UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

ESCOLA DE ENGENHARIA CIVIL E AMBIENTAL

ENGENHARIA AMBIENTAL E SANITÁRIA

Disciplina BIOLOGIA GERAL

Dogma da Biologia Molecular

Profa. Katia Saavedra

2017
CONTEÚDO

Replicação
Transcrição
Tradução
 Replicação
• Inicialmente, considerou-se que proteínas
eram o material genético.

• Genes em Cromossomos.

• 20 aminoácidos – alfabeto.

• Ácido nucléicos - moléculas simples e

repetitivas - de célula para célula e geração
para geração.
 Replicação

• Informação hereditária - GENES

• 1940s: genes codificam proteínas

• Proteínas principal ator celular: enzimas,

estrutura, regulação da expressão gênica,
movimento, comunicação.
 Replicação

• O processo de replicação do DNA forneceu o

primeiro exemplo biológico do uso de um
molde molecular para guiar a síntese de uma
molécula.

• Uma fita é o complemento da outra.

 Replicação

• As propriedades fundamentais da replicação

e os mecanismos usados pelas enzimas que
o catalisam, são idênticos em todos os
organismos.
 Replicação
• Dupla fita: complementares.

• Replicação semi-conservativa.

• Replicação se inicia por separação das fitas

– DNA helicase.

• Origem de Replicação - seqüências

reconhecidas por proteínas iniciadoras da
replicação - ricas em A-T.
 Replicação

Replicação semiconservativa

• Cada fita de DNA funciona como um

molde para a síntese de uma nova fita,
resultando duas moléculas, cada uma
com uma fita nova e uma fita velha.
Replicação semiconservativa
 Replicação

• Forquilhas de replicação: local onde o DNA

parental está sendo desenrolado e as fitas
rapidamente separadas.

• Ambas as fitas do DNA são replicadas

simultaneamente.
 Replicação
• Formação de Forquilhas de Replicação:
Junções em forma de Y

• 2 forquilhas por cada origem de replicação.

• 100 a 1.000 pares de nucleotídeos/segundo

DNA Polimerase:

▪ Adiciona nucleosídeos trifosfato ao terminal 3’

Replicação

Forquilhas de Replicação
 Replicação
• 100 a 1.000 pares de nucleotídeos/segundo
DNA Polimerase:

▪ Catalisa apenas sentido 5’ > 3’

▪ Requer iniciador com terminal 3’

▪ Capacidade de correção 3’- 5’

 Replicação

• A síntese do DNA prossegue na direção

5 → 3 . Fita líder ou contínua.

• A fita descontínua ou atrasada é

sintetizada em pedaços curtos:
fragmentos de Okazaki.
 Replicação

• O DNA é sintetizado pela DNA

polimerase.

• A reação é o ataque nucleofílico pelo

grupo hidroxila 3´ do nucleotídeo na
extremidade 3´ da fita em crescimento
no fósforo 5´α do desoxinucleosídeo
5´- trifosfato.
 Replicação

• Necessário de um Iniciador: segmento da fita

nova (complementar ao molde) com um
grupo hidroxila 3´ ao qual os nucleotídeos
podem ser adicionados.

• A polimerase pode apenas adicionar

nucleotídeos a uma fita pré-existente.
 Replicação
• Os iniciadores frequentemente são
oligonucleotídeos de RNA.
• A polimerização é uma reação
termodinamicamente favorável.
• Cada novo nucleotídeo adicionado à cadeia
crescente é mantido lá não apenas pela nova
ligação fosfodiéster, mas também pelas
pontes de H, e as interações de
empilhamento de bases.
 Replicação

• As DNA polimerases são muito precisas.

