Laboratório 2- Extração de DNA da cebola

Grupo: Débora Thomaz, Bianca Oliver

Introdução

O DNA (sigla em inglês) é um ácido nucléico, desoxirribonucleico, uma macromolécula

constituída por nucleotídeos ligados, sendo formado a partir de uma desoxirribose, um
fosfato e uma base nitrogenada. Nas células há também a presença do RNA, que é
formado por uma ribose, sendo este responsável pela síntese de proteínas da célula.
Uma das diferenças que podemos citar entre eles é a presença do oxigênio (ausente no
DNA) e também o fato de que no RNA em geral a fita é simples.

A molécula de DNA é formada por duas fitas, assumindo a configuração de dupla

hélice, os nucleotídeos são ligados através de pontes de hidrogênio e as fitas formadoras
são complementares. As bases de uma fita de DNA são pareadas com a outra fita, de
forma que a Adenina se liga a Timina (bases púricas) e a Citosina a Guanina (bases
pirimídicas). A combinação dos nucleotídeos será responsável pelas características dos
seres e a informação genética dele.

A síntese de proteína feita pelo RNA é de acordo com a sequência de nucleotídeos do

DNA, sendo assim, a simples mutação de uma base nitrogenada pode acarretar doenças
genéticas.

Através de alguns procedimentos podemos obter o DNA do núcleo de algumas frutas ou

vegetais, como foi possível verificar com a realização no laboratório, mas mesmo em
casa podemos realizar procedimentos similares e também obter o DNA. Tais etapas a
serem realizadas permitem que o DNA fique suspenso na solução podendo ser extraído
e a posteriori ser analisado.

Para tanto é necessário que haja o rompimento das membranas citoplasmáticas e nuclear
e as proteínas presentes deverão ser saturadas a fim de isolar o DNA da célula da
cebola.

Objetivo

O objetivo do experimento é realizar a extração do DNA da cebola a fim de mostrar a

reação da célula diante de algumas variações do meio, fazendo com que a membrana
seja dissolvida e liberando o DNA na solução.

Materiais:

 Cebola
 Solução salina-EDTA:
 NaCl 0,15 M
EDTA 0,1 M (pH=8,0)
 SDS 2% (P/V)
 Etanol absoluto 95%
 Solução Tris-EDTA (TE)
10 mM Tris.Cl, 1 mM EDTA – pH 7,5

Procedimentos:
 Cortar 5g de cebola (fatia fina e bem picotada)
 Colocar a cebola picada em um tubo Falcon de 15 mL
 Adicionar 2,5 mL de solução salina EDTA
 Adicionar 1,0 mL de SDS 2%
 Macerar a cebola com gaze para retirar os fragmentos de cebola
 Colocar o filtrado em um tubo de vidro
 Adicionar, lentamente, com pipeta, 4 mL de álcool etílico 95% de modo que os
dois líquidos não se misturem. Notar que na interface, forma-se um material
insolúvel filamentoso, o DNA
 Introduzir um bastão até a região de interface. Imprimir-lhe um movimento
circular e verificar que o material filamentoso irá aderir ao mesmo
 Retirar o bastão e dissolver o precipitado a ele aderido em 2 mL da solução de
Tris-EDTA

Resultado e discussão

O detergente é utilizado a fim de interagir com as moléculas de gordura presentes na

parede celular gerando micelas na mesma e dissolvendo a gordura presente e desfaz
também o núcleo possibilitando o acesso ao DNA.

No interior da célula há nucleases que processariam o DNA uma vez que ele saísse do
núcleo, para isso é adicionado a solução salina de EDTA, neutralizando as enzimas que
viriam a degradar o DNA.

Quando adicionamos o etanol gelado lentamente a constante dielétrica diminui, fazendo

que a camada de solvatação diminua e ele precipite por causa das histonas nas quais o
DNA fica enrolado, por ser um processo endotérmico, o fato de o etanol se encontrar
resfriado torna a reação mais difícil de acontecer. É por causa das histonas presentes no
DNA que conseguimos visualizar o mesmo.

Quando colocamos o DNA com etanol no Tris conseguimos uma melhor visualização
do DNA e nos permite que a posteriori continuemos os processos de separação de
proteínas indesejáveis através de outros métodos mais específicos.

Conclusão
Foi possível observar que a extração do DNA da cebola pode ser feito através de um
método simples dividido em etapas. O detergente permite que as membranas se
dissolvam, a solução salina impede a degradação do material genético e a adição do
álcool faz com que ele precipite. Com isso podemos extrair o DNA, para melhor
manuseio e retirada de proteínas mais específicas existem outros métodos mais
avançados.