CENTRO UNIVERSITARIO DO SUL DE MINAS/UNIS-MG BIOMEDICINA COLETA E PROCESSAMENTO DE AMOSTRAS

COLETA,PREPARO E TRANSPORTE DE AMOSTRAS BIOLOGICAS PARA HEMOCULTURA,LIQUIDO CEFALORRAQUIDIANO,CULTURA SECREES E OUTROS FLUIDOS BIOLOGICOS

NOME:SAMARA MESQUITA FERREIRA

VARGINHA-MG 2013

COLETA DE AMOSTRAS BIOLOGICAS O procedimento de coleta de material biolgico causa sempre insegurana ao cliente, pois a espera deste resultado pode trazer consigo a ideia de alvio, medo e por este motivo importante que neste momento o coletador esteja seguro e confiante para que possa tranquilizar o cliente. Se paciente no apresenta alterao do nvel de conscincia, importante que o procedimento de coleta seja explicado em linguagem clara, mesmo em caso de crianas. Isto facilita a colaborao do paciente no procedimento. Quando o mesmo no est apto a compreender as informaes, estas so passadas ao acompanhante caso este esteja presente. HEMOCULTURA Material de Coleta: Sangue Preparo do paciente: Preferencialmente no estar em uso de antimicrobianos. Quando solicitado 3 amostras e no especificado os tempos, colher com espao de 10 a 20 minutos cada amostra. Procedimento da coleta: * Selecionar o local da puno. Aps seleo da veia, afrouxar o garrote; * Retirar a tampa de proteo do meio de cultura, sem remoo total do anel de alumnio que protege o frasco, e desinfeco da tampa de borracha com algodo e lcool etlico a 70%, colocar uma gaze estril protegendo a tampa, enquanto feita a assepsia do local de puno. * Limpar o local da puno com algodo embebido em alcool etilico 70% , em circulos concentrcos (do centro para as bordas), sem voltar com o algodo para o centro. * Em seguida, limpar o local da puno com algodo embebido em Clorexidina 2% em crculos concentricos (conforme descrito no item acima); * Esperar secar para que o antissptico exera seu efeito no local; *No assoprar, no abanar e no colocar nada no local; * Se coleta for feita com Scalp, posicionar o frasco de hemocultura abaixo do local da puno e na posio vertical, observando a quantidade de sangue que est fluindo no frasco; *Se coleta for feita com seringa e agulha, transferir o sangue imediatamente para o frasco de hemocultura sem trocar a agulha. * Homogeneizar os frascos (lentamente) por inverso. * Deve-se seguir os seguintes esquemas de coleta: Para solicitao de apenas uma amostra: colher 1 frasco de hemocultura convencional. Para solicitao de duas amostras: colher 1 frasco de hemocultura e, aps o intervalo de 10 a 20 minutos, colher a outra amostra no outro brao. Para solicitao de mais de duas amostras: colher 1 frasco de hemocultura convencional e colher as outras amostras 30 e 60 minutos (ou conforme solicitao mdica) aps a primeira coleta, alternando os braos a serem coletados. *Volume recomendvel: Adulto: 5 a 10 mL conforme seja o frasco de hemocultura de 45 ou 90 mL. Criana: 1 a 5 mL conforme o volume do frasco de hemocultura. *Quando houver solicitao de hemocultura para anaerbios especificada, usar tambm o frasco prprio para anaerbios.

- As principais dificuldades deste exame consistem em se definir se o agente isolado ou no contaminante. Portanto, os cuidados referentes ao processo de assepsia devem ser rigorosamente obedecidos. * O intervalo entre a coleta e o nmero das amostras varia de acordo com a suspeita clinica, devendo preferentemente ser especificado pelo mdico. * A sensibilidade do exame esta diretamente relacionada ao volume de sangue colhido. Quanto maior o volume da amostra, maior a possibilidade de se isolar a bactria. * A especificidade aumenta quando as coletas so feitas em stios diferentes. Descrio do Exame: Cultura de sangue Mtodo: Sistema especfico de isolamento e identificao. Conservao: As amostras devem ser conservadas em frascos apropriados para hemocultura em temperatura ambiente at 24 horas. Interferentes: O uso de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas, em algumas situaes, pode interferir no resultado. Valor de Referncia: Cultura negativa. Interpretao: O exame til para o diagnstico nos processos infecciosos sistmicos. O momento ideal da coleta da hemocultura antes do incio da antibioticoterapia, mas o uso prvio de antimicrobianos no impede a realizao do exame. - O isolamento de S. aureus, Enterobacteriaceae, P. aeruginosa, S. pneumoniae e C. albicans entre outros agentes, representa infeco em mais de 90% dos casos. J Corynebacterium spp, Bacillus spp e Propionibacterium spp raramente se mostram clinicamente relevantes. Para que sejam caracterizados como patgenos, os microrganismos Streptococcus do grupo Viridans, Enterococcus spp e Staphylococcus coagulase-negativo necessitam de isolamento em duas ou mais amostras. Dependendo da idade do indivduo, a deteco de Streptococcus bovis pode sugerir investigao de neoplasia do trato digestivo. Setor: Microbiologia

