Imunologia Clínica (Noite) – 2023.

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R9-Taquara
Prof.a Joana Hygino

Aula Prática: Teste Rápido de Sífilis, VDRL qualitativo, Tipagem Sanguínea, Teste
Rápido de Gravidez

1º )Teste Rápido de Sífilis (Teste Ambulatorial de triagem)

Método Laboratorial com Reagente Marcado: Imunocromatografia de fluxo lateral
Objetivo: É um teste qualitativo para detecção de anticorpos dos isotipos IgG, IgM e IgA específicos
para sífilis (Treponema pallidum) no soro humano, plasma ou sangue total por punção venosa e
por punção digital. É um teste de triagem inicial e amostras reativas devem ser confirmadas por um
teste complementar.
Amostra: Soro, plasma ou sangue total.
Tempo de Reação: 20 minutos
Sensibilidade: 99,9%
Especificidade: 99,9%
Materiais:

• Amostra biológica a ser testada;

• Cassete de teste rápido para sífilis;
• Solução Diluente;
• Pipeta e ponteira plástica.
Protocolo para execução do teste:

• Deixar todos os componentes e amostras em temperatura ambiente antes do teste.

• Remover o cassete da embalagem de alumínio e colocá-lo sobre uma superfície limpa, seca,
plana e livre de vibrações.
• Usando uma pipeta, adicionar 10 μL de plasma ou soro ou sangue total ao poço da amostra
(S) do dispositivo teste, evitando a formação de bolhas.
• Adicionar 3 gotas de solução tampão.
• Iniciar o temporizador/cronômetro.
• Interpretar o resultado em 20 minutos.
• Não ler os resultados após 30 minutos.
Leitura: Uma linha controle (C) deverá aparecer na janela de resultados, indicando que o teste está
funcionou corretamente. Resultado reagente: uma linha aparece na região da linha teste (T) da
janela de resultados.
2º ) V.D.R.L (laboratório de pesquisa de doenças venéreas) Qualitativo / Teste
não-treponêmico – Teste Laboratorial de Triagem para sífilis

Método Laboratorial com Reagente Não Marcado: Reação de floculação

Objetivo: Detecção qualitativa de reaginas. Ou seja, é a procura por anticorpos anticardiolipina,
um fosfolipídio encontrado no Treponema pallidum e em células do corpo humano. Ou seja, esse
antígeno não é exclusivo do Treponema. O falso positivo pode aparecer, principalmente, em
indivíduos com doenças autoimunes, gestantes e idosos.
Fundamento: Reação de floculação observada quando as reaginas (anticorpos anticardiolipina)
presentes na amostra do paciente se ligam à cardiolipina. As amostras devem ser testadas não
diluídas e diluídas 1:8 para evitar a ocorrência do efeito prozona.
Amostra: Soro ou Líquor.
Materiais:

• Placa escavada.
• Pipeta de 200 μL.
• Agitador Mecânico (agitador de Kline).
• Reagente (Ag VDRL constituído de cardiolipina bovina, adicionado de lecitina e cristais de
colesterol).
• Controle positivo
• Controle negativo
• Soro total.
• Soro diluído de 1:8.
• Microscópio óptico.
Protocolo para execução do teste:

• Em uma escavação da placa pipetar 50 μL da amostra bruta e em outra escavação pipetar

50 μL da amostra diluída.
• Adicionar 20 μL do reagente em cada escavação com a amostra/controle.
• Colocar a placa em agitador mecânico (Kline) e agitar por 4 minutos a 180 rpm (ou agitar
manualmente com movimentos circulares).
• Ler os resultados dentro de 1 minuto ao microscópio óptico em aumento de 100X (ocular e
objetiva de 10X – Foca primeiro na de 4X e depois passa para a de 10X).
Leitura:

• Teste Positivo/Reagente: Ocorre a formação de grumos de tamanhos variáveis. Suspensão

de aspecto heterogêneo.
• Teste Negativo/Não-reagente: Ausência de floculação, suspensão de aspecto homogêneo.

3º ) Tipagem Sanguínea
Método Laboratorial com Reagente Não Marcado: Reação de Hemaglutinação Direta para
determinação de Grupos sanguíneos.
Objetivo: Pesquisar a presença de antígeno A, B, e Fator Rh (antígeno D) em hemácias de amostra
de sangue humano.
Fundamento: Hemácias contendo Ag A, B, Rh na superfície aglutinam em presença dos
soros específicos anti-A, anti-B e anti-Rh (anti-D), respectivamente. A ausência de aglutinação
significa reação negativa.
Amostra: Sangue total.
Materiais:

• Amostra de sangue a ser testada.

• Soros imunes anti-A, anti-B e anti-D (fator Rh).
• 3 lâminas de microscopia para cada grupo.
• Capilar ou mini bastão para homogeneização.
Protocolo para execução do teste:

• Demarcar cada lâmina de vidro em 2 partes iguais (lâmina para o anti-A, para o anti-B e para
o anti-D)
• Gotejar 1 gota de sangue em cada metade da lâmina de vidro.
• Gotejar 1 gota de soro anti-A, anti-B e anti-D sobre a gota de sangue da metade inferior da
lâmina e misturar (homogeneizar) com o capilar.
• Agitar manualmente a lâmina.
• Ler os resultados.
Leitura: Observar a olho nu a reação positiva pela formação de grumos com o soro específico