Prof.

Sérgio de Araújo
 Prêmio Nobel medicina 2009
• Descoberta da telomerase e sua relação entre
envelhecimento celular e câncer em 1985
O telômero
A telomerase é uma enzima que
atua nos telômeros, que são as
extremidades dos cromossomos
compostos de seqüências
repetitivas de DNA e que se
encurtam cada vez que a célula se
divide graças a ele a maioria das
células humanas podem se dividir
apenas cerca de 50 a 100 vezes,
sendo que cada vez que a célula se
divide, os seus telômeros ficam
mais curtos e ela vai caminhando
para a senescência(envelhecimento
natural celular).
Telômero e telomerase
 Roteiro
• Quando ocorre a replicação do DNA
• Como avança a bolha de replicação
• Como é sintetizada a fita líder e a fita retardada
• O papel da helicases e da topoisomerases
• Papel da primase na replicação do DNA
• Diferenças entre a DNA polimerase III e a DNA
polimerase I
• Papel da DNA ligase
• Função da Telomerase
Francis Crick, 1958:
Dogma Central da Biologia Molecular

DNA

RNA Proteína
Mitose / Meiose
A replicação do DNA ocorre durante a
fase S do ciclo celular
 Replicação do DNA
• Características gerais do processo de
replicação
• DNA polimerase
• Estágios da replicação: Iniciação, Alongamento
e Término
• Telômeros e Telomerase
Como acontece a síntese do DNA?
Replicação semi-conservativa
 Questionamentos
• As fitas de DNA parental são completamente
desenroladas antes que cada uma seja
replicada?
• A replicação inicia em pontos aleatórios ou em
um ponto determinado?
• Após iniciar em qualquer ponto do DNA, a
replicação segue em um sentido ou em
ambos?
Origens de replicação
• Locais com um contexto
de sequência específico

• Ligam proteínas
específicas

• Quando acionadas,
essas proteínas
permitem o início da
replicação
Origens de replicação
Direção da forquilha de replicação
Micrografia, bolha de replicação

Forquilhas de replicação
O DNA é sintetizado no sentido 5’ → 3’

(Fita contínua)

(Fita descontínua)
 Direções da
replicação na Forquilha
 Replicação do DNA
• Características gerais do processo de
replicação
• DNA polimerase
• Estágios da replicação: Iniciação, Alongamento
e Término
• Telômeros e Telomerase
 Tipos de DNA polimerase
• DNA polimerase I
– Descoberta em 1956 (Kornberg pai)
– Função precisa descoberta apenas em 1969: remove o
primer de RNA da fita descontínua
• DNA polimerase III
– Descoberta em 1970 (Kornberg filho)
– Principal enzima que realiza a replicação em procariotos
• DNA polimerase II
– Lenta, envolvida em reparo do DNA
DNA polimerase
Mecanismo catalítico da reação
de polimerização

Por que o DNA é sintetizado

no sentido 5` → 3` ?
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação

A DNA Pol III constrói as

fitas filhas a partir de
dNMP, utilizando dNTP
como precursores.

A liberação do PPi e a
sua posterior hidrólise
por uma pirofosfatase
fornece a energia para
a polimerização do
DNA
 Replicação do DNA
• Características gerais do processo de
replicação
• DNA polimerase
• Estágios da replicação: Iniciação, Alongamento
e Término
• Telômeros e Telomerase
 Replissoma
Conjunto de enzimas e proteínas necessário ao
processo de replicação

• Helicase
• Primase
• Polimerases
• Topo-isomerases
• Proteínas de ligação ao DNA
• Ligase
 Iniciação
Proteína Função

DnaB (helicase) Desenrola o DNA

SSB Mantém as fitas de DNA

separadas
DNA girase Alivia a tensão causada pela
(topoisomerase II) desnaturação do DNA
DnaG (primase) Sintetiza o primer de RNA

DNA polimerase III Enzima replicativa

DNA polimerase I Remove os primers e

preenche seus espaços
RNase Remove os primers

DNA ligase Liga os fragmentos de DNA

(fragmentos de Okazaki)
Somente origens completamente metiladas podem
iniciar a replicação
 Desenovelamento do DNA
• Retirada das histonas
• Proteínas de ligação a fita simples (SSBPs) – Evitam a
renaturação do DNA
• DNA helicase
– Quebra pontes de H