AMOSTRAS DE FLUIDOS CORPORAIS

ESCARRO Material de Coleta: Escarro Preparo do paciente: Retirar previamente as instrues e o material para a coleta de escarro, que deve ser feita em casa, antes do caf-da-manh.

O paciente deve escovar os dentes e bochechar com bastante gua, tossir profundamente (tosse tipo diafragmtica) e colocar o material no recipiente de coleta, observando bem o processo para que a amostra obtida seja realmente escarro, e no saliva. - No caso de uso prvio ou atual de antimicrobianos, o nome do medicamento precisa ser informado ao Fleury. A administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas, em algumas situaes, pode interferir no resultado. - o material poder ser colhido no Fleury Descrio do Exame: Cultura Escarro Mtodo: Exame microscpico aps colorao pelo Gram em aumento de 100X para avaliao da qualidade do material. Cultura em meios especficos para isolamento de diversos microrganismos causadores de infeces do trato respiratrio e identificao por provas bioqumicas manuais. Conservao: O material deve ser entregue no laboratrio em at 2 horas aps a coleta, se em temperatura ambiente, ou at 24 horas, se mantido refrigerado (2 a 8 C).Interferentes: Uso de antimicrobianos prvio ou atual, o nome do medicamento precisa ser informado ao laboratrio. A administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas, em algumas situaes, pode interferir no resultado. A amostra ser avaliada quanto sua qualidade e, caso no seja adequada, o paciente ser informado em at 24 horas aps a entrega do material, para que seja realizada nova coleta. Valor de Referncia: Presena de microrganismos habitualmente no patognicos pertencentes microbiota normal. Interpretao: Usualmente, o escarro no o material mais adequado para o diagnstico de infeces do trato respiratrio inferior, por poder estar contaminado com microrganismos da microbiota normal da orofaringe, os quais, por sua vez, tambm causam infeco no trato respiratrio inferior. No entanto, este mtodo pode ser til para o diagnstico de pneumonias quando a amostra de escarro de boa qualidade. Assim, um resultado mais confivel depende fundamentalmente da qualidade da amostra, que deve ser obtida aps rigorosa higiene bucal. Uma amostra considerada representativa do stio de infeco deve apresentar mais de 25 leuccitos polimorfonucleares e menos de dez clulas epiteliais pavimentosas por campo, em aumento de 100 vezes. Amostras fora dessas especificaes costumam ser rejeitadas, apesar de algumas excees: Pacientes neutropnicos, como os transplantados de medula ssea, podem no apresentar leuccitos polimorfonucleares no escarro e, neste caso, apenas a

