EBT0309A-Microbiologia: Nutrição e Crescimento Bacteriano

Universidade estadual paulista UNESP

Guia de estudo, definições e notas.
- Crescimento.
- Aumento do número de células microbianas (multiplicação celular) numa
população. As bactérias se reproduzem por divisão binária onde cada célula
origina duas, o tempo necessário para isso ocorrer é chamado de tempo de
geração ou duplicação. Esse tempo varia entre minutos a dias, mas em geral é
de 1-3h.
- Crescimento exponencial (progressão geométrica).
 Fases do Crescimento
- Considerando um cultivo "batch" ou batelada, onde o substrato é todo
adicionado juntamente com a população bacteriana (ou de microrganismos
unicelulares em geral) no início, e após o término do crescimento, o cultivo é
encerrado (meio de cultura simples).
Considerando também que não há inibidores, e que se trata de um cultivo
exponencial temos uma curva de crescimento típica, com quatro fases
distintas:
- Fase LAG ou Latência: fase de adaptação, preparo de nutrientes e
enzimas para a fase seguinte, de crescimento.
- Não há aumento (crescimento) do número de células.
- Fase rápida.
- Fase LOG ou Exponencial: fase em que a cultura atinge o máximo
crescimento exponencial, variando de acordo com vários fatores tais como os
componentes do meio.
- Máquina genética da célula mais trabalha.
- Estacionária: Como não há renovação do meio de cultura durante o
crescimento exponencial, esse não ocorre indefinidamente, os nutrientes
acabam sendo exauridos ou os produtos excretados acabam inibindo o
crescimento.
Nessa fase não há incremento no número de células, mas há metabolismo
ativo de manutenção das funções celulares.
- Equilíbrio entre as células vivas e mortas;
- Diminuição drástica no processo reprodutivo;
- Ocorreu a produção de toxinas.
 - Declínio ou Morte: quando a cultura já exauriu e/ou há acúmulo de
substâncias tóxicas, as células morreram acompanhadas de lise celular.
Cinética do crescimento bacteriano
- Segundo MONOD: Em condições ideias de crescimento em cultivo Batch,
ou Batelada simples, (inoculo viável, fontes nutricionais, condições físico-
químicas, ausência de inibidores de crescimento) temos:
- dx/dt=k, X onde K é uma constante ou:
- dt=ux*dt (considerando dt como intervalo infinitamente pequeno, há uma
expectativa de biomassa (dX) proporcionando a soma X de células presentes
no intervalo)
- u (velocidade específica de crescimento)= (1/X)*dX/dt (eq. 1) ou
dX/X=u*dt (eq. 2)
- u=Expressa em h-1
Integrando a equação 2 com to=0 temos: Ln X = Ln Xo + u.t (eq. 3)
onde Xo=biomassa no início. Se ficar Ln X - Ln Xo = u*t e aplicando o conceito
do log da diferença de Ln X- Ln Xo = Ln X/ Xo e extraindo esse Ln temos:
A eq 4 e 5 que pode ser escrita de forma exponencial também X/Xo =
e^u*t ou X= Xo*e^u*t
- A lei do crescimento, tais como crescimento exponencial vale para os
procariontes e eucariontes que seguem o princípio da divisão binária, se
houver condições ideias para o crescimento, tais como ausência de inibidores,
e presença dos nutrientes necessários.
Condições físicas necessárias para o crescimento
- Temperatura:
- Mesófilos: 25-40 °C.
Patogênicas são geralmente mesófilas.
- Psicrófilos: 0-20 °C.
Mais frequentes entre 15-20 °C. Temperaturas maiores podem danificar a
membrana citoplasmáticas.
- Membrana rica em ácidos graxos insaturados.
- Encontradas em águas frias. A maioria dos microrganismos marinhos
estão nesse grupo. Alimentos conservados entre 4-10 °C por longos períodos
são degradados por esses organismos. Tais microrganismos tem suas enzimas
funcionando no frio, e se desnaturalizam rapidamente em temperaturas
moderadas. Possuem membrana com ácidos graxos mais insaturados.
- Termófilos: 45-85 °C.
 Crescem melhor entre 50-60 °C. Encontrados em áreas vulcânicas,
nascentes quentes. A maioria são bactérias.
- Membranas ricas em ácidos graxos saturados.
As células eucarióticas não crescem a temperaturas superiores a 60 °C
e isso pode estar associado às membranas das organelas internas que
precisam permanecer porosas para fluxo de ATP e RNA.
- Enzimas são produzidas mais rapidamente que nos mesófilos e mais
adaptadas a alta temperatura.
- Existe arqueobactérias (bactérias mais antigas) capazes de crescer a
103 °C (Thermococcus) a 110 °C. (Pyrodictium). Essas são bactérias termófilas
extremas.
- pH
- Acidófilas (crescem em pH muito abaixo de 7,0), neutras (pH 7,0) e
alcaligênicas (pH muito acima de 7,0).
* Substâncias tampões são colocadas no meio para manter o pH
(KH2PO4 e K2PO4).
- Independente do pH externo o microrganismo tem que manter o pH
interno próximo a neutralidade, expulsando ou absorvendo íons hidrogênio da
célula.
- A maioria das bactérias crescem entre pH 4-9, algumas toleram pH
alcalino (pH 11) tais como alguns *Bacillus.* Outras pH = 0,5 (*Thiobacillus*),
encontradas em água ácidas de minas onde enxofre e ferro estão presentes.
- Atmosfera
- Aeróbios estritos - Anaeróbios facultativos- Anaeróbios estritos e
Microaerófilos.
- Aeróbios estritos não possuem sistema enzimáticos que utilizem o O2
tais como catalase, superóxido dismutase, citocromo-oxidase.
- Catalase converte H2O2 em oxigênio molecular e água e a Peroxidade
converte H2O2 em água. Eliminando os radicais peróxido e superóxido
significa que não pode ser formado o OH.
- Os radicais hidroxila são altamente reativos e podem danificar qualquer
componente celular inclusive DNA,
- Os microaerófilos podem usar oxigênio para produção de energia, mas
ao contrário dos aeróbios não resistem níveis de oxigênio de 21% presentes na
atmosfera, crescem melhor em ambiente com 1-15%. Ex: Campilobacter jejuni,
Lactobacillus.
Fontes nutricionais:
- Os microrganismos utilizam compostos nutricionais do meio de cultura para
as reações catabólicas de produção de energia (catabolismo), e esta é utilizada
na biossíntese das macromoléculas (anabolismo).
- Os nutrientes podem ser divididos em:
1. Nutrientes essenciais: imprescindíveis para o crescimento celular.
1. Não sintetiza, e que o corpo precisa receber de forma exógena.
2. Nutrientes úteis e estimuladores do crescimento: não são essenciais
para o crescimento celular.
1. Podem ser fabricados pela célula.
- Fatores de Crescimento: Vitaminas - Tiamina (B1), Riboflavina (B2),
Niacina, Piridoxina (B6), Cobalamina (B12), Ácido fólico, Vitamina K, Biotina,
PABA, Ácido Pantotênico.
- Se faltar alguma coisa não há crescimento.
- Balanceamento.
- Ex: Nicotinamida - amida do ácido nicotínico (niacina), Riboflavina - FMN
e FAD.
- Aminoácidos essenciais.
Fontes de Energia:
- Energia Luminosa (fotossintetizadores): utilizam a energia luminosa através
da fotossíntese para a produção dos compostos orgânicos que serão utilizados
no catabolismo.
- QR: Coeficiente Respiratório - CO2 liberado/ O2 consumido.
- Q.R =1 *Chlorella* e *Scenedesmus* utilizam autotroficamente -
consomem C02, liberam O2 e fazem respiração, equilibrando a questão do
CO2 e o O2.
- Q.R > 1 pode indicar atividade fermentativa ou inibição da fotossintética
(produção de CO2).
-Fontes de Carbono (gera energia química):
1. Carbono orgânico - ex: glicose, frutose - E. coli, Bacillus, bactérias
patogênicas.
2. Carbono inorgânicas - ex: CO2 - *Thiobacillus*, *Nitrobacter*, Nostoc.
- Fontes de Nitrogênio.
1. Nitrogênio orgânico - proteínas, aminoácidos, peptídeos, bases
nitrogenadas, ureia, etc.
 2. Nitrogênio inorgânico - Amônia (gás), sulfato de amônio, nitritos,
nitratos.
a. Redução do nitrato a nitrito, pela enzima nitrato redutase (molibdênio
como cofator).
b. O nitrito é convertido em amônia, através da glutâmico
desidrogenase, formando ácido glutâmico (utilizado para síntese de outros
compostos nitrogenados), através de reações de transaminações.

— Funções: Participam da formação das biomoléculas. Os

nitratos/nitratos exercem papel adicional como fonte energética para alguns
tipos bacterianos.
- Minerais
- Consumidos em maior quantidade: Sais de enxofre, Fósforo, Sódio,
Potássio e Magnésio.
- Participam como cofatores enzimáticos (Mg) ou como constituintes
das macromoléculas, são utilizados em muito maior quantidade que os demais
minerais.
- Consumidos em menor quantidade: Sais de Zinco, Ferro, Molibdênio,
Manganês, Cobalto etc.
- Participam como cofatores enzimáticos.
- Ajudam as enzimas se tornarem bem-sucedidas em sua função
Classificação dos microrganismos quanto a requerimentos energéticos:
- Fototróficos ou fotossintetizadores (usam luz como fonte de energia), são
divididas em:
1. Aquelas que fazem fotossíntese anoxigênicas (não envolve O2 nem
hidrogênio da água), utilizam hidrogênio de H2S ou compostos orgânicos,
Essas são aquáticas e pertencem aos subgrupos:
- Bactérias púrpuras que utilizam e armazenam enxofre como doador
de hidrogênio (Chromatium e Thiospirillum) ou não (Rhodospirilum) e as
bactérias verdes que utilizam enxofre (Chlorobium).
2. As cianobactérias fazem a fotossíntese convencional como os
eucariotos, na presença da água, ou fotossíntese oxigênica, porque gera
oxigênio a partir da hidrólise da água gerando elétrons e prótons. O receptor
final de elétrons é o NADP que se transforma em NADPH2.

Os fototróficos também podem ser agrupados em:

 1. Fotoheterotróficos (fotoorganotróficos), onde a fonte de carbono é um
composto orgânico.
2. Fotoautotrófico (fotolitotróficos), utilizando CO2 como fonte de C.
(Cianobactérias). Bactérias púrpuras que utilizam e armazenam enxofre ou as
bactérias verde.
- Quimiotróficos (Usam energia química extraída de compostos orgânicos e
inorgânicos.)
- Quimiolitotróficos (ou quimioautotrófico): oxidam compostos inorgânicos
como FTE energia, e CO2 como fonte de C.
- Quimiorganotróficos (ou quimioheterotrófico): oxidam compostos orgânicos,
utilizam as vias de fermentação e respiração aeróbia ou anaeróbia tendo como
fonte de C um substrato orgânico.
- A decomposição da matéria orgânica pode usar qualquer um desses
processos.
- Classificação dos microrganismos quanto a fonte de Carbono.
- Autotróficos - bactérias que usam CO2 como única fonte de carbono.
- Heterotróficos - bactérias que utilizam fonte de c. orgânica.
Meio de Cultivo:
- Classificação quanto à composição:
- Sintético ou Definido: os nutrientes são todos conhecidos e
quantificados, normalmente usamos nutrientes ouros para formulação do meio.
Normalmente é muito caro e usado para pesquisas.
- Complexo: os nutrientes não estão definidos e nem sabemos a
quantidade deles, normalmente usamos extratos vegetais ou preparados de
origem animal.
Meio mais barato e usado.
- Ex: extrato de levedura, batata, infusão de cérebro e coração de
animais, peptona.
- Classificação dos meios quanto a função na microbiologia:
- Meio enriquecedor: contém extratos nutritivos de carne, levedura,
sangue e soro.
- Meio seletivo: presença de certas fontes nutricionais específicas.
- Meio diferencial: contém certos produtos que diferenciam visualmente
certas propriedades como hemólise, produção de H2S, pigmentação de
colônias etc.
 - Meio de contagem de microrganismo: Plate count agar ou meio de
contagem padrão.
- Meio de estocagem ou de manutenção: geralmente meios mais pobres
nutricionalmente, para o crescimento seja propositalmente mais lento.
- Meio rico ou mais pobre: o meio rico contém mais nutrientes essenciais
tais como fatores de crescimento, vitaminas e aminoácidos essenciais. O meio
pobre em geral é mais barato e usado para culturas que são menos exigentes
do ponto de vista nutricional.
Propagação em cultivos biotecnológicos:
- A produção biotecnológica de diferentes biomoléculas depende de um
aumento de escala de volume do cultivo que segue uma proporção (em geral
5-10% do volume da escala anterior), começando de um tubo de ensaio,
passando para frascos Erlenmeyer até fermentadores de diferentes tamanhos.
Teoria do Barril recordado:
- A nutrição é como um barril recortado de forma irregular na parte superior.
Quando você enche de água esse barril, a parte mais superior ou a parte mais
inferior do recorte?
- A mais inferior, nivelamento por baixo. A nutrição também funciona assim,
por isso é necessário um balanceamento dos nutrientes essenciais à célula.