Ministério da Educação

Universidade Tecnológica Federal do Paraná

Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Bioquímica de Microrganismos

Prova da Catalase - PRÁTICA 4.2

Maisa Moraes Gonçalves Ferreira

Valdielly Cristine Santos da Silva

Ponta Grossa
2023/2
 1. INTRODUÇÃO

Prova da catalase: O teste de catalase é um teste bioquímico rápido, que consiste

em colocar uma amostra de bactéria ou levedura em contato com o peróxido de
hidrogênio, e pesquisar a formação de bolhas de oxigênio. É feito pingando uma
gota de peróxido de hidrogênio a 3% em uma lâmina, e com uma alça bacteriológica
retirar uma colônia do meio de cultura e encostar na lâmina com movimentos
circulares, observando a formação ou não de gás (bolhas).

A função da CATALASE é proteger os tecidos contra os efeitos tóxicos da Água

Oxigenada (H2O2) formada durante o metabolismo celular, uma vez que aceleram a
decomposição dessa substância em H2O e O2. Quando essa ENZIMA se encontra
na presença do Peróxido de Hidrogênio (H2O2), ela DEGRADA o mesmo, com
formação de H2O e O2, onde a liberação de Oxigênio poderá ser confirmada
através da formação de bolhas.

Princípio – A enzima catalase determina a decomposição do reagente empregado,

uma solução de peróxido de hidrogênio (H2O2) a 3 %, com a liberação de oxigênio
molecular (O2) que irá formar bolhas na solução.

Imagem 01 -Decomposição do peróxido de hidrogênio com formação visível de bolhas. Fonte: Teste da Catalase
e Teste do KOH - 2022.2.pdf (unirio.br)

A catalase acelera as reações químicas (reações que levariam dias para

acontecer, ocorrem em alguns minutos ou segundos). Um exemplo viável do dia a
dia é a água oxigenada é aplicada sobre um ferimento; vê-se o mesmo efeito de
"espumar". Muitas pessoas ainda acreditam que isso acontece porque o ferimento
tem “microrganismos” mas, essa não é a realidade. Se a água oxigenada é aplicada
sobre a pele sem ferimentos, nada acontece, e ela não está livre desses
microrganismos.

No caso do ferimento, a CATALASE é proveniente das células vermelhas do

sangue. Muitas outras células do corpo humano contêm essa enzima que serve de
proteção ao organismo. Isso porque a água oxigenada é, na verdade, um Peróxido
de Hidrogênio (H2O2), muito parecido com a água (H2O).

Imagem 02 - Estrutura 3D da enzima Catalase

O Peróxido de Hidrogênio é formado nas células, mas é bastante tóxico para o

organismo. Ele contribui para as reações que estão associadas ao envelhecimento
dos animais. Mas, quando a CATALASE atua, formam-se dois compostos bastante
inofensivos para nosso organismo: a água e o oxigênio.

Imagem 02 - Decomposição do Peróxido de Hidrogênio

Em resumo, a prova da catalase é uma técnica bioquímica essencial para

identificar a presença da enzima catalase em microrganismos. Nesse meio, a
catalase desempenha um papel crucial na proteção dos tecidos contra o peróxido
de hidrogênio tóxico e, em consequência, a formação de bolhas de oxigênio é um
indicativo visual dessa atividade. Além de sua aplicação laboratorial, essa prova
destaca a importância da catalase na biologia celular e na proteção do corpo contra
substâncias nocivas, como o peróxido de hidrogênio.
 2. OBJETIVOS

Os objetivos do teste bioquímico da catalase são os seguintes:

● Identificar a presença da enzima catalase: O teste é usado para determinar

se uma amostra de microrganismos contém a enzima catalase. A presença
ou ausência dessa enzima é um indicador importante na identificação
bacteriana e na caracterização de microrganismos.

● Avaliar a atividade da enzima catalase: O teste mede a atividade da catalase

na amostra, determinando o quão eficaz essa enzima é na decomposição do
peróxido de hidrogênio (H2O2) em água (H2O) e oxigênio (O2). A formação
de bolhas de oxigênio é um indicativo visual dessa atividade.

● Compreender a importância da catalase na proteção do organismo: O teste

também destaca a importância da catalase na biologia celular e na proteção
do corpo contra substâncias nocivas, como o peróxido de hidrogênio. A
enzima catalase desempenha um papel crucial na proteção dos tecidos
contra o peróxido de hidrogênio tóxico.

Em resumo, o teste da catalase é usado para identificar a presença da enzima,

avaliar sua atividade e destacar seu papel na proteção do organismo contra o
peróxido de hidrogênio tóxico. É uma ferramenta importante na microbiologia e na
compreensão dos processos bioquímicos celulares.
 3. MATERIAIS E MÉTODOS

● Materiais utilizados:

→ Tubo de rosca com volume aproximado de 5mL da solução de peróxido de

hidrogênio 3,0%

→ Alça de inoculação estéril

→ Pipeta de Pasteur

- Meios de cultura empregados no teste:

a. Preparo do inóculo: TSI, TSA ou NA;
b. Solução de H2O2 a 3,0%
c. Controle positivo: com o mesmo cultivo das demais cepas, preparou-se um
tubo com Staphylococcus aureus.

