Ministério da Educação

Universidade Tecnológica Federal do Paraná

Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Bioquímica de Microrganismos

Prova da catalase e urease

Aula 7

Gabriela Gosdag Zolini

Luan Tucunduva Caigawa
Tassiane Naomi Viana

Ponta Grossa
2023/2
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Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Bioquímica de Microrganismos

1. Introdução

1.1 Prova da catalase

A catalase é uma enzima que a maioria das bactérias aeróbias e anaeróbias facultativas
possuem. Esta enzima decompõe o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio.
O peróxido de hidrogênio pode ser produzido, pela maioria das bactérias aeróbias e anaeróbias
facultativas, a partir de flavoproteínas reduzidas via uma reação de transferência de elétrons, gerando
oxigênio livre ao final da reação. Outro modo também é ser produzido enzimaticamente em aeróbios e
anaeróbios facultativos pela ação da enzima superóxido dismutase.
(Imagem 1: ilustração de reações de formação do peróxido de hidrogênio - H2O2)

Se houver acumulação de peróxido de hidrogênio na célula, ele se torna tóxico pois ele é uma
molécula muito reativa que causa danos aos componentes celulares. A decomposição deste
componente pode ocorrer pela ação das enzimas classificadas como hidroperoxidases, que são as
peroxidases e catalases.
Por isso, a catalase é uma enzima que a maioria das bactérias aeróbias e anaeróbias
facultativas possuem. Esta enzima decompõe o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio. E as
bactérias que não apresentam catalase ou peroxidase não são capazes de decompor o peróxido,
tendo seu crescimento inibido pelo acúmulo do produto no metabolismo.

1.2 Prova da urease

A urease é uma enzima microbiana muito importante pois está relacionada com a
decomposição dos componentes orgânicos. Ela é considerada constitutiva por ser sintetizada por
algumas bactérias, não importando se há presença ou ausência do seu substrato (ureia).
A prova da urease consiste em identificar a presença da atividade da enzima urease, que pode
ou não ser produzida pela levedura. Esta enzima hidrolisa a ureia e produz a amônia, que alcaliniza o
meio, elevando o pH do meio de cultura e esta mudança pode ser detectado pelo vermelho de fenol,
um indicador de pH com ponto de viragem em pH>8,4.
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O meio para o teste foi desenvolvido para determinar a capacidade do micro-organismo em

converter a ureia para amônia (utilizada pela bactéria como fonte de carbono para produção de
aminoácidos e nucleotídeos), que aumenta o pH do meio com consequente mudança de cor do
indicador, de uma coloração amarela em pH abaixo de 8,4 para uma coloração vermelho/rosa em pH
acima de 8,4.

2. Objetivos

O objetivo desta prática é detectar a presença da enzima catalase na bactéria e com base no
resultado obtido, auxiliar na identificação de gêneros e espécies bacterianas. Além disso, determinar
se o microrganismo testado (Escherichia coli) é capaz de produzir a enzima urease.

3. Materiais e Métodos

3.1 Materiais

3.1.1 Prova da catalase

 1 tubo de rosca com aproximadamente 5 mL da solução de peróxido de hidrogênio 3,0%;

 1 pipeta Pasteaur;
 1 tubo com o inóculo do micro-organismo (Escherichia coli);
 Bico de Bunsen;
 Papel;
 Álcool 70%;
 Incubadora;
 Fósforo.

3.1.2 Prova da urease

 1 alça de inoculação estéril;

 1 tubo com Ágar ureia de Christensen inclinado em rampa longa;
 Bico de Bunsen;
 Papel;
 Álcool 70%;
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 Incubadora;
 1 inóculo com o micro-organismo (Escherichia coli);
 Fósforo.

3.2 Métodos

3.2.1 Prova da catalase

Antes de realizar a prática, todos os integrantes do grupo lavaram as mãos e após isso,
realizou-se a desinfecção da bancada com o álcool 70% juntamente com o papel, fazendo
movimentos do início da bancada até o final dela.
Em seguida, recebido o inóculo do micro-organismo (Escherichia coli) em um tubo de ensaio,
ligou-se o bico de Bunsen e os processos a seguir são feitos ao redor da sua chama.
Iniciando a prática, adiciona-se diretamente ao tubo com o micro-organismo, 1,0 mL de
peróxido de hidrogênio a 3,0%. Após isso, fecha o tubo e é feita a observação se houve um
borbulhamento imediato (resultado positivo) ou não (resultado negativo).
Feita a observação, são tomados registros do resultado. E para finalizar, é desligado o bico de
Bunsen e feita a desinfecção total da bancada com o álcool 70%.

3.2.2 Prova da urease

Antes de realizar a prática, todos os integrantes do grupo lavaram as mãos e após isso,
realizou-se a desinfecção da bancada com o álcool 70% juntamente com o papel, fazendo
movimentos do início da bancada até o final dela.
Em seguida, recebido o inóculo do micro-organismo (Escherichia coli) em um tubo de ensaio,
ligou-se o bico de Bunsen e os processos a seguir são feitos ao redor da sua chama.
Para realizar a prática, é importante sempre lembrar de flambar a borda do tubo antes e depois
da inoculação, o mesmo serve para a alça de inoculação, flambar antes de coletar o micro-organismo
e depois também, ao finalizar.
Considerado isso, é possível dar início a prática tomando um inóculo moderado da linhagem
testada, usando o lado da alça de inoculação, e inocular o tubo com ágar Ureia de Christensen
inclinado, estriando a rampa.
Posteriormente, foi feito um tubo de controle com o mesmo meio de cultivo, porém sem o micro-
organismo.
Finalizado todo o procedimento, os tubos foram colocados na incubadora a 35-37°C por 48
horas. E por último, foi desligado o bico de Bunsen e feito a esterilização da bancada com o álcool
70%.
Passado o período estabelecido, o grupo voltou ao laboratório e tomou nota dos resultados.
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4. Resultados

4.1 Prova da catalase

(Imagem 2: resultado positivo do tubo com o micro-organismo e o peróxido de hidrogênio)

4.2 Prova da urease

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(Imagem 3: tubo inoculado após 48 horas)

5. Discussão

6. Referências Bibliográficas

TRENTIN, Vitória Stefani Magalhães et al. Testes bioquímicos para identificação de leveduras na
medicina veterinária - revisão de literatura. 2023 - UNIVERSIDADE PARANAENSE. Disponível
em: https://ojs.revistasunipar.com.br/index.php/veterinaria/article/view/10373/4885. Acesso em: 30
nov. 2023.