INSTITUTO SUPERIOR DE GESTÃO E EMPREENDEDORISMO GWAZA MUTHINI

ANÁLISES CLÍNICAS E LABORATORIAIS

Ângela Sheila Atanasio Come 20210067

Marquia Mateus Cristiano 20210008

Xai-Xai,Fevereiro de 2024
 TÉCNICAS E MÉTODOS DE ANÁLISES
MICROBIOLÓGICOS, PARÂMETROS E
PADRÕES MICROBIOLÓGICOS DE ÁGUA,
SOLO E AR.

ÂNGELA COME
MARQUIA CRISTIANO
Resumo
Existem diversas técnicas que ajudam na quantificação do crescimento de
microrganismos. Alguns desses métodos laboratoriais trabalham para determinar o
número exacto de células presentes, enquanto outros actuam directamente na análise de
toda a massa total de uma população. Ou seja, é preciso definir seu objectivo para
determinar qual a melhor técnica laboratorial a ser utilizada. Como a população de
bactérias costuma ser muito grande, é muito comum que se utilizem pequenas amostras
desses grupos bacterianos para realizar uma contagem-que pode ser feita com métodos
directos ou indirectos.

Palavras-chave: contagem em placas, numero mais provável, água, solo e ar.

Introdução
O diagnóstico microbiológico é o conjunto de procedimentos e técnicas
complementares empregadas para estabelecer a etiologia do agente responsável de
uma doença infecciosa. Muitos testes microbiológicos objectivam o isolamento de
microrganismos viáveis, os quais devem ser levados rapidamente ao laboratório
em transportes adequados e inoculados em meios de cultura para o crescimento
dos patógenos mais prováveis.
O presente trabalho, tem como tema: técnicas e métodos deanalises
microbiológicos e parâmetros microbiológicos de agua, solo e ar.
Objectivos
Objectivo Geral:
➢ Avaliar os padrões microbiológicos de água, solo e ar.

Específicos:
➢ Analisar os parâmetros microbiológicos da água;
➢ Descrever as técnicas de análises microbiológicas;
➢ Descrever os métodos de análises microbiológicos.
 Amostragem técnica e métodos de análises.
Como a população de bactérias costuma ser muito grande, é muito comum
que se utilizem pequenas amostras desses grupos bacterianos para realizar
uma contagem — que pode ser feita com métodos directos ou indirectos.
Porém, na maioria dos casos, a quantificação da população bacteriana é feita
levando em conta o número de células presentes em 1 ml do meio líquido ou
de 1 grama de matéria sólida. (Black, 2002)
Contagem em placas

A contagem de microrganismos em placas de petri com meios

de cultura é um dos métodos mais utilizados em laboratórios, e
ajuda a determinar o verdadeiro tamanho de uma população de
bactérias. A principal vantagem de utilizar essa técnica está na
possibilidade de quantificar a exacta quantidade de células
vivas presentes.
Por outro lado, a contagem de microrganismos em placas apresenta a
desvantagem do tempo de incubação, já que são necessárias 24 horas
para que as colónias visíveis apareçam de maneira clara nas placas
utilizadas. Esse período é considerado relativamente longo, impedindo
que a técnica seja utilizada em áreas que demandam maior agilidade —
como controle de qualidade de alimentos, que muitas vezes não podem
esperar tanto por tipo de análise.
 Alguns cuidados devem ser considerados na hora de realizar a
contagem de microrganismos em placas. Um passo essencial é
garantir que apenas um número extremamente limitado de
colónias possa crescer e se desenvolver em cada placa utilizada.
O excesso de colónias em uma placa pode causar saturação, o
que impede que outras colónias cresçam e se desenvolvam da
melhor maneira possível. Como consequência, a contagem dos
microrganismos acaba dificultada, o que pode prejudicar os
resultados.
A contagem em placas permite a avaliação da qualidade
microbiológica de alimentos, superfícies, matérias-primas e
água. Ela baseia-se na contagem de colónias de microrganismos
em placas, em meios específicos de cultivo utilizados para
determinação dos mais diversos tipos de microrganismos.
Através da Contagem em placas é possível inspeccionar e detectar fontes de
contaminação em:
✓ Derivados alimentícios: contagem de microrganismos em produtos lácteos,
verificando a possibilidade de liberação para o comércio.
✓ Superfícies: verificar a condição higiénica das superfícies dos equipamentos,
embalagens ou das mãos dos funcionários.
✓ Matéria-prima: como o leite cru e ingredientes utilizados na fabricação dos
derivados lácteos.
O método de contagem em placas possui algumas vantagens e desvantagens em
relação a outros métodos.
Vantagens
✓ Fácil execução.
✓ Mensura microrganismos de qualquer grandeza.
✓ Indicado para leite pasteurizado (pequena quantidade de microrganismos).
✓ Indicado para microrganismos psicrotróficos (baixa actividade redutora).
Desvantagens
✓ Não informa tipo e espécie de microrganismo.
✓ Bactérias patogénicas não são enumeradas.
✓ As colónias são estimativas do número de microrganismos.
✓ Demanda tempo.
✓ Não revela o potencial de actividade microbiana.
✓ O modo de leitura muitas vezes é subjectivo.
Fig 1: Técnica de Contagem de microrganismos em placas.
 Técnica de Número Mais Provável

