1.

INTRODUO
Alm de ser necessria a identificao do tipo de microrganismo em um meio
importante haver a quantificao do mesmo, pode-se citar: quantificao da populao
de microrganismos da gua e alimentos para avaliar a qualidade microbiolgica dos
mesmos, anlise da eficincia de agentes antimicrobianos. Para efetuar tais contagens
de micro-organismos existem vrias tcnicas.
Com isso, os microrganismos podem ser quantificados de forma direta ou indireta,
contando-se microscopicamente o nmero de clulas em um determinado material ou
superfcie, ou efetuando-se anlises da turbidez, determinao do peso seco,
concentrao de substncias qumicas (protenas, pesquisa de determinada enzima
ou produto final de uma via metablica, DNA, RNA) ou atravs da contagem do
nmero de microrganismos viveis utilizando um meio de cultura apropriado.
Esse ltimo mtodo leva em considerao um quesito importante para a tcnica de
contagem, que a contagem de apenas clulas vivas. Pois, em determinadas
circunstncias, preciso determinar a populao de clulas viveis. E, para efetuar a
contagem total de bactrias numa determinada suspenso da amostra faz-se diluies
decimais seriadas da amostra e inocula-se, usualmente, pela tcnica de PourPlate ou Spread-Plate com Ala de Drigalsky, em meios de cultura apropriados.
Aps o perodo de incubao em condies de temperatura e atmosfera adequadas
faz-se a contagem do nmero de colnias.
A diferena de um mtodo para o outro que o mtodo Pour-Plate coloca-se,
primeiramente, a alquota de 1 ml da amostra com os microrganismos em uma Placa
de Petri estril sem, o meio de cultura, pois esse ser colocado por cima dos
microrganismos na placa. E, na tcnica Spread-Plate o meio de cultura j se
encontra na placa e os microrganismos so colocados por cima do meio e so
espalhados com o auxlio da Ala de Drigalsky.
Porm, as regras so as mesmas para as duas tcnicas de quantificao direta.
Sendo elas:
Princpio Bsico: Cada colnia originada do crescimento e multiplicao de 1 clula
bacteriana.
As placas devem conter de 30 a 300 colnias e para isso fazem-se as diluies
seriadas, como o procedimento feito para essa prtica.
Uma aplicao importante da contagem de bactrias (heterotrficas)
amplamente utilizada como indicador da qualidade da gua potvel, sendo que os
microrganismos so detectados por propagao em meios no seletivos. O objetivo
desse tipo de trabalho comparar as metodologias de Pour Plate e a semeadura por
esgotamento para a contagem de bactrias heterotrficas em guas provenientes de
poos artesianos e demais fontes alternativas. Como exemplo: Foram analisadas 43
amostras de gua de poos artesianos da regio de Santa Maria e fontes alternativas,
coletadas durante o perodo de 11 de julho a 10 de novembro de 2005. O mtodo de
semeadura por esgotamento revelou maior sensibilidade (58,2%) em relao ao Pour

Plate (9,2%); houve compatibilidade do nmero de colnias em 32,6% das amostras

avaliadas por ambas as tcnicas. A partir dos dados obtidos foi possvel observar o
melhor desempenho da metodologia de semeadura por esgotamento.

Dessa forma pode-se observar que mtodos de contagem so de

grande importncia para diversas reas, principalmente para garantir a qualidade de
certos produtos que podem comprometer a sade dos seres vivos ao serem
ingeridos.

2. OBJETIVO:
- Aprender a realizar as tcnicas de contagem de colnias, spread plate e pour plate.
- Fazer a contagem de colnias expressando os resultados em UFC/ML

3. MATERIAIS NECESSRIOS
3.1 REAGENTES:
Meio de cultura BHI sabouraud, salina estril.

3.2 MATERIAIS:
Amostra de fub, Ala de Drigalsky, Pipetadoras manual (1000 microlitros) , ponteiras
estreis, dois tubos de ensaio, quatro placas de Petri, estante para tubos de ensaio,
recipiente para descarte, um erlenmeyer (250 ml).

3.3 EQUIPAMENTOS:
Balana, estufa, bico de Bunsen.

4. PROCEDIMENTO:
- Primeiramente foi passado lcool (70%) no fluxo laminar
- Ligou-se a luz UV
- Acendeu-se o bico de Bunsen.
- Logo aps pesou-se 10g de fub.
- Foram colocados em um Erlenmeyer, contendo 90 ml de soluo salina, os 10 g de
fub.
- A soluo foi homogeneizada com movimentos circulares.
- Em seguida colocou-se 1000 microlitros dessa soluo, com o auxlio de uma
pipetadora, em um dos tubos de ensaio contendo 9 ml de soluo salina.

