Apostila Defundamentos Laboratorio

CENTRO UNIVERSITÁRIO UNA
ROTEIRO DAS AULAS
FUNDAMENTOS DE LABORATÓRIO
ELABORADO POR:
Agnes Kiesling Casali
Carlos Alexandre Vieira
Karine Silvestre Ferreira
Maria Arlete Silva Pires
Paula Mendonça Leite
Belo Horizonte
Versão: 2018.2/2
1
SUMÁRIO
ORIENTAÇÕES PRELIMINARES ........................................................................................................................3

INSTRUÇÕES GERAIS PARA TRABALHO EM UM LABORATÓRIO ....................................................................3
PROCEDIMENTO DE LIMPEZA DE VIDRARIAS .................................................................................................4
SEGURANÇA NO TRABALHO ...........................................................................................................................4
AULA 01: Normas de segurança em laboratório – Biossegurança.................................................6

AULA 02: Riscos Químicos e Biológicos nos laboratórios............................................................15
AULA 03: Titulo: Noções básicas de primeiros socorros no laboratório.......................................22
AULA 04: Reconhecimento de Vidraria e material utilizados em laboratório..............................27
AULA 05: Manipulação de Balanças – Cuidados e Técnicas de Pesagem.....................................47
AULA 06: Aquecimento em laboratório......................................................................................52
AULA 07: Técnicas de pipetagem................................................................................................56
AULA 08: Preparo de soluções diversas......................................................................................61
AULA 09: Diluição de soluções...................................................................................................66
AULA 10: pH e solução tampão..................................................................................................70
AULA 11: Microscópio óptico:....................................................................................................78
AULA 12: Técnicas de coleta de sangue total venoso.................................................................84
AULA 13: Centrífuga e técnicas de funcionamento.....................................................................89
AULA 14: Espectrofotometria.....................................................................................................92
2
FUNDAMENTOS DE LABORATÓRIO
ORIENTAÇÕES PRELIMINARES
ATENÇÃO! NÃO SERÃO PERMITIDOS ALUNOS SEM JALECO DE MANGA COMPRIDA NEM COM TRAJES QUE
DESOBEDEÇAM AS REGRAS DE SEGURANÇA NO LABORATÓRIO!
Ao aluno:
Prepare-se antes de ir para o laboratório, lendo previa e cuidadosamente o texto relacionado à atividade a
ser executada. Confira o material recebido. Ao sair do laboratório, deixe cada coisa em seu lugar,
exatamente como foi encontrado.
Mantenha-se atento e concentrado durante a atividade para um melhor desempenho, e faça um registro
cuidadoso de todas as observações e resultados obtidos. Seja escrupuloso no registro das observações e
não altere os valores obtidos com o intuito de forçar sua coerência com os dados do problema. Não forje
observações que não tenham sido feitas realmente. Se o resultado final for insatisfatório, procure descobrir
a causa do erro e, somente se necessário, refaça a experiência. Siga as instruções fornecidas.
Em caso de qualquer problema, não aja sem antes consultar o professor ou o responsável pelo
laboratório.
Ao grupo:
Procurem harmonizar-se durante a execução da atividade para evitar acidentes.

Mantenham-se nos limites da bancada e com o menor índice de barulho possível.
Programem a execução das atividades para deixar a bancada sempre organizada.
INSTRUÇÕES GERAIS PARA TRABALHO EM UM LABORATÓRIO
Antes de começar qualquer atividade em um laboratório, o estudante deve estudar cuidadosamente os

detalhes completos da experiência, bem como sua respectiva teoria. Este não deve somente ter a ideia do
que deve ser feito e como se propõe a fazê-lo, mas em todas as vezes deve dar uma resposta inteligente a
perguntas como: o que se está fazendo e por quê? Pode-se então dizer que o exercício foi verdadeiramente
científico e não do tipo livro de receitas para cozinha.
O estudante logo perceberá que várias experiências dependem de um longo tempo de aquecimento ou
repouso, durante os quais nem sempre é necessário voltar toda a atenção ao que ocorre. Um bom
operador fará uso deste tempo, por exemplo, para fazer anotações, preparar o material e as condições
necessárias para uma próxima etapa (se houver), limpar e secar vidrarias.
Anotações de peso, volume e outros resultados numéricos podem ser feitas diretamente na própria
apostila de laboratório, no momento em que as observações forem feitas, para não correrem o risco de ser
perdidas. Os resultados de todas as experiências devem ser anotados em um caderno de notas, no
momento em que as observações forem feitas. Se a atividade requer anotações de peso, volume e outros
resultados numéricos, estes devem ser colocados diretamente no caderno de notas e não em pedaços de
papel, que podem vir a ser perdidos e desenvolverem atos de negligência no estudante.
Uma boa indicação da técnica do estudante será a aparência da sua bancada de trabalho. A parte superior
da bancada deve sempre estar limpa e seca.
Materiais frequentemente necessários no laboratório: calculadora científica e pincel para retroprojetor ou
3
marcador de CDs ou semelhante, nas cores azul e/ou preta.
SEGURANÇA NO TRABALHO
Qualquer acidente deve ser imediatamente comunicado ao professor.

Usar jaleco e outros acessórios de segurança eventualmente exigidos pela atividade: óculos de proteção,
luvas, botas etc.
Quanto aos calçados, estes devem ser totalmente fechados, ou seja, devem cobrir totalmente os pés e
principalmente o peito do pé, por ser esta a área mais exposta a respingos de líquidos.
Conservar limpo o local de trabalho.
Somente utilizar o material perfeitamente limpo.
Seguir cuidadosamente o roteiro da atividade.
Registrar os dados de cada etapa da atividade, inclusive com desenhos e representações esquemáticas.
Enxugar os frascos antes de aquecê-los.
Colocar o material no local de origem, à medida que for sendo liberado, respeitando os critérios de
limpeza.
Não jogar material sólido nas pias e, quando fazer uso da pia para descartar substâncias, manter a torneira
aberta.
Cuidar para que os restos de reagentes sejam devidamente destruídos ou armazenados, conforme
instruções nos roteiros das práticas ou fornecidas pelo professor.
Conservar os frascos sempre fechados, mesmo que outra pessoa vá utilizá-los na sequência, para evitar
penetração de umidade, que deteriora os produtos.
Não recolocar nos frascos de origem substâncias deles retiradas, que sobraram ou foram recuperadas,
sem a autorização do professor.
Não misturar substâncias ao acaso.
Evitar levar as mãos à boca ou aos olhos.
Quantidades pequenas de líquidos tóxicos não devem ser pipetadas sem a ajuda de uma pêra de sucção ou
de um pipetador. Na ausência destes, utilize pequenas provetas. Jamais fazer uso da boca.
Para perceber odores ou vapores, puxar com a mão um pouco do vapor em direção ao nariz, em
movimentos circulares.
Solventes voláteis, substâncias corrosivas ou gases tóxicos devem ser manuseados sempre dentro da capela
de exaustão devidamente ligada.
Para introduzir tubos de vidro ou termômetros em orifícios de rolhas, lubrificar com glicerina o orifício e a
peça a ser introduzida, segurar com um pano o material absorvente e introduzir com movimentos
circulares.
Lavar as mãos com água e sabão antes de sair do laboratório.
PROCEDIMENTO DE LIMPEZA DE VIDRARIAS
A limpeza dos materiais utilizados em laboratório é feita pelos técnicos de laboratório. No entanto, será
solicitado aos alunos que, em algumas situações, procedam à limpeza do material utilizado. Neste caso,
proceda à limpeza de acordo com as instruções a seguir.
SIGA RIGOROSAMENTE AS INSTRUÇÕES DO PROFESSOR OU DOS TÉCNICOS DE LABORATÓRIO COM
RELAÇÃO AO DESCARTE DE QUAISQUER RESÍDUOS PRODUZIDOS NO LABORATÓRIO.
OBSERVAÇÃO: JAMAIS FAÇA MOVIMENTOS BRUSCOS PARA ELIMINAR A ÁGUA NO INTERIOR DOS
RECIPIENTES.
4
Béqueres, elernmeyers, cálices, vidros relógio, provetas: após ter descartado líquidos ou sólidos contidos
nestes recipientes, sua limpeza deve ser feita como indicado a seguir:
1. Enxágüe o recipiente em água de torneira.
2. Com auxílio de uma esponja ou escova, lave o recipiente com detergente.
3. Enxágüe abundantemente em água de torneira.
4. Enxágüe por três vezes em água destilada.
Pipetas, buretas e balões volumétricos: após ter descartado líquidos contidos nestes recipientes, sua
limpeza deve ser feita como indicado a seguir:
1. Enxágüe abundantemente em água de torneira. Aguarde que toda água seja escoada.
2. Enxágüe por três vezes em água destilada.
3. Coloque em suporte próprio para secagem.
5
PRIMEIRA UNIDADE DE ENSINO:
BIOSSEGURANÇA
AULA 01: Normas de segurança em laboratório – Biossegurança
1. Competências
Identificar a importância da ABNT na segurança laboratorial;
Reconhecer os riscos inerentes ao ambiente laboratorial;
Reconhecer os equipamentos de proteção individual: jaleco, óculos, protetor facial, cabelos presos, luvas,
sapato fechado, máscara;
Reconhecer os equipamentos de proteção coletiva;
Conhecer as legislações aplicadas à biossegurança;
Utilizar o conteúdo para saber se comportar no laboratório em situações normal e em casos de acidente.
1.1 Correlação com as competências Profissionalizantes:

Biomedicina: Controle de Qualidade em Alimentos; Agentes Infecciosos e Respostas Imunológicas;
Farmacologia; Biologia Molecular e Biotecnologia; Citologia Clínica e Fluidos Corporais; Bioquímica Clínica;
Hematologia Clínica e Banco de Sangue; Controle de Qualidade de Laboratório; Imunologia Clínica; Análises
Toxicológicas e Criminalística; Microbiologia Clínica.
Ciências Biológicas: Biotecnologia Industrial e Ambiental; Biologia Molecular e Biotecnologia; Imunologia e
Microbiologia Aplicada;
Farmácia: Química Analítica e Instrumental; Processamento e Controle de Qualidade de Alimentos; Agentes
Infecciosos e Respostas Imunológicas; Farmacognosia; Farmacotécnica; Biologia Molecular e Biotecnologia;
Tecnologia Farmacêutica, Controle de Qualidade Físico-Químico e Microbiológico; Parasitologia e
Imunologia Clínicas; Hematologia e Banco de Sangue; Cosmetologia; Análises Toxicológicas e Toxicologia;
Microbiologia Clínica; Bioquímica Clínica,
2. Introdução:
Notícia publicada no G1 dia 05/12/2013 Estudante é internada após sofrer intoxicação em aula prática
(http://g1.globo.com/ma/maranhao/noticia/2013/12/estudante-e-internada-apos-intoxicacao-durante-
aula-pratica.html):
Fala da mãe da estudante de 15 anos “Ao descartar o material, ela não tinha os equipamentos apropriados
para que pudesse não haver o que aconteceu: ela inalou. Logo depois de inalar, ela sentiu-se mal, saiu da sala e
depois de alguns minutos ela foi levada para o [hospital] português, ficando só até o meio-dia. Fomos para casa e
às 19h o quadro agravou e tivemos que vir para o centro médico.” Nesse contexto, o que poderia ter sido feito
para evitar essa situação?
6
Referencial teórico
A biossegurança (vida + segurança) é o conjunto de ações voltadas para a prevenção, proteção do

trabalhador, minimização de riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento
tecnológico e preacional e amplia-se para a proteção ambiental e a qualidade. Assim, a biossegurança
envolve procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou
minimizar os riscos inerentes às atividades realizadas no laboratório.
A biossegurança pode também ser compreendida como um conjunto de normas e medidas que visa à
proteção da população e dos profissionais de saúde. Dessa forma, ao se iniciar um trabalho em laboratório,
é fundamental conhecer-se os procedimentos de segurança que irão permitir uma atuação com um mínimo
de risco.
Risco é a probabilidade de ocorrer um dano, ferimento ou doença. Eles são divididos em 5 categorias
(Portaria do Ministério do Trabalho, MT número 3214, de 08/06/1978) (Figura 1):
Figura 1 – Categorias de risco.
• Riscos biológicos  Os materiais biológicos abrangem amostras provenientes de seres vivos como
plantas, animais, bactérias, leveduras, fungos, parasitas (protozoários e metazoários) e amostras
biológicas provenientes de animais e seres humanos (sangue, urina, escarro, secreções, derrames
cavitários, peças cirúrgicas, biópsias entre outras). Incluem-se também os organismos
geneticamente modificados em que os cuidados são mais relevantes por albergarem genes com
características diferenciadas;
• Riscos ergonômicos  qualquer fator que possa interferir nas características psicofisiológicas do
trabalhador causando desconforto ou afetando a sua saúde;
• Riscos físicos  São riscos provocados por algum tipo de energia. Dependem dos equipamentos de
manuseio do operador ou dos ambientes que se encontram nos laboratórios. Podemos citar alguns
casos como calor, frio, ruídos, vibrações, radiações não-ionizantes, ionizantes e pressões normais.
Equipamentos que geram calor ou chamas;
7
• Riscos químicos  A classificação das substâncias químicas, gases, líquidos ou sólidos, também
devem ser conhecidas pelos seus manipuladores. Nesse aspecto, têm-se solventes combustíveis,
explosivos, irritantes, voláteis, cáusticos, corrosivos e tóxicos. Devem ser manipulados de forma
adequada em locais que permitam a segurança de seu manipulador e do seu meio ambiente. Este
grupo de risco é muito importante, pois os acidentes de laboratórios com substâncias químicas são
os mais comuns e perigosos;
• Riscos de acidentes  Principalmente em decorrência do uso de equipamentos de vidro e de

equipamentos e instrumentos perfurocortantes.
Para evitar esses riscos, algumas recomendações gerais devem ser seguidas:
Normas gerais
1º - A permanência dos alunos nos laboratórios de aulas práticas será apenas permitida mediante o uso de
jaleco branco devidamente abotoado, sapatos fechados e calça comprida. Caso não estejam devidamente
paramentados, os alunos não poderão assistir a essas aulas;
2º - Roupas e EPIs adequados, como calça comprida, jaleco, sapatos fechados, toucas, luvas, máscaras e
óculos de segurança. Conservar os cabelos compridos presos;
3º - A entrada dos alunos nos laboratórios será apenas permitida com a autorização dos professores
responsáveis;
4º - Não ingerir alimentos, bebidas ou fumar nos laboratórios;
5º - Trabalhar com seriedade evitando brincadeiras;
6º - Não deixar materiais estranhos ao trabalho sobre as bancadas. (Cadernos, bolsas e agasalhos devem
ficar nos escaninhos ou assemelhados);
7º - As bancadas e os corredores, bem como as pias, têm de ser mantidas sempre limpas durante toda a
aula. Os resíduos (lixo comum ou químico), devem ser colocados em reservatórios específicos;
8º - Balanças precisam ser cuidadosamente utilizadas; portanto, ao final de cada pesagem, verificar se a
balança está limpa e tomar as devidas providências para deixá-la adequada ao próximo usuário;
9º - Nunca deixar frascos de matérias-primas e solventes destampados. Após pesagem ou medida de

volume, devolvê-los rapidamente ao local de origem para que outros alunos possam também utilizá-los,
evitando-se perdas, quebras e derramamentos acidentais;
10º - Em caso de derramamento providenciar a limpeza o mais rapidamente possível;
11º - Nunca abrir um frasco de reagente antes de ler o rótulo, nem testar substâncias químicas pelo odor
ou sabor;
12º - Ao pipetar utilizar sempre uma pêra ou equipamento adequado (pipetador). Nunca pipetar com a
boca;
8
13º - Nunca usar termômetros como bastão;
14º - Todo material (matérias-primas, vidrarias e utensílios) utilizado pelo aluno deverá ser devolvido ao
local de sua guarda;
15º - Não é permitida a presença de pessoas estranhas à disciplina nos laboratórios;
16º - Devem ser seguidos os cuidados com o descarte de materiais e na lavagem das vidrarias, observados
pelos professores e técnicos de laboratório. Os descartes têm de ser feitos de maneira correta a fim de
preservar a saúde pública e os recursos naturais. Os resíduos comuns devem ser descartados em lixeiras e
os químicos devem ser descartados de acordo com sua natureza - os líquidos, que não oferecem risco à
saúde pública e ao meio ambiente, poderão ser descartados na pia; os sólidos nunca devem ser
descartados na pia e, se não oferecerem risco à saúde pública e ao meio ambiente, podem ser descartados
no lixo comum. Para os resíduos perigosos estão disponíveis frascos coletores para descarte;
17º - Ao acender o bico de Bunsen, observar a presença de materiais inflamáveis e solventes nas
proximidades e retirá-los. Fechar sempre os bicos de gás não utilizados;
18º - Em caso de incêndio usar a saída específica e chamar socorro para apagar o fogo em roupa de colegas,
abaixar as chamas com toalhas. Nunca usar extintores de incêndio em humanos;
19º - Jamais esquecer que os laboratórios são ambientes de trabalho, submetidos a riscos de acidentes na
maioria das vezes causados por atos inseguros. O trabalho em laboratórios exige concentração e bom
desempenho. Para tanto, o aluno precisa seguir as recomendações e instruções fornecidas pelos
professores. Também deve ser mantido o mínimo ruído possível (silêncio);
20º - Mesmo tomando os devidos cuidados, caso aconteça algum acidente, estarão disponíveis alguns
equipamentos de proteção coletiva como lava olhos e chuveiros de segurança, localizados no Laboratório
de Química e extintores de pó químico pressurizado em todos os laboratórios.
As Boas Práticas de Laboratório estão contempladas na Norma Regulamentadora NR-32 e alguns aspectos
importantes são:
Lavagem das mãos
Esse procedimento é necessário antes e depois da manipulação de materiais dentro do laboratório. Deve-
se usar água corrente e sabão, de acordo com a Figura 2. O uso de luvas de proteção para a manipulação de
materiais biológicos e químicos não substitui a lavagem correta das mãos.
9
Figura 2 – Lavagem das mãos.
Equipamentos de proteção individual
São elementos de contenção, de uso individual, utilizados para proteger o profissional do contato com
agentes biológicos, físicos, químicos, calor ou frio excessivos, entre outros (Tabela 1).
Tabela 1 – Equipamentos de proteção individual e suas características
Equipamentos de proteção coletiva
10
São equipamentos de contenção que possibilitam a proteção dos profissionais no ambiente de trabalho:
• Chuveiro de emergência;
• Lava-olhos;
• Autoclave;
• Cabines de segurança biológica;
• Extintores de incêndio;
• Kit de derramamento.
Os processos de desinfecção também são importantes para a proteção individual e coletiva (Tabela 2).
Tabela 2 – Processos de descontaminação
Processos de
Definição Exemplos
descontaminação
Limpeza Remoção de partículas ou material orgânico. Água e sabão
Álcool 70%
Eliminação de todos os microrganismos, exceto
Desinfecção
esporos.
Hipoclorito 5%
Autoclave
Garante a eliminação de qualquer forma de
Esterilização
vida.
Estufa
Descarte
Os procedimentos de descarte também são essenciais para a minimização dos riscos discutidos e esse
descarte varia com o tipo de material em questão.
• Descarte de material biológico:
-Lixo contaminado deve ser embalado em sacos plásticos para o lixo tipo 1 (branco), de capacidade máxima
de 100 litros, indicados pela NBR 9190 da ABNT;
-Os sacos devem ser totalmente fechados de forma a não permitir o derramamento de seu conteúdo,
mesmo se virados para baixo. Uma vez fechados, precisam ser mantidos íntegros até o processamento ou
destinação final. Não se admite abertura ou rompimento de saco contendo resíduo infectante sem
11
tratamento prévio. Deve-se verificar a qualidade do produto ou os métodos de transporte utilizados caso
ocorram rompimentos frequentes dos sacos;
-Havendo derramamento do conteúdo, cobrir o material derramado com uma solução desinfetante, por
exemplo, hipoclorito de sódio a 5% e recolher em seguida, fazendo depois a lavagem do local. Usar os
equipamentos de proteção necessários;
-Todos os utensílios que entrarem em contato direto com o material deverão passar por desinfecção
posterior;
-Os sacos plásticos deverão ser identificados com o nome do laboratório de origem, sala, técnica
responsável e data do descarte;
-Autoclavação a 121º C durante pelo menos 20 minutos para materiais limpos e 45 minutos para materiais
a serem descontaminados;
-As lixeiras para resíduos desse tipo devem ser providas de tampas e devem ser lavadas e desinfetadas,
pelo menos uma vez por semana ou sempre que houver vazamento do saco.
• Descarte de material perfurocortante:
Os materiais perfurocortantes constituem a principal fonte potencial de risco tanto para acidentes físicos
como para contaminação por agentes infecciosos. Exemplos: agulhas, ampolas abertas, lâminas de bisturi,
vidraria quebrada entre outros. Para o descarte seguro, recomenda-se os seguintes passos:
-Devem ser descartados em recipientes de paredes rígidas com tampa e resistente à autoclavação;
-Os recipientes devem estar localizados tão próximos possíveis da área de utilização dos materiais;
-Os recipientes devem ser identificados com etiquetas contendo informações sobre o laboratório de
origem, técnico responsável pelo descarte e data do descarte;
- Após tratamento para descontaminação, os recipientes devem ser embalados em sacos adequados para
descarte, identificados como material perfurocortantes e descartar como lixo comum, caso não sejam
incinerados;
-A agulha não deve ser retirada da seringa após o uso;
-No caso de seringa de vidro, levá-la juntamente com a agulha para efetuar o processo de
descontaminação;
-Não quebrar, entortar ou recapear as agulhas.
• Descarte de material químico
Para a realização dos procedimentos adequados de descarte é importante observar o grau de toxicidade e
não misturar os resíduos de diferentes naturezas e composições. Estes produtos devem ser tratados antes
de descartados e, no armazenamento, devem ser consideradas as compatibilidades entre os produtos
químicos.
12
As informações de descarte específica para cada produto estão disponíveis nas FISPQs (Ficha de Informação
de Segurança do Produto Químico) e devem estar acessíveis a todos. A Comissão de Gerenciamento de
Resíduos da FMUSP disponibiliza o Guia dos POPs de Resíduos de Serviços de Saúde, que traz os
procedimentos necessários para descarte de resíduos e carcaças, desde a sua geração até a disposição final,
no seguinte endereço: http://www.bioterio.fm.usp.br/pdf.
A segurança é responsabilidade de todos!
3. Materiais e Métodos:
3.1 Materiais de Consumo (Reagentes)
Luvas
Máscaras
Jaleco
Óculos de proteção
Descarte de Materiais com Hipoclorito.
Álcool 70%
Papel toalha
3.2 Materiais Permanentes (Vidrarias/equipamentos)

