Disciplina de Biologia Molecular

(60 h)
Prof. Leonardo Crema
 Ementa
• EMENTA:
1) Mecanismos moleculares da replicação do
DNA, transcrição e tradução gênica.
Características do código genético. Tipos de
mutações. Polimorfismos. Organização do
genoma. Técnicas de biologia molecular.
Bioinformática. Genética forense. Clonagem.
Transgenia. Tipos de células tronco. Prática
Profissional Integrada.
 Bibliografia Básica
• ALBERTS, B.; et al. Biologia molecular da
célula. 5 ed. Porto Alegre: Artmed. 2010.
• GRIFFITHS, A. J. F.; et al. Introdução à
genética. 7 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan. 2002.
• SNUSTAD, P. & SIMMONS, M. J. Fundamentos
de Genética. 2 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2001.
 Bibliografia Básica
• ALBERTS, B.; ANDRADE, A. E. Fundamentos da biologia
celular. 3 ed. Porto Alegre: Artmed, 2011.
• COOPER, G. M.; HAUSMAN, R. E. A célula: uma abordagem
molecular. 3 ed. Porto Alegre: Artmed. 2009.
• JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Biologia celular e molecular.
8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan. 332 p. 2011.
• RAVEN, P. H.; EVERT, R. F. Biologia Vegetal. 7 ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.
• SADAVA, D.; HELLER, C.; ORIANS, G.H.; PURVES, W.K.; HILLIS,
D.M. Vida: A Ciência da Biologia - Célula e Hereditariedade.
V. 1, 8 ed. Porto Alegre: Artmed. 2009.
 Introdução à Biologia Molecular

Prof. Leonardo Crema

 NOS SERES HUMANOS

DNA
NÚCLEO

CÉLULA CROMOSSOMOS - Informação das proteínas e

(DNA+PROTEÍNAS)
RNAs que serão sintetizadas
pelas células do organismo ao
longo da sua vida.
-Capacidade de se auto-
duplicar para originar outras
células.
ORGANISMO
 •1953: Watson and Crick

Estrutura do DNA
 Dogma
Central da
Biologia
Molecular
• 1961 – BRENNER, JACOB e MESELSON

• mRNA é a molécula que leva informação do DNA no

núcleo para a maquinaria de produção de proteínas
no citoplasma
 O CÓDIGO GENÉTICO É
DESVENDADO!!!

1966 – NIRENBERG, KHORANA

e OCHOA
Sequências sucessivas de três
nucleotídeos do DNA (codon)
determinam a sequência de
aminoácidos de uma proteína
 A CÉLULA

DNA

1. Regulação transcricional
2. Regulação no
- DIFERENCIAÇÃO
mRNA
processamento do - CRESCIMENTO
RNA primário
RETÍCULO - FUNÇÃO CELULAR
ENDOPLASMÁTICO
3. Regulação no RUGOSO - RESPOSTA AO
transporte do
mRNA para o AMBIENTE
citoplasma

4. Regulação da
síntese proteíca
5. Regulação
pós-síntese

Proteína
sintetizada
 Núcleo

DNA
Cromossoma

Gene

Promotor Exon Intron

DNA
 ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA)

Contém toda a informação genética de um organismo

Esta informação está arranjada em unidades hoje

conhecidas como genes
 ESTRUTURA DOS
ÁCIDOS NUCLEICOS

As moléculas de DNA e RNA são compostas por quatro

diferentes nucleotídeos:

• Adenina, Guanina e Citosina – comum para DNA e

RNA

• Timina – encontrada somente no DNA

• Uracila – encontrada somente no RNA

 ESTRUTURA DOS
ÁCIDOS NUCLEICOS

Todos os nucleotídeos apresentam uma

estrutura em comum:

radical fosfato

pentose
 ESTRUTURA DOS
ÁCIDOS NUCLEICOS

As bases nitrogenadas podem ser divididas em dois

grupos de acordo com sua estrutura:
 ESTRUTURA DOS
ÁCIDOS NUCLEICOS

O grupo hidroxil ligado ao carbono

3 da pentose de um nucleotídeo
forma uma ligação fosfodiéster
com o fosfato do outro nucleotídeo
 DNA

• Duas fitas de polinucleotídeos associadas formando uma estrutura

de dupla hélice onde as pentoses e os radicais fosfato compõe a fita
e as bases projetam-se para o interior da mesma

• As fitas mantêm-se unidas através da formação de pontes de

hidrogênio entre as bases o que contribui para a estabilidade da
dupla hélice

. Adenina (A) pareia com Timina (T) através de 2 pontes de

hidrogênio
. Guanina (G) pareia com Citosina (C) através de 3 pontes de
hidrogênio
DNA
 Antiparalelismo

As fitas do DNA
estão dispostas em
direções opostas
 Complementariedade
Cada base de uma fita é pareada com a base complementar da outra fita
 Complementariedade

Durante a replicação do
Fita velha
DNA as duas fitas velhas
ou mães servem de
molde para cada fita
nova ou filha
complementar, que
está sendo sintetizada.

