NUTRICAO E CULTIVO DE MICRORGANISMOS

Bactérias diferentes exigem meios de nutrição diferentes

Muitos podem ser cultivadas facilmente e outros que não podem ser cultivadas
artificialmente, pois as exigências nutritivas são variáveis entre os microrganismos. Muitos
são cultivados por meios simples e outros necessitam de condições especiais para seu
cultivo.
Exigências nutritivas: os elementos mais importantes – carbono e nitrogênio -
 Todos os organismos vivos requerem uma fonte de carbono.
O carbono é uma molécula fundamental para a síntese, como um arcabouço para a
biossíntese de várias moléculas biológicas. São classificadas em dois grupos de acordo a
fonte de carbono que precisa
o Heterotróficos: utilizam compostos orgânicos como sua principal fonte de carbono.
o Autotróficos: utilizam dióxido de carbono como sua principal, ou até mesmo única,
fonte de carbono.
 Todos os organismos necessitam de nitrogênio.
o Gasoso ou atmosférico = fixação do nitrogênio
o Compostos nitrogenados orgânicos ou inorgânicos
 Outros elementos essenciais são:
Hidrogênio e oxigênio: síntese de compostos orgânicos – essenciais em condições
variáveis, dependem da espécie cultivada
Enxofre: biossíntese dos aminoácidos
Fósforo: síntese de ácidos nucléicos e ATP
o Água
o Elementos minerais (Na+, Fe+2, Zn+2, Cu+2, Mn+2, Co+2, Mo+6) – são requeridos em
pequenas quantidades, microelementos.
o Vitaminas
Esses elementos devem estar presentes na base, no meio de cultura
Classificação nutricional dos seres vivos:
− Quanto a fonte de energia e a fonte de carbono temos:
Fototrofico – utiliza a luz
Quimiotrofico – oxida compostos químicos para produzir energia
 Fototroficos+Autotroficos=Fotoautotroficos
bactérias do enxofre verde e púrpura(arqueobacterias), algas, plantas, cianofíceas
 Fototroficos+Heterotroficos=Fotoheterotroficos
bactérias púrpuras e verdes não enxofradas(arqueobacterias)
 Quimiotróficos+Autotróficos=Quimioautotróficos
bactérias nitrificantes, do ferro, hidrogênio e enxofre
 Quimiotróficos+Heterotróficos=Quimioheterotróficos
muitas bactérias, fungos, protozoários e animais (eubactérias) – bactérias que são
importantes na área da saúde são pertencentes desse grupo
CULTIVO DE BACTERIAS
Métodos de obtenção de culturas puras
1. A importância da descoberta do ágar – O ágar é um polissacarídeo extraído de algas
marinhas e tem a função de tornar o meio de cultura solido. Embora seja um açúcar não é
utilizado pelos microrganismos como fonte de nutrientes. Foi essencial para o sucesso
no cultivo na separação e isolamentos dos microrganismos.
2. O método do esgotamento (estrias)
3. O método Pour plate
4. O método de espelhamento em placa (spread plate)

