MEIOS DE CULTURA

QUAL É A SUA COMIDA PREFERIDA?

MEIO DE CULTURA
 MEIO DE CULTURA

DEFINIÇÃO: São preparados especiais com

finalidade de cultura e isolamento de
microrganismos.

- Uma grande variedade de processos e

de preparações de nutrientes é utilizada para
induzir o crescimento e as reproduções de
microrganismos.
 MEIO DE CULTURA

• Não existe um meio de cultura universal para

o crescimento de todos os microrganismos.
Ex: não existe meio de cultura para
microrganismos como Treponema pallidum e
Mycobacterium leprae.

OBS: Estes microrganismos só podem ser

cultivados em animais de laboratório.
 MEIO DE CULTURA
NATURAIS:

Lagos Oceanos Solo

ARTIFICIAIS OU SINTÉTICOS
• São misturas preparadas
laboratório
nutritivas para o no
microrganismos. crescimento
de
 MEIO DE CULTURA
INÓCULO
Microorganismos que são introduzidos em um meio
de cultura para dar início ao crescimento
 MEIO DE CULTURA
APRESENTAÇÃO
 MEIO DE CULTURA
PREPARAÇÃO
• Técnica de preparação vem especificada
no rótulo dos frascos.
• Pesar e hidratar o meio conforme
as instruções do fabricante.
 MEIO DE CULTURA
PREPARAÇÃO
• Autoclavar (calor úmido) 121ºC por 15 a
20 minutos.

OBS: FILTRAGEM
- Produtos termo sensíveis
- Membranas de acetato de celulose (0,22 μm).
 RECIPIENTES
PARA OS MEIOS DE CULTURA
Placas de petri, tubos de ensaio, garrafas, frascos, etc...
 Exemplo de como preparar um meio de
cultura...
Suspender Aquecer a Distribuir nos Esterilizar em
23,5g de pó mistura até recipientes autoclave a
em 1L de água ficar finais 121C
destilada completamente por 15 minutos
dissolvida

E se quisermos preparar uma quantidade menor de meio de cultura?

 CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA

• Água: Principal solvente dos nutrientes.

• Fontes de Carbono: pode ser do CO2 ou de
nutrientes orgânicos (carboidratos, lipídeos e
proteínas).
• Fonte de energia: Carboidratos como amido,
glicogênio, monossacarídeos
 CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA

• Fonte de Nitrogênio “base amino-proteína”:

Aminoácidos, peptídeos, proteínas complexas e
peptona.

• Fontes de oxigênio, hidrogênio, fósforo

(fosfatos) e enxofre (sulfatos)

• Vitaminas: Complexo B (biotina e ácido

pantotênico).
 CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA

• Sais tamponantes: Fósforo (fosfatos),

enxofre (sulfato) e citrato.

• Sais minerais: Cálcio, Ferro, Magnésio

• Fatores de crescimento: sangue, soro e extrato

de levedura.
 CONSTITUINTES
DO
MEIO DE CULTURA

• Agentes seletivos: Químicos, Corantes, e

Antimicrobianos.

• Indicadores de pH: fenol vermelho.

• Agentes de gelificação para meios sólidos: Ágar.

 CLASSIFICAÇÃO
DOS
MEIOS DE CULTURA
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA

SÓLIDOS
-Usa ágar, um polímero de galactose
como agente solidificante na concentração de
1,35 a 2,0%.
-Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e sólido
à 37ºC.
-São feitos em frascos, placas de petri e
tubos de ensaio.
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SEMI-SÓLIDOS
-Usa ágar, como agente solidificante na
concentração de 0,2 à 0,75%.
-Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e
Semi-sólido à 37ºC.
- São feitos em tubos de ensaio
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
-São sempre líquidos mesmo até a 37ºC e
em temperaturas inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio
 SÓLIDOS

