Biologia Molecular

Dogma central da Biologia

Molecular - REPLICAÇÃO

Prof. Daniel Fagundes

 Introdução

• DNA é o responsável por transmitir as características

hereditárias.

• E que toda vez que uma célula se divide (mitose ou meiose), o

DNA sofre replicação, ou seja, se duplica!
 Introdução

• O DNA e as proteínas são macromoléculas que desempenham um papel

chave na vida de uma célula. Onde, tanto o DNA, como as proteínas, são
polímeros de unidades repetidas.

• Como dito anteriormente, a informação genética está armazenada no DNA

por uma sequência de quatro tipos de nucleotídeos (ATCG) , porém, são as
proteínas que realizam as funções vitais da célula.
 Dogma da Biologia Molecular

• O dogma central define o paradigma da biologia molecular. A

informação hereditária é perpetuada através de processos de
replicação do DNA. Essa informação sofrerá 2 processos
principais: A transcrição que converte a informação do DNA
em uma forma mais acessível (uma fita de RNA mensageiro
ou em RNA’s). E a tradução: converte a informação contida no
RNAm em proteínas.
 Dogma da Biologa Molecular

• Entretanto, a proposta original, foi ampliada nos últimos anos

(1970) com a descoberta da enzima transcriptase reversa.

• Essa enzima realiza a transcrição reversa do RNA mensageiro

em DNA (cDNA ou DNA complementar).
 Dogma da Biologa Molecular

• Isso permitiu que o dogma central se ampliasse sem, contudo,

perder a unidirecionalidade, ou seja, do DNA às proteínas.
Replicação do DNA
 Replicação

Três hipóteses tentaram explicar a replicação do DNA e foram

testadas por Mathew Meselson e Franklin Stahl em 1958:
Meselson-Stahl experiment (1958)
 Replicação semi-conservativa

▪Cada fita serve de molde para replicar uma nova fita complementar, produzindo
duas moléculas de DNA filhas. Cada molécula filha contém duas fitas de DNA com
orientação antiparalela. Este processo é chamado de replicação semi-conservativa,
porque o par parental é separado em duas metades. A nova molécula filha contém
apenas uma fita parental intacta.
 Replicação em procariotos

• Nos organismos procarióticos a replicação inicia-se em um

único ponto, denominada origem de replicação.
 Replicação em eucariotos

• Nos eucarióticos a replicação inicia em múltiplos pontos ao longo

da dupla fita de DNA. Como a molécula de DNA nos eucarióticos
é muito comprida, os vários pontos de início possibilitam uma
rápida replicação.
 Inicio do processo de replicação

• O início do processo de replicação do DNA é o desenovelamento

das fitas seguindo pela separação das duas fitas da dupla hélice
parental, por ação de uma enzima denominada DNA helicase.

• Essa enzima quebra as ligações de pontes de hidrogênio.

 Desenovelamento do DNA
1 - Retirada das histonas
2 - DNA helicase
– Quebra pontes de H

DNA topoisomerases
– Tiram a tensão

3 - Proteínas de ligação a fita simples (SSBPs)

 SSB’s e DNA topoisomerase

• Proteína de ligação do DNA de fita simples –SSB (single

strand binding protein) – Estas proteínas denominadas de
proteínas desestabilizadoras da hélice, se ligam a fita simples
de DNA, mantendo-as separadas.

• DNA topoisomerase – Um problema de superdobramento

ocorre a medida que as fitas se separam. As enzimas DNA
topoisomerases são responsáveis pelo mecanismo de
remoção da tensão das fitas.
 Forquilha de replicação

• À medida que as duas fitas se separam vai se formando uma

região de replicação denominada zona de replicação ou
forquilha de replicação

Procariotos - 1 forquilha - Eucariotos - Várias forquilhas

Sentido bidirecional Sentido bidirecional
Micrografia, forquilha de replicação

Forquilha de replicação
 Processo de replicação

• Inicia-se a replicação em ambas as fitas. Numa fita a replicação

acontece de forma contínua e na outra de forma descontínua
(Fragmentos de Okasaki).
• A DNA polimerase III adiciona nucleotídeos na direção 5`- 3`
 DNA polimerase

• Enzimas que catalisa a

reação de síntese do DNA

• Adiciona nucleotídeos tri-

fosfato à extremidades 3’OH
livre

• Alongamento da cadeia de
DNA sempre é feito na
direção 5’>3’ (endonuclease
5’>3’)

• Incapaz de fazer DNA do

zero (precisa ter
extremidade 3’OH livre)
 Tipos de DNA polimerase

• DNA polimerase I
– Descoberta em 1956 (Kornberg pai)
– Função precisa descoberta apenas em 1969: remove o
primer de RNA da fita descontínua
• DNA polimerase III
– Descoberta em 1970 (Kornberg filho)
– Principal enzima que realiza a replicação em procariotos
• DNA polimerase II
– Lenta, envolvida em reparos no DNA
 Replicação
• DNA Polimerase III
• Sentido 5’ → 3’
• Nucleotídeos 3P são
adicionados
– Liberação de
Pirofosfato
 Replicação

• A fita que cresce na direção da zona de replicação é

sintetizada continuamente, denominada fita líder.

• A fita que cresce na direção oposta a zona de replicação é

sintetizada descontinuamente, copiando pequenos
fragmentos de DNA perto da zona de replicação,
denominados fragmentos de Okazaki.

• Estes fragmentos são posteriormente unidos para se tornar

uma única fita contínua. A esta fita é denominada de fita
retardada ou tardia.
 Replicação das fitas

• Fita líder
– Primase age uma vez

• Fita retardada
– Primase age várias vezes
– 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication possible
discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967 Jun;20(3):255-60
 Primase

• Primase – É a enzima responsável por sintetizar primer.

As DNA polimerases não conseguem iniciar a síntese de uma fita

complementar de DNA através de um molde 3`- 5`. Elas necessitam de
oligonucleotídeo iniciador, denominado primer, que é na realidade uma
região curta de aproximadamente 11 nucleotídeos, com um grupo
hidroxila livre no carbono-3’, que serve como primeiro aceptor de um
nucleotídeo.
 Eliminação
dos
fragmentos de
Okasaki

DNA
Polimerase I
 Após a eliminação dos fragmentos de Okasaki:

• DNA Ligase – É a enzima

responsável por realizar a
junção entre os fragmentos de
DNA (fragmentos de Okazaki)
sintetizados na fita atrasada.
 Etapas da replicação

1- Ativação da origem de replicação

2- Rompimento das pontes de hidrogênio na fita dupla de DNA
3- Estabilização das fitas simples de DNA.
4- Adição de nucleotídeos nas fitas lider e atrasadas (adição de
primers RNA).
5- Digestão (retirada) dos primers de RNA para adição de
nucleotídeos de DNA.
6- União dos fragmentos de Okasaki por enzima de ligação.
Após a replicação as histonas são remontadas