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JOEL NERES DE SOUZA – PSE/UFAM 2020

INTRODUÇÃO

 A células deve manter um alto grau de organização em um

ambiente desfavorável
 A replicação do DNA deve ocorrer antes de a célula produzir
duas células-filhas geneticamente iguais.
 A replicação ocorre na fase S do ciclo celular
 A manutenção da ordem também requer a vigilância contínua
e o reparo dessa informação genética, devido a danos por
compostos químicos e radiação oriundos do ambiente, por
acidentes térmicos e por moléculas reativas.
 A primeira enzima que polimeriza nucleotídeos, a DNA-
polimerase, foi descoberta em 1957.
MANUTENÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE DNA  O crescimento da fita nascente é no sentido 5’→ 3’

As taxas de mutação são extremamente baixas

 Raramente os processos de manutenção do DNA celular falham,
resultando em uma alteração permanente no DNA. Tal alteração
é chamada de mutação
 A taxa de mutação, de aproximadamente 1 nucleotídeo alterado
por 1010 nucleotídeos cada vez que o DNA é replicado
 O dano pode ser causado por clivagem espontânea das ligações
químicas do DNA, por agentes ambientais como radiações
ultravioleta e ionizante, e pela reação com substâncias
genotóxicas, que são subprodutos do metabolismo celular normal
ou que ocorrem no ambiente.
 As células de um animal ou planta com reprodução sexual são de
dois tipos: células germinativas e células somáticas.
 As células germinativas transmitem a informação genética do
progenitor aos seus descendentes;
 As células somáticas formam o corpo do organismo
 A forquilha de replicação possui uma estrutura assimétrica “Y”.
 A fita-filha de DNA sintetizada continuamente é denominada fita-
líder, ou fita contínua.
 A síntese de uma fita-filha, chamada de fita-líder, pode proceder
continuamente a partir de um único iniciador de RNA
 Sua síntese precede levemente a síntese da fita-filha sintetizada
de modo descontínuo, conhecida como fita retardada, ou fita
descontínua.
 Os fragmentos de Okazaki são polimerizados apenas na cadeia
de direção 5’→3’ na fita descontinua e são unidos após sua
síntese(DNA-ligase), formando longas cadeias de DNA.

 Tendo as helicases separado o DNA parental em uma origem,

uma RNA- polimerase especializada chamada primase forma um
pequeno iniciador complementar às fitas-molde separadas.

 A sequência do genoma humano (aproximadamente 3,2 × 109

pares de nucleotídeos) permanece inalterada ou altera-se
apenas por alguns poucos nucleotídeos a cada vez que uma
célula humana típica se divide.
 A maioria dos seres humanos transmita instruções genéticas
precisas de uma geração a outra e também evita que as
alterações nas células somáticas originem um câncer.

TODA REPLICAÇÃO DE DNA OCORRE DE MODO

SEMICONSERVATIVO

 Replicação semiconservativa, porque cada fita original de

nucleotídeos permanece intacta (conservada), apesar de não se
combinar mais com a mesma molécula; a molécula original de
DNA tem sua metade (semi) conservada durante a replicação.
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 A replicação do DNA necessita da cooperação de várias

proteínas
 A DNA-polimerase e a DNA-primase, que catalisam a
polimerização dos nucleosídeos trifosfato;
 As DNA-helicases que auxiliam na abertura da dupla-hélice para
permitir que as fitas sejam copiadas
 Proteínas ligadoras (SSB) auxiliam as helicases, estabilizando
a conformação distorcida e de fita simples, e evitam a formação
de pequenos grampos que formam-se rapidamente no DNA de
fita simples
 A DNA-ligase é uma enzima que degrada os iniciadores de RNA,
para ligar os fragmentos descontínuos de DNA formados na fita
retardada,
 As DNA-topoisomerases, que aliviam a tensão causada pelo
enrolamento helicoidal e os problemas de emaranhamento do
DNA.
 Muitas dessas proteínas associam-se entre si na forquilha de
replicação, formando uma “maquinaria de replicação” altamente
eficiente, em que as atividades e os movimentos espaciais dos
componentes individuais são coordenados.

INÍCIO DA REPLICAÇÃO DO DNA EM EUCARIOTOS

Em resumo, cada forquilha de replicação ativa requer cinco

componentes básicos:

 A helicase para desenrolar o DNA.

