CURRAIS NOVOS

Fisiologia Microbiana – Nutrição e

Cultivo de Microrganismos
 INTRODUÇÃO

 De todos os organismos vivos, os microrganismos são

os mais versáteis e diversificados em suas exigências
nutricionais.
 Alguns são tão exigentes quanto o homem e outros
animais.
 Todos os organismos vivos compartilham algumas
necessidades nutricionais em comum:
- carbono
- nitrogênio
- água
 INTRODUÇÃO

 Em algumas situações os microrganismos são estudados

em seu hábitat natural.
Ex.: Fendas termais, sistemas de tratamento de resíduos, solo

 Para caracterizar suas propriedades (morfológicas,

fisiológicas e bioquímicas) é necessário o cultivo em
laboratório.

Cultivo in vitro: quando se conhece as exigências

nutricionais

Cultivo in vivo: quando exigências nutricionais específicas

são desconhecidas.
 INTRODUÇÃO

Para o cultivo in vitro são utilizados meios de cultura que simulam

e até melhoram as condições naturais.
Os elementos químicos principais para o crescimento das células
incluem C, N, H, O, S e P e são denominados de macronutrientes.

• O carbono é um dos elementos mais importantes para o

crescimento microbiano – todos requerem carbono
• Os compostos orgânicos são os que contém carbono
• Exceção para o dióxido de carbono que é considerado como
inorgânico.
 INTRODUÇÃO

MACROnutrientes: necessários em grande quantidade. Tem papel importante na

estrutura e metabolismo.
MICROnutrientes: quantidades mínimas. Funções enzimáticas e estruturais das
biomoléculas

Uma célula típica

P, S, K, Na ...
Matéria seca
Água
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES
 CARBONO
 Um dos elementos químicos mais importantes
 Elemento chave na estrutura dos carboidratos,
lipídeos e proteínas (Deles se obtém energia e
unidades básicas para o crescimento celular)
 FORNECIMENTO DE ENERGIA PARA O
CRESCIMENTO CELULAR
 Heterotróficos: utilizam compostos orgânicos
como principal fonte de carbono
 Autotróficos: utilizam substrato inorgânico
(CO2)
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES

 NITROGÊNIO
 Essencial na formação dos aminoácidos
 É o elemento mais abundante depois do C, cerca de
12% (constituinte das proteínas, ácido nucléicos, etc.)
 Bactérias podem utilizar o Nitrogênio gasoso ou
atmosférico para a síntese celular por mecanismo
chamado de fixação de nitrogênio
 Outras utilizam compostos nitrogenados orgânicos:
nitratos, nitritos ou sais de amônia
 Algumas utilizam compostos de nitrogênio orgânico:
aminoácidos e peptídeos
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES

 HIDROGÊNIO,
 Principal elemento dos compostos orgânicos e de
diversos inorgânicos (água, sais e gases);
 Função do H
 Manutenção do pH
 Formação de ligações de H entre
moléculas
 Serve como uma fonte de energia nas
reações de oxi-redução da respiração .
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES

 OXIGÊNIO,
 Elemento comum encontrado nas
moléculas biológicas (aminoácidos,
nucleotídeos, glicerídeos ...);
 É obtido a partir das proteínas e gorduras.
► Na forma de oxigênio molecular (O2), é
requerido por muitos para os processos de
geração de energia.
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES

 ENXOFRE E FÓSFORO
 Enxofre: Biossíntese de aminoácidos 
cisteína, cistina e metionina
 Fósforo: síntese de ácidos nucléicos e
adenosina trifosfato (ATP) - Composto que é
extremamente importante, para o
armazenamento e a transferência de energia;
 Alguns desses elementos são encontrados na
água, na atmosfera e na forma de sais de
sulfato e fosfato
ELEMENTOS QUÍMICOS COMO
NUTRIENTES

 OUTROS ELEMENTOS
 Sódio (Na+): Facilitam o transporte de
materiais através das membranas celulares.
Ex.: Requerido pela permease que transporta
o açúcar melibiose em células deEscherichia
coli .
 Exigidos como co-fatores para as enzimas : O
Fe+2 é requerido por enzimas
como:citocromos, catalases, etc.)
 Zinco, Cobre, Manganês, Molibdênio, Cobalto.
CLASSIFICAÇÃO NUTRICIONAL DOS
MICRORGANISMOS

