcies de
mamferos, peixes e plantas, existem muitos rabdovrus com potencial patognico ainda desconhecido. Alguns rabdovrus tm sido identicados como patgenos emergentes em humanos e
2 Classificao e taxonomia
Os rabdovrus so classicados em seis gneros e dois deles contm apenas vrus de plantas
(Tabela 27.1). Como os outros membros da ordem
Mononegavirales, os rabdovrus possuem como
genoma uma molcula de RNA linear de sentido negativo, que possui pelo menos cinco genes,
Ephemerovirus
BEFV
Chandipura
Isfahan
COCV
VSAV
IN98COE
Vesiculovirus
NJ95COB
SVCV
Lyssavirus
Raiva
692
Captulo 27
Tabela 27.1. Classificao taxonmica dos membros da famlia Rhabdoviridae, com espcies hospedeiras e doenas
de importncia veterinria.
Gnero
Espcie/tipo
Hospedeiro(s)
Doena de importncia
veterinria
Vesiculovirus
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
Mamferos, peixes,
insetos
Lyssavirus
Mamferos, insetos
Ephemerovirus
Mamferos, insetos
Novirhabdovirus
Vrus da necrose
hematopoitica
(IHNV)
Peixes
Necrose hematopoitica,
septicemia hemorrgica.
Cytorhabdovirus
Vrus da necrose
amarela da alface
Plantas
Nenhuma.
Nucleorhabdovirus
Plantas
Nenhuma.
projtil. Uma membrana lipdica derivada da clula hospedeira, contendo trmeros da glicoprotena de superfcie (G), forma o envelope viral.
O genoma dos rabdovrus consiste de uma
molcula de RNA de ta simples linear de polaridade negativa, com 11.000 a 15.000 nt (Figura
27.2C). A organizao do genoma e a ordem dos
genes so muito conservadas. O genoma possui
uma pequena seqncia leader no-traduzida com
40 a 50 nt na extremidade 3, seguida por um sinal
conservado de iniciao da transcrio; e pelos
genes N, P, M, G e L. Esses genes so separados
por regies intergnicas conservadas. Prximo a
extremidade 5 existe uma seqncia trailer de 40
a 50 nt, parcialmente complementar regio 3
leader. As regies leader, trailer e as seqncias
intergnicas possuem funes importantes na regulao da transcrio e replicao viral. Alguns
rabdovrus possuem genes adicionais, como alguns vrus de plantas, que possuem um gene extra entre os genes P e M; e alguns rabdovrus de
peixes possuem genes adicionais entre duas regies do genoma, P-M e G-L. Alguns vesiculovrus
e lissavrus codicam ainda algumas protenas
no-estruturais, pequenas e bsicas, em uma segunda seqncia aberta de leitura (ORF) do gene
da protena P.
693
Rhabdoviridae
Glicoprotena (G)
Protena
matriz (M)
Ribonucleocapsdeo
(RNP)
Fosfoprotena (P)
RNA
Polimerase (L)
Nucleoprotena (N)
trailer
leader
kb
0
10
11
Figura 27.2. Estrutura dos vrions e do genoma dos membros da famlia Rhabdoviridae. A) Fotografia de microscopia
eletrnica do vrus da estomatite vesicular, VSV; B) Estrutura de uma partcula vrica e seus componentes; C)
Estrutura e organizao do genoma.
A infectividade dos rabdovrus razoavelmente estvel sob condies ambientais, especialmente sob pH alcalino. No entanto, os vrions
so termolbeis e sensveis radiao solar e ultravioleta (UV). Na prtica, o VSV pode ser facilmente inativado por desinfetantes baseados em
detergentes.
4 O ciclo replicativo
O ciclo replicativo descrito a seguir baseiase no vrus da estomatite vesicular (VSV), o prottipo da famlia. O ciclo inicia com a interao
da glicoprotena G do envelope viral com recep-
694
Captulo 27
11
1
10
2
9
N
5
L
G
P
Ncleo
Citoplasma
Figura 27.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo do vrus da estomatite vesicular (VSV), prottipo da famlia
Rhabdoviridae. Aps a ligao aos receptores especficos (1), os vrions so internalizados por endocitose (2), que
seguida de fuso do envelope com a membrana endossomal, sob pH baixo, e da liberao do nucleocapsdeo no
citosol (3). Segue-se a transcrio individual dos genes (4) e traduo (5), resultando na produo das protenas virais
N, P, M, G e L (6). A polimerase viral (L), com a participao da protena P, realiza a sntese da molcula de RNA
complementar (7) e, a seguir, a sntese de cpias genmicas (8), que permanecem associadas com as protenas que
compem a ribonucleoprotena (RNP). Os nucleocapsdeos (RNA+protenas) recm-formados so transportados at
a membrana plasmtica (9), onde interagem com a protena M e com as caudas da glicoprotena G (10), resultando no
brotamento e egresso da prognie viral (11).
695
Rhabdoviridae
696
IN3 ALAGOAS
IN3 MINAS GERAIS
IN3 ESPINOSA
IN3 ANEGRAS
VSIV-3
Captulo 27
IN2 SCAT970
IN2 SCAT969
IN2 RANCHARIA
IN2 SALTO
5.1.1 Epidemiologia
VSIV-2
In2 PARAN
IN2 MAIPU
IN2 COCAL
Distribuio geogrfica
IN198COE
IN194GUB
IN2 MARAB
NJ88CRB
NJ89GAS
NJ95NME
VSNJV
IN 85CLB
VSIV
IN-1
Piry PMG
Raiva
100 substituies
697
Rhabdoviridae
selvagens (Sus scrofa). A infeco de animais silvestres parece ser assintomtica, no entanto, leses vesiculares pequenas tm sido descritas em
sunos selvagens. Em contraste, animais domsticos, como os bovinos (Bos taurus e Bos indicus),
eqdeos (cavalos, mulas e burros), sunos, ocasionalmente cameldeos (Lama glama), ovinos e
caprinos infectados, freqentemente apresentam
sinais clnicos. A ocorrncia de doena vesicular
em eqinos um importante achado para a sua
diferenciao de febre aftosa.
Existem evidncias consistentes de que o
VSV um arbovrus, ou seja, que transmitido
por insetos. Vrias espcies de insetos podem ser
infectados pelos VSVs, e essa infeco tem sido
detectada especialmente durante os surtos. Trs
espcies de insetos: as moscas-de-areia (Lutzomyia
ssp), as moscas-pretas (Simulium sp) e os pernilongos (Culicoides sp) so considerados vetores
biolgicos do vrus, pois so capazes de replicar
e transmitir o VSV a espcies susceptveis, tais
Hospedeiros naturais?
?
Bovinos, sunos, eqinos (sem viremia)
Hospedeiros terminais?
698
Captulo 27
Epidemiologia molecular
Os surtos de VS em reas endmicas so estacionais e ocorrem virtualmente todos os anos.
A anlise logentica dos vrus associados com
esses eventos demonstrou que vrias linhagens
virais causam surtos simultaneamente, em diferentes regies endmicas. Ao contrrio, as epizootias em reas no-endmicas so causadas
geralmente por uma nica linhagem viral, com
pouca ou nenhuma variao gentica ao longo
do surto, e cada surto , geralmente, causado
por uma linhagem diferente. Esses padres de
ocorrncia sugerem que os surtos em reas noendmicas resultam da introduo de linhagens
virais nicas a partir de reas endmicas, que se
disseminam durante o surto e se tornam posteriormente extintas.
O VSV muito varivel e a sua diversidade
gentica pode ser observada entre os isolados de
699
Rhabdoviridae
so, febre, laminite e salivao excessiva so freqentemente observadas antes da formao das
vesculas. Em vacas leiteiras, a produo de leite
pode reduzir signicativamente ou at mesmo
cessar. Em gado de corte com leses graves na
boca, a perda de peso pode atingir 140 quilos. A
mastite uma conseqncia comum da infeco,
devido reteno de leite (pela dor durante a ordenha) e por infeco bacteriana secundria. Na
maioria dos casos, h remisso das leses dentro
de sete a dez dias.
Durante um surto ocorrido no estado do Colorado, EUA, em 1982, foram estudados 13 rebanhos leiteiros, nos quais foram afetados 378 de
um total de 2.400 animais. As leses foram assim
distribudas: somente leses orais (263 animais ou
69,3%); leses somente nos tetos (87 animais ou
23%); leses orais e nos tetos (22 animais ou 5,8%)
e leses apenas nos cascos (7 animais; 1,9%).
Em humanos, a infeco pelo VSV semelhante gripe, com um perodo de incubao de
24 a 48 horas. Na maioria dos casos, h letargia,
mialgia, cefalia, fotofobia e sintomas de resfriado. A recuperao clnica ocorre dentro de uma a
duas semanas. Em reas endmicas, uma parcela
da populao rural pode apresentar anticorpos
contra o vrus sem manifestar sinais clnicos compatveis com a doena.
Alguns estudos tm identicado genes virais
determinantes de virulncia in vitro e in vivo. Por
exemplo, a protena M parece modular a resposta
imune inata em clulas infectadas e tem sido associada com o aumento da virulncia de isolados
em camundongos de laboratrio. Os sorotipos
VSNJV e VSIV apresentam diferenas importantes de virulncia; o tipo Indiana produz doena
mais grave e se dissemina com maior rapidez por
contato entre sunos, e a gG parece ser um importante determinante da virulncia.
5.1.3 Imunidade
Trs principais componentes da resposta
imune atuam na proteo contra o VSV: a imunidade no-especca ou inata (interferon e xido ntrico, por exemplo), a imunidade humoral
(anticorpos) e a imunidade celular (linfcitos citotxicos). O interferon parece desempenhar um
700
Captulo 27
PCR em tempo real. Amostras de epitlio e uido vesicular so as indicadas para o diagnstico.
Alternativamente, quando as leses vesiculares
esto ulceradas ou erosivas, pode-se coletar suabes. O meio de transporte deve conter pH neutro,
enviando-se as amostras em gelo, evitando-se
congel-las.
5.1.4 Diagnstico
O diagnstico diferencial extremamente
importante, principalmente para distinguir a VS
da febre aftosa. Os mtodos de diagnstico utilizados incluem o isolamento viral, a deteco de
antgenos por ELISA, a xao do complemento
e a imunouorescncia (IFA). Alm desses, a deteco de anticorpos por soroneutralizao (SN)
e determinao de IgM por ELISA so tambm
utilizados. A deteco de IgM em nveis altos indica infeco recente. Outros mtodos de deteco viral incluem a RT-PCR (transcrio reversa
e reao da polimerase em cadeia), alm do RT-
701
Rhabdoviridae
5.2.1 O agente
O vrus da raiva (RabV) pertence a ordem
Mononegavirales, a qual compreende todos os
vrus que possuem genoma formado por uma
nica molcula de RNA, de polaridade negativa
(ICTVdB, 2007). Dentro dessa ordem, o RabV
classicado na famlia Rhabdoviridae, no gnero
Lyssavirus (ICTVdB, 2007), juntamente com outros vrus denominados vrus relacionados
raiva, os quais apresentam semelhanas antignicas com o RabV. Posteriormente, pelo uso de
mtodos de anlise logentica, o gnero Lyssavirus foi subdividido em seis gentipos distintos, sendo o RabV classicado como gentipo 1
e prottipo do gnero. Os demais lissavrus so
classicados em outros seis gentipos distintos.
Os gentipos 5 e 6, correspondentes aos lissavrus de morcegos europeus, foram subdivididos
em subtipos. Alm desses, outros quatro novos
gentipos foram propostos, representados pelos
vrus Aravan, Khujand, Irkut e West Caucasian,
todos isolados de morcegos. Os membros do gnero Lyssavirus esto listados na Tabela 27.2. Em
702
Captulo 27
Gentipo
Nomenclatura
Distribuio geogrfica
Gentipo 1
Mundial
Gentipo 2
Lagos bat
frica
Gentipo 3
Mokola
frica
Gentipo 4
Duvenhage
frica
Gentipo 5
Europa
Gentipo 6
Europa
Gentipo 7
Austrlia
Novos gentipos
propostos
Arayan
Khujand
Irkut
West Caucasian
(Morcegos)
sia Central
703
Rhabdoviridae
704
funde-se com lisossomos, liberando a RNP no citoplasma celular e permitindo que seja iniciado o
processo de transcrio e replicao viral.
Uma vez no interior da clula, o genoma
de polaridade negativa inicialmente transcrito
e ocorre a produo de protenas. Para tanto, a
RNA polimerase viral transcreve o genoma em
um RNA lder e cinco mRNAs, todos os cinco
com cap e poli-adenilados, tal como os mRNA
celulares. A transcrio diminui sua ecincia em
cerca de 30% nas junes dos genes N-NS, NSM e M-G, resultando em um efeito cumulativo
na expresso gnica, ou seja, a expresso mais
eciente na extremidade 3 do genoma. Como
descrito anteriormente, esse processo denominado atenuao da transcrio. Os mensageiros
so traduzidos nas protenas N, P, M, G e L em
ribossomos livres no citoplasma. A protena G,
que requer glicosilao, recebe carboidratos no
retculo endoplasmtico rugoso e transportada
via complexo de Golgi para a membrana citoplsmtiica. A replicao do genoma viral ocorre somente aps a traduo dos mRNAs. A proporo
entre a quantidade de RNA e da protena N no
interior do citoplasma regula o processo de troca
do processo de transcrio para replicao. O primeiro passo na replicao a sntese de cpias de
polaridade positiva (ou antigenmica) de todo o
genoma viral. Para que estas sejam geradas, os sinais de transcrio representados por cdons de
parada e continuao de leitura so ignorados;
a RNA polimerase reconhece a extremidade 3 e
sintetiza uma cpia complementar com a extenso do genoma. Essas cpias positivas serviro
de molde para a sntese de novos genomas (de
polaridade negativa) que iro fazer parte dos novos vrions.
Durante a montagem, um complexo formado pelas protenas N, P e L promove a encapsidao dos novos genomas. A protena M envolve a
RNP; esse complexo vai para uma rea da membrana citoplasmtica (ou vesculas membranosas
internas) e M inicia o enovelamento da partcula, conferindo-lhe o formato de mola, que
caracteriza a disposio helicoidal da RNP. A seguir, as partculas ligam-se membrana celular
em regies onde foram inseridos trmeros da gG,
originando o envelope viral. Esse processo no
Captulo 27
705
Rhabdoviridae
5.2.5 Epidemiologia
O RabV est presente em todos os continentes, com exceo da Austrlia e Antrtica.
Alguns pases (Inglaterra, Irlanda, Japo e pases
escandinavos) obtiveram sucesso na erradicao
da doena. J os lissavrus de outros gentipos,
apresentam distribuio geogrca bem mais limitada (Tabela 27.2). At o presente, nas Amricas, todas as amostras do gnero Lyssavirus isoladas pertencem ao gentipo 1, que compreende a
totalidade das amostras clssicas do vrus.
O hospedeiro natural ou reservatrio natural
a espcie na qual o vrus capaz de se perpetuar sem a necessidade da sua reintroduo a partir
Ciclos da raiva
Na natureza, o RabV mantido por ciclos
ocasionalmente inter-relacionados, denominados
ciclos urbano e silvestre, areo e rural. Ciclo urbano refere-se raiva em ces e gatos domsticos; ciclo areo refere-se raiva em morcegos,
sendo os demais ciclos denominados ciclos terrestres. Ciclo rural refere-se raiva dos herbvoros, que envolve principalmente os bovinos e
eqinos, e na qual o principal vetor o morcego
hematfago. O termo silvestre refere-se raiva
associada a espcies silvestres, e pode englobar o
ciclo areo. O ciclo urbano tem sido controlado
por meio de vacinao de animais de companhia
de vrias regies do Brasil. Porm os ciclos silvestre e rural ocorrem em diversas regies. No ciclo
silvestre, o vrus pode utilizar diferentes espcies
como reservatrio, que podem variar em funo
da fauna da regio geogrca considerada. Assim, na Europa, o principal reservatrio natural
do vrus em seu ciclo silvestre a raposa-vermelha (Vulpes vulpes); na Amrica do Norte, so as
raposas-vermelhas, os gambs (Mephitis mephitis)
e guaxinins (Procyon lotor), que so tambm hospedeiros naturais do vrus. Na Amrica Latina,
os morcegos hematfagos Desmodus rotundus so
os principais hospedeiros silvestres do vrus (Tabela 27.3). Em funo de seus hbitos alimentares, os morcegos hematfagos so os principais
transmissores da infeco a bovinos. No obstante, na indisponibilidade de bovinos para sua alimentao, os morcegos D. rotundus podem atacar
outras espcies na busca de alimento, inclusive
humanos. Em um episdio, morcegos hematfagos foram responsveis por uma epidemia de
raiva humana, entre pessoas com o costume de
dormir ao ar livre em redes, tornando-se presas
706
Captulo 27
Reservatrios
Europa
Raposa vermelha
(Vulpes vulpes)
Estados Unidos
Amrica Latina
fceis para morcegos hematfagos. As duas outras espcies de morcegos hematfagos conhecidas, Diphylla ecaudata e Diaemus youngi, alimentam-se geralmente de sangue de aves, embora D.
ecaudata j tenha sido observado alimentando-se
de sangue humano. Ambas as espcies podem ser
contaminadas pelo RabV, mas a sua participao
na manuteno da infeco no ciclo silvestre da
raiva no signicativa.
A epidemiologia da raiva vem sendo examinada, e animais soropositivos de vrias espcies,
sem a presena de sinais clnicos, tm sido identicados. Esses estudos tm includo mangostas,
morcegos hematfagos e insetvoros, guaxinins,
gambs, raposas, hienas, chacais e ces selvagens
e domsticos na Etipia.
Slvio Torres e Queiroz de Lima (1936) e Pawan (1936) j haviam registrado a possibilidade
de morcegos hematfagos tornarem-se portadores da infeco; porm, em funo dos mtodos
disponveis poca, as evidncias apresentadas
deixaram margem a dvidas. No obstante, mais
recentemente, na Etipia, isolou-se repetidamente vrus infeccioso de ces assintomticos, assim
como na Nigria, adicionando ainda mais evidncias possibilidade de ocorrncia de infeces
no-fatais. O RNA viral foi detectado em hienas
na frica, sugerindo a ocorrncia de amostras de
baixa patogenicidade nesta espcie. Assim, apesar de ainda no estar completamente esclarecida a interao do vrus com seus hospedeiros,
em algumas espcies animais, o vrus capaz de
perpetuar-se, seja por causar infeces no-fatais,
seja por manter-se no hospedeiro tempo sucien-
707
Rhabdoviridae
Em 2004 e 2005, os casos noticados de raiva humana transmitida por morcegos hematfagos
apresentaram um incremento importante em decorrncia de surtos ocorridos na regio Amaznica, e esses morcegos tornaram-se os principais
transmissores da infeco a humanos. Como conseqncia, em 2005, observou-se o maior nmero
de casos de raiva humana registrados no decnio.
Dos 80 casos noticados no trinio 2004-2006,
morcegos hematfagos foram implicados em 66
(82,5%) ao passo que ces estiveram envolvidos
somente em 12 episdios (15%).
Tabela 27.4. Casos notificados de raiva em animais no Brasil no decnio 1997-2006 (no computados os registros de
raiva bovina)
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2005
2006
Caninos
945
1746
970
761
657
617
289
104
93
97
Gatos
65
165
93
69
27
67
21
10
10
Morcegos
hematfagos
72
12
11
19
60
50
Morcegos
no-hemat.
20
27
30
136
25
Morcegos
no-ident.
55
94
38
Animais
Silvestres
36
36
37
61
144
89
155
124
251
208
Tabela 27.5. Casos de raiva em humanos e espcie de animal transmissor no Brasil (1997-2006)
Espcie
transmissora
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2005
2006
TOTAL
Co
17
19
21
24
18
14
131
Gato
Morcegos
hematfagos
22
42
72
Morcegos nohematfagos
Guaxinim
(Procyon sp.)
Macaco
Bovino
708
Captulo 27
ovinos e caprinos representam uma parcela signicativa dos casos de raiva em herbvoros.
O perodo de incubao da raiva muito varivel aps infeces naturais. Muitos fatores podem estar associados a um perodo de incubao
mais ou menos prolongado, tais como a amostra
de vrus envolvida, o local da mordedura (quanto mais prximo do sistema nervoso central, mais
rpido o transporte do vrus), a carga viral inoculada, a suscetibilidade da espcie exposta e imunidade do animal agredido. Geralmente, o perodo de incubao de 14 dias a 12 semanas, porm
perodos superiores a um ano j foram relatados.
No hospedeiro infectado, o vrus pode replicar nas clulas musculares, prximas ao local da
inoculao, antes de invadir o sistema nervoso
central (SNC). Esta multiplicao importante
para a posterior invaso do SNC, porm, ocasionalmente, pode ocorrer o transporte direto do vrus sem a replicao prvia no local de entrada.
O vrus pode utilizar uma combinao de sistemas para atingir o SNC, envolvendo o uxo axoplsmico retrgrado (provavelmente utilizando
o sistema motor celular envolvendo a dinena,
passagem clula-clula via junes sinpticas e
passagem direta do vrus atravs de conexes intercelulares). No SNC, o vrus replica e se dissemina via nervos perifricos, de forma centrfuga,
para os tecidos no-neurais do organismo. An-
Tabela 27.6. Casos de raiva dos herbvoros notificados no Brasil, por regio, no decnio 1997-2006.
Regies
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2005
2006
TOTAL
Norte
68
74
61
2676
235
346
662
185
138
nd*
4445
Nordeste
406
269
374
302
198
226
226
257
309
nd
2567
Sul
48
81
52
77
60
193
140
147
158
nd
956
Sudeste
2335
2360
2666
2835
1324
1201
863
512
500
nd
14596
Nordeste
406
269
374
302
198
226
226
257
309
nd
2567
Centro-Oeste
94
240
254
409
697
824
761
725
806
nd
4810
2951
3024
3407
6299
2514
2790
2652
1826
1911
961**
27374
TOTAL
709
Rhabdoviridae
5.2.7 Diagnstico
O diagnstico da raiva no deve ser baseado apenas em observaes clnicas, especialmente porque outras enfermidades podem originar
sinais semelhantes. Paralelamente ao exame
clnico, fundamental a anlise da situao epidemiolgica, a histria da infeco na regio, a
presena de possveis vetores contaminados e a
possibilidade da introduo de animais oriundos
de reas endmicas. A associao desses dados
permitir um diagnstico presuntivo, que deve
ser conrmado por testes laboratoriais.
710
Diagnstico virolgico
O tecido de eleio para o diagnstico de
raiva o encfalo dos animais suspeitos. Em
eqinos, alm do encfalo, recomenda-se enviar
ao laboratrio fragmentos de medula. As regies
do encfalo, preferencialmente submetidas para
diagnstico, incluem pores do cerebelo, crtex e circunvolues do hipocampo (ou cornos
de Amon). Animais pequenos (p. ex.: morcegos,
gambs, sagis) devem ser remetidos inteiros ao
laboratrio. A cabea do animal suspeito tambm
pode ser remetida ao laboratrio. As amostras
devero ser remetidas sob refrigerao. Em locais
em que no h condies de manter o espcime
refrigerado, recomenda-se a imerso de fragmentos de tecido em Lquido de Valle (glicerina 50%
tamponada com tampo fosfato: KH2PO4 1,80 g;
K2H2PO4 2,30 g; glicerina neutra, 50%; H2O q.s.p.
1000 mL; pH 7,4-7,8). Nesse lquido, o vrus pode
ser detectado se mantido por alguns dias.
O diagnstico de raiva na primeira metade
do sculo 20 baseou-se fundamentalmente na
pesquisa das incluses ou corpsculos de Negri
no encfalo de animais infectados. Essa prova
apresenta sensibilidade e especicidade baixas,
pois as incluses so detectadas em mdia em 60
a 70% (amplitude de 40 a 90%) dos casos positivos. A variao na sensibilidade para a deteco
de incluses tambm ocorre em relao espcie,
como para os eqinos, em que a eccia da deteco de corpsculos de Negri menor.
Em 1958, a tcnica de imunouorescncia
direta (IFD) foi adaptada para a deteco de antgenos do RabV. A IFD realizada em impresses
de tecido fresco sobre lminas de microscopia e
permite a obteno do resultado em poucas horas. A IFD chega a atingir sensibilidade e especicidade prximas a 100% em relao inoculao
em camundongos. Essas qualidades, aliadas
rapidez na obteno dos resultados, tornaram a
IFD a tcnica de eleio para o diagnstico rpido de raiva. Para assegurar sua preciso, a IFD
acompanhada por um teste de conrmao biolgica, no qual o material suspeito inoculado
por via intracerebral em camundongos lactentes.
Os camundongos inoculados desenvolvem sinais
neurolgicos e morrem entre 8 e 23 dias aps a
Captulo 27
Diagnstico sorolgico
O diagnstico sorolgico, ou seja, baseado
na identicao de anticorpos especcos antiRabV, pode ser utilizado com vrios objetivos.
Freqentemente tem sido empregado para avaliar a capacidade imunognica de vacinas anti-rbicas, bem como para avaliar o status sorolgico
de populaes submetidas vacinao. A elevao dos ttulos de anticorpos no lquido cefalorraquidiano considerada diagnstica em casos
suspeitos e muito utilizada para o diagnstico
intra vitam em humanos. Testes sorolgicos igualmente tm sido utilizados para buscar evidncias
de circulao do vrus em populaes no-vacinadas. Assim, entre muitas aplicaes, os testes
sorolgicos tm tambm contribudo para que
muitos dos conceitos sobre a epidemiologia da
raiva sejam reavaliados.
A tcnica de eleio para a deteco de anticorpos contra o RabV a soro-neutralizao
(SN). Nessa prova, uma quantidade determinada
de vrus homogeneizada com diluies do soro
a ser testado. Se este possuir anticorpos espec-
711
Rhabdoviridae
peitos de raiva canina em um nmero equivalente a 0,2% da populao canina total do municpio,
permitindo, assim, uma avaliao da manuteno
do status de rea indene.
A raiva dos herbvoros controlada pela
vacinao de animais em reas endmicas e pelo
controle das populaes de morcegos hematfagos. Para a vacinao, utiliza-se vacinas inativadas, que representam atualmente 95% das vacinas
para bovinos comercializadas no Brasil (estimativa de mais de 100 milhes de doses/ano).
Para o controle das populaes de morcegos
hematfagos, so geralmente empregados mtodos baseados na aplicao tpica de uma pasta
contendo uma substncia anticoagulante, em
morcegos capturados e, posteriormente, liberados para retornar a sua colnia. Como morcegos
tm o hbito de higienizao pela lambedura mtua, o anticoagulante aplicado pode levar eliminao de vrios indivduos da mesma colnia.