 As proteínas ligadoras de fita única para proteger as fitas de
nucleotídios e evitar a formação de estruturas secundárias.
 A topoisomerase girase para remover a fita à frente da
forquilha de replicação.
 A primase para sintetizar primers com um grupo 3′-OH no
início de cada fragmento de DNA.
 A DNA polimerase para sintetizar a fita líder e fita tardia de
nucleotídios.

INÍCIO E TÉRMINO DA REPLICAÇÃO DO DNA NOS

CROMOSSOMOS

 A síntese de DNA inicia na origem de replicação

 Esse mecanismo assegura que cada origem de replicação seja

 A replicação de DNA é iniciado por proteínas iniciadoras
especiais que se ligam à fita dupla de DNA e separam as duas
ligações, rompendo as ligações de hidrogênio entre as bases.
 Os segmentos de DNA ricos em pares de bases A-T são
relativamente mais fáceis de serem separados, e essas regiões
de DNA ricas em pares A-T estão normalmente presentes nas
origens de replicação.
 Em cromossomos eucarióticos podem haver múltiplas origens de
replicação
ativada apenas uma vez por ciclo celular.
 Uma origem de replicação pode ser utilizada apenas se um
complexo pré-replicativo for formado na fase G1.
 No início da fase S, cinases especializadas fosforilam Mcm,
ativando-o, e ORC, inativando-o.
 Um novo complexo pré-replicativo não pode ser formado na
origem, até a célula ter progredido à próxima fase G1, quando o
ORC ligado será defosforilado.
 As helicases Mcm de eucariotos movem-se ao longo do molde da
fita-líder,
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 Enquanto a helicase bacteriana move-se ao longo do molde da REPARO DO DNA
fita retardada
 À medida que as forquilhas iniciam seu movimento, o ORC é
deslocado e novos ORCs são rapidamente ligados às origens
recém-replicadas.

A TELOMERASE REPLICA AS EXTREMIDADES DOS

CROMOSSOMOS
 A telomerase faz a inserção de sequências nucleotídicas
especiais nas extremidades dos cromossomos, incorporadas em
estruturas denominadas telômeros
 Em humanos, a sequência da unidade de repetição é GGGTTA,
sendo repetida aproximadamente mil vezes em cada telômeros
 A telomerase se assemelha às transcriptases reversas, proteínas
que sintetizam DNA usando um molde de RNA

 Dano ao DNA é inevitável e surge de várias formas.

 O dano pode ser causado por clivagem espontânea das ligações
químicas do DNA, por agentes ambientais como radiações
ultravioleta e ionizante, e pela reação com substâncias
genotóxicas, que são subprodutos do metabolismo celular normal
ou que ocorrem no ambiente.
 Uma alteração na sequência normal do DNA, chamada de
mutação.
 A primeira linha de defesa para a prevenção de mutações é a
própria DNA-polimerase.
 Às vezes, quando as DNA-polimerases replicativas progridem ao
longo do DNA-molde, um nucleotídeo errado é adicionado à
extremidade 3' crescente da fita-filha.

 A telomerase é um grande complexo proteína-RNA. A dupla-hélice de DNA é corrigida imediatamente

 O RNA (em azul) contém a sequência-molde para a síntese das
novas repetições de DNA telomérico.
 A reação de síntese é realizada pelo domínio da transcriptase
reversa da proteína (em verde).
 Uma transcriptase reversa é uma forma especial de polimerase
que utiliza um molde de RNA para produzir uma fita de DNA;
 Uma telomerase carrega seu próprio molde de RNA.
 A telomerase também possui vários outros domínios proteicos
necessários à ligação da enzima às extremidades dos
cromossomos.
 Depurinação e desaminação. Essas reações são duas das
reações químicas espontâneas mais frequentes que produzem
sérias lesões no DNA da célula.
 A depurinação pode remover a guanina e a adenina do DNA.
 O principal tipo de reação de desaminação converte a citosina em
uracila, mas a desaminação também pode ocorrer em outras
bases.
 Essas reações ocorrem na dupla-hélice de DNA