Composição do Peróxido de Hidrogênio a 3,0% Quantidade

Peróxido de Hidrogênio 30% 10,0 mL

Água destilada Completar para 90 mL

***Uso previsto: O peróxido de hidrogênio é um líquido incolor à temperatura

ambiente, com sabor amargo. É encontrado em baixas concentrações (3 – 9%) em
muitos produtos de limpeza e antissépticos, é utilizado também para o clareamento
de roupas e de cabelo. Empregado industrialmente, em concentrações mais
elevadas, como branqueador para tecidos e papel, componente de combustíveis de
foguete, na fabricação de espuma de borracha, na síntese orgânica e inorgânica, no
tratamento da água e de efluentes, entre outros usos.

● Procedimentos indispensáveis
→ Higienizar bem as mãos com água e sabão
→ Limpar as bancadas com álcool 70% antes e depois do experimento
→ Uso de guarda-pó limpo, abotoado e de mangas longas
→ Cabelos longos devem estar presos
→ Retirar possíveis adornos
 ● Preparação pré-experimento

→ Utilizar 10,0 mL de água oxigenada 30%.

→ Dissolver os 10,0 mL de água oxigenada 30% em água destilada.

→ Completar o volume para 100 mL com água destilada.

● Instruções de Segurança:

→ O peróxido de hidrogênio a 30% pode causar queimaduras dolorosas. Manusear

com luvas e óculos de proteção.

→ Em caso de respingos na pele, lavar com etanol 70% em abundância; não lavar
com água.

● Execução Experimental
A preparação e condução deste experimento envolvem vários passos essenciais:
Preparação do Inóculo:
→ Utilizar a linhagem a ser analisada em meio de cultura apropriado para provas
bioquímicas (ágar Kligler Ferro - KIA, ágar Tríplice Açúcar Ferro - TSI, ágar
Nutriente - NA, ágar Tripticase de Soja - TSA).
→ Realizar uma reativação 24 horas antes em 35-37°C (maioria das bactérias) ou
em condições específicas, conforme necessário.
→ Importante: Nunca utilizar cultivos em ágar sangue para a prova da catalase, pois
as células vermelhas do sangue contém catalase e podem resultar em um falso
positivo.

Controle Positivo para a Prova da Catalase:

→ Preparar um tubo com S. aureus como controle positivo para a prova da catalase.
Prova da Catalase - Método do Tubo:
→ Adicionar diretamente 1,0 mL de peróxido de hidrogênio a 3,0% às culturas
cultivadas (teste) em tubos de caldo ou ágar inclinado com crescimento vigoroso.
→ Fechar os tubos e observar o borbulhamento imediato como resultado positivo ou
a ausência de borbulhas como resultado negativo.
Controle Positivo Adicional:
→ Realizar o mesmo procedimento para um tubo contendo uma linhagem de S.
aureus como controle positivo.

Etapas Finais:
→ Realizar a desinfecção da bancada de trabalho com álcool 70% ao término da
aula.
→ Lavar as mãos ao final do trabalho.

● Objetivos alcançados até o momento:

Até esse momento, é possível identificar os seguintes objetivos previstos que foram
concluídos:

→ Identificar a presença da enzima catalase: o teste de catalase é uma técnica que

determina se uma amostra de microrganismos contém a enzima catalase. Isso é
realizado pelo teste de borbulhamento, no qual a presença da enzima é indicada
pela formação de bolhas de oxigênio quando o peróxido de hidrogênio é adicionado.

→ Avaliar a atividade da enzima catalase: teste mede a atividade da catalase na

amostra, determinando o quão eficaz essa enzima é na decomposição do peróxido
de hidrogênio em água e oxigênio. A formação de bolhas de oxigênio é um
indicativo visual dessa atividade. Esse objetivo também foi concluído.

→ Compreender a importância da catalase na proteção do organismo: a catalase é

importante na proteção dos tecidos contra o peróxido de hidrogênio tóxico e na
decomposição desse composto em água e oxigênio, que são inofensivos. O papel
da catalase na proteção do organismo é discutido. Portanto, esse objetivo também
foi concluído.

Em resumo, até o momento, os objetivos previstos relacionados à identificação da

presença da enzima catalase, avaliação de sua atividade e compreensão de sua
importância na proteção do organismo foram concluídos com base no texto
fornecido.
 4. RESULTADOS

5. DISCUSSÃO

6. REFERÊNCIAS

Teste de catalase. PROBAC DO BRASIL Produtos Bacteriológicos Ltda. São Paulo.

Disponível em: Microsoft Word - Teste de Catalase Rev 00 (probac.com.br). Acesso
em: 15 de out. 2023.

AULAS PRÁTICAS DE BACTERIOLOGIA HUMANA. UFG. Goiás. Disponível em:

Bacteriologia Humana (ufg.br). Acesso em: 16 out. 2023.

CÂMARA, Brunno. Biomedicina Padrão: PROVAS PARA A IDENTIFICAÇÃO DE

BACTÉRIAS - CATALASE E COAGULASE. 24 de abril de 2011. Disponível em:
Provas para identificação de bactérias - CATALASE E COAGULASE | Biomedicina
Padrão (biomedicinapadrao.com.br). Acesso em: 16 out. 2023.

MADIGAN, M.T. et al. Microbiologia de Brock. 12a Ed. Editora ArtMed, 2010.

FIDÉLIS, Marcos. TESTE DE CATALASE. 25 de novembro de 2017. Disponível em:

Teste de Catalase (linkedin.com). Acesso em: 16 out. 2023.

FIT-FICHA DE INFORMAÇÃO TOXICOLÓGICA. Julho de 2012. Disponível em:

Peroxido-hidrogenio.pdf (cetesb.sp.gov.br). Acesso em: 17 out. 2023.