Outros mtodos incluem a aplicao de pastas
com anticoagulante em bovinos, em feridas de
mordeduras de morcegos, por via intramuscular
ou intraruminal, porm no so rotineiramente
utilizados. O controle da raiva em quirpteros
em regies sinantrpicas tem se tornado alvo da
preocupao dos rgos de vigilncia sanitria.
As estratgias propostas para o combate raiva
em quirpteros urbanos foram recentemente discutidas no II Seminrio de Manejo de Quirpteros em reas Urbanas, em So Paulo. Dentre as
vrias propostas elaboradas, destacam-se as seguintes, que pretendem promover: a) a interao
entre rgos de vigilncia e de controle ambiental; b) pesquisa em quirpteros; c) capacitao
para o trabalho com morcegos; d) formao de
uma rede de laboratrios regionais habilitados
prtica com quirpteros; e) incrementar estudos
sobre a quiropterofauna; e f) conscientizao da
populao sobre o problema.
5.2.9 Tratamento
Em humanos
O tratamento da raiva apresenta uma peculiaridade: a vacinao, na maioria dos casos, no
aplicada preventivamente (com exceo de prossionais de risco) e sim terapeuticamente. Isso
712
Captulo 27
possvel em funo da lenta evoluo da infeco, ou seja, pelo perodo de incubao prolongado, que permite que o hospedeiro desenvolva
uma resposta imune protetora quando vacinado
aps a exposio ao RabV. Conforme a gravidade
da leso e o histrico do animal agressor, diferentes medidas devem ser tomadas com o intuito de
que a pessoa exposta no desenvolva a doena
(Tabela 27.7).
A Organizao Mundial de Sade recomenda que o tratamento mais ecaz contra a raiva
lavar e enxaguar a ferida ou ponto de contato
com bastante gua e sabo e, aps, colocar etanol,
tintura ou soluo aquosa de iodo sobre o ferimento. A vacina contra a raiva deve ser aplicada em caso de exposies de nvel 2 ou 3. Soro
anti-rbico (imunoglobulina anti-rbica) deve ser
administrado a todos aqueles que sofreram expo-
Tabela 27.7. Indicaes para o tratamento anti-rbico no homem. Recomendaes da Organizao Mundial da Sade
Natureza da
exposio
Sem leso, contato
indireto
Tratamento recomendado
(alm do tratamento local)
No momento
da agresso
Durante um perodo de
10 dias de observao
Agressivo
____
Nenhum.
Agressivo
____
Nenhum.
Sadio
Sinais clnicos
de raiva
Sadio
Agressivo, fugido,
ou no se conhece
____
a) Sadio
Sinais clnicos de
raiva ou diagnstico
de raiva comprovado
b) Sinais clnicos de
raiva
Sadio
____
d) Silvestre
____
Lambedura
a) sem leso cutnea
b) com pele esfolada ou
arranhada, ou com
mucosas intactas
Mordeduras
a) superficiais
b) graves (mltiplas ou
na face, cabea,
pescoo ou dedo)
A) Sadio
b) Sinais clnicos de
raiva
d) Silvestre
Sinais clnicos de
raiva ou diagnstico
de raiva comprovado
713
Rhabdoviridae
de tratamento ps-exposio, porm desenvolvendo uma resposta imune especca. O prognstico, neste caso, reservado, pois somente um
dos demais cinco pacientes que se recuperaram
da raiva sem tratamento ps-exposio no apresentou seqelas.
714
5.3.2 Epidemiologia
Distribuio geogrfica e espectro de
hospedeiros
Como grupo, os rabdovrus de peixes possuem uma ampla distribuio geogrca e uma
ampla gama de hospedeiros (Tabela 27.8). A infeco por esses vrus descrita na maioria dos
pases em que a criao de peixes realizada em
larga escala, incluindo a sia, Europa, Amrica
do Norte, Rssia e Austrlia. Atualmente existem
poucas evidncias da presena dos rabdovrus em
peixes nas Amricas Central e do Sul e na frica.
No entanto, o desenvolvimento das criaes de
peixes nessas regies provavelmente ser acompanhado do surgimento ou relato desses agentes.
Historicamente, a infeco pelo IHNV era limitada aos salmondeos, incluindo espcies de truta
e salmo do pacco, encontradas na costa oeste
da Amrica do Norte. Porm, esse vrus foi introduzido acidentalmente no Japo nos anos 60
Captulo 27
Vrus
Local
Hospedeiros
IHNV
VHSV
HIRRV
Japo
Plecoglossidae (ayus)
Pleuronectidae
Bothidae (flounders)
Localdo
Vrus e vrus Amrica
SVCV
emergentes Norte, Europa
semelhantes e sia
aos vesiculovrus
Hospedeiros
Cyprinidae
(carpas)
Esocidae (lcios)
Salmonidae (trutas)
Percidae (perches)
715
Rhabdoviridae
Epidemiologia molecular
Variaes entre isolados dos rabdovrus de
peixes tm sido caracterizadas com base no per-
716
5.3.4 Imunidade
A resposta imunolgica dos peixes contra
as infeces por rabdovrus envolve mecanismos
inespeccos e, subseqentemente, a resposta
imune adaptiva, com o desenvolvimento de anticorpos neutralizantes. Existem indicaes ainda
do envolvimento de resposta imune celular, no
entanto, a funo potencial de linfcitos citotxicos no conhecida. Isso se deve principalmente
Captulo 27
falta de anticorpos marcadores e linhagens celulares necessrios para a investigao da imunidade celular. Aps a exposio aos rabdovrus, a
primeira linha de defesa do organismo a imunidade inata, envolvendo o interferon (IFN) e genes induzidos pelo IFN, anlogos aos conhecidos
em mamferos. Sabe-se, desde os anos 1970, que a
infeco pelo VHSV em peixes estimula a sntese
de IFN, que apresenta um pico trs dias aps a
infeco, e esse IFN possui uma ampla atividade
antiviral. Os peixes possuem, ainda, outros componentes da imunidade inata, incluindo o complemento, receptores toll e genes induzidos por
vrus que so especcos de peixes. Esses genes
so induzidos rapidamente aps a infeco viral
ou vacinao. A secreo mucosa de peixes possui atividade antiviral natural, que pode ser evidenciada previamente induo de anticorpos.
O desenvolvimento de nveis detectveis de
anticorpos sricos e de mucosas ocorre aps trs
a dez semanas, e o pico ocorre em alguns meses.
O tempo para o desenvolvimento inuenciado
pela temperatura, com o desenvolvimento mais
rpido em temperaturas mais altas. Os peixes
geralmente possuem um subtipo principal de
imunoglobulina e o soro contm mais anticorpos
ligantes do que neutralizantes. A neutralizao
viral necessita de componentes do sistema complemento; anticorpos especcos para a glicoprotena G demonstraram ser necessrios e sucientes para uma imunidade protetora.
A importncia dos anticorpos neutralizantes
para a imunidade contra os rabdovrus de peixes
tem sido demonstrada pela transferncia passiva
de soro de peixes convalescentes para peixes susceptveis e soronegativos, conferindo imunidade
frente ao desao com doses letais de vrus. Peixes
sobreviventes de epidemias de infeces por rhabdovrus desenvolvem imunidade protetora contra a exposio subseqente, possuindo ttulos de
anticorpos especcos que declinam lentamente
com o tempo. A temperatura ambiental possui
funo importante na interao entre os rabdovrus de peixes e os hospedeiros. A ocorrncia
de epidemias dessas infeces em temperaturas
baixas se deve, em parte, supresso da resposta
imune, enquanto o contrrio acontece em temperaturas mais elevadas, nas quais o sistema imune
717
Rhabdoviridae
5.3.5 Diagnstico
O diagnstico das infeces pelos rabdovrus de peixes deve iniciar com a coleta de amostras clnicas para os exames virolgicos de rotina.
Os tecidos para a coleta dependem do tamanho
do peixe: para alevinos e peixes pequenos, coletase todo o animal, enquanto para peixes adultos,
coleta-se os rins, bao e uido reprodutivo, principalmente. Pode-se fazer um pool de amostras de
at cinco peixes ou, ainda, examinar-se amostras
individuais. Essas amostras devem ser transportadas a 4C em gelo, no-congeladas, e devem
ser processadas em 48 a 72 horas. Diluies de
homogeneizados de tecidos, smen ou uido
ovariano so inoculadas em monocamadas de
linhagens celulares susceptveis, e o vrus detectado pelo efeito citoptico caracterstico aps
dois a cinco dias, podendo levar duas semanas. O
IHNV, o VHSV e o HIRRV so incubados a 15C,
e o SVCV incubado entre 22 e 25C.
O efeito citoptico caracterstico de cada
um dos vrus e resulta na formao de agregados
em forma de cachos de uva por clulas arredondadas, formao de placas e, eventualmente, a
destruio da monocamada. Aps a deteco do
efeito citoptico, a identicao do agente pode
ser realizada por neutralizao com soro policlonal ou monoclonal especco. Esse mtodo
convel, sensvel e preciso, porm demorado,
necessitando de duas a oito semanas para o diagnstico nal. Para a identicao rpida, mtodos alternativos, como a IFA, PCR ou RT-PCR,
tm sido utilizados. Outros mtodos de deteco
e identicao dos rhabdovrus incluem testes
sorolgicos, como ELISA, immunoblots, imunohistoqumica (IHQ) e RT-PCR, em tecidos includos em parana.
Para o IHNV, VHSV e SVCV, o exame de
vrios isolados por mtodos sorolgicos tem demonstrado que cada espcie constituda por um
sorotipo nico, portanto, anticorpos policlonais
podem detectar todos os isolados na maioria dos
mtodos. A deteco de anticorpos especcos no
soro tambm pode ser til como um indicativo de
exposio prvia ao vrus. Tcnicas para deteco
718
Atualmente no existe nenhuma vacina comercial para uso em larga escala na preveno da
infeco pelos rabdovrus de peixes. No entanto,
o desenvolvimento de vacinas de DNA tem se
demonstrado rpido e promissor. Vacinas tradicionais atenuadas ou inativadas tm sido testadas por dcadas para esses vrus. Vacinas ecazes foram desenvolvidas, porm o seu uso foi
limitado pelo custo, eccia inconsistente ou pela
incerteza quanto segurana.
Com a aplicao da biologia molecular, vacinas de subunidades proticas e de peptdeos
foram desenvolvidas, mas a eccia foi inconsistente, impedindo a comercializao em larga
escala. Em 1995, a primeira descrio de uma
vacina de DNA, expressando a glicoprotena G
do IHNV, abriu novas perspectivas para a vacinologia de vrus de peixes. Desde ento, vacinas
de DNA contra o IHNV, o VHSV e o HIRRV tm
demonstrado ser excepcionalmente ecazes, garantindo proteo de 80 a 100% dos peixes contra
o desao com doses letais sob vrias condies
ambientais. Essas vacinas consistem de plasmdeos, molculas simples de DNA circular, que
contm somente um gene viral, portanto, so seguras e estveis, alm de ecazes. Uma vacina de
DNA contra o IHNV foi licenciada, em 2005, no
Canad, e outros pases devem liberar o comrcio
medida que esta vacina encontre maior aceitao. Limitaes atuais aplicao dessas vacinas
na aqicultura so os requerimentos regulatrios
de licenciamento e a necessidade do desenvolvimento de mtodos mais ecientes de introduo
do DNA nos animais. Alm das vacinas de DNA,
tem ressurgido o interesse em melhoria das vacinas inativadas.
6 Bibliografia consultada
AFS. Suggested procedures for the detection an identication
of certain nsh and shellsh pathogens. Alpharetta, GA: Fish
Health Section, American Fisheries Society, 2005.
AHNE, W. et al. Spring viremia of carp (SVC). Diseases of
Aquatic Organisms, v.52, p.261-272, 2002.
AMENGUAL, B. et al. Evolution of european bat lyssavirus. The
Journal of General Virology, v.78, p.2319-2328, 1997.
BAER, G.M. (ed). The natural history of rabies. 2. ed. Boca Raton,
FL: CRC Press, 1991. 620p.
Captulo 27
Rhabdoviridae
719
ORTHOMYXOVIRIDAE
Eduardo Furtado Flores, Luciane T. Lovato,
Mariana S e Silva, Renata Dezengrini & Diego G. Diel
28
1 Introduo
723
2 Classificao
724
725
725
3.2 O envelope
3.2.1 O genoma
3.3 Os nucleocapdeos
3.3.1 O genoma
725
725
727
727
4 Replicao
4.1 Adsoro e penetrao
4.2 Transcrio
4.3 Replicao do genoma
4.4 Morfognese e egresso
728
729
729
731
731
733
735
735
735
736
737
737
738
738
739
739
740
741
741
742
742
742
743
744
744
745
746
748
749
750
751
751
752
752
7 Bibliografia consultada
753
1 Introduo
A famlia Orthomyxoviridae abriga importantes patgenos humanos e animais, associados
essencialmente com infeces respiratrias. A
denominao da famlia deriva do latim e reete uma importante caracterstica biolgica desses
vrus, pois myxo signica muco, e ortho signica
verdadeiro. Ou seja, so os verdadeiros vrus do
muco, em uma referncia sua propriedade de
penetrar atravs do muco e infectar clulas do
epitlio respiratrio. Essa denominao foi utilizada para diferenci-los de outra famlia de vrus
associados com infeces respiratrias, a Paramyxoviridae. Essas famlias compartilham algumas propriedades biolgicas, mas so diferentes
do ponto de vista estrutural e gentico.
Os ortomixovrus causam as infeces respiratrias de pessoas e animais conhecidas como
gripe ou inuenza. Assim, so conhecidos como
vrus da inuenza ou vrus da gripe. A inuenza
a principal doena respiratria humana e um
dos principais problemas de sade pblica no
mundo inteiro, alm de ser uma importante causa
de perdas econmicas em animais de produo.
Historicamente os vrus da inuenza tm sido
envolvidos em epidemias de grandes propores
que ceifaram a vida de milhes de pessoas. Pela
sua constante evoluo gentica e antignica, esses vrus so considerados uma das principais
ameaas sade pblica mundial.
Os vrions dos ortomixovrus so grandes,
pleomrcos, com envelope e contm sete ou oito
molculas de RNA de polaridade negativa como
genoma. A natureza segmentada do genoma proporciona condies para a ocorrncia de recombinaes do tipo ressortimento. Nesses eventos,
ocorre a redistribuio de segmentos genmicos
entre duas cepas virais originando outro vrus,
com gentipo e fentipo mistos. Esse mecanismo
gentico permite aos vrus da inuenza evoluir
rapidamente, e tem sido responsabilizado pelo
surgimento de cepas altamente virulentas associadas com doena severa e alta mortalidade,
principalmente em humanos.
Outra caracterstica marcante dos vrus da
inuenza a alta variabilidade antignica das glicoprotenas de superfcie. Essa variabilidade per-
724
terespcies, no entanto, parece ser tnue e temporria, e os vrus podem, ocasionalmente, evoluir e
se tornar capazes de cruzar a barreira de espcies
e infectar outros hospedeiros. Esses exemplos
ilustram a contnua evoluo desses agentes, o
que torna a sua biologia e epidemiologia fascinantes, ao mesmo tempo em que impe barreiras
enormes para o seu controle.
Este captulo abordar as caractersticas gerais da famlia e os vrus de interesse veterinrio. Grande parte dos conhecimentos adquiridos
sobre essa famlia foi obtida de estudos com os
vrus da inuenza A humana. Por isso, a parte
geral deste captulo utilizar informaes obtidas
a partir desses estudos. Ao nal do captulo, ser
abordada, resumidamente, a infeco pelo vrus
H5N1, que adquiriu virulncia mesmo para as
aves e, ocasionalmente, transmitido para pessoas, quando causa doena severa e freqentemente fatal. A possibilidade da disseminao desse
vrus na populao humana representa um risco
real para a sade pblica mundial.
2 Classificao
De acordo com o ICTV (Comit Internacional para a Taxonomia de Vrus), a famlia Orthomyxoviridae dividida em quatro gneros:
Inuenza A: abriga vrus que infectam
uma variedade de espcies de aves, de mamferos e humanos. So os principais componentes
desta famlia, pela sua distribuio e importncia
sanitria. Possuem oito segmentos genmicos e
duas glicoprotenas principais de superfcie: HA
(hemaglutinina) e NA (neuraminidase). Essas
glicoprotenas apresentam uma notvel variabilidade antignica;
Inuenza B: vrus que infectam apenas
humanos. Tambm possuem oito segmentos genmicos e duas glicoprotenas principais (HA e
NA). Essas glicoprotenas, no entanto, apresentam pouca variabilidade antignica quando comparadas com o gnero anterior;
Inuenza C: abriga vrus que tradicionalmente s eram identicados em humanos, porm
a infeco natural j foi demonstrada tambm em
sunos. Esses vrus raramente esto associados
com doena nos seus hospedeiros. Possuem sete
Captulo 28
Orthomyxoviridae
3.2 O envelope
O envelope lipdico apresenta aproximadamente 500 projees (espculas) de 10 a 14 nm,
formadas pelas glicoprotenas HA e NA. As projees so formadas por homotrmeros da HA e
homotetrmeros da NA, na proporo de 4:1 ou
5:1. As projees formadas pela HA so mais longas do que as formadas pela NA, que apresentam
725
726
Captulo 28
727
Orthomyxoviridae
Essa protena est presente em arranjos tetramricos que ultrapassam toda a espessura da
membrana, formando uma espcie de canal que
permite a comunicao entre os compartimentos
interno e externo (Figura 28.2). De fato, a M2 funciona como um canal de ons que possui um papel importante em duas etapas distintas do ciclo,
durante a penetrao e, posteriormente, durante a maturao dos vrions. A primeira funo
exercida durante a internalizao dos vrions, no
interior de endossomos acidicados. A estrutura
da M2 se abre e permite a penetrao de ons H+
para o interior dos vrions. A acidicao interna
do pH favorece a dissociao dos ribonucleocapsdeos da protena da matriz, facilitando, assim,
o desnudamento. A segunda atividade da M2
ocorre na fase nal do ciclo, durante o transporte
das glicoprotenas em vesculas do aparelho de
Golgi para a membrana plasmtica, onde ocorrer o brotamento dos nucleocapsdeos. Nessa etapa, o canal formado pela M2 (que est inserida
na membrana das vesculas) se abre e permite a
sada de ons H+ das vesculas para o citoplasma.
Assim, o pH no interior dessas vesculas se mantm alto, prevenindo a ocorrncia prematura das
alteraes conformacionais da HA.
A M1 o componente mais abundante dos
vrions, apresentando aproximadamente 3.000
cpias por vrion. A camada formada por essa
protena est intimamente associada com a face
interna do envelope e medeia as interaes entre
o envelope e os nucleocapsdeos. A M1 desempenha um papel estrutural importante, conferindo
certa rigidez estrutura dos vrions e tambm
importante durante o processo de morfognese.
3.3 Os nucleocapsdeos
No interior dos vrions, so encontrados oito
nucleocapsdeos, que se apresentam como bastes helicoidais exveis, provavelmente exionados e enrolados sobre si mesmos (ver Figura
28.1). Cada nucleocapsdeo contm um segmento
de RNA conjugado com mltiplas cpias da protena NP (uma molcula da NP para cada 20 nucleotdeos, nt). O complexo RNA + NP denominado ribonucleoprotena (RNP) e relativamente
estvel, permanecendo razoavelmente associado
durante os processos de transcrio e replicao
do genoma. Associadas s RNPs encontram-se
trs protenas menos abundantes (30-60 cpias
por vrion), que so componentes do complexo
polimerase (transcriptase/replicase). Esse complexo formado por trs protenas principais:
PB1 (polimerase bsica 1); PB2 (polimerase bsica
2) e PA (polimerase cida).
3.3.1 O genoma
O genoma dos vrus da inuenza A constitudo por oito molculas lineares de RNA de sentido negativo, numerados de 1 a 8. Os segmentos
1 a 6 codicam uma protena cada; os segmentos
7 e 8 codicam duas protenas cada. Os segmentos genmicos apresentam a mesma organizao
geral: possuem um gene na regio central, anqueado por seqncias no-codicantes altamente conservadas nas extremidades 3 (12 nt) e 5
(13 nt) (Figura 28.3). Essas seqncias so parcialmente complementares e permitem a formao
das estruturas que lembram cabos de panela (pa-
GGAACAAAGAUGA-5
13 nucleotdeos
Figura 28.3. Organizao dos segmentos de RNA que compem o genoma dos vrus da influenza A (famlia
Orthomyxoviridae).
728
Captulo 28
Tabela 28.1. Organizao do genoma e produtos codificados pelo vrus da influenza A (famlia Orthomyxoviridae).
Segmento
1
2
3
4
5
6
Protena/funo
Gene (ORF)
PB2 = 2277nt
PB1 = 2271nt
PA = 2148nt
HA = 1698nt
NP = 1494nt
NA = 1362nt
M1=756nt
?=27
M2=291nt
NS1 = 690
NS2 = 363nt
4 Replicao
Os ortomixovrus se constituem em excees entre os vrus RNA, pois a replicao do ge-
729
Orthomyxoviridae
em linhagens celulares de mamferos (p. ex.: clulas MDCK, de origem canina). A replicao em
cultivo celular, principalmente de isolados recentes, pode no produzir efeito citoptico evidente.
Assim, o vrus pode ser detectado e quanticado no sobrenadante dos cultivos (ou no lquido
amnitico dos ovos embrionados) pela tcnica de
hemaglutinao (HA); e pode ser identicado/
tipicado por inibio de hemaglutinao (HI)
com um soro tipo ou subtipo especco.
4.2 Transcrio
A transcrio dos RNA genmicos realizada pelo complexo transcriptase/replicase, que
est associado com as RNPs, e cada protena deste
complexo desempenha funes diferentes. A PB1
possui atividade endonuclease, necessria para
a subtrao de oligonucleotdeos celulares que
servem de primers para o incio da transcrio. A
PB2 possui atividade polimerase e se constitui na
replicase viral, realizando as funes de transcrio e replicao do genoma. A funo exata da
PA no conhecida, mas esta protena um componente essencial do complexo.
A transcrio se inicia logo aps a penetrao
das RNPs no ncleo, e cada segmento genmico
transcrito individualmente, originando mRNA
com cap e poliA. A transcrio precedida pela
clivagem e subtrao de segmentos de mRNAs
730
Captulo 28
Traduo
B. mRNA
AAA(n)-3
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG
8-13nt
15-22nt
Transcrio (1)
8-13nt
Cap-5---------GA
3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)
5-AGCGAAAGCAGG
GGAACAAAGAUGA-5
2
Replicao
CCUUGUUUCUACU-3
Figura 28.4. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. (A) RNA genmico (vRNA);
(B) mRNA; (C) RNA antigenmico. A transcrio para a sntese de mRNA utiliza nucleotdeos com cap subtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem dos RNA
antigenmicos, pela presena de 8-13 nt adicionais com cap e cauda poliA.
Orthomyxoviridae
731
732
Captulo 28
acaso. Assim, se oito segmentos forem incorporados em cada novo vrion, um em cada 400 vrions
conteria o conjunto completo de segmentos. Este
nmero situa-se dentro da relao entre o total
de partculas e o nmero de partculas infecciosas observada em preparaes do vrus, ou seja,
uma proporo muito grande de partculas produzidas no infecciosa, provavelmente por no
conter o conjunto completo de RNAs genmicos.
Por outro lado, evidncias indicam que pode haver algum tipo de seleo que favorece a incluso consistente de alguns segmentos genmicos,
principalmente o segmento 1. Neste caso, o empacotamento dos segmentos no seria totalmente
ao acaso. O ciclo replicativo dos ortomixovrus
est ilustrado esquematicamente na Figura 28.5.
Orthomyxoviridae
733
734
Captulo 28
Gripe Espanhola
1918
Influenza Asitica
1957
Influenza H1N1
Influenza H2N2
Influenza Hong-Kong
1968
Influenza H3N2
Nova Influenza
Pandmica
H1N1 humano
Vrus avirio
H2N2 avirio
H2N2 humano
H3N2 humano
H3 avirio
Ressortimento
Ressortimento
Ressortimento
?
Os oito segmentos
se originaram de
um vrus avirio
Novos HA e PB1
avirios + cinco
segmentos de RNA
do vrus de 1918
Oito segmentos
novos ou mais
uma derivao do
vrus de 1918
Figura 28.7. Mecanismos responsveis pelo surgimento de vrus pandmicos da influenza A em humanos. O vrus
que causou a gripe espanhola de 1918 (H1N1) era um vrus avirio que se adaptou a humanos (continha os oito
segmentos genmicos de vrus avirio). Os vrus associados com as pandemias de 1957 e 1968 foram originados pelo
ressortimento entre os vrus humanos ento circulantes (H1N1 e H2N2, respectivamente) e vrus avirios. Antecipase que cepas capazes de causar grandes epidemias podem ser originadas por qualquer destes mecanismos. O vrus
H5N1 um dos candidatos a causar uma pandemia em humanos, caso adquira a capacidade de ser transmitido entre
pessoas.
735
Orthomyxoviridae
6 Infeces de importncia em
veterinria causadas por ortomixovrus
6.1 Influenza eqina
A inuenza ou gripe eqina uma enfermidade que afeta as vias areas superiores dos
eqinos e se caracteriza pela disseminao rpida
entre animais susceptveis. A doena ocorre geralmente sob a forma de epizootia. A gripe eqina trata-se de uma das enfermidades respiratrias mais importantes dessa espcie devido aos
prejuzos econmicos causados, principalmente
em animais de competio. Por essas razes, a
6.1.1 Epidemiologia
Os EIVs se constituem nos principais agentes
de doena respiratria em eqinos em vrios pases. A enfermidade passou a ser diferenciada das
demais viroses respiratrias de eqdeos a partir
de 1956, quando o vrus A/equi/Prague/1/56
(H7N7) foi isolado, pela primeira vez, durante
uma epizootia na Europa Central. Posteriormente, em 1963, um segundo vrus foi isolado nos Estados Unidos e foi classicado como H3N8 (A/
equi/Miami/2/63). Desde ento, vrios surtos
relacionados ao EIV, principalmente ao subtipo
H3N8, tm sido descritos em cavalos, mulas e asnos em diversas regies, com exceo de alguns
pases, como Austrlia, Nova Zelndia e Islndia,
que permanecem livres da enfermidade.
