REPLICAÇÃO DO

DNA
CICLO CELULAR E A CÓPIA DO DNA
Exemplo da brincadeira do telefone sem fio.
Sempre surgem erros quando uma informação é copiada.
COMO UM ORGANISMO MULTICELULAR TRANSMITE SUAS
INFORMAÇÕES GENÉTICAS CORRETAMENTE EM CADA RODADA DE
DIVISÃO DA CELULA?
REPLICAÇÃO NO CONTEXTO DO CICLO
CELULAR
COMO?
O processo de cópia do DNA precisa ser não apenas muito exato,
mas também muito rápido.
O único cromossomo circular da E. coli tem cerca de 4,6 milhões de
pares de base. Em uma taxa de mais de 1.000 nucleotídios por
minuto, a replicação do cromossomo inteiro levaria quase 3 dias.
Essas bactérias são capazes de se dividir a cada 20 min.
Na verdade, Escherichia coli replica seu DNA em uma taxa de 1.000
nucleotídios por segundo, com menos de um erro em um bilhão de
nucleotídios
REPLICAÇÃO SEMI-
CONSERVATIVA
REPLICAÇÃO SEMICONSERVATIVA

Esse processo é chamado de replicação

semiconservativa, porque cada fita original de
nucleotídeos permanece intacta (conservada),
apesar de não se combinar mais com a mesma
molécula; a molécula original de DNA tem sua
metade (semi) conservada durante a replicação.
Inicialmente foram propostos 3 modelos:
duas fitas de nucleotídios se
rompem (dispersam) em fragmentos,
que servem como molde para a síntese
de novos fragmentos de DNA
SEMICONSERVATIVA
EXIGÊNCIAS DA REPLICAÇÃO

❑ Um molde de DNA de fita dupla.

❑ Matérias-primas (substratos) a serem montadas em
uma nova fita de nucleotídios.
❑ Enzimas e outras proteínas que “leem” o molde e
reúnem os substratos em uma molécula de DNA.
DIREÇÃO DA REPLICAÇÃO
Na síntese do DNA, novos nucleotídios são unidos, um de cada vez, à
extremidade 3′ da fita recém-sintetizada.
As DNA polimerases, enzimas que sintetizam DNA, podem adicionar
nucleotídios apenas na extremidade 3′ da fita crescente (não na
extremidade 5′), e então novas fitas de DNA sempre alongam no
mesmo sentido 5′ para 3′ (5′ → 3′).
DIREÇÃO 5’ 3’
 FORQUILHA DE
REPLICAÇÃO

Região do DNA
onde ocorre a
transcrição do
DNA parental
fita dupla para
as novas fitas
filhas duplas
FORQUILHA DE REPLICAÇÃO
PONTOS DE ORIGEM DE REPLICAÇÃO-
 CONJUNTO DE PROTEÍNAS
REPLISSOMOS QUE ATUAM NO PROCESSO
DE REPLICAÇÃO
FERRAMENTAS DA REPLICAÇÃO
 PROTEINAS/ ENZIMAS
1- DNA polimerases
São enzimas multifuncionais
DNA-pol na replicação que incorpora nucleotídeos
FERRAMENTAS na extremidade 3’OH livre sintetizando uma fita no
sentido 5’- 3’
DA Há várias DNA polimerases: em E.coli são cinco: POL
REPLICAÇÃO I, II, III, IV e V
Em eucariotos há famílias da DNA pol
A DNA pol I- famílias I e II são replicases
A DNA pol III- são responsáveis pelos processos de
reparo após os eventos de replicação.
DNA HELICASE- DESENROLAMENTO DA
FITA
A DNA helicase rompe as pontes de hidrogênio
entre as bases de duas fitas de nucleotídios
de uma molécula de DNA.
A helicase não pode iniciar o desenrolamento
do DNA de fita dupla; a proteína de iniciação
separa primeiro as fitas de DNA na origem ORI-
C , fornecendo um curto segmento de DNA de
fita dupla onde essa enzima se liga.
A helicase liga-se ao molde da fita tardia em
cada forquilha de replicação e move-se na
direção 5′ →3′ ao longo dessa fita, também
movendo a forquilha
PROTEÍNAS LIGADORAS DE DNA DE FITA ÚNICA

Após o DNA ser desenrolado pela helicase, as

proteínas ligadoras de DNA de fita única
(SSBs) prendem-se firmemente ao DNA de fita
única exposto.
Essas proteínas protegem as cadeias de
nucleotídeos de fita única e evitam a formação
de estruturas secundárias como os grampos que
interferem na replicação;
De forma diversa à de muitas proteínas
ligadoras de DNA, as SSBs são indiferentes à
sequência de base: elas se ligam a qualquer
DNA de fita única. Essas proteínas formam
tetrâmeros (grupos de quatro); cada tetrâmero
abrange de 35 a 65 nucleotídeos.
TOPOISOMERASES
As topoisomerases controlam o superenrolamento
do DNA. Existem dois tipos principais dessa
enzima:
As topoisomerases tipo I alteram o
superenrolamento ao fazer rupturas de fita
única no DNA,
Enquanto as topoisomerases tipo II criam
rupturas de fita dupla.
DNA GIRASE.

