Enzimologia Industrial

Profª Josileide Borges

O que é Biotecnologia ?
 O que é Biotecnologia ?

Aplicação de métodos e processos

biológicos e bioquímicos à produção
industrial.
 • Alimentos
• Bebidas
• Microrganismos
• Modificação de
Agentes Biológicos • Células
processos Químicos
• Biomoléculas
Bens • Energia
• Fármacos
•Exopolissacarídeos

Biotecnologia
• Microbiologia • Purificação de
Conhecimento • Bioquímica água
• Genética Serviços • Tratamento de
• Engenharia resíduos
• Química • Controle da
• Informática poluição
 Microrganismos

O que primeiro vem a mente quando

se fala de microrganismos?
 Microrganismos

Causadores de doenças!

Por quê?
 Pandemias

Gripe Espanhola
(1918-1920)

Vírus: Influenza (H1N1)

Contaminados: 500 milhões de pessoas
Mortos: cerca de 100 milhões
Ondas: três ondas
Agravante: Intoxicação por aspirina: Oficiais recomendaram
dosagens de 8 a 31 g por dia causando hiperventilação em
33% dos pacientes, além de edema pulmonar em outros 3% dos
pacientes .
 Pandemias

Covid 19
(2019-2023 ?)

Vírus: SARS- COV-2

Contaminados: 270 milhões de pessoas
Mortos: cerca de 5-15 milhões (OMS)
Ondas:três ondas
Agravantes: Atraso em medidas restritivas, desinformação,
politização da vacina e atraso na compra, medicamentos sem
eficácia comprovada (Ivermectina (vermifugo), hidroxicloroquina
(artrite reumatoide, lúpus)).
 1800 AC 1797

O levedo já era usado O médico Edward Jenner

para a fabricação de criou a (Pai da Imunologia)
pão, vinho e cerveja. primeira vacina ( vacina
viral contra varíola).
 1861
1904

Pasteur define a O médico sanitarista

função dos Oswaldo Gonçalves Cruz
microrganismos. implantou uma Campanha
de vacinação em massa
contra varíola.
 1953
1982

Watson e Crick A insulina humana é

revelam a produzida por
estrutura do DNA. engenharia genética.
 1983 1994

As primeiras
plantas O primeiro
transgênicas alimento GM chega
são aos mercados.
desenvolvidas.
Microrganismos são as “Biofábricas”
 As avaliações de
biossegurança são feitas
durante a fase experimental
para detecção de problemas.

O emprego de
microrganismos
considerados GRAS
(Generally Recognized as
Safe).
Produtos biotecnológicos
 AS PROTEÍNAS

Funções biológicas das proteínas:

 Transporte (hemoglobina, permeases);

Armazenamento (ferritinas);
Estrutural (ex. colágeno, actina/miosina, queratina, albumina);
Defesa (anticorpos);
Regulagem (hormônios);
Enzimas
 Enzimas
(Proteínas especializadas)

 Especificidade pelo substrato – ATIVIDADE BIOLÓGICA

Catalisadores biológicos intra e extracelulares

( 108-1011 a vel. reação).
Atuam em baixas concentrações – condições brandas
( T°C) e pH.
 São atóxicas e biodegradáveis
 Atividade enzimática

• As enzimas convertem uma substância,

chamada de substrato, em outra
denominada produto, e são extremamente
específicas para a reação que catalisam.

• O local da enzima onde o substrato se

"encaixa" é denominado sítio ativo (ou
centro ativo).
 Mecanismos
Modelo chave-fechadura

Hermann Emil Fischer

1896
 K1 cte formação Kp cte catalítica
E+S ES E+P
K-1 cte decomposição

Etapa rápida Etapa lenta

Equação de Michaelis-Menten

V = velocidade da reação enzimática

V max = velocidade máxima da

reação enzimática.

[S] = concentração do substrato.

Km = constante de Michaelis-Menten

Indica o grau especificidade da

enzima ao substrato
 Tecnologia Enzimática
• Ferramenta promissora para o desenvolvimento
sustentável. O mercado de enzimas é crescente e
promissor.