• A replicação precisa ocorrer com um grau de
fidelidade muito alto.
• As DNA polimerases apresentam atividade
nucleásica que permite remover um
nucleotídeo despareado.
 Replicação

• DNA polimerase I: atividade

exonucleásica 5´→ 3´
• DNA polimerase II: reparo
• DNA polimerase III: enzima primária da
replicação em E. coli.
• Todas apresentam atividade
exonucleásica 3´→ 5´
 Replicação

• A replicação do DNA requer muitas enzimas

e fatores protéicos.
• Sistema da DNA replicase ou replissomo.
• Helicases: separam as fitas.
• Topoisomerases: alivia o estresse topológico
criado na separação das fitas.
• Proteínas de ligação ao DNA: estabiliza as
fitas separadas.
 Replicação

• Iniciases: iniciadores (RNA)

• DNA ligases: selam os cortes após

serem removidos os iniciadores de
RNA.
 Replicação

• Etapas da replicação
• Iniciação
• Origem de replicação: oriC
• Enzimas abrem a hélice de DNA na
origem e estabelecem um complexo
pré-iniciação.
 Replicação

• Alongamento

• Síntese da fita líder.

• Síntese da fita atrasada.
 Replicação
• Terminação

• As duas forquilhas de replicação

encontram-se no outro lado do
cromossomo circular da E. coli.
 Replicação
• Requer terminal 3’ - iniciador ou primer

• Fita líder: um iniciador

• Fita descontínua: síntese contínua de

iniciadores

• Fita descontínua: Fragmentos de Okazaki

• DNA ligase: une fragmentos de Okazaki

Replicação
Origem de replicação
 Replicação

• A replicação nas células eucariotas é mais

complexa. Sequências de replicação
autônomas.
• As moléculas de DNA são maiores que das
bactérias e são organizadas em estruturas
nucleoprotéicas complexas.
• Origens de replicação: sequências de
replicação autônomas.
 3’
5’

5’
3’
Replicação
 Replicação
▪ Qual a importância da duplicação do DNA?
▪ Do que depende o processo de duplicação (ou
replicação) do material genético?
- enzimas: a principal é a DNA-polimerase
- rompimento das pontes de H
- afastamento das cadeias (ou fitas) complementares
- produção de novas fitas de DNA usando nucleotídeos livres e as fitas
preexistentes como moldes
 Replicação
▪ Qual a importância da duplicação do DNA?
▪ Do que depende o processo de duplicação (ou
replicação) do material genético?
- enzimas: a principal é a DNA-polimerase
- rompimento das pontes de H
- afastamento das cadeias (ou fitas) complementares
- produção de novas fitas de DNA usando nucleotídeos livres e as fitas
preexistentes como moldes
A energia liberada na
Durante a replicação quebra do trifosfato é
do material genético, a utilizada pela DNA-
DNA-polimerase coleta polimerase
nucleotídeos livres,
unindo-os uns aos A DNA
outros para formar as polimerase
novas fitas. Durante a também atua na
formação da nova fita,
o pareamento correto
correção de
das bases é mantido. eventuais erros
de pareamento.
 Replicação

Princípio de Matthew
Meselson e Franklin
Stahl (1958):
Replicação
Semiconservativa do
DNA
 Replicação

▪ Duplicação Semiconservativa: experimento de

Meselson e Stahl
 Replicação

▪ A duplicação do DNA tem início em vários pontos da

molécula.

Forquilhas de
replicação
 Replicação

▪ A DNA-polimerase só adiciona um novo nucleotídeo na

cadeia depois de “verificar” se o pareamento anterior está
correto. Do contrário, realiza a correção e, posteriormente,
adiciona o novo nucleotídeo.
A primase se liga ao
DNA e sintetiza um
primer de RNA.

Quando o primer está

completo, a DNA
polimerase se liga e
sintetiza o novo DNA
 Replicação
▪ Cadeia Leading (líder) e cadeia Lagging (retardada).
Consequência da orientação antiparalela das fitas do
DNA.

Molde
fita
líder

Fragmentos
de Okazaki
Fita retardada

Molde fita
retardada
 Expressão gênica

O termo expressão gênica refere-se aos

eventos que levam à manifestação da
informação contida no material genético (DNA).
Normalmente, essa manifestação se dá por
meio das proteínas, macromoléculas que
realizam as mais diversas funções no interior
das células, desde estruturais até metabólicas.
 Expressão gênica

• O processo da expressão de um gene

envolve basicamente duas etapas:

►Transcrição gênica

► Tradução gênica
 Transcrição
▪ Trata-se de um mecanismo em
que a informação codificada em
uma sequência de bases do DNA
é convertida em uma sequência
de bases de RNA.
• Em células eucariontes, a
transcrição ocorre no núcleo.
O porquê da transcrição?
A informação contida no DNA precisa ser
convertida para uma “linguagem gênica” capaz de
ser “lida” pelos ribossomos citoplasmáticos,
organelas que efetivamente produzem as cadeias
polipeptídicas (proteínas). Tal “linguagem” é
representada pela molécula de RNA.
 Transcrição

● O processo de transcrição não ocorre em qualquer

ponto do DNA. Somente algumas regiões dessa
molécula (frequentemente os loci gênicos) é que
sofrem a transcrição.