avaliao da quantidade de clulas epiteliais deve ser feita; A presena de patgenos associados fibrose cstica em materiais de trato respiratrio superior obtidos com swabs de orofaringe aps tosse, principalmente em crianas com idade inferior a 5 anos, apresenta alto valor preditivo positivo para infeces do trato respiratrio inferior e, em tal situao, no h necessidade de avaliar a presena d-Entre os microrganismos mais freqentemente associados a pneumonias esto Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Enterobacteriaceae (em particular, K. pneumoniae e E. coli) e Pseudomonas aeruginosa. So considerados como parte da microbiota normal o Staphylococcus coagulasenegativo, o Streptococcus do grupo viridans e a Neisseria spp. Setor: Microbiologia AMOSTRAS DA OROFARINGE Material de Coleta: Secreo de orofaringe Secreo de nasofaringe Preparo do paciente: Jejum mnimo de duas horas. Colher, preferencialmente, antes do desjejum e da higiene oral. Usando foco de luz, abaixar a lngua do paciente. Introduzir o swab diretamente na rea da coleta , evitando toc-lo em outras partes da boca. Descrio do Exame: Cultura de orogaringe Cultura e antibiograma de Orifaringe Orofaringe Cultura Mtodo: Cultura em meios especficos para isolamento de diversos micorganismos. Conservao: Temperatura ambiente at 4 horas colhido em meios conservador (STUART). Interferentes: A administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura,mas pode interferir no resultado em algumas situaes .Valor de Referncia: Cultura negativa. Presena de microrganismo pertencentes microbiota normal do local. Interpretao: til na avaliao da microbiota local e para a deteco de microrganismos sabidamente patognicos, como o Streptococcus pyogenes (estreptococo betahemoltico do grupo A), ou potencialmente patognicos, a exemplo de Streptococcus beta-hemolticos dos grupos C e G, S. pneumoniae, Arcanobacterium haemolyticum, Corynebacterium pseudodiphtheriticum, H. influenzae, Moraxella catarrhalis e S. aureus, entre outros.

Na suspeita de angina de Vincent, convm solicitar tambm exame bacterioscpico (Gram). Setor: Microbiologia SECREO URETRAL Material de Coleta: Secreo uretral. Preparo do paciente: O paciente precisa estar pelo menos h duas horas sem urinar. No caso de uso prvio ou atual de antimicrobianos, deve ser informado o nome do medicamento. Descrio do Exame: Secreo uretral Mtodo: Cultura em meios adequados para isolamento de diversos microrganismos. Este exame no detecta a presena de determinados microrganismos, como Chlamydia, Mycoplasma e Ureaplasma, os quais necessitam pedidos especficos. Conservao: Aps a coleta enviar imediatamente ao setor de microbiologia.Interferentes: A administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas, em algumas situaes, pode interferir no resultado. Valor de Referncia: Se o exame de cultura no revelar a presena de algum microrganismo relevante nem no exame direto do material (bacterioscpico pelo mtodo de Gram), mas houver presena aumentada de leuccitos, sugere-se pesquisa de outros agentes causadores de uretrite que no so diagnosticados neste exame (Chlamydia, Mycoplasma e Ureaplasma). Interpretao: til no diagnstico etiolgico das uretrites e inclui rotineiramente a pesquisa de diversos microrganismos em meios especiais de cultura, at mesmo Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis e Candida spp. Os meios de cultura empregados permitem tambm o isolamento de diversos outros microrganismos, tais como enterobactrias, bacilos gram-negativos no-fermentadores, Streptococcus spp, Enterococcus spp e Staphylococcus spp. Este exame, no entanto, no pesquisa outros agentes causadores de uretrites, como Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum/parvum e Chlamydia trachomatis, os quais necessitam de mtodos especiais e pedidos especficos do clnico. Para uma melhor avaliao, importante avaliar conjuntamente o resultado dos exames microscpico direto para a pesquisa de Trichomonas spp e do bacterioscpico pelo mtodo de Gram, uma vez que tais recursos auxiliam a avaliao da microbiota local e de elementos celulares (leuccitos e eritrcitos). Setor: Microbiologia FEZES

Material de Coleta: Fezes recente "In Natura " e em meio de Transporte (Cary-Blair). Swab anal (para cultura de enteropatgenos) .Preparo do paciente: Colher fezes recm excretadas antes da administrao de antimicrobianos. Descrio do Exame: Cultura de fezes Cultura de fezes com antibiograma Cultura pra enteropatgenos Mtodo: Cultura em meios especificos. Conservao: At 2 horas "In natura" em temperatura ambiente. Meio Cary-Blair, enviar entre 2 e 8 C em at 48 horas. Interferentes: Amostras com conservantes. Uso de antibiticos. Valor de Referncia: Cultura negativa. Interpretao: A cultura de fezes identifica microorganismos enteropatognicos em casos de diarria aguda ou crnica. So consideradas indicaes de coprocultura: diarria sanguinolenta, febre, tenesmo, sintomas severos e persistentes, presena de leuccitos fecais e histria de exposio a agentes bacterianos.As coproculturas so direcionadas para pesquisa de Salmonella spp, Shigella spp, E. coli enteropatognicas, entre outros eventuais patgenos. Setor: Microbiologia Material de Coleta: - Escarro expectorado, escarro induzido com salina a 3%, - Secrees de feridas, - Puno de linfonodos, - Abscessos, - Sangue, - Lquidos corporais (lquor, lquido pleural, lquido asctico ou peritoneal, lquido sinovial,lquido pericdico lquido amnitico), - Urina Preparo do paciente: Usar frascos limpos e descartveis. Toda amostra, sujeita a ressecamento deve ser protegida com o acrscimo de soro fisiolgico estril. - Escarro expectorado: Lavar vrias vezes a boca com gua pura, gargarejando e bochechando abundantemente. Qualquer secreo nasal ou saliva, deve ser eliminada. Fazer varias inspiraes profundas e tossir vrias vezes, procurando obter o material do fundo do peito. - Urina: . Realizar higiene ntima com gua.