 Tipo mais comum de dímero de timina. Esse tipo de lesão

ocorre no DNA de células expostas à radiação ultravioleta (como
a luz do sol). Um dímero semelhante também pode ser formado
entre duas bases pirimídicas quaisquer (C ou T) presentes no
DNA.
 Uma nuclease especializada remove a extremidade 5’ de um
telômero formando uma saliência na extremidade de fita simples.
Essa extremidade – associada às repetições GGGTTA nos
telômeros – atrai um grupo de proteínas que formam um tipo de
“tampa” cromossômica protetora conhecida como shelterina.
 A shelterina “esconde” os telômeros dos detectores de lesões
celulares que monitoram o DNA continuamente.
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VIAS DE REPARO DE LESÃO NO DNA
 As duas vias diferem na maneira pela qual a lesão é removida do
DNA.
 A primeira via → reparo por excisão de bases, envolve uma
bateria de enzimas denominadas DNA-glicosilases, cada uma
capaz de reconhecer um tipo específico de base alterada no DNA
e de catalisar sua remoção hidrolítica.
 A segunda principal via → reparo por excisão de nucleotídeos.
 Esse mecanismo pode corrigir uma lesão causada por
praticamente qualquer alteração volumosa na estrutura da dupla-
hélice de DNA.
RECOMBINAÇÃO HOMÓLOGA
 Um dos mecanismos de reparo de DNA, consiste em um grupo
diverso de reações conhecidas como recombinação homóloga
 Função → troca de fitas do DNA entre um par de sequências de
DNA de duplex homólogos, isto é, segmentos de dupla-hélice
com sequências nucleotídicas semelhantes ou idênticas.
 Esse tipo de recombinação possui características comum entres
as células
 É dirigida pelas interações de pareamento de bases do DNA
 O pareamento não precisa ser perfeito, mas deve ser muito
próximo para que ocorra a recombinação homóloga
A RECOMBINAÇÃO HOMÓLOGA É DIRIGIDA PELAS
INTERAÇÕES DE PAREAMENTO DE BASES DO DNA
 O princípio da recombinação homóloga é que ela ocorre apenas
entre dois duplex de DNA com extensas regiões de sequências
similares (homologia). A recombinação homóloga pode reparar
corretamente as quebras na fita dupla de DNA
 O duplex de DNA quebrado e o duplex-molde realizam uma
“dança das fitas”, de modo que uma das fitas danificadas utiliza
uma fita complementar do duplex intacto para o reparo.
 Primeiro, as extremidades do DNA danificado são removidas, ou
“recortadas” por nucleases produzindo uma extremidade de fita
simples 3’.
 A próxima etapa é a troca de fitas (também chamada de invasão
de fitas), em que uma das extremidades 3’ da molécula de DNA
quebrada abre caminho até o duplex-molde e busca a sequência
homóloga pelo pareamento de bases.
 Uma vez estabelecido o pareamento entre as bases, uma DNA-
polimerase com alta precisão alonga a fita invasora usando a
informação fornecida pela molécula-molde não danificada,
corrigindo o DNA danificado.
 As últimas etapas – deslocamento da fita, síntese adicional do
reparo e ligação – regeneram as duas hélices duplas de DNA
originais e completam o processo de reparo.
A TROCA DE FITAS É REALIZADA PELA PROTEÍNA RECA/RAD51
 RecA em Procariotos (E. coli) e Rad51 em praticamente todos os
eucariotos.
 A recombinação homóloga é essencial para a meiose
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 Recombinação homóloga durante a meiose produz o
entrecruzamento e a conversão gênica, resultando em
cromossomos híbridos contendo informação dos dois homólogos,
materno e paterno
Junções de Holliday são formadas durante a meiose
 As junções podem adotar múltiplas conformações, e um conjunto
de proteínas de recombinação especiais liga-se a ela,
estabilizando o isômero simétrico aberto.
 As proteínas especializadas que se ligam às junções de Holliday
catalisam uma reação chamada migração da ramificação

A RECOMBINAÇÃO HOMÓLOGA NORMALMENTE

RESULTA EM CONVERSÃO GÊNICA
 Em organismos de reprodução sexuada, uma lei fundamental da
A RECOMBINAÇÃO MEIÓTICA INICIA COM UMA genética é – exceto pelo DNA mitocondrial, que é herdado
QUEBRA PROGRAMADA DE FITA DUPLA apenas por herança materna – cada genitor dá uma contribuição
genética igual para sua progênie.

 A proteína Spo11, específica de meiose, e o complexo Mre11

quebram o duplex de DNA e processam as extremidades, a
recombinação homóloga pode ocorrer por duas vias alternativas.
 Uma (lado direito da figura) assemelha-se muito à reação de
reparo de quebras de fita dupla e resulta em cromossomos que
foram “corrigidos”, mas nas quais não ocorreu o
entrecruzamento.
 A outra (lado esquerdo, com as quebras das fitas indicadas por
setas em azul) segue pela junção de Holliday dupla e produz dois
cromossomos entrecruzados.
 Durante a meiose, a recombinação homóloga ocorre entre os
cromossomos materno e paterno homólogos, quando estão
unidos firmemente