BIOTECNOLOGIA DOS

MICROORGNISMOS

BIOTECNOLOGIA – MS Prof. Domingos Magno

Alunos:
Jocsã Nascimento Barros
Manoel Junior
Mirela
Amanda
 TECNOLOGIA DO CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
INTRODUÇÃO
A tecnologia do cultivo de
microrganismos estuda o conjunto
de operações envolvidas nos
processos realizados por
microrganismos que, ao se
desenvolverem em um meio de
cultura adequado, originam
produtos de interesse comercial.
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HISTÓRICO
O uso de microrganismos nas
transformações bioquímicas é
conhecido há aproximadamente
8.000 anos, quando se produzia
pão, vinho, vinagre, cerveja e
queijo. Nessa época, no entanto, o
homem não sabia exatamente por
que essas transformações
ocorriam e quais eram os agentes
responsáveis pelos bioprocessos,
limitando-se apenas a usufruir dos
seus benefícios.
 TECNOLOGIA DO CULTIVO
DE MICROORGANISMOS
⊷ Em 1856, Louis Pasteur provou que a causa
das transformações observadas era a ação
desses seres minúsculos, os
microrganismos. Pasteur recebeu a
incumbência de mercadores franceses de
descobrir por que os vinhos e as cervejas
azedavam. Para isso, ele realizou
investigações detalhadas sobre os
bioprocessos de produção dessas bebidas e
concluiu que as leveduras vivas, na
ausência de ar, transformavam o açúcar em
etanol e CO2 (PELCZAR; CHAN;
KRIEG,1996; TORTORA; FUNKE; CASE,
2012).

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 ELEMENTOS ESSENCIAIS AO
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
⊷ Nos processos industriais de
cultivo de microrganismos estão
envolvidos quatro componentes
básicos: o microrganismo, o meio
de cultura, a forma de condução do
bioprocesso e as etapas de
recuperação do produto (PELCZAR;
CHAN; KRIEG, 1996; SCHMIDELL
et al., 2001).

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5
 ELEMENTOS ESSENCIAIS AO
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
⊷ No cultivo de microrganismos para a
obtenção de bioprodutos, uma série de
fatores são importantes, dentre os
quais se destaca a escolha correta do
microrganismo que será utilizado. Há
diversas formas de obtenção de
microrganismos para utilização
industrial.

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 ISOLAMENTO A PARTIR
DOS RECURSOS NATURAIS
⊷ O isolamento é uma das formas de
obter microrganismos com
características desejáveis, pois o
local de isolamento reflete muito no
bioproduto que um determinado
microrganismo é capaz de
sintetizar. Por exemplo, para a
obtenção de enzimas microbianas
resistentes ao calor, os
microrganismos podem ser isolados
em locais quentes.

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 ISOLAMENTO

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 ETAPAS DO ISOLAMENTO
⊷ As etapas de isolamento de um
microrganismo retirado do ambiente
são as seguintes:
⊷ escolha e retirada de amostras do
ambiente a ser explorado;
⊷ diluições das amostras em laboratório;
⊷ utilização de técnicas de isolamento de
colônias em meio sólido, através do
método de espalhamento;
⊷ seleção de colônias de microrganismos
pela sua morfologia ou produtos
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formados.
 AQUISIÇÃO EM COLEÇÕES DE
CULTURA
⊷ Os bancos de culturas foram criados
com o objetivo de reunir uma série de
microrganismos e manter sua
estabilidade e pureza durante grandes
períodos de tempo, normalmente na
forma liofilizada, conservando suas
características genéticas e suas
propriedades fisiológicas.

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 LISTA DE BANCOS DE
CULTURA
⊷ LISTA COM ALGUNS DOS BANCOS DE CULTURA
EXISTENTES NO BRASIL
⊷ Fundação André Tosello, Coleção de Culturas Tropical
(CCT), Campinas, SP (www.fat.org.br)
⊷ Secretaria de Agricultura e Abastecimento, Coleção
de Culturas IBSBF do Instituto Biológico, Campinas,
SP (www.biologico.sp.gov.br)
⊷ Instituto Oswaldo Cruz, IOC/FIOCRUZ, Rio de Janeiro,
RJ (www.fiocruz.br)
⊷ Coleções Científicas - Coleções Microbiológicas,
Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, SP
(www.ial.sp.gov.br)
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 ⊷ Obtenção de microrganismos
mutantes
⊷ Obtenção de microrganismos
recombinantes

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 BIOPROCESSOS
INDUSTRIAIS
⊷ Para que um bioprocesso seja
realizado com sucesso, devem-se levar
em consideração algumas
características dos microrganismos
que serão empregados (SCHMIDELL
et al., 2001). A seguir, são descritas as
principais características necessárias
aos microrganismos utilizados em
bioprocessos.
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o Ser eficientes na conversão de
substratos em produtos.
o Permitir o acúmulo do produto gerado
no meio de cultivo, ou seja, o produto
não deve inibir o crescimento celular.
o Não produzir substâncias
incompatíveis com o produto, ou que
possam levar à degradação do produto
gerado.
o Apresentar estabilidade fisiológica, ou
seja, não sofrer alterações
metabólicas, conservando suas
características durante todas as
etapas envolvidas no processo.
o Não ser patogênicos, não oferecendo
riscos para a saúde.
o Não representar riscos ambientais.
o Não exigir condições de processo
muito complexas nem meios de
cultura muito caros. Controles
precisos de parâmetros, como pH,
temperatura e oxigênio dissolvido,
levam ao aumento dos custos. O
ideal é conseguir trabalhar com
microrganismos menos exigentes.
o Permitir a rápida liberação do
produto para o meio.
Normalmente os produtos
extracelulares são mais fáceis de
purificar, uma vez que não
necessitam de etapas de
rompimento celular.
 ⊷ MEIOS DE CULTURA PARA
UTILIZAÇÃO DE PROCESSOS

