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Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto

Autarquia Estadual- Lei 8899 de 27.09.07
Disciplina de Imunologia Médica Departamento de Biologia Molecular
Roteiro de Aula Prática

Tema: Tipagens sanguineas ABO e Rh Conteúdo: Teórico

Curso: Pós-Graduação Lato Sensu em Análiss Clínicas- Avanços Diagnósticos Turma:

Docente: Prof. Dr. Luiz Carlos de Mattos

Data: 02.06.2012 Atividade Prática Tempo: 180 minutos Avaliação: prova

Preparação de suspensões de hemácias a 5%

Lavagem das hemácias:

1. centrifugar a amostra de sangue a 3500 rpm por 5 minutos;
2. separaro plasma ou o soro das hemácias, transferindo-o para outro tubo identificado;
3. colocar um volume arbitrário do concentrado de hemácias em um tubo limpo e identificado;
4. adicionar solução salina isotônica até 1 cm da borda;
5. homogeneizar por inversão e centrifugar 2 minutos a 3500 rpm;
6. desprezar o sobrenadante;
7. repetir os itens d, e e f por mais duas vezes;
8. vedar o tubo caso não vá utilizá-lo imediatamente.

Preparação da suspensão de hemácias a 5%:

a. em um tubo de hemólise identificado, colocar 19 gotas de solução salina;
b. adicionar uma gota do concentrado de hemácias lavadas;
c. homogeneizar delicadamente;

Tipagem direta e reversa do Sistema ABO

Tipagem direta:
a. Identificar 3 tubos de hemólise: anti-A (1), anti-B (2), anti-A,B (3) para cadaamostra
b. Pipetar: 1 gota de anti-soro anti-A no tubo 1, uma gota de anti-soro anti-B no tubo 2 e uma gota de
anti-soro anti-A,B no tubo 3;
C. pipetar uma gota da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo.
d. centrifugar 1 minuto a 1500 rpm;
e. re-suspender delicadamente o botão de hemácias;
f. ler, interpretar e anotar os resultados em graus de aglutinaçäo;

Disciplina de Imunologia - Departamento de Biologia Molecular

Fone 3201-5854- E-mail: imunogenetica@famerp.br

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Disciplina de Imunologia Médica - Departamento de Biologia Molecular
Tipagem reversa:
a. marcar 2 tubos de hemólise: RA (1) e RB (2) para cada amostra;
b. pipetar 2 gotas de soro ou plasma correspondente à amostra, em
cada tubo;
e. pipetar 1 gota de hemácias padronizadas em suspensão a 5% em cada
tubo;
d. centrifugar 1 minuto a 1500 rpm;
e. re -suspender delicadamente o botão de hemácias;
f. ler, interpretar e anotar os resultados em graus de aglutinação;

Resultados das fenotipagens:

Tipagem direta com anti -soros Tipagem reversa com hemácias Grupo identificado
Anti-A Anti-B Anti- A,B A1 B --- ---------------- ------ ---

Tipagem do Sistema Rh e pesquisa do D fraco

Tipagem direta:
a. marcar 2 tubos de hemólise: anti-D policlonal (Rh0) (1) e Controle Rh (2) e identificá-los para cada
amostra;
b. pipetar 1 gota de anti-soro anti-D policlonal (Rh0) no tubo 1 e uma gota do controle Rh (CRh) no tubo
2;
e. pipetar uma gota da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo.
d. centrifugar 1 minuto a 1500 rpm;
e. re-suspender delicadamente o botão de hemácias;
nação;
f. ler, interpretar e anotar os resultados em graus de agluti
g. anotar os resultados.

Resulta d os da fenot1pagem:
Fenotipagem direta
soro controle Rh Grupo identificado
soro anti-D policlonal (Rho)

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u
A pesquisa do D fraco (D ) será realizada apenas nas amostras Rh negativas no teste anterior.
Técnica:
a. marcar 2 tubos de hemólise: anti-D policlonal (Rh 0) (1) e Controle Rh (2) e identificá-los para cada
amostra;
b. pipetar 1 gota de anti-soro anti-D policlonal (Rh0) no tubo 1 e uma gota do controle Rh (CRh), no tubo
2;
e. pipetar uma gota da suspensão de hemácias a 5% em cada tubo.
°
d. homogeneizar e incubar os tubos em banho-maria a 37 C por 15 minutos
e. centrifugar os tubos durante 1 minuto a 1500 rpm;
f. observar a presença de hemólise no sobrenadante;
g. re-suspender delicadamente o botão de hemácias;
h. observar a presença de aglutinação com uma lupa, se necessário;
i. anotar os resultados em graus de aglutinação;
j. lavar os tubos 2 vezes em solução salina, descartando o sobrenadante;
k. após a última lavagem, decantar totalmente o sobrenadante;
1. adicionar duas gotas do soro de Coombs (antiglobulina humana) em ambos os tubos;
m. homogeneizar e centrifugar 1 minuto a 1500 rpm;
n. ler, interpretar e anotar o resultado em graus de aglutinação;

Resultado da pesquisa:
------------------------------------------ °
Primeira leitura (37 C) Segunda leitura (AGH)
com soro anti-D policlonal (Rh 0)
com soro controle Rh

u
Quadro para interpretação da pesquisa do D fraco (D )
Reação a 37º C Reação com AGH Interpretação

Anti-D(Rh0) Controle Rh Anti-D(Rh0 ) Controle Rh

o o o o Rh negativo
+ o NR NR
u
Rh positivo fraco (O )

o o + o u
Rh positivo fraco (O )

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