HEMATO SERVIÇOS DE HEMOTERAPIA LTDA

AGÊNCIA TRANSFUSIONAL HOSPITAL ALIANÇA - SALVADOR

PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO

DETERMINAÇÃO GRUPO SANGUÍNEO ABO/Rh

(PROVA DIRETA E REVERSA)

1. Objetivo
Determinar o grupo sanguíneo ABO e Rh na amostra de sangue, através da tipagem direta e
reversa pelo princípio da hemaglutinação, garantindo a excelência e segurança do processo.

2. Aplicação
Aplica-se às amostras de receptores e pacientes.

3. Referências
 Portaria de Consolidação GM/MS n°5 de 28 de Setembro de 2017;
 Resolução – RDC/ANVISA nº 222, de 28 de março de 2018;
 American Association of Blood Banks. Technical manual, 18th edition/ Standards for Blood
Banks and Transfusion Services, 1st - 26th edition. AABB Press, 2014;
 Valgueiro, M.C. Práticas Imunologia Eritrocitária, 1° edição, Ed. Guanabara, 1999;
 Girello, A.L. e Kühn, T.I.B.B. Fundamentos da Imuno-hematologia Eritrocitária, 4° edição,
Ed. Senac, 2016;
 ONA, Manual das Organizações Prestadoras de Serviços de Saúde, Coleção Manual
Brasileiro de Acreditação, Volume 1, Versão 2018-2022;
 Práticas Organizacionais Obrigatórias – ROPs: Programa da Qmentum Internacional, edição
2018, IQG: Health Services Accreditation. São Paulo: 2018;
 Manual de Medicina Transfusional do Grupo GSH, Manual para Médicos, 2ª edição, ano
2019;
 Resolução RDC/ ANVISA nº 75, de 02/05/2016;
 Resolução RDC n° 34, de 11/06/2014;
 Bula do reagente.

4. Documentos Complementares
 POP - Biossegurança;
 Mapa Transfusional (Anexo I).

5. Setor Responsável
Liderança Técnica.

6. Setor Envolvido
Agência Transfusional.

7. Materiais
 Amostra do paciente com anticoagulante;
 Tubos acrílico;
 Ponteiras;
 Pipetas Automáticas;
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DETERMINAÇÃO GRUPO SANGUÍNEO ABO/Rh

(PROVA DIRETA E REVERSA)

 Centrífuga de tubos;
 Centrífuga para cartões BioRad®;
 Incubadora de Cartão Biorad®;
 Diluent-2 (Liss Modificado);
 Cartão ID-Liss/Coombs para gel centrifugação;
 Solução Fisiológica;
 Soros Anti-A, Anti-B, Anti-AB, Anti-D monoclonal, Controle Rh, ID-DiaClon Anti-D;
 DiaCell ABO A1 e B;
 Estante de tubos;
 Banho Maria 37ºC;
 EPI – Jaleco, luvas, máscara e óculos.

8. Procedimentos (Técnica para Tipagem do Receptor)

8.1 Preparo da suspensão de hemácias a 5%

 Centrifugar a amostra do receptor de 3000 a 3500 rpm por 5 minutos;
 Identificar um tubo com o nome do receptor / paciente ou todas as suas iniciais;
 Pipetar 1000µl de Solução Fisiológica 0,9%;
 Pipetar 50µl de concentrado de hemácias;
 Homogeneizar;
 A suspensão de hemácias pode ser utilizada imediatamente.

8.2 Técnica da Tipagem Direta

 Identificar um tubo para cada antissoro “A”, “B” e “AB” com o nome ou inicias do receptor/
paciente;
 Pingar 1 gota de cada antissoro nos respectivos tubos conforme sequência indicada;
 Pipetar 50µl da suspensão a 5%, previamente preparada, nos tubos acima citados;
 Homogeneizar suavemente, centrifugar de 3000 a 3500 rpm por 15 segundos, realizar a
leitura e anotar no Mapa de Trabalho-Imuno-hematologia (Anexo II).