Região Região de término

Promotora da Transcrição
 Transcrição

• A transcrição é realizada por RNA

polimerases dependentes de DNA, que
usam ribonucleotídeos 5´-trifosfato
para sintetizar RNA complementar a
uma fita molde do duplex de DNA.
Transcrição
 Transcrição
• A transcrição ocorre em várias fases:

• Ligação da RNA-polimerase a um sítio no

DNA chamado de promotor;
• Início da síntese do transcrito;
• Alongamento;
• Terminação.
Transcrição

Início da transcrição
 Transcrição

• Rompimento enzimático das pontes de

hidrogênio das bases nitrogenadas do DNA:
as fitas se separam.

• Pequenas seqüências de bases do DNA não

pareadas são expostas para servirem de
moldes na transcrição.
 Transcrição

 Somente uma fita direciona a síntese de RNAm

para qualquer gene.
o RNAm é formado na direção
5’  3’
Fita complementar é usada como molde na
replicação.
 Transcrição
1.Condições necessárias - quantidade suficiente
de nucleotídeos contendo ligações de fosfato
de alta energia.

2.RNA polimerase se liga a uma das fitas

expostas do DNA.

3.Nova base se prende a base molde

complementar do DNA pelo pareamento de
bases.
 Transcrição
4. A enzima vai se deslocando e o nucleotídeo
fosforilado apropriado se junta ao complexo.

5. O fosfato do segundo se liga a ribose do

primeiro nucleotídeo.

6. Repete-se o processo até que a molécula de

RNA seja concluída.
RNA polimerase
Transcrição
 Transcrição
• Processamento do RNA

• Transcrito primário: molécula de RNA

recém sintetizada.
• Muitas das moléculas de RNA de
bactérias e todas de eucariotos.
• Ribozimas.
 Transcrição

• Muitos transcritos primários de RNAm

contêm íntrons (regiões não codificantes), os
quais são removidos por splicing.
 Transcrição - RNApolimerases

1) Reconhecem e ligam-se a sequências

específicas de DNA.

2) Desnaturam o DNA, expondo a sequência de

nucleotídeos a ser copiada.

3) Mantêm as fitas de DNA separadas na região

de síntese.
 Transcrição - RNApolimerases

4) Mantêm estável o duplex DNA:RNA na

região de síntese.

5) Restauram o DNA na região imediatamente

posterior à da síntese.

6) Sozinhas ou com auxílio de proteínas

específicas, terminam a síntese do RNA.
 Transcrição
A) RNAP I, que sintetiza os rRNAs

● Essa polimerase catalisa a síntese de apenas

um tipo de RNA, precursor dos rRNAs 18S,
5,8S e 28S.
• Entretanto esse é o RNA mais abundante na
célula.
• Esses pré-RNAs são bastante longos,
variando de 6.000 a 15.000 nucleotídeos.
 Transcrição
• Para poder responder a essa demanda, a
célula possui de 100 a 5.000 cópias dos
genes para rRNA, uma ao lado da outra, e
sua síntese ocorre em um ponto
especializado no núcleo, o nucléolo.

• O complexo RNAP I é composto por 2

subunidades maiores (com 130 e 190 kDa) e
por 4-10 subunidades menores.
 Transcrição
B) RNA polimerase II que sintetiza mRNA

