Estrutura e Função de

proteínas
Continua...
 Estrutura Quaternária

• Descreve o número e as posições relativas das

subunidades nas proteínas multiméricas;
• O nível + alto da estrutura são os arranjos
macromoleculares...

Muito grandes
Dezenas de cadeias polipeptídicas
Podem ter ác. Nucléicos
Ex. citoesqueleto, maquinaria de transcrição
A maquinaria de transcrição do DNA

Fatores gerais de transcrição

RNA polimerase
Complexo
mediador

promotor

Complexo pré-
iniciação da
transcrição
 Dobramento (enovelamento)
• Como a célula promove o enovelamento adequado de uma
proteína?

qualquer cadeia polipeptídica pode, em tese, sofrer dobramentos

em 8n conformações...
onde n = número de resíduos
(há 8 ângulos de ligação permitidos no esqueleto)

Porém adotam uma conformação específica

Estado nativo
(para a maioria é o estado + estável)

A informação está codificada na seqüência...

 O enovelamento in vivo é promovido por
chaperonas

• Estudos de desnaturação e renaturação in vitro

Muitas proteínas sofrem renaturação espontânea

Mas a maioria não....

Nas células há mecanismos que garantem o rápido e

eficiente enovelamento, mesmo sob altas [ ]

Isso se dá pela presença de chaperonas,

Proteínas que atuam no dobramento
 Chaperonas
• Há 2 famílias gerais:

1) Chaperonas moleculares: ligam e estabilizam

proteínas não enoveladas (ou parcialmente);

2) Chaperoninas: facilitam diretamente o enovelamento.

 Como as proteínas trabalham?

Ligam-se à outras moléculas (=ligante)

(forte ou fracamente, mas muito específica)

A ligação envolve ligações fracas simultâneas

Do ligante no sítio de ligação

Enzimas são uma classe especial de proteínas:

Ligam-se aos substratos → produtos
 Alguns tipos comuns de enzimas

ENZIMA REAÇÃO CATALISADA

Nucleases Hidrólise ligações entre nucleotídeos
Proteases Hidrólise ligações entre aminoácidos
Sintetases Condensação de duas moléculas menores
Isomerases Rearranjo de ligações dentro de uma única
molécula
Polimerases Polimerização
Quinase Adição de grupos fosfatos
Fosfatase Remoção de grupos fosfatos
ATPase Hidrólise de ATP
Desempenho das enzimas é dado por KM e Vmax

Velocidade de formação dos produtos

de reação (unidades relativas)

Concentração de substrato [S]

 Enzimas de uma via comum em geral estão
associadas fisicamente
• Enzimas que participam num processo comum, em geral, estão
localizadas no mesmo compartimento celular
reagentes

produtos

reagentes produtos

reagentes ou
Suporte estrutural
produtos

reagentes produtos
 A degradação controlada de proteínas

• A degradação controlada é uma forma

de regular a quantidade de proteína
presente num espaço de tempo.

• A vida média varia de segundos a

anos...

• A via de degradação citosólica tira de

circulação proteínas de vida curta e
reconhece e elimina aquelas
danificadas;

• No citossol, as proteínas são

degradadas em Proteossomos =
complexo de enzimas proteolíticas.
Como os proteossomos reconhecem as proteínas
que vão para degradação?

Atuam em proteínas marcadas para a destruição

Ligadas a ubiquitina....
Ácidos nucléicos
Bases nitrogenadas
purinas

pirimidinas
 Ligação
fosfodiéster

Ligação
fosfodiéster
A dupla hélice: modelo 3D do B DNA
Modelos das diversas estruturas do DNA

10,5pb/volta 11 pb/volta Hélice levógira

Não há pontes de H paralelas ao eixo da
hélice...há flexibilidade
 O DNA dupla fita pode sofrer separação
reversível

DNA

Porcentagem de pares GC
fita simples
Absorção de luz 260nm

DNA
fita dupla

Temperatura
Muitas moléculas de DNA são circulares

Supertorcido Círculo relaxado

Micrografia eletrônica do DNA viral SV40

 RNAs de diferentes tipos e funções

O RNA é quimicamente mais instável que o DNA...