As evidncias dos casos de inuenza eqina, nos ltimos 20 anos, indicam que o subtipo
H7N7 est presente na populao em nveis muito baixos ou pode at mesmo ter sido extinto. No
entanto, a maioria dos pases continua inserindo
este subtipo na formulao das vacinas, uma vez
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737
Orthomyxoviridae
6.1.3 Imunidade
Uma caracterstica importante do EIV ausncia de proteo cruzada entre os dois subtipos,
H7N7 e H3N8. Essa caracterstica torna necessria a incluso dos dois subtipos na formulao de
vacinas. A durao da imunidade protetora conferida pela vacinao de trs a quatro meses, dependendo do histrico prvio de vacinao e da
dose do desao. No entanto, mesmo animais que
tenham sido regular e recentemente vacinados
podem se infectar e excretar o vrus. As variaes
antignicas dos vrus de campo podem reduzir a
qualidade e a durabilidade da imunidade conferida pela infeco natural ou pela vacinao, pois
anticorpos cruzados neutralizam o vrus menos
ecientemente do que anticorpos contra o vrus
homlogo.
6.1.4 Diagnstico
Surtos de doena respiratria em eqinos
podem ser causados por vrios agentes infecciosos, incluindo o vrus da arterite, os herpesvrus,
rinovrus, adenovrus, alm de bactrias como
Streptococcus equi, S. zooepidemicus ou S. pneumoniae. O diagnstico presuntivo da inuenza eqina, com base nos sinais clnicos e na rpida disseminao, deve ser conrmado pelo isolamento
do vrus ou por de testes sorolgicos.
Tradicionalmente, a conrmao laboratorial de uma suspeita clnica de inuenza tem sido
realizada pelo isolamento do vrus a partir de
secrees nasais ou por testes sorolgicos. Atualmente existe uma ampla variedade de testes laboratoriais de deteco de antgenos, cido nuclico
e clulas infectadas, que permitem a obteno do
diagnstico mais rapidamente. O isolamento do
EIV realizado pela inoculao das amostras de
secreo nasal na cavidade alantide ou amnitica de ovos embrionados de galinha. O vrus pode
ser adaptado para replicar em cultivos de clulas,
incluindo de origem canina (MDCK), mas o isolamento inicial geralmente feito em ovos embionados. Nos ovos inoculados, a presena do vrus
demonstrada pela prova de hemaglutinao,
utilizando-se eritrcitos de galinha. Para a conrmao da etiologia e caracterizao do vrus isolado, realiza-se a prova de HI, utilizando-se um
soro imune especco.
Testes imunoenzimticos (ELISA) de captura tm sido utilizados no diagnstico da inuenza humana e esto sendo padronizados para a
deteco rpida de antgenos do vrus A/equi/2
em suabes nasais de animais suspeitos. A tcnica
de IFA tambm tem sido empregada para a deteco de antgenos do EIV em clulas do trato
respiratrio, obtidas por raspado nasal ou lavado traqueal. Alm desses mtodos de deteco
de antgenos, a reao em cadeia da polimerase
(PCR) tambm vem sendo utilizada para a deteco do cido nuclico viral.
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Orthomyxoviridae
sobre imunidade, transmisso, hospedeiros, relaes antignicas com os outros vrus da inuenza, formas de manuteno na natureza, entre outros. At 1975 existiam poucos relatos da doena
em outros pases alm dos Estados Unidos, mas a
partir dessa poca, vrios casos de doena clnica
e rebanhos com sorologia positiva foram descritos em diferentes pases.
6.2.2 Epidemiologia
O isolamento do vrus H1N1 (A/swine/
Iowa/15/30) e estudos sorolgicos retrospectivos em humanos sugerem que o vrus de sunos antigenicamente semelhante ao vrus de
humanos, responsvel pela pandemia de 1918.
Estudos recentes indicam que esse vrus se originou de um vrus avirio, pois todos os seus oito
segmentos genmicos so muito semelhantes aos
encontrados em vrus de aves. A dvida que permanece a de quais hospedeiros foram infectados primeiro: sunos ou humanos? Desde 1918 o
agente permanece circulante na populao suna
e responsvel por doena em rebanhos sunos
na Amrica do Norte.
O vrus circula na populao suna ao longo do ano, mas os surtos so mais freqentes no
nal do outono e inverno. O aparecimento da
doena est associado principalmente com a movimentao de animais e introduo de animais
nos rebanhos. A principal forma de transmisso
a direta, pela via nasofarngea, por contato com
secrees nasais de animais na fase febril da infeco. Em regies com alta densidade de sunos,
a disseminao aergena pode ser importante,
especialmente nas populaes sem imunidade. A
morbidade pode chegar a 100%, mas a mortalidade baixa (1% ou menos).
O H1N1 clssico o subtipo mais comumente identicado e estima-se que 25% da populao
de sunos do mundo possua sorologia positiva
para este agente. Nos Estados Unidos, 30% dos
sunos apresentam sorologia positiva para o subtipo H1N1 e, na regio Centro-Norte daquele
pas, 51% dos sunos so positivos. Na Blgica,
entre 2001 e 2003, foram identicadas matrizes
com anticorpos para dois (48%) ou trs subtipos
virais (31%) de inuenza suna. Outros subtipos
j relatados em sunos incluem o H9N2, H1N2
(derivado de vrus de aves), H1N7 (derivado de
vrus de humanos e eqinos) e H4N6. O H1N1
740
foi isolado de sunos no Japo em 1978; na Frana, em 1987 e 1988, e na Gr-Bretanha, em 1994.
O H3N1 e H1N7 foram isolados na Gr-Bretanha
em 1990. No Brasil, at o momento, no existem
casos conrmados de inuenza suna.
A infeco de sunos com o H3N2 de humanos tambm tem sido demonstrada. O vrus A/
Hong Kong/68 foi isolado de sunos no Taiwan,
logo aps seu aparecimento na populao humana.
A origem dos isolados de sunos difere entre
os continentes. O H1N1, predominante na Europa, teve origem em vrus de aves e foi introduzido
por patos selvagens na populao suna em 1979.
As diferenas entre os vrus tm implicaes prticas para a realizao do diagnstico e controle,
e, portanto, as cepas utilizadas para diagnstico
na Europa e nos Estados Unidos so diferentes.
Em geral, os vrus de inuenza de sunos
no infectam humanos. No entanto, j foram relatados alguns casos de infeco de pessoas que
trabalhavam diretamente com esses animais. J
foram descritos aproximadamente 14 episdios
de inuenza por vrus sunos em humanos, com
seis mortes por pneumonia. A maioria dos casos
foi de pessoas que se infectaram aps contato
prximo com sunos. Em 1976, durante um surto em Nova Jersey, EUA, 500 pessoas adoeceram
com o vrus H1N1, o mesmo identicado em sunos na poca. No entanto, nunca foi realmente
provado que os sunos serviram de fonte de vrus
para humanos. Anticorpos contra o SIV foram
identicados em diversos pases, em pessoas que
mantinham contato prximo com sunos, mas a
ocorrncia de doena clnica no freqente. Em
um surto em Wisconsin, EUA, em 1988, foram
identicados casos de humanos infectados e evidncias sorolgicas da transmisso de pacientes
para funcionrios da rea de sade que tiveram
em contato com as pessoas infectadas.
Como os sunos so susceptveis tanto aos
vrus avirios quanto aos vrus humanos, esto
freqentemente envolvidos na transmisso interespcies. Os vrus da inuenza aviria no replicam de forma eciente em clulas de humanos
e primatas, e os vrus de humanos no replicam
bem em clulas de aves. Entretanto, os vrus de
aves e de humanos replicam de forma eciente
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741
Orthomyxoviridae
6.2.4 Imunidade
Nveis elevados de anticorpos tm sido detectados at seis meses aps a infeco. A relao
entre a quantidade de anticorpos no soro ou nas
vias respiratrias e a resistncia infeco no
bem estabelecida, ocorrendo muitas variaes individuais dos sunos aps a exposio.
Os anticorpos maternos contra o vrus persistem por dois a quatro meses, variando de acordo com o nvel inicial. Sunos lactentes com anticorpos maternos podem se infectar e excretar o
vrus, mas a gravidade dos sinais clnicos e a taxa
de excreo viral so inversamente proporcionais
ao nvel de anticorpos maternos.
Aps a queda na taxa de anticorpos maternos, os sunos podem se infectar novamente,
eliminar o vrus e apresentar sinais clnicos da
doena.
6.2.5 Diagnstico
Surtos de doena respiratria aguda em sunos, envolvendo um nmero elevado de animais,
devem ser necessariamente investigados para
inuenza. O diagnstico denitivo requer o isolamento e identicao do vrus ou deteco de
anticorpos especcos contra o SIV.
O isolamento viral pode ser realizado a
partir de suabes, coletados do muco nasal ou do
muco da faringe. A fase ideal para a coleta dos
suabes o perodo febril, pela maior possibilidade de deteco do vrus. Os suabes devem ser
acondicionados em tubos e enviados ao laboratrio no mximo 48 horas aps a coleta, em meio
de transporte apropriado. O vrus tambm pode
ser isolado do pulmo de animais que morreram
ou foram submetidos eutansia na fase aguda
da doena.
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Captulo 28
Orthomyxoviridae
6.3.2 Epidemiologia
Os vrus da inuenza aviria que infectam
aves domsticas so, em grande parte, remotamente originrios de aves silvestres. O vrus j
foi detectado em 100 espcies, pertencentes a 26
diferentes famlias e pelo menos 12 ordens. As
aves silvestres aquticas classicadas na famlia
Anatidae, ordem Anseriformes, so citadas como os
principais reservatrios do vrus na natureza. A
transmisso provavelmente ocorra pela transferncia do vrus presente em fezes contaminadas
das aves silvestres para aves domsticas, mecanicamente, atravs de outros animais, humanos,
alimentos ou gua. Outras fontes de infeco so
sunos infectados, aves de estimao ou aves domsticas endemicamente infectadas.
O vrus excretado em grandes quantidades nas fezes e nas secrees respiratrias das
aves infectadas durante o perodo clnico e por
um tempo varivel aps a recuperao. Em galinhas, este perodo pode se estender por at 36
dias aps a infeco.
A transmisso horizontal a forma mais comum de transmisso, ocorrendo de aves infectadas para aves susceptveis atravs de fmites ou
por via aergena. O contato com equipamentos,
roupas ou sapatos contaminados com fezes tambm so importantes fontes de infeco. A transmisso por via aergena ocorre entre animais da
mesma criao ou, possivelmente, entre avirios
prximos, embora esta via no seja considerada a
mais importante.
Os 16 subtipos de HA e os nove subtipos
de neuraminidase (NA) j foram identicados
em aves silvestres ou domsticas em diferentes
combinaes. Os isolados mais recentes que causaram doena em aves domsticas foram: H5N2,
H7N1, H7N3, H7N7, H9N2 e H5N1. At o momento, apenas os subtipos H5 e H7 esto associa-
743
dos com o surgimento de cepas de alta patogenicidade, enquanto os demais subtipos so isolados
de surtos da doena causados por cepas de mdia patogenicidade. No entanto, deve-se ressaltar que os subtipos H5 e H7 podem tambm estar
envolvidos em surtos de mdia patogenicidade.
Alguns surtos causados por vrus desses dois
subtipos foram inicialmente de mdia patogenicidade e, aps a circulao por algum tempo na
populao, o vrus sofreu modicaes genticas
e passou a apresentar alta patogenicidade.
Vinte e quatro surtos da forma altamente
patognica da doena foram descritos desde 1959
em todo o mundo, sendo que 11 tiveram, como
agente etiolgico, um vrus do subtipo H5, e 13
foram causados por um subtipo H7.
Dentre os vrus de mdia patogenicidade,
o H9N2 merece considerao especial por estar
circulando de forma endmica em vrios pases
desde a metade dos anos 1990. Entre os anos de
1994 e 2004, este vrus foi detectado na Alemanha, Itlia, Irlanda, frica do Sul, Estados Unidos
e Coria. Recentemente surtos de inuenza pelo
H9N2 foram descritos em galinhas no Oriente
Mdio, envolvendo o Ir, Arbia Saudita, Israel,
Jordnia, Kuwait, Lbia, Lbano, Iraque e outros
pases da sia, como China, Coria e Paquisto.
As cepas do vrus da inuenza que circulam entre aves silvestres so de mdia patogenicidade. A transformao de uma cepa de mdia
patogenicidade em cepa de alta patogenicidade
parece ocorrer nas aves domsticas logo aps a
sua introduo a partir de espcies silvestres. Os
mecanismos que induzem esta transformao so
complexos e no totalmente esclarecidos, mas esto ligados a alteraes observadas na HA aps
a aquisio de mltiplos aminocidos bsicos e
perda de stios de glicosilao. Eventos de mutao ou recombinao parecem estar associados
com essas modicaes e, possivelmente, mais
de um mecanismo possa contribuir para esta alterao de patogenicidade.
No Brasil, no h registro recente de diagnstico clnico ou laboratorial da inuenza em
aves comerciais. O subtipo H3 foi recentemente
isolado de aves silvestres nos estados do Amazonas e Rio Grande do Norte, entretanto no existem evidncias de transmisso desse vrus para
aves domsticas.
744
Captulo 28
6.3.4 Imunidade
O principal mecanismo efetor envolvido na
proteo das aves contra o vrus da inuenza
representado pelos anticorpos neutralizantes. Os
anticorpos so produzidos contra vrias protenas estruturais e no-estruturais, mas apenas os
anticorpos contra as protenas externas do vrus,
HA, NA e M2 possuem atividade neutralizante.
A resposta humoral de aves contra o vrus da inuenza ocorre de forma similar ao que ocorre com
outros vrus nesta espcie e com o mesmo vrus
em outras espcies. Aproximadamente cinco dias
aps a infeco, pode-se detectar anticorpos especcos da classe IgM no soro e, posteriormente,
ocorre o aparecimento de IgG (IgY). A resposta
humoral ocorre tambm nas mucosas, mas pouco
tem sido estudado sobre este mecanismo.
O principal alvo da resposta imune humoral a HA, em cuja estrutura foram identicados pelo menos cinco determinantes antignicos
neutralizantes. Uma boa resposta de anticorpos
Orthomyxoviridae
6.3.5 Diagnstico
O diagnstico denitivo de inuenza aviria
obrigatoriamente realizado por um laboratrio
de referncia do Ministrio da Agricultura ou rgo equivalente em cada pas. No Brasil, existem
vrios laboratrios ociais do Ministrio habilitados para realizar o diagnstico.
O diagnstico laboratorial realizado pela
deteco direta do vrus ou pelo isolamento e
identicao viral a partir do material enviado
para o laboratrio. As amostras preferenciais para
o diagnstico so secrees traqueais e cloacais
coletadas com o auxlio de suabes. Os suabes devem ser transportados em meio estril, acrescido
de antibiticos. As amostras podem ser conservadas a 4C se processadas em at 48 horas aps
a coleta. Aps esse perodo, recomendado que
as amostras sejam estocadas a -70C. As vsceras
de animais mortos tambm devem ser coletadas,
principalmente se houver a suspeita de infeco
745
com as cepas altamente patognicas. Nesses casos, traquia, pulmo, sacos areos, intestino,
rim, fgado, corao, sangue, bao e crebro so
os rgos de eleio.
A inoculao do material suspeito em ovos
embrionados de galinha, com posterior identicao por tcnicas sorolgicas, o mtodo de
diagnstico mais comumente utilizado. Com
este objetivo, embries de nove a onze dias de
incubao so inoculados na cavidade alantide.
Setenta e duas horas aps a inoculao, os ovos
embrionados so resfriados a 4C por algumas
horas. O lquido alantide coletado, e a presena do vrus nesse material determinada pela deteco de atividade hemaglutinante pelo teste de
hemaglutinao (HA).
Aps a determinao da atividade hemaglutinante, o vrus deve ser identicado com relao
ao seu tipo e subtipo. A identicao do tipo viral
(A, B, C) pode ser realizada atravs do teste de
imunodifuso ou ELISA, ou, ainda, pela deteco
de antgenos virais na membrana crio-alantide
do embrio, atravs das tcnicas de IFA ou IPX.
Para a realizao desses testes, so utilizados anticorpos direcionados para a protena matriz (M)
ou nucleoprotena (NP).
A identicao do vrus em subtipos realizada pelas tcnicas de inibio da hemaglutinao (HI) ou inibio da neuraminidase (NI) com a
utilizao de anticorpos especcos para cada um
dos tipos de HA e NA.
Testes sorolgicos podem ser tambm utilizados para a deteco de anticorpos no soro de
aves que foram potencialmente infectadas. Nesse
caso, os testes so aplicados em programas de vigilncia e determinao de prevalncia do vrus
em populaes especcas, e no como diagnstico de surtos. Nesses casos, os testes recomendados so a imunodifuso, ELISA, HI e NI.
Recentemente, a tcnica de transcrio reversa acoplada reao de polimerase em cadeia
(RT-PCR) tem sido utilizada para a deteco do
genoma viral em amostras clnicas.
A presena do vrus da inuenza tipo A
pode ser conrmada utilizando-se oligonucleotdeos nucleoprotena ou matriz-especcos. A
presena dos subtipos H5 e H7 tambm pode
ser conrmada atravs de oligonucleotdeos H5-
746
Captulo 28
aves domsticas e, segundo, evitar a propagao do vrus entre aves domsticas caso ocorra a
introduo da infeco. De acordo com as recomendaes tcnicas, o controle deve ser realizado
principalmente pelo uso de medidas rigorosas de
biossegurana.
As aves infectadas excretam grande quantidade de vrus pelas fezes e secrees respiratrias. A transmisso ocorre principalmente pela
exposio ao material orgnico contaminado, em
equipamentos, gua, alimento, cama, veculos,
roupas e calados de pessoas que esto em contato com os animais. A primeira etapa para evitar a
transmisso do vrus evitar o transporte de aves
infectadas e de material orgnico potencialmente
contaminado. Em caso de surtos, a interdio da
propriedade contaminada um procedimento
compulsrio.
Especialistas chamam a ateno para a rpida adoo de medidas de controle de focos causados por vrus de mdia patogenicidade como
um dos procedimentos mais importantes para
evitar o surgimento de cepas de alta patogenicidade. Como j mencionado, quanto maior for a
circulao do vrus na populao avcola, maiores sero as chances de ocorrerem alteraes na
patogenicidade desses vrus.
A vacinao contra a inuenza aviria tem
sido realizada em situaes especcas em alguns
pases, mas a sua aplicao ainda um ponto
muito polmico. O maior argumento contra a vacinao comum a outras doenas de animais, ou
seja, a impossibilidade de diferenciao entre animais vacinados e animais infectados pelo vrus
de campo. Outro forte argumento contra a vacinao de aves o de que algumas vacinas protegem contra os sinais clnicos, mas no protegem
contra a infeco e excreo viral. Neste caso, os
vrus poderiam seguir circulando e propiciar o
surgimento de cepas altamente patognicas.
A proteo vacinal contra o vrus da inuenza especca para o subtipo, e qualquer subtipo
pode infectar as aves. Como seria muito difcil
prever o subtipo que ir infectar determinada populao avcola, a escolha do subtipo a ser includo na vacina mais um problema que restringe o
uso da vacinao. Existe uma poro signicativa
da comunidade tcnico-cientca que totalmen-
Orthomyxoviridae
747
At agora, o nico sistema que permite a deteco do vrus de campo na populao vacinada
que resulta na erradicao baseia-se na vacinao
heterloga e conhecido como DIVA (differentiating infected from vaccinated animals). Esse sistema
foi desenvolvido para os programas de erradicao das diferentes cepas de vrus de mdia patogenicidade do subtipo H7. A vacina utilizada
contm o vrus com a mesma HA, porm com
uma NA diferente, como o vrus de campo. Essa
estratgia de vacinao permite a deteco dos
anticorpos da neuraminidase especcos contra
o vrus de campo. Por exemplo, se a cepa do vrus de campo em circulao um H7N1, a vacina
utilizada dever ser um H7N3 ou uma das outras
sete combinaes possveis de NA. O monitoramento sorolgico baseado na protena N3 conrmar que o lote foi vacinado, e o baseado na protena N1 conrmar que a ave foi infectada com o
vrus de campo. As aves que formam vacinadas e
depois infectadas tambm so detectadas.
A vacinao contra o vrus da inuenza aviria j foi utilizada em pases diferentes com sucesso varivel. Vacinas inativadas e recombinantes
foram usadas no Mxico, na Itlia, no Paquisto
e nos EUA para controlar o vrus da inuenza de
mdia patogenicidade. Antes do surto causado
pelo vrus de alta patogenicidade H5N1 na sia
sudeste, algumas tentativas foram relatadas para
controlar surtos causados por vrus de alta patogenicidade atravs da vacinao: surto por H5N2
no Mxico (1994); H7N1 na Itlia (2000), H7N3 no
Paquisto (2003).
As prticas inadequadas de biossegurana
ou de vacinao podem conduzir transmisso
viral entre lotes e a seleo de variantes que exibem a antigenic drift. Os vrus H5N2 circulantes
no Mxico apresentaram antigenic drift resultando uma baixa identidade com as cepas vacinais.
O uso intenso de vacinas no Mxico resultou na
emergncia de variantes antignicas, que escapam da resposta imune induzida pela vacina. O
Mxico tem vacinado as aves comerciais desde o
surto de alta patogenicidade, em 1994, sem nunca
aplicar o princpio DIVA. Embora nenhum vrus
de alta patogenicidade tenha sido relatado desde
748
Captulo 28
Orthomyxoviridae
749
750
Este vrus continuou a circular de forma endmica no Sul da China, principalmente em patos
e marrecos domsticos. No nal de 2003 e incio
de 2004, foram relatados surtos de infeces pelo
H5N1 simultaneamente em vrios pases asiticos. O vrus foi detectado no Vietn, Tailndia,
Indonsia, Camboja, Laos, Coria, Japo e China. Os surtos foram aparentemente controlados,
mas, em agosto de 2004, o vrus foi detectado na
Malsia.
Vrios estudos moleculares do vrus H5N1
foram realizados no perodo de 2000-2004 de isolados humanos e de aves nos pases asiticos. O
seqenciamento desses isolados demonstrou que
uma srie de ressortimentos, envolvendo o vrus
inicialmente detectado em gansos, deu origem a
um gentipo de H5N1 dominante (gentipo Z)
entre galinhas e perus. A evoluo do vrus H5N1
potencializou sua virulncia e sua expanso entre hospedeiros susceptveis. Foi observado um
aumento da virulncia para espcies silvestres e
tambm uma maior letalidade em camundongos
e fures infectados experimentalmente. O vrus
tornou-se infeccioso para mamferos, causando
mortes e sendo transmitido entre felinos selvagens como tigres e leopardos, e tambm entre
gatos domsticos.
Surtos do H5N1 foram relatados em aves
migratrias na China e na Monglia em 2005,
e o vrus foi detectado principalmente em aves
oriundas do Lago Qinghai, localizado no Oeste
da China. A propagao do vrus atravs dessas
aves para outras regies a oeste e sul considerada uma possibilidade. Nesse mesmo ano, o vrus
foi isolado de cisnes na Crocia e, posteriormente, em 2006, no Ir, Azerbaijo, Casaquisto, Gergia e em outros 20 pases europeus.
O vrus propagou-se da sia para a Europa e frica, causando a enfermidade e levando
destruio de mais de 200 milhes de aves em vrios pases. At abril de 2007, a presena do H5N1
j havia sido relatada em quarenta pases desses
trs continentes. Ainda de acordo com o relato da
Organizao Mundial de Sade (OMSWHO) de
abril de 2007, 291 j foram infectadas pelo H5N1
e ocorreram 172 bitos com comprovao laboratorial da etiologia.
Captulo 28
At incio de 2007, apesar das centenas de casos humanos registrados e dos freqentes registros de doena causada por vrus H5N1 em aves
silvestres e domsticas de vrios pases asiticos,
frica, Oriente Mdio e Europa Oriental, no havia evidncia de transmisso do vrus entre pessoas. Ou seja, os casos de infeco humana foram
originados da exposio direta ou indireta de
pessoas a aves infectadas. Isto explicava porque
os casos humanos se restringiam a poucas pessoas, geralmente membros de uma mesma famlia.
A capacidade dos vrus avirios serem transmitidos entre pessoas e de replicar ecientemente
no trato respiratrio de humanos est associada
com duas protenas e funes principais: HA e
PB2. Alteraes na HA permitem ao vrus se ligar
em receptores que contm cido silico com ligao 2,6, que esto presentes no epitlio do trato
respiratrio superior e, assim, iniciar a infeco.
Mutaes especcas na PB2 (E para K na posio
627) aumentam a capacidade do vrus replicar
em clulas de mamferos e conferem uma vantagem para a replicao sob as temperaturas mais
baixas do trato respiratrio superior. Essas duas
alteraes so provavelmente necessrias, porm
insucientes para a gerao de vrus H5N1 pandmicos.
A grande preocupao de autoridades sanitrias de todo o mundo a de que este vrus eventualmente adquira a capacidade de ser transmitido entre pessoas como ocorre com os vrus da
inuenza A humanos podendo, ento, disseminar-se rapidamente na populao humana e causar uma pandemia mundial. Esta preocupao
reveste-se de especial signicado pela severidade
da doena causada pelo H5N1 em humanos.
751
Orthomyxoviridae
6.6.1 Epidemiologia
As primeiras descries de infeco pelo
H5N1 em gatos domsticos foram realizadas na
Tailndia, Alemanha, ustria, China, Iraque e Indonsia, durante surtos de inuenza aviria. Felinos selvagens tambm so susceptveis infeco. Dois tigres (Panthera tigris) e dois leopardos
(P. pardus) morreram aps contrarem a infeco
por ingesto de carne crua de aves contaminadas.
Em um zoolgico da Tailndia, 147 tigres morreram ou foram abatidos aps apresentarem sinais
clnicos de inuenza, e foi possvel demonstrar a
transmisso horizontal do vrus entre os tigres.
Em 2005, trs gatos civets morreram no Vietn
aps a infeco com o H5N1. Fures tambm so
susceptveis infeco experimental e podem
servir de modelo para estudos com o H5N1. Estes animais desenvolvem sinais clnicos de infeco respiratria e excretam o vrus em secrees
nasais. O H3N2 tambm pode replicar em fures,
porm apresenta menor patogenicidade. Felinos
e fures podem transmitir horizontalmente o
H5N1. Essas espcies so criadas como animais
domsticos e possuem contato direto com pessoas, podendo servir como uma fonte eventual de
vrus para humanos.
A infeco pelo H5N1 possui importncia
pelas taxas elevadas de mortalidade e letalidade
em animais, alm de possuir potencial zoontico.