Fita nova
 A Dupla Hélice
Fatores que estabilizam a dupla hélice:

• interações hidrofóbicas
• forças de van der Walls Entre as bases
• pontes de hidrogênio nitrogenadas

• interações iônicas Entre os grupos fosfato

do DNA e os cátions
(Mg2+) presentes na
solução fisiológica
 A Dupla Hélice
A dupla hélice apresenta dois tipos
de sulcos aos quais se ligam as
proteínas da cromatina

Sulco menor

Sulco maior
Proteínas:níveis de complexidade estrutural
 O Empacotamento do DNA:
a estrutura terciária do DNA

DNA em procariontes: DNA circular nas formas não-super-

helicoidal (esquerda) e super-helicoidal (direita)
 A Dupla Hélice
A forma predominante de torção da espiral do DNA é para a
direita ou sentido horário
Propriedades Químicas e Físicas do DNA
 REPLICAÇÃO DO DNA

 Conservativa ou Semiconservativa?

 Unidirecional ou Bidirecional?
 REPLICAÇÃO
SEMICONSERVATIVA
Evidência baseada em um experimento clássico de Meselson-Stahl em
1958

• Células de E. coli foram inicialmente colocadas em um meio para

crescimento contendo sais de amônia preparados com 15N (nitrogênio
pesado – “heavy”) até todo o DNA celular conter o isótopo.

• As células foram, então, transferidas para um meio contendo 14N

(nitrogênio leve – “light”).

• As amostras foram analisadas com gradiente de densidade que

separa as duplas H-H, L-L e H-L em bandas distintas.
A replicação é semi-conservativa
•The Meselson-Stahl experiment
 ORIGEM DA REPLICAÇÃO

Experimento com SV40 (Simian Virus)

• DNA viral de células infectadas com SV40 foi cortado com a

enzima de restrição EcoRI, que reconhece um sítio único.
• A partir de um “ponto” vai se formando uma bolha
chamada bolha de replicação comprovando a existência de
um ponto de origem da replicação

Características da origem de replicação:

. estrutura repetitiva
. seqüências ricas em AT
 ORIGEM DA REPLICAÇÃO

ORIGEM Sítio de restrição

EcoRI

Cromossomo viral
circular

EcoRI
Bolha de
replicação
ORIGEM DA REPLICAÇÃO
Biologia – Campbell & Cols.

Procariontes vs Eucariontes
Síntese de DNA em Eucariontes: As “Bolhas de
Replicação”

• Nos eucariontes, a replicação

requer “múltiplas origens”,
devido ao tamanho de seu
genoma. A replicação é
bidirecional e, em ambas as
fitas, simultânea.

• Este processo gera “bolhas de

replicação”.
 Regiões Codificadoras e
Não-Codificadoras do DNA
O DNA é formado por 2 regiões:

Intergênicas Gênicas Intergênicas Gênicas

Região Gênica Região Intergênica

É a porção que codifica para
um produto final, que pode ser
uma cadeia polipeptídica ou
um RNA
É a porção regulatória, que
sinaliza o início ou o final de um
gene, que influencia a
transcrição gênica, ou que é o
ponto de início para a
replicação do DNA
 PROCESSO DE REPLICAÇÃO

Os mecanismos celulares responsáveis pela

replicação do DNA foram descobertos
primeiramente em bactérias.

A replicação em eucariotos ocorre através de

proteínas análogas e com processos semelhantes à
replicação do DNA de E. coli
PRINCIPAIS ENZIMAS ENVOLVIDAS
(SISTEMA DE REPLICAÇÃO DO DNA)

1. DNA Polimerases
2. Endonucleases
3. Helicases
4. Topoisomerases
5. Primases
6. Telomerases
 DNA POLIMERASE

• São incapazes de quebrar as pontes de hidrogênio

que ligam as duas fitas do DNA

• Só alongam uma fita de DNA/RNA pré-existente

• Catalisam a adição de um nucleotídeo no radical

hidroxil da extremidade 3’ da cadeia que está se
formando. Desta forma, as fitas só podem crescer no
sentido 5’ 3’
Biologia – Campbell & Cols.
 DNA Polimerases

