Prof. MSc. Jorge Belém Oliveira Jr.

junniorbiologia@hotmail.com
@prof.jorgebelem
Análise de amostras
biológicas
Processamento de
amostras biológicas
Meios de cultura
Identificação de colônias
• As amostras podem ser colhidas:
- Pelo próprio paciente;
- Pela equipe do laboratório;
- Outros locais: hospitais.

• Ao receber a amostra, o microbiologista deve avaliar:

- Data e horário da coleta;
- Natureza do material clínico;
- Sítio anatômico da coleta (quando aplicável).
1)Amostras recebidas em swab:
- Semeadura por esgotamento/estriamento;
- Incubação
2) Amostras de escarro:
- Selecionar a porção mais sanguinolenta da amostra;
- Coloração de Gram;
- Semear por esgotamento nos meios apropriados;
- Incubar.

Saliva Escarro
(Inadequado) (Adequado)
3) Líquidos orgânicos (exceto urina e sangue):
- Centrifugar a amostra, dispensar o sobrenadante e utilizar o
sedimento;
- Sedimento: coloração de Gram
- Semear por esgotamento
4) Urina:
- Urina de jato médio: homogeneizar o material, semear com uma
alça calibrada e usar 10 microlitros para coloração de Gram;

- Urina de 1º jato: centrifugar a amostra, semear e corar o

sedimento por Gram.
5) Fragmentos de biópsia e tecido:

- Fragmentar a amostra com auxílio de um bisturi;

- Semear os fragmentos por esgotamento;
- Comprimir o fragmento em uma lâmina para proceder
colorações.
6) Fragmentos ósseos:

- Se for pequeno: transferi-lo para caldo BHI;

- Se for grande: adicionar caldo BHI ao frasco estéril
(fragmento submerso).
 Coleta e Transporte
Falhas nos sistemas de coleta e transporte:

1)Falhas no isolamento do agente etiológico causador da infecção;

2)Favorecer o crescimento de microrganismos contaminantes;

3)Introdução a um tratamento inadequado;

4)Falha no resultado liberado.

 Coleta e Transporte
O passo mais importante para o laboratório de microbiologia:

Pontos importantes a serem considerados para garantir a

qualidade do processo de coleta dos exames de microbiologia:

1)Assepsia correta antes da coleta;

2)Estabelecer melhor momento para proceder a coleta;
3)Coletar quantidade de amostra suficiente;
4)Utilizar materiais de coleta e transporte adequados;
 Coleta e Transporte
O passo mais importante para o laboratório de microbiologia:

Pontos importantes a serem considerados para garantir a

qualidade do processo de coleta dos exames de microbiologia:

5) Coletar amostras antes da utilização de antimicrobianos

(SEMPRE QUE POSSÍVEL);
6) Etapa pré-analítica;
7) Treinamento constante dos colaboradores.
 Coleta e Transporte

• Estabilidade de amostras clínicas:

• Amostra que chega ao laboratório deve ser imediatamente

processada;

• A maioria das amostras clínicas permanecem estáveis por um

período ≤ 2 horas à TA ou ≤ 24 horas quando refrigeradas.

Exceções:
- Fezes com conservantes: até 48 horas;
- Fluido vítreo, raspados de córnea e cateter: ≤ 12 horas.

• A maioria se mantém estável quando refrigeradas a 2-8 °C.

 Coleta e Transporte

• Materiais de coleta e transporte:

Exemplos de materiais de coleta:

- Seringas (aspirados e exsudatos);

- Tubos esterilizados (pleural, peritoneal, pericárdico);

- Tubos com solução fisiológica estéril (fragmentos de

biópsia, tecido e osso).
 Coleta e Transporte

• Tempo e temperatura de transporte:

• Tempo de transporte

- Imediato: Ex.: líquor, fluido vítreo, aspirado, exsudatos e amostras

coletadas com swab sem meio de transporte;

- ≤ 1 hora: fezes, cateter.

- Maior parte das amostras: tempo ≤ 2 horas.