Um estudo sorolgico, realizado em Bangkok,
752
Captulo 28
6.6.3 Diagnstico
A suspeita clnica de infeco pelo vrus da
inuenza pode ser conrmada pela inoculao
de secrees nasais, orofarngeas, amostras fecais ou suspenses de tecidos suspeitos em clulas MDCK ou, ainda, no saco alantide de ovos
embrionados de 10 dias. Clinicamente, a infeco
em ces muito semelhante aos sinais observados na tosse dos canis, porm a ocorrncia de
hemorragias e sinais mais severos pode diferenciar a etiologia da doena. Felinos com inuenza
apresentam sinais semelhantes aos apresentados
na sndrome do trato respiratrio superior.
A conrmao laboratorial da infeco pelos
vrus da inuenza pode ser realizada por IHQ,
hemaglutinao associada com HI e RT-PCR em
tempo real. Testes sorolgicos como HI e soroneutralizao (SN) tambm podem ser utilizados.
Orthomyxoviridae
7 Bibliografia consultada
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754
Captulo 28
BUNYAVIRIDAE
Fernanda S. F. Vogel1
29
1 Introduo
757
2 Classificao
757
757
4 Replicao
759
759
760
5 Biologia e patogenia
762
762
762
762
764
765
765
765
6.2
6.3
6.4
6.5
765
767
769
770
7 Bibliografia consultada
771
Mariana S e Silva colaborou com a seo 6.2 (Hantavrus), e Eduardo Furtado Flores com as sees 6.4 (Doena
das ovelhas de Nairobi) e 6.5 (Febre hemorrgica da Crimia-Congo).
1
1 Introduo
2 Classificao
A famlia Bunyaviridae contm o maior nmero de vrus animais, abrigando centenas de espcies virais isoladas principalmente de insetos.
Os vrions so grandes, envelopados e possuem
como genoma trs molculas de RNA de polaridade negativa. A maioria desses vrus foi isolada
de insetos ou de animais silvestres, sem estarem
necessariamente associados com doena. Alguns
buniavrus causam doena severa em humanos e
vrios deles so zoonticos. Dos cinco gneros da
famlia, apenas os membros do gnero Hantavirus
no so transmitidos por insetos, os demais so
arbovrus. Este gnero abriga o hantavrus, um
vrus zoontico cujos hospedeiros naturais so
roedores silvestres. Em humanos, a hantavirose
se manifesta sob duas formas, por apresentar caractersticas epidemiolgicas e clnicas distintas.
No sudeste asitico, a doena endmica e manifesta-se primariamente por insucincia renal
aguda, com alta morbidade e baixa mortalidade.
Nas Amricas, a doena apresenta ocorrncia espordica e se manifesta por insucincia respiratria aguda, com altos ndices de letalidade.
No Brasil, j foram isoladas dezenas de vrus da famlia Bunyaviridae. Do ponto de vista
clnico e epidemiolgico, o mais importante o
vrus Oropouche, que est associado com epidemias na regio amaznica. Esse vrus infecta
primariamente humanos e, nessa regio, o nmero de casos noticados superado somente pela
dengue, reforando a sua importncia. A enfermidade conhecida como febre do Oropouche e
caracterizada por febre, cefalia, mialgias, artralgias, anorexia, tonturas, calafrios e fotofobia.
Menos freqentemente, a infeco pode cursar
com sinais neurolgicos. Este vrus se mantm na
natureza atravs de dois ciclos: um urbano e outro silvestre. Embora no Brasil o mais importante
vrus dessa famlia seja o Oropouche, deve-se salientar que, para os animais, o mais importante e
patognico membro da Bunyaviridae o vrus da
febre do vale Rift (RVFV), agente restrito praticamente ao continente africano.
758
Captulo 29
G1+G2
Membrana
lipdica
Nucleocapsdeos
RNA
N
P
Segmento L
3-
- 5
L (polimerase)
Segmento M
3-
Segmento S
3-
G1/G2
G1/G2
- 5
NS
- 5
Figura 29.1. Vrions e genoma da famlia Bunyaviridae. A) Fotografia de microscopia eletrnica de vrus do gnero
Phlebovirus (vrus da febre do Vale Rift); B) Representao esquemtica de uma partcula vrica e seus componentes;
C) Estrutura do genoma. Segmentos L (grande); M (mdio) e S (pequeno). No diagrama, est representada a
organizao genmica de um phlebovrus.
Bunyaviridae
4 Replicao
As centenas de vrus da famlia Bunyaviridae apresentam vrias propriedades biolgicas
em comum; porm, por constiturem uma populao heterognea, tambm apresentam muitas
propriedades diferentes. Com exceo dos hantavrus, os vrus dos outros gneros so capazes
de replicar tanto em clulas de vertebrados (ou
plantas, no caso dos tospovrus) como de artrpodes. Os efeitos da replicao nas clulas hospedeiras variam com o vrus e com o tipo de clula.
Em geral, a replicao em clulas de mamferos
(e plantas) citoltica; enquanto a replicao em
clulas de artrpodes, geralmente, resulta em citopatologia discreta ou ausente.
759
760
Captulo 29
1
11
10
5a
5b
L
Golgi
6
8
5c
RER
Ncleo
Figura 29.2. Ciclo replicativo dos buniavrus. 1) Ligao aos receptores celulares; 2) Internalizao por endocitose,
seguida de penetrao por fuso do envelope com a membrana endoctica; 3) Desnudamento; 4) Transcrio dos
segmentos de polaridade negativa e produo de mRNAs; 5a) Traduo dos mRNAs e produo de protenas
envolvidas na replicao do genoma e de protenas estruturais (5b, 5c); 6) Replicao do genoma; 7) Formao dos
nucleocapsdeos; 8) Transporte das glicoprotenas do envelope para o aparelho de Golgi; 9) Brotamento dos
nucleocapsdeos para o interior do Golgi; 10) Transporte dos vrions em vesculas para a superfcie celular; 11)
Egresso por exocitose.
761
Bunyaviridae
protena (N) no sentido do mRNA de sentido positivo clssico; e a protena NSs codicada por
um RNA com o sentido do genoma. Essa estratgia ambissense observada no segmento S dos
phlebovrus e tospovrus e no segmento M dos
tospovrus. Neste ltimo caso, os genes das protenas G1 e G2 esto localizados na metade 3 do
genoma e as protenas so codicadas pela estratgia usual dos vrus RNA de sentido negativo
(semelhante protena N do segmento S). O gene
da protena Nsm est localizado na regio prxima extremidade 5 do genoma e expresso
a partir de um RNA complementar, produzido
pela transcrio da regio correspondente do
RNA antigenmico. Os arenavrus tambm utilizam a estratgia ambissense para expressar as
suas protenas.
B
Protena NSs
5-
Replicao
3-
mRNA (+)
Traduo
3- 5
cRNA (+)
Transcrio (3)
Transcrio
- 3
5NSs
- 3
5
Traduo
mRNA
-5'
Replicao (2)
RNA genmico
3-
Protenas
NSs
- 5
Transcrio (1)
mRNA
N
- 3
5Traduo
Protena N
Figura 29.3. Estratgia de expresso gnica e replicao do genoma dos membros da famlia Bunyaviridae. A)
Estratgia de expresso do segmento L nos membros dos quatro gneros; e do segmento M para os membros dos
gneros Bunyavirus, Hantavirus, Nairovirus e Phlebovirus; B) Estratgia ambissense de expresso gnica, que ocorre
no segmento M dos tospovrus e no segmento S dos tospovrus e phlebovrus. No diagrama, est representada a
expresso do segmento S dos phlebovrus.
762
5 Biologia e patogenia
Os buniavrus utilizam uma ampla variedade de hospedeiros, incluindo diferentes espcies
de mamferos (e plantas no caso dos tospovrus) e
gneros de artrpodes. Uma vez que os buniavrus replicam em insetos, pode ocorrer a transmisso transovariana nesses vetores, o que permite a
manuteno do agente durante estaes frias.
A patogenia dos buniavrus variada, uma
vez que existem diferentes grupos de vrus dentro da mesma famlia, mas geralmente a inoculao do agente pela picada do inseto vetor determina uma viremia transiente, e a replicao
e amplicao do vrus ocorre nos rgos-alvo,
que varia conforme os diferentes buniavrus. A
patogenicidade e virulncia tambm variam de
acordo com o vrus. As infeces de vertebrados
pelos buniavrus variam em severidade, incluindo desde infeces inaparentes at doenas severas e mesmo fatais.
Captulo 29
6.1.1 Epidemiologia
O RVFV apresenta algumas peculiaridades
epidemiolgicas que favorecem a sua manuteno e disseminao na natureza. Esse vrus pode
ser transmitido por diferentes gneros de mosquitos e tambm por ebotomdeos, alm de ser um
vrus RNA e, como tal, propenso a altas taxas
de mutao. As mutaes podem ter repercusso
antignica pequena (drifts) ou grande (shifts) e
podem determinar um fentipo de variabilidade
antignica e, assim, representar uma estratgia
de evaso do sistema imune.
A febre do vale Rift (RVF) uma zoonose
viral de grande importncia na frica. Esta enfermidade permaneceu restrita ao sul do Saara at
1977, quando um grande surto ocorreu no Egito.
Um dos fatores incriminados como responsvel
pela disseminao do agente foi a fonte de gua
abundante nos canais construdos para grandes
Bunyaviridae
represas. Embora a doena estivesse restrita apenas ao continente africano, em 2000, o vrus se
disseminou pela Pennsula Arbica, produzindo
dois surtos simultneos na Arbia Saudita e no
Imen.
Historicamente, os surtos de RVF ocorrem
em diferentes regies da frica em intervalos
de 5 a 15 anos. O longo intervalo de ocorrncia
desses eventos provavelmente deve-se reduo
gradativa na susceptibilidade da populao com
o decorrer do tempo. Por muitos anos, o reservatrio do vrus durante os perodos interepidmicos foi desconhecido. Esse desconhecimento perdurou at que pesquisadores descobriram que
ovos do mosquito Aedes lineatopinnis, presentes
no solo dos dambos, continham o RVFV. Os dambos so depresses no solo que alternam perodos
de plenitude hdrica em pocas de chuvas, com
perodos de ausncia de gua em pocas de seca.
Quando essas depresses se enchem de gua, os
ovos eclodem, e as larvas infectadas se tornam
mosquitos que contm e podem transmitir o vrus. Por isso, esses dambos so considerados os
reservatrios de mosquitos (e do vrus).
Ao realizarem o repasto sangneo em ruminantes, os mosquitos inoculam o vrus, que ,
posteriormente, amplicado no animal. Esse animal serve, ento, de fonte de infeco para vetores de diferentes gneros, que contribuem para
uma rpida disseminao do agente. Se a rea
que possui os mosquitos infectados apresenta
animais susceptveis, provvel a ocorrncia de
casos clnicos. Por outro lado, em muitas regies
da frica, a presena dos mosquitos e do vrus
enzotica e, assim, casos clnicos dicilmente
so observados. Nessas regies, a circulao do
vrus tem sido monitorada pelo uso de animais
sentinelas.
Nos vetores, o vrus transmitido pela via
transovariana entre geraes. Uma caracterstica
peculiar que o vrus pode permanecer latente
nos ovos dos mosquitos durante estaes secas
(perodos interepizoticos). Quando os ovos infectados pela via transovariana eclodirem, daro
origem aos mosquitos transmissores do RVFV.
Na frica, os principais vetores do RVFV
so os mosquitos dos gneros Aedes, Anopheles,
763
764
Captulo 29
Tabela 29.1. Espectro e hospedeiros e conseqncias da infeco de diferentes espcies animais pelo RVFV.
Mortalidade
ap. 100%
Doena severa
abortos
mortalidade
Doena severa,
viremia,
abortos
Cordeiros
Ovelhas
Macacos
Eqinos
Cobaios
Bezerros
Bovinos
Camelos
Gatos
Coelhos
Cabritos
Cabras
Ratos
Ces
Sunos
Filhotes de co
Bfalos
Esquilos
Macacos
Tartarugas
Filhotes de gato
Humanos
Infeco
viremia
Refratrios
infeco
Sapos/rs
Camundongos
Galinhas
Hamsters
Canrios
Camundongos silvestres
Pombas
Periquitos
765
Bunyaviridae
6.1.3 Diagnstico
Em reas endmicas ou de risco, deve-se
suspeitar de RVF quando so observados os seguintes eventos: a) altas taxas de aborto em ovelhas e vacas (pode atingir 100%); b) altas taxas
de mortalidade em cordeiros e em bezerros com
menos de sete dias de idade; c) fetos abortados e
neonatos com leses no fgado; d) enfermidade
semelhante gripe em humanos, particularmente
naqueles com contato com animais; e) ocorrncia
de enfermidade durante perodo de ocorrncia
dos vetores; e) disseminao rpida.
O diagnstico da infeco baseado na deteco de antgenos virais e na pesquisa de anticorpos em exames histopatolgicos. Deve-se ter o
mximo cuidado na manipulao das amostras,
uma vez que o RVFV pode infectar humanos e
casos de infeco humana adquirida durante necropsias e procedimentos laboratoriais j foram
descritos. Amostras de vrus para o isolamento
podem ser coletadas de fetos abortados ou de
animais febris. As amostras a serem coletadas
incluem o fgado, bao, sangue, crebro e soro.
Essas amostras podem ser submetidas ao isolamento viral, a RT-PCR por extenso ou, ainda,
imunoistoqumica. Para a conrmao sorolgica da enfermidade, pode-se realizar a sorologia
pareada, pelo uso do teste de soroneutralizao
(SN). Para pesquisa de anticorpos, a tcnica de
ELISA pode ser utilizada, tanto para deteco de
IgM como de IgG.
6.1.4 Tratamento
No existe tratamento para a RVF. No entanto, estudos em macacos e em outros animais
tm demonstrado que a ribavirina uma droga
antiviral promissora para utilizao futura em
humanos. Outros estudos sugerem que o interferon, imunomoduladores e plasma sangneo de
fase convalescente podem auxiliar no tratamento
de pacientes com a RVF.
766
Captulo 29
A infeco de ruminantes adultos geralmente subclnica. A viremia que se segue infeco geralmente ocorre entre os dias um e seis
e persiste por um a nove dias. Os sinais da infeco so observados apenas quando animais
prenhes so infectados. Nestes, so observados
sinais de doena reprodutiva, tais como: abortos,
nascimento de bezerros fracos e inviveis, malformaes congnitas e distocias. O achado mais
freqente e que mais chama a ateno o nascimento de animais com malformaes. Os fetos
infectados durante o primeiro trimestre de gestao geralmente so viosos e alertas, mas no caminham. Embora alguns possam se desenvolver
com assistncia, so incoordenados, apresentam
ataxia e podem apresentar paralisia em um ou
mais membros. Atroa muscular, exoftalmia, rotao de membro, produo excessiva de lgrima
so alguns dos sinais que podem ser observados.
Os fetos infectados no segundo tero gestacional
normalmente apresentam artrogripose. As articulaes so rgidas e no fazem exo, e os msculos podem estar atroados. Torcicolo, escoliose
e cifose tambm so freqentemente observados.
Alguns recm-nascidos podem apresentar anormalidades neurolgicas alm da artrogripose.
Os animais nascidos muito fracos geralmente
foram infectados tardiamente na gestao. Estes animais podem se manter de p e caminhar,
mas apresentam anormalidades comportamentais como: reexo de suco fraco ou ausente,
depresso, torpor, hiperexcitabilidade peridica,
surdez, nistagmo, incoordenao e cegueira. Deformidades no crnio so freqentes. A maioria
dos animais que nascem assim morrem ou so
sacricados pouco tempo aps o nascimento. Em
animais que nascem com sinais mais leves, estes
se acentuam gradativamente e os animais geralmente morrem antes dos seis meses de idade.
As malformaes congnitas ocorrem mais
freqentemente quando os fetos so infectados
durante o primeiro tero gestacional. Em ovelhas, essas alteraes ocorrem quando os fetos
so infectados entre o 30 e 50 dia, dependendo
da virulncia da cepa. Em vacas, malformaes
congnitas so evidenciadas quando a infeco
fetal ocorre entre os 62 e 92 dias de gestao. Em
767
Bunyaviridae
6.3 Hantavrus
A hantavirose uma enfermidade infecciosa grave que afeta humanos, cujo agente possui
roedores silvestres e domsticos como hospedeiros naturais e reservatrios. A enfermidade apresenta duas formas clnicas: a febre hemorrgica
com sndrome renal (HFRS) e a sndrome pulmonar por hantavrus (HPS), tambm conhecida
como sndrome cardiopulmonar por hantavrus
(CPSH). A HFRS foi descrita na dcada de 1950,
na Coria e Rssia, e foi chamada inicialmente de
febre hemorrgica da Coria. Os sinais clnicos
eram inicialmente semelhantes aos da gripe, seguidos de hipotenso, trombocitopenia e falncia
renal. Em 1993, na regio de Four Corners (Novo
Mxico, Arizona, Colorado e Utah), nos Estados
Unidos, foi descrita uma enfermidade com sinais
semelhantes aos da gripe e com comprometimen-
768
Captulo 29
cipais portadores e disseminadores da enfermidade. Apesar da ausncia de sinais clnicos, infeces experimentais em roedores indicam que
a viremia ps-infeco pode durar duas semanas,
quando h disseminao do vrus pelos tecidos
do hospedeiro.
A patogenia tanto da HPS quanto da HFRS
caracterizada por uma resposta imune exacerbada, que leva liberao de citocinas envolvidas
no aumento de permeabilidade vascular. Os vrus possuem capacidade de se ligar em plaquetas
por receptores, levando essas plaquetas a serem
retiradas da circulao, provocando a trombocitopenia observada nas duas apresentaes clnicas
da hantavirose. Na HPS, ocorre ainda destruio
de antgenos nas clulas endoteliais do corao
e tecidos linfides. Os pulmes apresentam inltrados de linfcitos T/CD8, que produzem citocinas, estimulando os macrfagos a produzir TNF,
IL-1, IFN gama, que aumentam a permeabilidade
vascular, levando formao de edema pulmonar.
Aps a inalao do agente, os sinais se iniciam entre 15 e 20 dias. Os sintomas da forma cardiopulmonar so febre, mialgias, cefalia, alm de
tosse seca e edema pulmonar. A HFRS apresenta
sinais de trombocitopenia, ditese hemorrgica e
insucincia renal.
O diagnstico laboratorial realizado pela
deteco de anticorpos especcos, principalmente pela tcnica de ELISA, para deteco de
IgM, e por imunouorescncia indireta (IFA). O
isolamento viral no muito utilizado em razo
da diculdade de propagao do vrus em cultivo celular.
O tratamento para hantavirose de suporte, e a letalidade depende do vrus envolvido, do
tempo de incio do tratamento e de fatores individuais, como idade e imunidade do paciente.
Algumas vacinas inativadas contra a HFRS so
utilizadas para os vrus Seoul e Hantaan, na sia,
e, aparentemente, no promovem proteo contra os hantavrus. Estudos so realizados para o
desenvolvimento de vacinas efetivas contra a forma cardiopulmonar e para a produo de vacinas de DNA. O controle da enfermidade deve ser
realizado principalmente com medidas de saneamento bsico, controle de roedores e preveno
de contato com esses animais.
Bunyaviridae
769
A enfermidade caracterizada por gastrenterite hemorrgica aguda, que inicia com febre
alta e se segue com depresso, declnio da temperatura corporal e diarria. Corrimento nasal
mucopurulento e diculdade respiratria so
freqentemente observados. As fezes so inicialmente liquefeitas, mas passam a conter muco e
sangue com a evoluo da doena. Casos subagudos, em que os animais apresentam fraqueza
e quadros recorrentes de diarria; e casos superagudos, em que os animais apresentam apenas
febre alta seguida de colapso e morte sbita, tambm tm sido relatados. Abortos tambm podem
ocorrer associados com os surtos.
Os achados patolgicos incluem hiperemia
e petquias da mucosa do abomaso, enterite hemorrgica no ceco e poro anterior do clon. A
mucosa do intestino grosso pode estar recoberta
com petquias e com contedo sanguinolento.
Hiperplasia generalizada nos rgos linfides
tambm um achado comum. Fmeas prenhes
podem apresentar hiperemia no trato genital,
edema e hemorragias nas membranas fetais. Fetos abortados apresentam petquias e sufuses
em vrios rgos.
Em reas endmicas, a maioria da populao de ovinos e caprinos imune ao vrus, e a
enfermidade acomete principalmente animais
introduzidos a partir de reas livres. De fato, os
surtos esto quase sempre associados com movimento de animais susceptveis para reas de ocorrncia dos carrapatos vetores. pocas de chuvas
tambm favorecem a ocorrncia da doena, pela
maior populao dos vetores.
O diagnstico laboratorial pode ser realizado pelo isolamento do vrus a partir de plasma
ou sangue com anticoagulante, coletado durante
a fase aguda da doena. O vrus pode ser identicado por imunouorescncia (IFA) realizada em
cultivos celulares previamente inoculados com o
material suspeito. O vrus replica bem em cultivos celulares de origem ovina, caprina e tambm
de hamster. A inoculao intracerebral de camundongos lactentes um mtodo alternativo de
diagnstico, e o vrus pode ser identicado por
IFA ou xao de complemento.
O diagnstico diferencial deve considerar
doenas como a febre do vale Rift, antrax e algu-
770
Captulo 29
ovinos e pequenos mamferos, como lebres e coelhos silvestres. Sorologia positiva para o vrus
tem sido detectada em vrias espcies animais de
mamferos silvestres e cativos do Sudeste e Sul
da frica, indicando a sua ampla distribuio.
Dentre as espcies soropositivas, incluem-se bovinos, ovinos, caprinos, eqinos, ces, mamferos
silvestres (74 espcies), alm de algumas espcies
de aves. Acredita-se que, na maioria, seno em
todas essas espcies, a infeco cause apenas febre transitria e, muitas vezes, pode ser absolutamente subclnica.
A doena causada por um vrus pertencente ao gnero Nairovirus, classicado em um dos
seis sorogrupos que formam o gnero. Vrus relacionados j foram identicados no Oriente Mdio,
sia e antiga Unio Sovitica. O vrus replica em
uma variedade de clulas primrias e de linhagem, incluindo Vero, BHK-21 e CER, nas quais
produz citopatologia discreta e de difcil percepo. O isolamento e titulao do vrus geralmente
so realizados pela inoculao intracerebral de
camundongos lactentes. O carter zoontico e a
possibilidade de transmisso por contato coloca o agente no nvel de biossegurana 4 (BSL-4)
dentre os agentes patognicos manipulveis em
laboratrio.
A exemplo de outros vrus do gnero, o
agente da CCHF transmitido entre animais por
carrapatos pertencentes a vrios gneros. O vrus j foi isolado de aproximadamente 30 espcies de carrapatos. No entanto, os carrapatos do
gnero Hyalomma parecem ser os principais envolvidos na transmisso e manuteno do vrus
em reas endmicas, podendo ser transmitido de
forma transestadial nesses invertebrados. A distribuio geogrca da enfermidade segue fundamentalmente a distribuio desses vetores. O
vrus persiste nos vetores em todos os estdios de
seu desenvolvimento e transmitido aos animais
atravs da inoculao de saliva contaminada.
Mamferos infectados geralmente desenvolvem
altos ttulos de viremia durante aproximadamente uma semana, perodo no qual o vrus pode ser
transmitido. Pessoas podem ser infectadas por
contato direto com sangue, tecidos ou secrees
desses animais ou, eventualmente, atravs da
picada de carrapatos. A maioria dos casos hu-
771
Bunyaviridae
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Captulo 29
REOVIRIDAE
Amauri A. Alfieri, Alice F. Alfieri,
Elisabete Takiuchi & Zlia Ins Portela Lobato
30
1 Introduo
775
2 Classificao
775
3 Gnero Orthoreovirus
777
4 Gnero Rotavirus
777
778
779
779
780
4.1 Classificao
4.2 Propriedades dos vrions, estrutura e organizao genmica
4.3 Replicao
781
782
786
788
790
790
791
792
5 Gnero Orbivirus
793
793
794
796
797
798
798
800
802
802
803
803
6 Bibliografia consultada
804
804
805
805
1 Introduo
A famlia Reoviridae composta por vrus
que infectam uma ampla variedade de hospedeiros, incluindo invertebrados, plantas e vertebrados. As infeces de vertebrados afetam principalmente os tratos gastrintestinal e respiratrio.
A denominao Reovirus derivada das palavras
Respiratory, Enteric e Orphan, sendo esta ltima
denominao (rfos) referente a vrus que no
puderam ser associados com nenhuma doena
conhecida. Embora vrios desses vrus j tenham
sido relacionados recentemente com algumas doenas, o nome ainda persiste.
Os vrus que compem essa famlia compartilham as seguintes caractersticas: a) vrions
com simetria icosadrica; b) ausncia de envelope glicoprotico; c) genoma constitudo por RNA
ta dupla (dsRNA) segmentado; d) RNA genmico infeccioso somente quando associado com
as protenas virais; e) transcriptase presente nos
vrions; e f) replicao no citoplasma da clula
hospedeira.
O tipo e organizao do genoma so as principais caractersticas em comum dos vrus includos na famlia Reoviridae. O genoma desses vrus
constitudo por 10, 11 ou 12 molculas de dsRNA, ou seja, possuem o genoma segmentado. Em
geral, cada segmento genmico codica uma protena viral, mas h casos em que duas ou at trs
protenas so codicadas pelo mesmo segmento. Vrus com o genoma constitudo por dsRNA
tambm podem ser encontrados em outras cinco
famlias virais. No entanto, somente duas (Reoviridae e Birnaviridae) possuem vrus que infectam
vertebrados. Destas, apenas os vrus da famlia
Reoviridae produzem infeces em mamferos.
Os vrions dos membros da Reoviridae possuem
uma arquitetura complexa: so desprovidos de
envelope, possuem 60 a 85 nm de dimetro, simetria icosadrica e capsdeo duplo. A exemplo
da maioria dos vrus RNA, esses vrus realizam o
seu ciclo replicativo no citoplasma da clula hospedeira.
A famlia Reoviridae bastante complexa com
relao s suas caractersticas biolgicas e moleculares. A famlia composta por 11 gneros,
porm apenas cinco esto associados com doen-
2 Classificao
A famlia Reoviridae composta por 11 gneros, dos quais apenas cinco infectam vertebrados
(Orthoreovirus, Orbivirus, Rotavirus, Coltivirus e
Aquareovirus). Destes, apenas os gneros Orbivirus e Rotavirus ocasionam infeces que, por suas
caractersticas epidemiolgicas e pela gravidade
dos sinais clnicos, so consideradas importantes
em mamferos. Alguns ortoreovrus tambm produzem infeces de alguma importncia clnica
em humanos e animais (Tabela 30.1). Fotograas
de microscopia eletrnica de vrions representativos dos ortoreovrus, rotavrus e orbivrus esto
apresentados na Figura 30.1.
