AULA PRÁTICA 02

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Visto: ________________________
PROCEDIMENTO FENOTIPAGEM ABO DIRETA E REVERSA EM TUBO E
PESQUISA DE D FRACO

DESCRIÇÃO DOS PROCEDIMENTOS

PREPARO DA SUSPENSÃO DE HEMÁCIAS:

1. Colocar os EPI´s necessários (jaleco, gorro, máscara, luvas);

2. Retirar do tubo primário (tampa roxa) 500uL da amostra de concentrado de hemácias do
paciente;
3. Transferir para um tubo de hemólise;
4. Completar com salina para lavagem;
5. Colocar na centrífuga com cuidado no balanceamento e centrifugar a 3500 rpm por 1
minuto;
6. Desprezar o sobrenadante e ressuspender as hemácias em solução salina;
7. Centrifugar a 3500 rpm por 1 minuto;
8. Repetir as etapas 6 e 7 mais uma vez;
9. Desprezar o sobrenadante e emborcar o tubo de acrílico sobre o papel absorvente batendo
levemente na bancada para secar;
10. A partir do sedimento de hemácias lavadas obtido, preparar uma suspensão a 5% (50 µL
do sedimento de hemácias + 950 µL de salina).

PROVA DIRETA:

1. Identificar com caneta piloto os tubos de hemólise necessários para classificação

sanguínea, ou seja, 3 tubos, com as letras A, B e D e organizá-los na estante plástica;
2. Colocar 1 gota de cada reagente em seu tubo específico, ou seja, anti-A no tubo A, anti-B
no tubo B e anti-D no tubo D;
3. Colocar 50 μL (1 gota) da suspensão de hemácias preparada anteriormente nos tubos A, B
e D;
4. Centrifugar os tubos a 3500 rpm por 15 segundos com cuidado no balanceamento dos
mesmos;
5. Ler o resultado dos testes com elevação dos tubos contra a luz;
6. Registrar resultado em local especificado abaixo.

Interpretação da fenotipagem ABO

Positivo: a aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a presença de antígeno
correspondente.

Negativo: a ausência de aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a ausência de

antígeno correspondente.

Interpretação da fenotipagem ABO

Anti- A Anti- B Anti- AB Anti- D Grupo
Sanguíneo
Fator Rh

+ negativo + + A+

+ negativo + negativo A-

negativo + + + B+

negativo + + negativo B-

+ + + + AB +

+ + + negativo AB -

negativo negativo negativo + O+

negativo negativo negativo negativo O-

Reações fracas podem indicar a presença de subgrupos de A (ABO1) ou B (ABO2), o que

requer procedimentos adicionais. Para uma interpretação correta, deve-se fazer uma
fenotipagem completa (prova direta com anti-A, anti-B e prova reversa com hemácias A, B e
O).
Resultados dos testes realizados:
Anti-A Anti-B RH (Anti-D) Grupo sanguíneo/Rh
Amostra 01
Amostra 02
Amostra 03
Amostra 04
PESQUISA DE D FRACO (EM CASO DE RH NEGATIVO):

1. Colocar os tubos anti-D em banho-maria a 37°C por 15 minutos;

2. Ativar o cronômetro;
3. Centrifugar os tubos a 3500 rpm por 15 segundos;
4. Realizar a leitura com elevação dos tubos contra a luz;
5. Lavar 3 vezes com salina, desprezando o sobrenadante após cada centrifugação a
3550 rpm por 1 minuto;
6. Após última lavagem, desprezar o sobrenadante e emborcar o tubo de acrílico sobre
o papel absorvente batendo levemente na bancada para retira o excesso de salina;
7. Acrescentar 2 gotas de Coombs poliespecífico em cada tubo;
8. Centrifugar os tubos a 3500 rpm por 15 segundos;
9. Realizar a leitura com elevação dos tubos contra a luz;
10. Registrar resultado na tabela anterior correspondente à amostra analisada.

Leitura Pesquisa de D fraco:

Presença de aglutinação: D fraco + (pos)

Ausência de aglutinação: D fraco – (neg)

CLASSIFICAÇÃO SANGUÍNEA (PROVA REVERSA):

1. Identificar 2 tubos de acrílico RA e RB;

2. Acrescentar 1 gota de Hemácia A no tubo RA e uma gota de Hemácia B no tubo RB;
3. Acrescentar 100µl (2 gotas) do soro do paciente em cada tubo;
4. Centrifugar os tubos a 3500 rpm por 15 segundos;
5. Realizar a leitura com elevação dos tubos contra a luz;
6. Registrar o resultado na tabela a seguir e comparar com a tabela anterior.
7. Resultados dos testes realizados:
HEMÁCIA A HEMÁCIA B Grupo sanguíneo

Amostra 01
Amostra 02
Amostra 03
Amostra 04