Setor de Microbiologia – Estágio curricular HGV

Kamylla Ramos
▪ A parede celular das bactérias Gram-positivas possuem muitas camadas de
peptideoglicano e ácidos tecóicos (álcool + fosfato).
▪ E as bactérias Gram-negativas possuem 1 ou algumas camadas de peptideoglicana
e uma membrana externa. Sua parede é composta por lipopolissacarídeos e
fosfolipídeos.
▪ Todos os fungos são Gram-positivos, assim a utilização da coloração não visa a
diferenciação dos microrganismos, mas possibilita discriminar elementos fúngicos
de artefatos existentes em urina, secreções e fezes.

▪ GRAM + cocos coram-se em roxo Porém há Corynebacterium sp

▪ GRAM - bacilos coram-se em rosa exceções Acinetobacter sp

MICROBIOLOGIA - COLORAÇÃO E MEIOS DE CULTURA

1. Obtenção de um esfregaço (uma colônia com alça de 0,01ml ou 1 µL )
2. Secar e fixar o esfregaço (bico de Bunsen)
3. Cristal violeta (1 minuto)
4. Lugol (solução iodo-iodetada – 1 minuto)
5. Álcool etílico a 95% (15 segundos)
6. Safranina ou fucsina (30 segundos a 1 minuto)
7. Lavar em água corrente, secar e observar no MO

▪ Quando as estruturas celulares são cobertas pelo cristal violeta, todos se coram em
roxo. A partir da adição do lugol é formado o complexo iodopararosalina que fixa. O
álcool dissolve a porção lipídica, desidrata e contrai os poros desfazendo a coloração
primária. A safranina ou a fucsina cora as estruturas descoradas.

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▪ Essa técnica é para pesquisar bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR)
▪ Os lipídeos e a quantidade de carboidratos da parede celular são diferentes das outras
bactérias
▪ Protocolo:
1. Fixar o esfregaço no calor
2. Fucsina fenicada à quente (5 minutos)
3. Descoloração com álcool etílico e ácido clorídrico (1 minuto)
4. Contra-coloração com azul de metileno ou verde malaquita
(1 minuto)

▪ Se for BAAR vai continuar corado pela coloração primária, pois não sofrem ação da
solução descolorante álcool-ácido. Já os demais micro-organismos e artefatos coram-
se, primariamente com fucsina, e, após adição da solução de álcool-ácido, descoram-se,
absorvendo em seguida o pigmento do contacorante.

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▪ Ágar EMB (eosina e azul de metileno)
➢ Função: utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos
(enterobactérias e outros bastonetes gram-negativos)
➢ Contém os corantes de eosina e azul de metileno que inibem as bactérias gram-positivas
e são indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose
por microrganismos.

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▪ Ágar MacConkey
➢ Função: isolar bacilos Gram negativos
(enterobactérias e não fermentadores) e
verificar a fermentação ou não da lactose.
➢ O cristal violeta inibe o crescimento de
microrganismos Gram positivos,
especialmente enterococos e
estafilococos. O indicador de ph é o
vermelho neutro.

Colônias rosas = fermentadoras de lactose

Colônias incolores = não fermentadoras de lactose

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▪ Ágar Sangue
➢ Funções: isolamento de microrganismos não fastidiosos e verificação de hemólise dos
Streptococcus spp e Staphylococcus spp
➢ O meio de Ágar sangue oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos
microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos
de hemólise nítidos.

Beta-hemólise Alfa-hemólise Gama-hemólise

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▪ Ágar Chocolate
➢ Função: crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp.,
Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.
➢ É amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam
neste meio quase todos os tipos de microrganismos.

Colônias de tamanho pequeno a médio, com

pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp,
Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp.
Colônias pequenas e delicadas, com pigmento
creme claro: sugestivo de Haemophilus spp.
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▪ Ágar CROMONEW
➢ Meio cromogênico para identificação presuntiva de microrganismos

Presume-se que seja Klebsiella pneumoniae Presume-se que seja Escherichia coli
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▪ Ágar Mueller Hinton
➢ Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos
pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores,
Staphylococcus, Enterococcus sp.

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▪ Ágar Lowenstein Jensen
➢ Função: Isolamento primário das micobactérias.
➢ A base do meio é constituída por ovos integrais,
o que permite amplo crescimento das
micobactérias e o crescimento é satisfatório para
o teste de niacina (que é positivo para
Mycobacterium tuberculosis)

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▪ Meio Stuart
➢ Função: Transporte de diversos materiais .
Preserva e mantém a viabilidade dos
microrganismos no período entre a coleta da
amostra e o processamento no laboratório.
➢ Conservação de microorganismos
patogênicos como: Haemophilus spp.,
Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp.
entre outros.

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▪ Meio BHI – brain heart infusion
➢ Função: É um meio de enriquecimento. Para o cultivo de
estreptococcos, pneumococos, meningococos,
enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.
➢ Além disso, também é utilizado na preparação do inóculo
para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos.
➢ Derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e
dextrose

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▪ Outros meios mais direcionados:
➢ Ágar Salmonella-Shigella
➢ Ágar Sabourad
➢ Ágar Cetrimida
➢ Ágar Manitol Salgado
➢ Ágar Bile Esculina
➢ Ágar Thayer-Martin Chocolate

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