• Todos os pré-mRNAs das células são

sintetizados pela RNAP II, que, portanto,
transcreve a maior parte dos RNA
heterogêneos nucleares (hnRNA)
precursores dos mRNAs. As RNAPs II
possuem duas subunidades maiores de 215
e 139kDa e vários componentes menores
(de 6-8), de aproximadamente 50kDa.
 Transcrição
C) RNAP III, que sintetiza os tRNA
• Essas polimerases catalisam a síntese de
cerca de 10% do RNA da célula dos tRNAs.
• A enzima é a mais complexa das RNAPs,
com tamanho aproximado de 700 kDa, sendo
formado por cerca de 14 subunidades.
• Assim como as outras RNAPs, 2
subunidades são maiores, com 160 e 128
kDa, e têm identidade com as
correspondentes subunidades de RNAP II.
Transcrição pela RNA polimerase em E. coli
Transcrição pela RNA polimerase em E. coli
Promotores típicos de E. coli
Transcrito primário e splicing em eucariotos
Transcrito primário e splicing em eucariotos
Transcrito primário e splicing em eucariotos
Splicing do RNAm
A partir de sua formação, a molécula de RNA pode ter 3 funções
distintas:
● RNA ribossômico (RNAr): juntamente com algumas proteínas
constitui os ribossomos, grânulos citoplasmáticos onde se dá
efetivamente a síntese proteica.

A produção de RNAr resulta da

transcrição de uma região do
DNA que não constitui um
gene. Trata-se de uma região
com uma sequência específica
de bases nitrogenadas.
▪ RNA mensageiro (RNAm): ácido nucleico de fita simples com a
informação genética (decodificada a partir da fita ativa do DNA)
para a produção de uma proteína específica. Na informação
contida no RNAm esta a sequência com que os aminoácidos
devem ser encadeados durante a síntese proteica. Essa
sequência aparece na forma de trincas (sequência de 3 bases
nitrogenadas) chamadas códons.

A produção de RNAm resulta

da transcrição de uma região
do DNA que constitui um gene.

Cada códon corresponde à

sequência codificante de um
aminoácido específico.
▪ RNA transportador (RNAt): transporta aminoácidos livres no

citoplasma para as regiões de síntese proteica, nos ribossomos.

A molécula de RNAt possui 2 regiões importantes:

Cada RNAt transporta um

tipo específico de
aminoácido. A sequência de
bases do anticódon é que
define qual é o aminoácido
transportado.

Assim como na formação do

RNAr, a produção do RNAt
também resulta da transcrição de
uma região do DNA que não
constitui um gene.

A relação entre os 3 tipos

de RNA pode ser melhor
compreendida no processo
de tradução gênica.
 Diferenças na transcrição em procariotos e
eucariotos

• Em procariotos: um tipo de RNA

polimerase.
• Em eucariotos: RNA pol. I, RNA pol. II,
RNA pol. III.
• Em procariotos não é necessário a
presença de proteínas.
• Em eucariotos sim é necessário a
presença de: fatores gerais de
transcrição.
 TRADUÇÃO
▪ Processo em que a informação codificada no DNA é
efetivamente usada para a síntese de proteína.
 TRADUÇÃO

▪ Processo em que a informação codificada no

DNA é efetivamente usada para a síntese de
proteína.
▪ Diferente da transcrição, que ocorre no
núcleo celular, a tradução se dá no citoplasma
e tem a participação fundamental dos
ribossomos durante o processo de síntese
proteica.
TRADUÇÃO
 TRADUÇÃO
• O ADN contém a informação genética para
codificar as proteínas da célula.

• O RNAm leva essa informação para a síntese

de proteínas.

• Determina a ordem em que ficaram os

aminoácidos.
 TRADUÇÃO
 Em procariotos os ribossomos podem
começar a tradução assim que o RNAm
emerge da RNA polimerase.

 Em eucariotos, a transcrição se realiza no

núcleo e a tradução no citossol.

 Diversos ribossomos podem se ligar a um

transcrito de RNAm, resultando num
polissoma.
 RNAm
Ribossomos

Peptídeo

Síntese de proteínas
 TRADUÇÃO
• Cada trinca (seqüência de 3 bases) no RNAm
constituí um códon.

• Cada códon especifica um aa particular ou

age como códon de terminação.

• 1o Códon (de iniciação) – sempre codifica o

aa – formilmetionina.
 TRADUÇÃO

• Último códon – a ser traduzido na molécula

de RNAm  finalizador ou terminação.

• Fim de uma molécula de proteína.

• Relação entre cada códon e 1aa específico

constituí o código genético.
 TRADUÇÃO

• Escrito em códons no RNAm.

