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Departamento de Cincias Farmacuticas/UFPE

Staphylococcus
Lvia Bandeira
Doutoranda em Inovao Teraputica livbandeira@bol.com.br

Microbiota
S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus

S. aureus

S. epidermidis

Staphylococcus aureus
O nome aureus significa dourado em latim, qualidade atribuda ao pigmento amarelado caracterstico produzido pela bactria.

Staphylococcus aureus

Estrutura da parede celular e fatores de virulncia de S. aureus

Toxinas

Mecanismos de Patogenicidade
Superfcie celular Cpsula: efeito anti-fagocitrio

Adesinas de Superfcie: adeso ao tecido conjuntivo.


Membrana Citoplasmtica: barreira osmtica e sntese protica.

Mecanismos de Patogenicidade
Parede Celular:
- Peptidoglicano:

Rigidez Ativam complemento Citocinas


Atividade Endotxica Atrai PMN.

cidos teicicos

Estes cocos so piognicos- pus

Produo de IL-1 (pirognica: febre).

Mecanismos de Patogenicidade
- Protena A 90% das cepas de S. aureus Identificao Ligao a IgG
Efeito anti-fagocitrio. Liberao de histamina. Reaes de hipersensibilidade. Leso plaquetria.

IgG

Mecanismos de Patogenicidade
Gram+ : produtores de substncias extracelulares (enzimas e toxinas que liberadas para fora da clula).

Exotoxinas:

- Leucocidinas: lise dos grnulos citoplasmticos dos neutrfilos e macrfagos com liberao do contedo enzimtico.

Mecanismos de Patogenicidade
- Hemolisinas Lisam hemcias, lesam os hepatcitos, conjuntivo, entre outros. tecido

Mecanismos de Patogenicidade
- Hemolisinas S. aureus -hemoltico
OBS: algumas amostras podem no produzir hemlise.

S. epidermidis No-hemoltico

-Toxina esfoliativa (S. aureus): degrada as molculas de


adeso da pele (ao descamativa).

Sndrome da pele escaldada

Mecanismos de Patogenicidade
- Enterotoxinas :
Intoxicao alimentar aguda.

- Resistentes ao cido gstrico e enzimas (tripsina) - Termoestveis a 100 0 C

- TSST-1 (toxic shock syndrome toxin)


Sndrome do choque txico.
Enterotoxinas, toxina esfoliativa e TSST so superantignicas, capazes de desencadear uma reposta imunolgica (estimulam linfcitos T-> citocinas -> choque). Provocam Leso Celular e Tecidual .

Mecanismos de Patogenicidade
Enzimas:
Catalase
Degrada o perxido de hidrognio.

Coagulase (S. aureus) coagulao, dificulta a ao dos fagcitos.

Hialurinidase
Fibrinolisina Lipases: DNAase: Beta-lactamases

Degrada o cido hialurnico (componente tecido conjuntivo; invaso). Degradao da fibrina e invaso. Invaso Degrada o DNA Degradam anti-microbianos betalactmicos (penicilina).

Evaso

Fatores de leso

Fatores de leso

Regulao de Fatores de Virulncia


Os fatores de virulncia produzidos por S. aureus no so expressados a toda hora, so dependentes da fase de crescimento.

bactrias

Colonizar Protena A Adesinas Coagulase

Fase estacionria
Hemolisinas Toxinas Danos aos tecidos

Tempo (h)
Fase exponencial

Staphylococcus aureus
Infeces
Pele e tec. subcutneo

Superficiais Invasivas Txicas


Profundas- bacteremia

abscessos (inflamao), infeco de feridas Pneumonia, artrite, meningite, endocardite, septicemia (choque) Quadros txicos

Infeces supurativas
Impetigo (faces e membros)

Furnculo e Carbnculo

Amostra: pus Cocos Gram + Diagnstico Clnico: furnculo

Colorao de Gram

Foliculite
Folculo piloso

Terol

Staphylococcus coagulase negativa


31 espcies conhecidas.
Staphylococcus epidermidis - infeces de cateteres e prteses; mais freqente em hemoculturas.

Staphylococcus saprophyticus - infeco urinria.

Mecanismos de Patogenicidade
toxinas e enzimas S. epidermidis: Foi o primeiro coagulase negativo a ser considerado patognico. Principal fator de virulncia: formao de biofilme.

Staphylococcus epidermidis
Microbiota da pele e das mucosas. Prteses cardacas, articulares e vasculares. Endocardite. Septicemia.

Staphylococcus saprophyticus
Trato urinrio Infeco aguda

Capacidade de aderir s clulas do epitlio urinrio. Polissacardeo cido teicico.