Caixa de perfurocortantes
Lixo comum
Lixo Biológico
Pia para descarte de materiais
3.3 Procedimentos
Durante o desenvolvimento da prática simularemos um processo de coleta de amostra biológica (sangue).
O professor irá demonstrar de forma prática a importância da utilização dos EPIs (equipamentos de
proteção individual). Será demonstrado:
 A paramentação adequada em laboratório;
 O uso correto dos EPIs;
 A correta desinfecção de bancadas antes e após a utilização;
 O procedimento seguro para a utilização de agulhas e perfurocortantes;
 Os cuidados com reagentes líquidos e o processo de descarte de substâncias;
 O correto descarte de placas com meio de cultura;
 A separação do lixo comum e lixo biológico e seus devidos símbolos;
 Os procedimentos a serem realizados após a quebra de vidrarias e derramamento de reagentes;
 Os procedimentos a serem realizados após o derramamento de material biológico e a desinfecção
do local.
4. Resolução do Problema Levantado
A estudante deveria estar usando os equipamentos de proteção individual pertinentes, além de manipular
o reagente em uma capela para evitar a inalação.
13
5. Listas de Exercício
1) Identifique os erros na seguinte situação e justifique:
Julia entra em um laboratório químico de calça jeans, blusa e sandália; seus cabelos estão soltos; ela veste
seu jaleco de mangas curtas e se prepara para iniciar os experimentos. Sem luvas, Júlia pesa em uma
balança cloreto de sódio e mede certo volume de água em um béquer. Ela mistura e adiciona uma gota de
ácido sulfúrico. Ela paramenta-se com óculos de proteção, liga a manta térmica e coloca a mistura sob
aquecimento dentro do béquer. Enquanto aguarda a finalização do experimento, Júlia pega sua garrafinha
de água dentro da bolsa e bebe a água. Após isto, Júlia volta ao experimento, retira o béquer e deixa-o
resfriar. Finalizado o experimento, Júlia lava as mãos e deixa o laboratório. Ela vai ao seu escaninho, no
primeiro andar, retira seu jaleco e o guarda.
2) Descreva sucintamente a diferença entre o descarte de materiais biológicos, perfurocortantes e

químicos.
3) Aponte os EPIs e EPCs necessários em cada uma das seguintes situações em um laboratório:
• Experimento envolvendo cultura de células;
• Experimento utilizando água, glicose e cloreto de sódio;
• Experimento envolvendo materiais perfuro-cortantes;
• Coleta de sangue;
• Experimento envolvendo ácidos concentrados;
• Manipulação de material biológico;
• Experimento envolvendo reagentes em pó;
• Manipulação de produto altamente dispersível.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ANVISA. Microbiologia Clínica para o controle de infecção relacionada à assistência à saúde. Brasília, 2010.
48 p.
COMISSÃO DE SEGURANÇA E SAÚDE NO TRABALHO. Manual de Boas Práticas de Laboratório. Universidade

de Lisboa: Lisboa, 2016. 34 p.
GERÊNCIA TÉCNICA. Guia de Boas Práticas Laboratoriais. HC-FMUSP: São Paulo, 2015. 25 p.
SOCIEDADE BRASILEIRA DE PATOLOGIA CLÍNICA. Boas Práticas em Microbiologia Clínica. Brasil, 2015. 323 p.
UNISESPE. Manual institucional de biossegurança. 2010. 13 p.
14
AULA 02: Riscos Químicos e Biológicos nos laboratórios
1. Competências
Reconhecer os riscos químicos e biológicos em laboratório;
Atuar na prevenção de acidentes químicos e biológicos em laboratório;
Reconhecer os níveis dos laboratórios de acordo com a Segurança Biológica;
Armazenar corretamente os produtos químicos e resíduos gerados.

Biomedicina: Métodos de análise, investigação e síntese; Parasitologia clínica; Agentes infecciosos e
respostas imunológicas; Análise ambiental; Controle de qualidade de alimentos; Farmacologia; Biologia
molecular e biotecnologia; Vigilância sanitária; Bioquímica clínica; Hematologia clínica e banco de sangue;
Controle de qualidade de laboratório; Imunologia clínica; Análise toxicológica e criminalística; Microbiologia
clínica.
Ciências Biológicas: Métodos de análise, investigação e síntese; Agentes infecciosos e resposta
imunológica; Análises histológicas e citogenéticas; Biologia molecular e biotecnologia; Imunologia e
microbiologia aplicada.
Farmácia: Métodos de análise, investigação e síntese; Química Analítica e instrumental; Agentes
infecciosos e resposta imunológica; Processamento, controle e qualidade de alimentos; Farmacognosia;
Biologia molecular e biotecnologia; Farmacotécnica; Controle de qualidade físico-quimico e biológico;
Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e banco de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e
toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Um aluno, ao ser o primeiro a chegar em seu laboratório de iniciação científica, percebe que o ambiente
está com um cheiro estranho e vê que houve um derramamento do líquido que estava no descarte. Como o
aluno deve proceder de forma a minimizar os riscos para si, para os transeuntes e para o ambiente?
Os riscos químicos e biológicos são os principais envolvidos nos acidentes em laboratórios:
• Riscos biológicos  Os materiais biológicos abrangem amostras provenientes de seres vivos como
plantas, animais, bactérias, leveduras, fungos, parasitas (protozoários e metazoários) e amostras
biológicas provenientes de animais e seres humanos (sangue, urina, escarro, secreções, derrames
cavitários, peças cirúrgicas, biópsias entre outras). Incluem-se também os organismos
geneticamente modificados em que os cuidados são mais relevantes por albergarem genes com
características diferenciadas;
• Riscos químicos  A classificação das substâncias químicas, gases, líquidos ou sólidos, também
devem ser conhecidas pelos seus manipuladores. Nesse aspecto, têm-se solventes combustíveis,
explosivos, irritantes, voláteis, cáusticos, corrosivos e tóxicos. Devem ser manipulados de forma
adequada em locais que permitam a segurança de seu manipulador e do meio ambiente. Este
grupo de risco é muito importante, pois os acidentes de laboratórios com substâncias químicas são
os mais comuns e perigosos;
15
Uma das ferramentas importantes em um laboratório é o mapa de risco (Figura 1). O mapa de risco é uma
representação gráfica de um conjunto de fatores presentes nos locais de trabalho capazes de acarretar
prejuízos à saúde dos servidores, causando acidentes e doenças do trabalho. É utilizado para facilitar a
visualização dos riscos existentes no local.
Figura 1 – Exemplo de um mapa de risco
Além disso, existem algumas medidas específicas que podem ser adotadas para evitar esses riscos.
Procedimentos básicos de segurança nos laboratórios químicos:
Risco químico é o perigo a que determinado indivíduo está exposto ao manipular produtos químicos que
podem causar-lhe danos físicos ou prejudicar-lhe a saúde. Os danos físicos relacionados à exposição
química incluem, desde irritação na pele e olhos, passando por queimaduras leves, indo até aqueles de
maior severidade, causado por incêndio ou explosão. Os danos à saúde podem advir de exposição de curta
e/ou longa duração, relacionadas ao contato de produtos químicos tóxicos com a pele e olhos, bem como a
inalação de seus vapores, resultando em doenças respiratórias crônicas, doenças do sistema nervoso,
doenças nos rins e fígado, e até mesmo alguns tipos de câncer.
Consideram-se agentes de risco químico as substâncias, compostos ou produtos que possam penetrar no
organismo do trabalhador pela via respiratória, nas formas de poeiras, fumos, gases, neblinas, nevoas ou
vapores, ou que seja, pela natureza da atividade, de exposição, possam ter contato ou ser absorvido pelo
organismo através da pele ou por ingestão.
As barreiras de contenção para agentes químicos são os dispositivos ou sistemas que protegem o operador
do contato com substâncias químicas irritantes, nocivas, tóxicas, corrosivas, líquidos inflamáveis,
substâncias produtoras de fogo, agentes oxidantes e substâncias explosivas.
Todos os procedimentos relacionados com a manipulação de produtos químicos deverão realizar-se de

modo a garantir a segurança de todos os que trabalham no laboratório e fora dele. Algumas substâncias
16
apresentam propriedades potencialmente perigosas que implicam procedimentos laboratoriais e
precauções específicos. Dentro destas substâncias incluem-se:
• Solventes inflamáveis;
• Compostos/misturas químicas altamente reativos e oxidantes fortes;
• Gases comprimidos;
• Compostos/misturas corrosiva;
• Compostos/misturas com toxicidade elevada e/ou crónica.
Apresentam-se em seguida alguns procedimentos que devem ser adotados na manipulação de substâncias
químicas:
• Ler com atenção a ficha de segurança e instruções dos produtos químicos, identificá-los e
armazená-los conforme orientação do fabricante;
• A inalação, ingestão acidental e contato com a pele com esses produtos químicos deve ser evitada;
• Certificar-se do funcionamento dos exautores de modo a minimizar a exposição aos produtos

químicos;
• Realizar as experiências no espaço adequado e não transportar recipiente com reações em

execução para fora do laboratório;
• Reconhecer os pictogramas de perigo;
• Manter os esguichos de água, álcool e outros líquidos devidamente rotulados;
• Manter os recipientes de produtos químicos bem fechados;
• Não abrir nem utilizar recipientes de produtos químicos sem identificação;
• Substâncias inflamáveis devem ser mantidas longe de fontes de calor;
• Os produtos químicos devem ser descartados corretamente.
Procedimentos básicos de segurança nos laboratórios biológicos:
São considerados riscos biológicos: vírus, bactérias, fungos, parasitas e protozoários. Os riscos biológicos
ocorrem por meio de microrganismos que, em contato com o homem, podem provocar inúmeras doenças.
Muitas atividades profissionais favorecem o contato com tais riscos. É o caso das indústrias de alimentação,
hospitais, limpeza pública (coleta de lixo), laboratórios, etc.
Entre as inúmeras doenças profissionais provocadas por microrganismos incluem-se: tuberculose,

brucelose, malária e febre amarela. Para que essas doenças possam ser consideradas doenças
profissionais, é preciso que haja exposição do funcionário a estes microrganismos. São necessárias
17
medidas preventivas para que as condições de higiene e segurança nos diversos setores de trabalho sejam
adequadas.
Os riscos biológicos em laboratórios podem estar relacionados com a manipulação de:
- Agentes patogênicos selvagens;
- Agentes patogênicos atenuados;
- Agentes patogênicos que sofreram processo de recombinação;
- Amostras biológicas;
- Culturas e manipulações celulares (transfecção, infecção);
- Animais.
Todos os itens citados acima podem tornar-se fonte de contaminação para os manipuladores. As principais
vias envolvidas num processo de contaminação biológica são a via cutânea ou percutânea (com ou sem
lesões - por acidente com agulhas e vidraria, na experimentação animal - arranhões e mordidas), a via
respiratória (aerossóis), a via conjuntiva e a via oral.
Há uma classificação dos agentes patogênicos selvagens que leva em consideração os riscos para o
manipulador, para a comunidade e para o meio ambiente. Esses riscos são avaliados em função do poder
patogênico do agente infeccioso, da sua resistência no meio ambiente, do modo de contaminação, da
importância da contaminação (dose), do estado de imunidade do manipulador e da possibilidade de
tratamento preventivo e curativo eficaz. Os materiais biológicos são classificados segundo seu risco (Tabela
1):
Tabela 1 – Classificação dos grupos de risco dos agentes biológicos
18
• Em locais que ocorrem experimentos que envolvam materiais biológicos, o acesso é restrito
somente ao pessoal autorizado, de acordo com procedimentos implementados;
• O uso de jaleco é obrigatório;
• Deve-se lavar e desinfetar as mãos antes e após a manipulação de materiais biológicos sempre que
retirar as luvas e antes de sair do laboratório;
• É estritamente proibido comer, beber, fumar, colocar/retirar lentes de contato, levar à boca
material de trabalho (lápis, caneta), maquilhar-se e armazenar comida ou bebida para consumo, no
laboratório. Não devem serem usados saltos altos, brincos compridos, colares e pulseiras nos
laboratórios. Os cabelos compridos/longos devem estar devidamente amarrados;
• Os materiais cortantes e perfurantes devem ser utilizados de acordo com os respectivos protocolos
e sempre com EPI (p.e. luvas resistentes a perfuração / corte);
• Os trabalhos devem ser executados de forma a minimizar ou evitar a formação de aerossóis;
• As superfícies de trabalho devem ser descontaminadas no mínimo, antes de iniciar um trabalho e

sempre que o finalizar, com um desinfectante adequado e sempre que ocorrer algum pequeno
derrame de material biológico (álcool de 70% existente nos esguichos);
• O material biológico que for descontaminado em locais fora do laboratório onde foi utilizado, deve
ser transportado num recipiente resistente estanque e fechado, e de acordo com as normas legais
e de boas práticas em vigor.
Além disso, a área física ocupada pelo laboratório deve ter sido planejada de acordo com os materiais
clínicos que serão manipulados e o risco dos agentes porventura isolados e por isso o fluxo de pessoas e
materiais deve ser respeitado para minimizar os riscos.
3. Material e Métodos
Placas de cultivo de micro-organismo de classe I (Lactobacillus spp; Bacillus subtilis) e classe II
(Pseudomonas, Salmonella).
Agulhas.
Ácido clorídrico (exemplo)

Placa de cultivo de micro-organismo por grupo.
Agulhas estéreis por grupo.
FISPQ – Fichas de segurança de produtos químicos.
Produtos químicos e rótulos.
Pipetas automáticas e manuais.
19
Capela de fluxo laminar
3.3 Procedimentos
A aula será expositiva. O professor irá levantar as principais causas de riscos químicos e biológicos e
demonstrar exemplos práticos:
 Riscos biológicos por meio de micro-organismos de classe I e classe II (visualização de placas de
cultivo).
 Determinar causas de risco potenciais e as precauções de segurança apropriadas antes de começar
a utilizar novos equipamentos ou implantar novas técnicas no laboratório e confirmar se existem
condições e equipamentos de segurança suficientes para implantação de novos procedimentos.
 Demonstrar a correta pipetagem de solventes ou reagentes voláteis, tóxicos ou que apresentem
qualquer risco para a segurança. Usar sempre um pipetador.
 Demonstrar a utilização da capela de fluxo laminar.
 Em grupo, os alunos devem reconhecer os efeitos das substâncias químicas observando a FISPQs –
Fichas de segurança de produtos químicos.
 Descrever a rotulagem dos frascos contendo soluções com o nome do produto, a data de aquisição
ou preparação, validade e responsável pela solução. Quando necessário adicionar informações
sobre o risco, perigo e condições de segurança em seu manuseio.
 Lavagem das mãos ao final dos procedimentos de laboratório e remoção de todo o equipamento
de proteção incluindo luvas e jalecos.
 Demonstrar o risco de consumir alimentos e bebidas no laboratório. A separação de alimentos e
bebidas dos locais contendo materiais tóxicos, de risco ou potencialmente contaminados pode
minimizar os riscos de ingestão acidental desses materiais.
Em acidentes com derramamento de produtos químicos, deve-se:
• Utilizar EPIs,
• Conter o líquido derramado;
• Cobrir o resíduo com vermiculina ou areia e aguardar sua absorção;
• Recolher todo o resíduo e material utilizado para limpar a área em saco plástico perto para
posterior descarte;
No caso de ser um aluno, ele deveria chamar o responsável pelo laboratório e interditar o local para que
não haja circulação de pessoas. O responsável, então, tomaria as atitudes acima referidas.
1) Procure uma ficha FISPQ de um produto químico, analise-a quanto aos riscos e traga uma resenha para
ser apresentada a turma;
2) Cite e explique fatores importantes na organização de um laboratório de forma a prevenir riscos

químicos e biológicos;
20
3) Descreva o que deveria ser feito para minimizar os riscos da seguinte situação:
• Um técnico deixa cair uma prateleira contendo diversas amostras de sangue. O sangue se espalha
pelo chão, juntamente com pedaços dos tubos e não se sabe se haviam amostras contaminadas;
4) Pesquise qual os procedimentos de saúde devem ser realizados quando uma pessoa entra em contato
com material suspeito de contaminação com o vírus HIV. Analise criticamente a necessidade de realização
desses procedimentos;
5) Procure alguma incompatibilidade química, analise seu risco e traga para discutir em sala.
48 p.

