AULA PRÁTICA MICROBIOLOGIA

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ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA DE

STAPHYLOCOCCUS
Os Staphylococcus são cocos gram-positivos geralmente encontrados na pele e
mucosas do homem e de outros animais. Em vista do grande número de infecções humanas
causadas por estafilococos e a crescente resistência a múltiplos agentes antimicrobianos, é
imprescindível que o microbiologista clínico esteja familiarizado com os métodos atuais de
caracterização desses microrganismos.
A identificação presuntiva começa com a inoculação primária na placa de ágar
sangue de carneiro que deve ser incubada por 18-24h. Após incubação, deve-se preparar um
Gram. Na presença de Cocos Gram Positivos realiza-se a Prova da Catalase.
1 . Prova da Catalase
A catalase é um a enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio (H 2O2) em água

e oxigênio. A prova da catalase é utilizada com frequência para diferenciar Estafilococos

(Catalase positivos) de Estreptococos (Catalase negativos).
Procedimento: Com uma alça bacteriológica ou com um palito de madeira, transfira
parte do centro de uma colônia para uma lâmina; Adicione uma gota de peróxido de hidro
gênio a 3% e observe a formação de bolhas.
Interpretação: Resultado positivo – Aparecimento rápido e produção sustentada de
bolhas de gás ou efervescência. Resultado negativo – Ausência de bolhas de gás.

2. Prova da Coagulase
A prova da coagulase é utilizada para identificar Staphylococcus aureus e diferenciá-
lo de outras espécies do gênero. A enzima coagulase está presente em duas formas: na form a
livre e na forma ligada à célula. A coagulase ligada à célula é detectada pelo método da
lâmina e a livre pelo método do tubo.
Procedimento: Prova em lâmina
1. Colocar uma gota de água destilada estéril ou solução fisiológica estéril sobre
uma lâmina de vidro;
 2. Emulsionar a colônia suspeita na gota de salina ou água (fazer uma emulsão
densa);
3. Colocar um a gota de plasma sobre a emulsão e homogeneizar;
4. Observar a formação de grumos brancos imediatamente (5 a 20 segundos).
Procedimento: Prova em tubo
1. Colocar 0,5 m l de plasma sem diluição no tubo de vidro;
2. Colocar um a alçada do crescimento bacteriano diretamente no plasma contido no
tubo;
3. Homogeneizar com a própria alça, não agitar;
4. Incubar em banho-maria a 37ºC por 4 horas;
5. Não agitar o tubo, apenas incliná-lo suavemente para verificar a formação de
coágulo. Se não houver formação de coágulo em 4 horas, incubar por 24 horas em banho-
maria a 35ºC.

3. Teste da DNase
Verificar se o microrganismo possui a enzima desoxiribonuclease, a qual degrada o
ácido nucléico (DNA).
Procedimento:Fazer um inóculo denso de forma circular em uma pequena parte do
meio; Incubar a 35±2ºC por 18 - 24 h. (A placa pode ser inoculada com várias cepas);
Decorrido o período de incubação, realizar a leitura: Formação de um halo
transparente ao redor do crescimento bacteriano.
Interpretação:
Formação de halo transparente identifica Staphylococcus aureus;
Ausência de formação de halo transparente identifica Staphylococcus coagulase
negativa.

4. Teste de fermentação do manitol

Verificar se o microrganismo tem a capacidade de fermentar o manitol contendo
7,5% de cloreto de sódio.
Procedimento:
Semear a colônia suspeita e Incubar a 35±2ºC por 18 - 24 h.
de halo amarelo ao redor das colônias
 Interpretação:
Formação de halo amarelo ao redor das colônias, identifica Staphylococcus aureus;
Meio permanece inalterado ao redor das colônias, identifica Staphylococcus
coagulase negativa.

Figura 1: Esquema para Isolamento e Identificação de Estafilococos aureus