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DISCIPLINA: BIOQUMICA
PROFESSOR: DR.MARCELO SANTOS SILVA

RELATRIO DE PRTICA N 01 - CARACTERIZAO DE


CIDOS NUCLEICOS EXTRAO DO DNA DA BANANA

KAMILLE ARAJO DUARTE

IGUATU-CE
2015

KAMILLE ARAJO DUARTE

RELATRIO DE PRTICA N 01 - CARACTERIZAO DE


CIDOS NUCLEICOS EXTRAO DO DNA DA BANANA

Relatrio de aula prtica n 01


apresentado ao Instituto Federal de
Educao, Cincia e Tecnologia
Iguatua-CE
Licenciatura

(IFCE),
em

curso

de

Qumica,

semestre, como forma de avaliao


parcial da disciplina de Bioqumica.

IGUATU-CE
2015

SUMRIO
LISTA DE FIGURAS.......................................................................................... iv
1 INTRODUO............................................................................................... 1
2 MATERIAIS E MTODOS................................................................................ 2
2.1 Materiais.................................................................................................. 2
2.2 Mtodos.................................................................................................. 3
3 RESULTADOS E DISCUSSO.........................................................................6
3.1 Macerao............................................................................................... 6
3.2 Soluo de lise......................................................................................... 6
3.2.1 Detergente......................................................................................... 6
3.2.2 Sal.................................................................................................... 6
3.5 Banho-maria............................................................................................ 7
3.6 lcool...................................................................................................... 7
4 CONCLUSO................................................................................................ 8
5 REFERENCIAS.............................................................................................. 9

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Macerao da banana e preparao da soluo de lise (sal e


detergente)............................................................................................................3
Figura 2. Mistura de banana e soluo de lise no banho-maria..........................3
Figura 3. Resfriamento da mistura no gelo..........................................................4
Figura 4. Filtragem da amostra............................................................................4
Figura 5. Precipitao das molculas de DNA.....................................................5

1 INTRODUO

Muitas pesquisas de Biologia Molecular comeam com a extrao de


cidos nucleicos. O DNA um dos cidos nucleicos que constituem o material
gentico da

maioria

dos seres vivos.

A sigla DNA significa acido

desoxirribonucleico, esta molcula foi descoberta por volta de 1969 por Johann
Friedrich Miescher. O DNA tem papel importante para os seres vivos, o
responsvel por todas as informaes genticas necessrias para criao de
um organismo, ele controla toda a atividade celular que transmitida de
gerao em gerao.
O DNA formado por nucleotdeos, e cada nucleotdeo formado por
uma molcula de desoxirribose, uma molcula de fosfato e uma base
nitrogenada que pode ser prica ou pirimdica. As bases pricas encontradas
no DNA so adenina e guanina; e as bases pirimdicas so citosina e timina,
sendo que a adenina liga-se timina e a guanina liga-se citosina atravs de
pontes de hidrognio.
Hoje os estudos para compreender e aperfeioar estas molculas tem
crescido rapidamente, pois suas aplicaes se tornaram inmeras para a
humanidade.
Na extrao do DNA pelos mtodos convencionais, a lise celular libera
as molculas em uma fase aquosa que separada dos restos celulares por
centrifugao. As protenas so removidas da fase aquosa por solventes
orgnicos (fenol, clorofrmio). O DNA, que permanece na fase aquosa,
precipitado com etanol e, posteriormente, purificado e suspendido em um buffer
adequado.
Neste trabalho laboratorial buscou-se verificar a existncia de molculas
de DNA em amostra de vegetais (banana) atravs da visualizao a olho nu
tendo como base um processo semelhante ao descrito anteriormente e
utilizado pelos cientistas quando comearam as primeiras investigaes sobre
o DNA. A extrao realizada basicamente utilizando-se detergentes, sais e
lcool.

2 MATERIAIS E MTODOS

O experimento de extrao de DNA da banana foi conduzido no


Laboratrio de Bromatologia do Instituto Federal de Educao, Cincia e
Tecnologia Iguatua-CE, aos dias 11 de maro de 2015, para os alunos do 6
semestre do curso de Licenciatura em Qumica sobe a orientao do professor
Dr. Marcelo Santos Silva.
Uma das razes de se trabalhar com bananas que elas so muito
macias e fceis de homogeneizar. Para realizao experimento utilizou-se os
seguintes materiais:
2.1 Materiais
Vidrarias

Vidro relgio
2 bqueres (250 ml)
Funil de Vidro
Proveta (100 ml)
Basto de vidro

Amostras e Reagentes

1 banana
gua destilada
NaCl (sal de cozinha)
Detergente para loua
lcool etlico a 95% gelado (-10C)

Acessrios

Banho-maria (60C)
Balana analtica
Papel de filtro
Bandeja de isopor com gelo
Esptula
Pisseta

2.2 Mtodos
Com o auxilio de um vidro relgio e uma esptula amassou-se uma
banana at a mesma ficar macia e homognea. Em seguida pesou-se 5

gramas de NaCl em uma balana analtica, mediu-se 60 ml de detergente de


cozinha e 100 ml de gua destilada com uma proveta. Misturou-se em um
bequer o sal, o detergente e a gua e mexeu-se at total dissoluo.

Figura 1. Macerao da banana e preparao da soluo de lise (sal e detergente)

Posteriormente adicionou-se a banana amassada a essa soluo recm


preparada, aquecendo-a em banho-maria (60C) por 15 minutos.

Figura 2. Mistura de banana e soluo de lise no banho-maria.

Aps aquecer, resfriou-se rapidamente a mistura colocando-a em uma


bandeja com gelo durante 5 minutos.

Figura 3. Resfriamento da mistura no gelo.

Filtrou-se a soluo em um bequer com auxilio de um funil de vidro e


papel filtro, adicionou-se vagarosamente a soluo filtrada 100 ml de lcool
etlico 95% previamente resfriado a -10C.

Figura 4. Filtragem da amostra.

Com a adio do lcool observou-se a formao de uma camada na


superfcie da soluo aquosa e com um basto de vidro limpo, fez-se

movimentos circulares misturando as fases onde obteve-se o resultado final


esperado.

Figura 5. Precipitao das molculas de DNA.

3 RESULTADOS E DISCUSSO
A banana por ser poliploide, ou seja, possuir vrios cromossomos em suas
clulas, favoreceu a visualizao final do experimento e a ssim como esperado a

prtica possibilitou a observao da precipitao das molculas de DNA com


formao de nuvem na fase alcolica.

3.1 Macerao
A correta macerao do material selecionada possibilitou uma maior
superfcie de contato com a soluo de lise e melhor ao da soluo sobre as
clulas. Permitindo assim a liberao de uma maior quantidade de molculas
de DNA e, portanto, um bom rendimento.

3.2 Soluo de lise


A soluo de lise, assim denominada devido a sua funo de
rompimento da membrana plasmtica e outras membranas, tem um papel
fundamental na extrao do DNA, seus componentes (sal, detergente)
apresentam uma funo decisiva no processo de extrao.

3.2.1 Detergente
As membranas plasmtica e nuclear so compostas principalmente por
lipdios. A funo do detergente desestruturar as molculas de lipdio das
membranas biolgicas. Desta maneira, as membranas sofrem ruptura e todo o
contedo celular - inclusive o DNA - fica disperso na soluo.

3.2.2 Sal
O sal (NaCl) proporciona um ambiente favorvel para a extrao depois
de dissolvido na gua, se dissocia e contribui com ons positivos que
neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As molculas de DNA
passam a no sofrer repulso de cargas entre si, o que favorece sua
aglomerao.

3.5 Banho-maria
A temperatura elevada promove agitao das molculas, facilitando a
ao do detergente em desestabilizar as membranas lipdicas, por esse motivo
a soluo foi levada a banho-maria.

A alta temperatura tambm ajuda a

inativar enzimas que podem degradar o DNA.

3.6 lcool
No bquer pode-se observar duas fases aps o adicionamento do lcool
resfriado, na parte inferior formou-se uma fase aquosa e na parte superior a
fase alcolica (sobrenadante).
O resfriamento permiti a precipitao do DNA, quanto mais gelado o
lcool, menos solvel ser o DNA . O lcool gelado desidrata o DNA, de forma
que este no mais fica dissolvido no meio aquoso. Alm disso, o DNA tende a
no ser solvel em lcool e, deste modo, suas molculas se agrupam.
Como o DNA tem menor densidade que os outros constituintes
celulares, ele surge na superfcie do extrato formando um aglomerado que
precipita junto com outras molculas. Os agregados moleculares obtidos so
uma mistura em proporo varivel de cidos nucleicos, protenas e pectina,
um carboidrato presente na lamela intercelular e no vacolo das clulas
vegetais.
Adicionar o lcool gelado em velocidade lenta auxilia na eficincia de
precipitao do DNA.

4 CONCLUSO
A aula prtica constitui um importante recurso metodolgico facilitador do
processo de ensino-aprendizagem. Atravs da experimentao, o professor alia
teoria prtica e possibilita o desenvolvimento da pesquisa e da
problematizao em sala de aula, despertando a curiosidade e o interesse do
aluno. Transforma o estudante em sujeito da aprendizagem, possibilitando que
o mesmo desenvolva habilidades e competncias especficas.
A partir da pratica realizada foi possvel observar a precipitao das
cadeias de DNA aglomeradas na fase alcolica alm de instigar a pesquisa
sobre a ao de cada substancia, agentes fsicos e qumicos, envolvidos no
processo de extrao.
Portanto correto afirmar que a aprendizagem foi efetivamente
significativa e a aula conseguiu cumprir todos os seu objetivos.

5 REFERENCIAS

LEHNINGER, A.L. et al. Princpios de bioqumica. 4 ed. So Paulo:


SARVIER, 2006.
MARIA ANTONIA MALAJOVICH / Guias de atividades Biotecnologia: ensino
e divulgao. http://www.bteduc.bio.br
Rodrigues, C.D.N. et al.

DNA vegetal na sala de aula So Paulo:

Departamento de Botnica IBUSP. So Paulo, 2008. 8 p.: il. (Ensino de


Botnica)