SEMI-SÓLIDOS
E
LÍQUIDOS
 CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SÓLIDO: o crescimento de bactérias é

visualizado pela formação de colônias

MEIO SEMI-SÓLIDO: o crescimento de

bactérias é visualizado pela turvação. Meio muito
utilizado para verificar a motilidade (movimento) da
bactéria.
MEIO LÍQUIDO: o crescimento de bactérias é
visualizado pela turvação do meio.
 CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
COLÔNIAS: são de células
milhares bacterianas derivadas de única
célula
uma semeada na superfície do ágar.
bacteriana
TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS
COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce de 12 à 48 horas.
- Outros exigem semanas e até meses.
CRESCIMENTO MICROBIANO MEIO SÓLIDO:
COLÔNIAS
 CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO SEMI-SÓLIDO E LÍQUIDO: TURVAÇÃO

CRESCIMENTO MICROBIANO MEIO
SÓLIDO

Ágar Sangue Ágar chocolate

 CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SEMI-SÓLIDO
Exemplo: Ágar SIM (MotilidadeIndol
Sulfeto)

çã o de
t ifi ca rias
é
Iden robact
e
Ent

Meio de H2S + H2S + H2S +

cultura Indol + Indol - Indol -
sem Motilidade + Motilidade + Motilidade -
inoculação
 CRESCIMENTO MICROBIANO

MEIO LÍQUIDO:
Exemplos: BHI (Infusão de cérebro e
coração), Tetrationato, Selenito, Uréia, etc...
 CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO X MEIO LÍQUIDO
-Meio líquido é impossível afirmar a
existência de mais de uma espécie de bactérias ou
até mesmo quantificar.

-Meio sólido pode-se afirmar a presença de

várias espécies bacterianas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2. TIPOS OU FUNÇÃO

Existem diferentes composições de meios de

cultura

Sucesso no cultivo
dos
microorganismos

Compreender suas exigências nutricionais

CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2. TIPOS OU FUNÇÃO
MEIOS QUIMICAMENTE DEFINIDOS
- São meios de composição química conhecida. São
utilizados para estudo de necessidades nutricionais de
determinadas bactérias. Ex: Meio para micobactérias.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS COMPLEXOS

- São meios quimicamente indefinidos, mas tem como

função simular o ambiente natural da bactéria. Ex: Ágar sangue,
Ágar chocolate.

Nutrientes e
fatores de
crescimento
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
-São meios que permitem a distinção
(diferenciação) entre dois ou mais tipos de bactérias pelas
simples observação das características apresentadas pelas
suas colônias que neles se desenvolvem.
-Os meios diferenciais permitem o crescimento de
várias espécies ao mesmo tempo, que facilita a
discriminação entre os diferentes microrganismos.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey

- Permite a distinção entre bactérias fermentadoras da

lactose (lactose positiva – colônias rosas) e bactérias
não fermentadoras da lactose (lactose negativa-
apresenta colônias incolores).
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey

Lactose
negativas
Lactose
positivas
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Ágar Hektoen
Salmonella
spp.
(Colônias
escuras)

Escherichia
coli
(Colônias
laranjas)
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- Impede o crescimento de microorganismos
indesejados e favorece o crescimento dos
microorganismos de interesse.

Ágar Bismuto
Sulfito:
Isolamento de
Salmonella spp.
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- Podem ser usadas várias substâncias seletivas
como os corantes tais como cristal violeta, azul de
metileno, eosina e verde brilhante.
Obs: O ágar Mac Conkey
contém cristal violeta e sais biliares
que inibe o crescimento de
bactérias Gram-positivas
Esse meio é considerado
diferencial e seletivo!
Outro exemplo de meio seletivo e diferencial: Ágar
hipertônico manitol
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS

MEIOS DE ENRIQUECIMENTO

-São meios utilizados para isolar um

microrganismo de um meio em que está presente
em pequena quantidade.
-São meios enriquecidos com sangue, soro
ou outros nutrientes.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO

Ágar sangue de carneiro a 5,0%:

Meio diferencial que permite o crescimento de
bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, além de
permitir a visualização de hemólise.