 QUIMIOTRÓFICOS: Utilizam compostos

químicos para obtenção de energia
 FOTOTRÓFICOS: Necessitam de energia
radiante (luz)
 Pela combinação destes termos com os
relacionados às principais fontes de carbono
temos:
 Quimioautotróficos: usam substâncias químicas
(inorgânicas) como fonte de energia e CO2 como fonte
de carbono
 Quimioheterotróficos: Usam substancias químicas
(orgânicas) e compostos orgânicos como fonte de
carbono.
CLASSIFICAÇÃO NUTRICIONAL DOS
MICRORGANISMOS
 Fotoautotróficos: usam luz como fonte de energia e CO 2
como fonte principal de carbono
 Fotoheterotróficos: Usam luz (orgânicas) e compostos
orgânicos como fonte de carbono.
Fonte de Fonte de
Grupo Nutricional Exemplos
Carbono energia
Bactérias nitrificantes
Dióxido de Compostos do ferro,
Quimioautotróficos hidrogênio e
carbono inorgânicos
enxofre
Muitas bactérias,
Compostos Compostos fungos,
Quimioheterotróficos protozoários e
orgânicos orgânicos
animais.
Bactérias do enxofre,
Dióxido de
Fotoautotróficos Luz algas, plantas e
carbono cianofíceas.
Bactérias púrpuras e
Compostos
Fotoautotróficos Luz verdes não
orgânicos enxofradas
Metabolismo Bacteriano
 MEIOS UTILIZADOS PARA CULTIVO
DE MICRORGANISMOS
 Usado para determinar as necessidades nutricionais de um
microrganismo.
 Meios quimicamente definidos: se conhece a composição
exata do meio
 Meios de cultura complexos preparados a partir de produtos
naturais  uso em laboratório
 Produtos naturais: extrato de carne, peptona, extrato de
levedura, sangue, soro, leite, etc.
 Componentes com carboidratos, lipídeos, proteínas mas de
composição exata desconhecida
 Meios sólido, líquido e semisólido
 MEIOS PARA CULTIVO DE BACTÉRIA

 Normalmente imitam o habitat normas das

mesmas;
 Se uma bactéria prefere os nutrientes
encontrados no sangue, então o sangue
pode ser adicionado ao meio;
 Se a glicose é um constituinte comum de um
nicho bacteriano, então o açúcar é
adicionado ao meio de cultura.
 CULTIVO DE BACTÉRIAS
Ingredientes Função Quantidade
(NH4)2SO4 Fonte de nitrogênio bem como de energia 0,5g
NaHCO3 Fonte de carbono na forma de CO2 em 0,5g
solução aquosa
Na2HPO4 Tampão e íons essenciais 13,5g
KH2PO4 Tampão e íons essenciais 0,7g
MgSO4.7H2O Íons essenciais 0,1g
FeCl3. 6H2O Íons essenciais 0,014g
CaCl2. 2H2O Íons essenciais 0,18g
Água q.s.p. Solvente 1000 mL
Meio quimicamente definido
Bactéria QUIMIOAUTOTRÓFICA
 CULTIVO DE BACTÉRIAS

Ingredientes Função Quantidade

Glicose Fonte de energia e de carbono 1g
NH4H2PO4 Fonte de Nitrogênio, tampão e íons 5g
essenciais
K2HPO4 Tampão e íons essenciais 1g
NaCl Íons essenciais 5g
MgSO4.7H2O Íons essenciais 0,2g
Água q.s.p. Solvente 1000 mL

Meio quimicamente definido

Bactéria QUIMIOHETEROTRÓFICA
 CULTIVO DE BACTÉRIAS

Ingredientes Função Quantidade

Extrato de Substâncias hidrossolúveis de tecido 3g
carne animal: carboidratos, compostos de
nitrogênio orgânico, vitaminas, sais
Peptona Fonte de Nitrogênio orgânico, algumas 5g
vitaminas
Cloreto de Íons e requerimentos osmóticos 8g
sódio
Água q.s.p. Solvente 1000 mL

Meio complexo
Bactéria QUIMIOHETEROTRÓFICA
 MEIOS PARA CULTIVO DE FUNGOS

 Assim como as bactérias, os fungos absorvem

nutrientes em vez de ingerí-los;
 Em laboratórios, muitos fungos podem crescer em
mistura simples contendo açúcar, uma mistura de
nitrogênio inorgânico ou orgânico e alguns minerais.
 Alguns necessitam de viatminas;
 Outros podem crescer somente em um meio
complexo que contenha uma grande variedade de
compostos orgânicos providos pela peptona e
extratos de carne.
 CULTIVO DE FUNGOS