A técnica de Número Mais Provável (NMP) é um método que permite estimar a

densidade de microrganismos viáveis presentes em uma amostra sob análise. Esta
técnica não permite a contagem "fixa" de células viáveis ou de unidades formadoras
de colónias (UFC), como acontece com a técnica de contagem em placas.
O Número Mais Provável (NMP) é um método estatístico usado para estimar o
número de células viáveis ​de um determinado microrganismo em uma amostra, mais
comummente comida ou água. É usado quando as amostras contêm poucas bactérias
para fornecer números de células viáveis ​confiáveis ​pela contagem clássica em placas.
 A técnica de NMP deve ser realizada incluindo as seguintes etapas analíticas:

a) Teste presuntivo (leitura dos resultados obtidos na série de tubos múltiplos).

b) Teste confirmatório (subcultivo dos tubos positivos do teste presuntivo em caldo de
maior impediência ou em ágar selectivo diferencial para o microrganismo pesquisado).
c) Teste completo (identificação bioquímica da (s) espécie (s) microbiana (s) presente
(s)). Esta técnica tem por base a probabilidade estatística relacionada com a frequência
da ocorrência de resultados positivos mais prováveis em função do número real de
microrganismos presentes. É necessário que a amostra seja preparada de modo que as
bactérias não se encontrem agrupadas, que estejam aleatóriamente distribuídas na
amostra; e que os meios e condições de incubação permitam a recuperação e detecção
de ao menos uma célula viável do organismo alvo.
Fig 2: Técnica de Número Mais Provável
 Técnica de Membrana Filtrante
Filtração, processo no qual partículas sólidas em um fluido ou gasoso são
removidas pelo uso de um meio filtrante que permite a passagem do fluido, mas
retém as partículas sólidas.
Membranas filtrantes são componentes essenciais no processo de tratamento de
água e efluentes, sendo capazes de remover contaminantes e purificar a água,
podendo ser utilizadas em processos industriais, de reúso e até potabilização,
dependendo da fonte e qualidade de água a tratar.
A Técnica da Membrana Filtrante é um método microbiológico utilizado para
analisar a quantidade da agua, especialmente para testar a presença de
microrganismos patogénicos, como bactérias. É amplamente empregada em
laboratórios de controlo de qualidade, como para água.
 Processo:
1. Colecta e preparação da Amostra: uma amostra de agua é colectada e, se necessário,
preparada para o teste. A preparação pode envolver a diluição da amostra para reduzir a
turbidez ou a concentração de microrganismos.
2. Filtragem da Amostra: a amostra de água é passada atravésde uma membrana filtrante com
poros muito pequenos, geralmente de 0,45 micrómetros de diâmetro. Essa membrana é capaz
de reter bactérias e outros microrganismos, enquanto deixam passar a água.
3. Transferência e Incubação: a membrana, agora contendo os microrganismos retidos, é
transferida para um meio de cultura nutritivo. A incubação é realizada sob
condiçõescontroladas de temperatura e tempo, permitindo o crescimento de colónias
bacterianas.
4. Contagem e Analise: após o período de incubadorascolónias formadas na membrana são
contadas e analisadas. Cada colónia representa, teoricamente, um microrganismo ou grupo de
microrganismo que estava presente na amostra original de água.
 A Técnica da Membrana
Filtrante é valorizada por sua
precisão e sensibilidade,
permitindo detectar até mesmo
baixas concentrações de
microrganismos na água. É
uma ferramenta crucial para
garantir a segurança da água
em vários contextos, incluindo
abastecimento público. (
Fig 3: Técnica de
Membrana Filtrante Murray, 2004)
 Técnica de Observação

