Isolamento e identificação de bactérias Gram positivas

O material clínico deve ser obtido antes da administração de antimicrobianos para que a
bactéria tenha um bom crescimento no meio de cultura.

Isolamento
As bactérias podem ser cultivadas, in vitro, em meios de cultura que lhes forneçam todas as
condições nutricionais e ambientais necessárias ao seu crescimento. As culturas são feitas pela
semeadura dos materiais clínicos em meios sólidos distribuídos em placa de Petri, em tubos de
ensaio ou em outros tipos de frascos. Depois de semeados os meios devem ser incubados em
temperatura e atmosfera adequadas. O período de incubação varia de acordo com a velocidade
de crescimento da bactéria.

Identificação
Streptococcus:
1. Atividade hemolítica:
 Alfa-hemolíticas: causam lise incompleta das hemácias, liberando um pigmento
verde que fica ao redor da colônia.
 Beta-hemolíticas: lisam completamente as hemácias, liberando hemoglobina e
formando uma zona clara ao redor da colônia.
 Gama-hemolíticas: ausência de atividade hemolítica

2. Morfologia celular:
São Gram positivas, esféricas, de tamanho variável, podendo apresentar-se
isoladamente ou em grupos de cadeias curtas ou longas.

3. Diferenciação bioquímica:

São utilizados testes com antimicrobianos para distinguir bactérias alfa, beta e
gama-hemolíticas.

Diferenciação das α-hemolíticas:

Utilizar o Teste de sensibilidade à Optoquina para diferenciar o Streptococcus pneumoniae

(sensível a optoquina) de Streptococcus viridescentes (resistente a optoquina). Além do Teste de
Solubilidade em Bile, no qual as bactérias solúveis em Bile são da espécie Streptococcus
pneumoniae, as bactérias insolúveis em Bile são de Streptococcus viridescentes.

Diferenciação das β-hemolíticas:

Teste da bacitracina para diferenciar S. pyogenes de outras cepas do grupo A e de outros

grupos de estreptococos β-hemolíticos.
Staphylococcus
Morfologia: são pequenos cocos gram positivos que podem se apresentar isolados, aos
pares, em cadeias ou em cachos.

1. ATIVIDADE ENZIMÁTICA:

A Staphylococcus aureus produz uma enzima chamada coagulase, responsável pela

coagulação sanguínea quando em contato com o sangue. Assim, nesse teste, adiciona- se 1ml
da cultura em caldo a 0,5ml de plasma de coelho, aquece-se e observa-se se há formação de
coágulo.

2. SENSIBILIDADE A NOVOBIOCINA:

Semeia-se uma solução em ágar, adiciona-se uma placa de novobiocina, faz-se a incubação
e verifica-se a formação de um halo de inibição. Esse teste permite diferenciar o S.
saprophytecus (resistente a droga) do S. epidermidis (sensível ao fármaco).

3. FERMENTAÇÃO DE MANITOL:

O objetivo do teste é identificar se o microrganismo é capaz de fermentar o material

contendo 7,5% de cloreto de sódio. Faz-se pequenos círculos no ágar com a colônia suspeita,
incuba-se a amostra e observa-se a formação de um halo amarelo ao redor das colônias. Se
houver o halo, identifica-se a Staphylococcus aureus, se ele não se formar, identifica-se
Staphylococcus coagulase negativa.

TESTE DA CATALASE:

É utilizado para diferenciar estreptococos (catalase negativo – ausência de bolhas) de

estafilococos (catalase positivo – presença de bolhas)