21
AULA 03: Titulo: Noções básicas de primeiros socorros no laboratório
1. Competências
Reconhecer os principais procedimentos, materiais e técnicas relacionadas aos primeiros socorros devido a
intercorrências existentes no ambiente laboratorial;
Conhecer os principais procedimentos relacionados à exposição a material químico e biológico no
laboratório.

Biomedicina: Métodos de análise, investigação e síntese; Parasitologia clínica; Agentes Infecciosos e
Respostas Imunológicas; Análise ambiental; Controle de qualidade de alimentos; Farmacologia; Biologia
clínica.
Farmácia: Métodos de análise, investigação e síntese; Química Analítica e instrumental; Agentes infecciosos
e resposta imunológica; Processamento, controle e qualidade de alimentos; Farmacognosia; Biologia
molecular e biotecnologia; Farmacotécnica; Controle de qualidade físico-quimico e biológico; Parasitologia
e Imunologia clínica; Hematologia e banco de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia;
Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Durante uma aula prática o professor estava manipulando reagentes para distribuir nos grupos de alunos
quando o vidro do reagente explode. Alguns estilhaços causam cortes no professor e o líquido espirra em
seu rosto. O que os alunos podem fazer até que chegue um atendimento especializado?
Primeiros socorros são os atendimentos imediatos e rápidos ao acidentado até seu encaminhamento ao
médico, em casos mais graves. Neste sentido, primeiros socorros são procedimentos de emergência. É
necessário que sejam os mais corretos possíveis para evitar problemas futuros. É também necessário que o
laboratório disponha de uma farmácia de emergência. No laboratório podem ocorrer, principalmente,
vertigens, corpos estranhos e substâncias químicas nos olhos, queimaduras, cortes e envenenamentos.
ACIDENTES GRAVES
• Não deverá mover o acidentado exceto quando estritamente necessário, ou seja, quando este
possa correr ainda mais perigo por inalação ou exposição prolongada ao agente causador do
acidente;
• Se o indivíduo estiver contaminado ou exposto a material perigoso no laboratório, deverá atuar de

modo a proteger a vida e saúde da vítima, bem como a sua. Determine a natureza do material
perigoso para indicar aos serviços de emergência;
22
• Se o indivíduo estiver em contato com corrente elétrica, NÃO O TOQUE. Desligue primeiro a
eletricidade, desligando os disjuntores no quadro elétrico, ou afastando o fio condutor com um
objeto não-condutor por exemplo uma vareta de vidro;
• Peça auxílio imediato através dos contatos de emergência.
ACIDENTES POUCO GRAVES
Em caso de ocorrerem acidentes que resultem em lesões corporais pouco extensas/danosas, poderão ser
realizados atos de primeiros socorros básicos de acordo com os procedimentos a seguir apresentados.
Quaisquer outros procedimentos mais invasivos exigem formação adequada.
Feridas
Lavar bem as mãos;
Expor o local da ferida;
Remover corpos estranhos visíveis com a pinça;
Objetos cravados profundamente não devem ser removidos;
Lavar a ferida com uma gaze embebida em água limpa ou soro fisiológico (lavar primeiro em volta e depois
do centro para a periferia);
Desinfetar com antisséptico disponibilizado na mala de primeiros socorros existente nas estações de
emergência;
Deixar secar;
Proteger com uma compressa esterilizada;
Cobrir com adesivo ou ligadura;
Encaminhar para assistência médica, se necessário.
Queimaduras por calor
Extinguir eventuais chamas sobre a vítima;
Não tentar remover a roupa;
Deixar cair água corrente na área afetada, até que a dor passe;
Em caso de queimaduras extensas deverá ter atenção ao estado de choque da vítima e tentar mantê-la
aquecida, tendo o cuidado de não contaminar as zonas queimadas;
Não aplicar produtos desinfetantes ou gordurosos;
23
Encaminhar a vítima imediatamente para o hospital em caso de queimaduras de 2.ºgrau e/ou extensas.
Queimaduras por derrames químicos
Identificar o produto que causou a lesão.
VIA CUTANEA
Encaminhar a vítima para o chuveiro, lavar durante pelo menos 10 a 15min, remover o vestuário e calçado
usando luvas e encaminhar a vítima imediatamente para o hospital.
VIA OCULAR
Encaminhar a vítima para o lava-olhos, lavar durante pelo menos 10 a 15 min sob uma corrente de água
fraca, manter as pálpebras abertas (retirar as lentes de contato, se aplicável), cobrir o olho, sem pressionar,
com uma compressa esterilizada e encaminhar a vítima imediatamente para o hospital.
Contaminação com agentes biológicos
Lave muito bem as mãos com sabão desinfetante para as mãos e água;
Caso ocorra exposição e contaminação pessoal: remova o equipamento de proteção individual

contaminado;
Para feridas com agulhas de seringas e outros objetos perfurantes: lave a área ferida com desinfetante ou
antisséptico durante 15min;
Para salpicos no rosto (membranas mucosas do nariz, olhos e boca): utilize o lava-olhos durante 15min na
área exposta, mantendo as pálpebras abertas.
Intoxicação
Identificar o produto que causou a intoxicação. Contatar a emergência para obter informação específica
sobre como proceder.
VIA RESPIRATÓRIA
Fechar as torneiras de gases/ fonte de tóxico; desapertar ou remover completamente a roupa

contaminada; retirar, se possível, a vítima do local contaminado e levá-la para um local ventilado;
encaminhar para o hospital.
VIA DIGESTIVA
Não provocar o vômito a não ser que este procedimento tenha sido indicado pelo Centro de Atendimento
Toxicológico; se os lábios ou boca da vítima mostrarem sinais de queimaduras, lave-os com água; mesmo
24
que a vítima esteja consciente, deve colocá-la em Posição Lateral de Segurança (PLS) e cobri-la para evitar o
choque; encaminhar de imediato para o hospital.

Álcool 70%
Algodão
Solução fisiológica
Água e sabão

Lava Olhos
Tomadas e aparelhos elétricos (diferentes voltagens)
Extintores de incêndio
Portaria para as escadas
Kit de primeiros socorros
3.3 Procedimentos
A aula será expositiva-demonstrativa:
• Demonstração dos principais equipamentos de segurança, onde ficam situados e como são
utilizados:
• Os equipamentos comuns de segurança e emergência incluem extintores, kit de primeiros

socorros, estação de lavagem de olhos e chuveiros de emergência e saídas de emergência.
É necessário que os usuários saibam onde estão e como manejar os equipamentos de
segurança, aprendam o que fazer em uma emergência e se familiarizem com estes
procedimentos.
• Demonstração de como são os primeiros socorros que podem ser executados pelos alunos:
• Divisão da sala em grupo para simulações: queimaduras, cortes, desmaios, etc.
Explicação do procedimento adotado em caso de acidentes.
Deve-se lavar bem com água corrente e sabão os cortes e proteger com uma compressa estéril e lavar bem
os respingos de resíduos químicos. Após isso, o correto é levar a vítima ao hospital para uma avaliação mais
profunda e se possível informar no hospital qual era a substância química envolvida no acidente.
25
1) Classifique as condutas abaixo em aceitável ou não aceitável e justifique:
• Passar óleo em uma queimadura;
• Remover tecidos grudados na pele em queimaduras;
• Estancar hemorragia com compressa;
• Atender à vítima mais grave do acidente antes de verificar se está tudo bem com você;
• Lavar corte com água corrente e sabão;
• Passar álcool 70% em cortes;
• Cobrir queimadura com pasta de dente;
• Provocar vômitos em intoxicações;
• Torniquete para estancar sangramento.
48 p.

26
SEGUNDA UNIDADE DE ENSINO
MANIPULAÇÃO DE EQUIPAMENTOS E VIDRARIAS
AULA 04: Reconhecimento de Vidraria e material utilizados em laboratório
1. Competências
Reconhecer os principais equipamentos e vidrarias utilizadas no laboratório.
Conhecer os principais procedimentos relacionados à utilização dos equipamentos e vidrarias.
Realizar medidas de temperatura, massa e volume; fazer o tratamento de dados experimentais através de
cálculo da média e do desvio padrão; diferenciar vidrarias volumétricas e graduadas; utilizar algarismos
significativos; distinguir os significados de precisão e exatidão; discutir os tipos de erros; comparar a
precisão de vidraria graduada com volumétrica.
1.1. Correlação com as competências Profissionalizantes:

clínica.
imunológica; Análises histológicas e Citogenéticas; Biologia molecular e biotecnologia; Imunologia e
microbiologia aplicada
Farmácia: Métodos de análise, investigação e síntese; Química Analítica e instrumental; Agentes infecciosos
e resposta imunológica; Processamento, controle e qualidade de alimentos; Farmacognosia; Biologia
molecular e biotecnologia; Farmacotécnica; Controle de qualidade físico-quimico e biológico; Parasitologia
e Imunologia clínica; Hematologia e banco de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia;
Microbiologia clínica; Bioquímica clínica
2. Introdução
A execução de qualquer tarefa em um laboratório envolve geralmente uma variedade de equipamentos
que devem ser empregados de modo adequado, para evitar danos pessoais e materiais. A escolha de um
determinado aparelho ou material de laboratório depende dos objetivos e das condições em que o
experimento será executado. Após formado você retorna a sua cidade natal, no interior de Minas Gerais,
para trabalhar no único laboratório de análises clínicas da região. Você verifica que, apesar do número
pequeno de amostras, há a necessidade de realização de antibiogramas e resolve implantar a metodologia
do teste de disco-difusão em ágar, descrito por Bauer e Kirby, como rotina no laboratório. Relacione os
materiais necessários para a realização dessa metodologia.
As experiências de laboratórios de ciências quantitativas, envolvem frequentemente medidas de massa,
volume e temperatura. Estes dados são posteriormente tratados estatisticamente para uma avaliação do
resultado obtido. Para toda medida que realizamos, temos uma incerteza (ou erro), e todo trabalho
experimental deve ter seus resultados expressos corretamente. Será feita uma apresentação da utilização
correta de alguns instrumentos em laboratórios de química e dos tópicos principais para expressar
corretamente as medidas por meio destes instrumentos.
27
Manipulação dos instrumentos de medidas de volume, massa e temperatura
Medidas de Volume
Para medidas aproximadas de volume, usam-se provetas ou pipetas graduadas, enquanto que, para
medidas precisas, usam-se buretas, pipetas volumétricas, balões volumétricos (chamadas vidrarias
volumétricas) e, também, provetas.
A medida do volume é feita comparando-se o nível do mesmo com a graduação marcada na parede do
recipiente. A leitura do nível para líquidos transparentes deve ser feita na parte inferior do menisco.
Devemos posicionar o nível dos nossos olhos perpendicularmente à escala onde se encontra o menisco
correspondente ao líquido a ser medido. Este procedimento evita o chamado erro de paralaxe (Figura 1).
Figura 1 - Procedimentos corretos para leitura do menisco em uma proveta (para líquidos incolores).
Uso da pipeta
Figura 2 - Pipetas volumétrica (a) e graduada (b).
O uso de pêra de sucção ou de pipetador deve ser sempre necessário, mesmo quando forem pipetadas
substâncias inofensivas à saúde. Evite aspirar o líquido com a boca. A pipeta a ser utilizada deve estar limpa
e seca. Certifique-se sempre de que o material a ser usado não possui nenhum contaminante.
Figura 3 - Pêra de sucção (esquerda) e pipetadores (direita).
Etapas a serem seguidas na utilização do pipetador (Figura 3):
i. Encaixar FIRMEMENTE a pipeta;
28
ii. Mergulhar completamente a ponta no líquido;
iii. Encher a pipeta girando a peça circular;
iv. Ajustar o nível desejado com a mesma peça;
v. Esvaziar apertando a alavanca inferior;
vi. Se necessário, empurrar o êmbolo conforme o tipo de pipeta (TC ou TD).
Pipetas TD (=): deve-se esvaziar completamente (incluir a gotinha final).

Pipetas TC (sem marcação): não se deve esvaziar.
Etapas a serem seguidas na utilização da pêra (Figura 3):
i. Encaixar FIRMEMENTE a pipeta;

ii. Apertar a válvula “A” e, com a válvula apertada, esvaziar o bulbo;
iii. Soltar a válvula e o bulbo;
iv. Mergulhar completamente a ponta no líquido;
v. Encher a pipeta apertando a válvula “S” e soltando-a quando terminar;
vi. Ajustar o nível desejado esvaziando-a com a válvula “E” (com a pipeta fora do recipiente);
vii. Se necessário, tampar o orifício próximo à válvula “E” com um dedo e apertar o pequeno bulbo
próximo para eliminar as últimas gotas, conforme o tipo de pipeta (TC ou TD).
Uso da Bureta
As buretas são recipientes volumétricos, usados para escoar volumes variáveis de líquido e empregadas
geralmente em titulações. Ao utilizar uma bureta, seguir as etapas abaixo descritas:
i. Verificar se a torneira, caso seja de vidro esmerilhado, está lubrificada;
ii. Fazer ambiente1 na bureta se não estiver seca;
iii. Encher a bureta e verificar se nenhuma bolha de ar ficou retida no seu interior;
iv. Fixar a bureta ao suporte, com o auxílio de uma garra, de forma a mantê-la na posição vertical;
v. Zerar a bureta (evitar erro de paralaxe);
vi. A leitura do volume escoado de uma bureta é uma medida relativa. Assim, do mesmo modo que ela
foi zerada deve-se ler o volume escoado (atenção para evitar erro de paralaxe).
1
Fazer ambiente: lavar internamente com pequena quantidade do líquido a ser medido, descartando o resíduo e, só então, encher a
vidraria com o líquido; após a ambientação da vidraria, a sobra pode ser devolvida ao frasco original, desde que não tenha sido
contaminada.
29
Figura 4 - Método correto de segurar a torneira de uma bureta.
Uso do balão volumétrico

O balão volumétrico mede um volume exato a uma determinada temperatura (geralmente 20 °C), podendo
ser usado sem erro apreciável em temperaturas de mais ou menos 8 °C acima ou abaixo da indicada. Usado
principalmente para o preparo de soluções e reagentes, quando se deseja uma concentração a mais exata
possível.
Medidas de Massa
As substâncias químicas não devem jamais ser pesadas diretamente nos pratos da balança, e sim sobre
papel apropriado ou num recipiente qualquer tal como béquer, pesa-filtro, vidro relógio ou cápsula de
porcelana previamente pesados. A utilização da balança será explicada pelo professor.
Medida de Temperatura
Em laboratórios de química, os termômetros mais utilizados são os de mercúrio, que contém em seu
interior mercúrio líquido de cor prata. Ao medir a temperatura de um líquido, o bulbo do termômetro deve
ser introduzido no líquido. Quando a altura de mercúrio líquido no interior do termômetro estabilizar (2 a 3
minutos) pode-se fazer a leitura da temperatura, evitar erro de paralaxe.
Tomada de medidas
Algarismos significativos: as leituras de medidas devem considerar todos os algarismos significativos, que
compreendem os algarismos exatos (os que são fornecidos pela escala) e mais um (e somente um)
algarismo duvidoso, que é sempre o último.
Em instrumentos digitais como balanças, considera-se o último algarismo como duvidoso e os demais como
exatos. Em instrumentos analógicos como provetas, termômetros, réguas etc., proceder conforme
parágrafo a seguir.
Tomada de leituras: usar o valor zero para o algarismo duvidoso quando a leitura coincidir com a escala; se
estiver entre duas marcações, considerar o valor anterior mais o erro instrumental (a metade da menor
divisão), ou seja, considerar a média das duas marcações. Ver exemplo a seguir na Figura 5.
Figura 5 - Exemplo de tomada de leituras em mostrador

analógico. A: 0,55 cm; B: 0,65 cm; C: 0,75 cm; D: 0,90 cm.
Exatidão e Precisão
30
Exatidão: A exatidão de uma grandeza que foi medida é a correspondência entre o valor medido (x) e o
valor da grandeza (µ). Denota a proximidade de uma medida do seu valor verdadeiro.
Precisão: A precisão de uma grandeza é a concordância entre as várias medidas feitas sobre a grandeza, e
indica o grau de dispersão do resultado. Está associada à reprodutibilidade da medida.
É muito difícil obter exatidão sem precisão; porém, uma boa precisão não garante uma boa exatidão. Não
obstante, o analista sempre procura resultados reprodutíveis, pois quanto maior a precisão, maior é a
chance de se obter boa exatidão. Na Figura 4, ilustram-se os conceitos de exatidão e precisão em uma
medida cujo valor verdadeiro deveria ser igual a 3.
Figura 6 - Conjuntos de medidas que ilustram os conceitos de precisão e exatidão: (a) medidas precisas e
exatas, (b) medidas precisas, mas inexatas e (c) medidas imprecisas e inexatas.
Erros
Os dados obtidos por meio de medidas são sempre acompanhados de erros devidos ao sistema que está
sendo medido, ao instrumento de medida e ao operador. O conhecimento destes erros permite a correta
avaliação da confiabilidade dos dados e do seu real significado.
Dois classes de erros afetam a precisão e a exatidão de uma medida: os erros determinados e os erros
indeterminados.
Erros determinados: São aqueles que possuem causas definidas e são localizáveis. Podem ser minimizados,
eliminados ou utilizados para corrigir a medida. Os erros determinados são:
 Erros instrumentais;
 Erros devidos aos reagentes (impurezas, ataque dos recipientes por soluções etc.);
 Erros de operação: erros físicos e associados à manipulação; geralmente independentes dos
instrumentos e utensílios utilizados e não tem qualquer relação com o sistema químico. Suas
grandezas, geralmente desconhecidas, dependem mais do analista do que de outro fator. Por
exemplo: uso de recipientes descobertos, a perda de material por efervescência, a lavagem mal
feita da vidraria ou dos precipitados, o tempo insuficiente de aquecimento, erros de cálculo. Os
iniciantes, por falta de habilidade e de compreensão do processo, podem cometer erros
operacionais sérios sem deles se aperceberem, mas, ganhando experiência e conhecimentos, tais
erros são reduzidos a proporções mínimas.
 Erros pessoais: Estes erros são devidos a deficiências do analista. Alguns derivados da inabilidade
do operador em fazer certas observações com exatidão, como o julgamento correto da mudança
de cor nas titulações que usam indicadores visuais. Outros são erros de predisposição. Estes
surgem quando a questão é decidir qual fração de uma escala deve ser registrada: o operador
tende a escolher aquela que tornar o resultado mais próximo da medida anterior.
 Erros do método: Estes erros têm suas origens nas propriedades físico-químicas do sistema
analítico. São inerentes ao método e independem de quão bem o analista trabalhe.
31
Erros indeterminados: A segunda classe de erros são os indeterminados, que representam a INCERTEZA
que ocorre em cada medida. Eles são resultantes de flutuações em sucessivas medidas feitas pelo mesmo
operador nas melhores condições possíveis; são derivados de pequenas variações nos instrumentos, no
sistema ou no operador. Como estes erros são devidos ao acaso, não podem ser previstos, mas podem ser
avaliados por meio de tratamento estatístico dos dados.
A influência dos erros indeterminados é indicada pela exatidão da medida, que é descrita pelo desvio
padrão da média de uma série de medidas feitas sob condições idênticas. A precisão da medida não dá
informação de quão exata foi à medida, a menos que se disponha de um número muito grande delas.
Porém é possível, com certa confiança, avaliar o intervalo em que se encontra o melhor valor da grandeza;
esse intervalo é denominado intervalo de confiança da medida. Obviamente, é impossível eliminar todos os
erros devidos ao acaso, mas o analista deve minimizá-los até atingir um nível de insignificância tolerável.
Para uma única medida realizada, o erro / desvio avaliado é igual ao erro do aparelho (fornecido pelo
fabricante ou, na ausência, por convenção, é a metade da sensibilidade do aparelho - menor divisão).
δ = Desvio associado a uma única medida