• principais enzimas envolvidas no processo; responsáveis

pela adição de nucleotídeos e reparo
• requerem um modelo e um primer (segmento de RNA
sintetizado pela primase) complementares para início –
alongamento
• 3 tipos principais : I, II e III; existem pelo menos 11
I : importante no sistema de reparo
III: principal e mais complexa (mais de 10 subunidades)
Adição de nucleotídeos

3
 FORQUILHA
DE
REPLICAÇÃO

• Fita contínua
“leading”
 FORQUILHA
DE
REPLICAÇÃO

• Fita descontínua I
“Lagging”
 FORQUILHA
DE
REPLICAÇÃO

• Fita descontínua II
• “Lagging”
 OUTRAS ENZIMAS ENVOLVIDAS NO
PROCESSO DE REPLICAÇÃO
HELICASES – constituem uma classe de enzimas que podem se mover
ao longo da fita dupla de DNA utilizando a energia da hidrólise de ATP
para separar as duas fitas da molécula.

SSB (“single-strand-binding”- proteínas de ligação à fita simples) –

ligam-se a cada uma das fitas impedindo o reanelamento das mesmas.

PRIMASE – RNA polimerase que sintetiza pequenas moléculas de RNA

utilizadas como iniciadores durante o processo de replicação do DNA.

TOPOISOMERASES – Responsáveis por aliviar a torção na parte da fita

que não está sendo replicada.
 PROCESSO DE REPLICAÇÃO

O movimento da forquilha de replicação revela uma fita

molde no sentido 3’ 5’ e outra no sentido oposto 5’ 3’

Desta forma, as fitas novas são sintetizadas em sentidos

opostos

FITA “LEADING” – crescimento segue

a direção do movimento da forquilha
de replicação
FITA “LAGGING” – crescimento no
sentido oposto ao movimento da
forquilha de replicação
 PROCESSO DE REPLICAÇÃO

FITA “LEADING” – sintetizada continuadamente a partir de um

iniciador na fita molde 3’ 5’

FITA “LAGGING” – sintetizada descontinuadamente a partir de

múltiplos iniciadores
• Sítios descobertos no molde da fita “lagging” são copiados em
pequenos iniciadores de RNA pela primase.
• Cada iniciador é alongado pela DNA polimerase resultando na
formação dos FRAGMENTOS DE OKAZAKI.
•DNA polimeraseI remove o primer do RNA do fragmento adjacente
e preenche os “gaps” entre os fragmentos que, então, são unidos
pela DNA ligase.
PROCESSO DE REPLICAÇÃO
 PROCESSO DE REPLICAÇÃO
A síntese de DNA é feita na direção 5´ 3´ e é semidescontínua
ENCURTAMENTO DAS
EXTREMIDADES DE
MOLÉCULAS LINEARES
DE DNA
ENCURTAMENTO DAS
EXTREMIDADES DE
MOLÉCULAS LINEARES
DE DNA
 TELOMERASE

• Os cromossomos de eucariotos são lineares e apresentam

seqüências repetitivas em suas extremidades denominadas
telômeros

• A síntese da fita “leading” continua até o término da fita

molde de DNA, no entanto, no telômero a extremidade feita
pela primase na fita “lagging” não é digerida.

• Como o iniciador é instável, ele se degrada com o tempo

diminuindo, assim, o tamanho do cromossomo.

• Telomerase age evitando a perda do fim do cromossomo.

TELOMERASE
 REGULAÇÃO
-única fase regulada da replicação, de
forma que só ocorra uma vez por ciclo
celular ;
-afetada pela metilação de DNA
-DAM metilase na (5´) GATC sobre a
fita parental
 Núcleo
RNA polimerase

Gene
Transcrição
hnRNA
Processamento
mRNA
Tradução
Citoplasma

proteína
 O RNA ou ARN
O Ácido Ribonucléico é um polinucleotídeo que difere do
DNA em três aspectos básicos:
• O açúcar é uma Ribose;
DN
A
A-T
• É formado, geralmente, por
T-A uma fita simples que pode
G-C
C-G enrolar-se;
• Não existe a base pirimídica
Timina e no seu lugar se
encontra a base Uracila.
• Os pareamentos seguem a
RN
ordem A-U e G-C).
A
A-U
U-A
G-C
C-G
 RNA - É o ácido ribonucléico; possui a função de síntese protéica. O
RNA é encontrado no núcleo principalmente no nucléolo, e no
citoplasma (ribossomos).
Composição química - é formada por ácido fosfórico, pentose (ribose) e
pelas bases nitrogenadas ( A, G, C e uracila (U )).

