Meios de cultura de bactérias: classificação, tipos e usos

Meios de cultura contêm nutrientes e parâmetros de condições físicas necessários para o crescimento dos
micróbios. Definem-se como sendo um conjunto de substâncias orgânicas e inorgânicas que fornecem aos
microrganismos, elementos necessários ao seu crescimento e desenvolvimento.

Ingredientes básicos de um meio de cultura

 extrato de carne
 extrato de leveduras
 peptonas
 NaCl
 água destilada
 agar

Extrato de carne
 extrato aquoso concentrado de carne de vaca. É rico em produtos de degradação de
tecidos de animais solúveis em água, tais como compostos orgânicos azotados, hidratos
de carbono, vitaminas, sais minerais, factores de crescimento.
Extrato de leveduras
 fornece uma grande quantidade de aminoácidos, factores de crescimento (principal/ do
complexo B) e sais inorgânicos (particularmente potássio e fosfatos). Além disso pode
conter também hidratos de carbono.
Petonas
 obtidas da digestão de carne magra ou de outras substâncias proteicas (caseína, fibrina
ou farinha de soja)
 compostos orgânicos azotados, hidratos de carbono, vitaminas, sais minerais, factores de
crescimento.
Cloreto de sódio
 usado para manter a isotonia (pressão osmótica) do meio com as células (principalmente
GV) e também com os microrganismos.
Água destilada
 como não contém sais minerais não altera a composição dos meios de cultura.
Agar
 carbohidrato complexo de origem vegetal obtido de algas marinhas (como p. ex. Gelidium
corneum, Acanthopelis japonica). É utilizado para a solidificação dos meios de cultura; dá
uma consistência gelatinosa.

Nem todos os microrganismos podem crescer em meios de cultura simples e de facto muitos não podem
crescer em nenhum meio de cultura conhecido. Organismos que não podem crescer em meios de cultura
artificiais são chamados de parasitas obrigatórios. Mycobacterium leprae, rickettsias, Chlamydias, e
Treponema pallidum são parasitas obrigatórios.
Os meios de cultura bacteriológicos distinguem-se na base da composição, consistência e propósito/ uso.

Classificação dos meios de cultura com base na origem ou composição

Naturais - são os que se encontram livremente na natureza tais como leite, ovos, batata, etc.
Artificiais - são os que se preparam segundo uma fórmula. Os meios artificiais de acordo com os seus
ingredientes podem dividir-se em:

1. Sintéticos ou quimicamente definidos. Um meio quimicamente definido e aquele preparado a

partir de ingredientes purificados e portanto com uma composição exacta e conhecida.
2. Empíricos ou não sintéticos (meios quimicamente indefinidos). Contêm pelo menos um
componente que não foi nem purificado nem completamente caracterizado, e nem é
completamente consistente de lote em lote. Muitas vezes esses são proteínas parcialmente
digeridas de várias fontes de organismos. O caldo nutriente por exemplo, é derivado de culturas
de leveduras.

Meios não sintéticos podem ser simples ou complexos dependendo do suplemento incorporado. Um meio
não sintético ou simples é capaz de suprir os requerimentos nutricionais de microrganismos que exigem
factores de crescimento relativamente inferiores enquanto os meios não sintéticos complexos suportam o
crescimento dos microrganismos mais fastidiosos.

Classificação na base da consistência ou estado físico:

1. Meios sólidos. Contêm agar em concentrações que variam de 2.0-3.0%. os meios sólidos tem
uma estrutura física e permitem que a bactérias cresçam em formas físicas informativas ou úteis
(exemplo: colónias ou estrias). São úteis para o isolamento de bactérias ou para determinar as
características das colónias do isolado.
2. Meios semi-sólidos. São preparados com agar em concentrações de 0.5% ou inferiores (0.25-
0.50). Têm uma consistência suave e são úteis para o cultivo de bactérias microaerófilas ou para
determinação da motilidade das bactérias.
3. Meios líquidos (caldos). Esses meios contêm quantidades específicas de nutrientes mas não
têm vestígios de agentes solidificantes (gelificantes) ou de agar. Os caldos servem para vários
propósitos como a propagação de um grande número de organismos, estudos de fermentação, e
vários outros testes. Por exemplo: testes de fermentação de açúcares, caldo MR-VP.

