EXTRAÇÃO DE DNA DE FRUTAS / BIOLOGIA MOLECULAR

O objetivo é introduzir conceitos básicos sobre a extração de DNA. Nesta prática, junto com o DNA são
extraídos moléculas de RNA e algumas proteínas, e é possível ver a olho nu o aglomerado dessas
moléculas.

Este procedimento é feito com reagentes de cozinha com a intenção de mostrar que o procedimento é
simples e facilitar a memorização dos passos de extração. O DNA extraído não é apropriado para
procedimentos de pesquisa moleculares, mas é facilmente visualizado por estar associado a proteínas e
restos celulares.

- O detergente da solução de lise quebra as membranas lipídicas das células e dos núcleos, liberando o
DNA para a solução aquosa. Também, rompe as ligações não-covalente das proteínas, causando sua
desnaturação.
- O sal (NaCl; Na+) interage com o DNA, que tem carga negativa, tornando-o apolar, favorecendo a sua
precipitação da fase aquosa.
- A adição lenta de álcool cria duas fases polares e o DNA precipita entre elas.

Material e métodos

Materiais Reagentes
- Saco plástico do tipo zip lock (saco comum - Morango, banana ou kiwi
também funciona, mas deve ser resistente e - 100 ml solução de lise composta por 450 ml
não ter furos) de água, 25 ml de detergente líquido,
- 2 copos de vidro (ou béqueres) preferencialmente incolor e 1 colher de chá
- Papel filtro ou filtro de café de sal
- Funil - Álcool etílico 95% gelado
- Tubos de ensaio
- Água quente (50-70°C – pode ser obtido
esquentando uma chaleira de água e
desligando antes de ferver, ou utilizando uma
chapa quente)
- Caixa com gelo
- Pedaço de arame fino

Metodologia
1.1 Colocar a fruta em saco plástico e esmagá-la até ficar homogêneo.
1.2 Adicionar 100 ml de solução de lise à fruta amassada e misturar tudo, até ficar uma solução
homogênea.
1.3 Colocar a mistura em um frasco de vidro e levar à banho-maria quente (50-70°C) por 15 min, misturando
frequentemente a solução.
1.4 Filtrar a mistura.
1.5 Transferir o filtrado para um tubo de ensaio até quase a metade do volume do tubo.
1.6 Adicionar lentamente o álcool absoluto gelado no tubo de ensaio, deixando-o escorrer vagarosamente
pela parede interna, a fim de formar duas fases, a superior, alcoólica e a inferior, aquosa. O volume de
álcool adicionado deve ser aproximadamente o mesmo volume do extrato filtrado. Misture lentamente e
observe a formação de um precipitado em forma de fios entre as fases.
QUESTÃO PRÉVIA (antes da realização do experimento)
É provável que você tenha visto na mídia que, hoje em dia, é muito fácil fazer um teste de paternidade e obter
resultados confiáveis, ou que o mapeamento e sequenciamento do genoma humano pode “abrir portas” para
a cura de muitas doenças. Para ter acesso a todas as informações contidas no DNA, o primeiro procedimento a
ser realizado é seu isolamento. A técnica de isolamento foi desenvolvida há mais de 50 anos e foi a partir dela
que os cientistas conseguiram desvendar a estrutura da molécula de DNA em 1953. Mas onde o DNA está
presente e como podemos isolá-lo?

Questões após a realização do experimento:

1. Por que o tecido precisa ser macerado para isolar o DNA?
2. Qual o papel do detergente presente na solução de lise no processo de extração do DNA?
3. Qual a composição da molécula de DNA?
4. Quais as características químicas da molécula de DNA?
5. Porque o DNA se torna hidrofóbico ficando visível após adicionar álcool gelado?
6. Em relação à pesquisa, quais tipos de perguntas podem ser respondidas por meio da observação do
DNA dos indivíduos?