8.3 Técnica da Tipagem Reversa

 Identificar dois tubos: um com “RA” e outro com “RB” mais o nome ou as iniciais do
receptor/ paciente;
 Pipetar 100µl de soro ou plasma do receptor/ paciente a ser testada em cada um dos tubos
identificados previamente;
 Adicionar 1 gota de DiaCell A1 no tubo RA1;
 Adicionar 1 gota de DiaCell B no tubo RB;
 Homogeneizar suavemente e centrifugar de 3000 a 3500 rpm por 15 segundos;
 Fazer leitura e anotar os resultados no Mapa de Trabalho-Imuno-hematologia (Anexo II).
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DETERMINAÇÃO GRUPO SANGUÍNEO ABO/Rh

(PROVA DIRETA E REVERSA)

8.4 Técnica da Tipagem RhD

 Identificar dois tubos: um com “D” e outro com “CRh” mais o nome ou as iniciais do
receptor/ paciente;
 Pingar 1 gota do antissoro Anti-D monoclonal*, no tubo identificado como “D”, e 1 gota do
antissoro Controle de Rh Monoclonal*, no tubo “CRh.
*Os reagentes Anti-D monoclonal e Controle de Rh monoclonal deverão obrigatoriamente
ser da mesma marca/fabricante;
 Adicionar 50µl da suspensão a 5%, previamente preparada, nos tubos “D” e “CRh”;
 Homogeneizar suavemente e centrifugar de 3000 a 3500 rpm por 15 segundos;
 Fazer a leitura e anotar os resultados no Mapa de Trabalho-Imuno-hematologia (Anexo II);
 Se Rh negativo, positivo fraco (1+ ou W/ Pó) ou duvidoso, incubar por 15 minutos em em
banho maria a 37°C;
 Homogeneizar suavemente e centrifugar de 3000 a 3500 rpm por 15 segundos;
 Fazer a leitura e anotar os resultados
 Resultados fracamente positivos (1+ ou W/ Pó), realizar a confirmação do fenótipo Rh D
(Gel teste), pesquisa de D fraco.

Gel
Interpretação Tubo
(Liss/Coombs)
Controle
RhD Anti-D D Fraco
Rh
Positivo 4+ a 2+ 0 Não realizar
Positivo fraco 1+ W
0 Realizar pesquisa
(D fraco ou parcial) (pó)
Negativo 0 0 Realizar pesquisa

8.5 Confirmação do fenótipo Rh D (Gel Teste)

8.5.1 Preparo da Suspensão a 1% (Gel Teste)

 Identificar um tubo com o nome do receptor/ paciente ou todas as suas iniciais;
 Pipetar 1000µl de Diluent-2 (Liss Modificado);
 Pipetar 10 ou 12,5µl de concentrado de hemácias da amostra do receptor;
 Homogeneizar.
 A suspensão de hemácias está pronta para ser utilizada.
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(PROVA DIRETA E REVERSA)

8.6 Técnica da Confirmação do fenótipo Rh D (Gel Teste)

 Identificar um microtubo do cartão ID-Liss/Coombs com iniciais do nome do paciente e
data de nascimento e retirar cuidadosamente o lacre de alumínio;
 Adicionar 50µl da suspensão de hemácias a 1% previamente preparada no microtubo
identificado como “D”;
 Adicionar 1 gota do ID-Diaclon anti-D;
 Incubar o Cartão ID-Liss/Coombs durante 15 minutos na Incubadora de Cartão Biorad;
 Centrifugar o Cartão ID-Liss/Coombs por 10 minutos na centrífuga Biorad;
 Fazer leitura e anotar os resultados no Mapa de trabalho Imuno-hematologia (Anexo II).

9. Observações
 É EXPESSAMENTE PROIBIDA A REALIZAÇÃO DOS EXAMES SEM QUE HAJA A
IDENTIFICAÇÃO ADEQUADA DE TODOS OS TUBOS, COM O NOME OU NÚMERO
DA AMOSTRA E O ANTISSORO UTILIZADO EM CADA TUBO;
 Avaliar grau de hemólise conforme Anexo I, utilizar até grau 4. Para graus 5 e 6, coletar
nova amostra;
 A sequência de montagem de tubos deverá respeitar a seguinte ordem: Anti-A, Anti-B, Anti-
AB, Reversa A1 e Reversa B, Anti-D e Controle de Rh;
 Observar reações fracas nos tubos contendo anti-A e anti-B, pois podem sugerir subgrupos;
 Os resultados obtidos deverão ser registrados imediatamente no Sistema Informatizado;
 Os tubos de controle devem sempre ser negativos. Caso resultados positivos realizar
novamente os testes utilizando hemácias lavadas (realizar no mínimo três lavagens);
 Em casos de discrepâncias:
- Avaliar idade, diagnóstico, comorbidades e histórico transfusional do receptor;
- Repetir as pesquisas realizadas;
- Realizar TAD da amostra e enviar amostras para Laboratório de Referência se necessário.
 Discrepâncias na Tipagem Direta com Resultado Positivo:
- Realizar lavagem das hemácias com Solução Fisiológica;
- Coletar nova amostra;
- Realizar e avaliar TAD e enviar amostras para Laboratório de Referência se necessário.
 Discrepâncias na Tipagem Reversa com Resultado Positivo:
- Pré-aquecer o soro e/ou plasma do receptor;
- Realizar PAI na fase salina (T.A.).
 Discrepâncias na Tipagem Reversa com Resultado Negativo:
- Realizar a Pesquisa a 4 °C;
- Coletar novas amostras;
 Se na confirmação do fenótipo Rh D o resultado for positivo:
- Realizar TAD e enviar amostras para Laboratório de Referência se necessário.
 Toda discrepância nos resultados deverá ser resolvida antes da liberação da transfusão
ou laudo e deverão ser comunicadas a Liderança técnica ou médica
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(PROVA DIRETA E REVERSA)

