Introdução à

Biotecnologia e
Enzimologia Industrial
Prof. Dr. Guilherme Antônio Lopes de Oliveira
 Biotecnologia tradicional
Cultivar vegetais, domesticar animais, transformar os
alimentos ou aproveitar as propriedades curativas de
algumas plantas são atividades que remontam à alvorada
da humanidade e se desenvolveram com base no
conhecimento empírico, ignorando a existência dos
microrganismos ou das leis da hereditariedade.
Crescimento populacional
Condições sanitárias

Processos industriais mais

eficientes
 Biotecnologia tradicional
A partir de 1850 surgem novas áreas do conhecimento.
Nasce a Microbiologia, a Imunologia, a Bioquímica e a
Genética. A Química Industrial desenvolve-se
aceleradamente e aumenta, também, a intervenção da
Engenharia Agrícola e da Pecuária no gerenciamento do
campo.

Capitalismo
Conhecimentos científicos
 Biotecnologia tradicional
Em 1914, Karl Ereky, um engenheiro agrícola húngaro,
desenvolve um gigantesco plano de criação de suínos
visando substituir as práticas tradicionais por uma
indústria agrícola capitalista baseada no conhecimento
científico

Capitalismo
Conhecimentos científicos
 Primeiro conceito de biotecnologia
Deve-se a Ereky (1919) a primeira definição de
biotecnologia, como “a ciência e os métodos que
permitem a obtenção de produtos a partir de matéria-
prima, mediante a intervenção de organismos vivos”.

Logros extraordinários
Variedades genéticas
Novos alimentos
Tratamento do lixo
Produção de enzimas
 Biotecnologia moderna
James Watson e Francis Crick (1953)

Um marco fundamental na
história da Biologia Molecular
James Watson e Francis Crick (1953)
James Watson e Francis Crick (2003)
O Código Genético
O Código Genético
Tecnologia do DNA Recombinante

Biologia Molecular Aplicada à Saúde

Copiar: DNA Polimerase

Arthur Kornberg
1918 – 2007

1959
Colar: DNA Ligase

Robert Lehman
1924 –
Recortar: Enzimas de Restrição

Werner Arber
1929 –

1978
Estudo dos Plasmídeos Bacterianos, 1966

INÍCIO DA DIVISÃO ENTRE

BIOTECNOLOGIA
TRADICIONAL E MODERNA
Stanley Cohen
1935 –
Conferência sobre Plasmídeos, Honolulu (1972)

Herb Boyer
1936 –

Biologia Molecular Aplicada à Saúde

 DNA de Xenopus laevis > Plasmídeo E. Coli

(1973)

A partir desse momento é possível mudar o programa

genético de um organismo transferindo-lhe genes de outra
espécie.
 Conferência de Assilomar (1975)

A importância e os riscos inerentes à nova tecnologia não passaram

despercebidos às pessoas envolvidas. Fato inédito na história, em
1975, os cientistas reunidos em Assilomar (USA) estabeleceram uma
moratória em seus trabalhos até serem definidas as condições de
segurança adequadas, o que aconteceria pouco tempo mais tarde.
 Genetech: 1ª Empresa de Biotecnologia (1976)

Bob Swanson e Herbert Boyer

Março, 1981
Genoma Humano (2000, “Rascunho”)
Reação em Cadeia da Polimerase

Kary Mullis
1944 –

1993
Sequênciamento de DNA 1980

Walter Gilbert Frederick Sanger

1932 – 1918 –
Sequênciamento de DNA
Bioinformática
 Transições

Na passagem de uma biotecnologia de laboratório a

uma biotecnologia industrial, a Engenharia Genética
ocupa um lugar de destaque como tecnologia
inovadora do século XX.
 Transições

Em alguns casos, como os da insulina e do hormônio do

crescimento, a inovação consiste em substituir os métodos de
obtenção tradicionais. Em outros casos, como o dos anticorpos
monoclonais ou do Golden Rice, um arroz com vitamina A,
trata-se de produtos inteiramente novos. As técnicas recentes
de edição gênica ampliam extraordinariamente as
possibilidades de manipulação dos genes.
A Biotecnologia abrange uma área ampla do
conhecimento que decorre da ciência básica (biologia
molecular, microbiologia, biologia celular, genética
etc.), da ciência aplicada (técnicas imunológicas e
bioquímicas, assim como técnicas decorrentes da
física e da eletrônica), e de outras tecnologias
(fermentações, separações, purificações, informática,
robótica e controle de processos). Trata-se de
uma rede complexa de conhecimentos na
qual ciência e tecnologia se entrelaçam e
se complementam.
 Mantenha-se atualizado!