• A informação nos códons é derivada

diretamente do DNA durante a transcrição.
CÓDIGO GENÉTICO
 RNAm, RNAr e RNAt

• Envolvidos na síntese de proteínas.

• Cada um formado por uma única fita de

nucleotídeos.

• Sintetizados por transcrição usando DNA

como molde.
 RNA mensageiro (RNAm)

• Carreia informações do DNA para síntese da

proteína.

• Sintetizado em unidades que contém

informação para comandar a síntese de uma
ou mais cadeias polipeptídicas.
 RNA ribossomal (RNAr)
• Combina-se com proteínas específicas
para formar 2 tipos de subunidades
ribossomais.

• Serve como um sítio para a síntese de

proteínas.

• Enzimas associadas funcionam no

controle da síntese protéica.
 RIBOSSOMO

• Locais de síntese de proteínas da célula.

• Sítios de ligação para o RNAt.

Procarióticos: 30S (pequeno) e

50S (grande)
Eucarióticos: 40S e 60S
 RNA Ribossômico (rRNA)

Subunidade Menor: 30S

ou 40S (SSU)

Subunidade Maior: 50S

ou 60S (LSU)

rRNA: 70S ou 80S

rRNA 70S
 RIBOSSOMO

• Após as subunidades se unirem ao redor da

fita do RNAm – ocorre a síntese de
peptídeos.

• A cadeia peptídica recém formada cresce na

subunidade 50S.
 RNA transportador (RNAt)
• Encontrados no citoplasma, onde eles
recolhem aa e os transferem para o RNAm.

• As moléculas possuem forma de folha de

trevo com um sítio de ligação para um aa
específico.

• Transporta os aa unindo o seu anticódon ao

códon do RNAm.
 RNA
transportador
 Sínteses de proteínas

Etapas da síntese protéica

Etapa 1: Ativação dos aa
• Realizado no citosol.
• Cada aa é covalentemente ligado a
um RNAt.
• Catalisadas pelas aminoacil-tRNA
sintetases.
 Sínteses de proteínas
Etapas da síntese protéica
Etapa 2: Iniciação
• O RNAm contendo o código liga-se à
subunidade menor do ribossomo.
• Seguido pela ligação do aminoacil
tRNA de iniciação.
• Ligação da subunidade maior:
complexo de iniciação.
 Sínteses de proteínas
• O metionil-RNAt[i]Met coloca-se no sítio
P da subunidade menor do ribossomo.
• Fator IF-2 e gasta a energia de um GTP.
• Essa etapa de iniciação acaba quando
a subunidade maior se une à
subunidade menor e o ribossomo é
formado.
 Sínteses de proteínas
Etapas da síntese protéica
Etapa 3: Alongamento
• A cadeia polipeptídica é alongada por
ligações covalentes de aa sucessivos.
• Cada aa é transportado ao ribossomo.
• E corretamente posicionado pelo seu
RNAt.
 Sínteses de proteínas
Etapas da síntese protéica
Etapa 3: Alongamento

• O alongamento é promovido por

proteínas citosólicas: fatores de
alongamento.
 Sínteses de proteínas
Etapas da síntese protéica
Etapa 4: Terminação e liberação
• O término da cadeia polipeptídica é
sinalizado por um códon de terminação
no RNAm.
• A cadeia polipeptídica é liberada do
ribossomo, ajudado por proteínas:
fatores de liberação.
 Sínteses de proteínas
Etapas da síntese protéica
Etapa 5: Enrolamento e processamento

• O polipeptídio se enrola na sua

conformação tridimensional.
• Pode sofrer processamento: adição de
grupos metila, carboxila, fosfato, etc.
Sínteses de proteínas
Ribossomos
Síntese de proteínas- Etapa 1
Síntese de proteínas- Etapa 2
Síntese de proteínas- Etapa 3
Síntese de proteínas- Etapa 4
Síntese de proteínas- Etapa 5
Síntese de proteínas- Terminação
 Sínteses de proteínas
• As proteínas provenientes dos
ribossomos portam sinais que as
conduzem para seus lugares de
residência.

• A existência de chaperonas assegura a

correta formação das estruturas
secundárias e terciárias das proteínas.
 Atividade

• Explique a replicação semiconservativa do

DNA.

• Explique o código genético.