Microbiologia Clnica

Portflio das Aulas Prticas 2014.1

Alunas: Ana Patrcia Valria Pinheiro Prof. ngela Veras Universidade de Fortaleza

Prtica - Coprocultura
A coprocultura (cultura de fezes) realizada para promover o crescimento de bactrias patognicas causadoras de diarrias. Dentre as mais pesquisadas esto: Salmonella ssp., shigella ssp., e algumas cepas enteropatognicas de E. coli. Outros patgenos so pesquisados apenas quando h solicitao mdica.

Prtica - Coprocultura
A amostra colhida atravs de evacuao normal e armazenada em recipiente limpo, ou utilizando-se um swab estril. A amostra sem conservante deve ser entregue ao setor em at 2 horas aps a coleta e amostra com conservante pode ser mantida em temperatura ambiente por at 24 horas aps a coleta.

Prtica - Coprocultura
Critrios de rejeio: No armazenar a amostra em geladeira; No coletar amostra de pacientes em tratamento com antimicrobianos; Fezes enviadas em fraldas; Swab no acondicionado em meio de transporte; Amostras de um mesmo paciente coletadas em um mesmo dia.

Prtica - Coprocultura
AMOSTRA 1

Prtica - Coprocultura
Meios de Cultura: - Para investigar as colnias de Shigella spp., Salmonella spp., e as cepas enteropatognicas de E. coli, semeamos uma poro das fezes nos seguintes meios: MacConkey (MC), Hektoen (HK) e caldo tetrationato (as colnias que cresceram foram posteriormente semeadas no gar SS).

gar McConkey (MC)

O meio gar McConkey um meio seletivo e diferencial . Seletivo porque permite apenas o crescimento de bactrias gram negativas e diferencial, porque tem lactose como nico carboidrato. As bactrias fermentadoras de lactose produzem colnias de diferentes tons de vermelho devido viragem do indicador vermelho neutro. As colnias de bactrias no fermentadoras de lactose aparecem incolores ou transparentes.

gar Hektoen (HK)

um meio mais seletivo e diferencial para aumentar o rendimento no isolamento de espcies de Salmonella e Shigella. A alta concentrao de sais biliares inibe o crescimento de todos os Gram-positivos e retarda o crescimento de muitas cepas de coliformes. Ocorre a mudana de cor do indicador (azul de timol) para amarela quando o pH do meio reduzido. O tiossulfato de sdio uma fonte de enxofre e o gs H2 S detectado pelo citrato frrico.

gar SS
um meio mais seletivo e diferencial no qual, a concentrao elevada de sais biliares e citrato de sdio inibe todas as bactrias Gram-positivas e muitas Gram-negativas. A lactose o nico carboidrato e o vermelho neutro o indicador. O meio contm tiossulfato de sdio, que uma fonte de enxofre, para detectar as bactrias que produzam H2S , sabendo q este forma um precipitado negro quando combinado com citrato frrico. A alta seletividade do agar SS permite o uso de inculo abundante

Prtica - Coprocultura
Aps a semeadura, os meios MC e HE foram incubados em estufa 35 - 37C por 18 24 horas.
Caldo tetrationato: Aps a incubao por 8 horas foi semeado no meio gar SS, e foi incubado novamente por mais 12 horas.

Prtica - Coprocultura
Obtivemos os seguintes resultados: Encontramos bactrias fermentadoras de lactose em todos os meios e houve formao de precipitado negro no gar HK e no SS
gar McConkey gar Hektoen
gar SS

Avaliao das Colnias

No gar McConkey ns podemos observar as colnias rosadas, circundadas por uma zona de bile precipitada, de bactrias fermentadoras de lactose, como a E. coli e as incolores ou alaranjadas, de bactrias no fermentadoras de lactose, como a Salmonella e a Shigella.

Avaliao das Colnias

No gar HK, pudemos observar as colnias de E. coli, que fermentam a lactose e ficam alaranjadas e, uma pequena presena de Salmonella, cuja colnia fica transparente com o centro negro.

Avaliao das Colnias

No gar SS, as colnias que fermentam a lactose, como as de E. coli, so rseas ou avermelhadas e as que no fermentam so transparentes, como as de Shigella. As colnias de Salmonella tambm so transparentes e podem ou no apresentar centro negro.

Colnias Selecionadas
Foram resgatadas duas colnias do meio HK e uma do meio SS. Todas com centro negro, suspeitas de Salmonella spp. para realizao das provas bioqumicas.

Provas Bioqumicas
As colnias 1 e 3 das nossas bactrias pescadas so previamente conhecidas como no fermentadoras de lactose, portanto, para este grupo so realizadas as provas de TSI, SIM, urease, fenialanina e citrato. A colnia 2 de uma bactria fermentadora de lactose e para esta colnia so realizadas apenas as provas TSI, SIM e citrato. Alm disso, todas as colnias foram semeadas em gar gelose (gar nutriente).

Provas Bioqumicas
TSI: pesquisa fermentao da glicose e da sacarose e produo de H2S SIM: Pesquisa a produo de sulfeto, indol e a motilidade da bactria. Citrato: Pesquisa se a bactria utiliza o citrato como nica fonte de carbono Urease: Pesquisa a produo da enzima urease por algumas bactrias Fenilalanina: Pesquisa a produo da enzima fenialanina.

Provas Bioqumicas- Col. 1

TSI: meio apresentou pice alcalino (vermelho) e base cida (amarela), revelando a fermentao apenas da glicose. Ausncia de gs. SIM: - Presena de H2S - Motilidade bacteriana (crescimento difuso da colnia) - Indol negativo Citrato - Positivo Urease: Negativo Fenilalanina: Negativo

Provas Bioqumicas- Col. 2

TSI: meio apresentou pice alcalino (vermelho) e base cida (amarela), revelando a fermentao apenas da glicose. Produo de H2S SIM - Presena de H2S - Motilidade bacteriana (crescimento difuso da colnia) - Indol negativo Citrato: Positivo Urease: Negativo Fenilalanina: Negativo

Provas Bioqumicas- Col. 3

TSI: meio apresentou pice alcalino (vermelho) e base cida (amarela), revelando a fermentao tanto da sacarose quanto da glicose. Sem formao de H2S. SIM - Ausncia de H2S - Motilidade bacteriana (crescimento difuso da colnia) - Indol negativo Citrato Positivo Urease: Negativo Fenilalanina: Negativo OBS: A suspeita era de que essa fosse uma colnia de E. coli, mas como o Citrato deu positivo, ela foi descartada.

Prova Sorolgica
Pela realizao da prova sorolgica, conclumos a suspeita da presena de colnias de Salmonella na amostra.

Doenas Causadas po Salmonella

A gastroenterite caracteriza-se por apresentar inflamao do trato gastrointestinal que afeta o estmago e o intestino delgado. Resultando em diarreia, vmito e clicas abdominais. Geralmente designada erroneamente como gripe intestinal ou gripe gstrica. Atinge adultos e crianas de ambos os sexos, em qualquer momento do ano. A paratifide similar, mas de menor gravidade, causada pela bactria Salmonella Paratyphi A, B ou C.