Confronte as ideias e tire

suas próprias conclusões!
Símbolo de transgênico: é
obrigatória a presença deste
 Você acha que a sociedade símbolo nos rótulos dos
produtos que contenham
deveria ser melhor informada sobre acima de 1% de OGM em sua
os alimentos transgênicos? composição.

 Você tem o hábito de ler rótulos e

embalagens para conhecer a origem
dos produtos que consome?
T
 Definições de Biotecnologia
O impacto causado pelas primeiras experiências em
Engenharia Genética estimulou numerosas tentativas
de redefinição do campo da Biotecnologia. Mediante
a substituição da expressão “intervenção de
organismos vivos” por “utilização de processos
celulares e moleculares” tratou-se de diferenciar a
Biotecnologia clássica da moderna. Porém, devido à
enorme difusão das técnicas de manipulação gênica,
elas acabam se superpondo, e, fora do contexto
histórico, é difícil distinguir o limite entre ambas.
Campos da Biotecnologia
 Produtos e serviços de origem
biotecnológica, em diferentes setores
Quero saber de você:

Como você ver o desenvolvimento

da indústria farmacêutica e a
BIOTECNOLOGIA?
Entendendo a Enzimologia
 Quais as principais formas de se aumentar a
velocidade de reações?
•Aumento da concentração de reagentes
A velocidade de uma reação é proporcional às concentrações das espécies
reagentes.

•Aumento da temperatura
Aumenta-se a movimentação térmica das moléculas e, consequentemente,
aumenta-se a fração de moléculas com energia interna suficiente para atingir
o estado de transição.

•Uso de catalisadores
Reduz-se a energia de ativação e, consequentemente, aumenta-se a fração
de moléculas com energia interna suficiente para atingir o estado de transição.
 O quê são enzimas?
São proteínas globulares que apresentam ação
catalítica (aumentam a velocidade de reações
As enzimas: químicas).

• São sintetizadas pelas próprias células onde atuam;

• Apresentam elevada especificidade de ação;
• Podem ser expressas em maior ou menor quantidade, de acordo com as
condições fisiológicas;
• Apresentam atividade modulável, permitindo um ajuste fino do
metabolismo
às necessidades celulares.
Natureza das enzimas

• As enzimas, como todos os catalisadores, são compostos

capazes de aumentar a velocidade de reações químicas, sem
alterar a proporção entre reagente e produto encontrado no
final da reação e sem serem efetivamente consumidas durante
o processo.

• As enzimas aumentam a velocidade de reações químicas

diminuindo a energia de ativação.

• Não afetam o equilíbrio de reações.

Por que usar enzimas em processos industriais?

Outros catalisadores em geral produzem:

•Reações inespecíficas podem resultar em baixo rendimento

• Altas temperaturas e/ou altas pressões, necessárias para acelerar as reações

• Produzem altos custos energéticos e podem requerer grandes volume de água de

resfriamento

• Processos realizados a alta temperatura, pressão, acidez e alcalinidade necessitam

de alto investimento e especialmente de equipamentos e sistemas de controle
sofisticados

• Os subprodutos podem se difíceis de serem separados ou eliminados

•Impacto ambiental
Tudo isso pode ser diminuído usando enzimas
•Reações enzimáticas ocorrem em reações brandas de temperatura e
pressão;

•São altamente específicas, envolvem reações rápidas e são realizadas por

numerosas enzimas;

•Apenas pequenas quantidades de enzimas são requeridas nas reações

químicas, mesmo em escala industrial, e portanto necessitam de pequeno
espaço para armazenamento;

•Reações enzimáticas podem ser facilmente controladas e podem ser

interrompidas rapidamente quando o grau de conversão de substrato é
alcançado.

