Nutrição e Crescimento

Bacteriano
Prof. Adjunto Ary Fernandes Junior
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biociências – UNESP
Tel. 14 3880.0412/0413
ary@ibb.unesp.br
Características básicas das
bactérias

10 horas  1 bilhão de células

Estudos de Biologia Celular

95% do
peso
seco da
célula
Visão geral do metabolismo celular

Crescimento
bacteriano
+
Motilidade,
Luminescência,
etc
Nutrição: Fornecimento de substâncias
nutritivas para o crescimento
bacteriano
(Energia e Matéria Plástica)

Cultura: Propagação do microrganismo

em condições adequadas
(Exigências Nutricionais e Ambientais)
 FATORES NUTRITIVOS (in vitro = in vivo)

Fatores de
Crescimento
NH Na
Ca
Mg
K
Co Zn Mo Se etc
Fastidiosos

Ex: Haemophilus influenzae

Hemina (fator X), NAD+ (fator V)

OBS. Não existe um meio de cultura universal.

 Classificação dos Meios de Cultura
(Substâncias nutritivas  Sintéticos e Complexos)
 Classificação dos Meios de Cultura
(Estado fisico)  Agar

Líquido Sólido Semi-Sólido

(Turvação do (1,5 a 2,0%) (0,5%)
meio) (Colônias) (Movimento)
 Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)
Agar Sangue

(Enriquecidos)

Agar Chocolate

Lowenstein - Jensen
 Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)
(Seletivos)

(MAS – Manitol Salt Agar)

(Meio seletivo para Bacillus cereus)

(Agar MacConkey)
 Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)

(Seletivos)

(Eosin Methilen Blue (EMB) Oxoid Chromogenic Listeria Agar (OCLA)

 Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)

(Diferencial)

(Agar Sangue)
(Padrão de Hemólise)
 Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)
(Diferencial) Lactose (-)

Lac + Lac -

Lactose (-)

(Agar MacConkey) (Meio Cromogênico)

(Fermentação da Lactose) (E. coli/coliformes em alimentos e água)
Classificação dos Meios de Cultura
(Poder Seletivo e Diferencial)
(De Enriquecimento)

(Meio de Selenito Cistina) (Meio de Tetrationato)

Etapas do preparo de um meio sólido
 FATORES NUTRICIONAIS
ÁGUA - Solvente; Elevado Calor Específico;
Regula Pressão Osmótica; Participação em
Reações Químicas, Estrutura de
Macromoléculas, etc

FONTE DE ENERGIA = Doadores de Hidrogênio

*Fotossintetizantes  Fototróficas
Quimiossintetizantes  Quimiotróficas
(Quimiolitotróficas e Quimiorganotróficas)
FONTE DE ENERGIA = Doadores de Hidrogênio
 RECEPTORES DE HIDROGÊNIOS
Respiração aeróbia  O2.
Respiração anaeróbia  NO3-, SO4-, CO2..
Fermentação  Fermentação Lática, Alcoólica, etc.
 Respiração anaeróbia  receptor inorgânico ≠ do O2
(ex: SO42-, NO3-, CO2, S)
4 H2 + SO42- + H+  HS +4 H20 4 H2 + CO2  CH4 + 2 H20

Thiennimitr et al, 2011. Salmonella: the host and its microbiota. Current opinion in Microbiology, v.15, n.02, p.108-114, 2012.

Salmonella, the host and its microbiota. S. Typhimurium uses its virulence factors (flagella, T3SS-1 and T3SS-2) to invade the epithelium and
survive in mononuclear cells. The ensuing inflammatory response results in the epithelial release of an antimicrobial (lipocalin-2) that sequesters
iron chelators (enterobactin) produced by the microbiota, but not an iron chelator (salmochelin) produced by S. Typhimurium. ROS generated by
neutrophils migrating into the intestinal lumen oxidize an endogenous sulfur compound (thiosulfate) to generate a respiratory electron acceptor
(tetrathionate) that enables S. Typhimurium to edge out the fermenting microbiota, thereby enhancing transmission of the pathogen.
Fermentação Composto orgânico produzido durante o
próprio processo fermentativo.
 CARBONO (Composição dos Compostos Orgânicos
-Compostos orgânicos - Quimio-heterotróficos.
-CO2 (Fotossíntetizantes) - Fotoautotróficos.

