Biossíntese de DNA e RNA

(Replicação e Transcrição)

Técnicas de análise e manipulação

de ácidos nucleicos
O dogma central da Biologia Molecular

Replicação e Reparo

Reverse
Transcription

Transcrição e Processamento

Tradução, endereçamento
e modificação de Proteínas

Controle do fluxo da informação:

regulação da expressão gênica
Replicação do DNA

Características da replicação

Reação catalisada pelas DNA polimerases

Vários tipos de DNA polimerases

Direção da síntese das cadeias

Síntese contínua e descontínua

Fatores envolvidos na replicação

Inibidores da replicação
 Replicação do DNA
Características da replicação:
Semi-conservativa Bi-direcional
 Replicação do DNA: mecanismos

DNA polimerases:
adição de dNTPs à extremidade 3´OH
- requer uma cadeia pré-formada (primer)
- requer molde
- síntese ocorre na direção 5’  3’
5’

fita molde
3’ 5’
Os vários tipos de DNA polimerases
DNA polimerases bacterianas:
DNA pol I
DNA pol II
DNA pol III
Etapas na replicação do DNA

1- Síntese dos primers

2- Polimerização da fita líder
3- Polimerização da fita atrasada
(fragmentos de Okasaki)
4- Retirada dos primers
5- Preenchimento das lacunas
6- Ligação dos fragmentos de Okasaki
 Os componentes da maquinaria de replicação

1- Reconhecimento da ori e abertura

das fitas  Helicase
2- Síntese dos primers  Primase
3- Polimerização da fita líder
DNA Ligase
4- Polimerização da fita atrasada
(fragmentos de Okasaki) DNA pol I
5- Retirada dos primers DNA pol III
6- Preenchimento das lacunas
7- Ligação dos fragmentos de Okasaki
Videos 1201, 1202  DNA ligase
Drogas inibidoras da replicação

di-deoxi NTP

AZT
Reparo do DNA

- reparo direto da lesão

- reparo de erros de pareamento (MMR)
- reparo por excisão de bases (BER)
- reparo por excisão de nucleotídeos (NER)
- reparo por recombinação
Transcrição do RNA
• Diferenças na estrutura e organização dos
genes em procariotos e eucariotos
• Reação catalisada pela RNA polimerase
• Os vários tipos de RNA polimerases
• Estrutura dos promotores
• Fatores de transcrição eucarióticos
• Eventos pós-transcricionais em eucariotos:
- processamento
- adição de CAP
- adição de cauda poli-A
• Estrutura e papel da cromatina na transcrição
 Sequência nucleotídica e de aminoácidos
ATGagtggccgctcccgcgtctctctctctctctctctcttttttttt
tttgtttgttcttgattgattgatttctcttttgtgtgtttccccgcg
gagccagcgcggcaaatagggaagaaggaagggacgggcgtttaacat

seq. de bases
no DNA e RNA

seq de cadeia
laterais de aa

estrutura
primaria
secundaria
e terciaria
na proteina
 Expressão gênica

DNA RNA protein

Transcrição Tradução

Procariotos x Eucariotos
Expressão gênica em eucariotos e em procariotos

Eventos pós-transcricionais
em bactérias

Estrutura do genoma em
procariotos e eucariotos

Presença de íntrons no genoma eucariótico

em eucariotos

pre-mRNA

mRNA
 Transcrição do RNA
5’  3’
 RNA Polimerases RNA polimerase bacteriana
(adição de NTPs a extremidade 3’ OH de uma cadeia ribonucleotica
requer molde
não requer iniciador
reconhecem uma sequência “promotora” no início do gene
Etapas da transcrição
1- Reconhecimento do promotor e abertura das fitas
2- Iniciação da cadeia
3- Elongação da cadeia
4- Terminação da cadeia
 Etapas na transcrição do mRNA

Em procariotos Em eucariotos

Reconhecimento do promotor Reconhecimento do promotor

Iniciação Iniciação

Elongação Elongação

Terminação Terminação

Processamento do pré-mRNA

Transporte nucleocitoplasma
 A maquinaria de transcrição em
eucariotos

3 RNA polimerases:
- RNA pol I: rRNA
- RNA polI: mRNA
- RNA pol III: tRNA

RNA pol II +
- Fatores de transcrição basais
- Ativadores e inibidores da transcrição
O pré-mRNA eucarioto sofre 3
etapas de processamento
acopladas a transcrição

adição de CAP

retirada dos introns

A transcrição e o processamento
do mRNA eucarioto são eventos
simultâneos

adição de poli A
Etapas do processamento pós-transcricional
e estrutura do mRNA eucariótico maduro

 Adição do CAP no 5´
 Adição da cauda poli A no 3´
 Retirada dos introns (cis-aplicing)

estrutura do mRNA eucariótico

5´CAP
região codificadora (A)n
5´UTR 3´UTR
 Retirada dos introns (cis-splicing)

pre-mRNA

Spliceossomo:
snRNA
mRNA proteínas
Splicing alternativo e geração de diversidade
no conjunto de proteínas
Adição da cauda poliA
Poliadenilação
 Fatores de clivagem
(CPSF e CFI e CFII)

Poli A polimerase
(sinal para adição de poliA
presente no pre-mRNA: AAUAAA)

Proteina de Ligação ao poliA (PABP)

AAAAAAAAAA
 Estrutura do mRNA eucariótico
5’ UTR
Região codificadora

3’ UTR
 Estrutura da cromatina em eucariotos
Empacotamento dos nucleossomas
octâmero de histonas:

H2A H3
H2B H4

Histona H1 entre os nucleossomos

 Papel estrutural e regulatório da cromatina
 Papel estrutural: empacotamento do DNA no núcleo

 papel regulatório: controle do acesso da maquinaria de transcrição:

histonas acetilases
histonas desacetilases

Acetilação de histonas

 desempacotamento
da cromatina

 ativação da expressão
gênica
Diminuição das cargas positivas das
histonas por acetilação de Lys

Menor interação DNA-histona

Ativação do gene
Fatores envolvidos no controle da transcrição

em eucariotos:
- Sequencias na região 5’ do gene
- Fatores de transcrição gerais, reguladores e co-reguladores

Regulatory transcription factors