 Coleta e Transporte

• Tempo e temperatura de transporte:

• Temperatura de transporte

- Maior parte das amostras: temperatura ambiente (20 a 25 °C);

- Exceção: refrigerar amostras de investigação (sangue, LCR ou

urina).
 Coleta e Transporte
• Investigações de infecções por fungos

• Tipos de amostra:

- Cabelo, pele, unha e couro cabeludo;

- Secreções;
- Líquidos aspirativos;
- Sangue e medula óssea.
• Estabilidade variável de acordo com o tipo de amostra;
• Temperatura de transporte: ambiente.
 Coleta e Transporte

• Ao receber a amostra, o analista deve observar:

- Encontra-se devidamente identificada;

- O volume/quantidade é suficiente para a realização dos exames;

- Coletada nos meios de transporte apropriados;

- É adequada para realizar o exame solicitado (observar possíveis

contaminações).
 Procedimento

Amostra OK para Processar em cabine de

análise segurança biológica
• Para que os microrganismos sejam mantidos em um ambiente
adequado com todos os nutrientes ideais para o seu
desenvolvimento;

• Meio de cultura é uma preparação com objetivo fornecer aos

microrganismos o local perfeito para o seu crescimento;
• A sobrevivência e o suporte da vida dos microrganismos
dependem do fornecimento adequado de nutrientes e de
condições para o seu crescimento;

- Presença ou ausência de oxigênio.

- Temperatura ideal.
- pH.
 Crescimento
indiscriminado com
turvação do meio;

Líquidos
 Adição de menor
quantidade de ágar,
mobilidade bacteriana;

Semissólidos
Crescimento de colônias
isoladas, muito utilizado
para culturas puras;

Sólidos
 Culturas Microbianas

CULTURA CULTURA
PURA MISTA
 Culturas Microbianas

CULTURA CULTURA
PURA MISTA
 Classificação/Aplicação

Meio de cultura de
identificação

Meio de cultura
seletivo
Meio de cultura de estocagem
e manutenção
Meio de cultura
diferencial

Meio de cultura
indicador
 Classificação/Aplicação
• Meio enriquecido: apresenta uma grande porção de nutrientes
que favorecem o crescimento de microrganismos, incluindo os
microrganismos fastidiosos;

Ágar BHI
 Classificação/Aplicação
• Meio diferencial: possibilita a distinção entre diversos gêneros e
espécies microbianas por ter substâncias que permitem uma
diferenciação presuntiva - mudança de coloração ou morfologia
das colônias;

Ágar McConkey

Ágar Sangue
 Classificação/Aplicação
• Meio seletivo: possui propriedade para selecionar as espécies
microbianas que se deseja isolar e impedir o desenvolvimento de
outras através de componentes;

Ágar SS Ágar McConkey

 Classificação/Aplicação
• Meio de transporte: úteis quando não é possível realizar a
cultura/semeio microbiano no momento de coleta. É isento de
nutrientes, pH favorável, previne a desidratação de secreções,
evita a oxidação e autodestruição enzimática dos patógenos até o
cultivo no meio de cultura apropriado;

Meio de Stuart
 Classificação/Aplicação
• Meio indicador/identificação: indicado para a análise de
propriedades bioquímicas e características fisiológicas dos
microrganismos, auxiliando sua identificação;

Ágar Citrato
de Simmons
 Classificação/Aplicação
• Meio de contagem: úteis para verificar a quantidade de
populações microbianas;

Ágar de Contagem
em Placas
 Seleção do Meio de Cultura

• Há uma grande variedade de meios de cultura que podem ser

utilizados na rotina microbiológica;

• Examinar os meios quanto à validade, aparência, ausência de

contaminação;

• Durante a semeadura: identificar as placas com dados do

paciente, data de coleta e de processamento, etc.
 Tipos de Meio de Cultura

• Cada tipo de meio de cultura possui suas particularidades;

• Sua escolha é baseada na fisiologia microbiana;

CLED EMB Hemocultura

Ágar sangue Ágar Sabouraud

MacConkey
 Tipos de Meio de Cultura

1)Ágar sangue:

- Meio não seletivo e diferencial;

- Permite o crescimento de bactérias Gram +, Gram – e fungos;

- Utiliza-se sangue de carneiro, cavalo ou coelho;

- Permite a visualização de hemólise.