δ = δfábrica, atribuído pelo fabricante aos aparelhos não graduados e/ou digitais.
δ = (1/2)S, avaliado em aparelhos graduados;
Sensibilidade (S): menor divisão da escala do instrumento.
As vidrarias utilizadas em um laboratório de química para medidas de volumes dividem-se em graduadas e

volumétricas. O erro absoluto dos equipamentos graduados é dado como a metade da menor divisão. Já os
instrumentos volumétricos têm erros fornecidos pelo fabricante que podem estar gravados na própria
vidraria ou estar tabelado. Na Tabela 1, são mostrados os valores de desvio padrão para as vidrarias
volumétricas mais comuns nos laboratórios.
Tabela 1 - Desvio padrão para as vidrarias volumétricas mais comuns nos

laboratórios.
Desvio / mL
Volume / mL
Balão Volumétrico Bureta Pipeta
5 ± 0,02 ± 0,01 ± 0,01
10 ± 0,02 ± 0,02 ± 0,02
25 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,03
50 ± 0,05 ± 0,05 ± 0,05
32
100 ± 0,08 ± 0,10 ± 0,05
500 ± 0,20 - -
1000 ± 0,30 - -
Tratamento Estatístico de Dados Experimentais

População e amostra: inferência estatística
Inferência estatística é o processo pelo qual estatísticos tiram conclusões acerca da população usando
informação de uma amostra (Figura 6).
Figura 7 - Relação entre população e amostra.
A população se refere a todos os casos ou situações as quais o pesquisador quer fazer inferências ou
estimativas. Diferentes pesquisadores podem querer fazer inferências acerca da concentração de poluentes
num determinado lençol freático; predizer a quantidade de petróleo num poço a ser perfurado e assim por
diante.
Uma amostra é um subconjunto da população usado para obter informação acerca do todo.
Uma amostragem é muito útil porque muitas vezes conhecer informações sobre toda a população requer
custo elevado, tempo muito longo e algumas vezes é um procedimento impossível como, por exemplo, o
estudo da poluição atmosférica. Características de uma população que diferem de um indivíduo para outro
e as quais temos interesse em estudar são chamadas variáveis. Exemplos são comprimento, massa, volume,
idade, temperatura, número de ocorrências, etc.
A teoria da amostragem é um estudo das relações existentes entre uma população e as amostras dela
extraídas. Podemos, por exemplo, avaliar grandezas desconhecidas da população (como sua média, sua
variância, etc.), frequentemente denominadas de parâmetros, através das correspondentes grandezas
amostrais, denominadas de estatísticas amostrais. A Tabela 2 mostra a associação de grandezas
populacionais e amostrais para diferentes medidas.
Tabela 2 - Simbologia utilizada para os estimadores

populacional e amostral.
33
Utilizamos estimativas de uma amostra como nosso “melhor chute”' para os verdadeiros valores
populacionais. Exemplos são a média amostral, o desvio padrão amostral, a mediana amostral, os quais
estimam a verdadeira média, desvio padrão e mediana da população (que são desconhecidos). À medida
que a amostra aumenta mais informação nós teremos acerca da população de interesse, e, portanto mais
precisas serão as estimativas dos parâmetros de interesse.
Note que estatísticas são usualmente representadas por letras Romanas, (por exemplo, χ para a média
amostral, s para o desvio padrão amostral), enquanto que parâmetros são usualmente representados por
letras Gregas (por exemplo, µ para a média populacional, σ para o desvio padrão populacional).
Média aritmética e desvio padrão amostral

Em uma série de n medidas repetidas da mesma grandeza física, os valores observados (x i) não são
idênticos: eles diferem apreciavelmente entre si e situam-se dentro de uma faixa de dispersão, centrada
em torno de um valor médio (¯x), obtido pela média aritmética das medidas:
O parâmetro mais usado para avaliar a dispersão é o desvio padrão (s), que é definido pela relação
matemática abaixo e pode ser calculado com o auxílio de uma calculadora científica.
Existem várias outras grandezas amostrais que podem ser usadas para o estudo de um conjunto de dados,
mas nesta prática serão utilizados apenas a média e o desvio padrão amostral.
3.1 Materiais de Consumo (Reagentes):
Água destilada
Papel toalha (três a quatro folhas por grupo).
3.2 Materiais Permanentes (Vidrarias/equipamentos):
Seis béqueres de 50 mL;

Dois béqueres de 100 mL;
Três pêras de borracha ou pipetadores plásticos de 25 mL;
34
Três pipetas volumétricas de 25,00 mL;
Três provetas de 25,0 mL;
Três pissetas;
Três termômetros;
Três cronômetros;
Três suportes universais;
Três garras para fixação do termômetro;
Três chapas de agitação magnética;
Três barras magnéticas (“peixinhos”)
Balança analítica
3.3 Procedimentos:
A)Medidas de volume e de massa:
A1) Verifique se a balança está nivelada e, em seguida, ligue-a. Aguarde cerca de 30 segundos e então
zere a balança, tendo o cuidado de antes verificar se há algum resíduo no prato 2.
A2) Coloque um béquer de 50 mL na balança e anote sua massa. Em seguida, tare a mesma.
A3) Coloque cerca de 40 mL de água destilada em outro béquer de 50 mL. Encaixe uma pêra ou um
pipetador em uma pipeta volumétrica de 25,00 mL (ver instruções).
A4) Meça 25,00 mL de água destilada na pipeta (atenção com o menisco, consulte as instruções) e
transfira-a para o béquer previamente tarado. Atenção! Para evitar molhar a balança, retire o béquer
desta antes de colocar a água. Em hipótese alguma zere a balança, para não perder a tara previamente
feita.
A5) Anote o valor da massa de água.
A6) Descarte a água do béquer e seque-o cuidadosamente com uma folha de papel toalha.
A7) Repita as etapas de A2 até A6 por mais duas vezes.
A8) Repita as etapas de A2 até A7, usando agora uma proveta de 25,0 mL no lugar da pipeta.
Anotações:
Massas do béquer: __________ / __________ / __________ / __________ / __________ / __________
Massas de água: __________ / __________ / __________ / __________ / __________ / __________
B)Medidas de temperatura:
ATENÇÃO: nos termômetros de uso comum em laboratórios, as marcações da escala estão na casa das
dezenas, mas o algarismo das dezenas aparece à esquerda da coluna de mercúrio, enquanto os
algarismos das unidades encontram-se à direita. Logo, a medida da escala seria, por exemplo, de 20 °C,
e não de 2,0 °C. Além disso, a disposição da escala nos termômetros permite que as leituras sejam
feitas com uma casa decimal de precisão, com variação mínima de 0,5 °C de uma medida para outra.
B1) Adicione cerca de 50 mL de água destilada em um béquer de 100 mL.
B2) Fixe cuidadosamente o termômetro no suporte universal com a garra.
B3) Coloque a chapa de agitação magnética sobre a base do suporte universal. Coloque o béquer com
água sobre a chapa de agitação.
B4) Ajuste cuidadosamente o termômetro de maneira que o bulbo fique totalmente em contato com a
água no béquer.
B5) Adicione cuidadosamente a barra magnética no béquer e acione somente a agitação magnética,
deixando o aquecimento desligado.
2
Zerar ou tarar a balança: ajustar a escala, deixando a mesma indicando zero gramas.
35
B6) Com auxílio do cronômetro, faça 5 (cinco) leituras da temperatura da água com intervalos de 30
segundos. Anote as temperaturas com todos os algarismos significativos adequados.
B7) Com auxílio da Tabela 3, determine a densidade da água nas temperaturas medidas.
Tabela 3 - Densidade da água em diferentes temperaturas (Fonte: KOTZ et al., 2009).
T (°C) d (g/mL ou g.cm-3) T (°C) d (g/mL ou g.cm-3)
10 0,999700 20 0,998203
11 0,999605 21 0,997992
12 0,999498 22 0,997770
13 0,999377 23 0,997538
14 0,999244 24 0,997296
15 0,999099 25 0,997044
16 0,998943 26 0,996783
17 0,998774 27 0,996512
18 0,998595 28 0,996232
19 0,998405 29 0,995944
Anotações:
Temperaturas da água: ___________ / ___________ / ____________ / ____________ / ____________
Densidades da água: ____________ / ____________ / ____________ / ____________ / ____________

Para o teste de difusão em disco (antibiograma) serão necessários os seguintes materiais:
Placas de Petri 150mm x 10mm;
Estufa bacteriológica;
Alças bacteriológicas em platina ou descartáveis;
Agar Mueller Hinton;
Tubo com escala 0,5 Mac Farland ou tubidímetro;
Solução salina estéril (NaCl 0,85%);
Termômetro de máxima e mínima para controle da estufa;
36
Swabs estéreis para espalhamento da suspensão;
Pinças;
Tabelas com os valores esperados de halos inibitórios;
Bico de Bunsen;
Discos de antimicrobianos
Procurar e identificar os instrumentos a seguir e discutir suas aplicações.
VIDRARIAS, EQUIPAMENTOS E OUTROS MATERIAIS
MATERIAIS DE VIDRO:
Balão de fundo chato ou de Florence: utilizado

no armazenamento e no aquecimento de
líquidos, bem como em reações que se
processam com desprendimento de gás; deve
ser aquecido sobre a tela de amianto.
Balão de fundo redondo: muito usado em

destilações, para colocação do líquido a ser
destilado ou para a coleta deste após a
condensação do vapor; pode apresentar boca
esmerilhada de diâmetro padronizado;
também na forma de balão de destilação,
possui gargalo longo e é rovido de saída
lateral, por onde passam gases e vapores; para
ser aquecido, deve estar em manta de
aquecimento ou em banho-maria.
Balão volumétrico: recipiente calibrado,

destinado a conter um determinado volume de
líquido, a uma dada temperatura; é utilizado
no preparo e na diluição de soluções de
concentração definida (soluções-padrão);
como o volume nominal dos balões
37
volumétricos é geralmente calibrado a 20 °C,
não se deve, em hipótese alguma, colocar
soluções aquecidas no seu interior, nem
submetê-los a temperaturas elevadas ou muito
reduzidas, sob risco de descalibrá-lo e torná-lo
inútil.
Bastão de vidro: usado na agitação e na

transferência de líquidos; quando envolvido
em uma das extremidades por um tubo de
látex é chamado de "policial" e é empregado
na remoção quantitativa de precipitados; é
frágil e deve ser tratado como tal.
Béquer: recipiente com ou sem graduação, de

forma alta (Berzelius) ou baixa (Griffin); usado
para transferência de líquidos a partir de
recipientes maiores (frascos comerciais de 1 L,
por exemplo) no preparo de soluções,
pesagem de sólidos e aquecimento de líquidos,
bem como em reações de precipitação e
recristalização; é freqüentemente
confeccionado em vidro pirex, resistente a
temperaturas elevadas; não resiste a choques
nem a variações bruscas de temperatura; pode
ser aquecido em tela de amianto; não deve ser
usado para medidas confiáveis de volume, pois
sua escala é imprecisa (aproximada).
Bureta: equipamento calibrado para medidas

exatas de volume; permite o escoamento
controlado de líquido e é muito utilizada em
titulações; possui uma torneira de vazão
controlada na sua parte inferior; são
comercializadas buretas com capacidades de 5
(cinco) a 100 (cem) mililitros e microburetas
com capacidade mínima de cem microlitros; as
buretas automáticas possuem dispositivos
capazes de abastecê-las automaticamente,
evitando a contaminação do titulante com CO 2
do ar.
38
Condensador: equipamento destinado a
condensação de vapores, utilizado em
destilações ou aquecimentos sob refluxo; os
mais comuns são: a) condensador reto
(apresenta uma superfície de condensação
pequena e por isso não é apropriado para o
resfriamento de líquidos de baixo ponto de
ebulição); b) condensador de bolas
(empregado em refluxos; contribui para que os
vapores condensados retornem ao balão de
origem); c) condensador de serpentina
(proporciona maior superfície de condensação
a b c
e é usado principalmente no resfriamento de
vapores de líquidos de baixo ponto de
ebulição).
Cuba de vidro: recipiente geralmente utilizado

em recristalizações e separações
cromatográficas; também pode conter
misturas refrigerantes.
Dessecador: usado no armazenamento de

substâncias que devem ser mantidas sob
pressão reduzida ou em condições de umidade
baixa; deve conter material dessecante (sílica-
gel, cloreto de cálcio etc.) no fundo, abaixo da
placa de porcelana.
Erlenmeyer: recipiente largamente utilizado na

análise titulométrica, no aquecimento de
líquidos e na dissolução de substâncias; pela
sua forma cônica, é muitas vezes utilizado para
conter soluções durante reações conduzidas
sob agitação; assim como os béqueres,
também não são destinados a medidas
precisas de volume, pois também possuem
uma escala meramente aproximada.
39
Kitassato ou kitasato: frasco cônico de
paredes reforçadas, munido de saída lateral; é
usado em filtrações sob sucção (ou pressão
reduzida).
Funil de separação: vidraria largamente

utilizada em extração, decantação, separação
de líquidos imiscíveis e adição gradativa de
líquidos reagentes durante uma reação
química.
Funil simples: vidraria largamente utilizada em

extração, decantação, separação de líquidos
imiscíveis e adição gradativa de líquidos
reagentes durante uma reação química;
empregado na transferência de líquidos e em
filtrações simples, utilizando papel de filtro
adequado.
Pipeta: Instrumento calibrado para medida

precisa (e, portanto, mais confiável) e
transferência de determinados volumes de
líquidos, a dada temperatura. Existem
basicamente dois tipos de pipetas: as
graduadas (1) e as volumétricas ou de
transferências (2). As volumétricas são
utilizadas para escoar volumes fixos, enquanto
as graduadas são utilizadas para escoar
volumes variáveis de líquidos; ambas devem
ser usadas somente para soluções e líquidos
límpidos e altamente fluidos (pouco viscosos).
Proveta: frasco destinado a medidas precisas

de volume (quase tão precisas quantos as
realizadas em pipetas) e, por isso, confiáveis;
são recomendadas no caso de líquidos mais
viscosos e suspensões; são encontradas no
comércio provetas com volume nominal
variando de cinco mililitros a alguns litros.
40
Termômetro: instrumento apropriado para
medida de temperatura; são encontrados no
comércio termômetros de mercúrio e de
álcool; os primeiros são mais confiáveis mas,
por conterem mercúrio (metal pesado), devem
ser tratados com ainda mais cuidado, pois em
caso de danos deve-se cuidar para que não
reste nenhuma gotícula de mercúrio no
ambiente.
Tubo de ensaio: geralmente utilizado em

reações de testes e em ensaios de
precipitação, cristalização e solubilidade; pode
ser aquecido, com cuidado, diretamente sobre
a chama do bico de gás.
Vidro de relógio: utilizado no recolhimento de

sublimados, na pesagem de substâncias
sólidas, em evaporações e na secagem de
sólidos não-higroscópicos.
MATERIAL DE PORCELANA:
Almofariz e pistilo: destinados a pulverização,

trituração e homogeneização de sólidos, bem
como na maceração de amostras que devem
ser preparadas para posterior extração; podem
ser feitos de porcelana, ágata, vidro ou metal.
Cadinho: usado na secagem, no aquecimento e

na calcinação de substâncias; pode ser feito de
porcelana, metal ou teflon.
Cápsula: usada na evaporação de soluções, na

sublimação e secagem de sólidos e na
preparação de misturas; embora semelhante
ao gral no formato, possui paredes bem mais
41
finas e é, portanto, frágil.
Funil de Büchner: utilizado em filtrações por

sucção (ou sob pressão reduzida), devendo ser
acoplado a um frasco kitassato.
Triângulo de porcelana: usado como suporte

no aquecimento de cadinhos.
MATERIAL DE METAL:
Espátula: usada para transferir substâncias

sólidas, especialmente em pesagens; pode ser
fabricada em aço inoxidável, porcelana e
plástico; possui formatos variados.
Pinças: as pinças de Mohr (A) e de Hoffmann

(B) têm por finalidade impedir ou reduzir o
fluxo de líquidos ou de gases através de tubos
flexíveis; já a pinça representada em (C) é
muito empregada para segurar objetos
aquecidos, especialmente cadinhos.
MATERIAIS DE METAL USADOS EM MONTAGENS:
Argola: usada como suporte para funis simples

e de separação.
Garras: são feitas de alumínio ou ferro,

podendo ou não ser dotadas de mufas; ligam-
se ao suporte universal por meio de parafusos
e destinam-se à sustentação de utensílios com
buretas, condensadores, frascos kitassato,
42
balões de fundo redondo etc.
Mufa: adaptador de ferro ou alumínio com

parafusos nas duas extremidades, utilizada
para a fixação de garras metálicas ao suporte
universal.
Suporte universal: serve para sustentar

equipamentos em geral; quando usado, deve-
se colocar uma toalha de papel embaixo para
proteção e limpeza.
INSTRUMENTAÇÃO UTILIZADA PARA MEDIDAS DE MASSA:
Balança analítica: instrumento utilizado para

determinação de massas com alta exatidão. As
balanças analíticas podem ser classificadas em
duas categorias: a) balança de braços iguais:
efetua a pesagem mediante a comparação
direta. Foi largamente utilizada até a década
de 50, sendo posteriormente substituída pela
balança analítica de prato único. b) Balança de
prato único: possui um contrapeso que
balanceia as massas conhecidas e o prato (ver
figura). Um objeto é pesado através da
remoção de massas conhecidas até que o
equilíbrio com o contrapeso seja
restabelecido; deste modo, o valor da massa
desconhecida é igual ao total das massas
removidas. Balanças semi-analíticas são
43
também usadas para medidas nas quais a
necessidade de resultados confiáveis não é
crítica.
EQUIPAMENTO DE SECAGEM:
Estufa: equipamento empregado na secagem

de materiais por aquecimento; atinge, em
geral, temperaturas de até 200 °C. Após a
secagem o material é encaminhado ao
dessecador.
EQUIPAMENTO DE IGNIÇÃO:
Mufla ou forno: utilizada na calcinação