Existem dois métodos gerais utilizados para preparar espécimes

microbiológicas para observação de microrganismos por meio do
microscópico luminoso. Técnica entre lâmina e lamínula e gota
pendente - utilizam uma suspensão de microrganismos vivos em uma
gota ou uma camada líquida.
 MICROSCOPIA ÓPTICA COM
ILUMINAÇÃO DIRECTA
A identificação do patógeno a partir de material clínico deve ser iniciada pelo exame
microscópico da amostra clínica. A demonstração directa do agente tem como objectivo
verificar as características morfológicas e enumerar microrganismos e células eucarióticas;
pode auxiliar o microbiologista na escolha dos meios de cultura mais indicados e ao médico,
a melhor terapia empírica a ser ministrada.
Observações importantes como a qualidade da amostra e a intensidade da resposta
inflamatória, verificada pela presença de um infiltrado de polimorfonucleares, podem ser
visualizadas. Para visualização do material celular e microrganismo torna-se necessário o
emprego de corantes, uma vez que os mesmos são frequentemente transparentes.
 COLORAÇÃO DE GRAM
É o método de coloração diferencial mais utilizado em exames directos ao
microscópio de amostras clínicas e a partir de colónias bacterianas, devido ao
seu largo espectro de coloração, que inclui a maioria das bactérias, muitos
fungos e parasitas, tais como Trichomonas, Strongyloides e cistos de vários
protozoários. As excepções significantes incluem Treponema, Mycoplasma,
Chlamydia e Rickettsia, por serem pequenos demais para a visualização em
microscopia óptica de luz directaou por não terem parede.
A coloração de Gram permite dividir as bactérias em dois grandes grupos:
Gram-positivas e Gram-negativas.
 COLORAÇÃO DE BACILOS ÁLCOOL-ÁCIDO
RESISTENTES (BAAR)

Algumas bactérias possuem ácidos graxos de cadeia longa (ácido micólico)

na sua parede, que conferem impermeabilidade ao cristal violeta a outros
corantes básicos. Para permitir a entrada de corantes primários nestas devem
ser empregados calor ou detergentes.
Uma vez dentro da célula bacteriana, o corante não é eliminado mesmo com
solvente álcool-ácido. A coloração álcool-ácido diferencia bactérias dos
géneros Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Tsukamurella, Gordona,
Legionella micdadei e cora oocistos de Cryptos¬poridium, lsospora,
Sarcocystis e Cyclospora.
 MICROSCOPIA ÓTICA COM
ILUMINAÇÃO DE CAMPO ESCURO
A microscopia em campo escuro é uma das técnicas mais usadas para o
diagnóstico da sífilis primária. Devido ao pequeno tamanho da célula
bacteriana de Treponema pallidum não é possível observá-la utilizando-se
colorações usuais, a não ser pela coloração da prata após fixação do
esfregaço. Um resultado positivo em exame microscópico é definitivo para
sífilis se a infecção por outros treponemas patogénicos puder ser excluída.
 Parâmetros de qualidade da água