Ágar sangue
 Tipos de Meio de Cultura

1)Ágar sangue:
 Tipos de Meio de Cultura

1)Ágar sangue:
 Tipos de Meio de Cultura

2. Ágar Chocolate:

- Meio nutritivo que permite o crescimento da maioria das bactérias,

especialmente Haemophilus influenzae e Neisseria gonorrhoeae;

- Materiais clínicos (LCR, aspirados invasivos, sangue e secreções);

Ágar chocolate
 Tipos de Meio de Cultura

2. Ágar Chocolate:

Haemophilus Neisseria
influenzae gonorrhoeae
(ATCC 10211) (ATCC 49226)
 Tipos de Meio de Cultura

3.Meio SS (Salmonella e Shigella):

- Meio seletivo e diferencial para o isolamento de Salmonella spp. e

Shigella spp.

- Inibe dos microrganismos Gram+ e outras Enterobacteriales (teor

de sais biliares, verde brilhante e citratos);

- Detecta a produção de H2S.

Ágar SS
 Tipos de Meio de Cultura

3.Meio SS (Salmonella e Shigella):

 Tipos de Meio de Cultura

4.Caldo BHI ou ágar Nutrientes:

- Meio enriquecido que favorece o crescimento da maioria dos
microrganismos.

Ágar nutrientes Caldo BHI

 Tipos de Meio de Cultura

4.Caldo BHI ou ágar Nutrientes:

- Meio enriquecido que favorece o crescimento da maioria dos
microrganismos.
 Tipos de Meio de Cultura

5. Ágar EMB:

- Seletivo;

- Diferenciação:
- Bacilos entéricos Gram- (enterobactérias e outros bastonetes
Gram-);

- Inibe as bactérias Gram+;

- Escherichia coli.

Ágar EMB
 Tipos de Meio de Cultura

5. Ágar EMB:

Klebsiella pneumoniae Salmonella enteritidis

 Tipos de Meio de Cultura

5. Ágar EMB:

Escherichia coli
 Tipos de Meio de Cultura

6.Ágar CLED:

- Não seletivo;

- Diferenciação:
- Colônias lactose positiva: amarela
- Colônias lactose negativa: azul.

- Quantificação;

- Amostra de urina.

Ágar CLED
 Tipos de Meio de Cultura

6.Ágar CLED:
 Tipos de Meio de Cultura

7.Ágar MacConkey:

- Seletivo, devido aos sais biliares e cristal violeta, que

inibem os microrganismos Gram+;

- Diferencial (bactérias Gram-negativas):

- Fermentadoras de lactose (↓pH): vermelhas/rosa
- Não-fermentadoras (↑pH): amarelas

- Reduz a formação do véu de Proteus spp.;

Ágar MacConkey
 Tipos de Meio de Cultura

7.Ágar MacConkey:

Lactose Lactose
positiva negativa
 Tipos de Meio de Cultura

7.Ágar MacConkey:
 Tipos de Meio de Cultura

8. Ágar Manitol Salgado:

- Seletivo, devido ao alto teor salino;

- Diferencial (Staphylococcus sp.):

- Alto teor de sal e diferenciação através da fermentação de
manitol.

Ágar Manitol
Salgado
 Tipos de Meio de Cultura

8. Ágar Manitol Salgado:

Staphylococcus sp. Staphylococcus aureus

 Tipos de Meio de Cultura

8. Ágar Sabouraud:

- Seletivo, devido ao pH, levemente ácido, favorece o

crescimento de dermatófitos e inibe algumas espécies
bacterianas;

- Alta concentração de dextrose, que proporciona uma

vantagem para o desenvolvimento dos fungos;

Ágar Sabouraud
 Tipos de Meio de Cultura

8. Ágar Sabouraud:
Características das colônias:
• Tamanho (mm):
– Grande: maior que 1 mm de tamanho.
– Média: 1 mm de diâmetro.
– Pequena: menor que 1 mm de diâmetro.
Características das colônias:
Cor:
Amarela, branca, branca-
acinzentada, cinza, rosa,
esverdeada, preta, alaranjada,
creme, incolor, etc.

Odor:
Uva, água sanitária, fermento
de pão, vinagre, queijo, terra
molhada, ovo podre, peixe,
caramelo, etc.
Características das colônias:
• Densidade:
Opaca, translúcida ou transparente;

• Consistência:
Brilhante, cremosa, seca ou mucoide;

• Pigmento:
Amarelo, vermelho ou mostarda;
• Borda ou forma:
Circular (redonda), irregular, puntiforme, ondulada;

• Elevação:
Convexa, achatada, elevada, umbilicada, centro elevado;
 FIM

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