(“queima”) de substâncias; atinge em geral,
temperaturas na faixa de 1000 a 1500 °C.
EQUIPAMENTOS DE AQUECIMENTO:
Bicos de gás: fonte de calor destinada ao

aquecimento de materiais não inflamáveis. A
chama de um bico de gás pode atingir
temperatura de até 1500 °C. Existem vários
tipos de bicos de gás (ver figura), mas todos
obedecem a um mesmo princípio básico de
funcionamento: o gás combustível é
introduzido numa haste vertical, em cuja parte
inferior há uma entrada de ar para suprimento
de oxigênio, o gás é queimado no extremo
superior da haste. Tanto a vazão do gás quanto
a entrada de ar podem ser controladas de
forma conveniente. Os tipos mais comuns de
bicos de gás são: (A) bico de Bunsen; (B) bico
de Tirril; e (C) bico de Mecker.
44
Tela de amianto: tela metálica, contendo
amianto, utilizada para distribuir
uniformemente o calor durante o aquecimento
de recipientes de vidro ou metal expostos à
chama do bico de gás.
Tripé: usado como suporte, principalmente de

telas de amianto e triângulos de porcelana.
Banho-maria: equipamento utilizado para

aquecimento e incubação de líquidos a
temperaturas inferiores a 100 °C.
Manta elétrica: utilizada no aquecimento de

líquidos contidos em balões de fundo redondo.
Chapas elétricas: utilizadas para solubilização

de substâncias por aquecimento. As
temperaturas podem atingir 250 °C.
MATERIAIS DIVERSOS:
Pêra: acoplado a uma pipeta, ajuda a “puxar” e

a “expelir” pequenos volumes de líquidos.
45
Centrífuga: instrumento que serve para
acelerar a sedimentação de sólidos suspensos
em líquidos; é empregado, também, na
separação de emulsões, e de sangue.
Bateria ou estante ou suporte para tubos de

ensaio: pode ser feita de metal, acrílico ou
madeira.
Pinça de madeira: utilizada para segurar tubos

de ensaio, geralmente durante aquecimento.
Pisseta ou frasco lavador ou garrafa lavadeira:

frasco próprio para armazenamento de
pequenas quantidades de água destilada,
álcool ou outros solventes; é usado para
efetuar a lavagem de recipientes ou
precipitados com jatos do líquido nele contido.
Trompa de água (vácuo): dispositivo para

aspirar o ar e reduzir a pressão no interior de
um frasco; é muito utilizado em filtrações por
sucção, geralmente adaptado a um frasco
kitassato, e ligado à torneira.
46
Espectrofotometro): O espectrofotômetro
permite análises quantitativas e qualitativas de
amostras, no espectro visível. Ele pode ser
amplamente utilizado em ensaios clínicos, na
indústria farmacêutica, bioquímica,
petroquímica e nas áreas de proteção
ambiental e controle de qualidade.
Centrifuga: A alta velocidade da centrífuga

refrigerada, tornando-o ideal para aplicações
de alta velocidade. Seu tamanho pequeno e
seu sistema de amortecimento permite sua
instalação em qualquer de bancada de
laboratório e permite a operação a ser simples
e confortável, tem com diferentes opções de
rotor para acomodar quase todos os tipos de
recipientes, que podem ser utilizados para
baixo para alto rendimento, bem como
aplicações em biologia molecular ou de cultura
de células.
ATKINS, Peter W.; JONES, Loretta. Princípios de química: questionando a vida moderna e o meio. 5. ed.
Porto Alegre: Bookman, 2012.
DIAS, S. L. P. Química Analítica: Teoria e Prática Essenciais. 1. Ed. Brasil: Bookman,2016. 392p.
KOTZ, John C. Química geral e reações químicas: volume 1. 3.ed. São Paulo: Cengage Learning, 2016.
47
SKOOG, D. A.; CROUCH, S. R.; HOLLER, F. J.; WEST, D. M. Fundamentos de Química Analítica. 1. ed. Brasil:
Cengage CTP, 2014. 1088p.
48
AULA 05: Manipulação de Balanças – Cuidados e Técnicas de Pesagem
1. Competências
Manipular adequadamente a balança, conhecendo sua estrutura, precisão, cuidados, tara e fatores que
interferem na sua fidelidade;
Converter medidas de massa.

Ciências biológicas: Biotecnologia Industrial e Ambiental; Biologia Molecular e Biotecnologia; Imunologia e
Microbiologia Clínica; Bioquímica Clínica.
2. Introdução
Um aluno de iniciação científica chegou ao seu primeiro dia de trabalho, o laboratório foi apresentado e o
projeto em que ele trabalharia também. O projeto envolvia o estudo do efeito de um suplemento X no
ganho de peso de camundongos e a primeira tarefa do aluno seria pesar a dose de suplemento que seria
dada a cada camundongo. Sabendo que a dose do suplemento é de 25mg/kg e que o peso dos
camundongos é, respectivamente 20g, 22g, 19g, 21g e 18g; como o aluno deveria proceder na pesagem do
suplemento?
A balança:
A balança é um dos instrumentos mais importantes do laboratório, é também um instrumento delicado e
de preço elevado. A balança mede a massa (a quantidade de matéria do qual um objeto é composto) de um
objeto e quase toda a análise química envolve previamente um processo de pesagem. O peso, por sua vez,
é a força com que a massa é atraída para o centro de gravidade, e por isso é variável. Para seu
funcionamento adequado, a balança deve ser calibrada com frequência e o processo de calibração é feito
com pesos padrão.
A diferença entre as balanças está na precisão e na capacidade. A precisão indica o quanto as medidas
repetidas estão próximas umas das outras (Figura 1). A capacidade máxima também deve ser observada,
pois por ser um aparelho de precisão delicado, o uso de cargas excessivas pode gerar estragos na balança.
Normalmente a capacidade máxima da balança está impressa nela.
49
Figura 1 – Ilustração do significado de precisão e exatidão
Em laboratórios costuma-se utilizar as balanças semi-analíticas e as balanças analíticas. A balança semi-

analítica alcança até 0,001 de precisão, enquanto a balança analítica chega a alcançar até 0,0001. Além da
precisão, a exatidão é um parâmetro importante nesse tipo de medida. A exatidão indica o quão próximo o
valor medido está do valor real. Assim, a escolha da balança deve levar em consideração a precisão
requerida, a massa a ser pesada e a capacidade máxima da balança.
Além disso, todo procedimento analítico está sujeito a erros instrumentais, causados pela falta de
calibração por exemplo, e erros aleatórios, produzidos por fatores sobre os quais o analista não tem
controle. Dessa forma, a manipulação da balança deve ser feita de forma cuidadosa, de forma a minimizar
os erros de aferição, obtendo resultados confiáveis. Para isso, alguns cuidados gerais sempre devem ser
tomados:
 Conhecer as características do material a ser pesado;
 Consultar o Procedimento Operacional Padrão (POP) para conhecer o modo de funcionamento da
balança;
 Verificar se a balança está nivelada e caso ela não esteja, nivelar a balança;
 Retirar sujidades do prato da balança com pincel apropriado;
 Zerar a balança;
 Não pesar substâncias corrosivas, voláteis ou higroscópicas em frascos abertos;
 Centrar o peso no prato da melhor forma possível;
 Nunca tocar com as mãos os objetos a serem pesados. Estes devem ser manipulados com pinça,
espátula ou com um pedaço de papel limpo;
 Utilizar recipientes adequados, limpos e secos para a pesagem (pesafiltro, vidro de relógio, cadinho,
papel manteiga), nunca colocar o material a ser pesado diretamente no prato;
 O material a ser pesado deve estar em temperatura ambiente para evitar interferências na medida;
 Caso a balança seja composta por uma câmara de pesagem, mantê-la fechada durante a leitura;
 Não pesar materiais com peso próximo da capacidade máxima da balança;
 Nunca deixar pesos na balança após a pesagem;
 Zerar a balança sempre que terminar essa operação;
 Conservar a balança limpa: após cada pesagem, garantir que não ficou nenhuma sujidade no prato;
 Evitar ao máximo mover a balança;
 Evitar aglomeração de observadores durante a determinação de uma massa.
Instruções gerais para o uso de uma balança:
1. Nivelar a balança;
2. Calibrar a balança;
50
3. Colocar o recipiente no qual o material será pesado, tarar a balança ou anotar o peso do recipiente;
4. Colocar o objeto a ser pesado;
5. Fazer a leitura e anotar.
Transformação de unidades:
Cada unidade de massa é 10 vezes maior que a unidade imediatamente anterior (Figura 2).
Figura 2 – Conversão de unidades de massa
Cloreto de sódio:
O cloreto de sódio é um composto iônico resultante de interações entre cátions Na + e ânions Cl-. É
popularmente conhecido como sal comum ou sal de cozinha e sua fórmula química é NaCl.
 Cloreto de sódio (NaCl).
 2 balanças semi-analíticas com precisão diferente;
 Vidro de relógio (1 por grupo);
 Espátula (1 por grupo).
3.3 Procedimentos
 Pesar o vidro de relógio nas duas balança e anotar a leitura;
 Pesar exatamente 2g de NaCl na balança de menor precisão e anotar a leitura;
 Pesar o vidro de relógio + 2g de NaCl na balança de maior precisão e anotar leitura;
 Calcular a massa de NaCl de acordo com a leitura da balança de maior precisão e comparar com os
2g obtidos na balança de menor precisão.

O aluno deveria calcular a dose que deveria ser administrada a cada camundongo utilizando a seguinte
regra de três:
25 mg  1000 g (dose por 1kg)
x  20 g (peso do camundongo)
Assim, sabe-se que o as doses seriam respectivamente 0,5mg; 0,55mg; 0,475mg; 0,525; e 0,45mg. Por isso,
a balança adequada para garantir precisão das doses seria uma balança com precisão de pelo menos
0,0001mg.
5. Listas de Exercícios
1) Complete as tabelas abaixo:
51
Composto µg mg g kg
A 15
B 0,30
C 0,72
D 5,7
Composto µL ml L
E 3,1
F 52
G 0,05
Solução
(Composto de mol/L mg/mL g/mL %m/v
MM= 16g/mol)
1 50
2 2,5
3 0,02
4 10
2) Uma professora está organizando um novo laboratório de aulas práticas e pediu seu aluno de iniciação
científica que fizesse uma lista dos equipamentos necessários. Sabendo-se que nesse laboratório são
testados medicamentos com doses variando de 1 a 100 mg/kg em coelhos (peso entre 1 e 3 kg) e que
esses coelhos têm ingestão de cenoura controlada (50 g por dia), balanças com que precisão são
essências para o laboratório?
3) A prescrição médica é de 125 mg do antibiótico X. Sabendo que o frasco do antibiótico X contém 50

mg/mL, quantos mL devem ser administrados?
4) Sabe-se que para o teste de tolerância à glicose em crianças administra-se 1,75 g/Kg de peso de glicose
(MM=180,16 g/mol). Calcule a dose de glicose em (mol, mg e g) a ser administradas em 4 crianças, com
os pesos de respectivamente: 5 kg, 13 kg, 25 kg e 40 kg.
5) Esquematize o procedimento de pesagem de uma amostra de 15,2 g; detalhando as vidrarias a serem

utilizadas e a precisão necessária da balança.
52
53
AULA 06: Aquecimento em laboratório.
1. Competências
Identificar e manusear fontes de aquecimento presentes nos laboratórios.
1.1 Correlação com as competências Profissionalizantes

Biomedicina: Métodos de Aprendizagem, Pesquisa e Análise; Métodos de Análise, Investigação e
Síntese; Parasitologia Clínica; Agentes Infecciosos e Respostas Imunológicas; Análise Ambiental;
Controle de Qualidade em Alimentos; Farmacologia; Biologia Molecular e Biotecnologia; Vigilância
Sanitária; Citologia Clínica e Fluidos Corporais; Bioquímica Clínica; Hematologia Clínica e Banco de
Sangue; Controle de Qualidade de Laboratório; Circulação Extracorpórea; Imunologia Clínica; Análises
Toxicológicas e Criminalística; Microbiologia Clínica; Interpretação de Exames Laboratoriais
Ciências Biológicas: Métodos de Aprendizagem, Pesquisa e Análise; Métodos de Análise, Investigação e
Síntese; Agentes Infecciosos e Respostas Imunológicas; Análise Histológicas e Citogenéticas;
Biotecnologia Industrial e Ambiental; Saúde Ambiental; Imunologia e Microbiologia Aplicada
Farmácia: Métodos de Aprendizagem, Pesquisa e Análise; Métodos de Análise, Investigação e Síntese;
Química Analítica e Instrumental; Processamento e Controle de Qualidade de Alimentos; Práticas
Integrativas do SUS; Farmacognosia; Farmacotécnica; Tecnologia Farmacêutica; Controle de Qualidade
Fisicoquímico e Microbiológico; Parasitologia e Imunologia Clínicas; Hematologia e Banco de Sangue
Cosmetologia; Análises Toxicológicas e Toxicologia; Bioquímica Clínica; Tópicos em Ciências
Farmacêuticas
2. Introdução
Você foi contratado como técnico no Laboratório de Microbiologia de um Centro Universitário. Você teve
15 dias para treinamento e na primeira semana de aula já deve preparar os meios de cultura para serem
utilizados nos experimentos. Você preparou meios líquidos e sólidos, porém alguns tubos contendo meio
sólido ainda permaneceram líquidos. O que ocorreu? Como solucionar esse problema?
Antes de aquecer qualquer substância, é necessário conhecer a sua natureza. Água e éter, por exemplo, são
líquidos com propriedades totalmente diferentes e, por isso mesmo, devem ser aquecidos de modo
diferente.
Chapa Aquecedora:
A Chapa Aquecedora é um equipamento que possui uma plataforma aquecida confeccionada em aço,
tendo como função aquecer amostras de forma uniforme com temperatura constante, podendo ser
controlada de forma analógica ou digital.
Autoclave:
O Autoclave é um aparelho utilizado para esterilizar artigos através do calor úmido sob pressão. Existem
vários modelos de autoclaves. Normalmente nos laboratórios de pesquisa são empregados os modelos
verticais em um ciclo de 121°C por 15 a 20 minutos.
Bico de Bunsen:
O bico de Bunsen é um dispositivo usado para efetuar aquecimento de soluções em laboratório. Em
biologia, especialmente em microbiologia e biologia molecular, é usado para manutenção de condições
estéreis aquando da manipulação de microrganismos, DNA, etc.
54
Reações químicas:
As reações químicas são transformações que envolvem quebra e formação de ligações resultando na
formações de nova(s) substância(s). Nessas transformações pode haver consumo ou liberação de calor,
evidenciado por variação na temperatura. De acordo com a variação da energia do sistema, as reações
podem ser classificadas em:
 Exotérmica: reação em que há liberação de energia;

 Endotérmica: reação em que há consumo de energia.
Ágar Nutriente
Água destilada
Etanol
Cloreto de sódio (NaCl)
Nitrato de amônio (NH4NO3)

Material necessário por grupo (6 grupos):
6 Placas de Petri de vidro
2 Tubos de ensaio com tampa de rosca
Papel pardo
Fita de autoclave
1 Erlenmeyer
1 rolha de algodão
Barbante
Fita de pH
Bico de Bunsen
Chapa aquecedora
Agitador magnético
Espátula
Balança de precisão
3 béqueres de 150 mL
Termômetro
Bastão de vidro
Vidro de relógio
Espátula
3.3 Procedimentos
Preparo de meio de cultura:
 Pesar os componentes do meio e hidratá-lo com água destilada (usualmente coloca-se apenas uma
parte do volume de água, mede-se e acerta-se o pH, se necessário, e então se completa o volume
final).
 Dissolver por completo utilizando chapa aquecedora.
 Distribuir 3 mL do meio de cultura dissolvido em 2 tubos de ensaio.
55
 Distribuir, na presença do Bico de Bunsen, o meio de cultura pronto em placas, previamente
esterilizadas.
Variação da temperatura em reações químicas:
 Adicionar 50 mL de água em um béquer e medir a temperatura;

 Acrescentar 50 mL de etanol nesse béquer, homogeneizar e medir novamente a temperatura;
 Avaliar a variação da temperatura e classificar a reação em endotérmica ou exotérmica;
 Em outro béquer, acrescentar 100 mL de água destilada e medir a temperatura;

 Pesar 20 g de NaCl e acrescentar no béquer;
 Misturar com o bastão e vidro e media a temperatura novamente;
 Avaliar a variação da temperatura e classificar a reação em endotérmica ou exotérmica;
 Em um terceiro béquer, acrescentar 100 mL de água destilada e medir a temperatura;

 Pesar 20 g de NH4NO3 e acrescentar no béquer;
 Misturar com o bastão e vidro e media a temperatura novamente;
 Avaliar a variação da temperatura e classificar a reação em endotérmica ou exotérmica.

Os meios de cultura devem ser preparados seguindo as recomendações do fabricante. Meios líquidos
devem ser dissolvidos em água destilada e os meios sólidos devem ser dissolvidos em água destilado com
auxílio de aquecimento. Esses meios devem ser dissolvidos por completo em chapa aquecedora antes de
serem distribuídos nos tubos de ensaio e serem autoclavados. Se o ágar, que solidifica os meios, não estiver
dissolvido por completo não será distribuído igualmente nos tubos de ensaio e mesmo após a autoclavação
alguns tubos poderão permanecer líquidos pela ausência de quantidade ideal de ágar.
Em relação a procedimentos de aquecimento nos laboratórios responda as questões a seguir.
1) Como proceder quando a chama do bico de Bunsen está amarela?