Para caracterizar uma água, são determinados diversos parâmetros,

os quais representam as suas características físicas, químicas e
biológicas. Esses parâmetros são indicadores da qualidade da água e
constituem impurezas quando alcançam valores superiores aos
estabelecidos para determinado uso.
 Parâmetros físicos
✓ Temperatura: medida da intensidade de calor; é um parâmetro importante, pois, influi em
algumas propriedades da água (densidade, viscosidade, oxigênio dissolvido), com reflexos
sobre a vida aquática. A temperatura pode variar em função de fontes naturais (energia
solar) e fontes antropogênicas (despejos industriais e águas de resfriamento de máquinas).
✓ Sabor e odor: resultam de causas naturais (algas; vegetação em decomposição; bactérias;
fungos; compostos orgânicos, tais como gás sulfídrico, sulfatos) e artificiais (esgotos
domésticos e industriais). O padrão de potabilidade: água completamente inodora.
✓
Cor: resulta da existência, na água, de substâncias em solução; pode ser causada pelo
ferro ou manganês, pela decomposição da matéria orgânica da água (principalmente
vegetais), pelas algas ou pela introdução de esgotos industriais e domésticos. Padrão de
potabilidade: intensidade de cor inferior a 5 unidades.
 Parâmetros Químicos
✓ PH (potencial hidrogeniônico): representa o equilíbrio entre íons H+ e íons OH;
varia de 7 a 14; indica se uma água é ácida (pH inferior a 7), neutra (pH igual a 7)
ou alcalina (pH maior do que 7); o pH da água depende de sua origem e
características naturais, mas pode ser alterado pela introdução de resíduos; pH
baixo torna a água corrosiva; águas com pH elevado tendem a formar incrustações
nas tubulações; a vida aquática depende do pH, sendo recomendável a faixa de 6 a
9.
✓ Alcalinidade: causada por sais alcalinos, principalmente de sódio e cálcio; mede a
capacidade da água de neutralizar os ácidos; em teores elevados, pode
proporcionar sabor desagradável à água, tem influência nos processos de
tratamento da água.
 ✓ Cloretos: Os cloretos, geralmente, provêm da dissolução de
minerais ou da intrusão de águas do mar; podem, também, advir dos
esgotos domésticos ou industriais; em altas concentrações, conferem
sabor salgado à água ou propriedades laxativas.

✓ Ferro e manganês: podem originar-se da dissolução de compostos

do solo ou de despejos industriais; causam coloração avermelhada à
água, no caso do ferro, ou marrom, no caso do manganês, manchando
roupas e outros produtos industrializados; conferem sabor metálico à
água; as águas ferruginosas favorecem o desenvolvimento das
ferrobactérias, que causam maus odores e coloração à água e
obstruem as canalizações.
✓ Oxigénio Dissolvido (OD): é indispensável aos organismos aeróbios;
a água, em condições normais, contém oxigénio dissolvido, cujo teor
de saturação depende da altitude e da temperatura; águas com baixos
teores de oxigénio dissolvido indicam que receberam matéria
orgânica; a decomposição da matéria orgânica por bactérias aeróbias
é, geralmente, acompanhada pelo consumo e redução do oxigénio
dissolvido da água; dependendo da capacidade de autodepuração do
manancial, o teor de oxigénio dissolvido pode alcançar valores muito
baixos, ou zero, extinguindo-se os organismos aquáticos aeróbios.

