04/10/2022 07:44 Estudando: Microbiologia - Bacteriologia Básico | Prime Cursos

Estudando: Microbiologia - Bacteriologia Básico

Bacilos Gram-Negativos Não Fermentadores

Isolamento

Amostras clínicas, normalmente, são semeadas primariamente nos meios McConkey e ágar Sangue. O
microbiologista pode suspeitar de que um bacilo Gram-negativo desconhecido que cresça em algum desses
(ou nos dois) meios seja membro do grupo não fermentadores, caso ele apresente ausência de evidências de
fermentação da glicose (o que pode ser confirmado pela semeadura em TSI). Nesses casos, o passo
seguinte, seria a realização de provas específicas para não fermentadores. Nesse grupo, podemos destacar
dois gêneros de grande importância clínica: Pseudomonas e Acinetobacter.

Pseudomonas sp. semeada em McConkey. Colônias lactose negativa. Atenção para o aspecto difuso das
colônias. Embora cheirar placas não seja procedimento diagnóstico, é sabido que colônias de Pseudomonas
apresentam odor característico, alguns o descrevem como “cheiro de uva”. O odor acaba dando uma pista a
mais quando se está lidando com esse tipo de bactéria.

PROVAS DE IDENTIFICAÇÃO

Prova da oxidase

Essa prova é simples e de fácil realização. Existem fitas comerciais que podem ser utilizadas para esse fim.
Basta escolher uma colônia a partir da placa de McConkey ou ágar sangue, retirá-la da placa com um palito
de madeira (preferencialmente), e esfregar a colônia na área de teste na tira (papel de filtro saturado com o
reagente), tal como foi feito na figura a seguir. A positividade do teste é dada pelo aparecimento de uma
coloração arroxeada, indicando atividade de citocromo oxidase:

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Fita teste para oxidase: observe que foram realizados dois testes na mesma tira com o intuito de demonstrar a
diferença entre uma bactéria oxidase negativa (E. coli) e positiva (Pseudomonas sp.).

Meio base para oxidação e fermentação – OF

Verifica a capacidade da bactéria em utilizar os carboidratos pela via oxidativa ou fermentativa. O meio OF
pode ser utilizado como base para verificar a metabolização de diversos açúcares: glicose, frutose, lactose,
maltose, manitol, sacarose, xilose. Basta que seja adicionado ao meio base o açúcar que se deseja testar.
Normalmente, utiliza-se o OF-GLICOSE. Nesse teste, são necessários dois tubos de cada meio de
carboidrato.

Utiliza-se um tubo fechado (contendo uma camada de óleo mineral) e um tubo aberto (sem óleo mineral), a
bactéria teste deve ser semeada em picada nos dois tubos. As bactérias oxidativas produzem ácidos apenas
no tubo aberto (exposto ao oxigênio atmosférico); as bactérias fermentadoras produzem ácidos em ambos os
tubos; e as bactérias não sacarolíticas permanecem inertes nesse meio. O indicador é o azul de Bromotimol; a
cor amarela indica fermentação:

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Meio OF-glicose. O primeiro tubo (esquerda) foi semeado com bactéria fermentadora (E. coli – tubo aberto
não mostrado). O tubo central e o tubo aberto foram semeados com Pseudomonas aeruginosa. Observe que
bactérias oxidativas não são capazes de fermentar a glicose no tubo fechado, preservando a cor original do
meio (verde).

Produção de pigmento

Os não fermentadores produzem diversos pigmentos, alguns dos quais são úteis para identificar uma espécie.
No caso da Pseudomonas sp., gênero de grande prevalência em amostras clínicas, é importante destacar a
produção de piocianina.

Placa de ágar Mueller-Hinton. Teste de sensibilidade aos antimicrobianos para Pseudomonas aeruginosa
produtora de piocianina (pigmento esverdeado).

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Motilidade

Para essa finalidade, pode-se utilizar o SIM (mencionado anteriormente). Entretanto, existe uma
peculiaridade, quando da realização desse teste para não fermentadores, pois essas bactérias tendem a
crescer apenas na superfície. Por esse motivo, ao se empregar um meio de ágar semissólido deve-se efetuar
uma semeadura em picada apenas nos 4 mm superiores do meio, devendo-se fazer uma leitura inicial dentro
de 4 a 6 horas.

Muitas cepas móveis de não fermentadores mostram apenas uma área nebulosa fraca e precoce próximo à
superfície do ágar, que tende a desaparecer com incubação prolongada, daí o porquê de se ter um cuidado
especial na leitura dessa prova para esse tipo de bactéria. As leituras devem ser repetidas dentro de 24 e 48
horas para detectar a motilidade de cepas de crescimento mais lento.

Descarboxilação

A exemplo da motilidade, a prova da descarboxilação também exige atenção especial, quando realizada para
não fermentadores. A conversão inicial do meio numa cor amarela, à medida que os ácidos se acumulam a
partir da pequena quantidade de glicose no meio, não é observada para essas bactérias; os parâmetros finais
das reações são lidos comparando-se a intensa reação de cor púrpura alcalina com a tonalidade mais clara
azul-esverdeada do tubo controle.

Veja tambémr:

Microbiologia Médica: Introdução aos Bacilos Gram Negati…

Negati…

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