2) Todas as vidrarias podem ser postas para secar na estufa de secagem?
3) A autoclavação é um método apropriado para esterilizar óleos?
4) Como funciona uma autoclave?
5) Qual é a utilidade do banho-maria no laboratório?
56
TORTORA, G.I.; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia. 10 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2012. 894p.
57
AULA 07: Técnicas de pipetagem.
1. Competências
Reconhecer e manusear pipetas presentes nos laboratórios.

molecular e biotecnologia; Vigilância sanitária; Bioquímica clínica; Hematologia clínica e banco de
sangue; Controle de qualidade de laboratório; Imunologia clínica; Análise toxicológica e criminalística;
Microbiologia clínica
microbiologia aplicada
Farmácia: Métodos de análise, investigação e síntese; Química Analítica e instrumental; Agentes
infecciosos e resposta imunológica; Processamento, controle e qualidade de alimentos; Farmacognosia;
Biologia molecular e biotecnologia; Farmacotécnica; Controle de qualidade físico-quimico e biológico;
Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e banco de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e
toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica
2. Introdução
Você passou na seleção para uma bolsa de iniciação científica em um Centro de Pesquisa e no seu primeiro
dia já participou da extração de DNA bacteriano de várias amostras e da quantificação dos DNAs em gel de
agarose. No 2º dia você está acompanhando a digestão por enzimas de restrição desses DNAs e na hora da
corrida do gel, para visualizar os produtos da digestão, seu tutor encarrega você de aplicar os produtos no
gel. Como você deve proceder para evitar problemas na pipetagem?
Referencial teórico:
A manipulação de equipamentos de medida deve ser extremamente cuidadosa, de forma a minimizar os
erros de aferição, obtendo dados os mais confiáveis possíveis, e a preservar a integridade dos instrumentos
utilizados. É necessário distinguir e usar convenientemente cada equipamento volumétrico de modo a
reduzir ao mínimo o erro nas análises. A técnica de pipetagem, como a própria expressão sugere, é
realizada com o auxílio de pipetas, que são instrumentos específicos para medição e transferência de
líquidos. Existem diferentes modelos de pipeta, como a pipeta graduada, volumétrica, automática,
micropipetas (ideal para níveis baixos de líquidos) e pipetas eletrônicas.
Pipetas manuais:
São o tipo mais comum de pipeta, e estão disponíveis em maior quantidade de modelos.
 Pipeta de Pasteur: a mais comum, possui apenas abertura inferior e conta com um balão que
expulsa o ar quando pressionado. São mais baratas, fabricadas em plástico e descartáveis.
 Pipeta volumétrica: são perfeitas para medição e transferência de líquidos. Não podem ser
aquecidas em hipótese alguma, pois isto alteraria a precisão.
 Pipeta graduada: apresenta diversas graduações em sua extensão, o que permite a sucção de
distintos níveis de líquidos. A pipeta graduada pode ser graduada de escoamento parcial (com duas
58
marcas de calibração e duas linhas coloridas no topo) ou pipeta graduada de escoamento total
(graduada até a ponta inferior e com uma linha colorida no topo).
Pipetas Eletrônicas:
Possibilitam uma medição muito mais precisa do que os modelos manuais, estão mais presentes em
laboratórios que realizam exames médicos ou pesquisas. As pontas são normalmente descartáveis, o que
evita contaminação.
 Micropipeta digital tipo monocanal: eficaz para dispensa tanto de volume fixo, como também de
volume variável.
 Micropipeta digital tipo multicanal: permite somente dispensa de volume variável.
 Micropipeta eletrônica padrão e multicanal: no primeiro caso (padrão) é uma micropipeta
eletrônica do tipo dispensa de volume fixo ou variável. Já o modelo multicanal é somente para
volume variável.
Recomendações para pipetar:

• O ato de pipetar deve ser executado com a pipeta em posição vertical;
• A pipeta manual deve ser segurada entre o polegar e os três últimos dedos da mão, a pipeta automática
deve ser segurada com os quatro dedos e o polegar no topo;
• Enxugue as pontas apenas se houver líquido no exterior das pontas;
• Cuide de não tocar no orifício da ponta da pipeta ou ponteira;
• Não mantenha a pipeta na mão se não estiver a pipetar;
• O líquido residual de uma pipeta volumétrica ou de alguns tipos de pipeta graduada nunca é soprado;
• Ao pipetar soluções cujo frasco contém depósito de soluto, introduzir a pipeta ou ponteira no
sobrenadante;
59
• Nunca introduzir pipetas ou ponteiras sujas nos frascos que contenham soluções ou reativos químicos
puros;
• Deve-se sempre usar pipetas ou ponteiras secas para não diluir o líquido.
Solução de corante
Água destilada

10 tubos de ensaios
Rack para tubos de ensaio
10 Microtubos Eppendorf 1,5 mL
Rack para microtubos
Pipeta Pasteur de plástico
Pipetas volumétricas de 5 mL
Béquer 250 mL
Micropipetas
Ponteiras Tipo Gilson amarelas e azuis
Pêras
5 Tubos de ensaio
3.3 Procedimentos
Transferir o corante para um béquer e preparar as diluições com base na figura abaixo:
 Preparar diluições seriadas com auxílio de pipetas manuais:
Uso da pipeta manual:

- Retirar todo o ar presente no interior da pêra, encaixar o furo de sua extremidade inferior na abertura da
extremidade superior da pipeta;
- Colocar a pipeta no líquido (bem abaixo de sua superfície) e aspirar cuidadosamente até que a coluna do
líquido esteja um pouco acima da marca de aferição;
- Retirar a pipeta da solução, retirar a pêra e imediatamente fechar a abertura da pipeta a qual a pêra
estava encaixada com o dedo indicador;
60
- Deixando entrar um pouco de ar vagarosamente pela extremidade superior (controlar com o dedo
indicador), permitir que se escorra a coluna de líquido até a coluna atingir a marca de aferição, mantendo a
pipeta em posição vertical e a marca ao nível dos olhos (evitar erro de paralaxe: erro que ocorre pela
observação errada na escala de graduação causada por um desvio óptico causado pelo ângulo de visão
do observador);
- Remover então o líquido aderente a parede externe da pipeta com um papel absorvente (papel
higiênico);
- Em seguida, colocar a ponta da pipeta junto à parede interna do recipiente receptor, deixando escoar
lentamente o conteúdo da pipeta até o nível desejado (observar o menisco formado junto às paredes da
pipeta, a medida correta é efetuada pela parte de baixo do menisco);
- No escoamento completo é importante remover a última gota encostando a pipeta na parede do tubo (a
pipeta em posição vertical, o béquer em posição inclinada);
- Finalizadas todas essas etapas lavar as vidrarias e depois ambientá-las com água destilada.
Diluição seriada (1:2):

1. Numerar os tubos de ensaio de 1 a 10;
2. No tubo de ensaio número 1, colocar 10 mL da solução colorida;
3. Nos tubos de 2 a 10, colocar 5 mL de água destilada;
4. Transferir 5 mL do tubo 1 para o 2 e homogeneizar;
5. Transferir 5 mL do tubo 2 para o 3 e homogeneizar;
6. Repetir a série até o último tubo;
7. Retirar 5 mL de solução do último tubo e descartar.
8. Observar a mudança na coloração de acordo com a concentração da respectiva solução.
 Preparar diluições seriadas com auxílio de pipetas automáticas:
Uso da pipeta automática:

- Regular a pipeta automática com o volume a ser pipetado;
- Colocar a ponteira da pipeta no líquido (bem abaixo de sua superfície) e aspirar cuidadosamente usando
o primeiro estágio da pipeta. Desprezar o conteúdo da ponteira cuidadosamente usando o segundo
estágio da pipeta. Proceder assim em todas as pipetagens.
Diluição seriada (1:2):
1. Numerar os microtubos de 1 a 10;

2. No microtubo 1 colocar 1000 µL da solução colorida;
3. Nos microtubos de 2 a 10, colocar 500 µL de água destilada;
4. Transferir 500 µL do microtubo 1 para o microtubo 2 e homogeneizar;
5. Repetir a série até o último microtubo;
6. Retirar 500 µL de solução do último microtubo e descartar;
7. Observar a mudança na coloração de acordo com a concentração da respectiva solução.
Para aplicar as amostras no gel de corrida deve-se aspirar, lentamente, o volume determinado utilizando-se
o 1º estágio da micropipeta automática. Deve ser observado o posicionamento na vertical da micropipeta.
61
Com a ponteira dentro da canaleta do gel deve-se desprezar o conteúdo, lentamente, sem apertar o 2º
estágio da micropipeta. A seguir descarta-se a ponteira, em local adequado, e utiliza-se outra ponteira para
aplicar nova amostra.
1) As pipetas são instrumentos ou equipamentos utilizados para medir ou transferir líquidos. Existem
diferentes tipos de pipetas utilizadas em laboratório. Em relação a esses instrumentos, é correto
afirmar que
a. as pipetas volumétricas são utilizadas com uma ponteira plástica na extremidade;
b. as pipetas graduadas de vidro ou plástico apresentam maior precisão se comparadas com
as manuais de volume fixo ou ajustável;
c. as pipetas de Pasteur somente são utilizadas quando se quer aferir um volume preciso;
d. as pipetas graduadas somente devem ser utilizadas com equipamentos auxiliares de
pipetagem, como por exemplo, o pipetador ou a pera.
2) Em relação às pipetas graduadas e volumétricas, é correto afirmar que

a. a pipeta graduada não deve ser utilizada para medir volumes de líquidos transparentes;
b. a pipeta volumétrica só deve ser utilizada para medir volumes fixos de líquidos coloridos;
c. a pipeta graduada é utilizada para medir volumes fixos de líquidos que não sejam voláteis;
d. a pipeta graduada é utilizada para medidas precisas de volumes variáveis de líquidos.
62
TERCEIRA UNIDADE DE ENSINO
PREPARO DE SOLUÇÕES
AULA 08: Preparo de soluções diversas
1. Competências
Preparar adequadamente soluções diversas, utilizando os procedimentos analíticos necessários;
Realizar cálculos de concentração.

 Biomedicina: Controle de Qualidade em Alimentos; Agentes Infecciosos e Respostas Imunológicas;
Farmacologia; Biologia Molecular e Biotecnologia; Citologia Clínica e Fluidos Corporais; Bioquímica
Clínica; Hematologia Clínica e Banco de Sangue; Controle de Qualidade de Laboratório; Imunologia
Clínica; Análises Toxicológicas e Criminalística; Microbiologia Clínica.
 Ciências biológicas: Biotecnologia Industrial e Ambiental; Biologia Molecular e Biotecnologia;
Imunologia e Microbiologia Aplicada;
 Farmácia: Química Analítica e Instrumental; Processamento e Controle de Qualidade de Alimentos;
Agentes Infecciosos e Respostas Imunológicas; Farmacognosia; Farmacotécnica; Biologia Molecular e
Biotecnologia; Tecnologia Farmacêutica, Controle de Qualidade Físico-Químico e Microbiológico;
Parasitologia e Imunologia Clínicas; Hematologia e Banco de Sangue; Cosmetologia; Análises
Toxicológicas e Toxicologia; Microbiologia Clínica; Bioquímica Clínica.
2. Introdução
Anos após o desenvolvimento do sildenafila para a disfunção erétil, descobriu um uso off-label do
sildenafila para neonatos com hipertensão pulmonar. O sildenafila, no entanto, está disponível na forma de
comprimidos de 50 e 100mg, forma farmacêutica que o neonato não é capaz de utilizar. Nesse contexto, o
que poderia ser feito para viabilizar o uso do sildenafila nessa população?
Soluções:
As soluções são definidas como misturas homogêneas de uma ou mais substâncias e são encontradas no
estado sólido, líquido e gasoso (Tabela 1).
Tabela 1 – Tipos de soluções segundo o estado físico do soluto e solvente
Solvente Soluto Solução Exemplo
Gás Gás Gasosa Atmosfera
Líquido Gás Líquida Água-amônia
Líquido Líquido Líquida Água-etanol
63
Líquido Sólido Líquida Água-sal
Sólido Gás Sólida Paládio-hidrogênio
Sólido Líquido Sólida Zinco-mercúrio (amálgama)
Sólido Sólido Sólida Zinco-cobre (latão)
O solvente é, geralmente, o componente em maior quantidade e o soluto o componente em menor

quantidade. A mistura desses, forma um sistema unifásico e as partículas do soluto não se separam com o
uso de ultracentrífugas, não são retidas por ultrafiltros e não são vistas através de microscópios potentes.
Para o estudo das soluções, devem ser considerados quantidade, composição e concentração. A
quantidade pode ser medida em massa ou volume, a composição é a soma de todos os ingredientes que
compõe a solução, e a concentração é a quantidade relativa desses vários componentes. O preparo de uma
solução, frequentemente, envolve a pesagem de um sólido ou a transferência de um líquido e sua
solubilização com o solvente, formando soluções sólido-líquido e líquido-líquido, respectivamente.
Concentração das soluções:
A concentração de uma solução expressa a relação entre a quantidade de soluto e a quantidade de
solvente ou solução. Para medir a quantidade de soluto, costuma-se usar unidade de massa, número de
mol ou volume e as formas mais utilizadas para expressar a concentração são concentração comum,
molaridade e título. A concentração também pode ser expressa por normalidade e fração molar, que são
menos frequentes.
Concentração comum (C)
A concentração comum é dada em massa por volume, geralmente grama por litro (g/L): indica a relação
entra a massa do soluto e o volume da solução.
Molaridade (M)
Molaridade é a concentração em quantidade de matéria, dada em número de moles por volume (mol/L):
indica a relação entre o número de mol do soluto e o volume da solução.
Título (%)
Título é a concentração em percentual (%) ou partes por 100 e pode relacionar a massa ou volume do
soluto com a massa ou volume da solução, podendo ser representada por %(m/m), %(m/v) ou %(v/v).
Exemplos:
10%(m/m)  10g de soluto em 100g de solução
10%(m/v)  10g de soluto em 100mL de solução
10% (v/v)  10mL de soluto em 100mL de solução
Fração molar (X)
64
Normalidade é a relação estabelecida entre o número de mol de uma determinada matéria e o número de
mol de toda a mistura em que a matéria está inserida.
Normalidade (N)
É a relação entre o equivalente-grama do soluto pelo volume da solução. A unidade é representada pela
letra N (normal).
Preparo da solução:
No preparo da solução, algumas operações podem ser resumidas nos seguintes itens:
 Fazer os cálculos da quantidade de soluto e solvente;
 Pesar ou medir o soluto;
 Dissolver o soluto em um béquer, utilizando apenas pequena quantidade do solvente;
 Transferir o soluto quantitativamente para um balão volumétrico;
 Completar o volume com solvente até a marca de aferição;
 Homogeneizar a solução;
 Padronizar a solução preparada;
 Guardar a solução em recipiente adequado e identificado.
Permanganato de potássio:
O permanganato de potássio é um composto de função química sal inorgânico, formado pelos íons potássio
(K)+ e permanganato (MnO4)−. É um forte agente oxidante que apresenta tanto em estado sólido quanto em
solução aquosa uma coloração violeta bastante intensa. É muito utilizado para secar as feriadas na
catapora.
Água destilada
Permanganato de potássio

Balança
Béquer de 100mL (1 por grupo)
Bastão de vidro (1 por grupo)
Pisseta com água destilada (1 por grupo)
Balão volumétrico de 250mL (2 por grupo)
Espátula
3.3 Procedimentos
 Preparo de solução sólido-líquido: solução de permanganato de potássio (KMnO 4)
o Calcular quantos g de KMnO 4 são necessários para fazer 250mL de solução de permanganato
de potássio 0,02 M;
o Pesar a massa calculada acima em um vidro de relógio;
o Transferir a massa para um béquer de 100mL;
65
o Dissolver o soluto no béquer com 40mL de água destilada;
o Lavar o vidro de relógio com água destilada para o béquer;
o Transferir a mistura para um balão volumétrico de 250mL;
o Lavar o béquer e o funil, com água destilada, e transferir essa água da lavagem para o balão;
o Completar o volume do balão com água destilada até o menisco;
o Arrolhar o balão e agitá-lo para homogeneização.

Para que o sildenafila possa ser administrado ao neonato, deve-se transformar o comprimido em solução,
ou seja, o comprimido deve ser macerado e misturado com água destilada. De acordo com a dose
recomendada para o neonato, administra-se o volume adequado dessa solução.
1) Complete a tabela abaixo:
Solução
(Composto de mol/L mg/mL g/mL %m/v
MM= 16g/mol)
1 50
2 2,5
3 0,02
4 10
2) Sabe-se que para o teste de tolerância à glicose em crianças administra-se 1,75 g/Kg de peso de
glicose (MM=180,16 g/mol). Calcule a dose de glicose a concentração da solução administrada,
sabendo que a glicose será dissolvida em 20 mL de água. Peso das crianças: 10 kg, 17 kg, 23 kg e 38
kg.
3) Considerando uma prescrição de Tramal gotas (100 mg/mL); frasco de 10 mL; dose de 30 mg 3x ao
dia; tratamento de 40 dias; 1 mL=20 gotas. Quantas gotas deverão ser administradas a cada dose?
Quantos frascos serão necessários para o tratamento completo?
4) Qual a massa em gramas de soluto em:
a. 16,0 mL de sacarose (342 g/mol) 0,350 mol/L;
b. 37,0 mL de ácido benzoico (112 g/mol) 5,75 x 10 -4 mol/L;
c. 11,7 mL de KBrO3 0,0225 mol/L.
5) Qual a massa de NaNO3 deve ser adicionada a 500 g de água para preparar uma solução 0,0512 M?
6) SEJUS ES 2009: Muitas substâncias consideradas tóxicas têm aplicações terapêuticas quando
utilizadas em mínimas doses. Exemplo dessa propriedade é o flúor. Embora considerado muito
venenoso, é um bom fármaco contra as cáries. Para Paracelsus (1493-1541) “a dose certa
diferencia o veneno do remédio”. De acordo com o Ministério da Saúde, o limite máximo de flúor
66
na água para consumo humano é de 1,5 mg/L (colher se sopa = 15mL; colher de chá = 5 mL). Com
base no texto e nas informações acima, julgue os itens seguintes:
a. Sabendo que um micrograma µg equivale a 0,000001 g, é correto afirmar que a quantidade

máxima de flúor para a preparação de um copo de água de 200 mL é de 300µg, segundo
recomendações do Ministério da Saúde;
b. Considere que uma farmácia tenha adquirido 150 L de um medicamento para atender
prescrições de 3 colheres de chá ao dia, durante 5 dias. Nesse caso, são suficientes 1.500
frascos de 75 mL cada um para a redistribuição desse medicamento;
c. Considere que um paciente adulto tome uma colher de sopa de um medicamento, quatro vezes
ao dia, durante cinco dias, e que uma criança necessite ingerir, em colheres de chá durante seis
dias, metade da quantidade do medicamento tomada pelo paciente adulto. Nesse caso, ela
deve tomar cinco colheres de chá ao dia.
67
AULA 09: Diluição de soluções
1. Competências
Fazer cálculos para a diluição de soluções;
Preparar corretamente diluições simples e seriadas;
Entender os efeitos da diluição na concentração dos componentes.

2. Introdução
A contagem em placas é um dos métodos mais utilizados para determinar qual o número de
microrganismos viáveis em um meio líquido. Esse método foi utilizado na análise de um lote de sucos com
suspeita de contaminação. No entanto, o resultado foi uma altíssima proliferação de microrganismos. O
que poderia ser feito para possibilitar a contagem desses na placa contendo meio de cultura?
Diluição de soluções:
Com frequência é necessário preparar soluções diluídas a partir de outras soluções. Essa prática é muito
comum nos laboratórios, pois geralmente as soluções que são comercializadas vêm numa concentração
bem alta e, de acordo com a finalidade, os cientistas preparam soluções mais diluídas a partir da solução
inicial. Também observamos exemplos assim no supermercado, em alguns tipos de sucos e produtos de
limpeza.
Diluir uma solução, então, é adicionar a ela mais solvente, não alterando a massa do soluto (Figura 1). O
produto básico da diluição é que o número de mol do soluto é o mesmo na solução de partida
(concentrada) e na solução final (diluída), sendo que o volume varia (aumenta da solução concentrada para
a diluída).
68
Figura 1 – Diluição de solução
Para fazer uma diluição, é necessário combinar uma amostra líquida com uma quantidade de solvente para
chegar na concentração desejada. O fator de diluição é o número total de unidade de volume em que seu
material será dissolvido e a amostra diluída deve ser muito bem homogeneizada. Uma diluição 1/5, por
exemplo, ou 1:5 (lê-se 1 para 5) é a combinação de 1 unidade de volume da amostra e 4 unidades de
volume do solvente.
Para calcular as diluições, utiliza-se uma fórmula simples:
Solução concentrada Solução diluída
Massa do soluto = ms Massa do soluto = ms
Concentração inicial = Ci Concentração final = Cf
Volume inicial = Vi Volume final = Vf
Ci = ms/Vi Cf = ms/Vf
m s = C i x Vi m s = C f x Vf
69
A diluição de soluções deve seguir a seguinte ordem:
1. Medir o volume da solução concentrada a ser diluída;
2. Transferir qualitativamente para o balão volumétrico;
3. Completar o volume com o solvente;
4. Homogeneizar a solução;
5. Guardar as soluções em recipientes adequados e identificados.
Diluição seriada (realizada na aula 7):

Uma diluição seriada é basicamente uma séria de diluições simples que amplifica o fator de diluição e a
fonte da amostra para a diluição de cada etapa vem da diluição anterior. Todas as diluições na série têm o
mesmo fator de diluição, em que a amostra da diluição anterior é usada para fazer a diluição subsequente
(Figura 2).
.
Figura 2 – Exemplo de diluição seriada
Um exemplo é uma diluição 1/10, na qual o fator de diluição é 10 e todas as diluições seguintes são
multiplicada por 10:
1/10 x 10  1/100 x 10  1/1000 x 10  ...
Uma aplicação da diluição seriada é na microbiologia, a diluição seriada é a técnica que permite a contagem
do número de microorganismos de amostras com concentrações muito elevadas. A amostra deve então ser
diluída seriadamente para que a concentração de microrganismos diminua, dando origem a colônias
suficientemente separadas, possibilitando assim a contagem.
3.1. Materiais de Consumo (Reagentes)
 Solução de NaOH 0,1mol/L
 Água destilada
 Fita para medir pH
70
Pipeta volumétrica (3 por grupo)
3.3 Procedimentos
Diluição simples: diluição de solução de NaOH
1) Medir com uma pipeta volumétrica, 1,00mL de solução de NaOH 0,1mol/L;
2) Transferir para balão volumétrico de 100mL;
3) Completar com água destilada até o menisco;
4) Homogeneizar a solução;
5) Medir o pH;
6) Comparar com o pH da solução concentrada.