CULTIVO DE MICRORGANISMOS
 Meios de cultura: complexo de substâncias capazes de fornecer ao microrganismo
ambiente e elementos nutritivos necessários ao seu crescimento
 Tipos de meios:
- Quanto a origem:
 Meios sintéticos - quimicamente definidos – Útil nos estudos nutricionais. Utilizados em
laboratórios de pesquisa para levantamento e estudo de microrganismos particulares
 Meios complexos – adição de produtos naturais (sangue, extrato de carne, soro etc.) –
Ricos em nutrientes, mas composição nutricional desconhecida.
- Meios utilizados na rotina de laboratório
- Quanto ao estado físico: Diferença está na presença do agente solidificante – Ágar
 Meios líquidos – caldo - Quando não é adicionado o agente solidificante. As bactérias
crescem todas juntas não sendo possível separá-las
 Meios sólidos – Ágar (2-2,5%)
 Meios semissólidos – Ágar (0,5-1%) – Utilizado para avaliar a motilidade dos
microrganismos.
- Quanto a finalidade:
 Seletivos (ex. ágar manitol)
 Diferenciais (ex. ágar EMB)
 Seletivo diferencial (ex. EMB, ágar macConkey)
 De enriquecimento (ex. caldo Kauffmann)
 MEIOS PARA O CULTIVO DE BACTÉRIAS
Organismos fastidiosos: MOR exigentes do ponto de vista nutritivo, crescendo
preferencialmente em meios com suplementos especiais como sangue.
 MEIOS PARA O CULTIVO DE FUNGOS
É necessário deixar o meio seletivo para fungos, sendo necessário inibir o crescimento de
bactérias, porque as bactérias têm crescimento rápido, já os fungos têm um crescimento
lento.
Em geral apresentam uma concentração maior de açúcar (4%) e um pH menor – mais
ácido (3.8 a 5.6)
 MEIOS PARA O CULTIVO DE ANAEROBIOS
Precisa de uma atmosfera sem oxigênio
 Meio reduzido: adição de um agente redutor que remove o oxigênio (ex. caldo
tioglicolato de sódio)
 Culturas em camadas altas de ágar
 Incubação em câmara de anaerobiose
 MEIOS E METODOS PARA A CULTURA DE TECIDOS
Finalidade – isolamento de vírus, utilizada na produção de vírus para (produções de
vacinas, estudos e produções de pesquisas e outros meios)
- Cultura de células animais
 Culturas primarias de células: explants de tecidos – tempo de vida curto
 Linhagem de células contínuas: células transformadas – imortalizadas através de
métodos laboratoriais
Imortalização: multiplicação por várias gerações em um ambiente laboratorial apropriado.

REPRODUÇÃO E CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS

- Estuda características relacionadas ao aumento no número populacional de
microrganismos. As formas de reprodução podem variar entre assexuadas e sexuadas.
Assexuadas – forma de divisão dos microrganismos do reino monera.
- O crescimento de microrganismos não é em seu tamanho, mas sim no aumento no número
de indivíduos.
o Principais formas de reprodução
− Bacterias (assexuada) – elas se reproduzem exclusivamente de forma assexuada.
 Bipartição - ocorre a divisão do organismo ao meio, originando outro ser idêntico ao
que foi dividido.
Outras formas raras de reprodução assexuada: restritas a gêneros e/ou espécies
 Fragmentação (Nocardia) – a divisão acontece na extremidade
 Brotamento (rhodopseudomonas acidófila)
− Fungos (assexuada/sexuada)
 Brotamento
 Esporulação (no fungo forma de reprodução, já na bactéria meio de defesa)
CRESCIMENTO POPULACIONAL
Tempo de geração: tempo necessário para a célula bacteriana se dívida, ou seja, para que a
população se duplique. Crescimento sempre em progressão geométrica, a população sempre
dobra de número de indivíduos, e após esse tempo de criação geram colônias bacterianas.
 1ª fase – onde não há um aumento no
número de indivíduos, passam um
determinado tempo sem se reproduzir.
LAG – células sintetizando enzimas, e
a manutenção do número de
indivíduos.
2ª fase – as células entram em fase de
reprodução continua. Fase de divisão
logarítmica LOG – aumento no
número de células.
3ª fase – estacionaria onde a divisão
estaciona, ocorre a paralisia do
crescimento e se encontram as colônias com características próprias.
4ª fase – declínio, onde há a escassez de nutrientes e o acúmulo de dejetos, elas entram em
declínio e morrem
- Cultura contínua: o volume da cultura e a concentração celular são mantidos constantes
pela adição de meio estéril fresco na mesma proporção em que é removido o meio contendo
as células.

