Meios de Cultivo

Profª Thamires Romera da Silva

Contato: thamires.romera@uel.br
O que é?
“Substrato” necessário e que permite o crescimento de
microrganismos em condições artificiais e controladas em laboratório
Fatores que interferem no crescimento

Físicos Químicos Metabolismo

Temperatura Orgânicos: Carbono, Aeróbicos,
Oxigenação Nitrogênio Anaeróbicos, Anaeróbio
Consistência do meio Inorgânico: Fósforo, facultativo
Enxofre
Composição química
A bactéria E. coli é constituída por

● 70% Água
● 15% Proteinas
● 2% Lipídeos
● 1% LPS
● 0,7% Peptideoglicano Entender a constituição
é importante ponto para
se escolher um meio
Alta variedade = Não existir um
meio universal
 Estados físicos - Meios
Solidificado – Ágar – 1,35 a 2,0%

Semi Solidificado – Ágar – 0,2 a 0,75%

Líquido – ausência de ágar

 Os meios de cultura
• Quimicamente definidos
• Complexos
• Seletivo
• Diferencial
• Enriquecido
 Os meios de cultura : Constituição
• Quimicamente definidos

Um meio quimicamente definido é aquele cuja

composição exata é conhecida
 Leuconostoc mesenteroides

Os meios de cultura
• Quimicamente definidos

Meio definido para E. coli ANVISA (2010)

 Os meios de cultura
• Complexos

A composição química pode variar (Lote)

Rotineiro
 Os meios de cultura
• Complexos

Meio Ágar nutriente BDA/BDC

 Os meios de cultura
• Seletivo

Elaborados para impedir o crescimento de bactérias

indesejadas e favorecer o crescimento dos
microrganismos de interesse.
 Os meios de cultura
• Diferencial

Diferenciação das colônias de um microrganismo

desejado em relação a outras colônias
crescendo na mesma placa.
 Os meios de cultura
• Enriquecido

Geralmente é líquido e fornece nutrientes e

condições ambientais que favorecem o crescimento
de um microrganismo específico (Seletivo).
Exemplos: Stuart
• Meio de transporte

Carente de fonte de nitrogênio – impede a

multiplicação.
Transporta e conserva
Auxilio de “swab” estéril – coleta e já guarda
Manter em temperatura ambiente até semear
O mais importante é o não crescimento de
microrganismos
 Exemplos: Ágar sangue
• Enriquecido - não seletivo - diferencial
Ótimas condições para a maioria dos
Staphylococcus spp. microrganismos – não fastidiosos
A presença de eritrócitos íntegros favorece a
formação de halos de hemólise – diferenciar
Streptococcus spp. – Staphylococcus spp.
Klebsiella spp. Meio comercial + Sangue desfibrinado de
Streptococcus spp. carneiro ou coelho
5ml para cada 100ml de meio
No preparo não adicionar sangue no meio
quente
Exemplos: Ágar chocolate
• Enriquecido - não seletivo - fastidiosos
Hemólise – Lise de hemácias – mais nutrientes
para microrganismos fastidiosos
Sangue de Cavalo, Carneiro e Coelho
Meio base comercial + Sangue – 5ml para 100ml
Observação: adicionar suplementos a base de
NAD (coenzima I) e cisteína
Hamephilus spp.; Neisseria spp.; Moraxella spp.
Meio rico – Lembrar de combinar técnicas
(Gram)
Exemplos: CLED (Cystine Lactose Eletrolyte
• Diferencial e não seletivo
Deficient)
Isolamento e quantificação de
microrganismos
Amostras de urina (permite o crescimento da
maioria dos patógenos)
Deficiência de eletrólitos – inibe “véu” Proteus
spp. Shigella spp.
Presença de cloreto de sódio – inibe
crescimento exagerado
Lactose (+) amarelo (-) azul
Cresce: Gram +; Gram - ;
Fungos
Exemplos: Mac Conkey
• Seletivo e Diferencial
Inibe o crescimento de Gram + (Cristal
Violeta)
Menor concentração de sais biliares
(não é tão seletivo)
Possível diferenciar bactérias
fermentadoras de lactose
Ex: Proteus mirabilis (não fermentador e
incolor)
Escherichia coli (fermentadora – rosa)
 Exemplos: Ágar SS (Salmonella – Shigella)
• Seletivo e Diferencial Inibe o crescimento de Gram + (Sais de
bile, verde brilhante, citrato de sódio)

Presença de lactose – Microrganismos

fermentadores:
(+) Cor de Rosa (-) Transparentes
Citrato férrico e Tissulfato de sódio (Cor
preta na colônia)
Amostra de fezes, alimentos e água
Não autoclavar
 Exemplos: BHI (Brain Heart Infusion)
• Enriquecido e complexo
É um meio derivado de nutrientes de
cérebro e coração, peptona e dextrose.
A peptona e a infusão são fontes de
nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.
Muito utilizado no dia a dia
Inóculos
 Exemplos: MH (Mueller Hinton)
• Enriquecido e complexo
Meio indicado para testes de
sensibilidade a antibióticos (OMS)
Proporciona rápido desenvolvimento
para as bactérias
OK escolhi o
meio, eai?
Passo a passo do
preparo
 Placa de petri 20ml Tubo 3ml
Cálculo do meio Precisamos de 10 placas e 8 tubos

20x10 = 200 ml c/ ágar

Extrato de carne:
3x8 = 24 ml s/ ágar
3g ---------- 1000ml
? ----------- 200ml

200ml Ágar nutriente: Extrato de carne:

Extrato de carne = 0,6g 3g ---------- 1000ml

Peptona = 1g 0,6g ----------- 200ml

Ágar = 3g
Água destilada =
200ml
Método de esterilização
Filtragem
121ºC
00:15
Leve a teste de
esterilade

Pronto
após 24 horas
Obrigada !!
Contato: thamires.romera@uel.br