•Geram poucos resíduos – vantagem ambiental

•Desenvolvimento em genética e engenharia de proteínas aumentam a

estabilidade, especificidade e o potencial de aplicação industrial.
 Fontes de enzimas
As enzimas podem ser provenientes de:

• tecidos de organismos diferenciados (células vegetais

e animais) papaína, extraída do latéx do mamoeiro,
bromelina, obtida do talo do abacaxi
ficina, obtida do látex de figueiras
proteinase, do sisal
amilases para a preparação de mostos de cerveja

renina usada na elaboração de queijos,

• microrganismos.
 NOMECLATURA

Classificação das enzimas em relação à reação catalisada

Classes de enzimas Numero de Tipo de reação
subclasses
1. Oxidorredutases 20 Envolve o movimento de eletrons de uma molécula a
outra. Em sistemas biológicos nós vemos a remoção de
hidrogênio do substrato e as enzimas são chamadas
desidrogenases.
2. Transferases 9 Envolve a transferência de grupos de átomos de uma
molécula a outra
3. Hidrolases 12 Catalisa reações entre um substrato e a água. Moléculas
grandes são quebradas em pequenas unidades.
4. Liases 7 Catalisam a adição de grupos a duplas ligações ou a
formação de duplas ligações através da remoção de
grupos.
5. Isomerases 6 Catalisam a transferência de grupos de uma posição a
outra na mesma molécula.
6. Ligases 5 Ligam moléculas através de ligações covalentes..
Enzimas usadas em processos industriais

Classe Enzimas Industriais

1.Oxidorredutases Peroxidases
Catalases
Glucose oxidases
Lacases
2.Transferases Frutosil-transferases
Glucosil-transferases
3.Hidrolases Amilases
Celulases
Lipases
Pectinases
Proteases
Pululanases
4.Liases Pectato liases
Alfa-acetolactoase
descarboxilases
5.Isomerases Glucose isomerase
6.Ligases No momento ainda não são usadas
Principais indústrias consumidoras de enzimas
 Enzimas microbianas
 Microrganismos:

1) Temperatura de crescimento:
Psicrófilos - crescem abaixo de 20 oC
Mesófilos - 20 a 50 oC
Termófilos - crescem acima de 55 oC
Hipertermófilos – crescem acima de 80 oC

2) pH
Acidófilos
Neutrófilos
Alcalófilos 3) O2 4) Pressão
Aeróbicos obrigatórios osmótica (NaCl):
Anaeróbicos obrigatórios Halotolerantes
Anaeróbicos facultativos
Microaerófilos
Halófilos
Aerotolerantes Halófilos extremos
O que é um bom catalisador?
 Produção de enzimas com organismos
geneticamente modificados

 Atualmente: A maioria das enzimas produzidas

comercialmente provém de microrganismos
provenientes de programas de melhoramento genético

• Técnica:

Obter um fragmento de DNA que codifique a síntese de

uma determinada enzima e introduzir este fragmento
através de um vetor na célula hospedeira onde o código
genético vai se reproduzir e se expressar.
 Exemplo:
renina - protease de origem animal com alta demanda
 Substituição por renina microbiana (de Mucor
miehii): parcial.

 Produção por tecnologia de DNA recombinante:

 Celltex, Genex, Genencor e Codon: produção de
renina com cepas de Escherichia coli (sem
excreção);
 Genecor: produção de renina animal extracelular
com cepas Aspergillus nidulans.
 Outros centros: produção de renina com cepas de
Saccharomyces e Kluyveromyces.
 Gist-Brocades: renina animal produzida por cepas
clonadas de Kluyveromyces marxianus.
Produção de enzimas sintéticas
• Uma enzima, apesar de conter muitos
aminoácidos, utiliza somente uma pequena porção
destes no processo catalítico.

•Ex. Tripsina – 254 resíduos de aminoácidos, porém

3 aminoácidos são implicados no mecanismo de
proteólise.
•Os demais aminoácidos – importantes para formar
o sitio de união ao substrato

•Construir uma enzima nova ainda é inviável – não é

possível predizer a estrutura tridimensional
Pontos importantes:

- Utilização de enzimas mais que duplicou nos últimos

anos

- Acesso a patentes

- Mercado de enzimas dividido em três segmentos:

1) Enzimas técnicas – destinadas à indústria têxtil e de
produtos de limpeza
2) Enzimas para alimentos e bebidas
3) Enzimas para ração animal

- O mercado de enzimas produzidas por tecnologia do

DNA recombinante – plena expansão