Ingredientes Função Quantidade

Glicose Fonte de carbono e energia, alta 40g
concentração favorece o crescimento
de fungos, mas inibe o crescimento de
bactérias
Peptona Fonte de Carbono e Nitrogênio orgânicos, 10g
algumas vitaminas
Ágar Agente solidificante 15g
Água q.s.p. Solvente 1000 mL
pH Valores de pH baixos suprimem o 5,6
crescimento bacteriano, mas
favorecem o d efungos
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 TEMPERATURA
 Todos os processos de crescimento são dependentes de
reações químicas que são afetadas pela temperatura.
 Crescimento em uma ampla faixa de temperatura;
 A variação para o Bacillus subtilis é de (8 a 53) oC uma
variação de 45 oC;
 Para a Nisseria gonorrhoeae é de (30 a 40) oC, uma
variação de 10 oC
 A taxa de crescimento dobra a cada para cada aumento d
etemperatura de 10 oC
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 TEMPERATURA
 Temperatura ótima de crescimento: temperatura
na qual o microrganismo cresce mais
rapidamente;
 PSICRÓFILOS: crescem a baixas temperaturas
 MESÓFILAS: temperaturas moderadas
 TERMÓFILAS: altas temperaturas
 PSICRÓFILAS
 Crescem melhor a temperaturas de 15 a 20ºC
 Encontradas em águas frias e solos tais como os
oceanos e as regiões polares
 A maioria dos microrganismos marinhos
 Temperaturas de 4 a 10ºC deterioram alimentos
estocados por períodos prolongados
 Existem bactérias, fungos, algas e protozoários que
são psicrófilas;
 Ex.: Pseudomonas, Flavobacterium e Alcaligenes
 MESÓFILAS
 A maioria dos microrganismos são mesófilos
 Crescem a temperaturas de 25 a 40ºC
 Bactérias saprófitas, fungos, algas
 Os patogênicos ao homem crescem em
torno da temperatura corporal: 37ºC
 TERMÓFILOS
 A maioria cresce em temperaturas de 40 a 85ºC
 Crescem melhor entre 50 e 60ºC
 A maioria são Procarióticos, nenhum eucariótico
cresce em temperaturas superiores a 60ºC
 Ex.: Bacillus stearothermophilus
(Bacilo que produz esporos termorresistentes,
usado para teste de eficiência de
autoclaves, não patogênico para o homem)
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS
 ATMOSFERA GASOSA
 Os microrganismos no seu habitat natural
necessitam de quantidades variadas de gases
tais como o oxigênio, dióxido de carbono,
nitrogênio e metano;
 A fim de cultivar células microbianas, vegetais e
animais em laboratório, o gás atmosférico
apropriado deve está presente
 O dióxido de carbono e o oxigênio são os dois
gases principais que afetam o crescimento de
células microbianas
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 De acordo com as respostas ao oxigênio

gasoso, os microrganismos são divididos em
quatro grupos :
 AERÓBIOS
 FACULTATIVOS
 ANAERÓBIOS
 MICROAERÓFILOS
 AERÓBIOS
 Crescem em atmosfera padrão de 21% de
oxigênio;
 Adquirem mais energia dos nutrientes
disponíveis do os microrganismos que não
utilizam oxigênio.
 Os microrganismos que crescem em meio
líquido podem rapidamente utilizar o oxigênio
dissolvido na camada superficial do meio.
 Ex.: Fungos filamentosos
FACULTATIVOS
 Crescem na presença e na ausência do ar
atmosférico e podem também crescer na
anaerobiose;
 Eles não requerem oxigênio para o crescimento,
embora possam utilizá-lo para a produção de energia
em reações químicas.
 Sob condições anaeróbias, eles obtêm energia por
um processo metabólico chamado Fermentação.
 Ex.: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae
 ANAERÓBIOS
 Podem ser mortos pelo oxigênio
 Uso de câmaras de anaerobiose
 Clostridium perfringens, Cl. tetani

MICROAERÓFILOS
 Níveis de oxigênio de 1 a 15%
 As bolsas de incubação especiais com meio gasoso
apropriado são atualmente disponíveis para o
cultivo de tais bactérias.
 Campylobacter jejuni: causa diarréia em humanos
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 pH
 BACTÉRIAS:
Crescem a pH de 4 a 9
Ótimo em torno de 7
Picles e chucrute: presença de ácidos
orgânicos diminui o pH para 3 a 4.
 FUNGOS E LEVEDURAS
Faixa de pH mais extensa (2 a 9)
pH ótimo: 5 a 6
5 CRESCIMENTO MICROBIANO.ppt
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 Pressão Osmótica
 É a força com a qual a água se move através da
membrana citoplasmática de uma solução
contendo uma baixa concentração de substâncias
dissolvidas (solutos) para outra contendo uma
alta concentração de solutos;
 Quando as células microbianas estão em meio
aquoso, não devem existir grandes diferenças na
concentração de solutos dentro e fora da célula,
ou as células poderiam desidratar-se ou romper-
se;
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS
 Pressão Osmótica
 Em uma solução isotônica, o fluxo de água para
dentro e para fora da célula está em equilíbrio e a
célula cresce normalmente;
 Quando o meio externo é hipertônico, com uma
concentração de solutos mais alta do que no
citoplasma da célula, a célula perde água e seu
crescimento é inibido;
 Peixes salgados e frutas em caldas são
conservados pela retirada osmótica da água de
qualquer célula microbianas que estejam presente.
 CONDIÇÕES FÍSICAS PARA O
CULTIVO DE MICRORGANISMOS

 Pressão Osmótica
 Conteúdo celular de microrganismos80
a 90 % de água
 Elevações da pressão osmótica podem
remover a água de dentro da célula
 Peixe salgado, mel, leite condensado são
preservados pela diferença de pressão
osmótica causando a plasmólise.