FATORES AMBIENTAIS QUE INFLUENCIAM O CRESCIMENTO

 Temperatura – fator importante no
crescimento
Classificação de bactérias em relação á
temperatura:
 Psicotrófilos (4-10°C –
Flavobacterium)
 Psicrófilos (15-20°C, ótimo de =
15°C – Pseudomonas)
 Mesófilos (12-45°C, 37°C – E.
coli)
 Termófilos (42-68°C, 62°C –
thermococcus)
 Hipertermófilos (80-113°C,
105°C – pyrodictium brockii)
 pH:
acidófilas (thiobacillus – pH 0,5)
pH: 4.0 a 9.0 – ótimo pH 7,5
Alcalifilicos (bacillus – pH 11)
Fungos – tendem a ser mais acidófilos
que as bactérias (pH<5).
 Tensão de oxigênio:
Classificação:
Aeróbios (ex. Mycobacterium e
Legionella)
Anaeróbios estritos (ex.
Methanobacterium)
Anaeróbios facultativos (ex.
Escherichia coli)
Microaerofilos (ex. Campylobacter
jejuni)
Anaeróbios aero tolerantes (ex.
Clostridium perfringens)
 Variação na pressão osmótica
 Água: essencial a qualquer
microrganismo, embora as necessidades
sejam variadas. É o solvente universal,
mas sua disponibilidade é variável
(soluções com açucares ou sais tem
menos água disponível).
 CONTROLE DE MICRORGANISMOS (MOs)

Fundamentos do controle de MOs:

 Antimicrobianos – substâncias que matam os MOs ou previnem seu crescimento.
 Microbicidas – matam os MOs
− Esterilização: destruição total dos MOs
≠ esterilização comercial
 Microbiostaticos: inibem o crescimento dos MOs.
Aspectos fundamentais dos antimicrobianos
 Padrão de morte de uma população microbiana.
Morte exponencial: A morte celular ocorre em uma relação constante, em dado
período.

 Condições que influenciam a atividade microbiana.

 Tamanho da população;
 Intensidade ou concentração do agente;
 Tempo de exposição ao agente;
 Natureza do material que contém os MOs;
 Características dos MOs que estão presentes.
 Mecanismos de destruição das células microbianas.
Alteração da permeabilidade da membrana plasmática. Danos as proteínas e aos ácidos
nucleicos; desnaturação das proteínas; destruição do DNA ou RNA.
Agentes físicos aplicados ao controle de MOs
ALTAS TEMPERATURAS: mais utilizado porque o calor garante uma esterilização
eficaz e completa, mas nem todos os matérias podem ser submetidos a altas
temperaturas, pois pode afetar sua forma e assim sua funcionalidade.
− Calor úmido: causa a desnaturação e coagulação das proteínas vitais.
- Vapor d’agua sob pressão: o aparelho autoclave (121°C – 15’-1atm)
- Métodos que indicam se a esterilização foi obtida por TMT com calor. –
bioindicadores ex fitas de alto clave onde sua mudança de cor indica a esterilização.

Água fervente Não esterilizam;