A molécula de DNA é responsável pela formação do RNA. O RNA

apresenta-se constituído por um único filamento de nucleotídeo, cuja
seqüência de bases é determinada a partir de um molde de DNA.
 Tipos de RNA

1-RNA mensageiro (RNAm) - É formando no núcleo tendo como molde uma das fitas
de uma molécula de DNA. A produção de um RNAm, cujas bases são complementares
as bases de uma das hélices de uma molécula de DNA, recebe o nome de transcrição.
Este fenômeno pode ser definido de forma mais simples como sendo a passagem das
bases de uma linguagem do DNA para a linguagem de RNAm. EX:

T - A - C - T - G - A - DNA 3 bases correspondem a um aa, e um

! ! ! ! ! ! conjunto de bases uma proteína.
A- U-G - A - C - U RNAm
Códon início códon proteína
aa A aa B
 Síntese Protéica
A Transcrição
• A enzima RNA-polimerase abre a
dupla hélice do DNA e inicia a
produção de uma molécula de
RNAm, no sentido 5’  3’.
• Os nucleotídeos são ligados
respeitando a ordem A-U, G-C.
• Ao final da transcrição a RNA-
polimerase se desliga do DNA, a
molécula de RNAm está formada
e segue para o citoplasma onde
será traduzida.
Observe a complementação de uma fita de
DNA para RNA

DNA A T A CAT G G G CT A G A A

RNA U A U G UA C C C G A U C U U
RNAm

Sempre com a adenina se ligando a uracila e a guanina se

ligando a citosina.
2-RNA transportador (RNAt) - é produzido
nos cromossomos a partir de DNA
especiais. É uma molécula cadeia curta, (é
o menor RNA) que transporta os aa que
estão dispersos no citoplasma até os
ribossomos. O RNAt tem formato de
“folhas de trevo” e contém outros tipos de
bases, além das comumente encontradas
nos outros RNAs. Cada RNAt é capaz de
reconhecer um determinado aa
determinado códon, no RNAm. Todo RNAt
tem um filamento livre de sua molécula
composta pela seguinte seqüência de
bases: ACC. É nesse local que ocorre a
associação com o aa. Em cada região da
molécula existe uma seqüência de 3 bases
denominadas anticódon, que reconhece a
posição do aa no RNAm.
Tipos RNAs (2/2)
RNA TRANSPORTADOR
3-RNA ribossômico (RNAr) é o RNA que ocorre em
maior quantidade nas células. Esse RNA é encontrado
no nucléolo, onde é produzido, e no citoplasma,
associado às proteínas, formando os ribossomos.
 Tipos de RNA
• RNAm  O RNA mensageiro é formado no núcleo e contém a
“mensagem” - o código transcrito a partir do DNA - para a síntese
das proteínas. Cada conjunto de três nucleotídeos no RNAm é
chamado de CÓDON.
• RNAt  O RNA transportador está presente no citoplasma e é
responsável pelo transporte dos aminoácidos até os ribossomos
para a síntese protéica. No RNAt existe uma seqüência de
nucleotídeos correspondente ao códon chamada de ANTI-CÓDON.
• RNAr  O RNA ribossômico ou ribossomal faz parte da
estrutura dos ribossomos e participa do processo de tradução dos
códons para construção das proteínas.
 SÍNTESE DE PROTEÍNAS:

A síntese começa quando ocorre a transcrição das bases de DNA para RNA. Essa transcrição é o código
genético. O RNAm formado no núcleo passa para o citoplasma, deslocando-se para os ribossomos. Os RNAt
que estão no citoplasma, através de suas moléculas, unem-se ao aa livre levando até o ribossomo. Lá o
anticódon do RNAt reconhece no códon do RNAm o aa, que será codificado. Assim, ocorrendo
sucessivamente, até dar origem a uma proteína.

Núcleo

Núcleo
DNA RNAm RNAm Transcrição Proteínas Tradução
DNA-RNAm

A síntese completa de uma proteína leva de 20 a 60 seg, e o mesmo

RNAm pode ser traduzido por vários ribossomos, que mantêm uma
Distância entre si de aproximadamente 80 nucleotídeos.
 Os Íntrons e os Éxons