 Se a discrepância permanecer, a amostra deverá ser encaminhada para o laboratório de

referência para conclusão dos testes;
 Encaminhar ao laboratório de referência amostra e o formulário “Requisição de estudo
imunohematológico” (Anexo III) preenchido e impresso, conforme descrito no POP – Envio
de Amostras para Laboratório de Referência”. O formulário também deverá ser
encaminhado por e-mail com cópia para a liderança e o médico da agência;
 Todas as pipetagens devem ser em ângulo de 90° (pipeta reta);
 Todos os cartões deverão ser centrifugados previamente antes da utilização.

10. Análise dos Resultados

 Positivo: presença de aglutinação (+);
 Negativo: ausência de aglutinação (-).
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(PROVA DIRETA E REVERSA)

 Tipagem ABO:

Grupos Tipagem Direta Tipagem Reversa

Sanguíne Anti – Reversa Reversa
os Anti – A Anti – B
AB A1 B
O 0 0 0 + +
A + 0 + 0 +
B 0 + + + 0
AB + + + 0 0

 Tipagem RhD:

Interpretação Tubo Gel (Liss/Coombs)

RhD Anti-D Controle Rh D Fraco TAD
Positivo 4+ a 2+ 0 Não realizar Não realizar
Negativo 0 0 0 Não realizar
Positivo fraco
(D fraco ou 1+ a 0 0 4+ a 1+ 0
parcial)
0 0 + +
Teste inválido
+ + Não realizar +

 Os Controles de Rh deverão ser sempre negativos;

 Teste de D fraco positivo, validar realizando o teste de antiglobulina direto (TAD/CD);
 Teste de Antiglobulina direto positivo invalida uma reação positiva no teste para D fraco;
 Testes com resultados inválidos devem ser encaminhados para Laboratório de Referência
SP.

11. Registros da Qualidade

 Sistema informatizado - Real Blood;
 Mapa Transfusional - Anexo II;
 Requisição de Estudo Imunohematológico – Anexo III.

11.1 Registros no Sistema Informatizado

 Entrar com a senha pessoal no “Sistema Real Blood”;
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 Selecionar o módulo agência transfusional menu transfusão;

 Clicar em Receptor;
 Inserir o nome do paciente caso já tenha cadastro;
 Clicar em “pesquisar” para encontrar o paciente. Caso o paciente não esteja cadastrado,
clicar no ícone “inserir” e na aba “Contato” inserir as informações com o contato do
paciente ao terminar clicar em “Gravar”;
 Com o paciente cadastrado ou após encontrar um paciente que já possui cadastro, clicar no
ícone “Ação” e escolher a opção “Nova amostra”;
 Na tela de cadastro de amostra, informe o responsável pela coleta e tipo de exame
(ABO/RH, ABO/RH/TAD, ABO/RH/PAI, PAI, TAD, FENOTIPAGEM,
TRANSFUSÃO/RESERVA) e clique em inserir;
 Clique em “Inserir” e em seguida preencha as informações para cobrança automática:
Instituição, Convênio, Plano, Médico e Matrícula;
 Após inclusão da tela, ainda em receptor, escolha a “ação” “Nova imuno”;
 Lançar os resultados de: ABO (resultado da direta), Rh, Controle Rh, Reversa (interpretação
da reversa) e P.A.I e/ou TAD;
 Clique em “Gravar” para salvar o registro;
 Caso deseje imprimir o resultado, entrar na aba “Transfusão” do módulo agência
transfusional, clique em “Imuno”;
 Nas opções de pesquisa escolha o período (data) em que o exame foi realizado e na opção
“Exame” escolha a opção “SIM”;
 Digite o nome do paciente e clique em pesquisar. Nos resultados obtidos, escolha a “ação”
“Edição”;
 Na tela de lançamento dos resultados, clique na impressora no canto superior direito para
imprimir o laudo, selecione a opção PDF.

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Anexo I

Anexo II
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Anexo III
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