MEIOS DE CULTIVO E IDENTIFICAÇÃO

BACTERIANA
Meios de cultivo (cultura) consistem da associação qualitativa e quantitativa de
substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento (cultivo)
de microrganismos fora do seu meio natural para que ocorra o crescimento
bacteriano.
1 – Pesagem da quantidade de pó adequada;

2 – Hidratação e aquecimento para dissolução do pó;

3 – Esterilização em Autoclave ou Câmara de Fluxo

Laminar;

4 – Distribuição em tubos de ensaio ou placa de Petri;

5 – Solidificação (caso o meio seja sólido).

Os meios devem ser mantidos em locais livres de

contaminantes até a sua utilização.
 1 colônia
=
1 UFC
(Unidade Formadora de Colônia –
1 bactéria)

Cada bactéria “semeada” (introduzida)

no meio de cultivo é responsável pela
formação de uma colônia.
Sólidos – contém 1% a 2% de ágar.

- Caracterização de colônias;

- Contagem de colônias;

- Testes Bioquímicos;

- Identificação de contaminantes.
Transferência de bactérias presentes em
amostras para os meios de cultivo sólidos
empregando técnicas de esgotamento –
utilização de alças bacteriológicas
calibradas ou swabs estéreis.
Sólidos – contém 1% a 2% de ágar.
Semi-Sólidos – contém 0,0075% a 0,5% de ágar com consistência
intermediária de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tensões
variadas de oxigênio e para verificação da motilidade.
 - Empregados para Teste de Motilidade
Bacteriana e Testes Bioquímicos.

A Motilidade Bacteriana se refere à presença

de flagelos em bactérias (estruturas de
locomoção), uma característica comum e
diferencial em Enterobactérias.

Ausência de
Motilidade
Sólidos – contém 1% a 2% de ágar.
Semi-Sólidos – contém 0,0075% a 0,5% de ágar com consistência
intermediária de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tensões
variadas de oxigênio e para verificação da motilidade.

Líquidos (Caldos) – não contém ágar, utilizado para

enriquecimento de culturas e provas bioquímicas.
- Enriquecimento de Amostras;

- Crescimento de Bactérias Fastidiosas;

- Transporte de Amostras.
Meios Simples - composição química definida.

Crescimento de diversas bactérias, não

fastidiosas e, também, algumas
leveduras de interesse clínico.

Ex: Ágar Nutriente

Embalagem: E um meio utilizado para análise de água e
crescimento de microrganismos pouco fastidiosos.

Composição g/l

Extrato de Bife 1.0

Extrato de Levedura 2.0

Peptona 5.0

Cloreto de Sódio 5.0

Agar 15.0

pH Final= 6.8 + 0.2 a 25°C

Meios Complexos - composição
química indefinida, pois são acrescidos com
outros produtos além dos fornecidos pelo
fabricante. Ex: carne, sangue, leite, leveduras,
tecidos, dentre outros.

Crescimento de bactérias fastidiosas

que exigem nutrientes além dos
oferecidos pelos fabricantes dos meios
de cultivo.

Ex: Ágar Sangue – bactérias hemolíticas

Ágar Sangue = meio de
cultivo preparado com
hemácias não
hemolisadas.

Ágar Chocolate = meio

de cultivo preparado com
hemácias hemolisadas.
Meios de Enriquecimento - nutrientes adequados ao
crescimento de microrganismos presentes em baixos números ou de crescimento
lento. Exemplo: Ágar Chocolate.

- Meio de Enriquecimento – bactérias fastidiosas;

- Empregado em análise de LCR em suspeita de

meningites.

- Não Seletivo;

- Rico em Hematina, Hemina, Ferro;

- Presença de crescimento – suspeita de bactérias

patogênicas.
Ágar Chocolate - Enriquecimento
Meios Diferenciais - contém substâncias que permitem estabelecer
diferenças entre microrganismos muito parecidos. Ex: Ágar Sangue.
O Ágar Sangue é considerado diferencial pois permite avaliar a atividade hemolítica de
diferentes bactérias, a partir do aparecimento de um halo ao redor das colônias produzidas.

- Base – Ágar Columbia;

- Sangue de Carneiro Desfibrinado;

- Percepção de Hemólise.
 Ágar Sangue
Hemólise total de hemácias
1 – β–hemolíticas. / presença de halos grandes
ao redor das colônias.

Hemólise parcial de

2 – α-hemolíticas.
hemácias / presença de
halos discretos ao redor das
colônias.

3 – γ-hemolíticas. Ausência de halos de

hemólise.
Meios Seletivos - contém substâncias que inibem o desenvolvimento
de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros.
Exemplo: Ágar MacConckey / Ágar EMB

Seletivos para bactérias Gram

negativas, por conter sais biliares e
cristal violeta em sua composição,
além de lactose.

Ágar MacConkey – Seletivo e Diferencial

Meios Seletivos e Diferenciais
MacConkey
- Seletivo para Bactérias Gram negativas por conter
Cristal Violeta e Sais Biliares em sua composição,
além de Lactose.

- Colônias despigmentadas – ausência de

fermentação de lactose.

- Colônias rosadas – fermentação de lactose.

- Colônias rosa-choque – Escherichia coli.

Meios Seletivos e Diferenciais
EMB (Eosina Azul de Metileno)
- Seletivo para Bactérias Gram negativas por conter
Eosina e Azul de Metileno em sua composição,
além de Lactose.

- Colônias despigmentadas – ausência de

fermentação de lactose.

- Colônias preto-azuladas – fermentação de

lactose.

- Colônias verde-metálicas – Escherichia coli.

Meios Seletivos e Diferenciais – EMB
E. coli - EMB = verde metálica E. coli - MacConkey = rosa choque
 Tensão de
Oxigênio

(A)- Aeróbios
(B)- Anaeróbios Estritos;
(C)- Aeróbios / Anaeróbios Facultativos;
(D) - Microaerófilos;
(E)- Anaeróbios Aerotolerantes.
Temperatura

Psicrófilas – Bactérias que se

desenvolvem em baixas
temperaturas (4oC – 10oC);

Mesófilas – Bactérias que se

desenvolvem desde uma
temperatura ambiental até 37oC
(25oC – 37oC);

Termófilas – Bactérias que se

desenvolvem em altas temperaturas
(600C – 80oC).
1. Lag – fase de adaptação
ao meio de cultivo ou
novo ambiente;
2. Log – fase de
crescimento exponencial
com formação de
colônias;
3. Estacionária – fase em
que a quantidade de
bactérias que surgem é
proporcional às que
morrem.
4. Decílio – fase de morte
bacteriana.