. Em seguida, colher todo a urina da primeira mico da manh.Sugere-se um mnimo de trs e no mximo seis amostras colhidas em dias consecutivos. - No aceitamos amostras de urina de 24 hs. - Escarro Induzido: Lavar vigorosamente a boca com salina a 0,85% por 5 a 10 minutos, no usar pasta dental. Fazer nebulizao com salina hipertnica a 3%. A inalao profunda desta salina resultar na acumulao osmtica de fluido e na irritao da rvore brnquica, com subsequente tosse e expectoraco do contedo broncoalveolar. - Pus e secrees purulentas, aspirado de gnglios e de tumores: Quando provenientes de cavidade fechada so coletados atravs de puno, procedimento exclusivamente mdico. Quando o material de cavidade aberta, colhe-se atravs de um swab, com cuidados especiais de no tocar nas borbas. Nesse caso, deve-se descarregar o swab em gua destilada ou salina estreis. - Sangue: Colher o sangue em tubos de heparina ou SPS. Colher 02 tubos por amostra para adultos e 01 tubo por amostra para crianas. - Lquidos Corporais: Nos casos de liquidos sanguinolentos, coletar em tubo contendo anticoagulante para evitar que o bacilo fique preso na rede de fibrina. Descrio do Exame: Bacilos de Koch BAAR, Cultura Tuberculose, Cultura Micobactrias Bacilo da Tuberculose, Cultura Cultura para BK Mtodo: Cultura em meios epecificos. Conservao: - Escarro: enviar em at 06 horas a temperatura ambiente ou 72 horas entre 2 e 8 C e protegido da luz. - Sangue e medula ssea: at 24h. Nunca refrigerar. - Demais amostras: enviar em at 06 horas a temperatura ambiente ou 24 horas entre 2 e 8 C e protegido da luz. Interferentes: Administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas pode interferir no resultado, em algumas situaes. Valor de Referncia: Cultura negativa. Interpretao: A cultura considerada o padro-ouro para o diagnstico de infeces causadas por espcies do gnero Mycobacterium, uma vez que apresenta sensibilidade superior da microscopia direta aps colorao de Ziehl e da pesquisa do DNA (PCR para M. tuberculosis). A microscopia direta do material pelo mtodo de Ziehl-Neelsen essencial para a valorizao de espcies de patogenicidade discutvel. Setor:

Microbiologia FLUIDOS CORPORAIS Material de Coleta: Feridas superficiais (furnculos, lceras, fstulas, Abscessos drenados, lceras de decbito), Escarro, Esperma, Secrees genito-urinrias, Secreo nasal, Secreo de nasofaringe, Secreo de orofaringe, Secreo conjuntival, Urina 1 jato, Lquidos corporais, Secrees diversas, Raspado de leses de pelo, unha e couro cabeludo. Preparo do paciente: Vaginal: - A cliente deve realizar higiene ntima habitual com gua e sabonete, somente externamente. - Nas 48 horas antes do exame, a mulher no pode usar creme e/ou vulo vaginal nem ducha e/ou lavagem interna. -Para pesquisa de Streptococcus beta hemolitico: A coleta deve ser feita preferencialmente entre a 35 e a 37 semana de gestao, mas, desde que indicado pelo mdico, pode ser realizada em qualquer idade gestacional. Escarro: . A coleta de escarro deve ser feita em casa. . Colher preferencialmente de manh ao se levantar, antes da higiene oral e do desjejum. . Lavar vrias vezes a boca com agua pura,bochechando abundantemente. . Fazer vrias vezes inspiraes profundas e tossir vrias vezes procurando obter o material do fundo do peito. Recolher este material no frasco fornecido pelo laboratorio, fechando-o logo aps a coleta. . No colher saliva ou secreo nasal. . Enviar o mais rpido pssvel. - Espermocultura: Veja instrues em espermocultura. -Secreo vaginal: Veja instrues em cultura de secreo vaginal. -Secreo Uretral: . vir para a coleta preferencialmente pela manh sem urinar, ou estar sem urinar por pelo menos 4 horas.