O gnero Aquareovirus contm diversos vrus que j foram isolados de vrias espcies de
peixes de gua doce e salgada, ostras e outros
moluscos. Com base em tcnicas de hibridizao (RNA-RNA), so descritas seis espcies de
aquareovrus, denominadas de A a F. Esses vrus
apresentam uma grande especicidade de hospedeiro, de acordo com a espcie viral. Tanto o potencial patognico quanto o impacto econmico
da maioria das infeces ocasionadas pelos aquareovrus ainda no esto claramente denidos.
O vrus da febre do carrapato do Colorado (Colorado tick fever virus, CTFV) o prottipo
do gnero Coltivirus. O CTFV tem sido isolado
de carrapatos, roedores e de seres humanos na
Amrica do Norte. Um outro vrus, denominado
Eyach, tambm isolado de carrapatos e, possivelmente, de seres humanos na Europa (Alemanha
e Frana), apresenta reao cruzada em testes
776
Captulo 30
Tabela 30.1. Principais vrus da famlia Reoviridae associados com doenas em animais.
Gnero
Vrus
Espcies afetadas
Doena
Orthoreovirus
Isolado de vrios
mamferos
Hepatoencefalomielite
em camundongos
Galinhas, perus e
gansos
Rotavirus
Virtualmente todas as
espcies
Enterite
Orbivirus
Lngua azul
Peste eqina
Eqinos
Aborto e encefalite
Cervos
Doena epizotica
hemorrgica
Vrus Ibaraki
Bovinos
Bovinos
Aborto, malformaes
congnitas
Figura 30.1. Fotografias de microscopia eletrnica de vrions representativos dos gneros Orthoreovirus (A),
Rotavirus (B), e Orbivirus (C).
777
Reoviridae
a 11). Com base em anlises de seqncias genmicas e de protenas, novas espcies de Orthoreovirus tm sido subseqentemente descritas.
Atualmente so consideradas quatro espcies,
alm de outras cepas virais em processo de reconhecimento como novas espcies. Algumas
das novas espcies, como o reovrus de babuno,
encontram-se logeneticamente em uma posio
intermediria entre os reovrus de mamferos e
os avirios. Como o conhecimento acumulado
sobre essas novas espcies e cepas virais ainda
escasso e, principalmente, devido ao impacto
ainda no avaliado desses vrus na sade animal,
neste captulo sero apenas consideradas as duas
espcies clssicas de ortoreovrus: mamferos e
avirios.
3 Gnero Orthoreovirus
778
Captulo 30
Tabela 30.2. Vrus do gnero Orthoreovirus: segmentos genmicos, protenas codificadas e sua localizao nos
vrions.
Protena
Genoma
Segmento
Classe
L1
3854
1267
L2
3916
1289
L3
3901
1275
M1
2304
736
M2
2203
708
M3
2241
NS+
721
NSC
681
Nucleotdeos
S1
1416
Denominao Aminocidos
Localizao/funo
#1
455
#1S
120
No-estrutural, funo
desconhecida
S2
1331
#2
418
S3
1198
#NS
366
10
S4
1196
#3
365
relativa resistncia das partculas virais, desinfetantes comuns, como a formalina, lisol, derivados
fenlicos e perxido de hidrognio, devem ser
utilizados com cautela, pois, dependendo da concentrao e do tempo de exposio, os reovrus
podem manter a sua viabilidade. O hipoclorito
de sdio e o etanol a 95% so os desinfetantes de
eleio. Nos processos de desinfeco de instalaes e equipamentos, deve-se sempre considerar
que os reovrus so primariamente vrus respiratrios e entricos, e que secrees e excrees so
as fontes primrias de contaminao do ambiente, gua e alimentos. Os vrions so sensveis
ao da luz ultravioleta, e essa caracterstica deve
ser considerada para o manejo de vazio sanitrio
em ambientes com incidncia de luz solar direta.
779
Reoviridae
780
Captulo 30
faixas etrias mais avanadas. A taxa de morbidade pode ser de 100%, mas a taxa de mortalidade relativamente baixa (em mdia 5%). A
evoluo pode ser aguda ou crnica, e as aves
comprometidas apresentam dor articular, claudicao com conseqentes diculdades de locomoo e alimentao. Devido perda da condio
corporal e refugagem, muitas aves so eliminadas do lote. A intensidade dos sinais clnicos e
o nmero de aves comprometidas esto relacionados com a idade da ave e com o sorotipo viral
envolvido. Fatores intercorrentes, como infeces
mistas com Mycoplasma synoviae e falhas nos manejos zootcnico, nutricional e sanitrio, tambm
podem agravar a infeco.
Os prejuzos econmicos ocasionados pela
reovirose aviria em criaes comerciais de frangos de corte e de perus devem-se incapacidade
e denhamento de aves com quadro clnico de artrite/tenosinovite, ao aumento da taxa de mortalidade e reduo da performance geral, incluindo ganho de peso e converso alimentar. Essas
condies ocasionam um aumento da refugagem
e perda da aceitao das aves no mercado.
4 Gnero Rotavirus
Os rotavrus membros do gnero Rotavirus
so considerados em todo o mundo como um
dos principais vrus entricos tanto para humanos quanto para animais. A maioria das infeces agudas pelos rotavrus caracteriza-se por
sua gravidade, sendo, com freqncia, acompanhadas de diarria, desidratao, desequilbrio
eletroltico e acidose. Os rotavrus esto amplamente disseminados na natureza, e uma gama de
hospedeiros susceptvel infeco, incluindo
mamferos domsticos e silvestres e tambm as
aves. A infeco, quando acomete animais jovens,
geralmente acompanhada de sinais clnicos. Em
adultos, infeco com freqncia assintomtica,
porm esses indivduos podem ser portadores e
transmissores do vrus para indivduos jovens da
mesma espcie. Na dependncia da virulncia da
cepa viral infectante e em hospedeiros com potencial de resposta imunolgica comprometido,
tanto por infeces imunodepressoras recorrentes quanto pela idade avanada, algumas infec-
Reoviridae
4.1 Classificao
De acordo com as diferenas antignicas
detectadas na VP6, que a protena mais abundante dos vrions, os rotavrus podem ser classi-
781
782
Captulo 30
Rotavrus grupo A
Outros grupos
Tpicos
Atpicos
humanos
humanos
bovinos
sunos
-1
2
3
4
5
< <
6
7
8
9
10
11
<
longo curto
<
<
d d
<
<
Figura 30.2. Ilustrao esquemtica do padro de migrao dos segmentos genmicos dos rotavrus pertencentes aos
eletroferogrupos A a E, aps eletroforese em gel de poliacrilamida.
783
Reoviridae
Partcula
com capsdeo
triplo
Partcula
com capsdeo
duplo
VP4, VP7
Core ou ncleo
VP6
Agentes
quelantes
Agentes
caotrpicos
(10mM EDTA)
(1,5M CaCl2)
Protenas:
VP1, 2, 3, 4, 6, 7
Protenas:
VP1, 2, 3, 6
Protenas:
VP1, 2, 3
Infecciosa
No-infecciosa
No-infecciosa
Figura 30.3. Ilustrao esquemtica da estrutura dos trs tipos de partculas vricas dos rotavrus que podem ser
visualizadas sob ME.
784
Captulo 30
VP1
2
3
4
VP2
VP3
VP4
NSP1
VP6
7
8
9
NSP2
NSP3
VP7
10
NSP4
11
NSP5
NSP6
Segmentos
genmicos
Protenas
Figura 30.4. Eletroforese em gel de poliacrilamida, mostrando os segmentos genmicos (dsRNA) dos rotavrus
(esquerda); as protenas codificadas por cada segmento (centro) e uma ilustrao simplificada de uma partcula vrica
e os seus componentes (direita). Os segmentos esto numerados com base na migrao do genoma do rotavrus grupo
A da cepa Sa11.
O prottipo smio SA11 foi o primeiro rotavrus a ter o genoma completamente seqenciado. As extremidades 5 das tas genmicas
de polaridade positiva possuem uma estrutura
cap, mas diferentemente da maioria dos mRNA
celulares, no possuem as extremidades 3 poliadeniladas. Todos os genes dos rotavrus esto
anqueados por regies traduzidas de extenso
varivel prximo as extremidades 5 e 3. Em todos os segmentos, essas seqncias no-traduzidas anqueiam uma nica seqncia aberta de
leitura (open reading frame, ORF), com exceo do
segmento 11, que possui duas ORFs. Quase todos
os mRNA terminam com a seqncia consenso
5-UGUGACC-3, sugerindo que se constituam
em sinais importantes para a transcrio, transporte do RNA e replicao e/ou encapsidao
dos segmentos genmicos.
785
Reoviridae
Tabela 30.3. Caractersticas dos segmentos genmicos e protenas codificadas pelo genoma segmentado dos rotavrus
Localizao
nas partculas
Nmero
de cpias
125.005
Nucleocapsdeo
12
VP2
102.431
Nucleocapsdeo
120
VP3
98.120
Nucleocapsdeo
12
Guanililtransferase; metiltransferase;
protena bsica.
VP4
86.782
Capsdeo
120
60.000
28.000
Gene
Protena
VP1
Massa (Da)
Funes
NSP1
58.654
Protena no-estrutural
VP6
48.16
Capsdeo
780
NSP3
34.600
Protena no-estrutural
NSP2
34.700
Protena no-estrutural
VP7
7.368
780
10
NSP4
20.290
Protena no-estrutural
11
NSP5
21.725
Protena no-estrutural
NSP6
11.012
Protena no-estrutural
Capsdeo externo
786
4.3 Replicao
O mecanismo de replicao dos rotavrus
tem sido elucidado a partir de estudos realizados
em clulas da linhagem contnua MA-104 (clulas renais de macaco rhesus). Esta linhagem celular uma das mais permissivas infeco pelos
rotavrus e tem sido amplamente utilizada para a
caracterizao desses vrus.
O monitoramento dos estgios iniciais da
replicao viral por ME revela que somente as
partculas com o capsdeo triplo, contendo a
VP4 ntegra, so capazes de penetrar produtivamente nas clulas hospedeiras. A adsoro viral
superfcie celular mediada pela VP4 ou por
seu produto de clivagem (VP5). Alguns estudos
apontam tambm a participao da VP7 nas ligaes vrion-clula. Entretanto, a penetrao dos
rotavrus nas clulas hospedeiras parece iniciar
com um processo complexo, que necessita da interao dessas duas protenas (VP4 e VP7) para
estabelecer a ligao inicial.
A infeco in vivo pelo rotavrus est restrita a clulas do topo das vilosidades do intestino
delgado, o que sugere a existncia de receptores
especcos nessas clulas. A infeco in vitro tambm limitada a linhagens celulares epiteliais de
origem intestinal e renal. Embora grandes avanos no conhecimento da biologia molecular e
estrutural dos rotavrus j tenham sido obtidos,
pouco conhecido sobre os seus provveis receptores. A infectividade de algumas cepas de rotavrus de origem animal depende da presena de
cido silico (AS) na superfcie celular. Entretanto, esta interao parece no ser essencial, uma
Captulo 30
vez que j foram identicadas molculas na superfcie celular resistentes a neuraminidase (ASindependentes), que interagem com a maioria das
cepas de rotavrus de origem humana e algumas
de origem animal. Portanto, tem sido proposto
que existam, pelo menos, dois receptores para
o rotavrus: os AS-dependentes (gangliosdeos)
e os AS-independentes (integrinas). Estudos recentes sugerem uma interao inicial dos vrions
com o receptor AS-dependente, seguida por uma
segunda interao com um receptor AS-independente. Aparentemente a ligao com o segundo
receptor mais especca. A interao inicial
dependente de concentraes de sdio e ocorre
na faixa de pH compreendida entre 5,5 e 8.
Aps a interao do vrion com os receptores
celulares, a partcula viral penetra no citoplasma
celular por um mecanismo ainda no completamente conhecido. Entre os mecanismos propostos, destacam-se a penetrao direta atravs da
membrana plasmtica aps a clivagem proteoltica de VP4 e exposio do peptdeo de fuso VP5;
e a penetrao aps internalizao por endocitose (Figura 30.5).
Estudos realizados com a cepa OSU do rotavrus suno conrmam a internalizao dos
vrions por endocitose, mediada por receptor
especco, e sugerem que o desnudamento pode
ocorrer pela ao de enzimas lisossomais. A endocitose constitui um modelo de entrada clciodependente, sendo que a ligao aos receptores
celulares induz a formao de uma vescula endoctica que isola a partcula de capsdeo triplo
em um compartimento intracelular. A reduo
da concentrao de clcio no interior da vescula
endossomal ocorre por meio de difuso simples
e pode provocar alteraes conformacionais no
capsdeo, com a solubilizao das protenas do
capsdeo externo. Com a liberao dos peptdeos do capsdeo externo, ocorre o rompimento da
membrana lisossomal, permitindo a penetrao
da partcula subviral, isenta do capsdeo externo, no citoplasma (Figura 30.5). Nesse momento,
ocorre a ativao da transcriptase viral, dando
incio transcrio dos segmentos genmicos.
O ciclo replicativo ocorre integralmente no
citoplasma, independente de estruturas e mecanismos nucleares. A sntese dos mRNA virais
modulada pela enzima viral RNA polimerase
787
Reoviridae
Membrana plasmtica
Citoplasma
1
2
3
4
5
Figura 30.5. Modelo para a penetrao dos rotavrus em clulas susceptveis, por meio de endocitose clciodependente. 1) Internalizao por endocitose; 2) Efluxo de ons clcio do interior das vesculas; 3) Baixa na
concentrao de Ca++ e acidificao das vesculas; 4) Solubilizao do capsdeo externo (VP5, 7 e 8); 5)
Permeabilizao da membrana, lise da vescula endoctica, liberao das partculas com duplo capsdeo no citosol.
788
Captulo 30
12
13
Viroplasma
cap
AAAA
(-)
cap
10
AAAA
(-)
cap
AAAA
11
(-)
4
3
cap
cap
cap
cap
AAAA
cap
AAAA
AAAA
AAAA
cap
AAAA
cap
AAAA
AAAA
VP7
Citoplasma
RER
Ncleo
Figura 30.6. Ciclo replicativo dos rotavrus. A internalizao ocorre por endocitose mediada por receptor (1), e a
penetrao ocorre aps a desestabilizao da partcula vrica e permeabilizao da membrana endoctica
desencadeadas pelo efluxo de clcio (2). A penetrao direta atravs da membrana tambm tem sido proposta (3). A
transcrio primria ocorre ainda no interior de partculas semi-ntegras (4) e resulta na produo de mRNA para a
sntese protica (5) e para a replicao do genoma (6). A replicao do genoma (6, 7) e os estgios iniciais da
morfognese (8) ocorrem no interior de estruturas denominadas viroplasmas, que contm RNAs e protenas virais e
partculas vricas em formao. As partculas com duplo capsdeo formadas no viroplasma adquirem um envelope
lipdico temporrio ao penetrarem no RER (9). A remoo do envelope (10) seguida da adio da VP7, formando o
capsdeo externo e estabilizando as partculas (11). Acredita-se que os vrions maduros sejam liberados por lise
celular (12), embora outros mecanismos j tenham sido propostos (13).
Reoviridae
789
790
Captulo 30
4.4.2 Imunidade
Os mecanismos imunolgicos envolvidos
na resposta s infeces pelos rotavrus ainda
no esto totalmente esclarecidos. A imunidade
791
Reoviridae
o entendimento dos fatores imunolgicos envolvidos, bem como para a denio das diretrizes
para o desenvolvimento de vacinas ecazes.
4.4.3 Diagnstico
Devido semelhana com os sinais clnicos
de infeces entricas causadas por outros enteropatgenos, como bactrias, protozorios e vrus,
o diagnstico denitivo das rotaviroses depende
essencialmente da realizao de testes laboratoriais. A ME muito eciente na deteco do vrus, uma vez que a morfologia tpica dos rotavrus permite a sua identicao sem a necessidade
do uso de soro hiperimune (imunomicroscopia
eletrnica). A ME tambm freqentemente utilizada com o objetivo de solucionar os resultados
discrepantes de outros mtodos de diagnstico.
Entretanto, essa tcnica mostra-se invivel quando o diagnstico envolve um grande nmero de
amostras a serem analisadas.
O isolamento viral em cultivo celular tem
pouco valor prtico para o diagnstico, particularmente por ser uma tcnica laboriosa, demorada e exigir a manuteno de linhagens celulares,
que torna o procedimento oneroso. As linhagens
celulares rotineiramente empregadas para o isolamento do rotavrus incluem a MA-104b e HT 29
(clula de tumor retal humano). Embora no seja
utilizada como tcnica de diagnstico de rotina,
o cultivo do rotavrus um mtodo indispensvel para o desenvolvimento de estudos relacionados s caractersticas antignicas e moleculares
das cepas virais e para a produo de antgenos
empregados no diagnstico e na elaborao de
vacinas.
Outros mtodos tambm j foram padronizados para a deteco do rotavrus, como a xao de complemento, imunouorescncia (IFA),
radioimunoensaio (RIA), hemaglutinao (HA)
e aglutinao em ltex. Os testes imunoenzimticos (ELISA) constituem um dos mtodos mais
difundidos no diagnstico da rotavirose animal
devido ao seu limiar de deteco, facilidade de
execuo, baixo custo e rapidez na obteno dos
resultados. Vrios testes de ELISA com anticorpos de captura foram desenvolvidos para o diagnstico do rotavrus grupo A. Kits de ELISA, em
792
Captulo 30
793
Reoviridae
resposta imunolgica plena e duradoura. A variabilidade antignica e molecular dos rotavrus, gerada pelas caractersticas prprias de seu genoma
e expressas nos vrios grupos sorolgicos, sorotipos e mesmo variantes de sorotipos circulantes
representa um grande obstculo para a obteno
de vacinas efetivas. Devido complexidade e diversidade genmica dos rotavrus, ca evidente
que o prvio conhecimento dos gentipos P e G
das cepas virais circulantes em uma regio, bem
como a sua distribuio temporal, fundamental
para o planejamento de qualquer programa de
vacinao.
5 Gnero Orbivirus
rogrupos, nmero de sorotipos, principais vetores e hospedeiros desses vrus esto listados na
Tabela 30.4.
Dentre as espcies de orbivrus importantes
na medicina veterinria, incluem-se o vrus da
lngua azul (bluetongue virus, BTV) que possui 24
sorotipos conhecidos; o vrus da doena hemorrgica epizotica dos cervdeos (EHDV), com dez
sorotipos; o vrus da peste eqina (african horse sickness virus, AHSV), com nove sorotipos; o vrus
da encefalose eqina (EEV), com sete sorotipos, e
o vrus Palyam. Estas trs ltimas enfermidades
so exticas no Brasil e encontram-se basicamente restritas aos continentes africano e asitico.
Tabela 30.4. Principais membros do gnero Orbivirus associados com doenas em animais.
Sorogrupo
Sorotipos
Hospedeiros
Doena
Distribuio
geogrfica
Peste eqina
1 a 10
Eqideos,
zebras, ces
Doena cardiopulmonar,
febre
Lngua azul
1 a 24
Rinite, estomatite,
Ovinos, bovinos,
caprinos, cervdeos laminite
frica,sia,
Austrlia, Amricas
Culicoides
EHDV
(vrios
sorotipos)
Cervdeos
Amricas, Austrlia,
frica
Culicoides
Ibakari
Kawanabe
Bovinos
Culicoides
Kasba
Bovinos
Abortos
Culicoides
Chuzan
Bovinos
Doena
epizotica
hemorrgica
Palyam
frica do Sul
Vetor
Culicoides
794
Captulo 30
795
Reoviridae
Tabela 30.5. Caractersticas dos segmentos genmicos e das protenas codificadas pelo genoma dos orbivrus.
Segmento N de
do genoma bases
L1
3.954
149.588
Principais funes
Ncleo interno
RNA polimerase
L2
2.926
VP2
111.112
Capsdeo externo
L3
2.772
VP3
103.344
Subncleo
M4
2.011
VP4
76.433
Ncleo interno
Funo enzimtica de
guanililtransferase e metiltransferase.
M5
1.639
VP5
59.163
Capsdeo externo
Penetrao viral.
M6
1.770
NS1
64.445
No-estrutural
S7
1.156
VP7
38.548
Subncleo
Determinao do sorogrupo,
penetrao em clulas de insetos.
S8
1.124
NS2
40.999
No-estrutural
S9
1.046
VP6
35.750
Ncleo interno
S10
822
NS3
25.572
No-estrutural
NS3A
24.020
no ncleo e seqncia de aminocidos, acreditase que seja a RNA polimerase viral. Essa protena
seria a responsvel pela transcrio e replicao
do genoma durante a replicao viral nas clulas
hospedeiras.
O ncleo icosadrico do BTV circundado
pela camada externa ou capsdeo, que composto
pelas protenas VP2 e VP5. Estas protenas so as
menos conservadas entre os diferentes sorotipos
do vrus. A VP2 o principal determinante do sorotipo e responsvel pelo estmulo para a produo de anticorpos neutralizantes. Alm disso,
apresenta atividade de hemaglutinao e hemadsoro. A segunda protena do capsdeo externo
a VP5, que possui 526 aminocidos. Esta protena mais varivel do que as outras protenas do
ncleo, mas mais conservada do que a VP2. A
VP5 possui uma funo importante na penetrao do vrus na membrana do endossomo, sendo
responsvel pela liberao do ncleo viral no ci-
796
Captulo 30
B
VP2
VP5
VP7
dsRNA
VP1
VP3
VP4
VP6
Figura 30.7. Partculas vricas dos orbivrus. A) Fotografia de microscopia eletrnica de um vrion; B) Ilustrao
esquemtica da estrutura de uma partcula vrica indicando os elementos constituintes.
5.3 Replicao
A adsoro dos vrions do BTV s clulas
hospedeiras parece envolver uma interao rpida e especca de algumas regies da VP2 com
componentes da membrana celular, sendo esta
797
Reoviridae
damente reprimida. O primeiro polipeptdeo viral detectado duas a quatro horas ps-infeco,
e a sntese protica viral atinge o pico entre nove
e 11 horas aps, diminuindo progressivamente
at a morte celular.
A protena VP6 possui funo de helicase
e desenrola os componentes do duplex de RNA
genmico, enquanto a VP1 inicia a sntese de molculas de RNA de sentido positivo, para serem
utilizadas como mRNA para a sntese protica.
Uma vez sintetizadas, essas molculas so
modicadas pela atividade enzimtica da VP4,
sendo metiladas na extremidade 5. Os mRNA,
assim sintetizados, so exportados dos capsdeos
semi-ntegros para o citoplasma, para o incio da
traduo. A ta de RNA de polaridade negativa
sintetizada tambm pela ao da VP1, iniciando a partir da extremidade 3 das tas positivas.
Em geral, os segmentos genmicos menores so
transcritos com maior freqncia, porm o fragmento que codica a protena NS1 o mais abundantemente transcrito.
A condensao dos RNAs recm-produzidos pela transcrio e as protenas recm-produzidas pela traduo formam os corpsculos
de incluso, onde os vrions so montados gradativamente, desde ncleo at partcula viral
completa, e, subseqentemente, liberados para o
citoplasma. A VP2 e a VP5 so adicionadas aos
vrions na periferia dos corpsculos.
Os corpsculos de incluso podem ser granulares ou brilares, so encontrados dispersos
pela clula e correspondem aos stios de morfognese das partculas virais. Esses corpsculos
so compostos por ssRNA, dsRNA, ncleos e
subncleos virais, algumas protenas estruturais
(VP3, VP7 e VP5) e, principalmente, a NS2. Esta
protena pode ligar-se ao RNA viral, facilitando, assim, o seu encapsidamento no interior dos
ncleos virais. Protenas estruturais e partculas
virais completas so observadas em maior concentrao na periferia dos corpsculos.
A NS1 produzida em grandes quantidades, formando os tbulos que esto presentes
em grande abundncia, predominantemente ao
redor ou nas proximidades do ncleo da clula
hospedeira. Essas estruturas so caractersticas
da infeco por orbivrus e apresentam diferen-
as em relao a sua espessura e extenso, variando para cada espcie viral, o que sugere que
possuem uma funo especca para cada grupo
viral. Os corpsculos, os tbulos e as partculas
virais recm-formadas so associadas com redes
de lamentos intermedirios no citoesqueleto celular.
No processo de morfognese das partculas,
ocorre inicialmente a formao do subncleo,
que composto pela VP3, VP4, VP1 e VP6. Em
seguida, so montados e adicionados os trmeros de VP7, formando o ncleo viral. Acredita-se
que a NS2, com a sua capacidade de ligao ao
RNA, facilita o empacotamento dos segmentos
genmicos no ncleo viral. A seguir, as protenas
VP2 e VP5 se associam atravs da interao com
a VP7.
Vrios estudos da morfognese do BTV
tm sido conduzidos, utilizando a expresso de
protenas individuais no sistema de baculovrus.
Nesses estudos, observou-se que as protenas estruturais possuem a capacidade de se associarem
entre si, na ausncia do genoma, formando partculas chamadas de CLP (core like particles) ou VLP
(virus like particles), dependendo da combinao
das protenas produzidas.
Aps a formao do capsdeo pela adio
da VP2 e VP5 ao ncleo viral, as partculas virais
esto prontas para o seu egresso das clulas infectadas. Nas fases iniciais da infeco, os vrions
podem ser liberados por brotamento atravs da
membrana plasmtica, onde adquirem um envelope temporrio. Quando j h desestruturao
da membrana celular, grupos de partculas virais
se movem atravs de membrana plasmtica rompida e so, assim, liberados. A protena no-estrutural NS3 tem sido identicada nesses stios,
sugerindo um papel importante, provavelmente
mediando a liberao das partculas por exocitose.
5.4 Patogenia
Os orbivrus so transmitidos para os hospedeiros vertebrados por insetos hematfagos.
Aps a replicao primria nos linfonodos regionais, os vrions se disseminam para o bao,
timo e outros linfonodos associados s clulas
798
sangneas. O BTV se liga a glicoforinas na superfcie dos eritrcitos de bovinos e ovinos, onde
persiste em invaginaes da membrana. Nesses
locais, os vrions permanecem protegidos dos
anticorpos circulantes por longo perodo, resultando em viremia prolongada. Essa viremia de
longa durao proporciona uma contnua oportunidade para a transmisso do agente.
A maioria dos orbivrus so neurovirulentos
e alguns so neuroinvasivos quando inoculados
em camundongos ou hamsters, e os fetos so particularmente susceptveis a infeco.