Hemólise:
lise (rompimento) de
hemácias
 Hemólise Ausência de
Hemólise
parcial: hemólise: o
total: zona
formação de meio
clara ao
um halo permanece
redor das
esverdeado íntegro ao
colônias
em volta da redor da
colônia colônia
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

2 – TIPOS

MEIOS DE ENRIQUECIMENTO

Ex: Tetrationato e Selenito

- São meios usados para amostras fecais

(coprocultura) inibindo o crescimento da microbiota
(bactérias normais das fezes) e permitindo o crescimento
de Salmonella e Shigella que são patogênicas.
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO

Ex. caldo Rappaport

Meio de
enriquecimento e
seletivo!

Favorece o
crescimento de
Salmonella spp.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS

MEIOS DE TRANSPORTE

-São meios utilizados para o transporte e

manutenção de amostras biológicas como fezes e
secreções.
-São meios inertes, pois, permitem a viabilidade
da maioria dos patógenos sem alterar a sua
concentração.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS

MEIOS DE TRANSPORTE

Ex: Meio de Stuart usado para o transporte com

swabs.
Ex: Meio Cary-Blair e salina glicerinada
tamponada útil no transporte de fezes para o
isolamento de shigella e Salmonella.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

MEIOS DE TRANSPORTE
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS

MEIOS DE MANUTENÇÃO

São meios utilizados para preservação das bactérias

para realização de exames complementares para
estudos futuros como pesquisa clínica,
epidemiológica ou educacional.
Ex: CaldoTSB, caldo nutriente, água destilada.
 MEIOS DE MANUTENÇÃO
Métodos de preservação:

Curto período de tempo: temperaturas de 2 a

8 ºC ou de 4 à 10ºC (refrigerador): duração por
semanas. Fazer subculturas em caldo TSB ou caldo
nutriente.

Longo período de tempo: temperaturas de -70 à

-196ºC permite a duração por anos (1 até 10 anos).
- Nitrogênio líquido: (-196ºC)
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura ultra baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
-São meios utilizados na identificação das
bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.
Ex: EPM e MILI para identificação
de Enterobactérias (Gram-negativas)
-Ágar Bile esculina: Identificação de bactérias
Gram-positivas.
 CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

MEIOS PARA IDENTIFICAÇÃO: RUGAI

A inoculação é feita com um

fio de platina, com o qual se
coleta a amostra e inocula-se
com uma picada até o fim do
tubo e realiza-se estrias na
superfície inclinada.
EQUIPAMENTOS PARA MICROBIOLOGIA
Capela de fluxo
laminar, autoclave,
estufa de cultura,
contador de colônias.
TÉCNICAS DE SEMEADURA
INÓCULO: é a amostra de microrganismos que são
colocados em um meio de cultura para iniciar o
crescimento.

Obs: Inocular primeiramente os meios menos seletivos para

evitar que substâncias inibidoras sejam transferidas de um
meio para o outro.
CULTURA: é quando os microrganismos crescem e se
multiplicam no meio de cultura.
COLÔNIA: agregado de microorganismos iguais
 Inoculação de
microorganismos

Colônia
Cultura de
microorganismos
Espalhamento em placa (superfície)

Alça de Drigalski
Inoculamento em profundidade
(pour plate)
Cuidado com a
temperatura do
meio de cultura!

Não devem ser

usados meios
coloridos
Método de esgotamento

Alça bacteriológica
 Métodos de semeadura

Estria simples Espalhamento Esgotamento

 Métodos de semeadura

https://
www.youtube.com/watch?v=pOouM7Bo96
o

https://
www.youtube.com/watch?v=PPLnm8IkCf
w
2º momento!
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
FATORES INTERFERENTES

- TEMPERATURA
- Ph
- ATMOSFERA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
TEMPERATURA

- Psicrófilos: 0 à 20ºC.
- Mesófilos: 20 à
45°C.
- Termófilos: 45 à 90°C.