Quando a concentração de microrganismos é alta, procede-se a preparação de diluições seriadas para que
a contagem possa ser realizada.
1) O ácido clorídrico, HCl, possui largo emprego em laboratórios. Assim, no preparo de uma aula prática,
pipetaram-se 10 mL de uma solução aquosa de HCl 1,0 mol/L. Em seguida, foi adicionada água
suficiente para atingir o volume de 500 mL. Qual a molaridade da solução final?
2) Uma solução 0,05 mol/L de glicose, contida em um béquer, perde água por evaporação até restar 100
mL, passando a concentração de 0,5 mol/L. Qual o volume de água evaporada?
3) O cloreto de potássio (KCl) é o sal de escolha para repor estoques de potássio exauridos por diuréticos
tiazídicos ou de alça, por diarréia intensa e pelo uso de corticosteróides em conseqüência de doenças
das supra-renais ou nas doenças tubulares renais. Entretanto, a supeerdosagem pode levar ao óbito.
Esse medicamento está disponível em ampolas plásticas de 10 mL nas concentrações de 10, 15 e 20%.
Se uso é via intravenosa e sua diluição é feita em soro fisiológico ou soro glicosado (frasco de 500 ou
1000 mL). Calcule a concentração de: KCl 10% (ampola 10 mL) diluída em soro fisiológico de 500 mL; KCl
15% (ampola 10 mL) diluída em soro fisiológico de 1000 mL; e KCl 20% (ampola 10 mL) diluída em soro
fisiológico de 500 mL.
4) O hidróxido de sódio (NaOH), também conhecido como soda cáustica, é um hidróxido cáustico usado

na indústria, principalmente como base química, na fabricação
de papel, tecidos, detergentes, alimentos e biodiesel. Trata-se de uma base forte. Apresenta
ocasionalmente uso doméstico para a desobstrução de encanamentos e sumidouros, pois
dissolve gorduras. Esse produto está disponível comercialmente em sua forma concentrada (3 mol/L),
calcule as novas concentrações considerando uma diluição 1:10, 1:100 e 1:1000.
71
72
AULA 10: pH e solução tampão
1. Competências
Entender o conceito de pH, interpretar os valores de pH de substância considerando a escala de pH e medir

o pH de substâncias utilizando indicadores ácido-base, fitas de pH e pHmetro;
Entender o que é uma solução tampão e como ela funciona.

2. Introdução
O crescimento microbiano é dependente de diversos fatores como fatores físicos (temperatura, pH,
pressão osmótica) e fatores químicos (nutrientes, água, oxigênio). Nos meios de cultura, essas condições
devem ser controladas visando favorecer o crescimento microbiano. Entretanto, sabe-se que o pH pode
variar em uma faixa ampla de acordo com os compostos presentes no meio (água, nutrientes, metabólitos
produzidos pelos microrganismos, etc). Nesse contexto, o que pode ser feito, em um meio de cultura,
visando estabilizar o pH na faixa ótima para o microrganismo em questão?
pH
pH é o potencial hidrogeniônico, uma escala logarítmica (pH = - log [H +]) que mede o grau de acidez,
neutralidade ou alcalinidade de uma solução. O pH varia de acordo com a composição da solução e a escala
de pH compreende valores de 0 a 14 (Figura 1).
73
Figuras 1 – Escala de pH
O pH pode ser estimado e medidos de várias formas:
 Indicadores ácido-base (compostos que mudam de cor de acordo com o pH);

 Fitas de pH (indicador universal que é a mistura de vários indicadores);
 pHmetro (aparelho que mede o potencial hidrogeniônico.
Solução tampão:
As soluções tampão são soluções que resistem às modificações de pH quando a elas é adicionada certa
quantidade de ácido ou base, ou ainda quando sofrem diluição. Por isso, essas soluções são utilizadas para
manter constante o pH de uma mistura e para preparar soluções de pH definido. As soluções tampão
podem funcionar em diferentes faixas de pH e sua capacidade tamponante é limitada pelo total consumo
de um dos seus componentes.
Os laboratórios usam tampões rotineiramente para controlar o pH de uma reação, manter estável os
compostos de uma solução, como peptídeos e proteínas, etc. Na indústria de alimentos, soluções tampão
como conservantes e agentes antimicrobianos.
Biologicamente, também encontramos a presença de diversos sistemas tamponados, abrangendo o

controle do pH do sangue, da saliva e até mesmo da urina. O pH do sangue é mantido entre 7,35 e 7,45 por
um equilíbrio complexo que envolve tamponamento, produção e eliminação de ácidos pelo corpo. O
tamponamento do sangue é possibilitado pelos sistemas H 2PO4-/HPO42- e CO2/H2CO3/HCO3- e uma
diminuição (acidose) ou aumento (alcalose) do pH sanguíneo pode ser fatal.
O tampão é constituído de uma mistura de um ácido fraco e sua base-fraca ou uma base-fraca e seu ácido
conjugado. Alguns exemplos comuns de tampão são:
 Ácido acético e acetato de sódio;
 Ácido cítrico e citrato de sódio;
74
 Ácido fosfórico e fosfato de sódio;
 Amônia e cloreto de amônio.
Outro exemplo de tampão é uma solução concentrada de ácido forte (pH 0-2) ou base forte (pH 12-14).
Mecanismo de funcionamento da solução tampão:
Numa solução tampão constituída do par ácido/base conjugada, temos o equilíbrio abaixo:
Se um ácido forte for adicionado a esse tampão, os íons hidrônio liberados serão consumidos pela base
conjugada do tampão. Por outro lado, se uma base forte for adicionada, os íons hidróxido liberados serão
consumidos pelo ácido fraco do tampão. Seguindo o princípio de Le Chatelier, a perturbação no equilíbrio
ácido-base será neutralizada para reestabelecimento do equilíbrio.
Essa habilidade em evitar mudanças significativas no pH é diretamente relacionada à concentração total

das espécies do tampão (ácidas e básicas), por isso, pode-se constatar que quanto maior a concentração
dessas espécies, maior a capacidade tamponante.
pH das soluções tampão:
Os sistemas tampões são escolhidos de acordo com a faixa de pH desejada utilizando a equação de
Henderson-Hasselbalch:
Essa equação é calculada a partir da constante de dissociação do ácido (pKa) ou da base (pKb) e considera a
teoria de ácidos e bases de Bronsted-Lowry, na qual um ácido (HA) é uma espécie doadora de prótons (H +)
e uma base (B) é uma espécie aceptora de prótons.
3. Materiais e métodos
Soluções tampão
75
NaOH (0,5mol/L)
Água destilada
pHmetro
Fitas de pH
Espátula
Pêra (1 por grupo)
Proveta de 50mL (1 por grupo)
Béquer 100mL (2 por grupo)
Pipeta volumétrica graduada 10mL (1 por grupo)
Bastão de vidro (1 por grupo)
Vidro de relógio (1 por grupo)
Liquidificador
Peneira
Béquer de 500 mL
Pipeta de Pasteur (1 por grupo)
Tubos de ensaio (5 por grupo)
Estante para tubos de ensaio
3.3 Procedimentos
 Parte 1: Verificação das propriedades de um tampão
1) Colocar 50 mL da solução de água em um béquer de 100 mL;
2) Medir o pH com fita de pH;
3) Imergir o pHmetro e medir o pH;

76
4) Com o pHmetro imerso na solução, adicionar volumes de 1 mL de NaOH na solução e anotar o
pH;
5) Colocar 50 mL da solução tampão em um béquer de 100 mL;
6) Medir o pH com fita de pH;
7) Imergir o pHmetro e medir o pH;
8) Com o pHmetro imerso na solução, adicionar volumes de 1 mL de NaOH na solução e anotar o

pH;
9) Comparar os resultados da adição de NaOH na água e no tampão.
Solução Volume de NaOH (0,5 mol/L) pH medido

H2O 1mL
H2O 2mL
H2O 3mL
Tampão 1mL
Tampão 2mL
Tampão 3mL
 Parte 2: Verificação do pH de substâncias utilizando um indicador caseiro
1) Bata 1 folha de repolho roxo com 1 litro de água no liquidificador;
2) Coe esse suco, pois o filtrado será o nosso indicador ácido-base natural (se não for usar o
extrato de repolho roxo na hora, guarde-o na geladeira, pois ele decompõe-se muito
rápido;
3) Identifique os tubos de ensaio;
4) Adicione aproximadamente 5 mL das substâncias escolhidas nos tubos de ensaio;
5) Pingue gotas do extrato de repolho em cada tubo de ensaio;
6) Observe e registre as cores das soluções.
Para manter constante o pH dos meios de cultura de microrganismos são utilizadas soluções tampão, de
acordo com a faixa de pH requerida.
77
1) (UFMG) Considere duas soluções aquosas diluídas, I e II, ambas de pH = 5,0. A solução I é um
tampão e a solução II não.
Um béquer contém 100 mL da solução I e um segundo béquer contém 100 mL da solução II. A cada uma
dessas soluções, adicionam-se 10 mL de NaOH aquoso concentrado.
Assinale a alternativa que apresenta corretamente as variações de pH das soluções I e II após a adição de
NaOH (aq):
a) O pH de ambas irá aumentar e o pH de I será menor do que o de II.
b) O pH de ambas irá diminuir e o pH de I será maior do que o de II.
c) O pH de ambas irá aumentar e o pH de I será igual ao de II.
d) O pH de ambas irá diminuir e o pH de I será igual ao de II.
2) (UnB-DF - adaptada) Os sistemas químicos baseiam-se em algumas características: os sistemas

ácidos caracterizam-se pela liberação de íons hidrônio (H 3O+) e os sistemas básicos baseiam-se na
liberação de hidroxilas (OH-). Sabendo vinagre (pH = 3), saliva (pH = 6) e clara de ovo (pH =8), julgue
as afirmativas a seguir e justifique:
a. Todos os sistemas são formados por substâncias ácidas;
b. O pOH da saliva é igual a 6;
c. O vinagre é mais ácido que a clara de ovo;
d. Acrescentando uma gota de vinagre à uma gota de saliva, o pH se tornará neutro.
3) (UFMG – 2009) Considere certa quantidade de água e suco de limão, misturados, contida em um
copo. Julgue as três afirmativas concernentes a esse sistema:
a. O sistema é ácido;
b. O pH do sistema é maior que 7;
c. No sistema, a concentração de íons H+ é maior que a de íons OH-.
DIAS, S. L. P. Química Analítica: Teoria e Prática Essenciais. 1. Ed. Brasil: ATKINS, Peter W.; JONES, Loretta.
Princípios de química: questionando a vida moderna e o meio. 5. ed. Porto Alegre: Bookman, 2012.
78
79
QUARTA UNIDADE DE ENSINO
Manipulação de equipamentos e técnicas de laboratório
AULA 11: Microscópio óptico: Reconhecimento dos componentes manipulação e cuidados.
1. Competências
Reconhecer as regras e cuidados para a correta utilização do microscópio óptico.

clínica.
Farmácia: Métodos de análise, investigação e síntese; Agentes infecciosos e resposta imunológica;
Biologia molecular e biotecnologia; Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e banco de sangue;
Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Um aluno é admitido para uma iniciação científica. O projeto a ser realizado envolve a visualização de
infiltrados de células inflamatórias em tumores de mama. Os tumores foram recolhidos de pacientes
tratadas com procedimento cirúrgico para a sua remoção. No primeiro dia de trabalho o aluno foi instruído
a focalizar as lâminas já preparadas, e na objetiva de maior aumento verificar o infiltrado celular presente
em 10 campos distintos. Como o aluno deve proceder para realizar a correta contagem dos campos e
visualização das células?
O microscópio é um instrumento ótico de ampliação utilizado para observação de objetos próximos, tão
pequenos ( 0,1 a 10um) que não podem ser vistos nitidamente pelo olho humano desarmado (diâmetro
inferior a 0,1 mm, a uma distância de 25 cm).
Em 1674, o holandês Antonie van LEEUWENHOEK descreveu pela primeira vez os microrganismos,
observado através de lentes polidas por ele. Os microscópios são classificados em ópticos e eletrônicos,
dependendo do princípio no qual a ampliação é baseada. O microscópio eletrônico emprega um feixe de
elétrons para produzir uma imagem ampliada. O microscópio óptico ou luminoso (emprega ondas
luminosas) comumente usado é composto, porque apresenta dois sistemas de lentes - ocular, que fica
próximo ao olho do observador e aquele que fica próximo à preparação a ser observada, objetiva. A
microscopia óptica inclui a M. luminosa (uso do microscópio ótico comum), M. de campo escuro, M. de
fase, M. de fluorescência e Microscopia ultravioleta. Na microscopia luminosa, o campo microscópico ou
área observada aparece brilhantemente iluminado e os objetos estudados se apresentam mais escuros.
80
O microscópio óptico ou luminoso compõe-se de: base, coluna, cuja extremidade superior articula-se com
um tubo metálico, conhecido por canhão, que sustenta os sistemas de lentes - oculares (embutida num
único tubo - monocular ou em dois tubos - binocular) e objetivas (a seco de 5, 10, 40, 45 X ou de imersão 90
ou 100X), montadas num dispositivo chamado revólver). Um sistema de cremalheira permite o
deslocamento do canhão (em outros microscópios, desloca-se a mesa ou platina contendo a preparação)
para baixo e para cima pelo giro dos parafusos macrométrico (fazem deslocamentos rápidos e de grande
amplitude) e micrométrico (movimentos mínimos e lentos), permitindo a aproximação das objetivas à
preparação a ser visualizada; - condensadores e diafragma que regulam a intensidade da iluminação; mesa
ou platina, onde é colocada a lâmina com a preparação; Charriot, parafusos que permitem movimentação
da lâmina nos sentidos laterais, anterior e posterior. O sistema de iluminação é constituído de espelho ou
lâmpada e filtro.
2 lâminas de corte histológico (corte de pele espessa e epidídimo).

Microscópio óptico.
3.3 Procedimentos
MICROSCÓPIO DE LUZ
 Não arraste o microscópio na bancada.
 Quando necessário movimentar o aparelho, carregue-o com as duas mãos.
 Evite deixar a luz do microscópio acesa quando não estiver utilizando.
 Antes de desligar o aparelho, apague a luz, e volte para menor objetiva de uso.
 O microscópio é um aparelho sensível, formado por um conjunto de lentes e espelho, por isso
tenha o maior cuidado ao manuseá-lo!
 Objetivas: pequena: 4X, média: 10X, grande: 40X, imersão: 100X
 Aumento total: 40X, 100X, 400X, 1000X
 NA DÚVIDA, PERGUNTE!!!!!!!!!!
Manuseio do microscópio de luz:

i. Acenda a lâmpada do microscópio de luz e regule a intensidade de luz.
ii. Verifique se a mesa está baixa e se a menor objetiva está em posição de uso.
iii. Coloque a lâmina no microscópio com a lamínula voltada para cima.
iv. Focalize o corte com a objetiva de menor aumento, através do parafuso macrométrico. Faça o
ajuste fino utilizando o parafuso micrométrico.
v. Em outros aumentos (médio e grande) utilize somente o parafuso micrométrico para focalizar!!!!
Não é necessário abaixar a mesa quando for mudar de aumento.
vi. Com auxílio do revólver, passe para objetiva de médio aumento e focalize com o parafuso
micrométrico.
vii. Percorra o corte (com auxílio do Charriot) procurando a área ou estrutura a ser estudada e
centralize-a no campo.
viii. Passe agora para o maior aumento (utilizando o revólver) e focalize (micrométrico) a estrutura ou
área a ser estudada.
ix. Ao terminar o estudo com a respectiva lâmina, volte para a menor objetiva, abaixe a mesa e troque
de lâmina.
81
x. Utilize gaze para limpar as lentes do microscópio e a lâmina a ser utilizada.