Classificação dos meios de cultura com base no propósito, uso funcional ou aplicação

Muitos meios com propósito especial são necessários para facilitar a identificação, enumeração, e o
isolamento de certos tipos de bactérias. Para atender a essas necessidades, vários meios estão
disponíveis.

1. Meios de propósito gerais ou básicos. Basicamente são meios simples que suportam a maior
parte das bactérias não-fastidiosas (não exigentes em termos nutricionais). Água peptonada, caldo
 nutriente e agar nutriente são considerados meios básicos. Estes meios são geralmente usados
para o isolamento primário dos microrganismos.

Agar Nutriente

2. Meios enriquecidos (factores de crescimento adicionados):

Agar sangue

Meios enriquecidos são obtidos por adição de nutrientes extra na forma de sangue (5%), soro (10%),
liquido ascítico (25%), gema de ovo, etc. aos meios básicos. São usados para o crescimento de bactérias
fastidiosas. Agar sangue, agar chocolate são alguns dos meios enriquecidos. O agar sangue é preparado
por adição de sangue (5-10% do volume) à base do agar sangue. Agar chocolate também se conhece
como como agar sangue aquecido ou lisado.

3. Meios selectivos: São designados para impedir o crescimento de alguns microrganismos enquanto
favorecem o crescimento de outros. São meios sólidos. Qualquer meio de agar poderá tornar-se selectivo
por adição de certos agentes inibidores que não afectam ao patógeno de interesse. Vários mecanismos
fazem um meio selectivo incluindo a adição de antibióticos, marcadores, químicos, alteram o pH ou a
combinação de todos.

a) Meios selectivos de isolamento: são meios sólidos ou com base de agar de modo a permitir o
isolamento especifico de colónias de bactérias. Ex. Agar SS; Endo agar.

Outros exemplos de meios selectivos incluem:

 “Mannitol Salt Agar” e “Salt Milk Agar” usados para recuperar S.aureus. Contem 10% NaCl.
 “MacConkey’s Agar” usado para os membros da família Enterobacteriaceae. Contem sais de bile
que inibem a maioria das bactérias Gram positivas.
 “Crystal Violet Blood Agar” usado para recuperar S. pyogenes. Contem 0.0002% de cristal violeta.
 Lowenstein Jensen Medium usado para recuperar M.tuberculosis. É tornado selectivo por
incorporação de verde malaquita. Outros.

b) Meios selectivos de enriquecimento: Os meios de enriquecimento têm consistência líquida.

Meios de enriquecimento são usados para aumentar a concentração relativa de certos
microrganismos antes de serem inoculados em meios sólidos. Estes meios inibem o crescimento
de bactérias indesejáveis comensais ou contaminantes de amostras clínicas. Ao contrário dos
meios selectivos, os meios de enriquecimento são tipicamente usados como caldos e também
servem para recuperar patógenos de amostras de fezes. Exemplos de meios enriquecidos
incluem: caldo selenito, caldo tetrationato e agua peptonada alcalina (APW).

Ambos meios servem o mesmo propósito.

4. Meios diferenciais ou indicadores

Certos meios são designados de modo que bactérias diferentes ou grupos de bactérias poderão ser
reconhecidas com base na cor das colónias.

Várias abordagens incluem a incorporação de tintas/ marcadores, substratos metabólicos, etc., de

modo que as bactérias que os utilizam apareçam como colónias diferentemente coradas. Esses meios
são chamados de meios diferenciais ou indicadores. Meios diferenciais permitem o crescimento de
mais de um microrganismo de interesse mas com colónias morfologicamente distintas.

Exemplos de meios diferenciais incluem:

 “Mannitol salts agar” (fermentação do manitol = amarelo)

 Agar sangue (vários tipos de hemólise. Ex. α, β e γ)
 Agar Mac Conkey (fermentadores da lactose, colónias rosadas, enquanto os não
fermentadores da lactose produzem colónias pálidas ou incolores.
Regras de cultivo de bacterias