✓ Matéria Orgânica: a matéria orgânica da água é necessária aos

seres heterótrofos, na sua nutrição, e aos autótrofos, como fonte de
sais nutrientes e gás carbônico; em grandes quantidades, no entanto,
podem causar alguns problemas, como: cor, odor, turbidez, consumo
do oxigênio dissolvido, pelos organismos decompositores. (Martinko,
2004)
 Parâmetros Biológicos
✓ Coliformes: são indicadores de presença de microrganismos patogénicos
na água; os coliformes fecais existem em grande quantidade nas fezes
humanas e, quando encontrados na água, significa que a mesma recebeu
esgotos domésticos, podendo conter microrganismos causadores de
doenças.
✓ Algas: as algas desempenham um importante papel no ambiente
aquático, sendo responsáveis pela produção de grande pane do oxigénio
dissolvido do meio; em grandes quantidades, como resultado do excesso de
nutrientes (eutrofização), trazem alguns inconvenientes: sabor e odor;
toxidez, turbidez e cor; formação de massas de matéria orgânica que, ao
serem decompostas, provocam a redução do oxigénio dissolvido; corrosão;
interferência nos processos de tratamento da água: aspecto estético
desagradável. ( Martinko, 2004)
 Padrões de qualidade da água

Os padrões de qualidade da água variam para cada tipo de uso. Assim, os padrões de
potabilidade (água destinada ao abastecimento humano) são diferentes dos de
balneabilidade (água para fins de recreação de contacto primário), os quais, por sua vez,
não são iguais aos estabelecidos para a água de irrigação ou destinada ao uso industrial.
Mesmo entre as indústrias, existem requisitos variáveis de qualidade, dependendo do tipo
de processamento e dos produtos das mesmas.
Uma forma de definir a qualidade das águas dos mananciais, é enquadrá-los em classes,
em função dos usos propostos para os mesmos, estabelecendo-se critérios ou condições a
serem atendidos. (Muray, 2004)
 Parâmetros microbiológicos
do Solo
Os principais microrganismos do solo são representados pelas
bactérias, fungos, arqueias, algas, protozoários e microfauna.
Compõem este sistema também os vírus, parasitas intracelulares
obrigatórios, que desempenham funções importantes no controle das
populações no solo. Os microrganismos representam uma fracção
muito pequena da massa do solo e ocupam um volume de menos de
1% de seu total. (Denise, 2018).
 Parâmetros microbiológicos do Ar
A análise do ar ou microbiológica tem por
finalidade aferir a qualidade do ar.
É fundamental manter a qualidade do ar do
ambiente. A saúde respiratória, em grande
medida, depende da qualidade do ar que se
respira.
Uma série de factores são levados em conta ao avaliar a qualidade do ar. Entre eles:
✓ Pureza do ar: é verificada a quantidade de aerodispersóides, que são partículas
muito pequenas presentes no ar, que podem ser nocivas ao sistema respiratório.
Trata-se de névoas, fumos ou poeiras, ou aerossóis (líquidos). Também é aferida a
concentração e feita a identificação dos biosdispersóides (fungos, bactérias, vírus e
outros microrganismos) no ar. A alta concentração dessas partículas e
microrganismos pode causar problemas como alergias respiratórias e irritações
oculares.
✓ Renovação do ar: é verificado, por meio de um equipamento específico, se a quantidade de
gás carbónicoestá em padrões aceitáveis. Apesar do gás não ter alta toxicidade, a alta
concentração de gás carbónico gera abafamento e falta de ar, além disso pode tornar o ar
menos capaz de diluir químicos mais pesados, como o dióxido de nitrogénio.
✓ Parâmetros físicos de temperatura, humidade e velocidade do ar: a leitura desses indicadores
é realizada por meio de equipamentos de alta tecnologia. Esses parâmetros têm a ver com o
conforto do ambiente. Caso eles estejam fora dos padrões indicados, não causam apenas
desconforto, mas também podem deixar o ambiente mais propício a fungos e bactérias
nocivos, além de poluentes químicos. (Denise, 2018).
 Conclusão
Não existe nenhum teste laboratorial perfeito. Existem muitas
técnicas diferentes para estabelecer a presença de um microrganismo
patogénico em uma amostra. Todos os métodos estão sujeitos a falta
de precisão por não detectarem um patógeno ou uma resposta imune
quando presentes ou por indicarem a sua presença quando na
verdade o patógeno ou a resposta imune estão ausentes. Alguns
testes são mais sensíveis ou mais específicos que outros, e as medidas
de seu desempenho determinam como e quando devem ser utilizados.