Mas pode assumir função catalítica... as Ribozimas.

O RNA pode aparecer como:

• Fita simples
• Fita dupla (RNA-RNA ou RNA-DNA)
Estrutura secundária e terciária do RNA
A polimerização de ribonucleotídeos é mediada
pela RNA polimerase
 A síntese de RNAm inicia-se em
sítios específicos no DNA molde

Como a enzima “acha” o início do gene?

A RNA polimerase liga-se a promotores
↓
Seqüências específicas, que nas bactérias são
reconhecidas pela RNApol+fator σ

~40pb localizados a 5’do início da transcrição

(Seqüências consenso)
Em E. coli:
Pribnow box Início da transcrição
5’

TTGACA TATAAT
-35 -10 +1
 Transcrição
Iniciação
 Transcrição
Extensão

Terminação
Modelo de uma RNA polimerase bacteriana ligada
a um promotor
 Transcrição em eucariotos

Mesmos princípios fundamentais de procariotos;

Distingue-se por ter múltiplas RNA polimerases e seqs.

de controle:
RNA pol. I ⇒ sintetiza a maioria dos rRNAs
RNA pol. II ⇒ sintetiza os precurssores do mRNA;
RNA pol. III ⇒ sintetiza os precurssores do rRNA 5S,
tRNAs e outros
RNA pol. mitocondriais e em cloroplastos.
Em geral: variam de 500 a 700 kDa.
 A organização dos genes difere entre
pro e eucariotos
Procariotos:
• Organização mais comum dos genes
em OPERONS

Genes operando como uma unidade de

resposta a um único promotor

um RNAm comum para várias proteínas

relacionadas

• Há poucas regiões não codificantes

Eucariotos:
– Cada gene é transcrito a partir de seu
próprio promotor
– Em geral, há RNAm precursores que
são processados
 O processamento do RNAm

• Nos procariotos transcrição e

tradução podem ser
simultâneos, nos eucaritos
não;
• Modificação no pré-RNAm :
5’: cap 5’ de 7-metilguanilato
3’: clivagem e poliadenilação
(100 a 250 A’s) pelo
complexo da poli A
polimerase;
splicing: retirada dos íntrons e
união dos éxons.
Demonstração de splicing no gene de ovoalbumina por hibridização
Seqüências conservadas delimitam os íntrons
Splicing alternativo da α tropomiosina

Organização dos exons no gene

Músculo
estriado

Músculo
estriado

mioblasto

Músculo
da boca

Fibroblasto

Hepatoma

cérebro
Os 3 papéis do RNA na tradução

cadeia chegando
polipeptídica em
crescimento

Ribossomo

de partida

Movimento do ribossomo
O ribossomo
A informação do RNA mensageiro
 2

1
 Posição Wobble

Pareamento
Watson-Crick
RNA transportador (tRNA)
Estrutura e características
gerais dos tRNAs
 RNA transportador (tRNA)

Estrutura e características
gerais do tRNAala de leveduras
Símbolos usados:

T - ribotimidina
Ψ – pseudouridina
I – Inosina
D – 5,6-diidrouridina
m1I – 1-metilinosina
m1G – 1-metilguanosina
m2G – N2-dimetilguanosina
 O “carregamento” dos Classe II
transportadores é feito pelas
Aminoacil-tRNA-sintetases (aaRS)

Classe I
A tradução pode ser dividida
em 3 etapas:
iniciação, extensão e
terminação
 Terminação

Fatores de liberação
auxiliam esta etapa
As proteínas são produzidas em
polirribossomos

Modelo de síntese protéica

em polissomos circulares
O que acontece com o RNAm após a
síntese protéica?