A DNA girase é uma Topoisomerase Tipo II

Na replicação, ela reduz a tensão de torção
(torque) que surge à frente da forquilha de
replicação como resultado do desenrolamento
Ela reduz o torque ao romper a fita dupla em
um segmento da hélice de DNA, passando outro
segmento da hélice através da ruptura e,
então, liberando as extremidades rompidas do
DNA. Essa ação, que requer ATP, remove uma
deformação no DNA e reduz o superenrolamento.
PRIMERS- INICIADORES
Todas as DNA polimerases precisam de um
nucleotídio com um grupo 3′-OH ao qual um novo
nucleotídio pode ser adicionado. Por causa
dessa exigência, as DNA polimerases não podem
iniciar a síntese de DNA em um molde vazio;
elas precisam de um primer – um grupo 3′-OH –
para iniciar.

Então, como começa a síntese de DNA?

PRIMERS-INICIADORES
PRIMASE

Uma enzima chamada primase sintetiza segmentos

curtos (cerca de 10 a 12 nucleotídios) de RNA, ou
primers, que fornecem um grupo 3′-OH ao qual a
DNA polimerase pode prender os nucleotídios de
DNA.
A primase é uma Ribonucleoproteína
Sintetiza um primer de RNA contendo
aproximadamente 11 bases; fornece 3’ OH
As primases vão sintetizando primers mais
lentamente evitando a progressão muito rápida
da forquilha na fita descontínua, uma vez que a
fita líder anda mais rápido.
LIGASES

LIGASES
São enzimas que unem os
fragmentos polimerizados na
fita descontínua
FITA CONTÍNUA E FITA DESCONTÍNUA
Durante o processo de replicação do DNA, dois fatores devem ser
considerados: as fitas do DNA têm polaridades opostas (5'→3' e
3'→5') e as DNA-polimerases sintetizam apenas no sentido 5'→3'.
Dessa forma, as novas fitas de DNA crescem em sentidos opostos,
sendo uma das fitas sintetizada de forma contínua e a outra de forma
descontínua
A síntese da fita descontínua, por sua vez, é realizada a partir de
vários iniciadores, sendo polimerizada em diversos fragmentos
(fragmentos de Okazaki), que possuem entre 1.000 e 2.000
nucleotídeos em organismos procarióticos e entre 100 a 200
nucleotídeos em eucariotos. A síntese de cada fragmento de Okazaki
prossegue até encontrar a região 5'-P do fragmento anterior, quando
então a DNA-polimerase se dissocia da fita descontínua do DNA.
PROCESSO DA REPLICAÇÃO
O processo de replicação é semi-descontínuo- em função da direção
oposta da polaridade 5’-3’/// 3’-5’
Reconhecimento do ponto de origem da replicação pela DNA-pol –III
Desenrolamento da helice pela helicase
Manutenção da torção pelas Girases
Proteção da fita pelas SSB
A fita contínua- fita lider necessita somente de um primer onde está o
ponto iniciador para a DNApol- III
A fita descontínua- fita tardia- necessita de vários primers e a fita é
sintetizada gerando os fragmentos de Okazaki com 100 a 200
nuceotídeos
PROCESSO DA REPLICAÇÃO

As ligases vão polimerizando os fragmentos de Okazaki

As primases diminuem os ritmo do replissomo para que as
duas fitas se polimerizem em tempo igual.
Em caso de erro a DNA pol tem propriedade de
exonuclease 3’-5’ que retira nucleotídeos errados e
recoloca o correto
A esse processo dá-se o nome de revisão de leitura-
proofreading
Aumenta a fidelidade da síntese em cerca de 100 vezes.
TÉRMINO DA REPLICAÇÃO

PROCARIOTO- A replicação de uma molécula circular não apresenta

problemas de término, pois ele ocorre quando as duas forquilhas de
replicação se encontram (replicação bidirecional), ou quando a
forquilha atinge novamente a região de origem de replicação
(replicação unidirecional).
EUCARIOTO-O término da replicação de cromossomos lineares, como
os das células eucarióticas, possivelmente ocorra pelo encontro das
forquilhas de replicação adjacentes.
No entanto, são encontrados sítios de pausa de replicação em
eucariotos, com função mais especializada para alguns genes, como,
por exemplo, a região onde estão localizados os genes codificadores
de rRNA.
REPLICAÇÃO
DNA Polimerase III
Sentido 5’ → 3’
Nucleotídeos 3P são
adicionados- ATPs
 Liberação de Pirofosfato

http://207.207.4.198/pub/flash/24/menu.swf
FIDELIDADE DA REPLICAÇÃO
A DNA pol consegue corrigir bases erradas-
REVISÃO- (proofreading)
Reparo de pareamento errado de DNA corrige os erros
após o término da replicação.
Qualquer nucleotídio incorretamente pareado que
permanece após a replicação produz uma deformação
na estrutura secundária do DNA;
A deformidade é identificada por enzimas que removem
o nucleotídeo incorreto e usam a fita original de
nucleotídios como molde para substituir esse nucleotídio.
SÍNTESE
ANIMAÇÃO
https://www.youtube.com/watch?v=TNKWgcFPHqw