UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DISCIPLINA: EVOLUÇÃO CELULAR
Curso: Ciências Biológicas

FLUXO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA

REPLICAÇÃO DO DNA

Profa. Lia d’Afonsêca P. de Miranda

Replicação do DNA
Fluxo da informação genética

DNA RNA PROTEÍNAS

Replicação
Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed
 Marcação de DNA por incorporação
Replicação do DNA - Características de N pesado

Bactérias crescendo em
• Semiconservativa meio contendo
nitrogênio pesado

Bactérias em meio
contendo nitrogênio leve

Molécula paterna

Extração do DNA das

Moléculas filhas células

Suspensão do DNA em
cloreto de césio

Centrifugação

Moléculas netas

Rplicação semiconservativa do DNA. São mostradas as

cadeias de DNA progenitora e as cadeias filhas em três
gerações sucessivas
Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed
Replicação do DNA - Características

• Ocorre no sentido 5’→ 3’

Reação
irreversível

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Replicação do DNA - Características

• Tem início em origens de replicação

Em célula eucariótica: múltiplas origens

Lodish et al., Molecular Cell Biology, 5thed

Replicação do DNA - Características

Em procariotos

Na região das origens foram caracterizados dois grupos de sequências:

- 4 sequências repetidas com nove pb,cujo consenso é 5’ TTAT(C/A)CA(C/A)A 3’
- 9 sequências repetidas de 13 pb ricas em AT

Estágios do início da replicação em oriC

1.Complexo inicial – sítios específicos para reconhecimento das proteínas iniciadoras

2.Complexo aberto – abertura das duas hélices nas sequências ricas em AT
3.Complexo pré-priming – helicase já atuando, mantém as duas fitas dissociadas

* Presentes também em bacterófagos, plasmídeos e organelas

Replicação do DNA - Características
• A replicação é bidirecional

Abertura da hélice mostrando a bolha de

replicação e as forquilhas de replicação
que movem-se em direções opostas
Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed
Replicação do DNA - Características

• Assimétrica (em procariotos e eucariotos)

- Adição contínua de nucleotídeos

- Adição descontínua de nucleotídeos

Lodish et al., Molecular Cell Biology, 5thed

Replicação do DNA - Características

• A DNA polimerase é autocorretiva (ação das nucleases)

• O início da replicação depende de um primer de RNA

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Replicação do DNA - Mecanismos

Enzimas que atuam no processo de replicação

• Proteínas iniciadoras

• Helicase

• Primase – síntese do RNA iniciador (primer)

•DNA polimerase
- polimerização de nucleotídeos (polimerase)
- mecanismo de verificação – remoção de erros (nuclease)

• DNA ligase une os fragmentos de DNA na fita descontínua

• Nuclease – degradação do primer após o início da replicação
• Polimerase de reparo – substitui o RNA iniciador por DNA
Replicação do DNA - Mecanismos

Formação das fitas contínua e

descontínua

Stryer et al, 2004

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Replicação do DNA - Mecanismos

Molde da fita lider

Grampo deslizante

DNA polimerase sobre a

Fita lider recém-sintetizada fita líder

Hélice parental
do DNA
Próximo fragmento de Okasaki
começará aqui

Primer RNA
DNA helicase
PRIMOSSOMO
Fragmento de Okasaki novo DNA primase

Fita simples de DNA

Grampo carregador
Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed
DNA polimerase sobre a fita molde
(fragmento de Okasaki recém
finalizado)

Proteínas na forquilha de replicação, modelo simplificado mostrando

as enzimas atuando independentemente na duas fitas
 Replicação do DNA - Mecanismos

Fita Fita recém-

molde sintetizada
DNA polimerase
sobre a fita molde

Hélice
parental
Fita simples de
DNA ligada a Primase
proteínas Helicase

Fita molde

Grampo
Primer (RNA) carregador
Fragmento de Fita recém-
Okazaki novo sintetizada
DNA polimerase sobre a
fita molde (fragmento de
Okasaki recém finalizado)

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Replicação do DNA
Término da replicação

Local de encontro
Em procariotos das forquilhas

T2 T1
término da término da
forquilha 2 forquilha 1

Ori
Término da replicação

Os telômeros formam caps no

final dos cromossomos. Elas
Em eucariotos contêm uma únicasequência
de DNA a qual se repete
diversas vezes
Término da replicação
Replicação do DNA nos telômeros