• DNA topoisomerases II
– Tiram a tensão
 Síntese de DNA em Procariontes
Início da Replicação
A Topoisomerase alivia a tensão causada pelo
desenrolamento da dupla fita de DNA
 Alongamento
• A extensão da cadeia é catalisada pela DNA
polimerase III, utilizando o grupo 3’-OH do iniciador
de RNA (primer) como aceptor do primeiro
desoxirribonucleotídeo

• Síntese da fita contínua (leading strand)

• Síntese da fita descontínua (lagging strand)

 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
A síntese das fitas de DNA, inicia com a formação de um
iniciador(primer), um oligonucleotídeo de RNA (10-60
nucleotídeos), pela enzima DNA primase.
3´ 5´ 3´
5´
Primer
Fita descontínua 5´ 3´
Fita contínua
Primer

3´ 5´
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
A DNA polimerase III adiciona desoxiribonucleotídeos aos
primers, sintetizando a fita líder ou contínua e os fragmentos
de Okazaki (fita atrasada ou descontínua).
5´ 3´
5´ 3´

5´
3´
Fragmentos de Okazaki 3´
(contém de 1000-2000
nucleotídeos) 5´

3´ 5´
 Replicação das fitas
• Fita líder
– Primase age uma vez

• Fita retardada
– Primase age várias vezes
– 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication possible
discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967 Jun;20(3):255-60
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
Posteriormente, os primers são removidos pela enzima RNase
associada a DNA polimerase I.
3´ 5´ 3´
5´
5´

2 cadeias de
3´
polinucleotídeos 3´
5´

3´ 5´
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
A DNA polimerase I preenche os espaços deixados pelos primers
de RNA removidos, substituindo-os por DNA.

3´ 5´ 3´
5´

5´ 3´

3´ 5´
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
A DNA ligase fará a ligação dos fragmentos de DNA
Forquilha de replicação
Correção de Erro pela DNA pol I
 Síntese de DNA em Procariotos
Síntese na Forquilha de Replicação
A geometria do pareamento incorreto exclui os bases do sítio
ativo da DNA polimerase
 Síntese de DNA em Procariotos
Terminação
As forquilhas se encontram em uma região contendo múltiplas
cópias de uma seqüência de 20pb, denominada Seqüência Ter
Síntese de DNA em Eucariotos
Proteínas Envolvidas
Tipos de DNA polimerases em eucariontes

Polimerase Funções
 • Síntese dos primers
• Fechamento espaços
• Inicia replicação do DNA

Replicação na mitocôndria
 • Replicação DNA
• Reparo do DNA
 • Replicação do DNA
• Reparo do DNA

Fazem o reparo do DNA
 Síntese de DNA em Eucariotos
Proteínas Envolvidas
Formação do complexo de replicação em eucariontes

FEN1

DNA polimerase 
RNase H

Fita atrasada ou
descontínua
(Fragmentos de
Okazaki - 150 a 200
nucleotídeos)
Fita líder ou contínua
Telômero (Final da replicação em
eucariotos)

Calado RT, Young NS. Telomere diseases. N Engl J Med. 2009 Dec 10;361(24):2353-65.
Síntese de DNA em Eucariotos
Final da Replicação
O Telômeros
Sem a telomerase os cromossomos são
encurtados após cada divisão celular

Telomerase Telomerase
Síntese de DNA em Eucariotos
Final da Replicação
A Telomerase
Animação - Replicação
Animação - Telômero
 Questões de Revisão
• Quais as características das DNA polimerases I, II e III de
procariotos?
• Onde começa a replicação e em qual sentido da fita de DNA
ela prossegue?
• Quais as enzimas responsáveis por abrir a fita de DNA e
aliviar a tensão durante a replicação?
• O que significa fita contínua e descontínua? Como elas são
geradas?
• Como a replicação termina em procariotos?
• Qual o papel da telomerase e o que aconteceria se essa
enzima não funcionasse?
 Próxima aula
• Transcrição do DNA!!!