Obs: A maioria são mesófilos. Temperatura ótima: 36,5 a

37°C.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
pH

- Acidófilas: pH 0,1 à 5,4

- Neutrófilas: pH 5,4 à 8,5
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5
Obs: A maioria na faixa de 4,0 a 9,0. Próximo do neutro (7,0) para a
maioria das bactérias.
CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA
- Aeróbios: 21% de O2.
- Microaeróbios: 1 a 15% de
O2
- Anaeróbios: ausência de O2

Jarras de anaerobiose e
microaerobiose.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Pressão Osmótica

-Meios hipertônicos: as bactérias perdem água

e sofrem plasmólise ou enrugamento da célula.
-Meios isotônicos: concentrações iguais, é
o mais recomendado.
-Meios hipotônicos: as células ganham água e
sofrem lise.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Pressão Hidrostática
-Água dos oceanos e lagos exercem pressão
hidrostática.
-Bactérias barófilas: vivem em alta pressão,
“profundidade”.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Luz

- Fotossintetizantes, precisam da luz.

- Fotofóbicas, inibidas pela luz.
- Indiferentes.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Tempo
Progressão geométrica:
1→21→22→23→24… .→2n
n = número de gerações
2n = número total de células em uma cultura.

TEMPO DE GERAÇÃO DAS BACTÉRIAS: Aproximadamente

minutos. 30
PERÍODO DE INCUBAÇÃO: 24 a 48 horas em estufa
bacterilógica.
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
CARACTERÍSTICAS DAS COLÔNIAS
TAMANHO (mm)
- Grande: maior que 1 mm de tamanho
- Média: 1 mm de diâmetro
- Pequena: menor que 1 mm de diâmetro.
 IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
COR
-Amarela, Branca, Branca- acinzentada,
Cinza, Rosa, Esverdeada, Preta, Alaranjada,
Creme, Incolor, etc...
ODOR
-Uva, Água sanitária, Fermento de pão,
Vinagre, Queijo, Terra molhada, Peixe,
Caramelo, etc...
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
DENSIDADE
- Opaca, Translúcida, Transparente

CONSISTÊNCIA
- Brilhante, Cremosa, Seca, Mucóide

PIGMENTO
- Amarelo, Vermelho, Mostarda
 IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
BORDA OU FORMA
- Circular (redonda), irregular,
puntiforme, ondulada

ELEVAÇÃ
O
Achatada, Elevada, Umbilicada,
-
Convexa, centro
elevado
 IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS

HEMÓLISE: é a lise (quebra, rompimento) da

hemácia.
Total (beta-hemólise): zona clara ao redor das
colônias.
Parcial (alfa-hemólise): há formação de um
halo esverdeado em volta da colônia, indicando
hemólise parcial das hemácias.
Ausência de hemólise (gama-hemólise): o
meio permanece íntegro em volta das colônias.
MEIOS DE CULTURA
CONTROLE DE QUALIADE
- Cepas padrão
 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BARBOSA, H. R.; TORRES, B. B. Microbiologia básica. São Paulo: Atheneu,
2005.
BLACK, J. G. Microbiologia – fundamentos e aplicações. 4. ed. Rio de Janeiro:
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WINN JÚNIOR, W. C. Diagnóstico microbiológico. Texto e atlas colorido. 5.
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LEVINSON, W.; JAWETZ, E. Microbiologia médica e imunologia. 7. ed. Porto
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MINS, C.; PLAYFAIR, J.; RITT, I. WAKELIN, D.; WILLIAMS. R. Microbiologia
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PELCZAR Jr., M. J.; CHAN, E. C. S. KRIEG, N. R. Microbiologia – conceitos e
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SPICER, W. J. Bacteriologia, micologia e parasitologia clínicas – um texto
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TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. H. Microbiologia. 8. ed. São Paulo:
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TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM. Microbiologia. 4. ed. São Paulo: Atheneu, 2005.