UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS

CAMPUS POOS DE CALDAS

FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA
Prof.: Gunther Brucha

Discentes:
Daniel Heitor Tardelli de Oliveira
Guilherme do Lago Lopes
Thais Paiva Lounine

RELATRIO 1 CONTAGE DE MICROORGANISMOS

Poos de Caldas
2014

1. INTRODUO
A identificao do tipo de organismo de um meio muito importante, mas tambm , em
alguns casos, de suma importncia sua quantificao. A quantificao de microrganismos
importante para a anlise da eficincia de agente antimicrobianos ou a eficincia de prticas
higinico-sanitrias, em determinadas condies clnicas como infeces do trato urinrio.
Tambm importante para a quantificao de microrganismos de gua e alimentos para avaliar
a qualidade microbiolgica dos mesmos.
Existem vrias formas de quantificar os microrganismos. De forma direta, contando-se
microscopicamente o nmero de clulas presentes num determinado material ou superfcie. De
forma indireta, efetuando anlises de turbidez, determinao do peso seco, concentrao de
substncias qumicas (protenas, pesquisa de determinada enzima ou produto final de uma via
metablica, DNA, RNA) ou atravs da contagem do nmero de microrganismos viveis
utilizando um meio de cultura apropriado.
Contagem microscpica direta, contagem eletrnica e anlise espectrofomtrica so
exemplos de mtodos que podem ser utilizados para a contagem de microrganismos. Alguns,
com aplicaes muito especficas, como a contagem de microrganismos no leite ou numa
cultura pura. Mas, em determinadas circunstncias, necessrio a determinao de clulas
viveis, como para a eficincia de prticas higinico-sanitrias. A determinao do total de
bactrias numa suspenso, usualmente pela tcnica de pour plate ou disseminao com ala de
Drigalsky em meios de culturas apropriados. Mtodo que consiste em sucessivas diluies das
amostras, e que cada diluio espalhada em uma placa de Petri. Tambm conhecido como
mtodo das diluies seriadas, serve tanto para o isolamento como para a contagem de
microrganismos.
Aps o plaqueamento e incubao, por tempo e temperatura adequados, as clulas ou
pequenos agrupamentos vo crescer isoladamente, dando origem s colnias que sero contadas
na diluio apropriada e, portanto, chamadas de unidades formadoras de colnia. evidente que
nos tubos muito diludos o nmero de clulas no ser suficiente para a contagem ao mesmo
tempo eu nos tubos muito concentrados o nmero de clulas ser muito alto e por isso a
contagem das clulas no ser possvel nessas placas.

2. OBJETIVOS
Determinao do nmero de clulas viveis, contagem total de microrganismos viveis ou
contagem padro em placas ou ainda contagem de viveis em placa.

3. MATERIAIS E MTODOS

Placa de Petri;
Cultura de E. coli;
Tubos de ensaio;
Meio de cultura (gar);

Bico de Bunsen;
Pipetas;
gua destilada;
lcool.

Primeiramente foram realizadas as manobras asspticas adequadas,

higienizando-se as mos e esterilizando-se a bancada, ambos com lcool iodado, a fim de
reduzir a carga microbiana do local de trabalho. E trabalhou-se, todo o tempo, nas
proximidades do Bico de Bunsen, na chamada zona estril.

Foram realizadas diluies com a soluo concentrada de cultura bacteriana na

qual estava presente a bactria E. coli. As diluies foram feitas da seguinte forma: com o
auxlio de uma pipeta graduada de 2mL foi adiciona 1mL da soluo concentrada de cultura
bacteriana ao tubo de ensaio onde a diluio foi de 10-1, tendo-se, posteriormente,
homogeneizado o tubo. Com outra pipeta graduada de 2mL, foi adicionado 1mL da soluo
primeiramente diluda (de concentrao 10-1) no tubo de diluio 10-2(posteriormente
homogeneizado), utilizando diferentes pipetas para cada diluio o procedimento foi
realizado at uma soluo diluda de concentrao 10 -4.

A partir de cada diluio utilizou-se 1mL como inculo, em duplicata, e

distribuiu-se nas placas previamente esterilizadas. Em seguida, pegou-se o meio fundido e
esfriado a 45C e o colocou nas placas de Petri contendo a suspenso diluda da amostra. O
material foi homogeneizado girando-se a placa atravs de movimento circulares. Aps a
solidificao do meio, as placas foram invertidas, tampadas e incubadas em estufa na
temperatura e atmosfera apropriadas.

4. RESULTADOS

Aps ficarem por um perodo de 48 horas na estufa, as amostras foram retiras e

as colnias contadas. Devido contaminao da amostra, no foi possvel realizar a
contagem das colnias.

5. CONCLUSO

O mtodo utilizado para a contagem de microrganismos importante para a

Engenharia Sanitria e Ambiental, j que permite quantificar bactrias em guas e efluentes.
O controle da populao de bactria de fundamental importncia, visto que densidades
elevadas de microrganismos na gua podem determinar a deteriorao de sua qualidade com
desenvolvimento de cor e sabor. A importncia de sua determinao no fato de ser um
importante instrumento auxiliar no controle bacteriolgico para avaliar as condies de
higiene e de proteo de poos, fontes, reservatrios, piscinas e sistemas de distribuio de
gua para consumo humano.

Os resultados esperados eram que nas placas adequadas para contagem,

deveriam ter entre 30 e 300 colnias. O presente experimento no obteve o resultado

esperado, devido contaminao da cultura contendo a bactria E.coli. No foi

possvel realizar a contagem das colnias.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

[1] http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAHq4AB/relatorio-tecnicascontagem-pour-plate-spread-plate

[2] http://www.ebah.com.br/content/ABAAAA2WIAI/contagemmicroorganismos-atraves-das-tecnicas-spread-plate-pour-plate