NITROGÊNIO (Proteínas, Ácidos Nucléicos, Coenzimas)

Orgânica - Aminoácidos, Sais Orgânicos de Amônia.
Inorgânica - NH3, NO3-, N2
 ENXOFRE (Aminoácidos Sulfurados, Vitaminas)
-Forma orgânica (Radicais sulfidrilas);
-Forma inorgânica ( SO4- , H2S)
-Forma elementar

FÓSFORO (ATP, Ácidos Nucléicos, Fosfolipídeos, Coenzimas)

-Fosfato inorgânico (PO42- )

ATIVADORES DE ENZIMAS
Minerais na forma de sais:
-Mg++e K+ (Ribossomos)
-Fe++ (citocromos e peroxidases)
-Ca++ (Parede celular de Gram positivas e esporulação)
ELEMENTOS TRAÇOS - Cobalto, Zinco (Atividade de
Enzimas), Molibdênio

FATORES DE CRESCIMENTO - Ex: Vitaminas,

Aminoácidos, Bases Nitrogenadas, Ácidos
Graxos, etc.
FATORES AMBIENTAIS

pH

Temperatura

Aeração (O2)

Osmolaridade
 FATORES AMBIENTAIS

pH – Estrutura e funções das proteínas

Maioria na faixa ótima de pH entre 6 e 8.

Ex. Thiobacillus - 1 e 2 (Acidófila)
Vibrio comma - 10 (Alcalinófila)

Obs. Normalmente os meios de cultura são

tamponados.
Bactérias patogênicas  pH ao redor de 7
 Valores mínimos, ótimos e máximos de pH durante o
cultivo para algumas bactérias
Organismo Mínimo Ótimo Máximo

Thiobacillus thiooxidans 0,5 2,0-2,8 4,0-6,0 Acidofílicas

Sulfolobus acidocaldarius 1,0 2,0-3,0 5,0
Bacillus acidocaldarius 2,0 4,0 6,0
Zymomonas lindneri 3,5 5,5-6,0 7,5
Lactobacillus acidophilus 4,0-4,6 5,8-6,6 6,8
Staphylococcus aureus 4,2 7,0-7,5 9,3
Neutrofílicas
Escherichia coli 4,4 6,0-7,0 9,0
Clostridium sporogenes 5,0-5,8 6,0-7,6 8,5-9,0
Erwinia caratovora 5,6 7,1 9,3
Pseudomonas aeruginosa 5,6 6,6-7,0 8,0
Thiobacillus novellus 5,7 7,0 9,0
Streptococcus pneumoniae 6,5 7,8 8,3
Alcalinofílicas
Nitrobacter sp 6,6 7,6-8,6 10,0
 Temperatura - Velocidade das reações químicas

Concentração
elevada de ácidos Patogênicas
Organização tridimensional das proteínas
graxos insaturados ao homem e
permite a manutenção da estrutura
garante fluidez da animais)
adequada para sua ação em elevadas
membrana
plasmática temperaturas
 Aeração - Metabolismo energético

Facultativo Microaerófilo Microaerófilo

Aeróbio estrito Anaeróbio estrito
(<0.5-21%) aeróbio (1-5%) anaeróbio
(18-21% ) (<0,5%)
(Aerotolerante)
P. aeruginosa, C.haemolyticum Enterobactérias Campylobacter,
Neisseria (2-8%)
Mycobacterium
Bacteroides,
Clostridium
 Bactérias aeróbias e facultativas

O2 Metabolismo Produtos Sistema de Produtos

tóxicos desintoxicação não tóxicos
O2 + 2 e- + 2 H+  H2O2

O2 + e-  O-2

O2 + H2O2  OH*

O-2 + H2O2  O2 + OH2- + OH*

H2O2 + e- + H+  H2O + OH*

Ação das enzimas superóxido dismutase, catalase e peroxidase. Estas

enzimas eliminam radicais tóxicos do oxigênio que são inevitavelmente gerados
em sistemas vivos na presença de O2. A distribuição destas enzimas nas células
determina a capacidade destas células existirem na presença de O2 .
 Bactérias anaeróbias estritas

O2 Metabolismo Produtos Ausência do Morte

tóxicos sistema de bacteriana
O2 + 2 e- + 2 H+  H2O2 desintoxicação

O2 + e-  O-2
Danos ao DNA, destroem
O2 + H2O2  OH* componentes lipídicos, inativam
O-2 + H2O2  O2 + OH2- + OH* enzimas

H2O2 + e- + H+  H2O + OH*

 Reação positiva produzida por Bacillus sp,
Teste da Catalase Staphylococcus sp; Reação negativa produzida
por Clostridium sp, Streptococcus sp.
 Método da
vela acesa
(microaerofilia)
Jarra de anaerobiose (Sistema GasPak)
Tampa com Grampo Catalisador
anel de rosca de paládio
selador em pastilha

