Atividade Laboratorial

Como extrair o DNA a

partir de células vegetais?

Toda a informação genética necessária para criar um organismo

encontra-se no DNA. O DNA, ácido desoxirribonucleico, é o suporte da
informação genética que coordena todas as atividades celulares.

Este ácido nucleico é constituído por um grupo fosfato, uma pentose (a

desoxirribose) e uma base nitrogenada, que pode ser a adenina, a
timina, a citosina e a guanina. As duas cadeias polinucleotídicas
antiparalelas pelo qual DNA é constituído encontram-se unidas por
ligações de hidrogénio entre as base nitrogenadas dos nucleiótidos das
duas cadeias. A estrutura do DNA é em dupla hélice.

Para estudar o modo como as informações são transmitidas à célula, de

modo a realizar todas as atividades celulares, os cientistas isolaram o
DNA. Foi o físico Friedrich Miescher que em 1869 isolou o DNA. Hoje em
dia é possível isolá-lo facilmente. Para o fazer é necessário separá-lo dos
outros componentes celulares, fragmentando as membranas celulares e
os invólucros nucleares. O objetivo desta atividade laboratorial é
precisamente extrair o DNA das células vegetais.

Materiais:
Laranja
Almofariz e pilão
Gobelés de 250 ml
Filtro de café
Funil de vidro
Tubos de ensaio e
respetivo suporte
Provetas de 100 ml
Colher de laboratório
Álcool etílico a 96%
(arrefecido no congelador
durante pelo menos 1
hora)
Água da torneira
Detergente líquido da loiça
Papel absorvente
Palito de madeira grande
Sal de cozinha
Pipeta de Pasteur
Pipeta e pipetador
Procedimento:
1. Descascar a laranja e colocar meia
laranja no almofariz esmagando-a com
a ajuda do pilão.
2. Adicionar à laranja esmagada 10 ml de
água, uma gota e meia detergente da
loiça e meia colher de sal. Misturar bem.
3. Colocar o funil com o filtro de café na
abertura da proveta e transferir o
conteúdo do gobelé para o filtro.
4. Distribuir a mistura obtida por tubos de
ensaio.
5. Adicionar com ajuda da pipeta de
Pasteur, álcool etílico arrefecido,
deixando-o escorrer lentamente pela
parede do tubo de ensaio ligeiramente
inclinado.
6. Observar a formação de um precipitado
esbranquiçado na faze alcoólica.
7. Recolher do álcool, com o palito de
madeira, uma amostra de DNA

Fig. 1 Maceração da laranja

(procedimento 1)

Fig. 2 e 3 Laranja no filtro de

café (procedimento 3)
 Resultados experimentais:
Amostra de DNA

Fase
alcoólica

DNA

Fase DNA
aquosa

Fig. 4 Tubo de ensaio com amostra de DNA - mistura

heterogénea

Discussão/Conclusão:
Na atividade laboratorial observamos que o tubo de ensaio com o DNA não
é uma mistura homogénea, mas sim heterogénea uma vez que as
substâncias se encontram divididas por fases, a fase aquosa que está na
parte inferior do tubo de ensaio e a fase alcoólica na parte superior, o DNA
encontra-se entre estas duas fases.

Para facilitar a observação das células procedemos á trituração do material

biológico, laranja, o que permitiu romper as paredes celulares e as
membranas celulares, libertando o conteúdo celular. Após a trituração foi
colocado um filtro de café no funil para filtrar o material biológico triturado,
esta filtração permite separar as paredes e membranas celulares do
restante conteúdo celular, uma vez que este foi libertado durante o processo
de trituração. A filtração também é essencial para impedir a passagem de
impurezas. O detergente provoca a rotura das membranas celulares ao
penetrar a estrutura desta e separar as moléculas de fosfolípidos. Esta
rotura faz com que as proteínas se dispersem na solução.
A adição de sal (NaCl) no inicio da experiencia proporciona ao DNA um
ambiente favorável. Visto que o grupo fosfato, um dos componentes do
DNA, apresenta elevado numero de cargas negativas, assim estas cargas
têm tendência para se repelirem. Os iões positivos (Na+) presentes no sal
atuam sobre a carga negativa do DNA neutralizando-o, esta é a função do
sal ao ser adicionado ao material biológico. Durante a atividade verificamos
que o álcool etílico não se dissolve com o DNA. Assim este último precipita-
se, separando-se da solução, o que facilita a visualização. O álcool por ser
menos denso do que a água flutua numa camada acima desta. Por outro
lado, verifica-se que a maior parte das estruturas celulares é muito densa,
permanecendo na solução aquosa no fundo do tubo de ensaio. E o DNA ao
ser menos denso do que a água encontra-se numa região acima desta.
Verifica-se que as diferentes substâncias que foram utilizadas na atividade
(o álcool, o detergente e o sal) tiveram influência nos resultados obtidos.

Nesta atividade laboratorial não existem variáveis independentes nem

variáveis dependentes.

Na atividade laboratorial não foi possível observar uma molécula de DNA,

devido ao seu reduzido tamanho, apenas conseguimos observar milhões de
cadeias de DNA aglomeradas.