EXTERNATO RIBADOURO

Tcnicas Laboratoriais de Biologia - Relatrio

Extrao de ADN de clulas vegetais

Trabalho realizado pela aluna:

M Beatriz Andrade n 21 11 A6
no mbito da disciplina de Biologia e Geologia
Prof Ise Machado

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Extraco do ADN de clulas do Kiwi

Introduo

O ADN, ou cido desoxirribonucleico, composto de vrios nucletidos, essencialmente constitudo por

aminocidos; inanimado, ou seja, no reactivo e quimicamente inerte. Controla a funo das clulas e
responsvel pela existncia de vida, pois contm o seu esquema.

Em organismos vivos, o ADN no existe como uma molcula nica mas sim como um par de molculas firmemente
associadas. As duas longas fitas de ADN enrolam-se formando uma dupla hlice. Os nucletidos esto presentes
em ambas as fitas da dupla hlice, unidos com nucletidos da mesma fita por ligaes fosfodister e fita
complementar atravs de pontes de hidrognio formadas pelas suas bases.
A dupla hlice do ADN estabilizada por pontes de hidrognio, entre as bases presas s duas fitas. As quatro bases
encontradas no ADN so a adenina (A), a citosina (C), a guanina (G) e a timina (T).
A dupla hlice uma espiral dextra. Como as fitas de ADN giram uma ao redor da outra, elas deixam espaos entre
cada cerne de fosfato, revelando os stios das bases que esto localizadas na parte interna.
Contm as bases do plano gentico que copiam as mensagens biolgicas e as transferem para molculas muito
mais geis conhecidas por RNA (a transmisso dos nossos pais para ns, onde metade do nosso ADN ser materno
e a outra metade paterno)

Sendo o ADN inerte e quimicamente inactivo ele pode ser extrado de uma srie de fontes, mesmo que secos h
milhares de anos.

Objectivo

Esta actividade laboratorial tem como objectivos: conhecer as tcnicas de extraco de ADN das clulas e
compreender o processo necessrio extraco do ADN.

Material

. Kiwi;
. Almofariz;
. Varinha mgica;
. Gobel;
. Bisturi;
. Banho-maria (37C);
. Gaze (pano);
. Proveta (100ml);
. Lminas e lamelas;
. Tubos de ensaio;
. gua destilada;
. Detergente da loia;
. NaCl;
. Etanol a 5C;
. Disco de aquecimento;

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. Tina;
. Pipetas de Pasteur;
. Fucsina Bsica;
. MOC.

Procedimento Experimental

1. Depois de ter descascado um kiwi, este foi cortado em pequenos cubos e esmagado num almofariz;
2. Foi adicionada uma soluo composta por:
. 100 ml de H2O;
. 10 ml de detergente da loua;
. 3 g de NaCl.
3. Continumos o processo de esmagamento;
4. Colocmos a preparao em banho-maria (37) durante 15 minutos;
5. Filtramos, atravs da gaze de forma a obter 5ml de lquido para um tubo de ensaio.
6. Adicionamos lentamente preparao, 5 ml de etanol 96% a 5C.
7. Deixmos repousar at observarmos a ascenso de uma camada gelatinosa.
8. Observmos ao microscpio, utilizando a fucsina bsica.

Recorrendo a um determinado nmero de processos, realizados em funo da

composio e estrutura do ADN, possvel a extraco desta molcula e sua
posterior visualizao.

Discusso de Resultados

O kiwi esmagado permitiu a destruio da membrana nuclear e da membrana celular da parede celular para que
houvesse um extravasamento celular.
Depois de se derramar o lcool no extracto de kiwi, deixou-se repousar durante 15 minutos e a partir da comeou
a observa-se, acima da camada do extracto, um outro extracto mas este dum material gelatinoso, constitudo
por fitas brancas muito finas o ADN.

O porqu da utilizao do sal

O sal utilizado para ajudar a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, impedindo que elas precipitem
com o ADN.
O sal tambm d um ambiente favorvel ao ADN, e contribui com ies positivos que neutralizam a carga negativa
impedindo a repulso elctrica entre as molculas de ADN, permitindo a sua agregao de modo a formar
filamentos mais espessos e compridos que so mais facilmente visveis.

O porqu da utilizao do detergente

O detergente ajuda a dissolver e a desagregar as membranas nucleares constitudas pela bicamada fosfolipdica
que compe a membrana plasmtica e as membranas dos organelos, que acabam emulsionados.

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 O porqu da utilizao do lcool (etanol)

Utilizamos o lcool porque o ADN no solvel neste composto. Possibilita assim a separao do ADN e desta
forma estas molculas levam os filamentos de ADN a ascenderem na camada de lcool, surgindo mais prximos da
superfcie. As bolhas de ar que se desenvolveram devido ao choque trmico colaboraram na ascenso do ADN.

Concluso

Com esta experincia podemos concluir que o ADN uma molcula existente nas clulas de todos os seres-vivos e
tambm que pode ser extrado. Para tal necessrio a utilizao de certos componentes na sua extraco: sal,
lcool e detergente.
O sal proporciona um ambiente considerado favorvel s molculas de ADN das clulas da cebola, pois contribui
com ies positivos que neutralizam, a carga negativa ADN. Por sua vez o detergente intervm na desorganizao
das membranas celulares, enquanto o lcool desidrata as molculas de ADN, aglutinando-as e ao mesmo tempo
tornando-as visveis a olho nu. Isto s ocorre porque o ADN aparece como uma massa branca e filamentosa
(cromatina).

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