- Posteriormente colocou-se 1000 microlitros, da soluo contida no tubo de ensaio, no

outro tubo de ensaio contendo 9 ml de soluo salina.
- Identificaram-se os tubos (com caneta) como 10- e 10- respectivamente.
- Colocou-se meio de cultura at a metade, em duas placas.
- Em uma delas colocou-se 100 microlitros da soluo
10-, com o auxlio de uma pipetadora.
- Espalhou-se uniformemente na superfcie do meio j solidificado, com o auxlio da
ala de Drigalsky.
- Na outra placa colocou-se 100 microlitros da soluo
10-, com o auxlio de uma pipetadora.
- Espalhou-se uniformemente na superfcie do meio j solidificado, com o auxlio da
ala de Drigalsky.
- Identificaram-se as placas (com caneta) como 10- e 10- respectivamente.
- Posteriormente colocou-se 100 microlitros da soluo 10- em uma placa, com o
auxlio de uma pipetedora, e foi adicionado meio de cultura at a metade da mesma.
- Para distribuir o meio de forma uniforme na placa foram feitos movimentos em oito,
sobre a superfcie da bancada.
- Em seguida colocou-se 100 microlitros da soluo 10-, com o auxlio de uma pipeta,
na outra placa e foi adicionado meio de cultura at a metade da mesma.
- Para distribuir o meio de forma uniforme na placa foram feitos movimentos em oito,
na superfcie da bancada.
- Esperou-se o meio de cultura solidificar para depois identificar as placas como 10- e
10- respectivamente.
- Logo aps colocou-se os meios de cultura em uma estufa e foi aguardada uma
semana.
- Aps a encubao, os dados obtidos foram anotados e observados com ateno,
para ento ser realizada a contagem.

5. RESULTADOS E DISCUES.
As diluies das amostras foram feitas para viabilizar a contagem de microrganismos
posteriormente. Quando no se tem noo do numero de unidades formadoras de
colnia em determinada amostra, fazem-se vrias diluies, porm quando j se tem
noo, faz-se inoculao em faixas de diluio determinadas. Essa diluio foi
transferida para as placas para que as tcnicas de pour plate e spread plate gerassem
uma contagem de 30 a 300 colnias.

Como esperado essas placas geraram colnias e a contagem gerou a seguinte tabela:

Spread
plate
Pour plate

10^(-2) ml

10^(-3)ml

0
Tabela 1. Tipo de crescimento da colnia por

diluio.

A partir da tabela 1 observa-se que a contagem no alcanou o intervalo de preciso

(30 a 300 colnias), sendo assim deve-se expressar o resultado da seguinte forma:
Spread Plate
Diluio 10^(-2) = incontvel
Diluio 10^(-3) = incontvel
Pour Plate

Diluio 10^(-2) = incontvel

Diluio 10^(-3) = 0

Contudo foi possvel observar o crescimento nas placas por Pour Plate de fungos
filamentosos de colorao rosa e amarelado, em aspecto pulverulento e/ou cotonoso,
de borda irregular com centro elevado. Em Spread Plate os fungos tambm eram
filamentosos, mas de colorao branca e rosa; com aspecto cotonoso e pulverulento,
com borda irregular e centro elevado.
Um dos motivos pelo qual no foi observado um nmero maior de colnias que os
fungos quando crescem em uma placa tem tendncia a ocupa-la por completo no
deixando espao para outras colnias crescerem ou mesmo surgirem.

6. CONCLUSO
Atravs do experimento realizado observou-se que uma das vantagens dessas
tcnicas que somente so contabilizadas clulas vivas e que o estudo e identificao
das colnias tornou-se fcil devido ao isolamento das mesmas. Porm a necessidade
de muita manipulao pode originar erro nas contagens devido a erros de diluio e/ou
plaqueamento.

7. Referncias Bibliogrficas
{1}- http://recife.ifpe.edu.br/recife/metodos_contagem.pdf
acesso em 14 de maio de 2014
{2}- Case, Christine L.; Tortora, Gerard J.; Funke, Berdell R. Microbiologia. 10 ed.
Artmed.
{3}- Michael T. Madigan; John M. Martinko; Paul V. Dunlap; David P. Clark.
Microbiologia de Brock. 12 ed. Artmed.

Centro Federal de Educao Tecnolgica de Minas Gerais

Departamento de Qumica Curso: Qumica Tecnolgica Professora: Mariana Vieira
Disciplina: Laboratrio de Instrumentao em Microbiologia

Contagem de colnias

Alunos: Dayane Apolnio do Carmo

Marcus Vinicius Ferreira
Tamires Freitas
Belo Horizonte, 02 de maio de 2014.