Nos eucariontes, o RNA transcrito pelo gene é normalmente chamado de pré-

RNA, no sentido de que ele ainda não está pronto para ser traduzido,
produzindo proteínas. O pré-RNA seria, assim uma versão ainda não acabada
do RNAm, que precisa ser primeiro processado no núcleo para, em seguida,
migrar ao citoplasma.
Éxon Íntron Éxon Íntron Íntron Éxon
A
Os Íntrons são retirados e os éxons são soldados um ao
outro
Síntese Protéica
A Tradução
• O RNAm transcrito no núcleo
chega ao citoplasma e se liga a um
ou mais ribossomos.
• O ribossomo “lê” o primeiro
códon e um RNAt com o
anticódon correspondente
transporta um aminoácido e se
liga ao códon.
• O ribossomo se desloca, no
sentido 5’3’ e lê o próximo
códon.
• Os aminoácidos são unidos por
ligações peptídicas.
• Ao final da tradução o
polipeptídeo se desliga e se
constituí na proteína.
O ribossomo acomoda dois tRNAs carregados
4.
4. Terminação
Terminação
 Dogma Central da Biologia Molecular

• Foi estabelecido em 1956 por Francis Crick.

• Postulava que o sentido da construção das moléculas é sempre de DNA à
Proteína – fluxo unidirecional da informação.
• O DNA é o “molde” para formar DNA (replicação) e RNA (transcrição). Este
por sua vez é o “molde” para formação das proteínas (tradução).
• Hoje se sabe que, em alguns vírus, o RNA pode replicar-se e, em outros, o
RNA pode produzir DNA (transcrição reversa) utilizando o maquinário
genético da célula-hospedeira.
• Porém, não é possível se sintetizar ácidos nucléicos a partir de proteínas.
• Os novos conhecimentos permitiram que se ampliasse o dogma central
sem contudo perder a unidirecionalidade, ou seja, de ácido nucléico à
proteína.
• Projeto Proteômico.
Diferenças entre RNA e DNA
O RNA é uma molécula intermediária na síntese
de proteínas, ela faz a intermediação entre o DNA
e as proteínas.

Ele é formado por uma cadeia de

ribonucleotídeos, que, por sua vez, são formados
por um grupo fosfato, um açucar (ribose), e uma
DNA base nitrogenada (veja abaixo).

As principais diferenças entre o RNA e o DNA são

sutis, mas fazem com que o último seja mais
estável do que o primeiro. O RNA é formado por
uma fita simples, o açúcar de seu esqueleto é a
ribose e uma de suas bases pirimídicas (de anel
simples) é diferente da do DNA (uracila ao invés
de timina), além disso o açucar do RNA é a ribose
RNA invés da desoxirribose do DNA.
 DNA e RNA
Os processos de síntese de proteínas na célula são controlados pelo metabolismo de controle.As duas
principais personagens do metabolismo de controle são as moléculas de DNA e RNA. O DNA (ácido
desoxirribonucléico) é o patrimônio genético, que contém as instruções para a síntese de todas as
proteínas que a célula é capaz de realizar. O RNA atua como mensageiro (RNA mensageiro) entre o
DNA e o ribossomo, local de síntese de proteínas.

DNA (ácido desoxirribonucléico) RNA (ácido ribonucléico)

Se localiza somente no núcleo Se localiza no núcleo e no citoplasma

Apresenta forma de dupla hélice com

Apresenta apenas uma fita
duas fitas

É formado com a pentose (açúcar)

É formado com a pentose ribose
desoxirribose

Bases nitrogenadas participantes: A, T, Bases nitrogenadas participantes: A, U,

C, G C, G
 Código Genético
Genoma
Conjunto de
moléculas de DNA
Codon que dá
origem à síntese de
qualquer proteína

Código Genético – correspondência entre cada tripleto (codon) de RNA e cada um

dos 20 aminoácidos habituais das proteínas (desde 1964)
No código genético há 64 trincas possíveis, apenas 61 delas correspondem a
aminoácidos. As tres trincas restantes são usadas como pontuação; elas dizem à célula
o ponto em que termina a codificação de cada proteína.
Oração do DNA

Creio no DNA todo poderoso

criador de todos os seres vivos,
creio no RNA,
seu único filho,
que foi concebido por ordem a graça do DNA polimerase.
Nasceu como transcrito primário
padeceu sobre o poder das nucleases, metilases e poliadenilases.
Foi processa, modificado e transportado.
Desceu do citoplasma e em poucos segundos foi traduzido à proteína.
Subiu pelo retículo endoplasmático e o complexo de Golgi
E está ancorado à direita de uma proteína G
Na membrana plasmática
De onde há de vir a controlar a transdução de sinais
Em células normais e apoptóticas
Creio na Biologia Molecular
Na terapia gênica e na biotecnologia
No seqüenciamento do genoma humano
Na correção de mutações
Na clonagem da Dolly
Na vida eterna.
Amém