Pasteurização Matam os MOs vegetativos
Utilizado matar patógenos
Pasteurização clássica: 63°C – 30’
Pasteurização de alta temperatura e curto tempo (HTST) 75°C – 15”
 Tratamento de temperatura ultraelevada (UHT) 140-150°C = segundos
Calor seco: causa oxidação dos constituintes orgânicos da célula (“queima” lentamente as
células)
Incineração e flambagem – bico de bunsen e forno de ar quente (170°C)
RADIAÇÕES: esterilizações a fio – uteis na esterilização de objetos sensíveis ao calor
 Radiações ionizantes: conduzem elétrons que rompem as moléculas em átomos ou
grupos de átomos.
Raios gama (cobalto radioativo) e raios X
 Radiações não-ionizantes: excitam os elétrons, resultando em uma molécula que reage
diferentes das moléculas não irradiadas.
Luz Ultravioleta  DNA
BAIXAS TEMPERATURAS:
 Refrigeração (0 e 7°C) e congelamento (< - 18°C)
 Não podem matar os MOs, inibem o metabolismo dos mesmos, preservando-os por
um longo tempo.
FILTRACAO:
 Filtros de partículas de ar de alta frequência (HEPA)
 Processo físico que utiliza membranas filtrantes (0,01nm)
Agentes químicos aplicados no controle de MOs
Desinfecção: mata as formas vegetativas de MOs patogênicos, mas não necessariamente
suas formas esporuladas. Utilizado em superfícies inanimadas. – DESINFETANTE
Antissepsia: mata as formas vegetativas de MOs patogênicos, usualmente aplicado na
superfície do corpo, para prevenir a multiplicação dos MOs. – ANTISEPTICO
Sanitização: reduz as contagens microbianas a níveis seguros de saúde publica (mata
99,9% dos MOs contaminantes) em objetivos inanimados.
Degerminação: remoção mecânica dos micróbios em uma área limitada
 Fenol e compostos fenólicos
Joseph Lister (1800) → reduzir infecções em cirurgias
− Mec. De ação: rompem a membrana plasmática, desnaturação enzimática
− Bifenóis (triclosano): sabonetes e loções
 Álcoois: álcool etílico (70%) e álcool isopropílico (90%)
− Mec. De ação: desnaturação de proteínas, lise da membrana celular, lise de lipídeos
(vírus envelopados)
 Biguanidas (clorexidina)
− Mec. De ação: rompem a membrana plasmática
 Halogênios
Iodo e compostos iodados
− Aplicações e formas: tinturas de iodo e iodóforos
Cloro e compostos clorados
− Aplicações e formas: hipoclorito de sódio, hipoclorito de cálcio, cloraminas
− Mec. De ação: Poderosos agentes oxidantes, agem impedindo o funcionamento das
enzimas.
 Metais pesados e seus compostos: Mercúrio, prata, zinco e cobre (mercurocromo e
mertiolate, nitrato de prata (1%), sulfato de cobre, compostos de zinco)
 − Mec. de ação: inativam as proteínas celulares.
 Agentes de superfície
− Detergentes e sabões: diminuem a tensão superficial e são utilizados para limpar
superfícies, tornando os MOR acessíveis a outros agentes; alguns podem conter
substâncias antimicrobianas.
Agentes químicos esterilizantes
− Óxido de etileno e outros esterilizantes gasosos: inibem funções vitais da célula.
− Esterilização por plasma (peróxido de hidrogênio): inibem as funções vitais; utilizado
para esterilizar instrumentos médicos.

ANTIBIOTICOS E QUIMIOTERAPICOS
Antibióticos e quimioterápicos
Paul Erlich (1905): sulfonamidas (Salvarsan)
Alexander Flemming (1920): penicilinas

Características de um antimicrobiano ideal

 Exercer toxicidade seletiva.
 Ter amplo espectro de ação.
 Impedir o surgimento de
Microrganismos resistentes.
 Não agir sobre a microbiota normal.
 Não causar efeitos colaterais.
Toxicidade seletiva?

ESPECTRO DE AÇÃO
Atividade antibacteriana
 Espectro específico
Vancomicina (gram positivos), polimixina (gram negativos)
 Amplo espectro
Tetraciclinas (gram positivas e negativas)

Antibióticos X resistência

Mecanismo de ação dos

antimicrobianos
 Inibição da síntese da
parede celular
bacteriana
 Antibióticos beta-lactâmicos (penicilina)
 Alteração da função da membrana plasmática
Polimixina
 Inibição da síntese de proteínas
Aminoglicosídeos (30S), cloranfenicol (50S)
 Inibição da síntese de ácidos nucléicos
Novobiocina (DNA girase), Rifampicina (RNApolimerase)
 Ação como anti-metabólito (ácido fólico)
ex. sulfonamidas