Uma caracterstica marcante da patogenia
da infeco por esses vrus a sua capacidade de
replicar e destruir clulas endoteliais em diferentes rgos. A lise dessas clulas leva injria vascular, resultando em leso dos capilares, hemorragias e coagulao intravascular disseminada.
Clinicamente, observa-se edema generalizado,
hidrotrax, hidropericrdio, hemorragias generalizadas, hipotenso e choque.
A capacidade de atravessar a placenta e infectar os fetos outra propriedade importante
dos orbivrus. A infeco de ovelhas e vacas, com
o BTV, e de bovinos, com o vrus de Ibaraki ou o
vrus Kasba do grupo Palyam, pode resultar em
abortos e no nascimento de produtos com anormalidades, incluindo hidrocefalia, artrogripose,
prognatismo, cegueira e surdez.
Captulo 30
5.5.1 Epidemiologia
O BTV capaz de infectar naturalmente uma
variedade de ruminantes domsticos e selvagens,
incluindo ovinos, caprinos, bovinos, bubalinos,
camelos, cervdeos e outros herbvoros, como os
elefantes. A doena clnica mais comum nos
ovinos e cervdeos. Embora a infeco nos bovinos seja de grande importncia epidemiolgica,
a infeco nesta espcie geralmente subclnica.
Em 1994, nos Estados Unidos, foi demonstrada
uma associao entre a administrao de vacinas
contaminadas com o BTV e morte fulminante em
ces com problemas cardacos e respiratrios. A
importncia desses achados desconhecida.
O vrus transmitido por mosquitos do gnero Culicoides, que possuem grande variao de
hbitos alimentares, preferncia por hospedeiros
e competncia na transmisso da infeco. No
Brasil, os mosquitos Culicoides sp. so denominados maruim, mosquitos-plvora ou mosquitos-do-mangue. Apesar de existirem poucos
estudos sobre esses vetores no Pas, vrias espcies competentes na transmisso da doena, como
o Culicoides insignis, j foram descritas.
Reoviridae
Os mosquitos adquirem o vrus quando ingerem sangue de um hospedeiro virmico. Apenas as fmeas so hematfagas e requerem pelo
menos um repasto sangneo para a concluso de
um ciclo ovariano. Por isso o pico de atividade
desses insetos est relacionado com o seu ciclo
reprodutivo. Estaes quentes e midas favorecem o aparecimento dos Culicoides e, conseqentemente, a maior transmisso do vrus. A populao desses insetos tende a diminuir no outono e
inverno, quando a temperatura mais baixa.
Aps a ingesto e adsoro na parede do intestino mdio do mosquito, o vrus se multiplica em tecidos intestinais e em outros tecidos do
inseto, incluindo as glndulas salivares. Assim,
pode ser transmitido a um novo hospedeiro ao se
alimentar novamente.
A viremia que ocorre nos hospedeiros
essencial para a transmisso do vrus, uma vez
que, nessa fase, o vrus encontra-se associado s
clulas sangneas (principalmente moncitos,
linfcitos e eritrcitos). Nos ovinos e caprinos, a
viremia dura em mdia 50 e 28-41 dias, respectivamente. Nos bovinos, a viremia pode persistir
por mais de 100 dias, sendo estes animais considerados de grande importncia epidemiolgica
por servirem como reservatrios do vrus por perodos prolongados. Durante esse perodo, o vrus
circula intimamente associado com a membrana
dos eritrcitos, cando protegido dos anticorpos
neutralizantes. Vrias espcies de Culicoides competentes na transmisso do BTV se alimentam
preferencialmente nos bovinos, mesmo quando
ovinos e caprinos esto presentes.
A infeco pelo BTV est distribuda nas
reas tropicais e subtropicais em todos os continentes, entre as latitudes 40N e 35S, onde est
concentrado aproximadamente 70,7% do rebanho ovino mundial. Essa rea inclui as Amricas,
frica, parte da Europa, sia e Oriente Mdio.
Muitos pases localizados em reas tropicais,
como a sia, Caribe e Amrica do Sul, apresentam evidncias sorolgicas da presena do BTV
em ovinos e outros ruminantes, porm sem relatos da ocorrncia de doena.
A distribuio geogrca da BT pode ser dividida em trs reas epidemiolgicas, com o objetivo de facilitar a anlise da epidemiologia da
doena:
799
a) reas endmicas: onde a infeco comum, mas a ocorrncia da doena clnica rara
devido presena de grande nmero de animais
soropositivos. Nessas reas, o vrus pode ser isolado, com freqncia, de insetos vetores ou de
animais virmicos. A doena pode ocorrer aps a
introduo de animais virmicos infectados com
sorotipos exticos para a rea ou quando animais
susceptveis, oriundos de zonas livres da doena,
so introduzidos nessas reas;
b) reas epiendmicas: onde o nmero de
animais soropositivos varia e a ocorrncia da doena geralmente localizada em reas especcas.
Casos de doena podem ocorrer em formas de
surtos espordicos, dependendo principalmente
de variaes climticas, como temperatura, umidade do ar, velocidade e direo dos ventos;
c) reas livres: onde no h animais soropositivos, geralmente pela impossibilidade de sobrevivncia dos insetos vetores.
Vrios fatores podem alterar a distribuio
do vrus dentro dessas reas, como alteraes
climticas em regies limtrofes, movimento de
animais, mudanas nas caractersticas da estao chuvosa e, principalmente, movimento dos
ventos, que podem trazer os vetores Culicoides de
regies distantes. O movimento dos hospedeiros
para reas endemicamente infectadas em busca
de alimentos ou de climas mais amenos tambm
pode levar ao aparecimento de surtos localizados. Assim, essas zonas so dinmicas e representam o resultado da interao entre o vrus, o
meio ambiente e os hospedeiros.
No passado, o BTV j havia sido esporadicamente detectado em alguns pases da costa do
mar Mediterrneo, mas, nas ltimas dcadas, parecia estar ausente do continente. No entanto, em
2006, foi reintroduzido em vrios pases europeus
(Holanda, Blgica e Alemanha), provavelmente
a partir da frica, onde permanece endmico.
A reintroduo do vrus na Europa causou uma
grande repercusso, pelas possveis conseqncias sanitrias e comerciais e tambm pelo receio
de a infeco se tornar endmica em algumas regies com condies climticas propcias para a
sobrevivncia dos vetores.
Os inquritos sorolgicos, realizados no territrio brasileiro, em bovinos, caprinos, ovinos e
bubalinos por meio da tcnica de imunodifuso
800
Captulo 30
Reoviridae
801
802
5.5.3 Diagnstico
Deve-se suspeitar de lngua azul quando os
sinais clnicos caractersticos da doena forem
observados em ovinos e bovinos, principalmente
nas estaes de maior atividade dos vetores ou
quando animais provenientes de outras regies
so introduzidos em reas endmicas.
Para o diagnstico laboratorial, amostras de
sangue total e de soro devem ser coletadas de vrios animais do rebanho. Bao, medula, corao
e linfonodos mesentricos so os tecidos de escolha a serem coletados em animais submetidos
necropsia. Sangue, soro, bao e tecido nervoso
devem ser coletados de cordeiros ou bezerros
com problemas congnitos. O material deve ser
enviado refrigerado, o mais rpido possvel, para
o laboratrio.
O diagnstico sorolgico da infeco pelo
BTV baseado principalmente nas tcnicas de
IDGA e ELISA, que identicam a exposio dos
animais a vrus do sorogrupo BTV. Esses testes
Captulo 30
803
Reoviridae
5.6.1 Epidemiologia
O EHDV pode infectar uma grande variedade de ruminantes silvestres e domsticos, mas
os sinais clnicos so observados principalmente
em cervdeos. Nos bovinos, a infeco raramente acompanhada de sinais clnicos. J a doena
de Ibaraki freqentemente afeta essa espcie. Os
ovinos podem ser infectados experimentalmente, mas raramente desenvolvem sinais clnicos; e
os caprinos parecem no ser susceptveis infeco.
A infeco pelo EHDV est presente na
Austrlia, sia e pases africanos. Na Amrica
do Norte, a infeco considerada, junto com a
lngua azul, a doena mais importante dos cervdeos. Animais soropositivos para o vrus j foram identicados tambm na Amrica do Sul. A
doena de Ibaraki est restrita ao Japo, Coria e
Tailndia, apesar de bovinos soropositivos terem
sido identicados tambm na Austrlia e Indonsia.
No Brasil, poucos estudos tm sido feitos em
relao ao EHDV. Apesar de o vrus no ter sido
isolado e tipicado, existem evidncias sorolgicas da sua ocorrncia em cervdeos de vida livre
nos estados de So Paulo e Mato Grosso. Atravs
de testes sorolgicos, realizados em 81 cervdeos
804
Captulo 30
surtos espordicos de uma doena severa no Japo. Os sinais clnicos consistem de febre, leses
erosivas e ulcerativas na cavidade oral e na mucosa esofgica e edema na pele. A mortalidade
pode atingir 10% do rebanho. Leses degenerativas na musculatura so encontradas no esfago, laringe, lngua e musculatura esqueltica. Laminite e problemas de casco podem tambm ser
observados. Nos animais gestantes, pode ocorrer
morte fetal e, se a infeco ocorrer entre os dias 70
e 120 de gestao, pode ocorrer o nascimento de
animais com hidrocefalia, malformaes fetais e
distrbios neurolgicos.
Os achados macroscpicos e microscpicos
da EHD so caracterizados por hemorragias, que
vo desde petquias a equimoses, e envolvem
diferentes tecidos e rgos, sendo mais freqente o envolvimento do corao, fgado, bao, rim,
pulmo e trato gastrintestinal. Edema generalizado e aumento do uido pericrdico so achados
freqentes. As alteraes encontradas so conseqncias da degenerao das clulas endoteliais
dos vasos sangneos e da interferncia no processo de coagulao.
5.6.3 Diagnstico
Uma combinao do histrico, epidemiologia, caractersticas clnicas e achados macroscpicos podem levar suspeita da EHD. No entanto,
pelas similaridades com outras enfermidades, o
isolamento e identicao do vrus so essenciais
para o diagnstico conclusivo. A ocorrncia sazonal e o quadro de hemorragias generalizadas so
caractersticas que fortalecem a suspeita clnica.
No diagnstico diferencial, devem ser consideradas a BT, febre aftosa, fotossensibilizao e febre
catarral maligna.
Na doena em cervdeos, os melhores tecidos para o isolamento e/ou identicao do
agente ou seus produtos so bao e linfonodos,
seguidos de fgado, pulmo e corao. O sangue
total, coletado com anticoagulantes, a amostra
indicada para a pesquisa do EHDV e do vrus
Ibaraki. O material deve ser enviado sob refrigerao ao laboratrio. Tecidos xados em formol,
para anlise histopatolgica, tambm podem
ser coletados. O soro, principalmente nos casos
de doena crnica, pode ser til, e, se possvel,
Reoviridae
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RETROVIRIDAE
Ana Paula Ravazzolo & Ubirajara Maciel da Costa
31
1 Introduo
811
2 Classificao
811
811
3.1 O genoma
812
4 Replicao
815
819
819
819
820
821
822
823
823
824
824
824
824
825
825
826
826
827
827
828
828
828
829
829
829
830
830
831
831
832
832
833
833
834
834
835
835
835
836
836
6 Bibliografia consultada
836
1 Introduo
A famlia Retroviridae composta por um
grande nmero de vrus que podem ser encontrados em, virtualmente, todos os vertebrados. Os
retrovrus possuem vrions envelopados e apresentam duas molculas idnticas de RNA de ta
simples linear como genoma. Os membros dessa
famlia so assim denominados por possurem
uma enzima capaz de sintetizar uma molcula de
DNA pela transcrio do seu genoma, mecanismo
chamado de transcrio reversa. A enzima que
cataliza esta reao a transcriptase reversa (RT)
um componente dos vrions e possui, ainda,
outras atividades essenciais para a replicao viral. A etapa de transcrio reversa se constitui no
evento central da multiplicao dos retrovrus. O
ciclo replicativo dos retrovrus envolve tambm
uma etapa de integrao da cpia DNA do seu
cido nuclico no genoma da clula hospedeira,
etapa essencial para a expresso gnica e para a
produo de prognie viral. Esse evento faz com
que as infeces pelos retrovrus assumam um
carter persistente, ou seja, uma vez infectados,
os hospedeiros se tornam portadores do agente
pelo resto da vida. Alguns retrovrus tambm
tm sido descritos como indutores de tumores
em humanos e animais.
Os retrovrus foram responsveis por dois
marcos importantes nas Cincias Biolgicas, ambos relacionados com a descrio da enzima RT
DNA polimerase dependente de RNA por
Howard Temin, em 1970, que lhe valeu o prmio
Nobel. O primeiro refere-se quebra de um paradigma: at ento se acreditava que a transcrio
s ocorria de DNA para RNA. O segundo, baseado justamente nesta caracterstica, proporcionou
grandes avanos na Biologia Molecular, pela utilizao de enzimas com essa propriedade na obteno de DNA complementar (cDNA) aos RNA
mensageiros (mRNA).
Os retrovrus podem ser encontrados em
praticamente todas as espcies de animais domsticos, com signicado clnico e sanitrio variveis. Dentre os retrovrus de importncia veterinria, destacam-se o vrus da anemia infecciosa
eqina (EIAV), o vrus da leucose bovina (BLV),
o Maedi-Visna de ovinos, o vrus da artrite e en-
2 Classificao
Segundo o Comit Internacional de Taxonomia Viral (International Comittee of Viral Taxonomy
ICTV), a famlia Retroviridae est dividida em
duas subfamlias, sendo cada subfamlia dividida
em gneros (Tabela 31.1). A diviso em subfamlias baseia-se mais em propriedades patognicas
do que em critrios moleculares. A anlise de homologia de nucleotdeos, estrutura e organizao
genmica permite a diviso em grupos. A maioria dos retrovrus de importncia em veterinria
est classicada na subfamlia Orthoretrovirinae;
na subfamlia Spumaretrovirinae, os Spumavirus
ainda no foram associados com doenas.
812
Captulo 31
Subfamlia
Orthoretrovirinae
Gnero
Espcie viral
Alpharetrovirus
Betaretrovirus
Gamaretrovirus
Deltaretrovirus
Epsilonretrovirus
Lentivirus
Spumaretrovirinae
Spumavirus
ras dos retrovrus so, aproximadamente, esfricas e possuem um dimetro que varia entre 80
e 120 nm para os diferentes vrus. A Figura 31.1
apresenta uma fotograa de microscopia eletrnica e uma ilustrao esquemtica de partculas
vricas dos retrovrus.
3.1 O genoma
O genoma RNA dos membros da famlia
Retroviridae possui entre sete e 13 kb, dependendo do vrus, e contm trs genes principais: gag,
pol e env. O gene do antgeno especco de grupo
(group antigen gag) codica as protenas MA, a
NC e a CA. O gene pol codica as enzimas RT, IN
e PR. O gene env codica as protenas do envelope (TM e SU). As protenas Gag, Pol e Env so
sintetizadas como poliprotenas precursoras e so
clivadas somente na fase nal do ciclo, durante
o egresso e mesmo aps, dando origem s protenas individuais. A Figura 31.2 apresenta uma
ilustrao da estrutura e organizao do genoma
dos lentivrus de pequenos ruminantes (SRLV),
e a Figura 31.3 apresenta uma comparao da
estrutura e organizao genmica (provrus) de
diferentes retrovrus.
813
Retroviridae
SU
ENV
TM
NC
MA
IN
RNA
RT
CA
PR
Figura 31.1. Vrions da famlia Retroviridae. A) Fotografia de microscopia eletrnica de partculas do HIV; B)
Ilustrao esquemtica de um vrion mostrando os seus componentes. RNA: genoma; NC: protena do
nucleocapsdeo; CA: capsdeo; MA: matriz; IN: integrase; RT: transcriptase reversa; PR: protease; TM: glicoprotena
transmembrana; SU: glicoprotena de superfcie, ENV: envelope.
Cap
AAAA
tat
gag
rev
vif
pol
LTR
env
P55 Gag
MA
p16
CA
p25
gp160 Env
.Gag-pol
NC
p14
PR
p12
RT
p66/p51
IN
p29
SU
gp 135
LTR
TM
gp 45
Figura 31.2. Organizao do genoma e do provrus DNA dos lentivrus de pequenos ruminantes (SRLV ou CAEV e
MVV), com as protenas codificadas. LTR: regio repetida terminal. Genes: gag (antgenos especficos de grupo); pro
(protease); pol (polimerase); env (envelope). Protenas: MA: protena da matriz; CA: protena do capsdeo; NC:
protena do nucleocapsdeo; RT: transcriptase reversa; IN: integrase; PR: protease; TM: protena transmembrana; SU:
glicoprotena de superfcie. Os produtos dos genes tat, vif e rev so protenas acessrias com funes regulatrias. Os
nmeros abaixo de cada protena referem-se respectiva massa molecular.
814
Captulo 31
LTR
LTR
gag
ALV
pro
pol
env
LTR
LTR
BLV
pol
gag
env
pro
.tax
.rex
LTR
LTR
gag
pol
FeLV
env
rev
vif
LTR
gag
pol
env
tat
env
tat
LTR
LTR
LTR
pol
EIAV
S2
gag
rev
env
pol
LTR
gag
CAEV
Vif
rev
.tat
LTR
BIV
LTR
gag
Vif
LTR
env
pol
FIV
rev
Figura 31.3 Estrutura comparativa do genoma de diferentes retrovrus de animais domsticos. ALV: vrus da leucose
aviria; BLV: vrus da leucose bovina; FeLV: vrus da leucemia felina; CAEV: vrus da artrite-encefalite caprina; EIAV:
vrus da anemia infecciosa eqina; BIV: vrus da imunodeficincia bovina; FIV: vrus da imunodeficincia felina;
LTR: regio repetida terminal. Genes gag (antgenos especficos de grupo); pro (protease); pol (polimerase); env
(envelope). Genes acessrios: tax, rex, rev, vif, tat etc.
Retroviridae
4 Replicao
O ciclo replicativo dos retrovrus pode ser
dividido em duas fases. A primeira fase, que ocor-
815
816
Captulo 31
dar origem s protenas TM e SU) e nas protenas acessrias (nos retrovrus que as possuem).
Os mRNA com a extenso do genoma sero traduzidos nas protenas gag e pol (precursoras das
protenas MA, NC e CA; e RT, IN e PR, respectivamente), e tambm sero encapsidados em nucleocapsdeos pela NC e CA. Ambas as classes de
mRNAs possuem cap na extremidade 5 e so poliadeniladas na extremidade 3. As etapas da replicao do genoma e a estrutura das molculas
intermedirias (provrus) esto apresentadas na
Figura 31.4. As etapas tardias do ciclo, com o destino dos diferentes RNA transcritos a partir do
Genoma
Cap
U5
.gag
pol
env
U3
AAAA
RNA
U5
.gag
pol
env
U3
U5 DNA
U5
DNA
celular
AAAA
RNA
Integrao (2)
Provrus Integrado
DNA
celular
U3
U5
DNA
.gag
pol
env
U3
Transcrio (3)
Genoma
Cap
U5
.gag
pol
env
U3
817
Retroviridae
Ncleo
LTR
LTR
Transcrio
Cap
pol
gag
env
AAAAA
Sem splicing
Splicing
env
Citoplasma
AAA
gag
pol
Exportao
env
AA
Traduo
env
AAAAA
Traduo
Pol (PR, RT, IN)
Env (SU+TM)
Figura 31.5. Etapas tardias da replicao dos retrovrus. O provrus DNA integrado ao cromossomo celular
transcrito pela RNA pol II celular em toda a sua extenso, gerando transcritos com cap e poli-A. Uma parte desses
transcritos exportada do ncleo sem sofrer splicing e serve de mRNA para a sntese da poliprotena do gene gag e das
protenas do gene pol . A outra parte destes mRNAs, que no sofre processamento, exportada do ncleo e servir de
RNA genmico. Em fases tardias do ciclo, uma populao de transcritos sofre splicing e serve de mRNA para a
traduo em uma poliprotena (Env) que originar as glicoprotenas do envelope. Esta poliprotena transportada
para a membrana plasmtica, onde as protenas TM e SU so geradas por clivagem e ficam associadas membrana
que dar origem ao envelope viral. As poliprotenas dos genes gag e pol so transportadas para a membrana
plasmtica, onde interagem com o RNA genmico e com as caudas das glicoprotenas, membrana, resultando na
formao do nucleocapsdeo e brotamento das partculas vricas. A maturao completa das protenas precursoras
ocorre em partculas vricas extracelulares.
818
Captulo 31
A morfognese uma etapa pouco conhecida do ciclo replicativo dos retrovrus e parece
apresentar algumas diferenas entre os vrus.
Para a maioria dos vrus, as etapas de montagem
do nucleocapsdeo (interaes RNA + NC + CA)
e brotamento na membrana parecem ocorrer simultaneamente. Em outros, os nucleocapsdeos
so inicialmente montados no citoplasma e transportados at a membrana plasmtica, onde interagem com a protena MA e com as caudas das
glicoprotenas, resultando no brotamento e egresso. De qualquer forma, estes eventos ocorrem no
citoplasma, e as partculas vricas so liberadas
sem a necessidade de lise celular. Durante a morfognese, so includas algumas molculas das
enzimas virais RT, IN e PR nas partculas recmformadas. O ciclo replicativo dos retrovrus est
ilustrado esquematicamente na Figura 31.6.
O estudo da replicao dos retrovrus pode
ser realizado in vitro, em diferentes tipos celula-
Brotamento
Ligao aos
receptores
Maturao
Formao
do capsdeo
2
Penetrao
Transcrio
reversa
Traduo
Traduo
AAAAA
AAAAA
AAAAA
Provrus
AAAAA
RER
AAAAA
Transcrio
Integrao
Provrus
integrado
819
Retroviridae
5.1.1 Epidemiologia
O BLV est distribudo mundialmente, com
exceo de alguns pases europeus que erradicaram a infeco a partir da dcada de 1980. No
Brasil, a infeco est amplamente difundida,
com nveis variveis de prevalncia entre os rebanhos. Estudos sorolgicos j foram realizados
em praticamente todas as regies do pas, indicando a ampla distribuio da infeco, com
ndices de prevalncia geralmente maiores em
gado leiteiro. Na Serra de Botucatu, SP, foi detectada prevalncia de 52% entre animais e de 10
a 67% das propriedades eram positivas. No Rio
de Janeiro, 17,3% de 734 animais testados foram
positivos. Em um estudo envolvendo aproximadamente 10.000 amostras no Rio Grande do Sul,
detectou-se uma prevalncia de 8% de animais
soropositivos.
Em condies naturais, o vrus pode infectar
bovinos, zebunos, bfalos e capivaras. Infeces
experimentais j demonstraram a susceptibilidade de ovinos, caprinos e coelhos. Os coelhos podem desenvolver tumores ou imunodecincia
aps um tempo varivel de incubao.
Assim como os outros retrovrus, o BLV
apresenta uma baixa transmissibilidade, ou seja,
no facilmente transmitido. A transmisso ocorre predominantemente entre animais do mesmo
rebanho, e incomum ocorrer entre rebanhos
vizinhos. comum a existncia de regies onde
rebanhos positivos e negativos vizinhos coexistam por longos perodos, sem a disseminao do
vrus para os rebanhos livres. Essas observaes
indicam que um contato mais prximo entre os
animais necessrio para a transmisso. A transmisso iatrognica, pela aplicao de vacinas,
uso compartilhado de agulhas hipodrmicas,
administrao de medicamentos e aps o toque
retal contribui de forma importante para a disseminao da infeco dentro dos rebanhos.
O vrus est presente no sangue dos animais
infectados e transmitido por procedimentos
que envolvam a transferncia de clulas sangneas entre animais. Cabe lembrar que os animais
infectados tornam-se portadores pelo resto da
vida e possuem o vrus no sangue, sobretudo em
820
Captulo 31
821
Retroviridae
Tabela 31.2. Sinais clnicos associados com a infeco pelo vrus da leucose bovina (BLV).
Grupo 1b (%)
Grupo 2c (%)
Perda de peso
80
Agalactia
77
58
58
Anorexia
62
52
Paralisia/paresia do posterior
16
41
Febre
23
Exoftalmia
20
Dificuldade respiratria
14
Obstruo intestinal
19
Anormalidade no miocrdio
64
Linfcitos anormais
63
Sinais clnicos
Fonte: adaptado de: The Compendium Collection, Infectious Disease in Food and Animal Practice, 1993.
Dados de 298 animais hospitalizados.
c
Dados de 1.100 animais de campo.
b
A viremia detectvel somente nas duas primeiras semanas aps a infeco e, tardiamente, a
deteco de antgenos virais no sangue difcil.
Alguns trabalhos indicam que, aps a infeco
inicial, a permanncia do vrus no organismo seria mantida principalmente pela diviso celular
da clula contendo o provrus e no pela replicao do genoma viral via RT. Isso, de certa
forma, tambm ajudaria a explicar a menor variabilidade genmica do BLV, quando comparado
com outros retrovrus (p. ex., EIAV), cuja taxa de
replicao maior no curso da infeco.
Os animais infectados desenvolvem uma
resposta sorolgica entre duas a oito semanas
ps-infeco. Os anticorpos so direcionados
principalmente contra as glicoprotenas do envelope (TM, SU) e contra as protenas do capsdeo.
Os anticorpos so persistentes, porm os nveis
presentes podem variar de acordo com a condio siolgica e imunolgica do animal. Um estudo recente estimou o tempo mdio de soroconverso em 47 dias (infeco experimental) e 57
dias (dados de infeco experimental e natural).
5.1.3 Diagnstico
Duas condies distintas devem ser consideradas no diagnstico do BLV: o diagnstico da
enfermidade (leucose ou linfossarcoma) e o diagnstico da infeco. A suspeita da doena clnica,
822
Captulo 31
823
Retroviridae
positivos possuem um alto valor gentico e econmico; do contrrio, devem ser identicados e
eliminados do rebanho.
Atualmente no existem vacinas disponveis
contra o BLV.
5.2.1 Epidemiologia
A presena do BIV j foi relatada em vrios pases, como o Canad, Costa Rica, Estados
Unidos, Frana e Itlia. Nos Estados Unidos, a
soroprevalncia da infeco bastante varivel.
Alguns estudos identicaram uma prevalncia
de anticorpos em 40% de animais de carne e em
60% de animais de leite no estado da Louisiana.
Embora os dados de prevalncia sejam escassos,
acredita-se que o BIV esteja amplamente difundido na populao bovina de diferentes pases.