Envelope
contendo
bicarbonado de
sódio e boroidreto
de sódio

Indicador de
anaerobiose
(azul de
metileno)

Placas de
Petri
Câmara de anaerobiose (“Glove Box”)
 Osmolaridade - Concentração de solutos no
meio  Disponibilidade de água

Controle da Osmolaridade Transporte ativo de K+ para interior da célula e

eliminação de PUTRESCINA
 CRESCIMENTO BACTERIANO

Aumento no número de células no meio de cultivo

Após inoculação no meio de cultura (= “semeadura”)

em condições ótimas

Meio líquido  Turvação do meio de cultivo;

Meio Sólido  Formação de colônias

Concentração Celular = Núm. Cel. / Vol. meio

Densidade Celular = Massa Cel./ Vol. meio
Contagem bacteriana
(Plaqueamento)
Absorbância = 2 - Log de % de Transmissão
 Limites com 95%
NMP Combinação de Índice de
de confiabilidade
tubos positivos NMP/100mL
(Número Mais provável) Inferior Superior

Volume de
inóculo
para cada Tubos de meio Número de tubos
grupo de nutriente (grupo de positivos por
cinco tubos cinco tubos grupo
 Fases do crescimento bacteriano

(Crescimento << Morte)

Fisiologicamente Progressão
ativas geométrica (Crescimento
 Morte)

Tempo de
geração

Formas de involução
Taxa de Crescimento x Tempo de
Geração
Semeadura = Inocular (transferir o microrganismo a um meio de
cultura)
SEMEADURA POR ESGOTAMENTO
SEMEADURA EM QUADRANTES
 Semeadura Correta

Semeadura Errada
Princípios de Alguns Testes
Bioquímicos
 Catalase

Comum em bactérias aeróbias e anaeróbias

facultativas
Staphylococcus, Bacillus (+) e Streptococcus (-)
2 H2O2 2 H2O + O2
 Oxidase (Citocromo oxidase)
Oxidação do Citocromo C pelo O2
Para fenilenodiamina é oxidado pela enzima
adquirindo cor vermelha
Neisseria (+), Pseudomonas (+), Enterobactérias (-)
 Prova de OF
(Oxidação - Fermentação)
(Carboidrato Ácido)
Azul de Bromotimol: pH Alcalino (Azul), pH Ácido
(Amarelo)
Glicose Enterobactérias, Staphylococcus
(Fermentam), Pseudomonas, Micrococcus (Oxidam)
 Fermentação de Açúcares
Produção de Ácido ou Ácido mais gás
Açúcar a ser estudado + indicador de Andrade
(vermelho em pH ácido)
Enterobactérias  Glicose (Todas), Lactose
(Algumas espécies apenas)

Glicose Lactose
 Família Enterobacteriaceae

Lactose

Agar MacConkey -
+
Gêneros
Gêneros
 Shigella
 Escherichia
 Salmonella
 Klebsiella
 Proteus
 Enterobacter
 Providência
 Serratia
Morganella
Vermelho de Metila (VM): Fermentação Mista
(Glicose Acidos Orgânicos)
Vermelho de Metila em pH ácido (4,5) fica Vermelho

E.coli (+), Enterobacter (-) 1 2 3

 Voges-Proskauer (VP) Fermentação
Butilenoglicólica
Glicose Acetilmetilcarbinol (= Acetoina) 2,3 butilenoglicol

Acetoina + Creatinina  composto vermelho

E. coli (-), Klebsiella pneumoniae (+), Enterobacter (+)
 Indol
Triptofanase

Triptofano Indol
Para Dimetilaminobenzaldeído = Reativo de Kovacs + indol 
Composto vermelho.

E. coli (+), Klebsiella-Enterobacter (-)

Não inoculado
+ -
 Citrato de Simnons
Citrato de Sódio como única fonte de C
Se bactéria usa (Cresce) – Alcaliniza o meio  Azul
(Azul de Bromotimol)
Klebsiella - Enterobacter (+), E. coli (-)
 Uréia
(Urease)
Amônia
Alcalinização do meio (Vermelho Fenol  Vermelho)
E. coli (-), K. pneumoniae (+)
 Fenil-Alanina
Desaminação da Fenil-alanina  Ácido Fenilpirúvico
Ac. Fenilpirúvico + Cloreto Férrico  Hidrazina (Cor
verde-garrafa)
Característica de todas espécies de Proteus

- +
 Movimento
Crescimento em meio semi-sólido (0,5% de Ágar)
Imóvel - Cresce só no local da picada: K. pneumoniae
Móvel - Cresce além da picada: E. coli
EPM, MILI

Tríplice Açúcar com ferro

TSI
Métodos Miniaturizados