O aluno deve seguir as etapas para a focalização de amostras. A luz deve ser corretamente ajustada de
acordo com a objetiva utilizada. Se os passos descritos foram seguidos corretamente a amos tra será bem
visualizada.
De acordo com as observações feitas durante a aula descreva a função de cada componente do
microscópio e enumere no desenho a seguir.
1 = ocular
2 = objetivas e revólver
3 = platina
4 = charriot
5 = macrométrico
6 = micrométrico
7 = diafragma no condensador
8 = condensador
9 = botão do condensador
10 = dois parafusos centralizadores do condensador
11 = fonte de luz
12 = controle de iluminação
13 = diafragma de campo (alavanca no lado esquerdo do microscópio)
14 = dois parafusos de ajuste da lâmpada (esquerdo e direito)
15 = focalizadora da lâmpada (alavanca no lado direito do microscópio).
82
LÂMINA - 1- Desenhar o corte de pele espessa
Menor aumento (40X) Aumento médio (400x)
LÂMINA - 2 – Desenhar o corte de epidídimo
Menor aumento (40X) Aumento médio (400x)
83
ATTIAS, Márcia; BENCHIMOL, Marlene; CARVALHO, Técia Maria Ulisses de; SILVA, Narcisa Leal Cunha e.
Métodos de estudo da célula. Edição (4. ed.). Rio de Janeiro: editora, 1996. 17-19,23 p.
MURPHY, Douglas B. Fundamentals of Light Microscopy and Electronic Imaging. Nova York: Wiley-Liss,
2001. 2, 57 p.
84
AULA 12: Técnicas de coleta de sangue total venoso.
1. Competências
Reconhecer as regras e cuidados para a coleta de sangue venoso a vácuo.

respostas imunológicas; Análise ambiental; Farmacologia; Biologia molecular e biotecnologia; Bioquímica
clínica; Hematologia clínica e banco de sangue; Controle de qualidade de laboratório; Imunologia clínica;
Análise toxicológica e criminalística; Microbiologia clínica.
Farmácia: Agentes infecciosos e resposta imunológica; Processamento, controle e qualidade de alimentos;
Farmacognosia; Biologia molecular e biotecnologia; Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e
banco de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Um aluno de iniciação científica está participando de um projeto de pesquisa em Lúpus Eritematoso
Sistêmico. Para os experimentos serem realizados é necessário colher sangue dos pacientes provenientes
de um ambulatório médico/hospital Escola. O aluno necessita de sangue total para a realização de
hemograma e contagem de reticulócitos (hemácias jovens), plasma sanguíneo pobre em plaquetas para a
realização de ensaios da coagulação e soro sanguíneo para a detecção de proteínas inflamatórias. Como o
aluno deve proceder para realizar a coleta e obtenção das 3 amostras requeridas?
A coleta de sangue é um procedimento rotineiramente utilizado em laboratórios de análises clinicas e
pesquisas. Alguns cuidados são essenciais tanto para com o paciente como para com a amostra a ser
coletada. A coleta é realizada com agulhas e seringas estéreis e descartáveis ou por meio de tubos com
vácuo, adaptados a agulhas estéreis, com ou sem anticoagulantes. O garrote deve permanecer o menor
tempo possível no braço do paciente e a amostra deve ser acondicionada no tubo de ensaio de maneira
que não ocorra hemólise da amostra.
Material necessário:
1 caixa de tubos para coleta de sangue a vácuo (anticoagulante –EDTA)
10 canhões para coleta de sangue a vácuo
1 caixa de agulhas para coleta de sangue a vácuo ( tampa verde)
Álcool 70%
Algodão
Curativo pós-coleta
85
Suporte para coleta de sangue
Caixa de pérfuro-cortantes.
3.3 Procedimentos
Durante a realização da pratica de PUNÇÃO VENOSA - Veias da Dobra do Cotovelo (cefálica e basílica)
observa-se os seguintes procedimentos:
 Acomoda-se o paciente adequadamente na cadeira para coleta e o instrui sobre o procedimento;

 Após a lavagem de mãos e a paramentação adequada e completa, dá-se início a prática;
 Sobre uma mesa próxima ao paciente deve-se preparar o material a ser usado;
 Identifica-se os tubos para coleta de sangue a vácuo com o nome do paciente;
 Retira-se a agulha da embalagem estéril e acoplou-se ao canhão para coleta a vácuo;
 Coloca-se um garrote ao redor do braço do voluntario, acima da dobra do cotovelo e verificou-se o
pulso para garantir que a circulação arterial não foi interrompida;
 O paciente deve abrir e fechar a mão várias vezes para aumentar a circulação venosa;
 Pela inspeção e apalpação, determina-se a veia a ser puncionada, a qual deve ser calibrosa e
firme;
 Com algodão embebido em álcool a 70% realiza-se a assepsia da pele sobre a veia selecionada;
 Observa-se que após a desinfecção o local a ser puncionado não deve ser tocado e que o paciente
não deve dobrar o braço;
 Após esse procedimento o voluntário deve permanecer com a mão fechada. Em seguida deve-se
introduzir a agulha na veia do voluntario, o tubo deve ser acoplado ao canhão, deve-se aguardar o
preenchimento do tubo até o volume de 5 ml;
 Após o preenchimento do tubo, retira-se o tubo e depois a agulha e comprimi-se o local da punção
com algodão, por três minutos, para evitar a formação de hematomas no local da punção,
 Descarta-se a agulha utilizada no recipiente próprio para descarte de materiais perfuro cortantes.
Para a obtenção das amostras requeridas devemos colher os seguintes tubos de sangue na seguinte ordem:
1- Tubo sem anticoagulante para obtenção de soro (dosagem de proteínas inflamatórias)
2- Tubo com tampa azul- citrato de sódio para obtenção de plasma pobre em plaquetas
3- Tubo com tampa roxa-EDTA para a realização de hemograma.
1) Os anticoagulantes são fundamentais para a correta obtenção de amostras sanguíneas. A cor do
tubo de sangue corresponde ao tipo de anticoagulante presente no tubo a vácuo. Determine uma
dosagem laboratorial realizada em cada um dos anticoagulantes descritos abaixo. Informe também
a função de cada anticoagulante.
Tubo de tampa roxa- EDTA
Tubo de tampa azul-CITRATO DE SÓDIO
Tubo de tampa cinza-FLUORETO
Tubo de tampa verde-HEPARINA
Tubo de tampa amarela com gel de separação-SEM ANTICOAGULANTE
86
2) Algumas vezes necessitamos de colher mais de um tubo de sangue de cada paciente. Nessa ocasião
realizamos a coleta em uma sequência correta de tubos de acordo com o anticoagulante
especificado. Especifique a ordem de coleta sanguínea de acordo com o anticoagulante ( supondo
que tenhamos que colher uma amostra de cada dos 4 tipos de anticoagulante e uma sem
anticoagulante).
ZAGO, Marco Antônio; FALCÃO, Roberto Passetto; PASQUINI, Ricardo. Tratado de hematologia. São Paulo:
Atheneu, 2013.
87
AULA 13: Centrífuga: técnica de funcionamento.
1. Competências
Reconhecer as regras e cuidados para a correta utilização da centrífuga.

Fracionamento de amostras biológicas e separação de componentes.

Farmacognosia; Biologia molecular e biotecnologia; Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e banco
de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Um aluno de iniciação científica está participando de um projeto de pesquisa em Lúpus Eritematoso
Sistêmico. Para os experimentos serem realizados é necessário colher sangue dos pacientes provenientes
de um ambulatório médico/hospital Escola. O aluno necessita de sangue total para a realização de
hemograma e contagem de reticulócitos (hemácias jovens), plasma sanguíneo pobre em plaquetas para a
realização de ensaios da coagulação e soro sanguíneo para a detecção de proteínas inflamatórias. Como o
aluno deve proceder para a obtenção do plasma pobre em plaquetas?
A centrifugação é uma técnica fundamental usada em diversos ramos da Química, Biologia e Bioquímica
para a separação de amostras. Em geral, estas são introduzidas em tubos de diferentes tamanhos, que são
dispostos num motor de centrífuga. As centrífugas estão normalmente adaptadas para a utilização de
diferentes tipos e tamanhos de rotores, conforme a velocidade e aplicação desejadas. Enquanto que as
microcentrífugas de bancada podem centrifugar tubos entre os 0,2 e os 2 mL de volume, centrífugas de
grande porte podem usar tubos de volume muito variável, tipicamente até 1 L.
1 tubo para coleta de sangue a vácuo (anticoagulante EDTA)- 1 tubo com sangue total.
1 tubo para coleta de sangue a vácuo (sem anticoagulante)- 1 tubo com sangue total.
1 canhão para coleta de sangue a vácuo
1 caixa de agulhas para coleta de sangue a vácuo ( tampa verde)
Álcool 70%
2 Tubos de ensaio (hemólise)
Ponteiras para 10 e 1000 microlitros
88
Salina fisiológica ( 20 ml)
Algodão
Curativo pós-coleta

Suporte para coleta de sangue
Caixa de pérfuro-cortantes.
Pipeta automática para 10 e 1000 microlitros
3.3 Procedimentos
Nesta prática o professor realizará a coleta de amostras- serão dois tubos de sangue -1 com EDTA e outro
SEM ANTICOAGULANTE para centrifugação e obtenção do soro sanguíneo.
Centrifugar os dois tubos de sangue a 3000 rpm por 10 minutos.
 Técnica 1: Separação do soro sanguíneo- observar a separação do soro sanguíneo, polpa de

leucócitos e hemácias.
 Técnica 2: Separar 2 tubos de hemólise e pipetar 1 ml de salina fisiológica. Adicionar 10 microlitros
de sangue total (após homogeneizar o tubo de sangue com EDTA). Centrifugar os tubos por 5
minutos á 3000 rpm- observar a formação do botão de hemácias no fundo do tubo de hemólise.
4 Resolução do Problema Levantado

Após a coleta de sangue deve-se proceder a centrifugação da amostra. Devemos utilizar o tudo de CITRATO
DE SÓDIO e centrifuga-lo a 3000 rpm por 15 minutos. Assim teremos o plasma pobre em plaquetas ( as
plaquetas ficarão no fundo do tubo em conjunto com as outras células.
5 Listas de Exercício
Os processos de centrifugação auxiliam no fracionamento de amostras para a realização de análises
laboratoriais. Utilizamos a centrifugação para verificar os elementos da urina, líquor, sangue, dentre outros:
Descreva de forma completa como se obter através da centrifugação os elementos sanguíneos descritos
abaixo;
Elementos figurados (células)
Plasma
Soro
Plasma rico em plaquetas
Plasma pobre em plaquetas
Botão de hemácias
ZAGO, Marco Antônio; FALCÃO, Roberto Passetto; PASQUINI, Ricardo. Tratado de hematologia. São
Paulo: Atheneu, 2013.
89
Motta,Valter T. Bioquímica Clínica para o Laboratório - Princípios e Interpretações - 5ª Ed. 2011.
90
AULA 14: Espectrofotômetro: funcionamento e técnicas de utilização.
1. Competências
Reconhecer as regras e cuidados para a correta utilização do espectrofotômetro.

Relacionar a colorimetria com a área laboratorial e dosagem de substâncias.

Farmacognosia; Biologia molecular e biotecnologia; Parasitologia e Imunologia clínica; Hematologia e banco
de sangue; Cosmetologia; Análises tóxicas e toxicologia; Microbiologia clínica; Bioquímica clínica.
2. Introdução
Um aluno está fazendo estágio em um posto de saúde. Durante o seu terceiro dia de estágio o mesmo é
transferido para o setor de Bioquímica Clínica do laboratório regional. No transcorrer da tarde o
profissional responsável pelo laboratório recebe uma amostra de plasma sanguíneo para avaliação da
função renal em caráter de urgência. O médico informou que o paciente é hipertenso, encontra-se
extremamente edemaciado e com urina espumosa. Diante de tal situação o preceptor de estágio questiona
o aluno sobre como proceder. Como se deve fazer a análise de função renal através da amostra enviada ao
laboratório?
A Colorimetria e a Espectrofotometria podem ser conceituadas como um procedimento analítico através

do qual se determina a concentração de espécies químicas mediante a absorção de energia radiante (luz).
A luz pode ser entendida como uma forma de energia, de natureza ondulatória, caracterizada pelos
diversos comprimentos de onda (, expressos em m ou nm) (Figura 1) e que apresenta a propriedade de
interagir com a matéria, sendo que parte de sua energia é absorvida por elétrons da eletrosfera dos átomos
constituintes das moléculas.
91
Figura 1. Espectro de absorção de luz em diversos comprimentos de onda ().
Uma solução quando iluminada por luz branca, apresenta uma cor que é resultante da absorção relativa
dos vários comprimentos de onda que a compõem, que pode ser analisados por um espectrofotômetro
(Figura 2). Esta absorção, em cada comprimento de onda, depende da natureza da substância, de sua
concentração e da espessura da mesma que é atravessada pela luz.
Figura 2. Componentes e funcionamento de um espectrofotômetro para análise da absorção de um

determinado comprimento de onda específico de uma solução.
A Lei de Lambert-Beer: a absorbância é proporcional à concentração da espécie química

absorvente, sendo constante o comprimento de onda, a espessura atravessada pelo feixe
luminoso e demais fatores. Verifica-se uma relação linear entre absorbância ou densidade ótica e
concentração, e de uma relação logarítmica entre transmitância e concentração.
KIT-DOSAGEM DE GLICOSE
Reagente 1: Armazenar entre 2 – 8 ºC.
92
Padrão - 100 mg/dL: Armazenar entre 2 – 30 ºC. Após o manuseio, sugere-se armazenar bem vedado
para evitar evaporação. Contém glicose 100 mg/dL e biocida não tóxico.
O estabilizador do padrão pode precipitar-se em baixas temperaturas, fato que não interfere na sua
qualidade.

Espectrofotômetro com cubeta (leitura em 490 a 520 nm);
Tubos de hemólise e Pipetas automáticas ( 10, 100 e 1000 microlítros);
Crônometro
Centrífuga.
Banho Maria.
Pipetas automáticas para 10, 100 e 1000 microlitros.
Ponteiras para 10, 100 e 1000 microlitros.
Tubos de hemólise ( 3 por grupo- 6 grupos).
Raque para tubos ( 1 por grupo).
Béquer ( 3 por grupo)
3.3 Procedimentos
A dosagem da GLICOSE é empregada preferencialmente para avaliar condições diabéticas ou pré-
diabéticas.
Utilizar plasma sanguíneo colhido em FLUORETO –inibidor da glicólise ( 100 microlitros por grupo).
Procedimento manual
Método Direto
1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Branco Teste Padrão
Amostra ----- 0,01 mL -----
Padrão (nº 2) ----- ----- 0,01 mL
Reagente 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
2. Misturar vigorosamente e colocar em banho-maria a 37 ºC durante 10 minutos. O nível da água no

banho deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio.
Determinar as absorbâncias do teste e padrão em 505 nm ou filtro verde (490 a 520 nm), acertando o zero
com o branco. A cor é estável por 60 minutos.
Condições de Reação
 Leitura: Comprimento de onda 505 nm
 Temperatura:
 Método: Cinético em tempo fixo
93
Cálculos:
Absorbância do teste
Glicose (mg/dL) = x 100
Absorbância do padrão
Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o método do fator pode ser
empregado.
100
Fator de calibração =
Absorbância do padrão
Valores de referência
Plasma: (jejum de 8 horas):
70 a 99 mg/dL – Glicemia de jejum normal
100 a 125 mg/dL – Glicemia de jejum alterada
maior ou igual a 126 mg/dL – Provável Diabetes Mellitus
Líquor: 2/3 da glicemia quando a medição é realizada em amostras colhidas simultaneamente.
Valores críticos
Plasma:
>400 mg/dL
<40 mg/dL

Deve-se utilizar o plasma do paciente para efetuar a dosagem espectrofotométrica de substâncias que
avaliam a filtração renal. Podemos realizar a dosagem de creatinina no plasma bem como na urina.
Podemos realizar também a dosagem de uréia no plasma e urina.
1)Realize os cálculos de concentração dos seguintes analitos:

Glicose:
Absorbância teste- 0,5 nm
Absorbância padrão- 0,6 nm
2)Calcule o fator de calibração através de uma absorbância de 0,65 nm (padrão).
94
3) Realize os cálculos para dosagem de creatinina de acordo com os seguintes dados.
Método cinético de dosagem (utilizamos dois tempos – 30 e 90 segundos)
∆A do Teste ou Padrão = A90 - A30
Como a metodologia obedece a lei de Lambert- Beer, pode-se efetuar os cálculos através do Fator de
Calibração (FC).
∆P = (A90 - A30 )Padrão ∆T = (A90 - A30) Teste
CP = concentração do Padrão em mg/dL = 4,0 mg/dL
CT = concentração do Teste em mg/dL
FC = CP ÷ ∆P Ct = FC × ∆T
Se A30 Padrão = 0,090 e A90 Padrão = 0,138
Se A30 Teste = 0,124 e A90 Teste = 0,136
Motta,Valter T. Bioquímica Clínica para o Laboratório - Princípios e Interpretações - 5ª Ed. 2011.
95
96
97

Apostila Defundamentos Laboratorio

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Apostila Defundamentos Laboratorio

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

CENTRO UNIVERSITÁRIO UNA

ROTEIRO DAS AULAS

ORIENTAÇÕES PRELIMINARES ........................................................................................................................3

AULA 01: Normas de segurança em laboratório – Biossegurança.................................................6

Procurem harmonizar-se durante a execução da atividade para evitar acidentes.

INSTRUÇÕES GERAIS PARA TRABALHO EM UM LABORATÓRIO

Antes de começar qualquer atividade em um laboratório, o estudante deve estudar cuidadosamente os

Qualquer acidente deve ser imediatamente comunicado ao professor.

PROCEDIMENTO DE LIMPEZA DE VIDRARIAS

AULA 01: Normas de segurança em laboratório – Biossegurança

Conhecer as legislações aplicadas à biossegurança;

1.1 Correlação com as competências Profissionalizantes:

A biossegurança (vida + segurança) é o conjunto de ações voltadas para a prevenção, proteção do

Figura 1 – Categorias de risco.

• Riscos de acidentes  Principalmente em decorrência do uso de equipamentos de vidro e de

4º - Não ingerir alimentos, bebidas ou fumar nos laboratórios;

5º - Trabalhar com seriedade evitando brincadeiras;

9º - Nunca deixar frascos de matérias-primas e solventes destampados. Após pesagem ou medida de

10º - Em caso de derramamento providenciar a limpeza o mais rapidamente possível;

15º - Não é permitida a presença de pessoas estranhas à disciplina nos laboratórios;

Lavagem das mãos

Equipamentos de proteção individual

Tabela 1 – Equipamentos de proteção individual e suas características

Equipamentos de proteção coletiva

• Cabines de segurança biológica;

Tabela 2 – Processos de descontaminação

Limpeza Remoção de partículas ou material orgânico. Água e sabão

• Descarte de material biológico:

• Descarte de material perfurocortante:

-A agulha não deve ser retirada da seringa após o uso;

-Não quebrar, entortar ou recapear as agulhas.

• Descarte de material químico

A segurança é responsabilidade de todos!

3.2 Materiais Permanentes (Vidrarias/equipamentos)

4. Resolução do Problema Levantado

2) Descreva sucintamente a diferença entre o descarte de materiais biológicos, perfurocortantes e

• Experimento envolvendo cultura de células;

• Experimento utilizando água, glicose e cloreto de sódio;

• Experimento envolvendo materiais perfuro-cortantes;

• Experimento envolvendo ácidos concentrados;

• Manipulação de material biológico;

• Experimento envolvendo reagentes em pó;

• Manipulação de produto altamente dispersível.

COMISSÃO DE SEGURANÇA E SAÚDE NO TRABALHO. Manual de Boas Práticas de Laboratório. Universidade

UNISESPE. Manual institucional de biossegurança. 2010. 13 p.

1.1 Correlação com as competências Profissionalizantes:

Os riscos químicos e biológicos são os principais envolvidos nos acidentes em laboratórios:

Figura 1 – Exemplo de um mapa de risco

Procedimentos básicos de segurança nos laboratórios químicos:

Todos os procedimentos relacionados com a manipulação de produtos químicos deverão realizar-se de

• Compostos/misturas químicas altamente reativos e oxidantes fortes;

• Compostos/misturas com toxicidade elevada e/ou crónica.

• Certificar-se do funcionamento dos exautores de modo a minimizar a exposição aos produtos

• Realizar as experiências no espaço adequado e não transportar recipiente com reações em

• Reconhecer os pictogramas de perigo;

• Manter os esguichos de água, álcool e outros líquidos devidamente rotulados;

• Manter os recipientes de produtos químicos bem fechados;

• Não abrir nem utilizar recipientes de produtos químicos sem identificação;

• Substâncias inflamáveis devem ser mantidas longe de fontes de calor;

• Os produtos químicos devem ser descartados corretamente.

Procedimentos básicos de segurança nos laboratórios biológicos:

Entre as inúmeras doenças profissionais provocadas por microrganismos incluem-se: tuberculose,

Os riscos biológicos em laboratórios podem estar relacionados com a manipulação de: