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UNIVERSIDADE FEDERAL DE VI

VIOSA
Departamento de Microbiologia
MBI 100 Microbiologia Geral

Objetivos
Ao final desta aula o estudante dever
dever ser capaz de:
Reconhecer as principais exigncias nutricionais dos
microrganismos

Nutrio, Cultivo e
Crescimento de
Microrganismos

Distinguir os principais grupos nutricionais de microrganismos


Descrever o padro de crescimento de uma cultura
microbiana e os principais m
mtodos para determina
determinao do
crescimento.
Descrever as condi
condies f
fsicas requeridas para o cultivo de
microrganismos e as respostas fisiol
fisiolgicas aos mesmos.

Diversidade metablica e exigncias


nutricionais dos microrganismos
Necessidades bsicas: carbono, nitrognio,
sais minerais e gua

Isolamento de culturas puras


Incio da
semeadura
Colnia
isolada

Cultivo in vitro e in vivo


Cultivo de Microrganismos:
Meios de cultura
Obten
Obteno de culturas puras
Condi
Condies de incuba
incubao

Composi
Composio aproximada de elementos qu
qumicos
de uma c
clula bacteriana (E. coli)
ELEMENTO
Carbono
Oxignio
Nitrognio
Hidrognio
Fsforo
Enxofre
Pot
Potssio
Sdio
Clcio
Magn
Magnsio
Cloro
Ferro
Outros

% do PESO SECO
50
20
14
8
3
1
1
1
0,5
0,5
0,5
0,2
0,3

Elementos qumicos como nutrientes


Hidrognio (H2, H2O), Oxignio (O2, H2O),
Enxofre (SO4-) e F
Fsforo (PO43-)
Outros elementos: pot
potssio, s
sdio, c
clcio,
magn
magnsio, ferro, zinco, cobre, mangans,
molibdnio, cobalto, etc.
Fatores orgnicos de crescimento: vitaminas,
amino
aminocidos, etc

Elementos qumicos como nutrientes


Carbono:
compostos orgnicos CHO, aa, lipdeos
dixido de carbono CO2
Nitrognio:
compostos inorgnicos - N2, NO3-, NH3
compostos orgnicos aa, bases
nitrogenadas

Grupo
nutricional

Fonte de
carbono

Fonte de Exemplos
energia

Quimioautotr
Quimioautotrficos

di
dixido de
carbono

compostos
inorgnicos

bact
bactrias nitrificantes,
nitrificantes,
do ferro,
ferro, do enxofre

Quimioheterotr
Quimioheterotrficos

compostos
orgnicos

compostos
orgnicos

bact
bactrias,
rias, fungos
protozo
protozorios e animais

Fotoautotr
Fotoautotrficos

di
dixido de
carbono

luz

bact
bactrias sulfurosas
verde e prpura,
rpura, algas,
algas,
plantas,
rias
plantas, cianobact
cianobact

Fotoheterotr
Fotoheterotrficos

compostos
orgnicos

luz

bact
bactrias prpuras e
verdes nono-sulfurosas

Meio quimicamente definido para


bact
bactrias heterotr
heterotrficas

Meio quimicamente definido para


bact
bactrias quimioautotr
quimioautotrficas
Ingredientes

Fun
Funo

Quantidade

(NH4)2SO4

Fonte de nitrognio e energia

0,5 g

NaHCO3

Fonte de carbono

0,5 g

Na2HPO4

Tampo e ons essenciais

13,5 g

KH2PO4

Tampo e ons essenciais

0,7 g

MgSO4.7H2
O

ons essenciais

0,1 g

FeCl3.6H2O

ons essenciais

0,014 g

CaCl2.2H2O

ons essenciais

0,18 g

gua

Solvente

Fun
Funo
Fonte de energia e carbono

1g

NH4H2PO4

5g

K2HPO4

Fonte de nitrognio,
nitrognio, tampo e
ons essenciais
Tampo e ons essenciais

MgSO4.7H2O

ons essenciais

0,2 g

NaCl

ons essenciais

5g

gua

Solvente

Quantidade

1g

1.000 ml

1.000 ml

Meio complexo para o crescimento de


bact
bactrias heterotr
heterotrficas
Ingredientes

Funo

Extrato de
carne

Substncias hidrossolveis de
tecido animal: carboidratos,
compostos de nitrognio orgnico,
vitaminas, sais
Nitrognio orgnico, algumas
vitaminas

3g

Cloreto de
sdio

ons e requerimentos osmticos

8g

gua

Solvente

Peptona

Ingredientes
Glicose

Multiplicao de bactrias: Fisso binria

Quantidade

5g

1.000 ml

Progresso geomtrica do crescimento


populacional bacteriano
tg
tg
tg

tg

tg

N0

2N0

4N0

20 N0

21 N0

22 N0

8N0 . . .

N = 2n N0

Resolvendo a
equao:

log N = n log2 + log N0


Substituindo n = T/ tg

23 N0 . . . 2n N0

tg

log N = (T/tg) log2 + log N0

Frmula Geral: N= 2n N0
Onde: N = Nmero total de clulas na populao
n = Nmero de geraes (T/ tg)

Log N = (log 2/ tg) T+ log N0

N0 = Nmero inicial de clulas na populao

Curva de crescimento bacteriano:

Fatores do ambiente que afetam


o crescimento microbiano

Log N = (log2/tg) T + log N0


velocidade de crescimento = log2/tg = coeficiente angular da
reta tangente

log N

log N

Fase
Estacionria

Fase
de
morte

(h 1) =
Log 2/ tg
Fase
Lag

Tempo (h)

Relao linear entre log N X T

a) Atmosfera
b) Temperatura
c) pH

Fase Log

d) Disponibilidade de gua
Tempo (h)

Classificao dos microrganismos quanto


temperatura de crescimento

Efeito da temperatura no crescimento microbiano


Reaes
enzimticas com
velocidade mxima

tima

Termfilos

Mesfilos

Ex: Bacillus stearothermophilus

Ex: Escherichia coli

Psicrotrficos

Taxa de crescimento

Reaes enzimticas
com velocidade
crescente

Hipertermfilos
Ex: Thermococcus celer

Ex: Pseudomonas sp

Desnaturao de
protenas
Colapso da membrana
plasmtica
Lise celular
Mxima

Mnima

Solidificao da membrana
Diminuio do transporte de substncias
Paralizao do crescimento

Temperatura (C)
Psicrfilos
Ex: Flavobacterium sp

Disponibilidade de gua

Efeito do pH no crescimento microbiano

No haloflicos
Ex: Escherichia coli
Neutrfilos
Acidfilos

Alcaliflicos

Ex: Acidithiobacillus sp

Ex: Bacillus sp

3,5

Haloflicos
Ex: Vibrio fischeri

Taxa de crescimento

Taxa de crescimento

Ex: Escherichia coli

Haloflicos extremos
Ex: Halobacterium salinarium

14

pH
Halotolerantes
Ex: Staphylococcus aureus

Concentrao salina (NaCl)

Formas reativas (txicas) de oxignio


O2 + e O2- + e- + 2H+
H2O2 + e- + H+

O2 -

(nion super
superxido)
xido)

H2O2 (per
nio))
(perxido de hidrog
hidrognio
H2O + OH

(radical hidroxil)
hidroxil)

Classificao quanto a exigncia por oxignio

Mecanismos de destoxificao
2 O2- + 2H+ SOD O2 + H2O2
2 H2O2

catalase

2 H2O + O2

H2O2 + NADH + H+ peroxidase 2 H2O + NAD+

M
todos para quantificar o crescimento microbiano
Mtodos
1.1.1 LMINA

Anaer
Anaer
Anaerbios
Anaerbios
Aer
Aerbios
aerotolerantes
estritos Anaer
Anaerbios facultativos
Microaer
Microaerfilos
estritos

1.1 TOTAIS
1.1.1 ELETRNICA
1.

No.

CLULAS
1.2.1 PLAQUEAMENTO (diluies)
1.2 VIVEIS

MEDIDAS
DE
CRESCIMENTO

1.2.2 FILTRO (concentrar)

2.1 DIRETA
2. MASSA

2.1.1 MASSA SECA

2.2.1 DENSIDADE PTICA


2. 2 INDIRETA
2.2.2 ATIVIDADE METABLICA

Contagem de colnias
em placas e dilui
diluies
seriadas

Medida do crescimento microbiano por turbidimetria (densidade ptica)


ptica)
% de luz
absorvncia transmitida

Diluies sucessivas da
amostra
Plaqueamento de alquotas
Contagem de colnias
(entre 30 e 300)

Espectrofotmetro

Turbidez
da cultura

Fonte
luminosa

Amostra

Fototubo

Utiliza
Utilizao da cmara de contagem de PetroffPetroff-Hausser na
contagem microsc
microscpica direta do n
nmero de bact
bactrias

Clculo de unidades
formadoras de colnia
(UFC/mL)