Quando o primer é removido da

extremidade 5’ da fita atrasada,
uma fita do DNA parental
,permanece não pareada

A telomerase se liga a fita simples e

adiciona desoxirribonucleotídeos ao
final do DNA parental

A telomerase se move e a
adição de nucleotídeos se
repete

A primasee adiciona um novo primer

para que a DNA polimerase possa
sintetizar a fita complementar na
direção 5’→3’, recuperando o
comprimento original do cromossomo
Término da replicação

Replicação do DNA no telômero

DNA perdido da fita 1. Quando o primer é
atrasada removido da extremidade 5’
da fita atrasada, uma fita do
DNA parental permanece
não pareada
Telomerase com seu
RNA molde
2. A telomerase se liga a fita
simples e adiciona
desoxirribonucleotídeos ao
final do DNA parental

3. A telomerase se move e a
adição de nucleotídeos se
repete e a telomerase se
desliga

4. A primase adiciona um
novo primer para que a DNA
polimerase possa sintetizar
a fita complementar na
direção 5’→3’, recuperando
o comprimento original do
cromossomo
Tabela comparativa entre as enzimas que participam da replicação em
eucariotos e procariotos

PROCARIOTOS
Cinco polimerases I,II,III,IV e V
Funções da polimerase:
I está envolvida na síntese, revisão, no reparo
e remoção de primers
II enzima de reparo
III é a principal enzima da polimerização
IV e V são enzimas de reparo sob condições
anormais
Polimerases também são exonucleases
Uma origem de replicação
Fragmentos de Okazaki com 1000 a 2000
resíduos de comprimento
Não há proteínas combinadas com o DNA
EUCARIOTOS
Cinco polimerases (α,β,γ,δe ε)
Funções da polimerase:
α enzima de polimerização
β enzima de reparo
γ síntese de DNA mitocondrial
δé a principal enzima da polimerização
ε função desconhecida
Nem todas as polimerases são exonucleases
Várias origens de replicação
Fragmentos de Okazaki com 150 a 200
resíduos de comprimento
Há histonas complexadas com o DNA

Campbell & Farrell, 2006 Bioquímica 5 ed.

Reparo do DNA
Mutação
- Alterações gênicas
- Aberrações cromossômicas
Alterações gênicas

perda de nucleotídeos (deleção)

Inserção de nucleotídeos (intercalação)
troca de nucleotídeos

TROCA DE INFORMAÇÃO NO GENE

SÍNTESE DE PROTEÍNA DIFERENTE DA ESPERADA OU

AUSÊNCIA DE SÍNTESE DE PROTEÍNA
 Reparo do DNA
Mutações
- Em células somáticas
- Em células germinativas – transmitidas à descendência
Mutações gênicas espontâneas
- Durante a replicação
- Mudanças químicas espontâneas

DEPURINAÇÃO
Açúcar DEPURINAÇÃO
depurinado

C–
G

DESAMINAÇÃO

DESAMINAÇÃO

C–G
U–A

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Reparo do DNA
Consequências das moficações químicas

C desaminada A depurinada

G será Um par de nucleotídeos A-T

trocada por A será perdido

Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed

Como os erros são distinguidos

Propõe-se a existência de cortes nas fitas recém-sintetizadas seja o sinal
para que as enzimas de reparo reconheçam o pareamento incorreto
 Mecanismo básico de reparo do pareamento incorreto
Etapas mais comuns nos diferentes tipos de reparo

ETAPAS
Pares de bases ligados por
pontes de hidrogênio
1. Retirada do nucleotídeo trocado
2. Clivagem da porção açúcar fosfato
URACILA DNA
GLICOSIDASE
por ação sequencial da endonuclase
AP e da fosfodiesterase
Perda de uma base na hélice
de DNA 3. Preenchimento do intervalo pela
DNA polimerase e junção dos pontos
ENDONUCLEASE AP E cortados pela DNA ligase
FOSFODIESTERASE REMOVEM
O AÇÚCAR FOSFATO
▼
hélice de DNA com intervalo de um
único nucleotédeo
▼
DNA POLIMERASE ADICIONA OS NOVOS
DNA REPARADO
NUCLEOTÍDEOS, DNA LIGASE REPARA O CORTE

DNA REPARADO
Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 4thed