No Brasil, von Groll et al. (1997) relataram, pela
primeira vez, a presena do BIV pela deteco de
animais sorologicamente positivos entre animais
clinicamente sadios.
A transmisso experimental pode ser obtida
pela administrao de sangue total de um animal
infectado. Dessa forma, o uso de agulhas e instrumental cirrgico contaminados, ingesto de
colostro de fmeas infectadas e a higienizao
deciente de instrumentos utilizados em prticas
invasivas, como castraes e descornas, podem
estar envolvidos na transmisso do BIV. J foi de-
824
Captulo 31
5.3.1 Epidemiologia
Com exceo da Islndia, de onde a doena foi erradicada aps o sacrifcio de milhares
825
Retroviridae
das vezes, os animais desenvolvem uma resposta humoral com ttulos de anticorpos detectveis
por testes sorolgicos, mas que no resultam na
erradicao do vrus do organismo. A exemplo
dos outros retrovrus, uma vez infectado, o animal torna-se portador e fonte de contaminao
para o rebanho durante toda a sua vida.
Vrios fatores so responsveis pela persistncia do vrus no organismo do hospedeiro. No
caso dos SRLV, foi demonstrada a importncia
da diferenciao/ativao dos macrfagos no
incremento da produo de partculas virais. A
restrio da replicao viral estaria relacionada
com a ausncia e/ou quantidades insucientes
de fatores de transcrio, capazes de levar sntese dos mRNA virais codicadores das protenas
estruturais do vrion.
As patologias pulmonares esto associadas
com a formao de folculos linfides que, atravs da secreo de citocinas, contribuiriam para o
desenvolvimento da pneumonia intersticial devido a uma resposta inamatria exacerbada. Alm
do pulmo, a glndula mamria pode igualmente apresentar a formao de folculos linfides e
o conseqente desenvolvimento de mastite. As
manifestaes de origem neurolgica, por encefalite, so raras e foram descritas principalmente
na epidemia que atingiu a Islndia e que levou
morte um grande nmero de animais. Comprometimentos articulares (artrites) foram igualmente descritos, mas com menor freqncia do
que os quadros respiratrios.
Em funo dos diferentes rgos atingidos pelo vrus, as manifestaes clnicas podem
variar desde diculdade respiratria, mastite
acompanhada de endurecimento da glndula
mamria, artrite, ataxia dos membros posteriores
e incoordenao. Os sinais clnicos podem levar
meses ou anos para se manifestarem; e apenas
uma parcela dos animais infectados desenvolve
a sintomatologia. Estima-se que apenas 30% dos
animais sorologicamente positivos manifestem
sinais clnicos da infeco, e as manifestaes respiratrias apresentam maior incidncia.
Em regies endmicas, o diagnstico presuntivo pode ser realizado pelo quadro clnico,
embora apenas uma parcela dos animais apre-
826
Captulo 31
5.4.1 Epidemiologia
O vrus j foi detectado em diversos pases,
inclusive no Brasil, pelo isolamento do agente ou
pela deteco de anticorpos. A infeco j foi detectada em caprinos nos estados de Minas Gerais,
Pernambuco e So Paulo. Um inqurito sorolgico, no Cear, demonstrou 1% de prevalncia entre 4.019 animais e, no Rio de Janeiro, 32,1% dos
rebanhos testados possuam animais positivos.
O CAEV transmitido principalmente atravs do colostro e leite, durante as primeiras mamadas dos recm-nascidos. A transmisso por
sangue contaminado, pelo uso de agulhas hipo-
827
Retroviridae
ELISA pode ocorrer de forma intermitente durante a vida do animal. Alm disso, j foi demonstrada a resistncia doena em animais portadores
de certos hapltipos do complexo principal de
histocompatibilidade (MHC).
A doena se manifesta principalmente em
rebanhos com alta soroprevalncia, sendo pouco
signicativa em rebanhos com baixa prevalncia
de animais soropositivos. Essa observao favorece a hiptese de que no existiriam fatores de
virulncia relacionados s cepas de SRLV, uma
vez que se consegue eliminar a ocorrncia da doena com a reduo dos animais soropositivos no
rebanho.
828
5.5.1 Epidemiologia
O JSRV apresenta distribuio mundial,
com exceo da Austrlia, onde a doena ainda
no foi descrita, e da Islndia, de onde a doena
foi erradicada. A doena ocorre de forma espordica, podendo atingir at 25% de incidncia em
alguns rebanhos de alto risco em pases como o
Reino Unido, frica do Sul e Espanha. A doena
tambm j foi descrita no Chile, no Peru e no Brasil, onde considerada enfermidade de noticao obrigatria.
No genoma dos ovinos, estima-se que existam entre 15 e 20 cpias do genoma de retrovrus
endgenos relacionados ao JSRV, alguns deles
apresentando transcrio ativa. No entanto, foi
Captulo 31
829
Retroviridae
5.6.1 Epidemiologia
A infeco pelo EIAV apresenta distribuio
mundial, com maior ocorrncia em reas tropicais ou subtropicais pantanosas e que apresentam populaes numerosas de vetores artrpodes moscas, tabandeos e mosquitos. Em reas
endmicas, a prevalncia pode atingir 70% dos
animais adultos. Estudos sorolgicos em vrios
estados brasileiros, como o Par, Minas Gerais,
Mato Grosso do Sul, Gois e Rio Grande do Sul,
demonstram a presena do EIAV na populao
eqina do pas. Em geral, os nveis de prevalncia so moderados a altos em regies com populaes numerosas e permanentes dos insetos
vetores.
Os hospedeiros naturais so os eqdeos
e, at o presente, no foi demonstrada infeco
natural de outras espcies. A principal forma de
transmisso pela picada de insetos hematfagos sobretudo tabandeos que exercem o papel de vetores mecnicos, carreando o vrus na
probscide. A transmisso mais freqente em
reas de grande infestao de insetos e com grande concentrao de animais. A picada dos insetos
estimula um reexo defensivo dos animais, o que
freqentemente resulta na interrupo do repasto sangneo. Esses insetos procuram reiniciar o
repasto com a maior brevidade, freqentemente o fazendo em animais que se encontram nas
proximidades e, com isso, transmitindo o agente.
A transmisso do EIAV por insetos depende da
populao e hbitos dos insetos, da densidade
dos animais, do nmero de picadas no animal e
em animais das proximidades, da quantidade de
sangue transferida entre animais, e do nvel de
vrus no sangue do animal infectado que serve de
fonte de infeco. Mosquitos e moscas tambm
podem transmitir a infeco entre animais.
Acredita-se que o homem tambm possa
desempenhar um papel epidemiolgico na transmisso do EIAV entre animais, pela utilizao de
agulhas, seringas e materiais cirrgicos no-descartveis. Embora possua papel epidemiolgico
secundrio, a transmisso pela ingesto de leite
ou pela inseminao articial com o smen contaminado tambm pode ocorrer.
830
Captulo 31
Aps a viremia primria, diferentes quadros podem se desenvolver nos animais infectados pelo EIAV: a) anemia profunda e morte
(forma aguda); b) recuperao e recidivas coincidentes com novas viremias (forma crnica) ou,
ainda, c) o animal pode tornar-se um portador,
mas sem recidivas ou manifestaes clnicas aparentes (forma inaparente). As recidivas e novas
viremias esto associadas com o surgimento de
variantes virais e, medida que o sistema imune reage infeco pela produo de anticorpos
e pela resposta celular, ocorre reduo da carga
viral no sangue, correspondendo aos perodos
assintomticos.
Na forma crnica, os episdios de febre podem ocorrer a intervalos variveis, entre os quais
a temperatura volta a valores normais. Quadros
recorrentes de depresso e letargia, petquias nas
mucosas, emagrecimento progressivo, edema nas
partes baixas e anemia esto freqentemente associados com a infeco crnica.
A resposta mediada por linfcitos T citotxicos especcos para epitopos das protenas do
capsdeo e das glicoprotenas do envelope viral
seria a principal responsvel pela manuteno
do estado assintomtico em animais portadores.
O perodo entre uma recidiva e outra varivel,
podendo ser inferior a 30 dias.
A replicao contnua do vrus nas clulasalvo os moncitos/macrfagos responsvel
pela carga viral presente na corrente sangnea.
Embora ocorra uma reduo de at 700 vezes nos
ttulos virais no sangue de animais assintomticos quando comparados com animais virmicos,
estima-se que a replicao viral continue nesses
perodos, nos macrfagos de diferentes rgos,
como o fgado, linfonodos e bao.
831
Retroviridae
5.7.1 Epidemiologia
A infeco pelo FeLV possui distribuio
mundial, e a sua prevalncia notadamente
maior em locais de grande densidade de felinos,
como os gatis e abrigos. Nesses locais, o contato
freqente e prximo entre os animais facilita a
transmisso e pode resultar em prevalncias de
at 33%. A prevalncia geralmente mais baixa,
podendo atingir nveis aproximados de 1%, na
populao geral de gatos domsticos, em que o
contato entre animais apenas casual. No Brasil,
a ocorrncia da infeco tem sido demonstrada
em felinos domsticos e selvagens em vrios estudos. No zoolgico da Universidade Federal de
Mato Grosso (UFMT), 12 de 16 felinos selvagens
possuam antgenos do FeLV e, no Cear, 83%
dos gatos de rua testados foram positivos. Um
estudo em So Paulo revelou uma prevalncia
baixa (<5%).
Acredita-se que a transmisso ocorra principalmente por contato direto e indireto, atravs da
saliva, sendo favorecida durante as brigas. Isso
pode explicar o porqu de gatos castrados apresentarem incidncia menor da infeco. Os gatos
com infeco persistente podem excretar at 106
vrions por mL de saliva, o que constitui a principal fonte de vrus para a transmisso por contato
832
Captulo 31
833
Retroviridae
5.8.1 Epidemiologia
O FIV apresenta uma distribuio mundial e
j foi isolado tambm de felinos selvagens, alm
de j terem sido descritos vrios isolados de gatos domsticos. A soroprevalncia na populao
geral pode variar de 1 a 30%, com ndices mais
elevados entre animais que apresentam sinais de
doena. Em nveis mundiais, estima-se uma prevalncia de aproximadamente 12% nos felinos
domsticos. O FIV tem sido descrito em felinos
no Brasil. No Rio de Janeiro, 21% dos felinos testados eram positivos para o vrus. No Rio Grande
do Sul, Minas Gerais e So Paulo, estudos epidemiolgicos tm conrmado a presena da infeco em felinos com imunodecincia ou sem sinais clnicos.
A infeco ocorre com maior freqncia em
gatos com mais de um ano de idade. A principal forma de transmisso parece ser pelo contato
direto, atravs da saliva, pelas mordidas durante
as brigas entre animais. Os machos se infectam
com o dobro da freqncia das fmeas, pelo seu
comportamento social e agressivo distinto. O vrus tambm pode ser transmitido pelo smen durante a cpula e pelo leite de fmeas infectadas
(infeco pela via oral).
834
Captulo 31
5.8.3 Diagnstico
A sintomatologia clnica observada em gatos infectados pelo FIV inespecca e reete um
quadro geral de imunossupresso, semelhante
ao observado na leucemia pelo FeLV. Quadros
sugestivos de imunossupresso devem ser investigados para a presena de anticorpos, antgenos
ou cidos nuclicos virais.
Para a deteco de anticorpos, os testes mais
utilizados so o ELISA, IFA e o Western blot.
Animais com testes negativos devem ser testados
novamente aps 60 dias, para a conrmao do
resultado. Existem kits baseados em cromatograa para o diagnstico da infeco em nvel ambulatorial, pela deteco de antgenos virais no
sangue total. A deteco do provrus em clulas
sangneas por PCR tambm pode ser realizada, utilizando-se o DNA extrado dos leuccitos.
Essa tcnica tem se difundido nos ltimos anos e
se constitui em uma importante ferramenta para
a identicao de animais infectados. Porm, a
Forma
Manifestaes clnicas
Durao
Infeco aguda
Semanas ou meses
Portador subclnico
Nenhuma
Anos
Linfoadenopatia
generalizada
Anos
Meses a anos
Meses
835
Retroviridae
5.9.1 Epidemiologia
O ALV est presente de forma endmica em
praticamente todos os pases que possuem avicultura comercial. A incidncia da infeco pode
variar de 3 a 20%, com a ocorrncia de surtos
espordicos. O subgrupo J j foi descrito como
ocasionando perdas de at 30% em matrizes de
corte.
A transmisso ocorre de duas formas principais: vertical e horizontal. A transmisso vertical pode ocorrer pela transferncia congnita do
vrus infeccioso e por transmisso gentica, com
836
Captulo 31
6 Bibliografia consultada
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da UFRGS, 1997. p.104.
32
1 Introduo
841
2 Polyomaviridae
841
2.1 Classificao
2.2 Propriedades gerais
2.3 Ciclo replicativo
2.4 Biologia e patogenia
3 Hepadnaviridae
3.1 Classificao
3.2 Propriedades gerais
3.3 Ciclo replicativo
3.4 Biologia e patogenia
4 Arenaviridae
4.1 Classificao
4.2 Propriedades gerais
4.3 Ciclo replicativo
4.4 Biologia e patogenia
5 Astroviridae
5.1 Classificao
5.2 Propriedades gerais
5.3 Ciclo replicativo
5.4 Biologia e patogenia
6 Filoviridae
6.1 Classificao
6.2 Propriedades gerais
6.3 Ciclo replicativo
6.4 Biologia e patogenia
Luiz Carlos Kreutz elaborou a seo 7.4.2 (Vrus da pancreatite necrosante dos salmes, INPV).
842
842
842
842
844
844
844
844
845
846
846
846
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848
848
848
849
849
849
850
850
850
851
7 Birnaviridae
851
7.1 Classificao
7.2 Propriedades gerais
7.3 Ciclo replicativo
851
851
852
852
852
855
8 Bornaviridae
856
8.1 Classificao
8.2 Propriedades gerais
8.3 Ciclo replicativo
8.4 Biologia e patogenia
8.5 Doena de Borna
856
857
857
858
858
9 Bibliografia consultada
859
1 Introduo
Algumas famlias abrigam vrus que possuem importncia limitada, como patgenos de
animais de companhia ou de criao, apresentando menor relevncia em medicina veterinria. Este captulo abordar, de forma sucinta, os
principais aspectos das famlias de vrus cujos
membros possuem importncia clnica limitada
em animais de interesse veterinrio. Dentre os
membros dessas famlias, alguns possuem importncia como patgenos humanos; outros so
patgenos de animais de laboratrio, de invertebrados ou produzem doenas apenas em animais
silvestres; um terceiro grupo abrange vrus que,
aparentemente, no esto envolvidos com doena em vertebrados e a sua importncia limita-se
a aspectos peculiares de sua estrutura, biologia
e ecologia.
Deve-se ressaltar que os critrios utilizados
nesta classicao so relativos, e que as linhas
que delimitam os grupos de vrus de acordo com
a sua importncia clnica so tnues, podendo ser
circunstanciais e temporrias. Certos agentes podem ser considerados pouco importantes dentro
de um contexto, mas so muito importantes em
outras situaes. Da mesma forma, vrus historicamente considerados pouco importantes podem
adquirir importncia clnica devido a alteraes
genticas ou ecolgico-ambientais que inuenciam as suas interaes com os hospedeiros, podendo resultar na ocorrncia de doenas humanas e animais. Um exemplo recente a adaptao
do vrus da inuenza a ces, espcie at ento
considerada refratria infeco.
Ao nal deste captulo, ser apresentada a
famlia Birnaviridae, uma pequena famlia, que
abriga pelo menos dois vrus importantes em
animais: o INPV (vrus da pancreatite necrtica
infecciosa), que infecta peixes e possui importncia em criatrios de salmes, e o IBDV (vrus
da doena de Gumboro ou doena da bursa de
Fabricius), que infecta galinhas e possui grande
importncia na avicultura comercial em vrios
pases. Outro vrus que possui importncia relativa em alguns pases o vrus da doena de Borna (BDV), pertencente a famlia Bornaviridae, que
2 Polyomaviridae
A famlia Polyomaviridae era classicada anteriormente como uma subfamlia da Papovaviridae, cuja denominao se devia aos vrus prottipos de cada subfamlia: Pa (papilomavrus de
coelhos); po (poliomavrus de camundongos);
va (agente vacuolizante, vrus smio 40, SV-40).
Atualmente, os poliomavrus e o prottipo SV40 so classicados separadamente, na famlia
Polyomaviridae. O interesse maior nesses vrus se
iniciou com a descoberta de que o SV-40 e outros
poliomavrus eram capazes de produzir tumores
em hamsters (por isto foram denominados pequenos vrus DNA tumorais). O SV-40 foi descoberto
acidentalmente como contaminante de linhagens
celulares de macacos rhesus utilizadas para a
produo de vacinas contra a poliomielite. Como
conseqncia, aproximadamente 50 milhes de
doses de vacinas produzidas contra a poliomielite e utilizadas na dcada de 1950 estavam contaminadas com o SV-40. Posteriormente, constatou-se que o SV-40 era capaz de produzir tumores
em hamsters, aumentando a preocupao sobre
uma possvel atividade tumorignica tambm
em humanos. Embora estudos extensivos realizados durante dcadas no tenham sido capazes
de demonstrar associao entre o SV-40 e tumores humanos, estudos recentes demonstraram a
presena de seqncias de DNA e antgenos do
SV-40 em certos tumores raros em humanos, renovando o interesse por este vrus.
O interesse inicial pelos poliomavrus deveu-se ao seu potencial oncognico. No entanto,
estes vrus foram mais estudados como modelos para a Virologia e Biologia Molecular do que
como patgenos humanos ou animais. Importantes conhecimentos na Biologia Molecular, como a
estrutura do DNA superenrolado, origens e iniciao da replicao do DNA, estrutura e funo
de promotores e enhancers, splicing alternativo e
regulao da expresso gnica, entre outros, foram obtidos a partir de estudos realizados com
esses vrus.
842
Captulo 32
2.1 Classificao
Polyomaviridae
Quadro 32.1. Propriedades biolgicas e moleculares da famlia Polyomaviridae. direita: fotografia de microscopia
eletrnica de vrions do SV-40.
843
Hospedeiro
Caractersticas principais
Poliomavrus de camundongos
(PyV)
Camundongos
Vrus K (PyK)
Camundongos
Macacos rhesus
Baboons
Macaco-verde-africano
Bovinos
Comum em bovinos;
persiste nos rins
Coelhos
Poliomavrus de
hamsters (HaPV)
Hamsters
Ratos atmicos
Vrus da doena de
Budgerigar fledgling (BFDV)
Psitacdeos
Vrus
844
Captulo 32
3.1 Classificao
A famlia Hepadnaviridae composta por vrus DNA pequenos, que apresentam um tropismo marcante por clulas hepticas. Essa famlia
abriga um importante patgeno de humanos, o
vrus da hepatite B (HBV), que o seu prottipo.
Por isso, os hepadnavrus so genericamente denominados vrus das hepatites B. O HBV considerado um dos principais patgenos de humanos e, em todo mundo, acredita-se que cerca de
300 milhes de pessoas estejam cronicamente infectadas. Entre as conseqncias da infeco pelo
HBV, esto a hepatite aguda ou crnica, infeco
subclnica persistente, cirrose e o carcinoma hepatocelular (HCC).
Esta famlia tambm abriga alguns vrus
de animais, como os hepadnavrus de esquilos
(ground squirrel hepatitis virus, GSHV), marmotas (woodchuck hepatitis virus, WHV) e patos (duck
hepatitis B virus, DHBV). Recentemente, outros
hepadnavrus foram identicados em garas,
gansos, marsupiais e orangotangos. Os hepadnavrus possuem tropismo marcante por clulas
hepticas, e as manifestaes clnicas da infeco
so predominantemente hepticas embora no
exclusivamente.
Hepadnaviridae
3 Hepadnaviridae
Quadro 32.2. Propriedades biolgicas e moleculares dos hepadnavrus. direita: fotografia de microscopia eletrnica
de vrions e partculas subvirais esfricas e filamentosas do HBV.
845
HBV
WHV
GSHV
DHBV
Hospedeiro
Humanos
Chimpanzs
Marmotas
Esquilos
Marmotas
Patos
Gansos
Tropismo
Fgado
Rins
Pncreas
Leuccitos
Fgado
Rins
Pncreas
Leuccitos
Fgado
Fgado
Rins
Pncreas
Bao
Manifestaes
clnicas
Portadores
subclnicos;
hepatite aguda e
crnica; cirose,
HCC
Portadores
subclnicos;
hepatite; HCC
Portadores
subclnicos;
hepatite; HCC
Portadores
subclnicos;
hepatite
846
4 Arenaviridae
Os membros da famlia Arenaviridae so vrus que possuem roedores silvestres da Europa,
frica e Amricas como hospedeiros naturais.
Nesses hospedeiros, os arenavrus geralmente produzem infeces subclnicas persistentes,
sendo continuamente excretados na saliva, urina
e fezes, condies que favorecem a sua transmisso e disseminao. A exposio humana usualmente ocupacional e freqentemente envolve
trabalhadores rurais. As conseqncias da infeco humana variam desde infeces inaparentes,
com sintomatologia leve a moderada, at febre
hemorrgica fatal. Por isso, esses vrus so genericamente denominados agentes de febres hemorrgicas. Mais de 20 espcies de arenavrus j
foram identicadas em vrios continentes; todas,
provavelmente, associadas com hospedeiros roedores, e algumas associadas com doena humana.
O prottipo dessa famlia o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV), um agente que infecta
roedores silvestres, colnias de roedores cativos
e, ocasionalmente, pessoas. O interesse maior no
LCMV tem sido como modelo para estudos imunolgicos. Descobertas importantes, como a imunotolerncia, imunopatologia induzida por vrus,
reconhecimento de antgenos virais por linfcitos
T CD4+ e CD8+, atividade das clulas NK (natural killer), entre outras, vieram de estudos com o
LCMV. Os arenavrus que causam doena humana devem ser manipulados em laboratrios com
estritas condies de biossegurana para evitar a
exposio (nvel 4 de biossegurana).
4.1 Classificao
A famlia Arenaviridae apresenta um nico
gnero (Arenavirus). Os arenavrus so classicados em dois grupos, com base em propriedades
genticas e antignicas: os arenavrus do Novo
Mundo (Junin, Machupo, Guanarito e vrus Sabi) e os arenavrus do Velho Mundo (LCMV e
Lassa vrus). O LCMV o prottipo do segundo
grupo, que tambm inclui os arenavrus da frica.
Os arenavrus do Novo Mundo so agentes
associados com febres hemorrgicas nas Amricas, incluindo o vrus Junin (febre hemorrgica
Captulo 32
847
Arenaviridae
Quadro 32.3. Propriedades biolgicas e moleculares dos arenavrus. direita: fotografia de microscopia eletrnica de
um vrion desta famlia.
848
Captulo 32
roedores adultos so infectados, a viremia transitria. J para o vrus Junin, a infeco intra-uterina determina morte fetal e aborto. A infeco
de neonatos resulta em viremia que persiste por
toda a vida; j a infeco de adultos pode resultar em viremia transitria ou persistente. Conseqentemente, a presena da infeco persistente
decorrente da interao de vrios fatores.
5 Astroviridae
Astroviridae
5.1 Classificao
Os astrovrus so classicados em dois gneros: Mamastrovirus e Avastrovirus. Os vrus
que pertencem ao gnero Mamastrovirus infectam mamferos e incluem vrus de bovinos (dois
sorotipos US1 e US2), felinos, ovinos, sunos,
marta e humanos (oito sorotipos). As espcies de
mamastrovrus so denidas de acordo com o
hospedeiro de origem. Os Avastrovirus infectam
aves, incluindo pssaros, galinhas, patos e perus.
O vrus da nefrite aviria (ANV), que est associado com nefrite aguda em galinhas, inclui-se
nesse gnero.
Os astrovrus so espcie-especcos e no
apresentam reatividade sorolgica cruzada. A
anlise sorolgica de vrios isolados de diferentes espcies (sete de humanos, um de ovinos, um
de sunos, trs de bovinos e um de aves) no demonstrou relao antignica entre eles.
Fonte: www.epa.gov
Quadro 32.4. Propriedades biolgicas e moleculares dos astrovrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
vrus desta famlia.
849
6 Filoviridae
Os lovrus foram os primeiros vrus associados com febre hemorrgica em humanos.
Esses vrus foram inicialmente identicados em
casos da doena em laboratoristas na Alemanha,
na dcada de 1960. O vrus foi caracterizado e denominado vrus Marburg, tornando-se o prottipo dessa famlia. A origem do vrus Marburg foi,
posteriormente, determinada e, provavelmente,
ocorreu pela importao de macacos-verdes africanos de Uganda. Aproximadamente uma dcada depois, o vrus Ebola foi reconhecido como
agente etiolgico de surtos de febre hemorrgica
no Zaire e no Sudan. Um vrus similar, denominado de Reston, foi introduzido nos EUA por
850
Captulo 32
6.1 Classificao
Filoviridae
A famlia Filoviridae pertence ordem Mononegavirales, juntamente com outros vrus com
genoma RNA no-segmentado de polaridade negativa. Na famlia Filoviridae, existem dois gneros: os vrus semelhantes ao Ebola (Ebola-like viruses), com quatro espcies (Zaire, Sudan, Reston
e Cte dIvoire), e o gnero dos vrus semelhantes
ao Marburg (Marburg-like viruses). No existe reatividade sorolgica cruzada entre os vrus dos
diferentes gneros. No entanto, existem alguns
epitopos em comum entre os vrus do grupo do
Ebola.
Quadro 32.5. Propriedades biolgicas e moleculares dos filovrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
um virion do vrus Ebola.
851
7 Birnaviridae
Os membros da famlia Birnaviridae so vrus que infectam vertebrados, insetos, moluscos
e crustceos. Os birnavrus de maior importncia
so os que infectam aves e peixes, entre eles, o
agente da doena de Gumboro, tambm conhecida como doena da bursa de Fabricius. A doena
de Gumboro possui grande repercusso sanitria
na avicultura comercial de vrios pases.
7.1 Classificao
A famlia Birnaviridae apresenta trs gneros:
Aquabirnavirus, Avibirnavirus e Entomobirnavirus.
No gnero Aquabirnavirus, esto classicados vrus que infectam peixes, moluscos e crustceos.
Entre estes se destacam o vrus da pancreatite
necrtica infecciosa (INPV) que infecta peixes,
o vrus Tellina (TV-2) e o vrus yellowtail ascites
(YTAV). O gnero Avibirnavirus abriga os vrus
que infectam as aves (vrus da doena da bursa
de Fabricius IBDV) e o gnero Entomobirnavirus congrega vrus que infectam insetos. Tanto
o INPV como o IBDV possuem diferentes sorotipos.
852
Birnaviridae
Captulo 32
Quadro 32.6. Propriedades biolgicas e moleculares dos birnavrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
vrions desta famlia.
A doena de Gumboro causada por um vrus da famlia Birnaviridae (infectius bursal disease
virus, IBDV), ocorre em aves jovens e apresenta a
bursa de Fabricius como rgo-alvo, sendo tambm conhecida como doena infecciosa da bursa
de Fabricius (IBD). Esta enfermidade possui distribuio mundial e tem causado grandes perdas
econmicas indstria avcola em vrios pases,
por determinar mortalidade e imunossupresso
nas aves infectadas. Uma importante conseqncia da infeco de frangos jovens pelo IBDV a
imunossupresso. Alm disso, a infeco com cepas virulentas pode determinar taxas de mortalidade elevadas. As medidas de controle envolvem
a vacinao e medidas gerais de biossegurana.
A doena de Gumboro foi inicialmente descrita, em 1962, por Cosgrove, na cidade de Gumboro, nos Estados Unidos, da a sua denominao. Nos ltimos anos, a emergncia de variantes
antignicas e de cepas de alta virulncia, que podem produzir doena clnica mesmo em animais
vacinados, tem ressaltado a importncia desta
doena. Diferentes cepas do IBDV foram identicadas nos EUA (entre 1986 e 1987), na Blgica e
nos pases baixos (em 1987). As cepas de alta virulncia foram descritas na Europa em 1986. Tanto as cepas clssicas como as mais virulentas esto presentes em todos os pases, com exceo da
Amrica do Norte e da Austrlia, pois nestes dois
pases predominam as cepas variantes (maior virulncia) do IBDV.
O IBDV apresenta dois sorotipos. No sorotipo 1, so classicados os isolados patognicos
do IBDV, que apresentam as clulas linfides da
bursa como alvo para replicao. Os IBDV do sorotipo 2 so isolados de perus e, geralmente, so
apatognicos. Pelas diferenas antignicas entre
os sorotipos, os frangos expostos ao sorotipo 2
no possuem proteo contra uma infeco posterior por um IBDV do tipo 1.
As galinhas so os nicos hospedeiros
conhecidos
que
desenvolvem
a
forma clnica da infeco pelo IBDV, porm perus
e patos tambm podem ser infectados. O vrus
transmitido pela via fecal-oral, com a ingesto de
fezes e/ou outros materiais orgnicos contaminados, ou, ainda, verticalmente, via ovo. O vrus
bastante resistente s condies ambientais, sobrevive a 60C por 60 minutos e em pH entre 3 e
9, o que representa um entrave para o combate
infeco.
Aps a ingesto de material contaminado,
o vrus pode ser detectado em macrfagos e em
clulas linfticas do duodeno, jejuno e ceco em
quatro ou cinco horas. O duodeno, jejuno e ceco
so os rgos de replicao primria do vrus,
que pode chegar ao fgado pelo sistema porta. A
853
854
Captulo 32
dos do IBDV, utiliza-se o teste de soroneutralizao (SN), que capaz de diferenciar os isolados
em sorotipo e subtipo dentro do sorotipo 1. A
tcnica de RT-PCR tem sido cada vez mais utilizada para o diagnstico. Quando associada com
anlise de restrio enzimtica (RFLP), permite a
identicao rpida das cepas de alta virulncia
e a caracterizao de isolados entre os seis grupos
moleculares do IBDV.
Em estdios mais avanados da infeco,
difcil conrmar o diagnstico somente pelo exame da bursa atroada. Outras doenas que cursam com alteraes similares, como a doena de
Marek, micotoxicoses, coccidioses, sndrome hemorrgica, hepatite por corpsculos de incluso
e bronquite infecciosa, devem ser consideradas
no diagnstico diferencial.
Pela grande capacidade de disseminao do
IBDV, as medidas de preveno e controle dessa
enfermidade requerem uma abordagem bem coordenada, envolvendo medidas de biossegurana
e vacinao. No ambiente, o vrus pode persistir
por quatro meses. A vacinao deve ser utilizada
para proteger os frangos nas primeiras semanas
de vida. Para garantir altos ttulos de anticorpos
passivos, as matrizes poedeiras devem receber
vacinas inativadas com adjuvante oleoso quando
completarem 18 semanas de vida, com revacinaes anuais. Algumas vacinas so aplicadas pela
via oral, adicionadas na gua dos bebedouros. Os
pintos so imunizados com uma vacina atenuada, iniciando a aplicao com uma ou duas semanas de vida, porm a proteo comprometida
nessas aves pela presena de imunidade passiva,
que pode permanecer por quatro a sete semanas
e neutralizar o vrus vacinal. A proteo dos frangos frente a cepas de alta virulncia tambm pode
ser comprometida quando os antgenos vacinais
utilizam cepas altamente atenuadas. Por outro
lado, a utilizao de cepas pouco atenuadas pode
no ser segura, e os animais apresentarem infeco subclnica, acompanhada de leso na bursa
e imunossupresso. Vacinas recombinantes esto
em desenvolvimento, utilizando alguns poxvrus, herpesvrus (vrus da doena de Marek) e togavrus (vrus Semliki Forest) como vetores. Vacinas de subunidade, utilizando a protena VP2
como antgeno, tambm esto sendo estudadas
e apresentaram uma resposta satisfatria. Vacinas de DNA tambm esto em fase de pesquisa
e desenvolvimento. No entanto, nenhuma dessas
vacinas est disponvel no comrcio.
7.4.2.1 Epidemiologia
O INPV transmitido horizontalmente, por
meio de fezes, urina e secrees, e tambm verticalmente, por meio das ovas infectadas. Algumas
espcies de aves e mamferos aquticos, caranguejos e protozorios podem servir como vetores
mecnicos do vrus. Experimentalmente, a doena pode ser transmitida pela ingesto do vrus,
imerso em gua contaminada ou pela injeo do
vrus nos salmes.
A doena ocorre com freqncia em trutasarco-ris (Oncorhynchus mykiss), trutas-brool (Salvelinus fontinalis), trutas-marrons (Salmo trutta),
salmes do Atlntico (Salmo salar) e diversas outras espcies de salmes do oceano Pacco (Oncorhynchus spp.).
855
856
7.4.2.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo INPV dos
salmes baseia-se no isolamento viral em cultivo
celular, seguido da identicao imunolgica do
vrus por meio de soroneutralizao (SN), ELISA,
imunouorescncia (IFA) ou imunoperoxidase
(IPX). Mtodos moleculares de diagnstico, como
a RT-PCR, executadas diretamente em amostras
clnicas, tambm tm sido desenvolvidos e apresentam alto grau de concordncia e especicidade. Antgenos virais tambm podem ser detectados por meio de imunohistoqumica em tecidos
preservados em formalina.
Captulo 32
8 Bornaviridae
A famlia Bornaviridae constituda por vrus
RNA de ta simples e polaridade negativa que
infectam vertebrados. O membro mais importante dessa famlia o vrus da doena de Borna
(BDV), que acomete principalmente os eqinos
e ovinos. A denominao da doena se refere
cidade alem, onde vrios cavalos morreram de
doena neurolgica em 1895. Esta enfermidade
foi, ento, denominada de doena de Borna (BD),
e o agente identicado, em 1926, foi denominado
vrus da doena de Borna (BDV). Nas ltimas dcadas, vrus com caractersticas semelhantes tm
sido identicados como patgenos de humanos,
porm ainda esto em processo de caracterizao.
8.1 Classificao
A famlia Bornaviridae pertence ordem Mononegavirales, juntamente com os vrus das fam-
857
Bornaviridae
Quadro 32.7. Propriedades biolgicas e moleculares dos bornavrus. direita, est uma ilustrao esquemtica de um
vrion.
858
com a membrana endoctica. A gp-43 est presente no envelope e na superfcie das clulas infectadas e provavelmente fuso. A gp-84 parece estar
envolvida na ligao do vrus aos receptores celulares.
Os detalhes da replicao dos bornavrus
no esto bem esclarecidos. Alguns pesquisadores sugerem que exista um mecanismo de regulao do genoma atravs de digesto enzimtica na
extremidade 5, envolvendo a deleo de partes
do genoma para limitar a expresso gnica. Sugere-se que esta estratgia seja benca aos bornavrus, pois permitiria o estabelecimento de infeco
persistente, sem determinar efeitos citolticos.
Captulo 32
estar ligada doena mediada pelo sistema imunolgico. Os sinais clnicos mais freqentemente observados em cavalos so: excitao, ataxia,
postura anormal, opisttono, nistagmo, cegueira,
paralisia e morte. Por outro lado, a infeco pode
tambm ser assintomtica, persistente ou crnica.
Roedores tm sido utilizados como modelo
experimental para estudos de patogenia da infeco pelo BDV. Ratos adultos apresentam hiperatividade, que coincide com a presena de produtos virais em neurnios do sistema lmbico e
inltrao de clulas mononucleares no crebro.
Em animais que sobrevivem infeco, embora a
inamao regrida em algumas semanas, o vrus
persiste e os animais podem apresentar diferentes sinais neurolgicos associados com alteraes
no SNC. No entanto, quando ratos so infectados
quando neonatos, a doena caracterizada por
crescimento retardado, distrbios de comportamento e apetite depravado. Estes animais no so
capazes de montar uma resposta imune celular
contra o vrus. Primatas infectados experimentalmente apresentam distrbios comportamentais
nos aspectos social e sexual. Alguns destes apresentam relaes anormais de dominncia e no
conseguem copular. Os macacos rhesus infectados experimentalmente se tornam inicialmente
hiperativos e, posteriormente, apticos e hipocinticos.
O diagnstico diferencial de doenas neurolgicas em eqinos deve, necessariamente, considerar a possibilidade de doena de Borna, sobretudo em reas onde a doena j foi diagnosticada.
O diagnstico laboratorial pode ser realizado
com testes sorolgicos, por imunouorescncia,
Western blot, radioimunoprecipitao e ELISA.
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Captulo 32
ABREVIATURAS E SIGLAS
A
AAV: vrus adeno-associado.
AcM: anticorpo monoclonal.
ADCC: citotoxicidade celular dependente de anticorpos.
ADE: infeco mediada por anticorpos.
AdV: adenovrus.
ADV: vrus da doena de Aujeszky (herpesvrus suno 1, SuHV1 ou vrus da pseudoraiva, PRV).
862
Virologia Veterinria
ChPVs: cordopoxvrus.
C: capsdeo.
Cp: citoptico.
863
Abreviaturas e siglas
D
Da: dalton.
DAB: diaminobenzidina.
DAdV: adenovrus de patos.
DBP: protena de ligao ao DNA.
DC: clula dendrtica.
DeAdV: adenovrus de cervdeos.
DHBV: vrus da hepatite B dos marrecos.
DHOV: vrus Dhori.
DM: doena das mucosas.
DNA: cido desoxirribonuclico.
dNTP: desoxirribonucleotdeo.
DPV: papilomavrus de cervdeos.
DR: repetio direta.
ds: cadeia dupla (double stranded).
dsRNA: RNA de ta dupla.
DUGV: vrus de Dugbe.
dUTPase: enzima que desdobra o nucleotdeo UTP.
E
E (early): genes de expresso inicial (ou precoce).
E1 a E7: protenas iniciais.
EAdV: adenovrus eqino.
F
F: protena de fuso.
FA: Fosfatase alcalina
FAdV: adenovrus avirio.
864
Virologia Veterinria
GP: glicoprotena.
H
H: hemaglutinina.
HA: teste de hemaglutinao.
HA: hemaglutinina.
HAD: hemadsoro.
HaOPV: papilomavrus oral do hamster.
HaPV: polyomavrus de hamsters.
HAV: vrus da hepatite A humana.
HBV: vrus da hepatite B humana.
HCC: carcinoma hepatocelular.
HCMV: citomegalovrus humano (HHV-5).
HCoV: coronavrus humano.
HCV: vrus da hepatite C.
HE: hemaglutinina-esterase.
HEF: glicoprotena multifuncional no envelope.
HeLA: clulas de linhagem humana.
HEV: vrus da encefalomielite hemaglutinante dos sunos.
HeV: vrus Hendra.
HFRS: febre hemorrgica com sndrome renal.
HHV: herpesvrus humanos tipos 1-8.
HI: inibio da hemaglutinao.
GDD: glicina-asparagina-asparagina.
865
Abreviaturas e siglas
Ig: imunoglobulina.
IgA: imunoglobulina A
IHC: imunoistoqumica.
IHQ: imunoistoqumica.
IL: interleucinas.
HV: herpesvrus.
IN: integrase.
IPX: imunoperoxidase.
ICQ: imunocitoqumica.
ICTV: Comit Internacional de Taxonomia de Vrus.
ID: intestino delgado.
ID50: dose infectiva para 50% dos cultivos celulares.
IDGA: imunodifuso em gar.
J
JCV: poliomavrus humano.
JEV: vrus da encefalite japonesa.
IFA: imunouorescncia.
IFN: interferon.
kb: quilobase.
kDa: quilodalton.
866
Virologia Veterinria
L
L: large (grande).
L: polimerase.
L (late): genes de expresso tardia.
LACV: vrus La Crosse.
LASV: lassavrus de roedores e humanos.
LAT (LTR): transcrito associado latncia.
LC: clula de Langerhans.
LCMV: vrus da coriomeningite linfoctica.
LCR: regio longa de controle.
LD50: dose letal para 50% dos animais.
LDEV: vrus elevador da lactato desidrogenase.
LDL: lipoprotena de baixa densidade.
LNYV: vrus da necrose amarela da alface.
LPS: lipopolissacardeo.
LPyV: poliomavrus linfotrpico.
LSD: doena da pele nodulosa (lumpy skin disease).
LSDV: vrus da LSD.
LT: laringotraquete infecciosa das galinhas.
lT: antgeno T grande.
LTR: regio longa terminal.
LTR: transcrito relacionado com a latncia.
M
M: mdio (medium).
M: protena da matriz.
M1: protena principal da matriz.
M2: protena com atividade de canal de ons.
MA: protena da matriz.
MA-104: clulas de rim de macaco.
MAC: complexo de ataque membrana.
867
Abreviaturas e siglas
P
N
NA: neuraminidase.
NCP: no-citoptico.
nm: nanmetro.
O
OAdV: adenovrus ovino.
OE: ovo embrionado.
OIE: Escritrio Internacional das Epizootias.
OMS: Organizao Mundial da Sade.
OP: uido esofgico-faringeano.
OPC: carcinoma pulmonar dos ovinos.
OPPV: vrus da pneumonia progressiva dos ovinos.
ORF: fase aberta de leitura.
ORFV: vrus do ectima contagioso dos ovinos.
ORI: origem de replicao.
ORSV: vrus respiratrio sincicial ovino.
868
Virologia Veterinria
RIA: radioimunoensaio.
PoV: poliomavrus.
RIP: radioimunoprecipitao.
PoxV: poxvrus.
PpV: papilomavrus.
RNAse H: ribonuclease H.
RNAse: ribonuclease.
PR: protease.
RNP: ribonucleoprotena.
S: pequeno (small).
SA-12: vrus smio 12.
SABV: vrus sabi.
SaHV-2: herpesvrus saimiri tipo 2.
SARS-CoV: coronavrus causador da pneumonia asitica, SARS.
SAT: South African Territory 1, 2 e 3.
869
Abreviaturas e siglas
T
TAdV: adenovrus de perus.
TANV: vrus Tanapox.
Taq: polimerase do organismo Thermophilus aquatics.
TAS: seqncia associada transcrio.
TAstV: astrovrus de perus.
TBEV: vrus da encefalite transmitida por carrapatos.
TBP: protena de ligao ao TATA box.
Tc: linfcito T citotxico.
TCID50: dose infectiva para 50% dos cultivos celulares.
TCoV: coronavrus dos perus.
TCR: receptor de linfcitos T.
TfR: receptor da transferrina.
TGE: gastrenterite transmissvel dos sunos.
TGEV: vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos.
TGF: fator de crescimento tumoral.
TGI: trato gastrintestinal.
Th: linfcito T auxiliar (helper).
THOV: vrus Thogoto de carrapatos.
TIC: traqueobronquite infecciosa canina.
TIF: fator ativador dos genes alfa.
TK: timidina quinase.
TM: protena transmembrana.
TNF: fator de necrose tumoral.
TOC: cultivo de anel da traquia.
TP: protena terminal.
TRHV: vrus da rinotraquete dos perus.
tRNA: RNA transportador.
TRS: seqncia de regulao da transcrio.
TS: mutantes sensveis temperatura.
TTE: triuortricloroetano.
TTV: circovrus humano (torquetenovrus).
TV-2: vrus Tellina.
870
U
UH: unidade hemaglutinante.
UL: regio nica longa.
UL(n): protena cujo gene est na regio UL.
US: regio nica curta.
UTR: regio no-traduzida.
UV: ultravioleta.
Virologia Veterinria
V
VAP: protena viral de ligao.
VCAM-1: molcula de adeso de clulas vasculares tipo 1.
VEE: encefalite eqina venezuelana.
VEEV: vrus da encefalite eqina venezuelana.
VERO: clula de rim de macaco-verde-africano.
VESV: vrus do exantema vesicular dos sunos.
VHSV: vrus da septicemia hemorrgica.
VIAA: antgeno associado com infeco viral.
W
WB: Western blot.
WBV: vrus Wesselbron.
WDSV: vrus do sarcoma dermal de Walleye.
WEE: encefalite eqina do oeste.
WEEV: vrus da encefalite eqina do oeste.
WHV: vrus da hepatite B das marmotas.
WNV: vrus do Nilo Ocidental
GLOSSRIO
Anticorpo secundrio: anticorpo contra imunoglobulinas (antiIg) de determinadas espcies animais, utilizado em tcnicas de
deteco de antgenos.
Antgeno: macromolcula capaz de se ligar especicamente aos
receptores de clulas do sistema imunolgico.
Antgeno T:
poliomavrus.
protena
complexa
multifuncional
dos
infeco
vrica
transmitida
por
artrpodes
872
Virologia Veterinria
molcula
de
DNA
sintetizada
condies
Glossrio
873
Citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC):
mecanismo de lise celular mediada por clulas, que se ligam
poro Fc de imunoglobulinas que esto ligadas a antgenos na
superfcie da clula-alvo.
Clatrina: protena estrutural da membrana plasmtica, cuja
aglomerao em certos locais antecede e media a endocitose.
Clivagem enzimtica: clivagem de uma macromolcula pela
ao de enzimas.
Cdon: seqncia de trs nucleotdeos que codica um aminocido
ou a terminao da traduo (cdon de terminao).
Cdon de iniciao: seqncia AUG que determina o local exato
do incio da traduo. Este cdon tambm codica o aminocido
metionina.
Cdon de terminao: seqncia de trs nucleotdeos que no
codica aminocidos e determina a terminao da traduo
(UGA, UAA, UAG).
Compactao gentica: capacidade de compactar o mximo de
informao gentica no genoma.
Complementao: interao entre os produtos gnicos de
diferentes vrus que permite a multiplicao de um ou mais
vrus, sem alterao do seu gentipo.
Complemento: sistema plasmtico formado por um grupo
de protenas enzimticas inativas, cuja ativao seqencial
desencadeia a formao de molculas com atividades biolgicas
diversas, principalmente relacionadas com a ativao da
inamao e combate a microorganismos.
Complexo antgeno-anticorpo: complexo molecular formado
pela ligao do anticorpo ao antgeno especco.
Complexo basal de transcrio: conjunto mnimo de fatores
de transcrio e enzima RNA polimerase necessrios para a
realizao de nveis basais de transcrio.
Complexo de ataque membrana (MAC): complexo formado
pelos componentes C5-C9 do complemento, que se insere e
forma poros nas membranas celulares e bacterianas.
Complexo de histocompatibilidade principal (MHC):
protenas de membrana celular, envolvidas na apresentao
de peptdeos endgenos (MHC-I) ou exgenos (MHC-II) para
clulas do sistema imunolgico. Identicadas inicialmente como
responsveis pela rejeio (ou no) de transplantes.
Complexo replicativo: conjunto de enzimas e fatores auxiliares
que realizam a replicao do genoma.
Complexo ribonucleoprotena: complexo formado pelo RNA
genmico e protenas associadas.
Concatmero: molcula longa de DNA formada por mltiplas
cpias de unidades genmicas contnuas. Constituem-se em
molculas intermedirias na replicao do genoma de alguns
vrus DNA.
874
Virologia Veterinria
Degranulao: liberao
citoplasmticos.
do
contedo
de
grnulos
875
Glossrio
876
Exonucleases: enzimas que degradam molculas de cidos
nuclicos a partir da remoo de nucleotdeos de suas
extremidades.
Expanso clonal: multiplicao de clulas a partir de clulas
progenitoras individuais.
Expresso gnica: termo genrico que denota a expresso ou
materializao das informaes genticas contidas no genoma.
Resumidamente, refere-se produo de protenas e s funes
decorrentes das suas atividades.
Fbrica viral: local especco no citoplasma ou ncleo onde se
acumulam os produtos virais e vrions em diferentes estgios de
morfognese. o local de replicao do genoma e produo das
partculas vricas.
Fagocitose: processo celular de internalizao de partculas
grandes, que envolve alteraes marcantes na estrutura da
membrana plasmtica, gasto de energia e reorganizao do
citoesqueleto cortical.
Fagossomo: vescula derivada da fagocitose que contm o
material fagocitado.
Fator de necrose tumoral: um tipo de interleucina secretada por
leuccitos.
Fatores de transcrio: protenas celulares que auxiliam a enzima
RNA polimerase no reconhecimento, ligao aos promotores e
incio da transcrio.
Fentipo: conjunto de caractersticas observveis de um
indivduo. o resultado da expresso do gentipo.
Virologia Veterinria
enzima
utilizada
em
testes
877
Glossrio
878
Imunodifuso em gel de gar (IDGA): tcnica de deteco de
anticorpos (e antgenos) que se baseia na migrao e precipitao
dos complexos antgeno-anticorpos em uma matriz de gar.
Imunoeletromicroscopia: tcnica de microscopia eletrnica que
utiliza anticorpos especcos para melhor localizar e marcar o
antgeno alvo.
Imunouorescncia: tcnica de deteco de antgenos que
utiliza anticorpos conjugados com uma substncia que emite
luminosidade uorescente quando excitada por luz ultravioleta.
Imunogenicidade: potencial de determinado antgeno de
estimular a resposta imunolgica do hospedeiro.
Virologia Veterinria
879
Glossrio
dada
amostras
do
NDV
aparelho
que
quantica
emisso
de
880
mRNA subgenmico: RNA mensageiro com extenso menor do
que o genoma.
miRNA: RNA pequenos produzidos durante a infeco com
alguns vrus e que interferem com funes celulares e virais.
Multiplicidade de infeco (moi): nmero aproximado
de partculas vricas infecciosas por clula contida em uma
suspenso viral inoculada em cultivo celular.
Mutao: alterao da seqncia de nucleotdeos de uma
molcula de cido nuclico em comparao com a molcula
parental.
Mutao em ponto: substituio de um nucleotdeo na molcula
de cido nuclico, comparando-se com a molcula parental.
Mutao espontnea: mutao que ocorre naturalmente,
decorrente de erros da polimerase ou por fatores externos.
Mutao induzida: mutao induzida propositalmente pelo uso
de agentes qumicos ou fsicos.
Mutao letal: mutao que resulta na inviabilidade absoluta do
organismo que a possui.
Virologia Veterinria
881
Glossrio
ovo
de
galinha
com
se
embrio
examinar
em
ovos
882
Virologia Veterinria
883
Glossrio
Recrudescncia: ressurgimento
patolgicos de doena.
sistemas
de
manifestaes
clnico-
884
Virologia Veterinria
resposta
imunolgica
mediada
por
885
Glossrio
886
Taxa de morbidade: freqncia de doena causada por um
determinado agente em relao populao de risco exposta.
Taxa de mortalidade: freqncia de morte causada por um
determinado agente em relao populao de risco exposta.
Taxa de mutao: freqncia de mutao determinada pelo
nmero de mutaes introduzidas por unidade genmica a cada
ciclo de replicao.
Tegumento: substncia protica amorfa presente entre o
nucleocapsdeo e o envelope dos herpesvrus.
TCR: receptor de linfcitos T.
Tcnica sorolgica: tcnica de deteco de anticorpos.
Telomerase: enzima que replica as extremidades do DNA
cromossmico celular.
Template (molde ou modelo): molcula de DNA ou RNA
utilizada como molde (ou modelo) pelas polimerases para a
sntese de molculas exatamente complementares (molculaslhas).
Tendncia secular: padro de variao de doenas cuja incidncia
varia lenta e discretamente ao longo de grandes perodos.
Termociclador: aparelho utilizado para a tcnica de PCR. Produz
ciclos contnuos, constitudos por trs etapas, com temperaturas
diferentes, que proporcionam a ocorrncia das trs reaes:
desnaturao, anelamento e extenso.
Virologia Veterinria
Transformao
tumoral:
transformao
celular
com
caractersticas fenotpicas de clulas neoplsicas, tumorais.
entre
entre
de
agentes
887
Glossrio
888
Veculo: o mesmo que fmite.
Velognica: denominao dada a amostras muito patognicas
do NDV.
Vetor bacteriano: bactria utilizada para carrear genes
heterlogos (virais) com ns vacinais.
Vetor biolgico: inseto que participa biologicamente da
transmisso de um agente infeccioso. O agente geralmente
amplicado ou desenvolve alguma fase do seu ciclo no
organismo do vetor para, ento, ser transmitido.
Vetor mecnico: inseto que participa apenas mecanicamente da
transmisso de um agente infeccioso.
Vetor vacinal: organismo que carreia genes heterlogos (de
outro organismo) e utilizado para imunizar hospedeiros.
Via de excreo: via pela qual os agentes infecciosos so
excretados do hospedeiro.
Via de penetrao: via pela qual os agentes infecciosos penetram
no hospedeiro.
Vigilncia epidemiolgica: conjunto de atividades utilizadas
para monitorar continuamente a situao epidemiolgica de
uma determinada doena em uma populao.
Viremia: presena de vrus no sangue.
Viremia ativa: viremia derivada da replicao viral em tecidos
do hospedeiro.
Viremia passiva: viremia derivada da introduo direta dos
vrus no sangue.
Viremia primria: viremia que se segue replicao primria.
Ocorre precocemente durante a infeco.
Viremia secundria: viremia derivada da replicao viral
nos rgos e tecidos-alvo. Ocorre mais tardiamente durante a
infeco.
Virologia Veterinria