• Quadro 1: Tecnologia enzimática nas indústrias

Indústria Item
Agropecuária Aditivos de ração
Alimentos Enzimas usadas na preparação de alimentos
Detergentes Melhoramento da eficácia
Energia Nutracêuticos; ingredientes
Farmacêutica Novas enzimas, medicamentos
Materiais Papel; polímeros, tecidos, tratamento de couro
Química Biocatálise, Compostos orgânicos
 Enzimas
• As enzimas são proteínas especializadas na catálise de
reações biológicas e apresentam características
extremamente importantes, como:

 Atuam em condições amenas de reação (temperatura

ambiente, pH neutro);
 São altamente específicas (seletividade de substrato e
grupo funcional);
 Proporcionam um ambiente reacional não-agressivo ao
meio ambiente (enzimas são biodegradáveis);
 Apresentam alta eficiência catalítica;
• Até 2013, 6.200 enzimas foram cadastradas
pela União Internacional de Bioquímica, mas
estima-se que cerca de 85% das enzimas
ainda estão na natureza sem serem
descobertas.

• As enzimas aceleram reações químicas.

Ex: Decomposição do H2O2
catalase
H2O2 H2O + O2
• Não são consumidas na reação;

H2O2 H2O + O2
Catalase
• E+S E+P

• Atuam em pequenas concentrações:

• 1 molécula de Catalase decompõe

5.000.000 de moléculas de H2O2.
Enzimas

INIBIÇÃO

DESNATURAÇÃO
• Inibidores enzimáticos são substâncias, que
podem inibir a atividade de algumas enzimas,
diminuindo-a ou eliminando-a totalmente;

• Desnaturação- sofrer desagregação e

inativação pelo aumento de temperatura, o
que provoca alterações na conformação
tridimensional da proteína.

Obs: Essas alterações podem ser reversíveis e

irreversíveis.
 Presença de Inibidores enzimáticos

• Classificação:

Irreversível
Competitiva

Reversível
Não Competitiva
INIBIÇÃO REVERSÍVEL COMPETITIVA
REVERSÍVEL NÃO-COMPETITIVA
 FATORES QUE INFLUENCIAM NA VELOCIDADE DE
UMA REAÇÃO ENZIMÁTICA

• pH;
• Temperatura;
• Concentração das enzimas;
• Concentração dos substratos;
• Presença de inibidores.
pH
Variação

-Enzima
-Substrato
GRÁFICO DE TEMPERATURA
 TEMPERATURA
• A maioria das enzimas • Em geral, pode-se
apresenta melhor dizer que nenhuma
desempenho em enzima resiste por
temperaturas que muito tempo à
variam de 30 °C a temperaturas
70°C e com valores de superiores a 100 °C.
pH próximos à
neutralidade (pH ≅ 7).
 Determinação da temperatura
ótima de reação !!!!

20ºC 30ºC 40ºC 50ºC 60ºC 70ºC

Incubação das misturas de reação (E + S + tampão ) em diferentes

temperaturas.
 CONCENTRAÇÃO DAS ENZIMAS

•Velocidade de transformação do S em P »
quantidade de E.

Desvios da linearidade ocorrem devido:

• Presença de inibidores na solução de enzima;

• Presença de substâncias tóxicas;
• Limitações impostas pelo método de análise.
 Recomenda-se:

• Enzimas com alto grau de pureza;

• Substratos puros;
• Métodos de análise confiável.
 Classificação de enzimas
Classe 1 Oxirredutases Catalisam reações de
oxirredução,
transferindo elétrons,
hidretos
(H-) ou prótons (H+).

Classe 2 Transferases Transferem grupos

químicos entre
moléculas.

Classe 3 Hidrolases Utilizam a água como

receptor de grupos
funcionais de outras
moléculas.
Classe 4 Liases Formam ou destroem
ligações duplas,
respectivamente
retirando ou adicionando
grupos funcionais.

Classe 5 Isomerases Transformam uma

molécula no seu
isômero.

Classe 6 Ligases Formam ligações

químicas por reações de
condensação,
consumindo energia sob
a forma de ATP.
 Outras formas de classificar

Atuam no interior da célula

Enzimas intracelulares sintetizam o material celular

Realizam reações catabólicas

que suprem as necessidades
energéticas da célula.

Atuam fora da célula

Enzimas extracelulares Executando as alterações
necessárias à penetração dos
nutrientes para o interior das
células.
 Produção Industrial de Enzimas
 Fonte

Lípase Pancreática,
Animais Pepsina, renina

Vegetais Bromelina, Papaína

Lactase: Salix fragilis

Microrganismos
Lipase: A.niger