- Coleta de secreo oral: . no escovar os dentes (1 hora antes da coleta) . no usar anti-sptico bucal no dia da coleta . jejum desejvel de pelo menos duas horas. - Secreo conjuntival: As secrees oculares so normalmente escassas e o paciente dever ser instrudo a no lavar a regio dos olhos antes da coleta. Se a secreo for muito intensa, evitar a coleta superficial. Nos demais casos, pedir ao paciente que olhe para cima, abaixe a palpebra inferior e, usando um swab pequeno, colher dessa regiao (fundo de saco conjuntival). . Colher do olho especificado pelo mdico. Quando no for especificado, colher separadamente de ambos os olhos afetados ou no e identificar os swabs ( O.D. e O.E.). dele. Descrio do Exame: Cultura Streptococcus beta hemolitico Streptococcus grupo A Cultura bactrias aerbicas Cultura geral Espermocultura Bacteriolgico Urocultura 1 jato Cultura para materiais diversos Mtodo: Cultura em meios adequados para isolamento de diversos microrganismo. Conservao: Aps a coleta encaminhar ao laboratrio de microbiologia o mais rpido possvel. O material colhido em meio(STUART) estvel 24 horas a temperatura ambiente. Interferentes: A administrao de antimicrobianos no impede a realizao da cultura, mas pode interferir no resultado, em algumas situaes. Valor de Referncia: Cultura negativa. Interpretao: til no diagnstico de infeces microbianas nos diversos stios corporais, identificao dos microorganismos e testes de sensibilidade aos antibiticos. -Dados americanos mostram uma incidncia de infeco por S. agalactiae de 1,4 e 0,4 por mil crianas nascidas vivas, sem uso e com uso da quimioprofilaxia, respectivamente. Dos infectados, cerca de 6% morrem e de 15% a 30% dos que apresentam meningite evoluem com seqelas neurolgicas. A doena causada por essa bactria pode se apresentar precocemente (idade inferior a sete dias) ou tardiamente (idade superior a sete dias), tendo quadros clnicos variados que incluem bacteriemia, pneumonia ou meningite e, mais raramente, celulite ou osteomielite. Aproximadamente 25% dos casos ocorrem em pra estratgia mais racional para diminuir a incidncia da doena em neonatos. - O S. agalactiae, ou estreptococo do grupo B de Lancefield, um coco grampositivo, beta-hemoltico, que apresenta rpido crescimento nos meios utilizados em

rotina microbiolgica. Essa bactria encontrada na microbiota do trato gastrointestinal e/ou dos tratos genital e urinrio. Os ndices de colonizao em gestantes variam de 10% a 30%, conforme a populao estudada. Setor: Microbiologia TRANSPORTE DE AMOSTRA PARA ANALISE Material: caixa box, termmetro, frascos de agua, caneta, luvas Todo material biolgico deve ser transportado em meio isotrmico, higienizvel e impermevel, o termmetro garante o controle da temperatura dando estabilidade a amostra biolgica desde a coleta ate realizao do exame. Na caixa tem a designao MATERIAL INFECTANTE``. FEZES Devem ser transportadas em maletas trmicas com gelo reciclvel para manter a refrigerao temperatura ate 25 C CULTURA DE SECREOES ,FLUIDOS BIOLOGICOS E ESCARRO -Microbiologia :Devero ser transportados em geladeiras, acondicionados em maletas trmicas no com gelo reciclvel-temperatura 23 a 25C. Amostras de BK devem ser separadas das demais sendo colocadas em sacos plsticos identificadas para no serem abertas em local inadequado. URINA Devem ser acondicionadas em maletas trmicas com gelo reciclvel temperatura 13 a 23 C.

CULTURA DE SECREO URETRAL

CULTURA PARA FUNGOS

CULTURA PARA MICOBACTRIAS