Diagnstico

Bacterioscopia Colorao de Gram

Isolamento

Identificao

Catalase
PRINCPIO A catalase uma enzima que decompe o perxido de hidrognio em gua e oxignio. UTILIDADE Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, entre outros. PRODUTO Perxido de Hidrognio (H2O2) 3%.

Catalase
INTERPRETAO Positivo: produo de efervescncia indica a converso do H2O2 em gua e oxignio gasoso. Evitar o uso de meios contendo sangue, pois os eritrcitos podem produzir reao fraca de catalase.

Coagulase
PRINCPIO Verificar a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formarem cogulo. A coagulase uma protena com atividade similar protombrina (fibrinognio -> fibrina). UTILIDADE Separar as espcies de Staphylococcus: S. aureus -> coagulase positiva Demais espcies-> coagulase negativa

Coagulase
PRODUTO Plasma de coelho com EDTA liofilizado. A coagulase conjugada (prova em lmina) (fator de aglutinao) encontra-se unida parede celular bacteriana.
Bactria + Plasma= Cogulo

Positivo

Negativo

Coagulase
A coagulase livre secretada extracelularmente e reage com uma substncia presente no plasma denominado Fator de Reao com a Coagulase CRF (resulta na formao de cogulos). Plasma + microrganismo produtor de coagulase forma-se um cogulo visvel.

Coagulase
Colnias em caldo BHI e colocar em estufa 37C. Turbidez at 0,5 da escala de MacFarland. Tubo de ensaio: 0,5 ml de plasma e 0,5 ml do cultivo em BHI. Incubar por 4 h.
Se no houver presena de cogulo, incubar o tubo em temperatura ambiente e repetir a leitura com 18 e 24 h.

Teste da DNAse
Degradao do DNA, contido no meio de cultura, por bactrias que possuem a enzima extracelular desoxirribonuclease (DNAse). Diferenciar S. aureus de estafilococos coagulase negativo.

Inoculao de colnias no meio gar teste DNAse; Incubar a 35C por 24 h.

Dnase Test Agar


-> Acrescentar HCl (1N) para revelar a atividade enzimtica (DNAse). Uma zona clara em volta da colnia indica reao positiva. Caso no tenha a enzima o HCl reage com o DNA intacto, formando um precipitado.

Dnase Test Agar com Azul de Toluidina

Quando o DNA degradado, o resultado positivo visualizado pela cor rosa ao redor da colnia produtora de DNAse. Melhor leitura; Repique da amostra positiva para o antibiograma (colnias esto bem isoladas).

Dnase Test Agar com Verde de Metila

No meio originalmente verde, aps o rompimento do DNA, h a formao de um halo incolor circundando a colnia.

Teste do crescimento em gar Manitol


O Staphylococcus aureus tem a capacidade de fermentar o manitol em meio contendo 7,5 % de cloreto de sdio. gar manitol salgado. O indicador de pH o vermelho de fenol, que indica uma reao positiva quando o meio ao redor das colnias se torna amarelo, e negativa quando permanece avermelhado.

Teste do crescimento em gar Manitol

MICRORGANISMOS

COLNIAS

Staphylococcus aureus

Amarela

MANITOL + _

Staphylococcus epidermidis

Brancas

Teste do crescimento em gar Manitol

S. aureus

S. epidermidis

Teste Rpido
Teste rpido de aglutinao em ltex para diferenciar S. aureus de outros Staphylococcus. S. aureus com resistncia a meticilina (MRSA) ou sensibilidade (MSSA). O reagente de teste formado por partculas revestidas com IgG e fibrinognio.

Teste da resistncia a Novobiocina


Placa de Muller Hinton. disco de novobiocina (5 g). Resistentes: halos 6 a 12 mm. Sensveis: halos de 16 mm ou mais.

Meio CLED
Finalidade: meio no seletivo e diferencial, utilizado na urocultura. Resultados : Fermentadores de lactose: colnias amarelas e meio amarelo. No fermentadores de lactose: colnias azuis e meio azulado. Staphylococcus
Colnias pequenas, opacas e de cor amarela.

Identificao de cocos
Catalase
Staphylococcus

Streptococcus

Coagulase
S. aureus
Nov- S Manitol + DNase +

S. epidermidis (Nov- S) S. saprophyticus (Nov- R)


Manitol DNase -

Tratamento
S. aureus
Resistncia penicilina pelas -lactamases. Meticilina como alternativa teraputica: no sofre ao da enzima. S. aureus resistentes meticilina (MRSA). ndices de mortalidade mais altos em pacientes que desenvolvem bacteremia por MRSA. Tratamento: glicopeptdeos (vancomicina). S. aureus resistentes vancomicina (VISA). GISA Utilizar um antibitico com outro stio de ao.