“
INDUSTRIAIS

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 ⊷ ser o mais barato possível;
⊷ estar disponível em grande quantidade;

“
⊷ ser de fácil transporte e armazenamento;
⊷ ter composição razoavelmente fixa;
⊷ auxiliar no controle do processo (p.ex.,
meios tamponados, que não permitem
variações drásticas de pH, ou que evitam
formação excessiva de espuma);
⊷ não provocar problemas na recuperação
do produto;
⊷ não causar dificuldades no tratamento
final dos efluentes

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 ETAPAS

“ ⊷ Classificação dos meios de cultivo

⊷ Resíduos agroindustriais
⊷ Esterilização

18
 “

19
 BIOPRODUTOS
⊷ Os bioprodutos obtidos a partir do cultivo
de microrganismos que empregam
substratos de baixo valor comercial
tornam-se economicamente mais viáveis
em comparação àqueles que utilizam
meios de cultura sintéticos.
⊷ Pasteurização é um tratamento térmico
realizado em temperaturas inferiores a
100°C, com tempo variável, que tem
como objetivo uma redução drástica no
número de microrganismos.
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 PASTEURIZAÇÃO

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 BIOPROCESSOS E
BIOREATORES

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 BIOPROCESSOS E BIOREATORES
BIOPROCESSOS BIOREATORES
Envolvem a aplicação ⊷ Biorreatores são
industrial de reações ou “locais” em que
vias biológicas para a ocorrem reações
biotransformação de
envolvendo células
matérias-primas em
produtos. São mediadas vivas (reatores
por células vivas inteiras biológicos) ou reações
de animais, plantas ou catalisadas por
microrganismos ou por enzimas (reatores
enzimas, em condições enzimáticos ou
controladas. bioquímicos).
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 CLASSIFICAÇÃO DE BIOREATORES
⊷ Reatores de fase ⊷ Reatores em fase não
aquosa: São utilizados aquosa: Os cultivos
em cultivos realizados neste tipo
submersos. Podem ser de reator também são
utilizados com células conhecidos como
ou enzimas livres, com cultivo em estado
células ou enzimas sólido (CES).
imobilizadas em
suportes, ou ainda com
células ou enzimas
confinadas entre
membranas
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 BIOREATORES
⊷ A maioria destes processos são aeróbicos,
logo um biorreator eficiente não deve
apresentar dificuldades de transferência de
calor e massa, além de facilitar a difusão e a
extração dos metabólitos.

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 CONDUÇÃO DO CULTIVO
DE MICROORGANISMOS

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 FASES
⊷ O primeiro passo ⊷ . A fase seguinte envolve
para a condução as etapas de crescimento
dos cultivos de e transferência do
microrganismos é microrganismo, que são
responder à desenvolvidas de forma a
pergunta: “Que garantir pureza,
bioproduto desejo concentração e
obter e qual será viabilidade adequada
sua aplicação? para a produção do
bioproduto no biorreator
principal.
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 ETAPAS DE PREPARAÇÃO DE UM CULTIVO

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 FORMA DE CONDUÇÃO
DOS BIOPROCESSOS

As formas mais utilizadas de conduzir

um bioprocesso são os cultivos
submersos (descontínuo,
descontínuo alimentado ou contínuo),
os cultivos com células imobilizadas e
os cultivos em estado sólido.

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 FORMAS DE CULTIVO
Descontinuo ou em
Batelada

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 Controle de parâmetros operacionais

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 CONTROLE

oTEMPERATURA
opH
oOXIGÊNIO DISSOLVIDO
oAGITAÇÃO
oESPUMA

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 RECUPERAÇÃO DE BIOPRODUTOS
A recuperação e purificação de bioprodutos
originados por cultivos de microrganismos é
uma etapa que apresenta alta complexidade.
Isso se deve aos constituintes do meio de
cultivo pós-bioprocesso, que contêm diversos
metabólitos formados e os nutrientes residuais
do meio de cultivo inicial

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 METODOS
Etapa da
Princípio Principais métodos
purificação

Separação das células do Filtração convencional; filtração tangencial;

Clarificação
meio de cultivo centrifugação

Métodos mecânicos (homogeinizadores de alta

Rompimento Separação de produtos
pressão, ultrassom, pérolas de vidro, moinhos);
celular intracelulares
métodos químicos ou enzimáticos

Concentração pela
retirada de água; primeira
Concentração ou
etapa de separação de Precipitação com sais; precipitação com
purificação de
bioprodutos; apresenta solventes; ultrafiltração
baixa resolução
moderado poder de
purificação

Cromatografia de troca iônica; cromatografia de

Purificação de Separação do bioproduto
afinidade; cromatografia de interação
alta resolução alvo
hidrofóbica; gel filtração
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 REFERÊNCIAS
⊷ Biotecnologia II: aplicações e tecnologias
[recurso eletrônico] / Organizadora,
Alessandra Nejar Bruno.– Porto Alegre:
Artmed, 2017.e-PUB.

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